CN102558120A

CN102558120A - 一种同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法

Info

Publication number: CN102558120A
Application number: CN201010603895XA
Authority: CN
Inventors: 李法庆; 刘东锋
Original assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2010-12-24
Filing date: 2010-12-24
Publication date: 2012-07-11

Abstract

本发明公开了一种同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法，包括将溶剂系统置于分液漏斗中分层，取上相为固定相，下相为流动相，取土木香提取物溶解于下相中，将固定相用泵灌满分离柱，连接柱首端与进样阀，调节流动相流速和主机转速，收集分离物；其特征在于，所述溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水体积比为9-16∶3-9∶4-8∶1-3。该分离方法分离效率高，能得到高含量的土木香内酯和异土木香内酯。

Description

一种同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法

技术领域：

本发明涉及一种同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法，尤其是涉及一种柱层析与逆流色谱结合分离纯化土木香内酯和异土木香内酯的方法。

背景技术：

土木香内酯和异土木香内酯，均为倍半萜类化合物，分子式C₁₅H₂₀O₂，分子量232.32；分子结构式分别为：

土木香内酯异土木香内酯

来源于菊科植物土木香Inula helenium L.的干燥根。土木香有健脾和胃，行气止痛，安胎的功效。用于胸胁、脘腹胀痛，呕吐泻痢，胸胁挫伤，岔气作痛，胎动不安。土木香内酯和异土木香内酯是土木香的主要活性成分，《中国药典》2010年版规定其提木香内酯和异土木香内酯的总量不得少于2.2％。

现代药理研究表明，0.1μg/ml土木香内酯可抑制感染人型结核杆菌，对金黄色葡萄菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌、真菌也有抑制作用，土木香内酯及其衍生物的化学结构与山道年类似，也有驱虫作用，且该作用好于山道年而毒性较低。土木香内酯低浓度对心脏有兴奋作用，高浓度时则有抑制作用，对离体兔子宫和兔肠运动有抑制作用，但在低浓度时有兴奋作用。土木香内酯也有一定的毒性，如升高血糖，降低白细胞的活力，严重者引起呼吸停止而死亡。异土木香内酯对人脑神经胶质瘤细胞、人肝癌细胞、人和色素瘤细胞和人乳腺癌脑转移肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用。

目前，土木香内酯和异土木香内酯的提取方法多是乙醇提取或超临界萃取，硅胶柱层析。

如专利(申请号200810055376.7)“一种异土木香内酯的提纯制备方法和其在制备抗肿瘤药物中的应用”，该发明的方法是90-99％的乙醇冷浸提取，浓缩得浸膏悬浮在饱和盐水中，石油醚萃取，无水硫酸钠脱水，硅胶柱色谱分离，得到异土木香内酯。

专利(申请号200810201250.6)“用于促进胃动力的土木香提取物的提取方法”，该发明公开了超临界萃取法和乙醇提取法，得到土木香提取物。

上述方法具有原料利用率低、制备量小或纯度低等缺陷。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种利用高速逆流色谱法纯化土木香内酯和异土木香内酯的方法。

本发明所述的一种同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法，其特征在于按下列步骤进行：

一种同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法，其特征在于按下列步骤进行：

(1)取土木香粉碎后用80-100％工业甲醇超声提取3-5次，合并提取液加入针剂类药用活性炭脱色，滤出活性炭，减压浓缩；

(2)将浓缩液以热水分散，加入层析柱，乙醇水溶液洗脱，气相色谱跟踪监测，浓缩洗脱液，水洗涤结晶；

(3)采用高速逆流色谱仪，溶剂系统由正己烷、乙酸乙酯、乙腈和水组成，体积比为9-16∶3-9∶4-8∶1-3，置于分液漏斗中，上相为固定相，下相为流动相，取步骤(2)粗结晶溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动，泵入流动相，当流动相流出时，连续进样，根据检测器谱图收集目标成分，浓缩，低温干燥即得产品。

所述步骤(1)中活性炭用量为提取液总质量的1-5‰。

所述步骤(2)中柱层析填料为MCI-GEL、MS24-SZ聚酰胺树脂、硅胶(100-200目)中的任一种。

所述步骤(2)中柱层析所用的洗脱剂可以选70-100％甲醇水溶液或60-95％乙醇水溶液中的一种。

所述步骤(3)中高速逆流色谱仪流速控制在1.5-2.8ml/min。

所述步骤(3)中高速逆流色谱仪主机转速为720-880rpm.。

本发明与现有技术相比具有如下的优点及有益效果：

1)本发明先用柱层析富集纯化，降低了后续工序的处理量；

2)采用高速逆流色谱法分离纯化，制备量大，产品纯度高，处理过程中样品无损失。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

以下实施方式采用气相色谱法(参照王燕发表的文献“气相色谱内标法同时测定土木香中土木香内酯、异土木香内酯的含量”)，该文献的条件如下：

实验仪器为SE-30弹性石英毛细管柱(柱长30m×0.32mm×0.25μm)；检测器：FID检测器；程序升温：初始温度50℃，以20℃/min的速率升温至170℃，保持28min，再以25℃/min的速率升温至250℃，保持1min；分流进样，分流比1∶10；进样口温度240℃；检测器温度为260℃。

实施例1：

土木香粉碎过20目筛，取5kg投入100L小型提取罐中，加入20L80％甲醇超声提取4次，每次1小时，合并得提取液，加入230g针剂类药用活性炭搅拌脱色，过滤除去活性炭，减压回收溶剂，再加适量热水分散，加入MCI-GEL柱，先以60％乙醇洗脱至颜色变浅，再改用80％乙醇洗脱，GC跟踪监测，收集土木香内酯和异土木香内酯含量高的流分，合并，减压回收试剂，加水洗涤，得到样品。

取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(13∶7∶8∶2)置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取样品溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到800rpm，以2.0ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图分别收集土木香内酯流分和异土木香内酯流分，浓缩，低温干燥即得到68g土木香内酯和60g异土木香内酯，GC检测含量都在98％以上。

实施例2：

土木香粉碎过20目筛，取5kg投入100L小型提取罐中，加入35L85％甲醇超声提取3次，每次0.5小时，合并得提取液，加入240g针剂类药用活性炭搅拌脱色，过滤除去活性炭，减压回收溶剂，再加适量热水分散，加入150目硅胶柱，先以60％乙醇洗脱至颜色变浅，再改用90％乙醇洗脱，GC跟踪监测，收集土木香内酯和异土木香内酯含量高的流分，合并，减压回收试剂，加水洗涤，得到样品。

取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(10∶5∶4∶3)置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取样品溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到850rpm，以1.5ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图分别收集土木香内酯流分和异土木香内酯流分，浓缩，低温干燥即得到80g土木香内酯和72g异土木香内酯，GC检测含量都在96％以上。

实施例3：

土木香粉碎过20目筛，取5kg投入100L小型提取罐中，加入30L95％甲醇超声提取4次，每次1.5小时，合并得提取液，加入215g针剂类药用活性炭搅拌脱色，过滤除去活性炭，减压回收溶剂，再加适量热水分散，加入MCI-GEL柱，先以70％甲醇洗脱至颜色变浅，再改用90％甲醇洗脱，GC跟踪监测，收集土木香内酯和异土木香内酯含量高的流分，合并，减压回收试剂，加水洗涤，得到样品。

取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(9∶4∶5∶2)置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取样品溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到720rpm，以2.5ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图分别收集土木香内酯流分和异土木香内酯流分，浓缩，低温干燥即得到64g土木香内酯和64g异土木香内酯，GC检测含量都在98％以上。

实施例4：

土木香粉碎过20目筛，取5kg投入100L小型提取罐中，加入28L100％甲醇超声提取3次，每次1.5小时，合并得提取液，加入310g针剂类药用活性炭搅拌脱色，过滤除去活性炭，减压回收溶剂，再加适量热水分散，加入MS24-SZ聚酰胺树脂柱，先以60％乙醇洗脱至颜色变浅，再改用95％乙醇洗脱，GC跟踪监测，收集土木香内酯和异土木香内酯含量高的流分，合并，减压回收试剂，加水洗涤，得到样品。

取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(16∶3∶6∶2)置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取样品溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到750rpm，以2.2ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图分别收集土木香内酯流分和异土木香内酯流分，浓缩，低温干燥即得到92g土木香内酯和68g异土木香内酯，GC检测含量都在95％以上。

实施例5：

土木香粉碎过20目筛，取5kg投入100L小型提取罐中，加入22L90％甲醇超声提取5次，每次0.5小时，合并得提取液，加入490g针剂类药用活性炭搅拌脱色，过滤除去活性炭，减压回收溶剂，再加适量热水分散，加入MCI-GEL柱，先以70％甲醇洗脱至颜色变浅，再改用95％甲醇洗脱，GC跟踪监测，收集土木香内酯和异土木香内酯含量高的流分，合并，减压回收试剂，加水洗涤，得到样品。

取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(14∶9∶7∶1)置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取样品溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到780rpm，以2.8ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图分别收集土木香内酯流分和异土木香内酯流分，浓缩，低温干燥即得到68g土木香内酯和52g异土木香内酯，GC检测含量都在96％以上。

Claims

1.一种同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法，其特征在于按下列步骤进行：

2.根据权利要求1所述的同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法，其特征在于所述步骤(1)中活性炭用量为提取液总质量的1-5‰。

3.根据权利要求1所述的同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法，其特征在于所述步骤(2)中柱层析填料为MCI-GEL、MS24-SZ聚酰胺树脂、硅胶(100-200目)中的任一种。

4.根据权利要求1所述的同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法，其特征在于所述步骤(2)中柱层析所用的洗脱剂可以选70-100％甲醇水溶液或60-95％乙醇水溶液中的一种。

5.根据权利要求1所述的同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法，其特征在于所述步骤(3)中高速逆流色谱仪流速控制在1.5-2.8ml/min。

6.根据权利要求1所述的同时制备土木香内酯和异土木香内酯的方法，其特征在于所述步骤(3)中高速逆流色谱仪主机转速为720-880rpm.。