CN102519952B - 一种试剂及用该试剂对食品中硼砂的快速测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种试剂及用该试剂对食品中硼砂的快速测定方法。本发明测定原理大致这样的：样品中的硼砂残留用一定浓度的盐酸酸化后，转化为硼酸。样品液经处理后，在酸性条件下，铍试剂III能与硼离子特异结合，转化为特定颜色的螯合物，采用分光光度法可测定待测物浓度，颜色的深浅与食品中硼砂残留量成正比。在一定的温度条件下，用稀盐酸对样品进行处理，使硼砂转化为硼酸，经处理后的样品液在酸性条件下，铍试剂III与硼离子发生特异性结合，形成特定颜色的螯合物，用分光光度计对反应结果进行定量测定。本发明具有毒性低，准确，简便等特点，适用于一般企业的检测部门使用。

Description

一种试剂及用该试剂对食品中硼砂的快速测定方法

技术领域

本发明涉及一种试剂及用试剂对食品中硼砂的快速测定方法。

背景技术

在食品中，硼砂由于具有增加食物韧性、脆度及改善食物保水性和保存度的功能，因此常常被添加到肉馅、肉丸、湿粉条、凉粉、面条、饺子中，从而使食品蓬松而有弹性。然而，硼砂对人体有毒害作用，硼砂通过口服进入人体后，不易排出体外，即使是含有微量硼砂的食物，长期食用也会在体内不断蓄积，严重影响人体消化道酶类发挥作用，导致有害物质不能及时排出，继而对人体的健康产生极大的危害，引起食欲减退、消化不良、抑制营养素吸收。硼砂的中毒剂量因人而异，通常常人为急性中毒剂量范围为1-3克，致死量为15克，儿童的致死量为5克，婴儿的致死量为2-3克。中毒症状主要表现为呕吐、腹泻、皮肤过敏、昏厥甚至休克。硼中毒者的病理检查可见胃、肾脏、肝脏、脑和皮肤出现非特异性病变，主要有肝脏充血、脂肪变性、肝细胞混浊肿胀；肾呈弥漫性水肿，肾小球和肾小管均有损害；脑和肺出现水肿。

国家标准方法测定食品中硼砂的含量，采用的是乙基己二醇-三氯甲烷萃取姜黄比色法和电感耦合等离子体原子发射光谱法，此两种方法的检测试剂毒性大，样品操作繁琐，其中电感耦合等离子体原子发射光谱法需要特殊的检测仪器，因而也受到很大的限制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种毒性低，检测准确，操作简便、快速的试剂及用该试剂对食品中硼砂的快速测定方法。

本发明的用于检测食品中硼砂的试剂的技术方案是这样的：

一种用于检测食品中硼砂的试剂，其特点在于该试剂由浓缩提取液A、提取液B、提取液C、标准品、缓冲液、反应液A、反应液B、显色液构成，各组份用量分别如下：

浓缩提取液A：浓度为3.6％的盐酸100mL，使用前用蒸馏水稀释10倍；

提取液B：5.3g亚铁氰化钾，使用前用50mL蒸馏水溶解；

提取液C：11.0g乙酸锌，使用前用50mL蒸馏水溶解；

标准品：0.01g硼酸，使用前用1mL蒸馏水溶解，此溶液相当于10mg/mL的硼酸，再用蒸馏水稀释成10mg/L的硼酸标准使用液；

缓冲液：200mL乙酸-乙酸钠溶液：称取20g乙酸钠，用800mL蒸馏水溶解后，用乙酸调pH至4.0，再用蒸馏水定容至1000mL；

反应液A：2.5g乙二胺四乙酸二钠，使用前用50mL蒸馏水溶解；

反应液B：100mL无水乙醇；

显色液：0.01g铍试剂III，使用前加入25mL蒸馏水溶解。

本发明的利用上述试剂对食品中硼砂进行快速测定方法的技术方案是这样的：

一种利用上述试剂对食品中硼砂的快速测定方法，其特点在于包括如下步骤：

(1)样品提取：

将样品绞碎均匀，取1.0g样品于15mL塑料离心管中，加入5mL0.36％HCl，混匀，置于90℃水浴提取35min，若样品中含蛋白质或脂肪较多，可加入0.25mL亚铁氰化钾溶液和0.25mL乙酸锌溶液，再加0.36％HCl至10mL，混匀后，4000转/min离心4min(或滤纸过滤)，取上清液待测(若结果超出线性范围，可做适当稀释)；

(2)测试：

(a)标准曲线的建立：

吸取0.00mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、1.00mL的标准使用液(相当于0.0μg、1.0μg、2.0μg、4.0μg、6.0μg、10.0μg硼酸)，分别置于15mL塑料离心管中，分别先后加入2mL的pH4.0乙酸-乙酸钠缓冲液，1mL的5％乙二胺四乙酸二钠溶液，1mL的无水乙醇，混匀，再加入0.8mL的0.04％铍试剂III，混匀，置于80℃水浴反应35min后在OD567nm下，以零管调零，测定样品管的吸光值，代入标准曲线中，计算测定液的硼酸含量；

(b)样品检测

吸取1mL的样品清液，置于15mL塑料离心管中，分别先后加入2mL的pH4.0乙酸乙酸钠缓冲液，1mL的5％乙二胺四乙酸二钠溶液，1mL的无水乙醇，混匀，再加入0.8mL的0.04％铍试剂III，混匀，置于80℃水浴反应35min后在OD567nm下，以零管调零，测定样品管的吸光值，代入标准曲线中，计算测定液的硼酸含量；所用的计算公式如下：

$X=\frac{A\×10}{m}\×1.54$

式中：

X——试样中硼砂的含量，单位为mg/kg；

A——测定用样液中硼酸的质量，单位为μg(通过标准曲线计算得出)；

m——试样质量，单位为g；

1.54——硼砂转化为硼酸的转化系数。

本发明的原理是：样品中的硼砂残留用一定浓度的盐酸酸化后，转化为硼酸。样品液经处理后，在酸性条件下，铍试剂III能与硼离子特异结合，转化为特定颜色的螯合物，采用分光光度法可测定待测物浓度，颜色的深浅与食品中硼砂残留量成正比。

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明：

具体实施方式

一种用于检测食品中硼砂的试剂，该试剂由浓缩提取液A、提取液B、提取液C、标准品、缓冲液、反应液A、反应液B、显色液构成，各组份用量分别如下：

浓缩提取液A：浓度为3.6％的盐酸100mL，使用前用蒸馏水稀释10倍；

提取液B：5.3g亚铁氰化钾，使用前用50mL蒸馏水溶解；

提取液C：11.0g乙酸锌，使用前用50mL蒸馏水溶解；

标准品：0.01g硼酸，使用前用1mL蒸馏水溶解，此溶液相当于10mg/mL的硼酸，再用蒸馏水稀释成10mg/L的硼酸标准使用液；

缓冲液：200mL乙酸-乙酸钠溶液：称取20g乙酸钠，用800mL蒸馏水溶解后，用乙酸调pH至4.0，再用蒸馏水定容至1000mL；

反应液A：2.5g乙二胺四乙酸二钠，使用前用50mL蒸馏水溶解；

反应液B：100mL无水乙醇；

显色液：0.01g铍试剂III，使用前加入25mL蒸馏水溶解。

一种利用上述试剂对食品中硼砂的快速测定方法，其包括如下步骤：

(1)样品提取：

将样品绞碎均匀，取1.0g样品于15mL塑料离心管中，加入5mL0.36％HCl，混匀，置于90℃水浴提取35min，若样品中含蛋白质或脂肪较多，可加入0.25mL亚铁氰化钾溶液和0.25mL乙酸锌溶液，再加0.36％HCl至10mL，混匀后，4000转/min离心4min(或滤纸过滤)，取上清液待测(若结果超出线性范围，可做适当稀释)；

(2)测试：

(a)标准曲线的建立：

吸取0.00mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、1.00mL的标准使用液(相当于0.0μg、1.0μg、2.0μg、4.0μg、6.0μg、10.0μg硼酸)，分别置于15mL塑料离心管中，分别先后加入2mL的pH4.0乙酸-乙酸钠缓冲液，1mL的5％乙二胺四乙酸二钠溶液，1mL的无水乙醇，混匀，再加入0.8mL的0.04％铍试剂III，混匀，置于80℃水浴反应35min后在OD567nm下，以零管调零，测定样品管的吸光值，代入标准曲线中，计算测定液的硼酸含量；

(b)样品检测

吸取1mL的样品清液，置于15mL塑料离心管中，分别先后加入2mL的pH4.0乙酸乙酸钠缓冲液，1mL的5％乙二胺四乙酸二钠溶液，1mL的无水乙醇，混匀，再加入0.8mL的0.04％铍试剂III，混匀，置于80℃水浴反应35min后在OD567nm下，以零管调零，测定样品管的吸光值，代入标准曲线中，计算测定液的硼酸含量；所用的计算公式如下：

$X=\frac{A\×10}{m}\×1.54$

式中：

X-试样中硼砂的含量，单位为mg/kg；

A-测定用样液中硼酸的质量，单位为μg(通过标准曲线计算得出)；

m-试样质量，单位为g；

1.54-硼砂转化为硼酸的转化系数。

通过实验确定了缓冲液pH对显色反应的影响，反应环境温度对显色反应的影响、反应时间对显色反应的影响，结果表明：选择缓冲液pH＝4.0、反应环境温度为80℃、反应时间为35min，对硼砂的测定有满意的结果。本方法采用硼酸作为标准物质作标准曲线，标准曲线中线性范围为(1～10μg)，吸光值与硼酸含量成直线关系，相关系数达0.9987，检出限为1μg，按本方法操作检测限为10mg/kg，硼砂经酸化水解成硼酸的转化率为1.54，以硼砂为计算则为15.4mg/kg。通过精密度和准确度试验，得相对标准变差为3.92％，平均回收率为90.49％。

下面举一些例子来说明，反应条件的不同对显色结果吸光值的影响：

(1)乙酸-乙酸钠缓冲液pH值对显色结果的影响

准确量取1mL 10mg/L的硼酸溶液5份，分别置于15mL塑料离心管中，分别加入2mLpH为3.0、3.5、4.0、4.5、5.0的乙酸-乙酸钠缓冲液，再依次加入1mL的5％乙二胺四乙酸二钠溶液，1mL的无水乙醇，0.8mL的0.04％铍试剂III，置于80℃水浴反应35min，分别以蒸馏水代替硼砂溶液做空白，冷却至室温后，在OD567nm下测定吸光值。

表1不同乙酸-乙酸钠缓冲液pH对结果吸光值的影响

由上述数据可以看出，乙酸-乙酸钠缓冲液pH＝4.0时，结果的吸光值最大，表明当乙酸-乙酸钠缓冲液pH＝4.0时，显色反应结果在D567nm下有良好的吸光值。

(2)反应温度的对显色结果的影响

准确量取1mL 10mg/L的硼酸溶液6份，分别置于15mL塑料离心管中，分别依次加入2mL pH 4.0的乙酸-乙酸钠缓冲液，1mL的5％乙二胺四乙酸二钠溶液，1mL的无水乙醇，0.8mL的0.04％铍试剂III，再分别置于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃水浴中反应35min，分别以蒸馏水代替硼砂溶液做空白，冷却至室温后，在OD567nm下测定吸光值。

表2不同反应温度对结果吸光值的影响

由上述数据可以看出，反应温度在80～90℃之间，吸光值趋向于平衡，表明当反应温度在80～90℃之间，反应温度对显色结果无影响。

(3)反应时间对显色结果的影响

准确量取1mL 10mg/L的硼酸溶液7份，分别置于15mL塑料离心管中，分别依次加入2mL pH 4.0的乙酸-乙酸钠缓冲液，1mL的5％乙二胺四乙酸二钠溶液，1mL的无水乙醇，0.8mL的0.04％铍试剂III，置于80℃水浴中分别反应10min、15min、20min、30min、35min、40min，分别以蒸馏水代替硼砂溶液做空白，冷却至室温后，在OD567nm下测定吸光值。

表3不同反应时间对结果吸光值的影响

由上述数据可以看出，反应时间在35～45min之间，吸光值趋向于平衡，表明当反应时间在35～45min之间，反应时间对显色结果无影响。

在不含硼砂的肉馅制品中加入100mg/kg的硼砂，按本方法的测定步骤测定6份，测定结果如下：

在添加100mg/kg的硼砂中，测得的平均值为90.49mg/kg，相对标准偏差为3.92，回收率范围在85.18％～94.74％，平均回收率为90.49％，表明本发明的方法测定的准确度和精密度符合相关技术要求。

Claims (1)

1.一种用于检测食品中硼砂的试剂，其特征在于该试剂由浓缩提取液A、提取液B、提取液C、标准品、缓冲液、反应液A、反应液B、显色液构成，各组份用量分别如下：

浓缩提取液A：浓度为3.6％的盐酸100mL，使用前用蒸馏水稀释10倍；

提取液B：5.3g亚铁氰化钾，使用前用50mL蒸馏水溶解；

提取液C：11.0g乙酸锌，使用前用50mL蒸馏水溶解；

标准品：0.01g硼酸，使用前用1mL蒸馏水溶解，此溶液相当于10mg/mL的硼酸，再用蒸馏水稀释成10mg/L的硼酸标准使用液；

缓冲液：200mL乙酸-乙酸钠溶液：称取20g乙酸钠，用800mL蒸馏水溶解后，用乙酸调pH至4.0，再用蒸馏水定容至1000mL；

反应液A：2.5g乙二胺四乙酸二钠，使用前用50mL蒸馏水溶解；

反应液B：100mL无水乙醇；

显色液：0.01g铍试剂III，使用前加入25mL蒸馏水溶解。