CN109521119A - 一种复方南板蓝根颗粒指纹图谱的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种复方南板蓝根颗粒指纹图谱的测定方法。指纹图谱的构建方法包括如下步骤：供试品溶液制备：取复方南板蓝根颗粒，研磨，有机溶剂提取，过滤；对照品溶液制备：称取秦皮乙素、咖啡酸，有机溶剂溶解；高效液相色谱检测：吸取供试品溶液、对照品溶液，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，获得复方南板蓝根颗粒指纹图谱。该指纹图谱息量大、谱峰信息丰富，包括9个共有峰，且共有峰分别归属复方南板蓝根颗粒不同的药材原料，这样的谱峰特征，能有效体现南板蓝根颗粒整体性化学特征信息、全面反映南板蓝根颗粒质量。并且，本发明在出峰较多的情况下保持基线平稳，精密度高，稳定性和重现性好。

Description

一种复方南板蓝根颗粒指纹图谱的测定方法
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种复方南板蓝根颗粒指纹图谱的测定方法，特别是一种复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法、质量检测方法。
背景技术
复方南板蓝根颗粒是由南板蓝根、紫花地丁、蒲公英三味药加辅料制成，具有消炎解毒之功效。用于腮腺炎、咽炎、乳腺炎、疮疖肿痛。复方南板蓝根颗粒现行的质量标准仅采用薄层色谱法对处方中的南板蓝根进行定性鉴别，而中药复方成分复杂，现有质量标准无法全面反映产品的整体质量特征，无法从整体上控制产品的质量。
复方南板蓝根颗粒作为中成药，是一种多组分复杂体系，因此其质量评价应采用能够提供丰富鉴别信息的检测方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别、含量测定、高效液相色谱测定等方法都不足以解决这一问题。例如，现有技术公开的一种复方南板蓝根片的质量控制方法，该方法是通过薄层层析进行质控。
因此，开发一种尽可能多地反映复方南板蓝根颗粒所含成分的指纹图谱检测方法对于复方南板蓝根颗粒的质量检测和评价非常必要。
发明内容
基于此，本发明的主要目的是提供一种复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法。该指纹图谱息量大、谱峰信息丰富，包括9个共有峰，且共有峰分别归属复方南板蓝根颗粒不同的药材原料，这样的谱峰特征，能有效体现南板蓝根颗粒整体性化学特征信息、全面反映南板蓝根颗粒质量。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：
供试品溶液制备：取复方南板蓝根颗粒，研磨，有机溶剂提取，过滤，获得供试品溶液；
对照品溶液制备：称取秦皮乙素、咖啡酸，有机溶剂溶解，获得对照品溶液；
高效液相色谱检测：吸取所述供试品溶液、对照品溶液，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，获得复方南板蓝根颗粒指纹图谱。
在其中一些实施例中，所述高效液相色谱检测的条件包括：
固定相：以C18为填料的色谱柱；
流动相：流动相A为甲醇，流动相B为体积比为0.05％～2％磷酸水溶液；
采用梯度洗脱，洗脱梯度为：0min～20min：A相5％～8％，B相95％～92％；20min～30min：A相8％～15％，B相92％～85％；30min～42min：A相15％～20％，B相85％～80％；42min～55min：A相20％～28％，B相80％～72％；55min～78min：A相28％～40％，B相72％～60％；78min～95min：A相40％～55％，B相60％～45％；95min～110min：A相55％～70％，B相45％～30％；110min～115min：A相70％～90％，B相30％～10％。
在其中一些实施例中，所述高效液相色谱检测的条件包括：
固定相：Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)色谱柱；
流动相：流动相A为甲醇，流动相B为体积比为0.05％的磷酸水溶液；
采用梯度洗脱，洗脱梯度为：0min～20min：A相5％～8％，B相95％～92％；20min～30min：A相8％～15％，B相92％～85％；30min～42min：A相15％～20％，B相85％～80％；42min～55min：A相20％～28％，B相80％～72％；55min～78min：A相28％～40％，B相72％～60％；78min～95min：A相40％～55％，B相60％～45％；95min～110min：A相55％～70％，B相45％～30％；110min～115min：A相70％～90％，B相30％～10％。
在其中一些实施例中，所述高效液相色谱检测的条件包括：柱温为28℃～32℃，检测波长为190nm～400nm，流速为0.8mL/min～1.2mL/min。
在其中一些实施例中，所述高效液相色谱仪的参数设计包括：柱温为30℃，检测波长为300nm，流速1mL/min。
在其中一些实施例中，供试品溶液制备、对照品溶液制备中，所述的有机溶剂为体积比为50％～100％的甲醇溶液。
在其中一些实施例中，所述的有机溶剂为体积比为50％的甲醇溶液。
本发明的另一目的是提供一种复方南板蓝根颗粒的质量检测方法，所述质量检测方法包括如下步骤：
待测样品溶液制备：取待测复方南板蓝根颗粒，研磨，有机溶剂提取，过滤，获得供试品溶液；
对照品溶液制备：称取秦皮乙素、咖啡酸，有机溶剂溶解，获得对照品溶液；
高效液相色谱检测：吸取所述供试品溶液、对照品溶液，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，获得待测复方南板蓝根颗粒质检图谱；对比分析所述待测复方南板蓝根颗粒质检图谱与上述构建的复方南板蓝根颗粒指纹图谱。
在其中一些实施例中，所述高效液相色谱检测的条件包括：
固定相：以C18为填料的色谱柱；
流动相：流动相A为甲醇，流动相B为体积比为0.05％～2％磷酸水溶液；
采用梯度洗脱，洗脱梯度为：0min～20min：A相5％～8％，B相95％～92％；20min～30min：A相8％～15％，B相92％～85％；30min～42min：A相15％～20％，B相85％～80％；42min～55min：A相20％～28％，B相80％～72％；55min～78min：A相28％～40％，B相72％～60％；78min～95min：A相40％～55％，B相60％～45％；95min～110min：A相55％～70％，B相45％～30％；110min～115min：A相70％～90％，B相30％～10％。
在其中一些实施例中，所述高效液相色谱检测的条件包括：
固定相：Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)色谱柱；
流动相：流动相A为甲醇，流动相B为体积比为0.05％的磷酸水溶液；
采用梯度洗脱，洗脱梯度为：0min～20min：A相5％～8％，B相95％～92％；20min～30min：A相8％～15％，B相92％～85％；30min～42min：A相15％～20％，B相85％～80％；42min～55min：A相20％～28％，B相80％～72％；55min～78min：A相28％～40％，B相72％～60％；78min～95min：A相40％～55％，B相60％～45％；95min～110min：A相55％～70％，B相45％～30％；110min～115min：A相70％～90％，B相30％～10％。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
本发明通过以秦皮乙素、咖啡酸为对照品，特别是配合合适的高效液相色谱条件，构建南板蓝根颗粒的指纹图谱。该指纹图谱息量大、谱峰信息丰富，包括9个共有峰，且共有峰分别归属复方南板蓝根颗粒不同的药材原料，这样的谱峰特征，能有效体现南板蓝根颗粒整体性化学特征信息、全面反映南板蓝根颗粒质量。并且，本发明在出峰较多的情况下保持基线平稳，精密度高，稳定性和重现性好。该指纹图谱为可用于评价复方南板蓝根颗粒质量的均一性和稳定性，能全面控制该产品的质量，保证疗效。
附图说明
图1、实施例1中波长的选择指纹图谱。
图2、实施例1中流动相考察指纹图谱。
图3、实施例1中供试品提取溶媒考察指纹图谱。
图4、实施例1中供试品提取时间考察指纹图谱。
图5、实施例2基于指纹图谱进行质量检测所得结果图。
图6、实施例4中10个批次复方南板蓝根颗粒的指纹图谱；图中，R为共有模式；S1～S10为10批复方南板蓝根颗粒指纹图谱。
图7、实施例4构建的复方南板蓝根颗粒的指纹图谱。
图8、实施例5复方南板蓝根颗粒相关性图谱；自下而上图谱依次为：缺蒲公英阴性样品指纹图谱；缺紫花地丁阴性样品指纹图谱；缺蒲公英及紫花地丁阴性样品指纹图谱；秦皮乙素对照品；咖啡酸对照品；复方南板蓝根颗粒指纹图谱。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
实施例1：复方南板蓝根颗粒指纹图谱测定方法的建立
1.波长选择
仪器：Agilent1260型高效液相色谱仪，ML204/02型分析天平。
试药：液相色谱分析试剂为色谱纯，其余试剂为分析纯、水为超纯水、复方南板蓝根颗粒由广州白云山奇星药业有限公司提供。
供试品溶液的制备：精密称定复方南板蓝根颗粒约10g，精密加入体积浓度为75％的甲醇溶液25mL进行提取，称定重量，超声(功率250W，频率50kHz)提取45min，恢复至室温再称定重量，使用75％甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液。
色谱条件：Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)色谱柱，流动相为A为甲醇，B为0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速1mL/min，柱温30℃。梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：
表1、梯度洗脱程序表
洗脱时间 流动性A的比例 流动性B的比例
0～20min 5％～8％ 95％～92％
20～30min 8％～15％ 92％～85％
30～42min 15％～20％ 85％～80％
42～55min 20％～28％ 80％～72％
55～78min 28％～40％ 72％～60％
78～95min 40％～55％ 60％～45％
95～105min 55％～80％ 45％～20％
105～110min 80％～90％ 20％～10％
110～115min 90％～90％ 10％～10％
测定：精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，考察波长为230nm、254nm、280nm、300nm、350nm、380nm的复方南板蓝根颗粒的指纹图谱。通过峰的数量、响应强度评价分析，发现供试品在300nm处，色谱峰的数量较多，基线较平稳，并且响应良好。因此选定300nm作为本品的最佳吸收波长。如图1所示。
2.流动相的选择
仪器：Agilent1260型高效液相色谱仪，ML204/02型分析天平。
试药：液相色谱分析试剂为色谱纯，其余试剂为分析纯、水为超纯水、复方南板蓝根颗粒由广州白云山奇星药业有限公司提供。
供试品溶液的制备：精密称定复方南板蓝根颗粒约10g，精密加入体积浓度为75％的甲醇溶液25mL进行提取，称定重量，超声(功率250W，频率50kHz)提取45min，恢复至室温再称定重量，使用75％甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；
色谱条件：Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)色谱柱，流动相为A为甲醇，B为磷酸水溶液，梯度洗脱，流速1mL/min，柱温30℃。梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：
表2、梯度洗脱程序表
洗脱时间 流动性A的比例 流动性B的比例
0～20min 5％～8％ 95％～92％
20～30min 8％～15％ 92％～85％
30～42min 15％～20％ 85％～80％
42～55min 20％～28％ 80％～72％
55～78min 28％～40％ 72％～60％
78～95min 40％～55％ 60％～45％
95～105min 55％～80％ 45％～20％
105～110min 80％～90％ 20％～10％
110～115min 90％～90％ 10％～10％
测定：精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，考察流动相为甲醇-0.05％磷酸水、甲醇-0.1％磷酸水、甲醇-0.2％磷酸水、甲醇-水、乙腈-0.05％磷酸水时的复方南板蓝根颗粒的指纹图谱，结果显示流动相为甲醇-0.05％磷酸时基线较为稳定且峰的数目增多，因此确定甲醇-0.05％磷酸为最终流动相，如图2所示。
3.供试品前处理考察
仪器：Agilent1260型高效液相色谱仪，ML204/02型分析天平。
试药：液相色谱分析试剂为色谱纯，其余试剂为分析纯、水为超纯水、复方南板蓝根颗粒由广州白云山奇星药业有限公司提供。
供试品溶液的制备：精密称定复方南板蓝根颗粒约10g，精密加入相应溶液(100％甲醇、50％甲醇溶液、75％甲醇溶液)25mL进行提取，称定重量，超声(功率250W，频率50kHz)提取，恢复至室温再称定重量，使用相应溶液补足减失重量，摇匀，滤过，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；
色谱条件：Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)色谱柱，流动相为A为甲醇，B为0.05％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速1mL/min，柱温30℃。梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：
表3、梯度洗脱程序表
测定：精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，分别考察100％甲醇、50％甲醇、75％甲醇提取溶剂，考察出最佳结果后，再以相应浓度的乙醇作为提取溶媒制备供试品，以色谱峰丰富度、峰形、分离度和峰数量等作为优选指标，考察最佳提取溶剂。结果显示用50％甲醇作为提取溶媒，色谱峰响应较好，且峰的数量较多，因此选择50％甲醇为最佳提取溶剂，如图3所示。
以50％甲醇为提取溶剂，照高效液相色谱法测定，分别考察超声处理时间15min、30min、45min的复方南板蓝根颗粒的指纹图谱，以色谱峰丰富度、峰形、分离度和峰数量等作为优选指标，考察最佳提取时间。结果显示，30min与45min基线较为稳定，但45min时峰的响应值高于30min，因此选定45min为最佳提取时间，如图4所示。
实施例2：复方南板蓝根颗粒基于指纹图谱的质量检测方法
仪器：Agilent1260型高效液相色谱仪，ML204/02型分析天平。
试药：秦皮乙素对照品(批号200506)、咖啡酸对照品(批号D11808026)购自中国药品生物制品检定所，液相色谱分析试剂为色谱纯，其余试剂为分析纯、水为超纯水、复方南板蓝根颗粒由广州白云山奇星药业有限公司提供。
供试品溶液的制备：精密称定复方南板蓝根颗粒约10g，精密加入体积浓度为50％的甲醇溶液25mL进行提取，称定重量，超声提取45min，恢复至室温再称定重量，使用50％甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；
对照品溶液的制备：精密称取秦皮乙素标准品2.049mg，置20mL容量瓶中，加100％甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为102.45μg/mL的对照品溶液；精密称取咖啡酸标准品3.308mg，置100mL容量瓶中，加100％甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为33.08μg/mL的对照品溶液。
色谱条件：Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)色谱柱，流动相为A为甲醇，B为0.05％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速1mL/min，柱温30℃，检测波长为300nm。梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：
表4、梯度洗脱程序表
洗脱时间 流动性A的比例 流动性B的比例
0～20min 5％～8％ 95％～92％
20～30min 8％～15％ 92％～85％
30～42min 15％～20％ 85％～80％
42～55min 20％～28％ 80％～72％
55～78min 28％～40％ 72％～60％
78～95min 40％～55％ 60％～45％
95～110min 55％～70％ 45％～30％
测定：精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到复方南板蓝根颗粒的指纹图谱。如图5所示。
实施例3：方法学考察
3.1稳定性试验
取同一批次供试品(广州白云山奇星药业有限公司)，按照复方南板蓝根颗粒的指纹图谱的最佳建立方法，分别于0，2，4，8，12，24h检测指纹图谱。以秦皮乙素(2号峰)为参照峰，记录色谱图，计算各共有峰色谱图峰相对保留时间、相对峰面积，结果参见表5、表6，各共有峰的相对保留时间RSD小于1.0％，相对峰面积的RSD小于5.0％，说明供试品溶液的成分在24h内是稳定的。
表5、稳定性试验-主要色谱峰相对保留时间比值
时间/峰编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
0h 0.715 1.000 1.063 1.122 1.500 1.590 1.692 1.894 1.941
2h 0.721 1.000 1.060 1.121 1.492 1.582 1.681 1.879 1.925
4h 0.719 1.000 1.060 1.121 1.495 1.585 1.685 1.884 1.930
8h 0.720 1.000 1.060 1.121 1.498 1.589 1.689 1.889 1.936
12h 0.720 1.000 1.060 1.121 1.495 1.586 1.686 1.884 1.931
24h 0.718 1.000 1.060 1.121 1.496 1.587 1.688 1.887 1.934
AVERAGE 0.719 1.000 1.061 1.121 1.496 1.586 1.686 1.886 1.932
STDEV 0.002 0.000 0.001 0.000 0.003 0.003 0.004 0.006 0.006
RSD 0.330 0.000 0.105 0.029 0.186 0.180 0.230 0.293 0.293
表6、稳定性试验-主要色谱峰相对峰面积比值
时间/峰编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
0h 1.575 1.000 0.303 0.070 0.070 0.662 0.111 0.120 0.073
2h 1.603 1.000 0.296 0.064 0.062 0.663 0.111 0.124 0.076
4h 1.618 1.000 0.291 0.063 0.067 0.648 0.120 0.126 0.080
8h 1.598 1.000 0.300 0.065 0.066 0.615 0.120 0.116 0.073
12h 1.584 1.000 0.297 0.063 0.070 0.699 0.120 0.130 0.078
24h 1.581 1.000 0.299 0.063 0.070 0.663 0.117 0.129 0.074
AVERAGE 1.593 1.000 0.298 0.065 0.068 0.658 0.117 0.124 0.076
STDEV 0.016 0.000 0.004 0.003 0.003 0.027 0.004 0.005 0.003
RSD 1.021 0.000 1.348 4.336 4.802 4.086 3.765 4.306 3.762
3.2重复性试验
取同一批次供试品(广州白云山奇星药业有限公司)，按供试品溶液的制备方法平行制备6份供试品，分别精密进样10μL，以秦皮乙素(2号峰)为参照峰，记录色谱图，计算各共有峰色谱图峰相对保留时间、相对峰面积，结果参见表7、表8，各共有峰的相对保留时间RSD小于1.0％，相对峰面积的RSD小于5.0％，说明该实验方法的重复性较好。
表7、重复性试验-主要色谱峰相对保留时间比值
次数/峰编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
1 0.719 1.000 1.060 1.120 1.496 1.587 1.687 1.885 1.932
2 0.719 1.000 1.060 1.120 1.495 1.585 1.686 1.885 1.920
3 0.719 1.000 1.060 1.121 1.496 1.586 1.686 1.886 1.932
4 0.719 1.000 1.060 1.121 1.496 1.587 1.688 1.888 1.935
5 0.719 1.000 1.060 1.121 1.496 1.587 1.688 1.887 1.934
6 0.719 1.000 1.060 1.121 1.496 1.586 1.687 1.886 1.933
AVERAGE 0.719 1.000 1.060 1.121 1.496 1.586 1.687 1.886 1.931
STDEV 0.000 0.000 0.000 0.000 0.001 0.001 0.001 0.001 0.005
RSD 0.030 0.000 0.014 0.030 0.036 0.042 0.053 0.055 0.277
表8、重复性试验-主要色谱峰相对峰面积比值
次数/峰编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
1 1.606 1.000 0.294 0.062 0.070 0.665 0.114 0.124 0.068
2 1.586 1.000 0.300 0.065 0.071 0.660 0.107 0.122 0.068
3 1.800 1.000 0.294 0.062 0.075 0.636 0.100 0.120 0.066
4 1.590 1.000 0.294 0.062 0.072 0.687 0.110 0.122 0.065
5 1.605 1.000 0.299 0.063 0.070 0.659 0.111 0.121 0.072
6 1.626 1.000 0.296 0.062 0.066 0.654 0.109 0.124 0.067
AVERAGE 1.635 1.000 0.296 0.063 0.070 0.660 0.109 0.122 0.068
STDEV 0.082 0.000 0.003 0.001 0.003 0.017 0.005 0.002 0.002
RSD 4.997 0.000 0.884 1.830 4.378 2.508 4.472 1.246 3.606
3.3精密度试验
取同一批次供试品(广州白云山奇星药业有限公司)，按供试品溶液的制备方法制备供试品，连续进样6次，以秦皮乙素(2号峰)为参照峰，记录色谱图，计算各共有峰色谱图峰相对保留时间、相对峰面积，结果参见表9、表10，各共有峰的相对保留时间RSD小于1.0％，相对峰面积的RSD小于5.0％，说明仪器的精密度良好。
表9、精密度试验-主要色谱峰相对保留时间比值
表10、精密度试验-主要色谱峰相对峰面积比值
次数/峰编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
1 1.575 1.000 0.303 0.070 0.065 0.662 0.111 0.120 0.073
2 1.603 1.000 0.296 0.064 0.063 0.663 0.111 0.124 0.071
3 1.618 1.000 0.291 0.063 0.061 0.648 0.115 0.126 0.072
4 1.598 1.000 0.300 0.065 0.060 0.615 0.120 0.116 0.073
5 1.654 1.000 0.299 0.064 0.065 0.651 0.124 0.130 0.065
6 1.559 1.000 0.285 0.063 0.068 0.600 0.110 0.120 0.068
AVERAGE 1.601 1.000 0.296 0.065 0.064 0.640 0.115 0.123 0.070
STDEV 0.033 0.000 0.007 0.003 0.003 0.026 0.006 0.005 0.003
RSD 2.075 0.000 2.221 4.131 4.781 4.062 4.955 4.041 4.610
实施例4：复方南板蓝根颗粒标准指纹图谱的建立
采用实施例2确定的最佳条件测定10个批次复方南板蓝根颗粒(批号分别为：18338(编号S1)、18339(编号S2)、18340(编号S3)、18341(编号S4)、18342(编号S5)、18343(编号S6)、18344(编号S7)、18345(编号S8)、18346(编号S9)、18347(编号S10)；由广州白云山奇星药业有限公司提供)。
10个批次复方南板蓝根颗粒的指纹图谱及共有模式如图6所示。
通过10个批次复方南板蓝根颗粒HPLC指纹图谱的比较，进行相似度评价：采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004年A版)”对10批次复方南板蓝根颗粒指纹图谱进行相似度计算，10批次复方南板蓝根颗粒指纹图谱与对照指纹图谱(10批次复方南板蓝根颗粒生成的共有模式R)相似度均大于或等于0.90(表11)。
表11、10批复方南板蓝根颗粒相似度比较结果
编号 R S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
相似度 1.000 0.900 0.956 0.958 0.934 0.936 0.900 0.902 0.900 0.900 0.930
通过上述方法所建立的复方南板蓝根颗粒标准指纹图谱如图7所示。根据图7可知，采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004年A版)”生成有9个共有峰构成的复方南板蓝根颗粒标准指纹图谱。其中第2号峰为秦皮乙素峰、3号峰为咖啡酸峰。
在指纹图谱中，以秦皮乙素峰为参照峰S峰，计算各共有峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积，所述相对保留时间值为：0.72-峰1、1.00-峰S、1.06-峰3、1.12-峰4、1.50-峰5、1.59-峰6、1.70-峰7、1.90-峰8、1.94-峰9。所述共有峰的峰面积值为：1.10-峰1、1.00-峰S、0.21-峰3、0.04-峰4、0.05-峰5、0.47-峰6、0.09-峰7、0.10-峰8、0.04-峰9。
实施例5、复方南板蓝根颗粒相关性研究：共有峰的归属
阴性供试品溶液的制备：分别取复方南板蓝根颗粒缺紫花地丁阴性样品、缺蒲公英阴性样品，缺蒲公英及紫花地丁双阴性样品，按前述复方南板蓝根颗粒指纹图谱的测定方法的供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
用前述复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法的色谱条件，取上述阴性样品及秦皮乙素和咖啡酸对照品，照高效液相色谱法进行检测，得复方南板蓝根颗粒相关性图谱。如图8所示。
结果：复方南板蓝根颗粒标准指纹图谱中的9个共有峰，通过阴性样品及对照品做对照，对其进行归属，结果表明：1、3、4、6号峰归属为蒲公英药材；2、3、4、5、7号峰归属为紫花地丁药材；8、9号峰归属为南板蓝根药材。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：
供试品溶液制备：取复方南板蓝根颗粒，研磨，有机溶剂提取，过滤，获得供试品溶液；
对照品溶液制备：称取秦皮乙素、咖啡酸，有机溶剂溶解，获得对照品溶液；
高效液相色谱检测：吸取所述供试品溶液、对照品溶液，注入高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，获得复方南板蓝根颗粒指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件包括：
固定相：以C18为填料的色谱柱；
流动相：流动相A为甲醇，流动相B为体积比为0.05％～2％磷酸水溶液；
采用梯度洗脱，洗脱梯度包括：0min～20min：A相5％～8％，B相95％～92％；20min～30min：A相8％～15％，B相92％～85％；30min～42min：A相15％～20％，B相85％～80％；42min～55min：A相20％～28％，B相80％～72％；55min～78min：A相28％～40％，B相72％～60％；78min～95min：A相40％～55％，B相60％～45％；95min～110min：A相55％～70％，B相45％～30％；110min～115min：A相70％～90％，B相30％～10％。
3.根据权利要求2所述的复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件包括：
固定相：Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)色谱柱；
流动相：流动相A为甲醇，流动相B为体积比为0.05％的磷酸水溶液；
采用梯度洗脱，洗脱梯度包括：0min～20min：A相5％～8％，B相95％～92％；20min～30min：A相8％～15％，B相92％～85％；30min～42min：A相15％～20％，B相85％～80％；42min～55min：A相20％～28％，B相80％～72％；55min～78min：A相28％～40％，B相72％～60％；78min～95min：A相40％～55％，B相60％～45％；95min～110min：A相55％～70％，B相45％～30％；110min～115min：A相70％～90％，B相30％～10％。
4.根据权利要求1至3任一项所述的复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件包括：柱温为28℃～32℃，检测波长为190nm～400nm，流速为0.8mL/min～1.2mL/min。
5.根据权利要求4所述的复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件包括：柱温为30℃，检测波长为300nm，流速1mL/min。
6.根据权利要求1至3任一项所述的复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，供试品溶液制备、对照品溶液制备中，所述的有机溶剂为体积比为50％～100％的甲醇溶液。
7.根据权利要求6所述的复方南板蓝根颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述的有机溶剂为体积比为50％的甲醇溶液。
8.一种复方南板蓝根颗粒的质量检测方法，其特征在于，所述质量检测方法包括如下步骤：
待测样品溶液制备：取待测复方南板蓝根颗粒，研磨，有机溶剂提取，过滤，获得供试品溶液；
对照品溶液制备：称取秦皮乙素、咖啡酸，有机溶剂溶解，获得对照品溶液；
高效液相色谱检测：吸取所述供试品溶液、对照品溶液，注入高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，获得待测复方南板蓝根颗粒质检图谱；对比分析所述待测复方南板蓝根颗粒质检图谱与权利要求1至7任一项构建的复方南板蓝根颗粒指纹图谱。
9.根据权利要求8所述的复方南板蓝根颗粒的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件包括：
固定相：以C18为填料的色谱柱；
流动相：流动相A为甲醇，流动相B为体积比为0.05％～2％磷酸水溶液；
采用梯度洗脱，洗脱梯度包括：0min～20min：A相5％～8％，B相95％～92％；20min～30min：A相8％～15％，B相92％～85％；30min～42min：A相15％～20％，B相85％～80％；42min～55min：A相20％～28％，B相80％～72％；55min～78min：A相28％～40％，B相72％～60％；78min～95min：A相40％～55％，B相60％～45％；95min～110min：A相55％～70％，B相45％～30％；110min～115min：A相70％～90％，B相30％～10％。
10.根据权利要求8或9所述的复方南板蓝根颗粒的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件包括：
固定相：Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)色谱柱；
流动相：流动相A为甲醇，流动相B为体积比为0.05％的磷酸水溶液；
采用梯度洗脱，洗脱梯度包括：0min～20min：A相5％～8％，B相95％～92％；20min～30min：A相8％～15％，B相92％～85％；30min～42min：A相15％～20％，B相85％～80％；42min～55min：A相20％～28％，B相80％～72％；55min～78min：A相28％～40％，B相72％～60％；78min～95min：A相40％～55％，B相60％～45％；95min～110min：A相55％～70％，B相45％～30％；110min～115min：A相70％～90％，B相30％～10％。
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