CN102507822B

CN102507822B - 一种复方丹参片中丹参酮类化合物的测定方法

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Publication number: CN102507822B
Application number: CN201110331404.5A
Authority: CN
Inventors: 吴笛; 臧忠良; 王德勤; 覃仁安; 李楚源; 李兰芳
Original assignee: GUANGZHOU BAIYUNSHAN HEJI HUANGPU CHINESE MEDICINE CO Ltd
Current assignee: GUANGZHOU BAIYUNSHAN HEJI HUANGPU CHINESE MEDICINE CO Ltd
Priority date: 2011-10-27
Filing date: 2011-10-27
Publication date: 2014-08-13
Anticipated expiration: 2031-10-27
Also published as: CN102507822A

Abstract

本发明涉及药物化合物检测领域，特别涉及一种复方丹参片中丹参酮类化合物的测定方法。该检测方法通过对一个指标成分丹参酮II_A进行检测，达到对同类型多个成分二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A的同时测定，方法简便、普适性好，能更全面地反映复方丹参片的质量。

Description

一种复方丹参片中丹参酮类化合物的测定方法

技术领域

本发明涉及药物化合物检测领域，特别涉及一种复方丹参片中丹参酮类化合物的测定方法。

背景技术

复方丹参片为临床常用的心脑血管药物，是由丹参、三七、冰片为原料加辅料制成的中药制剂，能活血化瘀、理气止痛，主要用于治疗冠心病、心绞痛。复方丹参片收载于2010年版《中华人民共和国药典》一部，分为三种规格，其中规格一为薄膜衣小片，每片重0.32g，相当于饮片0.6g；规格二为薄膜衣大片，每片重0.8g，相当于饮片1.8g；规格三为糖衣片，相当于饮片0.6g。

复方丹参片的药效物质基础明确，包括丹参酮、酚酸、皂苷三大类活性成分，其中丹参酮类化合物含量较高的有二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A，为一系列结构相似的化学成分。2010年版《中华人民共和国药典》一部复方丹参片中丹参酮类化合物的含量测定只控制了丹参酮II_A一个成分，监测指标少，不足以全面反映复方丹参片的质量。目前对复方丹参片中丹参酮类化合物的多指标含量测定方法文献报道较多，但存在诸如检测指标选择不合理、对照品难得、所建立的方法普适性不强等不足。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种复方丹参片中丹参酮类化合物的测定方法。该检测方法通过对一个指标成分(丹参酮II_A)进行检测，达到对同类型多个成分(二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A)的同时测定，方法简便、普适性好，能更全面地反映复方丹参片的质量。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种复方丹参片中丹参酮类化合物的检测方法，包括以下步骤：

取丹参酮类化合物对照品制备标准溶液，用于计算各化合物相对于内标丹参酮II_A的相对校正因子f；

取丹参酮II_A对照品制备对照品溶液，用于含量测定；

取复方丹参片制备供试品溶液，用于含量测定；

以所述丹参酮类化合物的最大紫外吸收波长对目标色谱峰定性；

将所述标准溶液、所述对照品溶液和所述供试品溶液分别经高效液相色谱法获得峰面积；

根据式I所示获得所述丹参酮类化合物相对于丹参酮II_A的相对校正因子，再根据式II所示获得复方丹参片中丹参酮类化合物的含量；

f = \frac{W_{s} \times A_{k}}{W_{k} \times A_{s}}

式I

其中，A_s为所述标准溶液中丹参酮II_A的峰面积，W_s为所述标准溶液中丹参酮II_A的质量或浓度，A_k为所述标准溶液中丹参酮类化合物的峰面积，W_k为所述标准溶液中丹参酮类化合物的质量或浓度，f为丹参酮类化合物相对于丹参酮II_A的相对校正因子；

i % = \frac{W_{r} \times A_{i}}{f \times A_{r} \times W} \times 100 %

式II

其中，A_r为所述对照品溶液中丹参酮II_A的峰面积，W_r为所述对照品溶液中丹参酮II_A的质量，A_i为所述供试品溶液中丹参酮类化合物的峰面积，W为复方丹参片取样量，f为丹参酮类化合物相对于丹参酮II_A的相对校正因子，i％为复方丹参片中丹参酮类化合物的含量。

在对中药进行多指标质量评价时，可以以样品中某一典型组分(有对照品供应者，且性质稳定)为内标，建立该组分与其它组分之间的相对校正因子，可以通过相对校正因子计算其它组分的含量。本发明提供的方法适用于对照品难得或制备成本高或不稳定的情况下同类多成分的同时测定。

在高效液相色谱法以紫外检测器测定时，在一定的范围内(线性范围内)某一组分的量(质量或浓度，W)与检测器响应(峰面积，A)成正比，即：W＝f·A。在多指标质量评价时，以样品中某一典型组分(有对照品供应者，且性质稳定)为标准，建立该组分对照品与其它组分对照品之间的峰面积相对校正因子(f)。于是测得的相对校正因子可作为某一色谱条件下某一组分的通用参数。通过使用一个对照品(标准物)和相对校正因子计算其它组分的含量。

为了节省人力物力，在检测复方丹参片中丹参酮类化合物的含量之前，可以先对丹参酮类化合物定性。

在检测过程中发现，隐丹参酮与丹参酮I在不同色谱柱上的目标峰的相对位置有时会互换，在某些色谱柱上丹参酮I先于隐丹参酮出峰，在某些色谱柱上隐丹参酮先于丹参酮I出峰。基于上述原因，且考虑到所建立的含量测定方法对不同仪器和色谱柱应具有普遍适用性，用各指标成分的相对保留值或保留时间差对指标成分定性不可行(相对保留值和保留时间差是常用的指标成分色谱峰的定性方法)。因此本发明提供的一种复方丹参片中丹参酮类成分的测定方法，基于各指标成分(二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A)的最大紫外吸收波长(λ_max)各不相同，据此对各目标色谱峰定性。

本发明提供的检测方法，还包括根据丹参酮类化合物的最大紫外吸收波长定性的步骤。其中，二氢丹参酮I的最大紫外吸收波长为244nm，隐丹参酮的最大紫外吸收波长为268nm，丹参酮I的最大紫外吸收波长为248nm，丹参酮II_A的最大紫外吸收波长为274nm。

作为优选，丹参酮类化合物包括二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I中的任一种或任几种以及丹参酮II_A。因此，当丹参酮类化合物为二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I中的任一种或任几种以及丹参酮II_A时，制备获得标准溶液为二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I中的任一种或任几种以及丹参酮II_A的混合溶液。

作为优选，二氢丹参酮I的相对校正因子为1.61。

作为优选，隐丹参酮的相对校正因子为0.74。

作为优选，丹参酮I的相对校正因子为2.29。

丹参酮II_A的相对校正因子为1.00。

作为优选，本发明提供的检测方法中，标准溶液的制备具体为，取丹参酮类化合物对照品，加甲醇溶解即得；以μg/mL计，所述二氢丹参酮I对照品与甲醇的质量体积比为8～12∶1；所述隐丹参酮对照品、丹参酮I对照品或丹参酮II_A对照品与甲醇的质量体积比为40～60∶1。

作为优选，本发明提供的检测方法中，对照品溶液的制备具体为，取丹参酮II_A对照品，加甲醇溶解即得；以μg/mL计，所述丹参酮II_A对照品与所述甲醇的质量体积比为40～60∶1。

作为优选，本发明提供的检测方法中，供试品溶液的制备具体为，取复方丹参片，加入甲醇超声处理，即得；以g/mL计，所述复方丹参片和所述甲醇的质量体积比为1∶20～50。

优选地，超声处理具体为，在功率250W，频率33kHz的条件下，超声处理15～60min。

作为优选，本发明提供的检测方法中，所述高效液相色谱法的条件为，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(70～75∶25～30)为流动相；检测波长为244～254nm；理论板数按丹参酮II_A计算应不低于2000。

本发明提供一种复方丹参片中丹参酮类化合物的测定方法，通过对一个指标成分(丹参酮II_A)进行检测，达到对同类型多个成分(二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A)的同时测定，方法简便、普适性好，节省人力、物力、财力，能更全面地反映复方丹参片的质量。

附图说明

图1示对照品的高效液相色谱图，其中，峰1为二氢丹参酮I，峰2为隐丹参酮，峰3为丹参酮I，峰4为丹参酮II_A；

图2示复方丹参片的高效液相色谱图，其中，峰1为二氢丹参酮I，峰2为隐丹参酮，峰3为丹参酮I，峰4为丹参酮II_A。

具体实施方式

本发明公开了一种复方丹参片中丹参酮类化合物的测定方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

取丹参酮II_A对照品制备对照品溶液，用于含量测定；

取复方丹参片制备供试品溶液，用于含量测定；

f = \frac{W_{s} \times A_{k}}{W_{k} \times A_{s}}

式I

i % = \frac{W_{r} \times A_{i}}{f \times A_{r} \times W} \times 100 %

式II

作为优选，丹参酮类化合物包括二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I中的任一种或任几种以及丹参酮II_A。

作为优选，二氢丹参酮I的相对校正因子为1.61。

作为优选，隐丹参酮的相对校正因子为0.74。

作为优选，丹参酮I的相对校正因子为2.29。

丹参酮II_A的相对校正因子为1.00。

作为优选，本发明提供的检测方法中，所述高效液相色谱法的条件为，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(甲醇与水的体积比为70～75∶25～30)为流动相；检测波长为244～254nm；理论板数按丹参酮II_A计算应不低于2000。

本发明考察了Waters 2695、戴安U3000，戴安P680三种高效液相色谱系统和Ecosil C18(4.6mm×250mm，5μm)、Merck Purospher STAR RP-18e(4.6mm×250mm，5μm)、Agilent TC-C18(4.6mm×250mm，5μm)、InertsilODS-3(4.6mm×250mm，5μm)四根不同厂牌的色谱柱对丹参酮类化合物相对校正因子的影响。丹参酮类化合物在上述色谱柱和上述色谱仪上测得的相对校正因子较稳定，差异不显著(P＞0.05)，见表1。

表1丹参酮类化合物在不同仪器和不同色谱柱上的相对校正因子

由表1可知，丹参酮类化合物在不同色谱柱和不同仪器上测得相对校正因子无显著差异(P＞0.05)。

本发明还考察了色谱条件的改变对丹参酮类化合物相对校正因子的影响，改变色谱条件后，丹参酮类化合物的相对校正因子无显著差异(P＞0.05)，表明本发明提供的检测方法具有较好的普适性。

本发明提供的检测方法的方法学考察：

标准曲线、检测限(LOD)和定量限(LOQ)：

方法：取预先配制好的每1ml分别含二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A10μg、50μg、50.5μg、50.5μg的混合溶液，分别进样1μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，按已确定的色谱条件进行HPLC分析。以各指标成分的浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，得到各指标成分的线性回归方程和线性范围。逐步稀释上述混合溶液，按信噪比3和10分别计算各指标成分的检测限(LOD)和定量限(LOQ)。

结果见表2，对各指标成分的标准曲线、线性范围进行了考察，得到二氢丹参酮I的标准曲线y＝120 088x-30 355(R2＝0.999 7)，线性范围1.00-25.00μg/ml；隐丹参酮的标准曲线y＝52 536x-31 384(R²＝0.999 7)，线性范围5.05-126.25μg/ml；丹参酮I的标准曲线y＝167 889x-185 419(R2＝0.999 7)，线性范围5.00-125.00μg/ml；丹参酮II_A的标准曲线y＝71 589x-42 299(R²＝0.999 8)，线性范围5.05-126.25μg/ml。

表2标准曲线、检测限(LOD)和定量限(LOO)

精密度考察：

方法：日内精密度：每3小时一次，以上述混合溶液连续进样5次，计算峰面积的相对标准偏差。日间精密度考察：每天3次，以上述混合溶液连续进样3天，计算峰面积的相对标准偏差。

重复性考察：

方法：取同一样品6份，每份称取约1g，按已确定的样品处理方法平行制备供试品溶液，进样测定，计算含量及相对标准偏差。

稳定性考察：

方法：取重复性下同一供试品，0h、3h、6h、9h、12h、24h、48h连续进样7次，记录48h内峰面积，计算相对标准偏差。

结果：日内及日间精密度、重复性实验、稳定性实验的结果见表3。二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮II_A在室温或低温、避光的条件下在上述混合溶液中至少5天内保持稳定，在样品溶液中至少48小时内保持稳定。

表3精密度、重复性及稳定性实验结果

^an＝5；^bn＝3×3；^cn＝6；^dn＝7。

加样回收率考察：

方法：取已知含量的同一批次样品0.5g，精密称定，精密加入高、中、低三个剂量的二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A对照品，共9份，分别制备供试品溶液，按已确定的色谱条件进行分析。

结果：高、中、低剂量下，各指标成分的加样回收率均在95％-105％之间，符合要求，见表4。

表4各指标成分的回收率

^a平均值±标准偏差，n＝3；^bc数据为三次测定结果的平均值；^d回收率(％)＝[(测得量-固有含量)/加入量]×100％。

本发明提供的检测方法中所用试剂均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

按照《中华人民共和国药典》2010年版一部复方丹参片的规格要求，取20批复方丹参片样品进行测定。

照高效液相色谱法(《中国人民共和国药典》2010年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(73∶27)为流动相；检测波长为248nm。理论板数按丹参酮II_A计算应不低于2000。

标准溶液的制备：取丹参酮类化合物对照品，加甲醇溶解即得；以μg/mL计，二氢丹参酮I对照品与甲醇的质量体积比为10∶1；隐丹参酮对照品、丹参酮I对照品或丹参酮II_A对照品与甲醇的质量体积比均为50∶1。

对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取复方丹参片10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约1g，精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇35ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以丹参酮II_A对照品的峰面积为对照，通过相对校正因子分别计算二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A的含量，用各指标成分色谱峰的最大紫外吸收波长定性。

各指标成分的最大紫外吸收波长(λ_max)如下：

各指标成分与内标丹参酮II_A之间的相对校正因子(f)根据式I计算：

f = \frac{W_{s} \times A_{k}}{W_{k} \times A_{s}}

式I

其中，A_s为所述标准溶液中丹参酮II_A的峰面积，W_s为所述标准溶液中丹参酮II_A的质量或浓度，A_k为所述标准溶液中丹参酮类化合物的峰面积，W_k为所述标准溶液中丹参酮类化合物的质量或浓度；f为丹参酮类化合物相对于丹参酮II_A的相对校正因子；

各指标成分的含量按式II计算：

i % = \frac{W_{r} \times A_{i}}{f \times A_{r} \times W} \times 100 %

式II

其中，A_r为对照品溶液中丹参酮II_A的峰面积，W_r为对照品溶液中丹参酮II_A的质量，A_i为供试品溶液中丹参酮类化合物的峰面积，W为复方丹参片取样量，f为丹参酮类化合物相对于丹参酮II_A的相对校正因子，i％为复方丹参片中丹参酮类化合物的含量。

本实施例中，20批复方丹参片(为薄膜衣小片，每片重0.32g，相当于饮片0.6g)样品含量测定结果见表5。

表5含量测定结果

比较例：

按照《中华人民共和国药典》2010年版一部复方丹参片的规格要求，取20批进行含量测定。

采用常规外标法，照高效液相色谱法(《中国人民共和国药典》2010年版一部附录VI D)测定。

对照品溶液的制备：取二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml各含10μg、50μg、50μg、50μg的溶液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本比较例中，20批复方丹参片(为薄膜衣小片，每片重0.32g，相当于饮片0.6g)样品含量测定结果见表6。

表6含量测定结果(常规外标法)

由表5、表6检测结果可知，本发明提供的检测方法与常规外标法的结果无显著性差异(P＞0.05)，证明本发明提供的检测方法对复方丹参片中丹参酮类成分进行测定具有可信度和可行性。

实施例2

按照《中华人民共和国药典》2010年版一部复方丹参片的规格要求，取3批复方丹参片进行测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(70∶30)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按丹参酮II_A计算应不低于2000。

标准溶液的制备：取丹参酮类化合物对照品，加甲醇溶解即得；以μg/mL计，二氢丹参酮I对照品与甲醇的质量体积比为8∶1；隐丹参酮对照品、丹参酮I对照品或丹参酮II_A对照品与甲醇的质量体积比均为60∶1。

对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取复方丹参片10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约1g，精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。

各指标成分的最大紫外吸收波长(λ_max)如下：

f = \frac{W_{s} \times A_{k}}{W_{k} \times A_{s}}

式I

各指标成分的含量按式II计算：

i % = \frac{W_{r} \times A_{i}}{f \times A_{r} \times W} \times 100 %

式II

本实施例中，3批复方丹参片(为薄膜衣大片，每片重0.8g，相当于饮片1.8g)样品含量测定结果见表7。

表7含量测定结果

比较例：

按照《中华人民共和国药典》2010年版一部复方丹参片的规格要求，取3批进行含量测定。

对照品溶液的制备：取二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml各含8μg、60μg、60μg、60μg的溶液，即得。

本比较例中，3批复方丹参片(为薄膜衣大片，每片重0.8g，相当于饮片1.8g)样品含量测定结果见表8。

表8含量测定结果(常规外标法)

由表7、表8检测结果可知，本发明提供的检测方法与常规外标法的结果无显著性差异(P＞0.05)，证明本发明提供的检测方法对复方丹参片中丹参酮类成分进行测定具有可信度和可行性。

实施例3

按照《中华人民共和国药典》2010年版一部复方丹参片的规格要求，取5批复方丹参片进行含量测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(75∶25)为流动相；检测波长为244nm。理论板数按丹参酮II_A计算应不低于2000。

标准溶液的制备：取丹参酮类化合物对照品，加甲醇溶解即得；以μg/mL计，二氢丹参酮I对照品与甲醇的质量体积比为12∶1；隐丹参酮对照品、丹参酮I对照品或丹参酮II_A对照品与甲醇的质量体积比均为40∶1。

对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取复方丹参片10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约1g，精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。

各指标成分的最大紫外吸收波长(λ_max)如下：

f = \frac{W_{s} \times A_{k}}{W_{k} \times A_{s}}

式I

各指标成分的含量按式II计算：

i % = \frac{W_{r} \times A_{i}}{f \times A_{r} \times W} \times 100 %

式II

本实施例中，5批复方丹参片(为糖衣片，相当于饮片0.6g)含量测定结果见表9。

表9实施例3含量测定结果

比较例：

对照品溶液的制备：取二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml各含12μg、40μg、40μg、40μg的溶液，即得。

本比较例中，5批复方丹参片(为糖衣片，相当于饮片0.6g)样品含量测定结果见表10。

表10含量测定结果(常规外标法)

由表9、表10检测结果可知，本发明提供的检测方法与常规外标法的结果无显著性差异(P＞0.05)，证明本发明提供的检测方法对复方丹参片中丹参酮类成分进行测定具有可信度和可行性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种复方丹参片中丹参酮类化合物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

取丹参酮类化合物对照品制备标准溶液；

取丹参酮Ⅱ_A对照品制备对照品溶液；

取复方丹参片制备供试品溶液；

以所述丹参酮类化合物的最大紫外吸收波长定性；

根据式Ⅰ所示获得所述丹参酮类化合物相对于丹参酮Ⅱ_A的相对校正因子，再根据式Ⅱ所示获得复方丹参片中丹参酮类化合物的含量；

式Ⅰ

f = \frac{W_{s} \times A_{k}}{W_{k} \times A_{s}}

其中，A_s为所述标准溶液中丹参酮Ⅱ_A的峰面积，W_s为所述标准溶液中丹参酮Ⅱ_A的质量或浓度，A_k为所述标准溶液中丹参酮类化合物的峰面积，W_k为所述标准溶液中丹参酮类化合物的质量或浓度，f为丹参酮类化合物相对于丹参酮Ⅱ_A的相对校正因子；

式Ⅱ

i % = \frac{W_{r} \times A_{i}}{f \times A_{r} \times W} \times 100 %

其中，A_r为所述对照品溶液中丹参酮Ⅱ_A的峰面积，W_r为所述对照品溶液中丹参酮Ⅱ_A的质量，A_i为所述供试品溶液中丹参酮类化合物的峰面积，W为复方丹参片取样量，f为丹参酮类化合物相对于丹参酮Ⅱ_A的相对校正因子，i％为复方丹参片中丹参酮类化合物的含量；

所述丹参酮类化合物包括二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ中的任一种或任几种以及丹参酮Ⅱ_A；

二氢丹参酮Ⅰ的相对校正因子为1.61；

隐丹参酮的相对校正因子为0.74；

丹参酮Ⅰ的相对校正因子为2.29；

所述高效液相色谱法的条件为，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相，甲醇与水的体积比为70～75:25～30；检测波长为244～254nm；理论板数按丹参酮Ⅱ_A计算应不低于2000。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述标准溶液的制备具体为，取丹参酮类化合物对照品，加甲醇溶解即得；以μg/mL计，所述二氢丹参酮Ⅰ对照品与甲醇的质量体积比为8～12:1；所述隐丹参酮对照品、丹参酮Ⅰ对照品或丹参酮Ⅱ_A对照品与甲醇的质量体积比均为40～60:1。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备具体为，取丹参酮Ⅱ_A对照品，加甲醇溶解即得；以μg/mL计，所述丹参酮Ⅱ_A对照品与所述甲醇的质量体积比为40～60:1。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备具体为，取复方丹参片，加入甲醇超声处理，即得；以g/mL计，所述复方丹参片和所述甲醇的质量体积比为1:20～50。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述超声处理具体为，在功率250W，频率33kHz的条件下，超声处理15～60min。