CN104569186A

CN104569186A - 多酚物质的hplc分离检测、大花红景天质量检测方法

Info

Publication number: CN104569186A
Application number: CN201410787229.4A
Authority: CN
Inventors: 刘青; 尼玛次仁; 顿珠; 多杰仁青; 泽仁达瓦; 米久; 益西拉姆; 罗珍; 达瓦
Original assignee: TIBETAN TRADITIONAL MEDICAL COLLEGE
Current assignee: TIBETAN TRADITIONAL MEDICAL COLLEGE
Priority date: 2014-12-17
Filing date: 2014-12-17
Publication date: 2015-04-29
Anticipated expiration: 2034-12-17
Also published as: CN104569186B

Abstract

本发明公开了一种多酚物质的HPLC分离检测方法。针对现有技术对红景天药材中同时分离与检测的成分数量有限，对红景天药材的全面质量控制效果不佳的缺陷，本发明提供了一种对包括没食子酸、红景天苷等6种多酚物质组分在内的高效液相色谱检测方法及其在大花红景天药材质量检测中的应用。本方法检测方法供试品和/或对照品包括没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸6种组分中至少之一，色谱条件是C18色谱柱、柱温25℃，流动相是乙腈与0.04％磷酸溶液混合溶液，乙腈体积百分比7％～20％，梯度洗脱。本发明还提供了一种大花红景天药材质量检测方法。本发明检测方法中HPLC方法色谱条件常规，对样品无需特殊处理，实用及适用性高。

Description

多酚物质的HPLC分离检测、大花红景天质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种多酚混合物的高效液相色谱分离与定量检测方法，特别是涉及一种对包括没食子酸、红景天苷等6种组分在内的高效液相色谱检测方法及其应用。以及大花红景天质量检测方法。

背景技术

大花红景天(Rhodiola crenulata)又名宽瓣红景天、宽叶景天、圆景天，1977年初次被中国药典收录。《中华人民共和国药典》(2005版)明确规定红景天的药材来源为大花红景天干燥根及根茎。根据国家食品药品监督管理总局(CFDA)公开数据，目前已获批上市的相关产品包括9个含红景天原药材的药品及85个含有红景天药材的保健食品。由于红景天用途广泛，尤其在医药、保健食品领域使用较广，因此有必要建立更接近于原药材的综合质量评价体系和方法。

《中华人民共和国药典》(2005版)把红景天苷(C14H20O7)作为大花红景天质量控制的指标，用于定性和定量检测。并具体公开了照高效液相色谱法(HPLC)测定的方法(《中华人民共和国药典》(2005版)附录ⅥD)。现有技术“HPLC同时测定大花红景天提取物中没食子酸、红景天苷、酪醇、对香豆酸的含量”(《中国实验方剂学杂志》2013年5月第10期)公开了一种大花红景天中4种成分含量测定方法，可以作为红景天药材的质量评价方法。现有技术“HPLC法同时测定大花红景天中的4个酚类成分的含量”(《北方药学》2011年第8卷第7期)公开了一种同时测定大花红景天中没食子酸、红景天苷、酪醇和没食子酸乙酯的含量的HPLC方法。现有方法对红景天药材中同时分离与检测的成分仅4种，数量有限，难以实现对红景天药材的全面质量控制。

发明内容

本发明的目的就是针对现有技术的不足，提供一种高效液相色谱分析方法，该方法能够对红景天中6种成分实现同时分离，并对测定各成分含量，既能够用于对红景天成分的分离，也可以用于红景天药材的质量检测。该方法也能对混合溶液中的6种成分进行分离。

为实现上述目的，本发明首先提供一种高效液相色谱检测方法，其技术方案如下：

一种多酚物质的高效液相色谱分离检测方法，包括选择色谱条件、供试品和/或对照品溶液配制、进样检测过程，其特征在于：所述供试品和/或对照品包括没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸6种组分中至少之一，所述色谱条件是C18色谱柱、柱温25℃，流动相是乙腈与0.04％磷酸溶液混合溶液，乙腈体积百分比7％～20％，梯度洗脱，检测波长275nm。

上述高效液相色谱分离检测方法用于同时分离检测供试品中没食子酸和/或红景天苷和/或酪醇和/或儿茶素和/或没食子酸乙酯和/或对香豆酸6种多酚类物质成分。色谱柱采用C18色谱柱、柱温25℃，流动相采用乙腈与0.04％磷酸溶液混合溶液，其中乙腈体积百分比7％～14％，采用梯度洗脱，检测波长275nm。

在优化条件下，梯度洗脱条件是：0min～10min时，流动相乙腈体积百分比7％；10min～25min时，流动相乙腈体积百分比7％～14％；25min以后，流动相乙腈体积百分比14％～20％。

上述高效液相色谱分离检测方法，当供试样品选用红景天提取液时，可以对红景天中6种成分进行同时分离，因而可以实现对红景天药材的质量检测。一般地，红景天提取液采用红景天超声波提取液。

本发明高效液相色谱检测方法可以应用于红景天药材质量检测，尤其是大花红景天(Rhodiola crenulata)药材的质量检测。

一种利用上述高效液相色谱检测方法实现的大花红景天(Rhodiolacrenulata)药材质量检测方法，同时检测样品中没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸6种多酚类物质组分的含量。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：(1)本发明公开了一种可以同时分离检测供试品中没食子酸和/或红景天苷和/或酪醇和/或儿茶素和/或没食子酸乙酯和/或对香豆酸6种多酚类物质成分的高效液相色谱方法；(2)本发明检测方法可以对红景天提取液中6种成分进行分离检测；(3)本发明检测方法可以应用于红景天药材质量检测与控制；(4)提供了一种大花红景天药材质量检测方法；(5)本发明检测方法中高效液相色谱方法色谱条件常规，对样品无需特殊处理，实用及适用性高。

附图说明

图1是实施例一对照品混合溶液色谱图。

图2是实施例一大花红景天提取物色谱图。

图3是实施例二大花红景天提取物色谱图。

附图中的数字标记分别是：

1没食子酸 2红景天苷 3酪醇 4儿茶素 5没食子酸乙酯6对香豆酸

具体实施方式

下面结合附图，对本发明的优选实施例作进一步的描述。

实施例一

如图1～图2所示，用本发明方法检测红景天提取液组分。

1、供试品溶液制备

原料：取大花红景天(Rhodiola crenulata)药材，洗净、晾干、磨粉备用。

取原料药材粉约2.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加30％乙醇20mL，20℃超声处理(功率250W，频率40kHZ)20min，静置室温，加30％乙醇稀释至刻度，摇均，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，摇均，滤过，取续滤液，即得。

2、对照品溶液A制备

对照品：没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸

对照品溶液A：分别取对照品适量，精密称定，加30％乙醇制成每1mL含没食子酸0.34mg、红景天苷0.18mg、酪醇0.24mg、儿茶素0.21mg、没食子酸乙酯0.23mg、对香豆酸0.16mg的混合溶液，即得。

3、色谱条件

色谱柱：Phenomenex Luna C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)

流动相：乙腈与0.04％磷酸溶液混合溶液(乙腈(A)-0.04％磷酸溶液(B))

梯度洗脱：如表1所示

流速：1mL/min

柱温：25℃

检测波长275nm

表1梯度洗脱条件

4、上样分析测定

取供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，供试样品中各待测组分与相邻峰的分离度均＞1.5，拖尾因子在0.95～1.05，塔板数按没食子酸峰计算不低于4000。

样品含量测定：分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液A各10μL，按上述色谱条件进行测定，计算其中没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸在原药材中的含量，以(mg/g)计。：原料药材6计算。色谱图分别见图1、图2。

实施例二

用本发明方法检测红景天提取液组分，其与实施例一相同之处不再重复，其不同之处在于梯度洗脱条件。梯度洗脱条件如表2所示。色谱图分别见图3。

表2梯度洗脱条件

试验例一：线性关系考察

1、对照品溶液B制备

对照品：同实施例一

对照品溶液B：分别取对照品适量，精密称定，用30％乙醇制成每1mL含没食子酸19.11μg、红景天苷150.83μg、酪醇9.92μg、儿茶素8.54μg、没食子酸乙酯2.28μg、对香豆酸3.19μg的混合溶液；

分别精密吸取对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、2.5mL、3.5mL、4.0mL、4.5mL、5.0mL置于7个10mL量瓶中，分别加入30％乙醇稀释至刻度，摇匀。

2、上样分析测定

采用实施例一色谱条件测定，分别精密进样10μL，测定色谱峰面积。以色谱峰面积对进样量M(μg)进行线性回归，结果表明各组分在各自进样量范围内线性关系良好。线性范围、回归方程、回归系数见表3。

表3标准曲线

试验例二：精密度试验

1、对照品溶液C制备

对照品：同实施例一

对照品溶液C：分别取对照品适量，精密称定，用30％乙醇制成每1mL含没食子酸0.22mg/mL、红景天苷0.24mg/mL、酪醇0.22mg/mL、儿茶素0.21mg/mL、没食子酸乙酯0.22mg/mL、对香豆酸0.24mg/mL的混合溶液。

2、上样分析测定

采用实施例一色谱条件测定，重复进样6次，测得峰面积。计算没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸RSD分别为0.40％，0.41％，0.47％，0.43％，0.40％，0.39％。表明仪器精密度良好。

试验例三：重复性试验

1、供试品溶液制备

同实施例一。

2、上样分析测定

采用实施例一色谱条件测定，任取待测样品，每隔1h进样1次，共6次，(RSD＝0.4％n＝6)，表明实施例一检测方法重现性较好。

试验例四：稳定性试验

1、供试品溶液制备

同实施例一。

2、上样分析测定

取同一供试品溶液，采用实施例一色谱条件测定，每2h测定1次，每次进样10μL，共6次，测得没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸峰面积的RSD分别为1.48％，1.78％，1.64％，1.25％，1.43％，1.57％。表明本法稳定性较好。

试验例五：加样回收率试验

1、供试品溶液制备

大花红景天原料同实施例一。

根据实施例一测定确定的大花红景天供试品中6种组分的含量，精密称取9份大花红景天原料样品，粉碎过60目，精密称量，分别加入对照品溶液，设置成高、中、低3个供试品溶液组，每组3个重复。高、中、低3个供试品溶液组含量分别是：

低浓度供试品溶液，每1mL含：没食子酸0.25mg、红景天苷0.94mg、酪醇0.11mg、儿茶素0.19mg、没食子酸乙酯0.09mg、对香豆酸0.07mg；

中浓度供试品溶液，每1mL含：没食子酸0.32mg、红景天苷1.2mg、酪醇0.14mg、儿茶素0.23mg、没食子酸乙酯0.11mg、对香豆酸0.09mg；

高浓度供试品溶液，每1mL含：没食子酸0.40mg、红景天苷1.45mg、酪醇0.17mg、儿茶素0.28mg、没食子酸乙酯0.14mg、对香豆酸0.11mg。

2、对照品溶液制备

同实施例一。

3、上样分析测定

采用加样回收法。采用实施例一色谱条件测定，计算加样回收率。结果为没食子酸为101.5％，红景天苷为100.8％，酪醇为100.2％，儿茶素为101.8％，没食子酸乙酯为98.8％，对香豆酸为100.5％。

Claims

1.一种多酚物质的高效液相色谱分离检测方法，包括选择色谱条件、供试品和/或对照品溶液配制、进样检测过程，其特征在于：所述供试品和/或对照品包括没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸6种组分中至少之一，所述色谱条件是C18色谱柱、柱温25℃，流动相是乙腈与0.04％磷酸溶液混合溶液，乙腈体积百分比7％～20％，梯度洗脱，检测波长275nm。

2.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述梯度洗脱是0min～10min时，流动相乙腈体积百分比7％；10min～25min时，流动相乙腈体积百分比7％～14％；25min以后，流动相乙腈体积百分比14％～20％。

3.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述梯度洗脱是0min～10min时，流动相乙腈体积百分比9％；10min～25min时，流动相乙腈体积百分比9％～15％；25min～40min时，流动相乙腈体积百分比15％～20％。

4.根据权利要求1～3任一所述的分离检测方法，其特征在于：所述供试样品是红景天提取液。

5.根据权利要求4所述的分离检测方法，其特征在于：所述红景天提取液是红景天超声波提取液。

6.根据权利要求5所述的分离检测方法，其特征在于：所述红景天超声波提取液是取红景天粉末在30％乙醇水溶液中采用20℃超声波处理20min，取滤液即得。

7.根据权利要求6所述的分离检测方法，其特征在于：所述超声波条件是250W、40kHZ。

8.根据权利要求1、2、3、5、6、7任一所述的分离检测方法在大花红景天(Rhodiola crenulata)质量检测中的应用。

9.一种利用权利要求1、2、3、5、6、7任一所述的分离检测方法实现的大花红景天(Rhodiola crenulata)药材质量检测方法，同时检测样品中没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸6种组分的含量。