CN102524058A - 一种粤紫萁组织培养的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于蕨类植物组织培养技术领域,具体是一种粤紫萁组织培养的方法。它是利用植物细胞全能性的生物技术,合理采取粤紫萁幼嫩茎尖作为外植体,在合理的培养基中培养,可在短期内繁殖出大量的粤紫萁组培苗。本发明优点在于提供了一条全新的粤紫萁组培方法,突破季节限制,可一年四季采取外植体组培。本发明挽救了我国濒危植物粤紫萁,可使更多人观看到有凤凰之羽美称的粤紫萁。
Description
技术领域
本发明属于蕨类植物组织培养技术领域,具体是一种粤紫萁组织培养的方法。
背景技术
粤紫萁为蕨类紫萁科紫萁属植物,香港特有草本植物。植物高约53厘米,极短根状茎深褐色,粗厚而直立,藏于浅层土壤,支根盘根错节。原产地为香港岛柏架山、新界大屿山及大帽山。粤紫萁主要生长于丛林之下,亦曾于2000年在深圳市龙岗南澳笔架山的一条溪流意外地被发现,但为数只有三株。
粤紫萁有凤凰之羽之称,目前国内数量仅以株记,极为稀少珍贵。寻找一种安全的繁殖方法,挽救粤紫萁这一濒危植物已迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种粤紫萁组织培养的方法。通过粤紫萁的茎尖作为外植体进行组培,实现粤紫萁的人工培养。
本发明一种粤紫萁组织培养的方法,包括下列步骤:
1)外植体处理:剪下粤紫萁的幼嫩茎尖,不能伤害粤紫萁本株,在经过消毒杀菌的工作台上用0.1%的汞消毒液消毒10-20分钟,后用无菌水冲洗干净后留用。
2)诱导培养:将消过毒的粤紫萁幼嫩茎尖插入原球茎诱导培养基中,于22-25℃温度下避光培养5-7天后,放置在光照下培养,光强由弱逐渐变强。培养30-40天即可在嫩叶上形成大量原球茎。以1L培养基用量,诱导培养基的配方为:MS(200ML-4000ML),激动素(0.5Mg-3Mg),3-吲哚乙酸(0.5Mg-2.5Mg),萘乙酸(10Mg-50Mg),磷酸二氢钠(50Mg-1000Mg),活性炭(1000Mg-2000Mg),蔗糖20000Mg,琼脂7000Mg。
3)繁殖培养:将第二步操作中的原球茎继续培养30-40天便萌发形成原叶体,然后分切原叶体在继代培养基上培养25-35天,如此循环三代即可得大量所需组培苗。以1L培养基用量,繁殖培养基的配方为:MS(200ML-4000ML),激动素(0.5Mg-3Mg),萘乙酸(15Mg-50Mg),细胞分裂素(0.5Mg-1Mg),磷酸二氢钠(50Mg-1000Mg),活性炭(1000Mg-2000Mg),蔗糖20000Mg,琼脂7000Mg。
4)生根培养:将上一步繁殖培养形成的组培苗转入生根培养基中,30天后形成孢子体,在继续培养一个月,即可形成羽状叶并长出数条根须。以1L培养基用量,繁殖培养基的配方为:MS(300ML-3000ML),激动素(0.5Mg-4Mg),萘乙酸(10Mg-50Mg),细胞分裂素(0.5Mg-1Mg),磷酸二氢钠(50Mg-2000Mg),活性炭(1000Mg-2000Mg),蔗糖30000Mg,琼脂8000Mg。
5)炼苗栽培:将已生根的的组培苗瓶放到大棚中摆置5-7天后,取出组培苗,洗净培养基后移栽到大棚中,控制大棚温度在18-22℃,湿度在80%以上,遮荫并逐渐增加光照和通风,半个月后即可进行常规管理。
本发明是利用植物细胞全能性的生物技术,合理采取粤紫萁幼嫩茎尖作为外植体,在配合比合理的培养基中培养,可在短期内繁殖出大量的粤紫萁组培苗。本发明优点在于提供了一条全新的粤紫萁组培方法,突破季节限制,可一年四季采取外植体组培。
具体实施方式
实施例1
粤紫萁为我国极其稀有的珍贵植物,宜在春季组培,此间适合组培苗炼苗的大棚环境条件容易把握,确保高的成活率。
一种粤紫萁组织培养的方法,依下述步骤对本发明做进一步说明:
1)外植体处理:春季,在不伤害粤紫萁本株的前提下剪下粤紫萁的幼嫩茎尖,在在经过消毒杀菌的工作台上用0.1%的汞消毒液消毒10-15分钟。后用无菌水冲洗干净后留用。
2)诱导培养:将消过毒的粤紫萁幼嫩茎尖插入原球茎诱导培养基中,于23℃温度下避光培养7天后,放置在光照下培养,光强由弱逐渐变强。培养30-40天即可在嫩叶上形成大量原球茎。
所述诱导培养基的配方为:每升诱导培养基包含MS 200ML,激动素0.5Mg,3-吲哚乙酸0.5Mg,萘乙酸10Mg,磷酸二氢钠80Mg,活性炭1000Mg,蔗糖20000Mg,琼脂7000Mg。
3)繁殖培养:将第二步操作中的原球茎继续培养30-40天便萌发形成原叶体,然后分切原叶体在继代培养基上培养25-35天,如此循环三代即可得大量所需组培苗。
所述繁殖培养基的配方为:每升繁殖培养基包含:MS 200ML,激动素0.5Mg,萘乙酸15Mg,细胞分裂素0.5Mg,磷酸二氢钠80Mg,活性炭1000Mg,蔗糖20000Mg,琼脂7000Mg。
4)生根培养:将上一步繁殖培养形成的组培苗转入生根培养基中,30天后形成孢子体,在继续培养一个月,即可形成羽状叶并长出数条根须。
所述生根培养基的配方为:每升生根培养基包含:MS300ML,激动素0.5Mg,萘乙酸15Mg,细胞分裂素0.6Mg,磷酸二氢钠100Mg,活性炭1000Mg,蔗糖30000Mg,琼脂8000Mg。
5)炼苗栽培:将已生根的的组培苗瓶放到大棚中摆置7天后,取出组培苗,洗净培养基后已在到大棚中,控制大棚温度在18-22℃,湿度在80%以上,遮荫并逐渐增加光照和通风,半个月后即可进行常规管理。
Claims (4)
1.一种粤紫萁组织培养的方法,其特征在于该方法包括下列步骤:
1)外植体处理:剪下粤紫萁的幼嫩茎尖,不能伤害粤紫萁本株,在经过消毒杀菌的工作台上用0.1%的汞消毒液消毒10-20分钟,后用无菌水冲洗干净后留用;
2)诱导培养:将消过毒的粤紫萁幼嫩茎尖插入原球茎诱导培养基中,于22-25℃温度下避光培养5-7天后,放置在光照下培养,光强由弱逐渐变强,培养30-40天即可在嫩叶上形成大量原球茎;
3)繁殖培养:将第二步操作中的原球茎继续培养30-40天便萌发形成原叶体,然后分切原叶体在继代培养基上培养25-35天,如此循环三代即可得大量所需组培苗;
4)生根培养:将上一步繁殖培养形成的组培苗转入生根培养基中,30天后形成孢子体,在继续培养一个月,即可形成羽状叶并长出数条根须;
5)炼苗栽培:将已生根的的组培苗瓶放到大棚中摆置5-7天后,取出组培苗,洗净培养基后移栽到大棚中,控制大棚温度在18-22℃,湿度在80%以上,遮荫并逐渐增加光照和通风,半个月后即可进行常规管理。
2.根据权利要求1所述的一种粤紫萁组织培养的方法,其特征在于所述诱导培养基的配方为:每升诱导培养基包含MS 200ML,激动素0.5Mg,3-吲哚乙酸0.5Mg,萘乙酸10Mg,磷酸二氢钠80Mg,活性炭1000Mg,蔗糖20000Mg,琼脂7000Mg。
3.根据权利要求1所述的一种粤紫萁组织培养的方法,其特征在于所述繁殖培养基的配方为:每升繁殖培养基包含:MS 200ML,激动素0.5Mg,萘乙酸15Mg,细胞分裂素0.5Mg,磷酸二氢钠80Mg,活性炭1000Mg,蔗糖20000Mg,琼脂7000Mg。
4.根据权利要求1所述的一种粤紫萁组织培养的方法,其特征在于所述生根培养基的配方为:每升生根培养基包含:MS300ML,激动素0.5Mg,萘乙酸15Mg,细胞分裂素0.6Mg,磷酸二氢钠100Mg,活性炭1000Mg,蔗糖30000Mg,琼脂8000Mg。
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