CN102439451B - 患神经退行性疾病的对象中抗体所识别的小分子的鉴定 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了患神经退行性疾病(ND)的个体的鉴定。鉴定了帕金森氏病和阿尔兹海默病特异性抗体识别的类肽，其能诊断或预测对象的ND。

Description

患神经退行性疾病的对象中抗体所识别的小分子的鉴定
发明背景
本申请要求与2009年6月2号提交的美国临时申请序列号61/183,260和于2010年3月29日提交的美国临时申请序列号61/318,655的优先权，上述每个申请通过整体引用并入本文。
本发明在国家心脏、肺和血液研究所(资助号NO1-HV28185)和国立卫生院(资助号DP10D00066301)的政府资助下完成。政府享有本发明的一些权益。
I.发明领域
本发明一般性涉及分子生物学、免疫学和神经生物学领域。更具体地，本发明涉及被神经退行性疾病(neurodegenerative disease，ND)特异性抗体所识别的类肽的鉴定。这些类肽可用于鉴定患有或有风险患ND的对象。
II.相关技术描述
阿尔兹海默病(Alzherimer’s Disease，AD)是有多至530万美国人患病的进行性致命脑疾病。AD破坏脑细胞，造成记忆、思考和行为问题。这些症状随时间加重，最终疾病是致命的。目前，在美国它是位列第六的致死原因，并且是痴呆的最常见形式，占所有痴呆病例的50-70％。不幸的是尽管有对症状的治疗方法，但不能治愈。
诊断阿尔兹海默病是涉及几种类型评估的经验性过程，并且可花费许多天或几周来完成。评估包括了解详细病史和身体检查。此外，设计标准实验室检测(包括血液、尿和CSF检测)主要来帮助排除其他可能病症。还进行神经心理学检测，使用多种工具来评估记忆、问题解决、注意力、视觉-运动协调和抽象思维。还应包括抑郁检测。最后，推荐脑成像扫描来排除造成症状的脑肿瘤或脑中血液凝块。总之，目前没有确切诊断阿尔兹海默病的单个检测，可能仅通过在死后检查脑组织来确定地诊断阿尔兹海默病。
帕金森氏病(PD)是另一种脑(中央神经系统)退行性疾病，它通常损害运动能力、语言和其他功能。它影响运动(运动症状)，但其他典型症状包括情绪、行为、思考和感觉障碍(非运动症状)。个体患者症状可有相当的不同，并且疾病进展也有个体差异。PD的症状是由于黑质致密区着色的多巴胺分泌(多巴胺能)细胞缺失(自发性或遗传性、毒性或创伤性缺失)。这些神经元影响纹状体，并且它们的缺失导致调节运动的基底神经节神经回路的活性改变，本质上抑制直接通路而激发间接通路。
PD的诊断有类似但稍有不同的挑战。当进行神经病学检查来评估有任何运动障碍的患者时，医生应了解病史并进行身体检查。此外，进行神经病学检查来完整评估神经系统，包括患者的运动、协调和平衡状况。有典型帕金森氏病症状的患者的血液实验室检测很少发现任何异常。脑电图(EEG’s)记录脑电活性的一些状态，但在确定PD方面不太有效。脑部MRI和CAT扫描产生显明和精细的尸检学图片，但PD疾病患者的脑甚至在这样的精细检查下也显示正常，这是因为与PD相关的改变是显微水平的并且这些扫描不能显示。由于没有确定性的诊断检测来提供具体答案，医生必须根据判断来作出PD诊断。
因此，仍需要对这两种疾病和其他神经性疾病的诊断方法：其(i)准确并且客观，(ii)简单并且可重复，和(iii)可用于早期和晚期病例两者。
发明概述
本发明提供了包含与指示神经退行性疾病之抗体结合的类肽的组合物和检测包含抗体的样品中抗体的方法，其包括将包含抗体的样品与其上附加有类肽的支持物接触。本发明的类肽具有式：
其中R1和R4独立地选自氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；芳基；杂芳基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基(isoxazoyl)；唑基；胡椒基(piperonyl)；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基(pyrimidyl)；嘧啶碱基(pyrimidinyl)；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基(isoxazolyl)；异喹啉环烷基；烯基；环烯基；苯基；吡啶基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。R2、R3和R5独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被选自以下的基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15选自H或C1-6烷基或C1-6炔基(alkynl))或R16(其中R16选自H或C1-6炔基(alkynl))；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。
或
其中R6选自氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；芳基；杂芳基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基；异喹啉环烷基；烯基；环烯基；苯基；吡啶基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；羟基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。R7和R8独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被选自以下的基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15选自H或C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16选自H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。
或
其中R9、R11和R13独立地选自氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；芳基；杂芳基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯开唑基；喹啉；异唑基；异喹啉环烷基；烯基；环烯基；苯基；吡啶基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；和羟基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。R10、R12和R14独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被选自以下的基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15选自H或C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16选自H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。
或
其中，在一个实施方案中，式1D的R17-R20和R23独立地选自氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；芳基；杂芳基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基；异喹啉环烷基；烯基；环烯基；苯基；吡啶基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；羟基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。R21、R22和R24独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被选自以下的基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15选自H或C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16选自H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。
在另一实施方案中，式1D的R17-R20、R23和R24独立地选自氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；芳基；杂芳基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基；异喹啉环烷基；烯基；环烯基；苯基；吡啶基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；和羟基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。R21和R22独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被选自以下的基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15选自H或C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16选自H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。
在又一实施方案中，式1D的R17、R19、R20和R23独立地选自氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；芳基；杂芳基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基；异喹啉环烷基；烯基；环烯基；苯基；吡啶基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；和羟基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。R18、R21和R24独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被选自以下的基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15选自H或C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16选自H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。
在式1A中，R2、R3、R4和R5可另外地选自表1和2显示的为ADP1-3和PDP1-3寡聚体中具体类肽单体位置的等同字母名称提供的那些基团。例如，在式1A中，选自R2、R3和R5的R变量可独立地选自表1和/或2针对具体类肽ADP-1的A、B或C和针对ADP2(D、E或F)和ADP3(G、H或I)所显示的那些侧链或单体。
在式1B中，R7和R8可另外地选自表1和2显示的为ADP1-3寡聚体中具体类肽单体位置的等同字母名称提供的那些基团。例如，在式1B中，选自R7和R8的R变量可独立地选自表1和/或2针对具体类肽ADP-1的C和针对ADP2(E或F)和ADP3(I)所显示的那些侧链或单体。
在式1C中，R10、R11、R12和R14可另外地选自表1和2显示的为ADP1-3寡聚体中具体类肽单体位置的等同字母名称提供的那些基团。例如，在式1C中，选自R7和R8的R变量可独立地选自表1和/或2针对具体类肽ADP-1的A、B或C和针对ADP2(D、E或F)和ADP3(G、H或I)所显示的那些侧链或单体。
在式1D中，R21、R22、R23和R24可另外地选自表1和2显示的针对ADP1-3寡聚体中具体类肽单体位置的等同字母名称提供的那些基团。例如，在式1D中，选自R7和R8的R变量可独立地选自表1和/或2针对具体类肽ADP-1的A、B或C和为ADP2(D、E或F)和ADP3(G、H或I)所显示的那些侧链或单体。
在本文所述的式中，Z是偶联基团，其可包括一个或更多个氨基酸或功能基团；L是任选的接头部分，M是基质或支持物或标记物；并且m、n、o和/或p是0-6。
方法还包括(b)检测与所述类肽结合的抗体。
在某些方面，本文所述的类肽可在羧基端或氨基端包含末端功能基团；该功能基团能偶联至支持物、接头部分、标记物或其他部分。在某方面，末端半胱氨酸残基偶联至所述类肽并可提供进一步将所述类肽偶联至基质的巯基。在另一些方面，羧基端可包含NH2、OH或其他化学基团，它们可进一步与基质(直接或间接)或接头或其他部分反应。
可使用多种接头。最简单的接头组分是类肽和第二部分(如基质或其他分子实体)之间的键。更一般地，接头会提供单分子或多分子骨架从而将一个或更多个类肽共价或非共价连接至一个或更多个基质或分子部分。因此，本文所述的类肽与期望的基质或分子部分的连接可以通过共价或非共价方式进行，这通常涉及与位于类肽和/或基质上的一个或更多个功能基团或第二分子实体相互作用。可用于该目的的化学反应性功能基团的实例包括氨基、羟基、巯基(sulfhydroxyl)、羧基和羰基，以及糖基、邻二醇、硫醚、2-氨基醇、2-氨基硫醇、胍基、咪唑基和酚基。
所述方法还包括从对象获得样品。所述方法还包括如果抗体与所述类肽的结合大于在对照未患病患者中观察到的，则诊断从其获得所述样品的对象患阿尔兹海默病。在又一方面，所述方法还可包括为对象制定具体的药物或疗法。
在某些方面，类肽可以选自AD1(APD1)、AD2(APD2)和AD3(APD3)，其中Z如上所述。样品可以与多于一种的式1A-1D的类肽接触，例如，三种结构不同的类肽(例如，AD1、AD2和AD3)。
在某些方面，所述支持物可以是珠、板、蘸棒(dipstick)、滤器、膜、针或孔。所述样品可以是血液、血清、唾液或CSF。检测步骤可包括RIA、FIA、ELISA、Western印迹、流式细胞术、FRET或表面等离子共振。
在某些方面，本发明的类肽可包括下式之一：
(i)(X)0-4(甲基苄基)(甲基苄基)(正丁胺)(正丁胺)
(ii)(X)0-4(烯丙基)(烯丙基)(正丁胺)(X)，或
(iii)(X)(胡椒基)(X)0-2(正丁胺)(X)0-2(甘氨酸)；
其中X可以是氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；或羟基。在一个优选的实施方案中，单体胺或氨基酸选自甘氨酸、半胱氨酸、烯丙基胺、乙醇胺，异丁胺、二氨基丁烷、甲基苄基胺、胡椒基胺、4(2-氨基乙基)苯磺酰胺、糠基胺、苄基胺、3-甲氧基丙胺(MPOA)、2-甲氧基乙基和环己基胺。可以任何组合使用这些单体以形成3-12mer长的寡聚物。
一些实施方案包括2、3、4、5、6、7、8个或更多个单体单元的类肽。在某些方面，类肽可包含从第1、2、3、4、5、6位至第8位或从第8、7、6、5、4、3、2位至第1位的类肽序列，或其间任何2、3、4、5、6、7个单体的类肽。
单体可包括R基团的多种组合，例如氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；芳基；杂芳基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基；异喹啉环烷基；烯基；环烯基；苯基；吡啶基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C1-C6烷基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-C6炔基；赖氨酰基；羧基；或羟基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。
在某些方面，式ADP1、ADP2和/或ADP3的某些单体单元可以是表1-3中所选基团并在特定位置。一些最优选的实施方案是显示为ADP1、ADP2、ADP3的具体化合物，并且还包括在肌氨酸扫描(sarcosine scan)中鉴定的那些活性化合物，该扫描鉴定以上所示的ADP1-3结构中称为A-I位的具体单体。下表1和2在左栏中提供了ADP1-3具体位置的名称，ADP1-3可另外地具有表1所示的侧链(使用具有所述侧链的胺)或表2所示的替代胺，并且它们位于这些特定优选位置处。ADP1、ADP2和ADP3的残基A至I还可被独立地选自以下的基团取代：氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；芳基；杂芳基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基；异喹啉环烷基；烯基；环烯基；苯基；吡啶基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基；未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基—包括下表1和2中描述的一种或多种化学基团。R2、R3和R5独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被选自以下的基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15选自H或C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16选自H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基。
表1类肽的侧链修饰
表2可用于合成本文所述类肽的胺的列表
在另一实施方案中，提供了结合指示帕金森氏病之抗体的类肽和检测在包含抗体的样品中抗体的方法，其包括(a)将包含抗体的样品与有类肽附加其上的支持物相接触，所述类肽具有式：
在一个实施方案中，R27是烷基芳基。在某些方面，R27是甲基苄基。式2A的R25、R26、R28-R32独立地选自氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；芳基；杂芳基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基；异喹啉环烷基；烯基；环烯基；苯基；吡啶基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被选自以下的基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15选自H或C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16选自H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基—包括表1和2中描述的一种或多种化学基团。在某些方面，R26、R29、R31和/或R32是烷基胺，例如N-丁基胺。在又一方面，R30是烯基，如烯丙基。
在另一实施方案中，类肽可具有式2B，其中，R34是烷基胺，例如N-丁基胺。在又一实施方案中，R35是烯基，如烯丙基。在某些实施方案中，R37是烷氧基如乙醇。在某些方面，式2B的R33、R36和R38-R40独立地选自氢；烷基；烯丙基；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；正丁胺；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；芳基；杂芳基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基；异喹啉环烷基；烯基；环烯基；苯基；吡啶基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被选自以下的基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15选自H或C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16选自H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基—包括表1和2中描述的一种或多种化学基团。
在本文所述的式中，Z是偶联基团，其可包括一种或更多种氨基酸或功能基团；L是任选的接头部分，M是基质或支持物或标记物；并且m、n、o和/或p是0-6。
在某些方面，所述方法还包括(b)检测与所述类肽结合的抗体。
所述方法还包括从对象获得样品。所述方法还可包括如果抗体与所述类肽的结合大于在对照未患病患者中观察到的，则诊断从其获得所述样品的对象患帕金森氏病。在又一方面，所述方法还可包括为对象制定药物或疗法。
在某些方面，类肽可以选自PD1、PD2和PD3。样品可以与多于一种的式2A-2B的类肽接触，例如，三种结构不同的类肽(例如，PD1、PD2和PD3)。
在某些方面，所述支持物可以是珠、板、蘸棒、滤器、膜、针或孔。所述样品可以是血液、血清、唾液或CSF。检测可包括RIA、FIA、ELISA、Western印迹、流式细胞术、FRET或表面等离子共振。
在又一实施方案中，提供了治疗被怀疑患神经退行性疾病(ND)的对象的方法，其包括(a)将来自所述对象的包含抗体的样品与一种或更多种有类肽附加其上的支持物相接触，所述类肽包含具有式(1A)、式(1B)、式(1C)、式(1D)、式(2A)和/或式(2B)的二类肽单元，(b)检测与所述类肽结合的抗体；和(c)根据步骤(b)的结果作出治疗决定。所述方法还可包括从对象获得样品。所述方法还可包括如果抗体与PD类肽的结合大于在对照未患病患者中观察到的，则诊断从其获得所述样品的对象患帕金森氏病，或者如果抗体与AD类肽的结合大于在对照未患病患者中观察到的，则诊断从其获得所述样品的对象患阿尔兹海默病。在又一方面，所述方法还可包括针对对象作出治疗决定。所述样品可与多于一种的式1A-1D和/或2A-2B的类肽接触。所述样品可与对PD和AD各自抗体有反应性的三种结构不同的类肽接触。所述支持物可以是珠、板、蘸棒、滤器、膜、针或孔。所述样品可以是血液、血清、唾液或CSF。检测可包括RIA、FIA、ELISA、Western印迹、流式细胞术、FRET或表面等离子共振。
在另一些实施方案中，神经退行性疾病包括但不限于阿尔兹海默病；帕金森氏病；多发性硬化(multiple sclerosis，MS)、肌萎缩性侧索硬化(ALS或Lou Gehrig氏病)；痴呆；运动神经元病；朊蛋白病(priondisease)；亨廷顿氏病；Tau蛋白病(Tauopathies)；17号染色体痴呆病；遗传性神经病和涉及小脑退行的疾病。
另一实施方案涉及从生物流体中分离的指示神经退行性疾病的抗体组合物。在某些实施方案中，通过将具有该抗体的样品与特异性结合指示神经退行性疾病或与其相关的类肽组合物相接触来分离所述抗体。抗体可以从其他非抗体或非ND特异性成分中取出、分离或纯化。然后可以从类肽捕获剂中清洗和/或解离出抗体。
在某些实施方案中，将类肽阵列与补充有细菌裂解物(例如大肠杆菌裂解物)的生物样品杂交。生物样品包括对照样品和具有中央神经系统疾病标记物的样品。例如，将微阵列载片用杂交盒覆盖并用1XTBST(50mMTris，pH 8.0，150mM NaCl，0.1％Tween20)平衡约15分钟。然后用浓度至少、至多或约0.5、1、1.5、2mg/ml裂解物的细菌裂解物封闭载片。去除裂解物，用约1ml的细菌裂解物中的生物样品(具有约5、10、15、20或25μg/ml的蛋白质浓度，包括其间所有范围和值)孵育并轻微震摇。然后用1XTBST清洗微阵列并标记抗IgG抗体(例如1∶400稀释)。然后用适当的缓冲液清洗载片。离心(例如，1500rpm旋转5分钟)干燥载片并在微阵列扫描仪上扫描，例如使用100％功率的635-nm激光和600或650的光电倍增管放大。因此本发明还涉及在诊断测定中降低背景抗血清噪音的方法，其包括用大肠杆菌裂解物处理对照血浆样品和疾病样品，并将所述样品与类肽或配体阵列接触。认为该方法可用于进行任何阵列的处理，使用所述阵列来在比较对照样品和疾病样品的情况下检测并区分血清中的抗体。
考虑本文所述的任何方法或组合物可参照本文所述的任何其他方法或组合物实施。
在权利要求和/或说明书中，术语“包含”在没有数量限定时可以指“一”，但还可以指“一或更多”、“至少一”和“一或多于一”。
考虑说明书中讨论的任何实施方案可参照本发明的任何方法或组合物实施，反之亦然。此外，本发明的组合物和试剂盒可用于完成本发明的方法。
在本申请中，术语“约”用于表明仪器、用于确定值之方法的误差的固有变化，或研究对象之间存在的变化。
附图简述
以下附图是本发明说明书的一部分，包括附图来进一步展示本发明的某些方面。通过参照一个或更多个这些附图以及本文给出的具体实施方案的详细描述，可以更好地理解本发明。
图1A-B-所发现的捕获疾病特异抗体的类肽的结构。(图1A)类肽AD1-AD3鉴定阿尔兹海默病抗体。(图1B)类肽PD1-PD3鉴定帕金森氏病抗体。Z表示可进一步偶联至基质、接头或第二分子实体的功能基团。
图2A-C-将阿尔兹海默病和帕金森氏病对象区别于对照的抗体谱。(图2A)类肽AD1-AD3的血清抗体结合谱。(图2B)类肽PD1-PD3的血清抗体结合谱。(图2C)ADPD1-ADPD3的血清抗体结合谱。
图3.AD血清样品的去除(经尸检确认)。通过经过具有过量固定化ADP1的柱来去除血清样品中的ADP1结合抗体。然后评价去除的血清与ADP1-3的结合。图表明类肽ADP1和ADP3结合相同的抗体，而类肽ADP2结合不同的抗体。
图4.在微阵列上对作为阿尔兹海默病选择性标记物的ADP1类肽的验证。
图5.在微阵列上对作为阿尔兹海默病选择性标记物的ADP2类肽的验证。
图6.在微阵列上对作为阿尔兹海默病选择性标记物的ADP3类肽的验证。
图7.对5年后中间对象AD12的验证。
图8.阿尔兹海默病相比于正常对照的Luminex滴定。(图8A)AD样品相比于正常对照的尸检确认。(图8B)AD5相比于NC9。(图8C)AD8相比于NC11。(图8D)AD样品相比于正常对照合并物的尸检确认。
图9.不同正常对照样品的Luminex滴定。(图9A)2种不同的正常对照相比于正常对照合并物。(图9B)AD8相比于NC11。(图9C)AD样品相比于正常对照合并物的尸检确认。
图10.在Luminex珠上对作为阿尔兹海默病选择性标记物的ADP1类肽的验证。
图11.在Luminex珠上对作为阿尔兹海默病选择性标记物的ADP2类肽的验证。
图12.在Luminex珠上对作为阿尔兹海默病选择性标记物的ADP3类肽的验证。
图13.中间样品的Luminex滴定。
图14.ADP1-3的肌氨酸扫描结果。
图15.用或不用细菌裂解物封闭剂孵育的类肽阵列的比较。
说明性实施方案描述
I.神经退行性疾病
神经退行性疾病(ND)包括多种中央和外周神经系统的衰弱病症。然而大部分影响CNS。这些疾病包括阿尔兹海默病、Pick氏病、老年痴呆、帕金森氏病、多发性硬化、多系统萎缩、路易体痴呆、亨廷顿氏病、进行性核上性麻痹、克雅氏病、肌萎缩性侧索硬化、痴呆、运动神经元病、朊蛋白病、亨廷顿氏病、Tau蛋白病、17号染色体痴呆病、遗传性神经病和涉及小脑退行的疾病。
由于对这些疾病通常没有单一确定性的检测，并且由于这些疾病中的许多显示重合的症状，医生耗费数周和百万美元进行以“排除”为目的的检测，其最终提供很少或不提供诊断益处。因此对简单和精确的检测有很大需要。
本发明人鉴定了多个小分子“类肽”，它们是患帕金森氏病或阿尔兹海默病对象特有产生的抗体的特异性配体。类肽或N-取代的寡聚甘氨酸是肽模拟物的特别亚类型。它们与其天然肽对应物紧密相关，但化学上的不同在于它们的侧链延分子的骨架附加在氮原子上，而不是在α-碳上(如氨基酸中的那样)。由于这些类肽对疾病特异性抗体显示灵敏的选择性，目前可以使用便宜和易于使用的基于免疫的简单测定来为至少一些PD和AD对象提供确定性诊断。本发明的这些和另一些方面在以下详细给出。
A.帕金森氏病
帕金森氏病(PD)是分类为运动障碍的病症类型的一种。它是慢性和进展性的。当黑质细胞开始功能失常并最终死亡时发生帕金森氏病。这导致多巴胺产生缺失，多巴胺是将信号转运至控制运动启动和协调的脑部分的化学信使。初期症状是四肢和躯干的颤抖、僵硬或僵直；运动徐缓或迟缓；和姿势不稳或平衡和协调受损。次要症状包括语言改变、面部表情丧失、吞咽困难、流口水、疼痛、痴呆或意识模糊、睡眠障碍、抑郁、害怕或焦虑、记忆困难、泌尿问题、疲劳和痛感和乏力。然而，症状有很大不同，并且疾病进展可能快或慢。
多至1百万美国人患PD。尽管约15％的患者在40岁前被诊断出患病，发病率随年龄增加。病因未知，尽管目前没有治愈方法，有许多治疗选择(如药物和手术)来应对症状。每种治疗的成功程度有个体差异，治疗选择保持有效的时间长度也有个体差异。
左旋多巴是多巴胺前体，认为其是PD治疗的突破。不幸的是，患者感受到致虚弱的副作用，包括严重的恶心和呕吐，病者随着剂量增大和使用时间增长，患者体验到其他副作用包括运动异常。息宁(Sinemet)(左旋多巴+卡比多巴)显示出显著的改进，卡比多巴的添加防止左旋多巴在肠、肝和其他组织代谢，使更多的左旋多巴到达脑。因此，只需要小剂量的左旋多巴，并且严重的恶心和呕吐大大减少。
Stalevo(卡比多巴+左旋多巴+恩他卡朋)是用于体验到剂末“衰减”的征兆和症状的患者的组合片剂。片剂将卡比多巴/左旋多巴与恩他卡朋相组合。尽管卡比多巴降低左旋多巴的副作用，恩他卡朋延长(多至10％)左旋多巴在脑中的活性。
Symmetrel(盐酸金刚烷胺)活化多巴胺从储存位置的释放并可能阻止多巴胺到神经末稍的重摄取。它还有阻断谷氨酸受体的活性。它的多巴胺能作用导致它在减少左旋多巴引起的运动异常中有效，并因此被称为间接作用的多巴胺激动剂，其广泛用于早期单一治疗，在需要时加入药力更强的息宁。
抗胆碱能药物(三己芬迪、甲磺酸苯托品、丙环定等)不直接作用于多巴胺能系统。它们发挥降低另一神经递质乙酰胆碱的活性的作用。脑中乙酰胆碱水平和多巴胺水平之间有复杂的相互作用。许多临床医生发现如果激动剂或左旋多巴不缓解颤抖，则添加抗胆碱能药物通常有效。副作用包括视觉模糊、口干和尿潴留。这些药物对老年患者禁用，因为其可导致意识模糊和幻觉。
其他药物包括司来吉兰(Selegiline)或deprenyl(Eldepryl)，已证明当在PD最早期使用时延迟对息宁的需要。多巴胺激动剂是直接激活多巴胺受体的药物，并且可单独服用或与息宁联合服用。这些激动剂包括溴麦角环肽(Parlodel)、培高利特(Permax)、普拉克索(Mirapex)和罗匹尼罗(Requip)。COMT抑制剂如托卡朋(Tasmar)和恩他卡朋(Comtan)通过阻断降解左旋多巴的酶的作用延长症状缓解的持续时间。
在药物不能满足需要的一些患者中手术是一种选择。在作出任何决定前患者应与其神经科医生详细地讨论手术。两种较老的损伤性手术是苍白球切开术和丘脑切开术。苍白球切开术可缓解僵硬和运动徐缓症状，丘脑切开术帮助控制颤抖。医生很少进行这两种手术，因为这两者均永久性破坏部分脑并且具有严重的副作用。损伤可以使未来可能能进行的手术不能进行，如脑组织移植。
深部脑刺激(DBS)更安全有效，因此以用其替代这些方法。它是优选的手术选择因为其有与苍白球切开术和丘脑切开术相同(如果不是更佳)的作用。DBS还为其他将来可能能进行的手术留下可能性。像任何手术一样，它有风险和副作用。DBS手术的主要优势是减少运动起伏，即有息宁效力的降低导致的起落。通常在脑的一侧放置电极。植入在脑左侧的DBS电极会控制身体右侧的症状，反之亦然。在一些情况下，患者需要在脑的两侧放置电极。
B.阿尔兹海默病
痴呆是严重影响人进行日常活动的脑疾病。阿尔兹海默病(AD)是老年人痴呆的最常见形式。科学家认为多至4百万美国人患AD。疾病通常在60岁后发病，风险随年龄增长而升高。尽管年轻人也可能患AD，但要不常见得多。65岁至74岁的男性和女性有约3％患AD，年龄85以及更老的人有一半可能患该病。尽管是大量研究的对象，AD的确切病因仍未知，并且没有治愈方法。
AD影响控制思考、记忆和语言的部分脑。其因德国医生AloisAlzheimer得名。在1906年，Alzheimer医生注意到死于不常见的精神疾病的一名女性的脑组织变化。他发现异常斑块(现在称为淀粉样蛋白斑)和缠绕的纤维束(现在称为神经纤维缠结)。当今，脑中的这些斑块和缠结被认为是AD的标志。
科学家还发现AD患者的其他脑变化。脑中对记忆和其他精神能力很关键的区域的神经细胞缺失。在脑中在神经细胞间来回携带复杂信息的化学物质的水平较低。因此，AD可通过抑制(生理上和化学上的)神经细胞间信息转移来扰乱正常的思考和记忆。
AD是进展性的，其特征为记忆丧失、语言能力弱化、视觉空间能力受损、判断力变差、态度冷漠，但保留运动能力。如上所述，AD通常开始于65岁，但其发病可能早至40岁，起初表现为记忆力下降，并且在数年中损伤认知、个性和能力发挥。也可能发生意识模糊和不安定。精神变化的类型、严重性、顺序和进展变化很大。由于类似于衰老的自然征兆，可以容易地忽视AD的早期症状，其包括健忘和注意力丧失。类似的症状还可能是由于疲劳、悲痛、抑郁、疾病、丧失视觉或听觉、酗酒或使用某些药物，或只是有过多细节一时不能记起。
对AD没有治愈方法并且没有减缓疾病进展的方法。对于在该疾病早期或中期的人，药物如塔克林可减轻一些认知症状。Aricept(多奈哌齐)和艾斯能(rivastigmine)是可逆乙酰胆碱酯酶抑制剂，其适于治疗轻至重度的阿尔兹海默式痴呆。并且，一些药物可帮助控制行为症状如失眠、焦灼、漫游、焦虑和抑郁。这些治疗旨在使患者更舒适。
疾病的病程有个体差异。一些人只在人生的最后5年患病，而另一些可能患病多达20年。AD患者中最常见的死因是感染。
AD的分子学方面很复杂并且仍未完全确定。如上所述，AD的特征为脑中淀粉样斑块和神经纤维缠结的形成，特别是在记忆处理的中心海马区。几个分子造成了这些结构：淀粉样β蛋白(Aβ)、早老素(PS)、胆固醇、载脂蛋白E(ApoE)和Tau蛋白。其中Aβ似乎发挥重要作用。
Aβ包含约40个氨基酸残基。42和43个残基的形式比40残基的形式具有的毒性大得多。Aβ从淀粉样前体蛋白(APP)通过连续蛋白裂解产生。其中的一个酶缺乏序列特异性，因此可产生多种长度(39-43)的Aβ。Aβ的毒性形式导致异常事件如凋亡、自由基形成、聚集和炎症。
早老素编码负责将APP切割为Aβ的蛋白酶。有两种形式：PS1和PS2。PS1的突变导致产生Aβ42，并且是早期AD发病的典型病因。
据称胆固醇降低剂有预防AD的能力，尽管没有确定的证据将胆固醇升高与AD风险加大联系起来。然而，Aβ包含鞘脂类结合结构域的发现为该理论进一步提供了证据。
类似地，现在认为参与胆固醇重分配的ApoE促进AD发生。显示最低程度的胆固醇外排的ε4等位基因的个体更可能发生AD。
与正常脑中的微管相关的Tau蛋白在患AD的脑中形成配对的螺旋丝(paired helical filament，PHF)，其是神经纤维缠结的主要组分。目前的证据表明Aβ蛋白可导致Tau蛋白的过度磷酸化，导致其从微管上解离并聚集成PHF。
对于AD，已经使用药物来限制疾病的进展并减轻或改善某些相关症状。这些药物一般属于胆碱酯酶抑制剂、蕈毒碱激动剂、抗氧化剂或抗炎剂。加兰他敏(Reminyl)、塔克林(Cognex)、司立吉林、毒扁豆碱、revistigmin、多奈哌齐(Aricept)、rivastigmine(艾斯能)、美曲磷酯、米拉美林、呫诺美林、saeluzole、L-乙酰肉碱、艾地苯醌、ENA-713 memric、喹硫平、neurestrol和neuromidal是被提出作为AD治疗剂的一些药物。
II.神经退行性疾病的诊断/预后/治疗决定
本发明第一次提供了对如阿尔兹海默病和帕金森氏病的疾病的确定性诊断。这使医生有知道他们已经正确地鉴定患者症状的生理基础的信心，从而启动早期干预和疾病处理。
由于对AD的治疗主要是延缓而不是阻止疾病，并且一些PD治疗以相同的方式起作用，对这些疾病提供早期诊断的能力对延缓更多严重症状的发生很关键。这还会为这些患者保持生活质量并延长生存。此外，由于能为患者提供正确的药物以应对他们的症状而没有错误诊断有时造成的“试验和错误”，它能限制减少治疗花费，避免患者的不适和可能的伤害。
这些测定将全部依赖于使用包含抗体的患者样品。最常使用的生物样品是血液或血清，因为其中抗体较多。然而，其他样品如眼泪、唾液、痰液、脊髓液、精液或尿液也可使用。
在对患者抗体水平的评价中，将观察的水平与标准相比较。标准可以取决于对疾病和正常对象两者建立的已知值，因此除反应对照(即表明出现阳性反应所需的试剂和条件)外可以不需要使用者提供任何东西。或者，可选择测定真实的对照，它包含从已知健康或疾病状态的真实人中获得的类似样品。此外，可以测定随时间从相同对象中获得的一系列样品，以寻找PD或AD抗体水平升高的趋势，将其作为疾病进展的指示。
III.基于抗体的诊断测定
如上所述，本测定的应用是(a)鉴定血清抗体谱表明其有风险发生或已患有ND的患者；(b)鉴定症状表明其可能或可能未患ND的患者(即提供ND的确定性诊断)；(c)评价ND治疗的影响；和(d)监测ND进展。
本发明的检测方法与基于抗体的检测方法类似，因此包括的形式如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、免疫放射量测定、荧光免疫测定、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、FACS、FRET和Western印迹等。多种有用的免疫检测法的步骤在科学文献中已有描述，如Doolittle和Ben-Zeev(1999)、Gulbis和Galand(1993)、De Jager等(1993)和Nakamura等(1987)。一般地，免疫结合法包括获得包含抗体的样品，将该样品在能有效形成类肽-抗体复合物的条件下与本发明的多肽接触，和检测结合至所述类肽的抗体。
类肽通常连接至固体支持物，其形式如柱基质、珠、滤器、膜、棒、板或孔，并且样品施加至固定的类肽。不期望的组分从支持物上洗脱，留下与类肽复合的抗体，然后用多种方式进行检测，如随后添加连接至可检测部分的抗Fc抗体。
在有效条件下将所选生物样品与类肽接触足以形成类肽-抗体复合物的时间是简单地将样品与类肽接触并将混合物孵育足以使抗体结合至类肽的时间的通常做法。在这段时间后，通常清洗样品-类肽组合物(如ELISA板、点印迹或Western印迹)以去除任何非特异结合的抗体种类，使仅检测特异结合至固定化的抗体-类肽复合物的那些抗体。
通常，类肽-抗体复合物形成的检测在本领域公知并且可通过实施多种方法达到。这些方法通常基于检测标记或标志物，如放射活性、荧光、生物和酶学标签的那些。涉及这些标记的使用的专利包括美国专利3,817,837、3,850,752、3,939,350、3,996,345、4,277,437、4,275,149和4,366,241。当然，如本领域已知使用第二结合配体如第二抗体和/或生物素/亲和素配体结合配置可具有额外的优势。
考虑了多种其他形式并且它们为本领域技术人员公知。以下讨论预计可方便地用于本发明的三种具体测定。
A.ELISA
免疫测定最简单和直接的意义是结合测定。特别地用于本发明的某些免疫测定是本领域已知的多种类型的酶联免疫吸附测定(ELISA)和放射免疫测定(RIA)。
在一个示例性ELISA中，本发明的类肽被固定在所选表面上，如聚苯乙烯微滴定板的孔中，然后，将怀疑含有所述抗体的测试组合物加入孔中。在结合并清洗以去除非特异结合复合物后，可检测结合的抗体。可以通过添加连接至可检测标记的另一类肽进行检测。除经标记的试剂的结合到结合抗体的Fab部分外，这类测定与简单的“夹心ELISA”类似。检测还可以通过添加结合任何结合抗体(例如识别结合抗体的Fc区)的经标记抗体进行。任选地，该抗体是未标记的，并且随后添加对第一抗体有结合亲和性的第二抗体，该第二抗体连接可检测标记。
在另一示例性ELISA中，将怀疑含有所述抗体的样品固定在孔表面，然后与本发明的经标记类肽接触。在结合并清洗以去除非特异结合免疫复合物后，可检测结合的经标记类肽。或者，类肽未经标记，并可通过特异结合所选类肽的人工抗体(非样品)进行检测，该第二抗体应连接可检测标记，从而能进行检测。
无论采用何种形式，ELISA具有一些共同特征，如包被、孵育和结合，清洗以去除非特异性结合种类，并检测结合的免疫复合物。这些在以下讨论。
在用类肽或抗体包被板时，通常用类肽或抗体溶液孵育板的孔过夜或特定的几小时。在某些方面，板可以用细菌裂解物封闭，如大肠杆菌裂解物(见实施例1)。然后清洗板的孔以去除不完全吸附的物质。然后孔中任何剩余的可利用表面被相对于测试抗血清呈抗原中性的非特异性蛋白质包被。这些包括牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白或奶粉溶液。包被能封闭固定表面上的非特异性吸附位点，因而减少由抗血清非特异性结合至表面所导致的背景。或者，由于类肽的简单和可预测的化学结构，它们可通过特定化学反应结合至支持物。
在ELISA中，可能更经常使用第二或第三检测方式而不是直接的方法。因此，在类肽或抗体结合至孔后，用非反应性物质包被以减少背景，并清洗以去除未结合物质，在足以使免疫复合物形成的条件下将固定的表面与待检测的生物样品或类肽接触。免疫复合物的检测则需要经标记的第二结合类肽或抗体，或与经标记的第三抗体(对抗体或类肽的Fc区有特异性)结合的第二结合类肽或抗体。
“在足以使免疫复合物(抗原/抗体)形成的条件下”是指该条件优选地包括用如BSA、牛γ球蛋白(BGG)或磷酸盐缓冲液(PBS)/Tween的溶液稀释抗原和/或抗体。这些加入的试剂还有助于减少非特异背景。
“适合的”条件还指孵育的温度或时间足以促使有效结合。孵育步骤通常约1至2至4小时左右，温度优选在25℃至27℃左右，或可在约4℃左右过夜。
在ELISA的所有孵育步骤后，清洗接触表面以去除未复合的物质。优选的清洗方法包括用溶液如PBS/Tween或硼酸盐缓冲液清洗。在测试样品和起初结合的物质之间形成特异性免疫复合物和随后的清洗后，可以检测甚至微量免疫复合物的出现。
检测可以使用酶，其在用适合的显色底物孵育后会显色。因此，例如，期望在利于发生进一步免疫复合物形成的条件下将第一和第二免疫复合物用尿素酶、葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酶或过氧化氢酶缀合抗体或类肽接触或孵育一段时间(例如，在室温下在含有PBS的溶液如PBS-Tween中孵育2小时)。
在用经标记抗体或类肽孵育并随后清洗以去除未结合物质后，确定标记的量，例如通过用显色物质如尿素、溴甲酚红紫或2，2′-连氮基-二-(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)或H2O2(在过氧化物酶作为酶标记的情况下)孵育。然后可通过测量产生颜色的程度来进行定量，例如通过可见光谱分光光度计。
B.福斯特共振能量转移(Resonance Energy Transfer，FRET)
FRET是一个分子(称为供体)中激发状态的能量通过无辐射偶联转移至另一分子的现象。该现象首先由正确描述，并于其他类型的能量转移(如电子共享(Dexter)或简单转移(供体发射的光子被受体重吸收))区分。Dexter机制需要两个分子物理接触，而简单转移的可能性极低。与之不同，当两个分子在半径内(对于任何给定的荧光团对是已限定的)时机制有很高的可能性。
总体的FRET效力取决于半径，并且其通过几个因素确定，并且直接与受体分子的吸收谱和供体分子的发射谱的重合量相关。FRET的量还取决于供体和受体分子的定向，尽管大部分生物系统没有刚性的定向。FRET的效力还被受体分子吸收光的能力(由其摩尔吸光系数指示)和供体分子激发状态的总体稳定性(由吸收导致荧光的可能性(量子产额)和激发状态的寿命指示)影响。
可通过几种方法测定两个不同荧光团之间的FRET：观察荧光颜色变化、测量供体的荧光寿命、检测光致漂白时供体或受体的变化或如我们在本新发明中显示的：通过测量受体的荧光偏振。不管用何种方法，大部分这些测定具有共同的仪器特性。
可根据目的适当地选择用于测量FRET的显微镜类型。如果为监测随时间的变化而需要经常观察，优选常见的入射光荧光显微镜。如果提高分辨率(如监测具体的细胞内定位时)则优选共焦激光显微镜。对于显微镜系统，由于能保持细胞的生理状态并防止污染，对大部分活细胞的测量优选倒置显微镜。当使用立式显微镜时，在使用高倍透镜时可使用水浸没透镜。
可根据荧光蛋白质的荧光波长适合地选择滤镜组。为观察GFP，优选使用激发光约470-490nm且荧光约500-520nm的滤镜。为观察YFP，优选使用激发光约490-510nm且荧光约520-550nm的滤镜。为观察CFP，优选使用激发光约425nm且荧光约460-500nm的滤镜。为本发明目的，对显微镜和滤镜没有特定要求，除在光路中需要将偏振元件最小化的情况。在透射和反射显微镜中，显微镜制造商都销售无变形的光学元件用于偏振光测量，这些光学元件对这些偏振荧光测量也有帮助。
此外，当通过使用荧光显微镜对活细胞进行随时间的观察时，细胞应在短时间内被拍照，因此使用高敏感性的冷CCD照相机。通过使用冷CCD照相机，可通过冷却CCD降低热噪音，并且可通过短时间曝光获得清楚的弱荧光图像。共焦显微镜也可用于活细胞成像，只要小心地将曝光时间最小化。
C.Luminex珠
Luminex’s xMAP借助于现有的技术平台，包括流式细胞术、微球、激光、数字信号处理和传统化学。xMAP的特点是灵活、开放架构的设计，其可被设置为快速、经济并准确地实施多种生物测定。
Luminex将微球用颜色编为100个不同的组。每组球可包被有本发明的类肽，从而能从样品中捕获和检测特异抗体。在Luminex小型分析器中，激光激发每种微球颗粒特有的内部染料和在测定中捕获的任何报告染料。对每组球作出许多读数，进一步确认结果。通过这种方式，xMAP技术能在单一样品中多通道进行多至100个独立测定，并且快速而且精确。
xMAP技术已经应用于生命科学的许多分支，包括蛋白质表达谱、分子和免疫诊断、HLA检测和生物防护/环境。
D.Tentagel珠
在某些方面，tentagel珠或树脂可用于检测与特定ND相关的抗体的组合物和方法中。最常见的微球制剂之一是tentagel，一种苯乙烯-聚乙二醇共聚物。这些微球在非极性溶剂如己烷中不膨胀，而在暴露至更极性或水性的基质时体积膨胀约20-40％。
类肽可粘附至固体支持物如tantagel珠上或在其上合成。Tentagel珠具有聚苯乙烯核并且粘附至该核的是多个聚氧乙烯臂，每个臂的游离端具有伯胺。可以使用类肽合成化学，通过顺次缀合添加至类肽的每个残基来合成类肽。这种分开合成法(split synthesis method)产生的珠每个均包含单个类肽序列的多个拷贝。
由于tentagel珠的聚氧乙烯臂是水溶性的，类肽的构型主要由热动力学和它们的一级序列决定。
E.免疫检测试剂盒
在又一些实施方案中，本发明涉及用于上述方法的检测试剂盒。本发明的类肽将包含在所述试剂盒中。因此免疫检测试剂盒会在适合的容器中包含结合阿尔兹海默病、帕金森氏病或两者的抗体的一种或更多种类肽，其任选地连接至检测剂和/或支持物。
在某些类肽被预先结合至固体支持物的实施方案中，提供支持物并且其包括柱基质、珠、蘸棒或微量滴定板的孔。试剂盒的免疫检测剂可采用多种形式的任何一种，包括可检测标记结合或连接至给定类肽或第二抗体的那些。示例性第二抗体是对样品抗体具有结合亲和力的那些。
所述容器通常包括至少一个管、试管、瓶、杯、注射器或其他容器，其中可放置类肽，或优选地，类肽被适当地等分。本发明的试剂盒通常还包含用于将类肽、抗体和任何其他试剂容器密封包装以进行销售的工具。这种容器可包括注塑或吹塑塑料容器，其中保存期望的管。
某些实施方案涉及包含本文所述类肽的试剂盒和使用本文所述类肽的方法。公开了用于检测、显现和/或分类至少一种疾病状态的试剂盒和/或方法。实施的步骤包括从对象(例如人)获得样品，并使用以试剂盒形式提供的试剂或阵列基质在样品中进行类肽结合分子。因此，在样品中分离或鉴定至少一种指示疾病状态的抗体。结合本文所述类肽的抗体与至少一种疾病发生风险或特定疾病状态的存在相关。
此外，本发明考虑使用多种试剂盒。一种该试剂盒提供疾病特异性抗体(包括与阿尔兹海默病和/或帕金森氏病相关的一种或更多种抗体)存在的测定。至少一种能与疾病特异抗体特异性结合的类肽整合入试剂盒。在某些方面，用于测定类肽和抗体结合的试剂也可以包括于其中。本文所述的类肽可固定于固体支持物或基质上，并包含至少一种检测剂以测定抗体是否结合至类肽。用于任何所述试剂盒的样品可以是分级分离或未分级分离的体液或组织样品。该流体的非限制性实例为血液、血液产物、尿液、唾液、脑脊液和淋巴液。
还考虑用于神经退行性疾病状态进行诊断、确定风险评估和鉴定与其相关的治疗途径的试剂盒。该试剂盒包含能与指示疾病状态的抗体特异性结合的至少一种类肽。还可以包含用于测定类肽与抗体之间的结合的试剂。
根据本发明方法分析的疾病特异抗体被释放入循环，并且可以存在于血液或任何血液产物(例如血浆、血清及其稀释液或制剂)和其他体液(例如脑脊液(CSF)、唾液、尿液、淋巴液等)中。可使用任何适合的直接或间接测定法确定所测量的抗体水平。所述测定可以是竞争性测定、夹心法测定，并且标记物可选自公知的标记物如放射免疫测定、荧光或化学发光免疫测定或免疫PCR技术。
IV.抗体组合物
某些实施方案包括用于表征特定ND的特征性抗体或被其识别的抗原决定簇的方法和组合物。对本说明书和所附权利要求而言，术语“表位”和“抗原决定簇”相互替换使用，指B和/或T细胞应答或识别的抗原部位。B细胞表位可由通过蛋白质的三级折叠并置的连续氨基酸或非连续氨基酸两者形成。由连续氨基酸形成的表位通常在暴露至变性溶剂时保留，而由三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丢失。表位通常包含独特空间构型的至少3(或更经常地，至少5或8-10)个氨基酸。测定表位空间构型的方法包括，如x光晶体法和2维核磁共振。参见例如EpitopeMapping Protocols(1996)。可在简单的免疫测定中鉴定识别相同表位的抗体，其中显示一种抗体阻止另一抗体对靶抗原的结合的能力。
T细胞识别CD8细胞约9个氨基酸或CD4细胞约13-15个氨基酸的连续表位。识别表位的T细胞可在测量抗原依赖性增殖的体外测定中鉴定，该增殖由激活的T细胞应答于表位的3H-胸腺嘧啶掺入(Burke et al.，1994)、抗原依赖性杀死(细胞毒性T淋巴细胞测定，Tigges等，1996)或细胞因子分泌所确定。
本文和权利要求中所用术语“抗体”或“免疫球蛋白”互换使用，指作为动物或接受者免疫应答的一部分发挥功能的几类结构相关蛋白质中的任一种，该蛋白质包括IgG、IgD、IgE、IgA、IgM和相关蛋白质。
在正常生理条件下，抗体存在于血浆和其他体液中和某些细胞的膜中，并且其由类型指明为B的淋巴细胞及其功能等同细胞产生。IgG类抗体由4个多肽链形成，它们通过二硫键连接在一起。完整IgG分子的4条链是被称为H链的2条相同重链和被称为L链的两条相同轻链。
如本领域公知，抗体可结合至固体支持基质或与可检测部分缀合，或者同时结合并缀合。荧光或酶学部分的缀合的一般性讨论参见Johnstone等(1982)。抗体到固体支持基质的结合也是本领域公知的(Harlow等，1988；Borrebaeck.1992)。
一旦鉴定指示ND的抗原或抗体，可以用重组技术产生所鉴定抗原和/或抗体的变体，包括单克隆抗体。例如，单链抗体(SCA)是基因改造的蛋白质，设计其以扩大用单克隆抗体可达到的治疗和诊断应用。SCA具有单克隆抗体的结合特异性和亲和性，其天然形式为单克隆抗体大小的约五分之一至六分之一，这通常使它们具有非常短的半衰期。与大多数单克隆抗体相比，SCA具有一些优点，包括它们与可用于检测(例如，萤光素酶或荧光蛋白)的多肽直接融合的能力。除这些优点外，可直接从人SCA文库中分离全人SCA，而无需昂贵和耗时的“人源化”过程。
单链重组抗体(scFV)由通过设计的可变形肽索链(tether)连接的抗体VL和VH结构域组成(Atwell等，1999)。与完整IgG相比，scFv的优点是具有较小的体积和结构简单性以及相当的抗原结合亲和力，它们可以比类似的2-链Fab片段更稳定(Colcher等，1998；Adams和Schier，1999)。重链和轻链(VH和VL)的可变区均长约110个氨基酸。它们可由15个氨基酸接头连接，或被更长的序列连接，例如该序列具有足够的柔性以使两个结构域组装成功能性抗原结合穴。在一些具体的实施方案中，添加多个信号序列使scFv靶向细胞中的不同细胞器或使其被分泌。添加轻链恒定区(Ck)使其经二硫键二聚化，使稳定性和活动性增加。因此，对于单链Fv(scFv)SCA，尽管Fv片段的两个结构域由分开的基因编码，已证明通过重组方法可以制造合成的接头使它们作为单个蛋白质链scFv形成(Bird等，1988；Huston等，1988)。此外，由于它们易于从噬菌体展示文库中分离和它们识别保守抗原的能力而被经常使用(综述参见Adams和Schier，1999)。因此，在本发明的一些方面，抗体可以是分离自噬菌体展示文库而不是产生自上述更传统的抗体生成技术的SCA。
在蛋白质的上下文中“基本纯”是指从其他杂质蛋白质、核酸和其他源自起初来源生物的生物物质中分离的蛋白质。可以通过标准方法测定纯度或“分离”，并且正常地纯度为至少约50％，更正常地为至少约60％，一般至少约70％，更一般至少约80％，通常为至少约85％，更通常为至少约90％，优选至少约95％，更优选至少约98％，在最优选的一些实施方案中，为至少99％。
本领域技术人员已知产生或分离多克隆抗体的方法。通常，通过取得包含目的抗体的来源并对来源进行分级分离以富集具有目的活性(例如类肽结合)的抗体来制备多克隆抗体。参见例如Harlow和Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual，CSH press，NY。
简言之，分离结合特定类肽的抗体的实例可包括但不限于获得包含该抗体的样品；硫酸铵沉淀样品中的抗体；使用标准技术和一种或更多种类肽作为亲和剂通过免疫亲和纯化分离抗体。使用的亲和树脂可以为活化的CH-sepharose，其偶联有具有本文所述结构的类肽。抗体沉淀可以上样至柱，并用PBS或另一适合的缓冲液或清洗溶液清洗。然后可洗脱并收集沉淀。所获得抗体的浓度可用总蛋白比色测定(Bio-Rad)确定。
本发明不旨在限于使用该具体方案来生成并纯化抗体，因为可获得多种方案并且它们为本领域技术人员已知(参见例如Sambrook等编，Molecular Cloning，Cold Spring Harbor Laboratory Press[1989]；Harlow和Lane编，Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press[1988]；Ausubel等编，Current Protocols in MolecularBiology，Ch.11，John Wiley&Sons，Inc.，New York[1994])。在本发明中使用的抗体生成方法的唯一标准是其生成足够纯的抗体制剂。
V.化学基团定义
当用于化学基团时，“氢”指-H；“羟基”指-OH；“氧代”(“oxo”)指＝O；“卤素”独立地指-F、-Cl、-Br或-I；“氨基”指-NH2；“羟氨基”指-NHOH；“硝基”指-NO2；亚氨基指＝NH；“氰基”指-CN；“叠氮基”指-N3；“巯基”指-SH；“硫代”(“thio”)指＝S；“硫醚”指-S-；“亚磺酰氨基”指-NHS(O)2-；“磺酰基”指-S(O)2-；“亚硫酰基”指-S(O)-；而且“甲硅烷基”指-SiH3。
对于本文提供的结构，以下括号中的下标进一步如下限定基团：“(Cn)”限定基团中的确切碳原子数(n)。例如，“烷基(C2-10)”指具有2至10个碳原子(例如2、3、4、5、6、7、8、9或10个，或者其中导出的任何范围(例如3-10个碳原子))的那些烷基。
术语“烷基”当在没有“取代的”修饰词下使用时，指具有饱和碳原子作为连接点的直链或支链、环、环状或非环状结构的非芳族一价基团，其无碳-碳双键或三键，且没有除碳和氢之外的原子。基团-CH3(Me)、-CH2CH3(Et)、-CH2CH2CH3(正丙基)、-CH(CH3)2(异丙基)、-CH(CH2)2(环丙基)、-CH2CH2CH2CH3(正丁基)、-CH(CH3)CH2CH3(仲丁基)、-CH2CH(CH3)2(异丁基)、-C(CH3)3(叔丁基)、-CH2C(CH3)3(新戊基)、环丁基、环戊基、环己基和环己基甲基都是烷基的非限定性实例。术语“取代的烷基”指具有饱和碳原子作为连接点的直链或支链、环、环状或非环状结构的非芳族一价基团，其无碳-碳双键或三键，且至少一个原子独立地选自N、O、F、Cl、Br、I、Si、P和S。下述基团是取代烷基的非限定性实例：-CH2OH、-CH2Cl、-CH2Br、-CH2SH、-CF3、-CH2CN、-CH2C(O)H、-CH2C(O)OH、-CH2C(O)OCH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)NHCH3、-CH2C(O)CH3、-CH2OCH3、-CH2OCH2CF3、-CH2OC(O)CH3、-CH2NH2、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CH2CH2Cl、-CH2CH2OH、-CH2CF3、-CH2CH2OC(O)CH3、-CH2CH2NHCO2C(CH3)3和-CH2Si(CH3)3。
术语“烯基”当在没有“取代的”修饰词下使用时，指具有非芳族碳原子作为连接点的直链或支链、环、环状或非环状结构的一价基团，其具有至少一个非芳族碳-碳双键，无碳-碳三键，且没有除碳和氢之外的原子。烯基的非限定性实例包括：-CH＝CH2(乙烯基)、-CH＝CHCH3、-CH＝CHCH2CH3、-CH2CH＝CH2(烯丙基)、-CH2CH＝CHCH3和-CH＝CH-C6H5。术语“取代的烯基”指具有非芳族碳原子作为连接点的直链或支链、环、环状或非环状结构的一价基团，其具有至少一个非芳族碳-碳双键，无碳-碳三键，且至少一个原子独立地选自N、O、F、Cl、Br、I、Si、P和S。基团-CH＝CHF、-CH＝CHCl和-CH＝CHBr是取代的烯基的非限定性实例。
术语“炔基”当在没有“取代的”修饰词下使用时，指具有非芳族碳原子作为连接点的直链或支链、环、环状或非环状结构的一价基团，其具有至少一个碳碳三键，且没有除碳和氢之外的原子。基团-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CC6H5和-CH2C≡CCH3是炔基的非限定性实例。术语“取代的炔基”指具有非芳族碳原子作为连接点的直链或支链的、环、环状或非环状结构的一价基团，其具有至少一个碳-碳三键，且至少一个原子独立地选自N、O、F、Cl、Br、I、Si、P和S。基团-C≡CSi(CH3)3是取代的炔基的非限定性实例。
术语“芳基”当在没有“取代的”修饰词下使用时，指具有芳族碳原子作为连接点的一价基团，所述碳原子形成其中环原子都是碳的一个或更多个六元芳香环结构的一部分，并且其中所述一价基团不含除碳和氢之外的原子。芳基的非限定性实例包括：苯基(Ph)、甲基苯基、(二甲基)苯基、-C6H4CH2CH3(乙基苯基)、-C6H4CH2CH2CH3(丙基苯基)、-C6H4CH(CH3)2、-C6H4CH(CH2)2、-C6H3(CH3)CH2CH3(甲基乙基苯基)、-C6H4CH＝CH2(乙烯基苯基)、-C6H4CH＝CHCH3、-C6H4C≡CH、-C6H4C≡CCH3、萘基和衍生自联苯基的一价基团。术语“取代的芳基”指具有芳族碳原子作为连接点的一价基团，所述碳原子形成其中环原子都是碳的一个或多个六元芳香环结构的一部分，并且其中所述一价基团还具有至少一个独立地选自N、O、F、Cl、Br、I、Si、P和S的原子。取代的芳基的非限定性实例包括如下基团：-C6H4F、-C6H4Cl、-C6H4Br、-C6H4I、-C6H4OH、-C6H4OCH3、-C6H4OCH2CH3、-C6H4OC(O)CH3、-C6H4NH2、-C6H4NHCH3、-C6H4N(CH3)2、-C6H4CH2OH、-C6H4CH2OC(O)CH3、-C6H4CH2NH2、-C6H4CF3、-C6H4CN、-C6H4CHO、-C6H4CHO、-C6H4C(O)CH3、-C6H4C(O)C6H5、-C6H4CO2H、-C6H4CO2CH3、-C6H4CONH2、-C6H4CONHCH3和-C6H4CON(CH3)2。
术语“杂芳基”当在没有“取代的”修饰词下使用时，指具有芳族碳原子或氮原子作为连接点的一价基团，所述碳原子或氮原子形成其中至少一个环原子是氮、氧或硫的芳环结构的一部分，并且其中所述一价基团不含除碳、氢、芳族氮、芳族氧和芳族硫之外的原子。芳基的非限定性实例包括吖啶基、呋喃基、咪唑并咪唑基、咪唑并吡唑基、咪唑并吡啶基、咪唑并嘧啶基、吲哚基、吲唑啉基、甲基吡啶基、噁唑基、苯基咪唑基、吡啶基、吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、四氢喹啉基、噻吩基、三嗪基、吡咯并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡咯并吡嗪基、吡咯并三嗪基、吡咯并咪唑基、苯并吡喃基(其中连接点为芳族原子之一)和色满基(其中连接点为芳族原子之一)。术语“取代的杂芳基”指具有芳族碳原子或氮原子作为连接点的一价基团，所述碳原子或氮原子形成其中至少一个环原子是氮、氧或硫的芳香环结构的一部分，并且其中所述一价基团还具有至少一个独立地选自非芳族氮、非芳族氧、非芳族硫、F、Cl、Br、I、Si和P的原子。
术语“酰基”当在没有“取代的”修饰词下使用时，指具有羰基碳原子作为连接点的一价基团，其还具有直链或支链、环、环状或非环状结构，除了羰基氧原子之外，不具有另外的非碳或非氢原子。基团-CHO、-C(O)CH3(乙酰基、Ac)、-C(O)CH2CH3、-C(O)CH2CH2CH3、-C(O)CH(CH3)2、-C(O)CH(CH2)2、-C(O)C6H5、-C(O)C6H4CH3、-C(O)C6H4CH2CH3、-COC6H3(CH3)2和-C(O)CH2C6H5为酰基的非限定性实例。因此，术语“酰基”包括但不限于有时被称为“烷基羰基”和“芳基羰基”的基团。术语“取代的酰基”指具有羰基碳原子作为连接点的一价基团，其还具有直链或支链、环、环状或非环状结构，其还具有除羰基氧原子之外的至少一个独立地选自N、O、F、Cl、Br、I、Si、P和S的原子。基团-C(O)CH2CF3、-CO2H(羧基)、-CO2CH3(甲基羧基)、-CO2CH2CH3、-CO2CH2CH2CH3、-CO2C6H5、-CO2CH(CH3)2、-CO2CH(CH2)2、-C(O)NH2(氨基甲酰基)、-C(O)NHCH3、-C(O)NHCH2CH3、-CONHCH(CH3)2、-CONHCH(CH2)2、-CON(CH3)2、-CONHCH2CF3、-CO-吡啶基、-CO-咪唑酰基和-C(O)N3是取代酰基的非限定性实例。术语“取代的酰基”包括但不限于“杂芳基羰基”基团。
术语“烷氧基”当在没有“取代的”修饰词下使用时，指基团-OR，其中R为如上所定义的术语烷基。烷氧基的非限定性实例包括：-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2CH3、-OCH(CH3)2、-OCH(CH2)2、-O-环戊基和-O-环己基。术语“取代的烷氧基”指基团-OR，其中R为如上所定义的术语取代的烷基。例如，-OCH2CF3为取代的烷氧基。
类似地，术语“烯氧基”、“炔氧基”、“芳氧基”、“芳烷氧基”、“杂芳氧基”、“杂芳烷氧基”和“酰氧基”当在没有“取代的”修饰词下使用时，指定义为-OR的基团，其中R分别为如上述定义的术语烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基和酰基。当术语烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基和酰氧基中任一个被“取代的”修饰时，其指基团-OR，其中R分别为取代的烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基和酰基。
术语“烷基氨基”当在没有“取代的”修饰词下使用时，指基团-NHR，其中R为如上述定义的术语烷基。烷基氨基的非限定性实例包括：-NHCH3、-NHCH2CH3、-NHCH2CH2CH3、-NHCH(CH3)2、-NHCH(CH2)2、-NHCH2CH2CH2CH3、-NHCH(CH3)CH2CH3、-NHCH2CH(CH3)2、-NHC(CH3)3、-NH-环戊基和-NH-环己基。术语“取代的烷基氨基”指基团-NHR，其中R为如上述定义的术语取代烷基。例如-NHCH2CF3为取代烷基氨基。
术语“酰氨基”(酰基氨基)当在没有“取代的”修饰词下使用时，指基团-NHR，其中R为如上述定义的术语酰基。酰基氨基的一个非限定性实例为-NHC(O)CH3。当术语酰氨基与“取代的”修饰词使用时，其指定义为-NHR的基团，其中R为如上述定义的术语取代的酰基。基团-NHC(O)OCH3和-NHC(O)NHCH3是取代的酰氨基的非限定性实例。
术语“饱和的”当涉及原子时指该原子仅仅通过单键连接至其他原子。
VI.实施例
包括下述实施例用于展示本发明的一些优选实施方案。本领域技术人员应当理解，在下面实施例中公开的技术代表由本发明人发现的会很好实施本发明的技术，因此可以视为构成其实施的优选方式。然而，本领域技术人员在参考本说明书的公开内容后应当理解，可以对公开的具体实施方案作出许多改变但仍获得相似或类似的结果，而不背离本发明的精神和范围。
实施例1：作为阿尔兹海默病和帕金森氏病选择性标记物的类肽的验证
本发明人使用的微阵列包含4680个八聚类肽阵列的2套拷贝以及多个标记物和对照点。将从6个阿尔兹海默病患者和6个正常对照采集的血清(血液)杂交到微阵列上。大大稀释血清样品以提供20μg/ml的血清蛋白质最终总浓度，将该溶液杂交至类肽微阵列。在孵育和清洗后，通过随后用Alexa-647标记的第二抗体孵育显示IgG结合模式。作为对照，用单独的第二抗体接触阵列，结合显著量的标记第二抗体的任何部件在随后的分析中被忽略。
对阵列所有部件的GenePix分析揭示可重复地，与接触正常血清相比，几种类肽(图1A)在接触AD血清时亮得多(在该特定蛋白质浓度强度＞30,000相对于＜10,000)(图2A)。三个目的类肽显示这样的特征。为了检测类肽的特异性，用从帕金森氏病患者收集的血清与这些类肽杂交。然而，从这些血清样品中类肽只捕获了背景水平的IgG抗体，这证明这些类肽是特异性捕获阿尔兹海默病产生的抗体的试剂(图2A)。
完成该训练组后，本发明人随后通过分析从患者(未包括在训练组中)收集的血清样品检测了这三个类肽区分AD的能力(图4-13)。还在微阵列测定和Luminex珠测定中验证了类肽(图7)。在实验中鉴定的所有3个类肽均在盲实验中表现完美。通过质谱对这三个类肽进行测序，重新合成并用HPLC纯化。
总之，本发明人已证明可通过类肽组合文库筛选分离能特异性捕获阿尔兹海默病特定IgG的合成分子。
表5.微阵列分析汇总
  评分   预测   临床诊断
  正   16   全部正确
  负   16   全部正确
  中间   4   AD(2)NC(2)
测试的全部样品＝36
表6.用Luminex平台的测定评价
  评分   预测   临床诊断
  正   47   全部正确
  负   54   全部正确
  中间   9   AD(3)NC(2)PD(4)
测试的全部样品＝110
通过在包含ADP1-3的类肽阵列上分析前检测用APD1类肽进行去除的血清的结合特性来进行另外的研究(图3)。抗体去除实验证明APD1和APD3结合类似的抗体群。而ADP2似乎结合另一抗体群。
文库合成和印制方案：在500μm聚苯乙烯大珠上使用常规的分开合并法(split-and-pool method)合成具有1个恒定残基(C末端的半胱氨酸)的8-mer类肽文库。珠粒被放置在96孔板中，每孔一个珠。然后用95％三氟乙酸、2.5％水和2.5％三异丙基硅烷的切割混合液将类肽从珠上切割下来。在每孔中加入50(50μl)该混合物并且将珠在该混合液中放置2小时。蒸发混合液。在混合液蒸发后，向每孔加入40μl 50％乙腈和50％的水。
然后用Tecan Genesis工作站200将96孔板(每孔40μl)的液体内容物转移至384孔板。每板中的34(34μl)被转移至新的384孔板。在每孔中含有6μl的板被标记为“残留”板，并静置以使乙腈/水混合物蒸发。然后将这些板用粘附贴膜封闭并储存在-80度冰箱以备用于测序。将含有34μl液体的板标记为“Master”，并且也静置以使乙腈/水混合物蒸发。
当液体从Master板中蒸发后，用Tecan Genesis工作站向每个孔加入20μl DMSO(二甲基亚砜)。从每孔中移出5(5μl)并放置在另一384孔板中。向该板每孔加入5μl DMSO并称其为“复制”板。然后将Master板用粘附贴膜封闭并储存在-80度冰箱。在4度冰箱中储存复制板以备印制微阵列。
然后用具有MP946 Micro Spotting Pin的NanoPrint将复制板的内容物印制到马来酰亚胺包被的玻璃载片上。在印制前和每次点样循环期间用10％乙醇和水的混合物清洗针。在每次取样和印制循环之间有多次清洗/声波/干燥循环。复杂阵列用全部48针头印制并使用10乘10点阵的410μm大小的点。子阵列用单个MP946在Whatman Fast Frame中印制，形式为载片上有2乘8的16个阵列并且使用10乘10点阵的410μm大小的点。印制前在50％的湿度中静置载片12小时。在印制后，关闭加湿器将载片放置12小时，而后用GenePix Autoloader 4200AL扫描仪扫描。用500PMT扫描载片以确认点的位置和形貌。
玻璃载片制作方案：用金刚石笔在每个载片的一角做标记。然后将载片放置在玻璃载片架上，将架放入玻璃染色池。
将玻璃烧杯(2L)放置在冰盒中并用冰将周围塞满。在该烧杯中制备70/30浓H2SO4和H2O2溶液(Piranha)并冷却至室温。将Piranha溶液倒入玻璃染色池以使液体覆盖载片。将其覆盖并在室温静置12小时。然后将它们取出并用去离子水彻底浸洗。将载片离心干燥。
加热水浴至80℃。将玻璃载片浸没在3-缩水甘油氧丙基三甲氧基硅烷中并放置在水浴中5-6小时伴随轻柔振摇。冷却载片然后用DMF浸没2次。再次将载片离心干燥并储存在氩气中以备下一步骤使用。
水浴温度保持在80℃。将玻璃载片浸没在2L聚(乙二醇)和8mLH2SO4的混合物中并放置在水浴中。中速至低速搅拌水浴6小时。冷却载片然后用DI水浸洗同时搅拌约1小时。再次将载片离心干燥并储存在氩气中以备下一步骤使用。
测量PMPI并溶解在无水DMSO中制成50mM溶液。然后将载片放置在PMPI反应容器上，有刻痕一面朝上。在载片下注入PMPI以使其完全填满溶器并且一些过量流入贮液器中。赶出载片朝下一面的所有气泡。在氩气中于振荡器上搅拌反应容器过夜。从反应容器中取出载片并在DMSO中清洗1小时。重复该步骤。用DMF再清洗1小时。再次将载片离心干燥并储存在氩气中以备下一步骤使用。
杂交方案：将微阵列载片用杂交盒覆盖并用1XTBST(50mM Tris，pH 8.0，150mM NaCl，0.1％Tween20)平衡15分钟。然后用1ml封闭缓冲液在4℃封闭载片1小时。去除封闭缓冲液，在4℃用约1ml血清(20μg/ml)孵育载片16小时并轻微震摇。在一个替换方法中，用1ml大肠杆菌裂解物(1.5mg/ml)封闭载片1小时。去除大肠杆菌裂解物，用1ml的大肠杆菌裂解物中的血清(15μg/ml)在4℃孵育18小时并轻微震摇。然后用1X TBST清洗微阵列3次并在4℃在轨道摇床上用Alexa-647标记的抗IgG抗体(5μg/ml)杂交2小时。从盒中取出微阵列载片并用1X TBST清洗(3x15分钟)；然后用0.1X TBST清洗(1x10)。离心(1500rpm，5分钟)干燥载片并在微阵列扫描仪(Gene Pix Autoloader4200)上扫描，使用100％功率的635-nm激光和600或650的光电倍增管放大。用Gene Pix Pro 6.0软件和Genespring软件分析所有扫描图像。
实施例2：ADP1-3的肌氨酸扫描
肌氨酸扫描的作用是用甲基而不是氢顺次替换每个侧链，保留叔位酰胺键，但去除侧链部分。类肽ADP1-3每个均包含在起初的文库合成中改变的8个位置(图14)。为了确定这8个位置处的侧链哪个会对结合AD特异抗体重要，合成了24个衍生物，其中每个侧链顺次被甲基取代。每个化合物可由固相“亚单体”化学结构形成，其中在期望取代的位置用甲基胺替换溴。为了检测每个包含甲基侧链的衍生物的抗体结合特性，在微阵列上印制所有24种化合物以及ADP1-3类肽。将经尸检确认的AD患者血清杂交至这些阵列。在清洗后，对阵列施加荧光标记的第二抗体。在再次清洗后，用荧光扫描仪测定每个位置的荧光强度。强度在图14中显示。当与母体化合物相关的给定点观察到显著的荧光降低时(指示捕获较少的抗体)，解释为表明母体化合物该位置处存在的侧链对结合至AD特异抗体重要。
实施例3.材料和方法
用于这些研究的材料方法实例包括以下。
类肽的合成和纯化。可根据亚单体法用ABI 433A肽合成仪或用平行合成机器在Rink酰胺树脂上合成类肽。(参见例如Zuckermann，R.N.，Kerr，J.M.，Kent，S.B.H.，&Moos，W.H.(1992)J.Am.Chem.Soc.，114，10646-10647.)简言之，将新生链上的酰胺溴乙酰化，而后用伯胺对溴进行SN2替换来形成侧链。合成后，可在三氟乙酸(TFA)∶三异丙基硅烷∶水(体积比95∶2.5∶2.5)中将类肽切除并去保护。可用线形乙腈/水梯度在C18柱上通过RP-HPLC纯化化合物。可以用质谱确定纯化产物的分子量。
可使用两个已经获得的亚单体单元分两步组装生长的类肽聚合物单体。Rink酰胺树脂用二异丙基碳二亚胺活化的溴乙酸溴乙酰化。然后，溴乙酰化的树脂经受伯胺对溴的SN2替换，这引入期望的侧链。可购得或合成数百种可用的胺亚单体和对应的侧链。用亚单体程序合成类肽与经单体法直接获得相比提供对化学结构多样性更大的序列的容易获取，并且仅通过序列顺序、长度和/或N-悬挂侧链结构就足以提供期望的活性。
更具体地，开始时可使Rink酰胺树脂(4-(2′，4′-二甲氧基苯基-(9-芴基甲基氧羰基)-氨基甲基)-苯氧树脂，0.25mmol；Novabiochem)在CH2Cl2中膨胀30分钟。在树脂膨胀后，通过用20％氮己烷的1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)溶液处理来去除9-芴基甲基氧羰基(Fmoc)保护基团。然后通过在室温下伴随持续搅拌与4.2ml的1.2M溴乙酸(50mmol)的N，N-甲基甲酰胺(DMF)溶液和1.0ml(11mmol)无溶剂N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)反应60分钟来将树脂结合的去保护胺溴乙酰化。随后，将树脂用DMF(3x10ml)浸洗。用6ml 1M伯胺(亚单体)的NMP或CH2Cl2溶液(6mmol)与树脂结合的溴乙酰部分反应，替换溴。合成被保护的亚单体以生成N-(4-氨基丁基)甘氨酸残基(Nlys)。然后再用NMP(3x10ml)浸洗而后用DMF(3次10ml)浸洗。这两个反应的产物生成类肽“残基”，其结构取决于所采用的亚单体胺。通过该亚单体法延长类肽直至达到期望的链长度。
在合成后，可从树脂上切下类肽寡聚物，同时通过用2，2，2-三氟乙酸(TFA)/三异丙基硅烷/H2O(体积比95∶2.5∶2.5)处理从Nlys残基去除叔丁氧羰基(Boc)保护基。切割后，通过制备规模的反相HPLC类肽可被纯化至＞97％均一性。HPLC采用的具体梯度取决于类肽结构和疏水性。
这些合成和表征也在美国专利No.6,887,845中描述，其通过引用并入本文。如其中所述并且如本领域技术人员根据本发明应理解的，目前N-取代的甘氨酸残基和所得的类肽化合物仅受合成的或市售的对应胺试剂的限制。
印制微阵列。在500μm聚苯乙烯大珠上使用常规的分开合并法(split-and-pool method)合成具有1个恒定残基(C末端的半胱氨酸)的8-mer类肽文库。使用常规的分开合并法和微波辅助方案采用了7种不同的胺。珠粒被放置在96孔板中，每孔一个珠。然后用95％TFA、2.5％水和2.5％三异丙基硅烷的切割混合液将类肽从珠上切割下来。然后用Tecan Genesis工作站将4个96孔板的液体内容物转移至384孔板。在液体从Master板中蒸发后，用Tecan Genesis工作站向每个孔加入DMSO(二甲基亚砜)。在4度冰箱中储存板以备印制微阵列。然后用NanoPrintLM 360将384孔板的内容物印制到马来酰亚胺包被的玻璃载片上。复杂阵列用全部48针头印制并使用10乘10点阵的410μm大小的点。在印制后，将载片放置12小时，而后用GenePix Autoloader 4200AL扫描仪扫描。用500PMT扫描载片以确认点的位置和形态。
杂交方案。将微阵列载片用杂交盒覆盖并用1XTBST(50mM Tris，pH 8.0，150mM NaCl，0.1％Tween20)平衡15分钟。然后用1ml封闭缓冲液在4℃封闭1小时。去除封闭缓冲液，在4℃用约1ml血清孵育载片16小时并轻微震摇。然后用1XTBST清洗微阵列3次并在4℃在轨道摇床上用Alexa-647标记的山羊抗小鼠抗体杂交2小时。从盒中取出微阵列载片并用1X TBST清洗。然后离心干燥载片并在微阵列扫描仪上扫描，使用100％功率的635-nm激光和600的光电倍增管放大。用Gene Pix Pro6.0软件和Genespring软件分析所有扫描图像。
设计类肽变体。肌氨酸扫描的作用是用甲基而不是氢顺次替换类肽每个侧链，保留叔位酰胺键，但去除侧链部分。可以在类肽中一个或多个位置改变目的类肽以确定哪个侧链位置影响类肽结合。每个类肽可由固相“亚单体”化学结构(如上所述)形成，其中在期望取代的位置用甲基胺替换溴。为了检测这些类肽变体的结合特性，可在微阵列或一些其他扫描平台上印制每个类肽变体以及适合的对照。含有类肽靶标的样品杂交至这些阵列。在清洗后，对阵列施加第二抗体或其他检测方法并测定每个位置的荧光强度。在与母体化合物相关的给定点观察到显著的荧光降低时(指示较弱的结合亲和力)，这被解释为表明母体化合物该位置处存在的侧链影响结合。
之后整合了整合一种或多种本文所述胺或R基团的变体类肽，并且用类似的合成和扫描方法鉴定变体。
***************
根据本发明公开内容，可以制备和实施本文中所公开和要求保护的所有组合物和方法，而无需过多的实验。虽然已经按照优选的实施方案描述了本发明的组合物和方法，但对本领域技术人员显而易见的是，在不背离本发明的概念、精神和范围的情况下，可以对本文描述的组合物和方法以及方法步骤或步骤的顺序进行改变。更具体地，显而易见的是，在化学和生理学上均相关的某些药剂可以替代本文描述的药剂而获得相同或类似的结果。对本领域技术人员显而易见的所有这些类似的替代和变化都被认为在所附权利要求所限定的本发明的精神、范围和概念内。
VII.参考文献
下述参考文献具体地通过引用并入本文，其程度在于其提供作为本文所述内容之补充的示例性的方法或其它细节。
美国专利3,817,837
美国专利3,850,752
美国专利3,939,350
美国专利3,996,345
美国专利4,275,149
美国专利4,277,437
美国专利4,366,241
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Doolittle and Ben-Zeev，Methods Mol Biol，109：215-237，1999.
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Nakamura et al.，In：Handbook of Experimental Immunology(4th Ed.)，Weir et al.(Eds)，1：27，Blackwell Scientific Publ.，Oxford，1987.

Claims (23)

1.有类肽附加其上的支持物在制备用于通过检测包含抗体之样品中的抗体来诊断阿尔兹海默病的组合物中的用途，所述类肽具有：
(i)式(1A)：
其中，R1和R4独立地选自氢；烷基；烯丙基；正丁胺；芳基；杂芳基；环烷基；烯基；环烯基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基或未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；和羟基；和
R2、R3和R5独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被以下基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15是H、C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16是H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基；
(ii)式(1B)：
其中，R6选自氢；烷基；烯丙基；正丁胺；芳基；杂芳基；环烷基；烯基；环烯基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基或未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；和羟基；和
R7和R8独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被以下基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15是H、C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16是H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基；
(iii)式(1C)：
其中，R9、R11和R13独立地选自氢；烷基；烯丙基；正丁胺；芳基；杂芳基；环烷基；烯基；环烯基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基或未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；和羟基；和
R10、R12和R14独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被以下基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15是H、C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16是H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基；
(iv)式(1D)：
其中，R17-R20和R23独立地选自氢；烷基；烯丙基；正丁胺；芳基；杂芳基；环烷基；烯基；环烯基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基或未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；和羟基；和
R21、R22和R24独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被以下基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15是H或C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16是H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基
(v)式(1D)：
其中，R17-R20、R23和R24独立地选自氢；烷基；烯丙基；正丁胺；芳基；杂芳基；环烷基；烯基；环烯基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基或未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；和羟基；和
R21和R22独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被以下基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15是H、C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16是H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基；或
(vi)式(1D)：
其中，R17、R19、R20和R23独立地选自氢；烷基；烯丙基；正丁胺；芳基；杂芳基；环烷基；烯基；环烯基；甲氧基乙基；(R)-甲基苄基；被NH2、OH或SH取代的C1-6烷基或未取代或被NH2、OH或SH取代的C2-6炔基；赖氨酰基；羧基；和羟基；和
R18、R21和R24独立地选自C0-6烷基芳基；C0-6烷基杂芳基；被以下基团取代的C1-6烷基：OH、SH、卤素、OR15、COOR15、NR15(其中R15是H、C1-6烷基或C1-6炔基)或R16(其中R16是H或C1-6炔基)；OC1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；C2-6烯基；和C2-6炔基；和
以及
Z是偶联基团；L是任选的接头部分。M是基质或支持物；而且m、n、o和/或p各自为0-6的整数。
2.权利要求1的用途，其中R1和R4独立地选自甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基；异喹啉；苯基；吡啶基。
3.权利要求1的用途，其中R6选自甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异唑基；异喹啉；苯基；吡啶基。
4.权利要求1的用途，其中R9、R11和R13独立地选自甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异 唑基；异喹啉；苯基；吡啶基。
5.权利要求1的用途，其中R17-R20和R23独立地选自甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异 唑基；异喹啉；苯基；吡啶基。
6.权利要求1的用途，其中R17-R20、R23和R24独立地选自甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异 唑基；异喹啉；苯基；吡啶基。
7.权利要求1的用途，其中R17、R19、R20和R23独立地选自甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；仲丁基；叔丁基；戊基；己基；异戊基；呋喃基；吲哚基；噻吩基；噻唑基；咪唑基；异唑基；唑基；胡椒基；吡唑基；吡咯基；吡嗪基；吡啶基；嘧啶基；嘧啶碱基；嘌呤基；噌啉基；苯并呋喃基；苯并噻吩基；苯并三唑基；苯并唑基；喹啉；异 唑基；异喹啉；苯基；吡啶基。
8.权利要求1的用途，其中所述类肽选自：
其中Z是能偶联至接头、基质或标记物的功能基团。
9.权利要求1的用途，其中所述样品与权利要求1任意式(i)至(vi)的多于一种类肽接触。
10.权利要求9的用途，其中所述样品与类肽AD1、AD2和AD3接触。
11.权利要求1的用途，其中所述支持物是珠、板、蘸棒、滤器、膜、针或孔，或者其中所述样品是血液、血清、唾液或CSF。
12.权利要求1的用途，其中检测包括使用RIA、FIA、ELISA、Western印迹、流式细胞术、FRET或表面等离子共振。
13.权利要求1的用途，其中
所述包含抗体之样品是血清，
所述血清暴露至多种权利要求1定义的任意式(i)至式(vi)的类肽，以及
在怀疑患AD的患者中进行所述诊断，
所述抗体包括结合至类肽A的AD相关抗体1并任选地包括结合至类肽B的AD相关抗体2。
14.指示神经退行性疾病的抗体的检测试剂盒，所述试剂盒包含任意式(1A)至(1D)类肽中的一种或更多种，其中所有变量与权利要求1所定义的相同，任选地与基质偶联。
15.权利要求14的试剂盒，其中所述一种或更多种类肽选自权利要求8中定义的任意的AD1、AD2、AD3，以及其中Z也与权利要求8中所定义的相同。
16.组合物，其包含从患神经退行性疾病对象的血清分离的抗体，其中所述抗体与权利要求8中定义的任意的AD1、AD2、AD3特异性结合，以及其中Z也与权利要求8中所定义的相同。
17.用于检测AD相关抗原的试剂盒，所述试剂盒包含权利要求16中定义的抗体。
18.由包括以下的步骤分离的抗体：
(a)将样品与免疫亲和性基质相接触，所述样品包含指示神经退行性疾病的抗体，所述免疫亲和性基质包含权利要求1的结合神经退行性疾病指示抗体的类肽；
(b)从所述亲和性基质洗脱所述结合抗体。
19.含有类肽的组合物，所述类肽具有权利要求1所定义的任意的式(i)至(vi)。
20.类肽组合物，其包含权利要求8中定义的任意的AD1、AD2、AD3，以及其中Z也与权利要求8中所定义的相同。
21.权利要求19或20的组合物，所述组合物还包含指示神经退行性疾病的抗体。
22.分离的类肽，其具有权利要求1中定义的任意的式(i)至(vi)，其中所述类肽是权利要求8中定义的任意的AD1、AD2和AD3，以及其中Z也与权利要求8中所定义的相同。
23.权利要求1的用途，其中检测包含抗体之样品中的抗体包括以下步骤：
(a)用包含浓度为0.5至2mg/ml的细菌裂解物的封闭缓冲液孵育类肽阵列；
(b)去除所述封闭缓冲液；
(c)用包含细菌裂解物的样品溶液孵育所述类肽阵列；和
(d)检测结合至所述类肽阵列的抗体。
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