CN102356061A - 用于制备二环γ-氨基酸衍生物的方法 - Google Patents

用于制备二环γ-氨基酸衍生物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明本开的是用于制备具有作为α2δ配体的良好活性的化合物的方法。具体来讲，本文公开的是通过光学拆分制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法。式(I)中，R1表示氢原子或C1-6烷基，R2表示氢原子或羧基保护基。

Description

用于制备二环γ-氨基酸衍生物的方法
技术领域
本发明涉及二环γ-氨基酸衍生物或其药理学上可接受的盐。具体来讲，本发明涉及具有作为α2δ配体的活性并且对电压依赖性钙通道亚基α2δ有亲和力的化合物，或者制备所述化合物的方法。
背景技术
研究表明具有结合电压依赖性钙通道亚基α2δ的高亲和力的化合物对治疗例如神经性疼痛有效(参见例如非专利文献1和2)。在本文中，神经性疼痛是指由神经组织损伤等引起的慢性疼痛，并且是一种以患者因严重疼痛发作而患有抑郁症的方式严重损害生命质量的疾病。
目前已知α2δ配体的若干类型是这类神经性疼痛的治疗药物。α2δ配体的实例包括加巴喷丁(gabapentine)和普瑞巴林。α2δ配体(例如这些化合物)可用于治疗癫痫和神经性疼痛等(例如专利文献1)。
然而，例如对于加巴喷丁，有报道称根据患者自评，其治疗疱疹后神经痛的功效约为60％(参见例如非专利文献3)，而对于普瑞巴林，根据患者自评，其治疗疼痛性糖尿病神经病变的功效约为50％(参见例如非专利文献4)。
其它化合物公开于例如专利文献2、3和4。
引用文献
专利文献
专利文献1：国际公布号WO 04/006836
专利文献2：国际公布号WO 99/21824
专利文献3：国际公布号WO 01/28978
专利文献4：国际公布号WO 02/085839
非专利文献
非专利文献1：J Biol.Chem.271(10)：5768-5776，1996
非专利文献2：J Med.Chem.41：1838-18445，1998
非专利文献3：Acta Neurol.Scand.101：359-371，2000
非专利文献4：Drugs 64(24)：2813-2820，2004
发明概述
发明要解决的技术问题
本发明的一个目的是提供制备具有作为α2δ配体的良好活性的二环γ-氨基酸衍生物、用于制备所述衍生物的中间体、及其盐的方法。
问题的解决方法
下面将对本发明进行描述。
(1)一种通过光学拆分制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法：
Figure BPA00001445998700021
其中各取代基的定义如下：
R1：氢原子或C1-C6烷基，和
R2：氢原子或羧基保护基，
所述方法包括
将通式(II)、(III)、(IV)和(V)表示的化合物的混合物与旋光有机酸溶于溶剂中：
Figure BPA00001445998700031
然后析出晶体。
另外，优选将本发明的各方面表示如下。
(2)按照(1)的制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法，其中R1为氢原子、甲基或乙基。
(3)按照(1)或(2)的制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法，其中R2为叔丁基。
(4)按照(1)-(3)中任一项的制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法，其中所述旋光有机酸为选自以下的任何活性有机酸：
D-扁桃酸、L-扁桃酸、二对甲苯甲酰基-L-酒石酸、N-Boc-L-脯氨酸、(R)-α-甲氧基苯基乙酸、O-乙酰基-L-扁桃酸、二苯甲酰基-L-酒石酸、O-乙酰基-D-扁桃酸、N-Boc-L-丙氨酸、(S)-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸、二乙酰基-L-酒石酸、L-酒石酸、L-苹果酸、L-焦谷氨酸、(+)-樟脑酸、(S)-2-甲基谷氨酸、(+)-3-溴樟脑-8-磺酸、(-)-
Figure BPA00001445998700032
氧基乙酸和(S)-2-苯氧基丙酸。
(5)按照(1)-(4)中任一项的制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法，其中所述溶剂为选自以下的任何溶剂：
乙腈、乙酸乙酯、甲苯和环戊基甲基醚。
此外，本发明还包括下述制备方法。
(6)一种制备通式(X)表示的化合物或其盐的方法：
Figure BPA00001445998700041
其中各取代基的定义如下：
R1：氢原子或C1-C6烷基，
所述方法包括
使按照(1)的制备方法制备的通式(I)表示的化合物的羧基保护基脱去保护或者进行该脱保护反应并进一步形成酸或盐。
发明的有利效果
本发明的制备方法可提供具有作为α2δ配体的良好活性的二环γ-氨基酸衍生物、制备所述衍生物的中间体、或其盐。
实施方案的描述
“C1-C6烷基”是指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、己基、异己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基和2-乙基丁基。
由于在结构中具有氨基和/或羧基的通式(I)表示的化合物等通过与酸或碱反应形成盐，因此“盐”或“药理学上可接受的盐”是指这种盐。
在本说明书的化合物的命名中，“*”表示具有由此标注的不对称碳原子的各种化合物为外消旋混合物。然而，标识“(1S*，5R*，6R*)-”应根据相对构型表示其关系。
通式(I)表示的化合物等当放置在大气中或重结晶时，可通过吸水而与吸附水缔合形成水合物。本发明的盐还包括这类水合物。
“羧基保护基”的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、己基、溴-叔丁基、三氯乙基、苄基、对硝基苄基、邻硝基苄基、对甲氧基苄基、对叔丁基苄基、乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基、异丁酰氧基甲基、戊酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基、乙酰氧基乙基、乙酰氧基丙基、乙酰氧基丁基、丙酰氧基乙基、丙酰氧基丙基、丁酰氧基乙基、异丁酰氧基乙基、新戊酰氧基乙基、己酰氧基乙基、异丁酰氧基甲基、乙基丁酰氧基甲基、二甲基丁酰氧基甲基、戊酰基氧基乙基、甲氧基羰基氧基甲基、乙氧基羰基氧基甲基、丙氧基羰基氧基甲基、叔丁氧基羰基氧基甲基、甲氧基羰基氧基乙基、乙氧基羰基氧基乙基、异丙氧基羰基氧基乙基、叔丁基二甲基甲硅烷基、三甲基甲硅烷基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、丙氧基甲基、异丙氧基甲基、(2-甲硫基)-乙基、3-甲基-2-丁烯基、5-茚满基和3-2-苯并[c]呋喃酮基。保护基优选为叔丁基。
通式(I)表示的化合物中的羧基可通过使羧基脱保护的常用方法脱去保护，以产生通式(X)表示的化合物，所述方法为例如，T.W.Greene和P.G.Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis(第3版，1999)”中披露的方法。
Figure BPA00001445998700051
通式(X)表示的化合物或其药理学上可接受的盐具有作为α2δ配体的活性，并对电压依赖性钙通道亚基α2δ有亲和力，可用作用于治疗和/或预防疼痛、中枢神经系统障碍和其它病症的药物组合物中的活性成分。
包含具有通式(X)的化合物或其药理学上可接受的盐的药物组合物，当给予哺乳动物(例如人、马、牛或猪，优选人)时，经由口服或胃肠外途径全身性或局部性给予。
可以根据给药方法选择的适当形式，通过常用于各种制剂的配制方法来制备本发明的药物组合物。
口服给药的药物组合物的形式包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂和酏剂。按照标准方法，根据需要通过从以下中适当选择添加剂来制备这类形式的药物组合物：常用的赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、膨胀剂、膨胀助剂、包衣剂、增塑剂、稳定剂、防腐剂、抗氧化剂、着色剂、增溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、保存剂、缓冲剂、稀释剂、润湿剂等。
胃肠外给药的药物组合物的形式包括注射剂、软膏剂、凝胶剂、乳膏剂、泥罨剂、贴剂、气雾剂、吸入剂、喷雾剂、滴眼剂、滴鼻剂和栓剂。按照标准方法，根据需要通过从以下中适当选择添加剂来制备这类形式的药物组合物：常用的稳定剂、防腐剂、增溶剂、保湿剂、保存剂、抗氧化剂、香料、胶凝剂、中和剂、增溶剂、缓冲剂、张度剂、表面活性剂、着色剂、缓冲剂、增稠剂、润湿剂、填充剂、吸收促进剂、助悬剂、粘合剂等。
具有通式(X)的化合物或其药理学上可接受的盐的剂量随症状、年龄、体重等而不同，对于口服给予成人(体重：约60Kg)为每剂1-2000mg，优选10-600mg(就化合物的量而言)，对于胃肠外给予成人为每剂0.1-1000mg，优选1-300mg(就化合物的量而言)。
实施例
(制剂实施例)
使用混合器将5g具有通式(X)的化合物、90g乳糖、34g玉米淀粉、20g结晶纤维素和1g硬脂酸镁混合，然后用压片机压片，得到片剂。
(试验实施例1)人钙通道亚基α2δ1(下文称为人Cacna2d1)基因表达质粒的构建以及表达人Cacna2d1的细胞膜部分的制备
a)人Cacna2d1表达质粒pRK/hCacna2d1的构建
a-1)DNA片段的制备
作为两个片段即前半片段和后半片段获得人Cacna2d1基因。使用cDNA文库(QUICK-Clone cDNA Human Brain(ClontechLaboratories，Inc.))作为模板，并且按照酶KOD聚合酶(TOYOBO CO.，LTD.)内包括的方案使用该酶进行了PCR。对于前半片段，所使用的PCR引物是购自SIGMA GENOSYS的具有以下序列的引物：
引物1：5′-agctgcggcc gctagcgcca ccatggctgg ctgcctgctg gc-3′(SEQID NO：1)，和
引物2：5′-attaggatcg attgcaaagt aataccc-3′(SEQ ID NO：2)；和
对于后半片段，为具有以下序列的引物：
引物3：5′-aatgggtatt actttgcaat cgatcc-3′(SEQ ID NO：3)，和
引物4：5′-agtcggatcc tcataacagc cggtgtgtgc tg-3′(SEQ ID NO：4)。
应用循环变温加热器(GeneAmp PCR System 9700(AppliedBiosystems，Inc.))，通过包括在94℃下加热1分钟、然后35次热循环(94℃ 15秒钟、60℃ 30秒钟和68℃ 2分钟)、置于68℃ 5分钟并冷却至4℃的步骤，对前半片段和后半片段两者进行了PCR反应。
按照试剂盒中包括的方案，采用PCR产物纯化试剂盒(MiniElutePCR Purification Kit(QIAGEN))，对这两个反应产物进行纯化。所得到的前半片段用限制性内切酶Not1(TOYOBO CO.，LTD.)消化。后半片段用限制性内切酶Cla1(TOYOBO CO.，LTD.)和BamH1(TOYOBOCO.，LTD.)消化。随后按照试剂盒中包括的方案，采用反应产物纯化试剂盒(MiniElute Reaction Cleanup Kit(QIAGEN))，对这些片段进行了纯化。
a-2)载体的制备
将用于动物细胞的表达载体pRK5(BD Pharmingen)的多克隆位点(下文称为MCS)变为载体pBluescript 2(STRATAGENE)的MCS以制备载体。准确地讲，将pRK5用限制性内切酶Cla1(TOYOBO CO.，LTD.)和Hind3(TOYOBO CO.，LTD.)处理，然后，使用Klenow片段(TAKARA BIO INC.)将该DNA的两端制成平端。使用小牛肠碱性磷酸酶(下文称为CIAP；TAKARA BIO INC.)使这两端进一步脱去磷酸，然后使用MiniElute Reaction Cleanup Kit(QIAGEN)对片段进行纯化。然后，将该经酶处理的DNA在1.0％琼脂糖凝胶上进行电泳。电泳后，凝胶用溴化乙锭染色。然后，在紫外线照射下用刀片分离相当于约4.7kbp的条带部分。按照试剂盒中包括的方案，使用凝胶提取/纯化试剂盒(MiniElute Gel Extraction Kit(QIAGEN))，从条带中提取DNA。
为了得到与pBluescript 2的MCS对应的DNA片段，将pBluescript2用限制性内切酶Sac1(TOYOBO CO.，LTD.)和Kpn1(TOYOBO CO.，LTD.)处理，然后使用Klenow片段(TAKARA BIO INC.)，将该DNA的两端制成平端。然后，将该经酶处理的DNA在2.0％琼脂糖凝胶上进行电泳。电泳后，凝胶用溴化乙锭染色。然后，在紫外线照射下用刀片分离相当于约100bp的条带部分。按照试剂盒中包括的方案，使用凝胶提取/纯化试剂盒(MiniElute Gel Extraction Kit(QIAGEN))，从条带中提取DNA。
按照试剂盒中包括的方案，使用DNA连接试剂盒(TAKARA BIOINC.)，使所得到的DNA片段与已切割的pRK5连接。用该反应产物转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞(TOYOBO CO.，LTD.)，得到耐氨苄西林菌落。收集一些菌落，然后培养所收集的菌落。从所得到的细菌细胞中提取质粒，并采用DNA序列分析仪(3700型(AppliedBiosystems，Inc.))分析其核苷酸序列，以证实在pRK5中引入了MCS序列。在本文中，载体中如果将CMV启动子视为位于上游，则掺入MCS序列使得其如下朝向下游方向：5′-ccaccgcggtggcggccgctctagaactagtggatcccccgggctgcaggaattcgatatcaagcttatcgataccgtcgacctcgagggggggcccg-3′(SEQ ID NO：5)，这种载体命名为pRK-SK，而将MCS序列以与之相反的方向掺入其中的载体命名为pRK-KS。
a-3)质粒的构建
将在段落a-2)获得的pRK-SK用限制性内切酶Xba1(TOYOBOCO.，LTD.)处理，使用Klenow片段(TAKARA BIO INC.)将该DNA的两端制成平端。平端DNA进一步用限制性内切酶Not1(TOYOBOCO.，LTD.)消化，并按与段落a-2)同样的方法进行纯化。将由此成为线性的该pRK-SK和在段落a-1)中得到的人Cacna2d1基因的头半段DNA片段在1.0％琼脂糖凝胶上进行电泳，从凝胶中提取约4.7kbp和约1.5kbp的DNA，并按与段落a-2)同样的方法进行纯化。按与段落a-2)同样的方法使所得到的两个DNA连接，将大肠杆菌用连接产物转化。从所得到的大肠杆菌克隆中提取质粒，并用DNA序列分析仪(3700型(Applied Biosystems，Inc.))分析其核苷酸序列以证实将SEQ ID NO：6所示序列引入其中。接下来，将所得质粒用限制性内切酶Cla1(TOYOBO CO.，LTD.)和BamH1(TOYOBO CO.，LTD.)处理，并按与段落a-2)相同的方法进行CIAP处理和纯化。将由此成为线性的该质粒DNA和段落a-1)中得到的人Cacna2d1基因的后半段DNA片段在1.0％琼脂糖凝胶上进行电泳，从凝胶中提取约6.2kbp和约1.8kbp的DNA，并按与段落a-2)同样的方法进行纯化。按与段落a-2)同样的方法使所得到的两个DNA连接，将大肠杆菌用连接产物转化。从所得到的大肠杆菌克隆中提取质粒，并用DNA序列分析仪(3700型(AppliedBiosystems，Inc.))分析其核苷酸序列以证实SEQ ID NO：7所示序列引入到载体pRK-SK中。所得质粒命名为pRK/hCacna2d1。
b)表达人Cacna2d1的293细胞系的获取
将293细胞用段落a)中构建的人Cacna2d1表达质粒pRK/hCacna2d1转染，用人Cacna2d1蛋白表达作为指标得到稳定表达人Cacna2d1的细胞系。准确地讲，将2×106个293细胞接种到φ6cm培养皿中并培养12小时。然后，使用转染试剂Lipofectamine Plus(Invitrogen Corp.)，按照试剂所包括的方案，将细胞用5μgpRK/hCacna2d1和0.5μg新霉素抗性基因表达质粒pSV2neo(Clontech)共转染。
收集由此转染的细胞，然后在稀释后接种到φ15cm培养皿中，并在补充了10％胎牛血清(Cansera International，Inc.)和500μg/ml G418(Invitrogen Corp.)的DMEM(Invitrogen Corp.)中培养2周。分离出成功形成集落的新霉素耐受性细胞。在扩繁培养后，收集细胞，细胞裂解物通过蛋白质印迹测定法评价，以得到表达人Cacna2d1的293细胞系。在蛋白质印迹测定法中，将抗hCacna2d1抗体(Chemicon Inc.)用作第一抗体。
c)表达人Cacna2d1的293细胞的细胞膜部分的制备
将段落b)中得到的表达人Cacna2d1的293细胞在补充了10％胎牛血清(Cansera International，Inc.)和500μg/ml G418(Invitrogen Corp.)的DMEM(Invitrogen Corp.)中大规模培养后，收集细胞。将蛋白酶抑制剂(Complete EDTA free(Roche Applied Science))以该试剂推荐的量加入结合测定缓冲液(10mM MOPS(pH 7.4)、10mM HEPES(pH 7.4)、100mM NaCl)中，以制备膜部分制备缓冲液。将收集的细胞用膜部分制备缓冲液洗涤，然后使用超声发生器匀浆。然后使用离心机，将匀浆物以12,000rpm于4℃离心1小时。弃去上清液，将沉淀悬浮于膜部分制备缓冲液中。将从使用超声发生器进行超声处理到离心后将沉淀悬浮的过程再重复三次，所得悬液用作表达人Cacna2d1的细胞膜部分。由280nm波长下的紫外吸光度计算膜部分中所含蛋白质的总水平。
(试验实施例2)用于Cacna2d1与加巴喷丁(下文称为GBP)之间的结合反应的检测系统的构建，以及试验化合物的Cacna2d1/GBP结合反应的抑制活性的检测
a)用于Cacna2d1和GBP之间的结合反应的检测系统的构建
分别以总蛋白水平2.5mg/ml的终浓度和3H-GBP 4.5nM的终浓度，将表达人Cacna2d1的细胞膜部分和用放射性同位素3H标记的GBP(下文称为3H-GBP；Tocris Cookson Ltd.)用结合测定缓冲液(10mM MOPS(pH 7.4)、10mM HEPES(pH 7.4)、100mM NaCl)稀释，以制备120μl的反应溶液，接着将反应溶液于4℃静置3小时。将该反应产物加入滤板(UniFilter 350GF/B(Whatman))的各孔中，通过滤器过滤。然后，将包括加入350μl结合测定缓冲液(10mM MOPS(pH 7.4)、10mM HEPES(pH 7.4)、100mM NaCl)和通过滤器过滤的洗涤过程重复三次。将滤板充分干燥，将底部密封。加入50μl Microscint 20(PerkinElmer Inc.)后，也将上表面密封。采用TopCount(PerkinElmerInc.)统计来源于保留在滤器上的放射性同位素3H的辐射。从所得值中减去将未标记GBP(SIGMA-ALDRICH INC.)以20μM的终浓度加入本测定法中得到的值(作为得自非特异性吸收的值)，所得值用作3H-GBP与Cacna2d1的特异性结合水平(单位：“计数(count)”)。
b)试验化合物的Cacna2d1/GBP结合反应的抑制活性的检测
将各试验化合物以不同的浓度加入段落a)中构建的Cacna2d1/GBP结合反应检测测定法中，通过段落a)中描述的方法测定了结合水平。然后，在将通过以x nM的浓度加入化合物得到的Cacna2d1/GBP特异性结合水平定义为“结合水平[x]”和与之相反将Cacna2d1/GBP结合抑制率定义为“抑制率[x]”的情况下，根据以下方程式求出抑制率(％)：
抑制率[x](％)＝(1-(结合水平[x]/结合水平[0]))×100，其中
结合水平[0]是指未加入化合物的情况下得到的3H-GBP的结合水平。
将抑制率对浓度作图。根据该结果，计算“IC50值”，IC50值是抑制50％的Cacna2d1/GBP结合所需要的试验化合物的浓度。
(制备实施例1)
[6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸
Figure BPA00001445998700121
(1-a)(2E)-庚-2，6-二烯酸
将4-戊烯醛(4.45g，51.4mmol)和丙二酸(6.41g，61.6mmol)溶于吡啶(9.9mL)中。向该溶液中加入哌啶(1.9mL)，然后将混合物在90℃下搅拌5小时。使混合物冷却，然后加入2N盐酸使之呈酸性，接着用乙醚萃取。有机层用饱和盐水洗涤后，经无水硫酸镁干燥，然后将滤液减压浓缩。将残余物减压蒸馏，得到目标化合物，为无色油状物质(3mmHg，110-116℃，3.27g，50％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：2.21-2.26(2H，m)，2.32-2.37(2H，m)，5.01-5.08(2H，m)，5.75-6.87(2H，m)，7.03-7.11(1H，m)。
(1-b)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-亚基乙酸叔丁酯
在冰冷却条件下，将草酰氯(10mL)滴加到含(2E)-庚-2，6-二烯酸(3.27g，25.9mmol)的甲苯(60mL)溶液中。将混合物搅拌20分钟，然后从冰水浴中移开，逐渐加热到室温。搅拌50分钟后，在加热至回流下搅拌反应溶液1小时。使溶液冷却，然后减压馏出溶剂。再向残余物中加入甲苯，然后再次减压馏出溶剂。将残余物溶于甲苯(20mL)中，在1小时内将该溶液滴加到预先加热至90℃的含三乙胺(9.19g，91mmol)的甲苯(20mL)溶液中。完成滴加后，再将混合物加热搅拌2小时。使反应溶液冷却，然后用饱和盐水和水稀释，并通过硅藻土(Celite)过滤。把滤液分成有机层和水层。有机层然后用1N盐酸洗涤，然后经硫酸镁干燥，并过滤。将滤液加入预先从含二甲氧基磷酰基乙酸叔丁酯(5.98g，25.9mmol)的二甲氧基乙烷(20mL)溶液和氢化钠(＞65％油，986.7mg，25.9mmol)制备的反应溶液中，将混合物搅拌1.5小时。向反应溶液中依次加入氯化铵的饱和水溶液、饱和盐水和水，用乙酸乙酯对反应溶液进行萃取。有机层经无水硫酸镁干燥，然后过滤。减压馏出溶剂后，将残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到目标化合物，为浅黄色油状物质(1.73g，32％，E/Z混合物)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：
主要异构体：1.45(9H，S)，2.29-2.35(1H，m)，2.62-2.71(2H，m)，2.89-2.98(1H，m)，3.27-3.35(1H，m)，3.92(1H，宽峰)，5.47-5.49(1H，m)，5.80-5.87(2H，m)。
次要异构体：1.49(9H，s)，2.42-2.48(1H，m)，2.62-2.71(2H，m)，2.89-2.98(2H，m)，4.34-4.36(1H，m)，5.37-5.38(1H，m)，5.61-5.64(2H，m)。
(1-c)[6-(硝基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯
将二环[3.2.0]庚-3-烯-6-亚基乙酸叔丁酯(1.73g，8.39mmol)溶于硝基甲烷(10mL)中。向该溶液中加入1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(1.3mL，8.4mmol)，将混合物在室温下搅拌1小时，然后在50-60℃下加热搅拌5小时。使混合物冷却，然后用1N盐酸和饱和盐水稀释，接着用乙酸乙酯萃取。然后，将有机层经无水硫酸镁干燥后，减压馏出溶剂。将残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到目标化合物，为无色油状物质(1.98g，89％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：1.45(9H，s)，1.53(1H，dd，J＝7.5，12.9Hz)，2.17(1H，d，J＝15.2Hz)，2.31(1H，ddd，J＝2.4，8.6，12.1Hz)，2.47(2H，s)，2.52-2.58(1H，m)，2.87(1H，五重峰，J＝7.5Hz)，3.25-2.66(1H，m)，4.78(1H，d，J＝11.4Hz)，4.87(1H，d，J＝11.4Hz)，5.65-5.67(1H，m)，5.95(1H，dd，J＝1.6，5.9Hz)。
(1-d)[6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯
将[6-(硝基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(1.98g，7.41mmol)溶于乙醇(20mL)和水(10mL)中。向该溶液中加入铁粉(2.07g，37.0mmol)和氯化铵(392.7mg，7.41mmol)，在加热至回流下将混合物搅拌4.5小时。使混合物冷却，然后用饱和盐水、碳酸氢钠饱和水溶液和乙酸乙酯稀释，并通过硅藻土过滤除去不溶物质。把滤液分成有机层和水层。有机层用饱和盐水洗涤，然后经无水硫酸镁干燥。然后，减压馏出溶剂，得到目标化合物，为浅黄色固体(1.99g，该化合物在未纯化的情况下便直接用于下一反应)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：1.39-1.49(1H，m)，1.44(9H，s)，1.97(1H，ddd，J＝2.8，9.0，11.7Hz)，2.14(1H，dd，J＝2.3，16.8Hz)，2.25(1H，d，J＝13.7Hz)，2.32(1H，d，J＝13.7Hz)，2.47-2.55(1H，m)，2.75(1H，五重峰，J＝7.4Hz)，2.88(2H，s)，2.98-2.99(1H，m)，5.77-5.79(1H，m)，5.87-5.89(1H，m)。
(1-e)[6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸
将4N含盐酸的乙酸乙酯(10mL)溶液加入[6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(0.99g，4.17mmol)中，将混合物在室温下搅拌1小时。然后，减压馏出溶剂。通过加入二氯甲烷使残余物悬浮。然后向悬浮液中滴加三乙胺，经过滤收集所得粉末。所得粉末用二氯甲烷洗涤，然后减压干燥，得到目标化合物，为白色粉末(211.6mg，35％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：1.49(1H，dd，J＝7.6，12.5Hz)，2.06(1H，ddd，J＝2.6，7.6，12.5Hz)，2.17(1H，dd，J＝2.6，16.8Hz)，2.49(2H，s)，2.48-2.56(1H，m)，2.86(1H，五重峰，J＝7.6Hz)，3.15-3.16(1H，m)，3.18(1H，d，J＝12.7Hz)，3.22(1H，d，J＝12.7Hz)，5.75-5.78(1H，m)，5.91-5.93(1H，m)。
(制备实施例2)
[6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸盐酸盐
将水(5mL)和4N含盐酸的1，4-二氧杂环己烷(22mL)溶液加入6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸(320.2mg，1.77mmol)中，将混合物在室温下搅拌5分钟。减压馏出溶剂。向残余物中加入1，4-二氧杂环己烷，将混合物加热，然后使之冷却到室温。经过滤收集所得粉末。将所得粉末用1，4-二氧杂环己烷洗涤，然后干燥，得到目标化合物，为白色粉末(350.0mg，92％)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δppm：1.51(1H，dd，J＝7.6，12.7Hz)，2.16(1H，ddd，J＝2.8，7.6，15.6Hz)，2.19(1H，dd，J＝2.2，16.8Hz)，2.51(2H，s)，2.53-2.59(1H，m)，2.89(1H，五重峰，J＝7.6Hz)，3.18-3.19(1H，m)，3.33(1H，d，J＝13.3Hz)，3.37(1H，d，J＝13.3Hz)，5.70-5.73(1H，m)，5.97-6.00(1H，m)。
(制备实施例3)
[6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸苯磺酸盐
Figure BPA00001445998700151
将6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸(152.2g，391mmol)溶于2-丙醇(7.5mL)和水(2.6mL)中。然后向该溶液中加入苯磺酸一水合物(305.2mg，1.73mmol)，将混合物在室温下搅拌5分钟。减压馏出溶剂，接着用2-丙醇进一步共沸脱水。然后，将残余物用2-丙醇洗涤，得到目标化合物，为白色粉末(260.4mg，55％)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δppm：1.51(1H，dd，J＝7.4，12.7Hz)，2.12-2，21(2H，m)，2.51(2H，s)，2.51-2.59(1H，m)，2.89(1H，五重峰，J＝7.4Hz)，3.17-3.18(1H，m)，3.32(1H，d，J＝13.3Hz)，3.36(1H，d，J＝13.3Hz)，5.69-5.71(1H，m)，5.97-6.00(1H，m)，7.40-7.46(3H，m)，7.80-7.84(2H，m)。
(制备实施例4)
[6-氨基甲基-3-甲基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸
Figure BPA00001445998700161
(4-a)4-甲基-3-羟基庚-6-烯酸甲酯
在冰冷却条件下，将氢化钠(＞63％油，1.64g，43.1mmol)加入含3-氧代戊酸甲酯(5.10g，39.2mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中，将混合物在该状态下搅拌10分钟。向反应溶液中滴加正丁基锂(1.66M的己烷溶液，25.9mL，43.1mmol)，将混合物在冰冷却条件下再搅拌10分钟。然后，向其中加入烯丙基溴(5.18g，43.1mmol)，将混合物在该状态下搅拌30分钟，然后再在室温下搅拌过夜。向反应溶液中加入1N盐酸和饱和盐水，接着用乙醚萃取。有机层用饱和盐水洗涤后，经无水硫酸镁干燥，减压馏出溶剂。将所得残余物溶于甲醇(100mL)。在冰冷却条件下，向该溶液中加入硼氢化钠(1.89g，50mmol)，将混合物在该状态下搅拌1.5小时。向其中加入2N盐酸(50mL)后，将混合物搅拌30分钟。然后，向其中加入饱和盐水，接着用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水洗涤，然后经无水硫酸镁干燥，减压馏出溶剂。将残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到目标化合物，为浅黄色油状物质(5.72g，85％，非对映体的混合物)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：0.89-0.94(3H，m)，1.58-1.75(1H，m)，1.91-2.03(1H，m)，2.21-2.33(1H，m)，2.43-2.56(2H，m)，3.72(3H，s)，3.84-4.00(1H，m)，5.01-5.07(2H，m)，5.74-5.84(1H，m)。
(4-b)4-甲基-3-羟基庚-6-烯酸
将4-甲基-3-羟基庚-6-烯酸甲酯(5.72g，33.2mmol)溶于2N含氢氧化钾的甲醇(50mL)溶液中，将该溶液在室温下搅拌过夜。从反应溶液中减压馏出溶剂。然后向残余物中加入1N氢氧化钠水溶液，接着再次用乙醚萃取。在冰冷却条件下通过加入浓盐酸使水层酸化，接着再次用乙醚萃取。有机层用饱和盐水洗涤后，经无水硫酸镁干燥。然后，减压馏出溶剂，得到目标化合物，为黄色油状物质(2.21g，42％，非对映体的混合物)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：0.90-0.94(3H，m)，1.64-1.74(1H，m)，1.93-2.00(1H，m)，2.24-2.32(1H，m)，2.45-2.61(2H，m)，3.87-4.03(1H，m)，5.03-5.08(2H，m)，5.75-5.83(1H，m)。
(4-c)3-甲基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-亚基乙酸叔丁酯
将4-甲基-3-羟基庚-6-烯酸(2.21g，13.9mmol)溶于乙酸酐(14mL)。向该溶液中加入乙酸钾(3.29g，33.4mmol)，将混合物在室温下搅拌2小时。将反应溶液加热至110-120℃并搅拌3.5小时。然后向反应溶液中加入冰水和甲苯，将该混合物在室温下搅拌1小时。通过加入饱和盐水和甲苯，使混合物分成水层和有机层。然后，将有机层依次用1N氢氧化钠水溶液和饱和盐水洗涤，然后经无水硫酸镁干燥，然后过滤。将滤液加入通过在冰冷却条件下将氢化钠(＞63％油，533.3mg，14.0mmol)加入含二甲氧基磷酰基乙酯叔丁酯(3.24g，14.5mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中而制备的反应溶液中，将混合物再搅拌1.5小时。通过加入氯化铵的饱和水溶液和饱和盐水使反应溶液分成水层和有机层。将水层用乙酸乙酯进行萃取。合并有机层，然后用饱和盐水洗涤，随后经无水硫酸镁干燥。减压馏出溶剂后，将残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到目标化合物，为浅黄色油状物质(1.21g，40％，E/Z混合物)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：
主要异构体：1.45(9H，s)，2.11-2.22(4H，m)，2.59-2.71(2H，m)，2.87-2.97(1H，m)，3.26-3.34(1H，m)，3.87(1H，宽峰)，5.22-5.23(1H，m)，5.45-5.47(1H，m)。
次要异构体：1.49(9H，s)，2.11-2.21(4H，m)，2.43-2.46(1H，m)，2.59-2.70(1H，m)，2.75-2.83(1H，m)，2.87-2.97(1H，m)，4.29(1H，宽峰)，5.36(1H，s)，5.59(1H，s)。
(4-d)[3-甲基-6-(硝基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯
将3-甲基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-亚基乙酸叔丁酯(1.21g，5.50mmol)溶于硝基甲烷(7mL)。向该溶液中加入1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.91mL，6.0mmol)，将混合物在50-60℃下加热搅拌6小时。使混合物冷却，然后向其中加入磷酸二氢钾饱和水溶液，接着用乙酸乙酯萃取。然后，有机层经无水硫酸镁干燥后，减压馏出溶剂。将残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到目标化合物，为无色油状物质(1.14g，74％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：1.45(9H，s)，1.53(1H，dd，J＝7.6，12.9Hz)，1.80(3H，s)，2.04(1H，d，J＝16.4Hz)，2.29(1H，ddd，J＝2.8，7.6，12.9Hz)，2.47(2H，s)，2.49(1H，dd，H＝7.6，16.4Hz)，2.86(1H，五重峰，J＝7.6Hz)，3.21-3.22(1H，m)，4.74(1H，d，J＝11.7Hz)，4.84(1H，J＝11.7Hz)，5.25(1H，s)。
(4-e)[6-氨基甲基-3-甲基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯
将[3-甲基-6-(硝基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(1.12g，3.99mmol)溶于乙醇(20mL)和水(10mL)。向该溶液中加入铁粉(892.8mg，15.9mmol)和氯化铵(211.5mg，3.99mmol)后，将混合物在加热至回流下搅拌4小时。使混合物冷却，然后用饱和盐水、碳酸氢钠饱和水溶液和乙酸乙酯稀释，并通过硅藻土过滤除去不溶物质。把滤液分成有机层和水层。将有机层用饱和盐水洗涤，然后经无水硫酸镁干燥，然后减压馏出溶剂。向残余物中加入4N含盐酸的乙酸乙酯(5mL)溶液，将混合物在室温下搅拌1小时。然后减压馏出溶剂。将残余物悬浮于二氯甲烷中。向悬浮液中滴加三乙胺，经过滤收集所得粉末，然后用二氯甲烷洗涤，然后干燥，得到目标化合物，为白色粉末(105.8mg，28％)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δppm：1.40(1H，dd，J＝7.6，12.3Hz)，1.79(3H，s)，2.02-2.08(2H，m)，2.43-2.50(1H，m)，2.45(1H，d，J＝16.2Hz)，2.51(1H，d，J＝16.2Hz)，2.85(1H，五重峰，J＝7.6Hz)，3.05-3.12(1H，m)，3.13(1H，d，J＝13.0Hz)，3.17(1H，d，J＝13.0Hz)，5.36(1H，t，J＝1.6Hz)。
(制备实施例5)
[6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸
Figure BPA00001445998700191
(5-a)4-乙基-3-羟基庚-6-烯酸乙酯
在冰冷却条件下，将氢化钠(＞63％油，2.09g，55mmol)加入含3-氧代己酸乙酯(7.91g，50mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中，将混合物在该状态下搅拌10分钟。向反应溶液中滴加正丁基锂(1.58M的己烷溶液，34.8mL，55mmol)，将混合物在冰冷却条件下再搅拌10分钟。然后向其中加入烯丙基溴(4.7mL，55mmol)，将混合物在该状态下搅拌1小时，然后在室温下再搅拌4小时。向反应溶液中加入1N盐酸和氯化铵的饱和水溶液，接着用正戊烷萃取。有机层用饱和盐水洗涤后，经无水硫酸镁干燥，减压馏出溶剂。将所得残余物溶于乙醇(80mL)。在冰冷却条件下，向该溶液中加入硼氢化钠(1.51g，40mmol)，将混合物在该状态下搅拌2小时。向其中加入1N盐酸(50mL)，并将混合物搅拌30分钟。然后，向其中加入饱和盐水，接着用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水洗涤，然后经无水硫酸镁干燥，减压馏出溶剂。将残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到目标化合物，为浅黄色油状物质(3.64g，37％，非对映体的混合物)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：0.91(3H，t，J＝7.5Hz)，1.28(3H，t，J＝7.2Hz)，1.43-1.55(2H，m)，1.98-2.28(2H，m)，2.45-2.48(2H，m)，2.88-2.93(1H，m)，4.07-4.10(1H，m)，4.10-4.20(2H，m)，5.01-5.09(2H，m)，5.75-5.86(1H，m)。
(5-b)4-乙基-3-羟基庚-6-烯酸
将4-乙基-3-羟基庚-6-烯酸乙酯(3.64g，18.2mmol)溶于2N含氢氧化钾的甲醇(120mL)溶液中，将该溶液在室温下搅拌过夜。从反应溶液中减压馏出溶剂。然后向残余物中加入1N氢氧化钠水溶液(200mL)，接着用乙醚萃取。在冰冷却条件下通过加入浓盐酸使水层酸化，接着再次用乙醚萃取。有机层用饱和盐水洗涤后，经无水硫酸镁干燥。然后，减压馏出溶剂，得到目标化合物，为浅黄色油状物质(3.14g，＜100％，非对映体的混合物)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：0.91-0.96(3H，m)，1.39-1.52(3H，m)，2.01-2.28(2H，m)，2.52-2.55(2H，m)，4.05-4.15(2H，m)，5.03-5.10(2H，m)，5.74-5.86(1H，m)。
(5-c)3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-亚基乙酸叔丁酯
将4-乙基-3-羟基庚-6-烯酸(3.13g，18.2mmol)溶于乙酸酐(15mL)。向该溶液中加入乙酸钾(4.27g，43.6mmol)，将混合物在室温下搅拌100分钟。将反应溶液加热至回流并搅拌3.5小时，以在反应溶液中形成“3-乙基二环[3.2.0]庚-6-烯-6-酮”。然后向反应溶液中加入冰水和甲苯，将混合物在室温下搅拌过夜。通过加入饱和盐水(50mL)和甲苯(20mL)使混合物分成水层和有机层。然后，将有机层依次用1N氢氧化钠水溶液和饱和盐水洗涤，然后经无水硫酸镁干燥，过滤。将滤液加入通过在冰冷却条件下将氢化钠(＞65％油，761.9mg，20mmol)加入含二甲氧基磷酰基乙酯叔丁酯(4.48g，20mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中而制备的反应溶液中，将混合物再搅拌1小时。通过加入氯化铵的饱和水溶液和饱和盐水，使反应溶液分成水层和有机层。水层用乙酸乙酯进行萃取。合并有机层，然后用饱和盐水洗涤，之后经无水硫酸镁干燥。减压馏出溶剂后，将残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到目标化合物，为浅黄色油状物质(1.32g，31％，E/Z混合物)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：
主要异构体：1.06(3H，t，J＝7.4Hz)，1.45(9H，s)，2.07-2.22(3H，m)，2.59-2.70(2H，m)，2.87-2.96(1H，m)，3.30(1H，ddt，J＝8.6，18.4，2.7Hz)，3.86-3.88(1H，m)，5.22-5.23(1H，m)，5.45-5.47(1H，m)。
次要异构体：1.08(3H，t，J＝7.3Hz)，1.49(9H，s)，2.07-2.21(3H，m)，2.43-2.47(1H，m)，2.59-2.70(1H，m)，2.75-2.85(1H，m)，2.87-2.96(1H，m)，4.28-4.31(1H，m)，5.35-5.38(1H，m)，5.45-5.47(1H，m)。
(5-d)[3-乙基-6-(硝基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯
将[3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-亚基乙酸叔丁酯(1.32g，5.63mmol)溶于硝基甲烷(7mL)中。向该溶液中加入1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(1.2mL，7.3mmol)，将混合物在50-60℃下加热搅拌7小时。使混合物冷却，然后向其中加入磷酸二氢钾饱和水溶液，接着用乙酸乙酯萃取。然后，将有机层经无水硫酸镁干燥，减压馏出溶剂。将残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到目标化合物，为无色油状物质(1.39g，84％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：1.09(3H，t，J＝7.4Hz)，1.46(9H，s)，1.52(1H，dd，J＝7.6，13.2Hz)，2.06(1H，d，16.6Hz)，2.14(2H，q，J＝7.4Hz)，2.30(1H，ddd，J＝2.4，7.6，13.2Hz)，2.47(2H，s)，2.49(1H，dd，J＝7.6，16.6Hz)，2.86(1H，五重峰，J＝7.6Hz)，3.21-3.22(1H，m)，4.75(1H，d，J＝11.7Hz)，4.84(1H，d，J＝11.7Hz)，5.27(1H，s)。
(5-e)[6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸
将[3-乙基-6-(硝基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(1.09g，4.71mmol)溶于乙醇(10mL)和水(5mL)中。向该溶液中加入铁粉(1.32g，23.5mmol)和氯化铵(249.6mg，4.71mmol)，将混合物在加热至回流下搅拌2小时。使混合物冷却，然后用饱和盐水、碳酸氢钠饱和水溶液和乙酸乙酯稀释，并通过硅藻土过滤除去不溶物质。把滤液分成有机层和水层。将有机层用饱和盐水洗涤，然后经无水硫酸镁干燥，之后减压馏出溶剂。向残余物中加入4N含盐酸的乙酸乙酯(20mL)溶液，将混合物在室温下搅拌1小时。然后，减压馏出溶剂。将残余物悬浮于二氯甲烷中。向悬浮液中滴加三乙胺，经过滤收集所得粉末，然后用二氯甲烷洗涤，之后干燥，得到目标化合物，为白色粉末(425.1mg，43％)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δppm：1.10(3H，t，J＝7.4Hz)，1.48(1H，dd，J＝7.5，12.5Hz)，2.03-2.08(2H，m)，2.14(2H，q，J＝7.4Hz)，2.46(1H，d，J＝16.2Hz)，2.46-2.53(1H，m)，2.51(1H，d，J＝16.2Hz)，2.85(1H，五重峰，J＝7.5Hz)，3.09-3.10(1H，m)，3.14(1H，d，J＝13.0Hz)，3.18(1H，d，J＝13.0Hz)，5.38(1H，dd，J＝1.7，3.7Hz)。
(制备实施例6)
[6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸对甲苯磺酸盐
Figure BPA00001445998700221
将[6-(叔丁氧基羰基氨基)甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(1152.23g，391.6mmol)溶于苯(1.2L)中。然后向该溶液中加入苯硫基甲烷(145.57g，1173mmol)和对甲苯磺酸一水合物(89.39g)，将混合物在回流下搅拌2小时。使混合物在室温下静置过夜，经过滤收集所得粉末。将所得粉末用乙酸乙酯洗涤，然后干燥，得到目标化合物，为白色粉末(88.29g，59％)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δppm：1.11(3H，t，J＝7.4Hz)，1.51(1H，dd，7.4，12.7Hz)，2.06-2,20(4H，m)，2.37(3H，s)，2.49-2.56(1H，m)，2.51(2H，s)，2.87(1H，五重峰，J＝7.4Hz)，3.12-3.14(1H，m)，3.28(1H，d，J＝13.5Hz)，3.33(1H，d，J＝13.5Hz)，5.31-5.32(1H，m)，7.21-7.25(2H，m)，7.69-7.72(2H，m)。
(制备实施例7)
[6-(氨基甲基)-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸苯磺酸盐
Figure BPA00001445998700222
通过在1M苯磺酸一水合物水溶液(22.7mL)中加热使6-(氨基甲基)-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸(4.50g，20.6mmol)溶解，然后使溶液冷却到室温。经过滤收集所得固体。将固体用水(15mL)洗涤，然后用真空泵干燥，得到目标化合物，为无色固体(6.45g，77％)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δppm：1.11(3H，t，J＝7.4Hz)，1.50(1H，dd，J＝7.5，12.6Hz)，2.08(1H，d，16.5Hz)，2.10-2.20(3H，m)，2.46-2.56(3H，m)，2.87(1H，五重峰，J＝7.5Hz)，3.12-3.13(1H，m)，3.28(1H，d，J＝13.4Hz)，3.33(1H，d，J＝13.4Hz)，5.31(1H，d，J＝1.8Hz)，7.39-7.45(3H，m)，7.80-7.85(2H，m)。
(还原硝基的步骤)
(制备实施例8)
[6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯
将阮内镍(Raney nickel)(102.3g，0.15w/w)和乙醇(5.5L，8.0v/w)加入[3-乙基-6-(硝基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(709.0g，净重：681.8g，2.31mol，85∶15非对映体的混合物)中，并搅拌混合物。向反应溶液中加入一水合肼(458.0ml，9.23mol，4.00eq.)，并将混合物在40℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温后，滤出阮内镍。然后，馏出溶剂，得到目标化合物，为褐色油状物质(637.0g，净重：552.3g，收率：90.2％，85∶15非对映体的混合物)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：1.05-1.10(各个t)，1.44-1.61(m)，1.86-2.38(m)，2.42-2.55(m)，2.73-3.05(m)，5.40-5.48(m)。
(ii)
将阮内镍(96mg，0.16w/w)和乙醇(200μL)加入[3-乙基-6-(硝基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(59mg，85∶15非对映体的混合物)中，在氢气氛下，将混合物在室温下搅拌12小时。滤出阮内镍。然后，馏出溶剂，得到目标化合物，为褐色油状物质(49mg，收率：92％，85∶15非对映体的混合物)。
(制备实施例9)
[6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯
Figure BPA00001445998700241
将阮内镍(0.4g)和乙醇(24ml)加入[6-(硝基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(4.0g，90∶10非对映体的混合物)中，并搅拌混合物。向反应溶液中加入一水合肼(2.9ml)，将混合物搅拌0.5小时。通过薄层色谱法证实起始原料的消耗，然后滤出阮内镍。将溶剂馏出，得到目标化合物，为褐色油状物质(3.62g，90∶10非对映体的混合物)。
薄层色谱法展开剂：己烷∶乙酸乙酯＝9∶1
硝基形式的Rf值：0.7，还原形式的Rf值：0.1(带拖尾)
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：1.44-1.51(m)，1.93-2.17(m)，2.23-2.35(m)，2.48-2.60(m)，2.70-2.90(m)，2.95-3.30(m)，5.75-5.80(m)，5.83-5.90(m)。
(制备实施例10)
[6-氨基甲基-3-甲基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯
Figure BPA00001445998700242
将阮内镍(0.28g)和乙醇(20ml)加入[6-(硝基甲基)-3-甲基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(2.81g，90∶10非对映体的混合物)中，并搅拌混合物。向反应溶液中加入一水合肼(1.9ml)，将混合物搅拌0.75小时。通过薄层色谱法证实起始原料的消耗，然后滤出阮内镍。将溶剂馏出，得到目标化合物，为褐色油状物质(2.50g，90∶10非对映体的混合物)。
薄层色谱法展开剂：己烷∶乙酸乙酯＝9∶1
硝基形式的Rf值：0.7，还原形式的Rf值：0.1(带拖尾)
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：1.44-1.61(m)，1.80-1.90(m)，1.93-2.06(m)，2.10-2.20(m)，2.23-2.38(m)，2.40-2.60(m)，2.73-2.90(m)，2.92-3.30(m)，5.40-5.45(m)。
(拆分非对映体的步骤)
(制备实施例11)
[(1R*，5S*，6S*)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯对甲苯磺酸盐
将乙酸乙酯(70ml，10.4v/w)加入[6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(7.8g，纯度：86.7％，22.03mmol，87∶13非对映体的混合物)中，并将混合物在室温下搅拌。加入对甲苯磺酸一水合物(4.2g，22.03mmol，0.87eq.)后，将混合物在室温下搅拌3小时，经过滤收集晶体。然后，在40℃的条件下将晶体减压干燥，得到[(1R*，5S*，6S*)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯对甲苯磺酸盐，为白色晶体(7.8g，收率：80.6％，非对映体比率：99.7∶0.3)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm：1.04(3H，t，J＝7.4Hz)，1.31-1.40(1H，m)，1.40(9H，s)，1.98-2.15(4H，m)，2.25(3H，s)，2.25-2.50(3H，m)，2.76(1H，五重峰，J＝7.4Hz)，3.05-3.18(3H，m)，3.35(1H，br s)，5.20-5.22(1H，m)，7.10-7.12(2H，m)，7.45-7.48(2H，m)，7.74(1H，brs)。
C23H35NO5S的分析计算值：C，63.13；H，8.06；N，3.20；S，7.33；实测值C，63.10；H，8.14；N，3.29；S，7.30。
GC分析条件(非对映体比率测定)
柱：用于胺的CP-Sil 8CB(GL Science，30m×0.25mm，0.25μm)
检测器：FID
温度：柱式加热炉(130℃)，注射(250℃)，检测器(250℃)
温度条件：(i)130℃(5.5分钟)，(ii)130-270℃(10℃/分钟)，(iii)270℃(4.5分钟)
流速：1.5ml/分钟(平均线速度：38cm/秒钟)
分流比：1/10
载气：氦气
分析时间：25分钟
削减峰值(Peak cut)：0.0-2.0分钟
保留时间：13.8分钟，14.0分钟
(光学拆分步骤)
(制备实施例12)
[(1R，5S，6S)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯羧酸盐(旋光羧酸盐)
Figure BPA00001445998700261
将[(1R*，5S*，6S*)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯对甲苯磺酸盐悬浮于乙酸乙酯(20v/w)中。通过加入碳酸氢钠水溶液(4v/w)将悬浮液分成水层和有机层，得到游离形式的[(1R*，5S*，6S*)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯。向该[(1R*，5S*，6S*)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(200mg，0.754mmol)加入二异丙醚(IPE)或乙腈(MeCN)(1.0mL，5.0v/w)，然后加入旋光羧酸(0.5eq.)，并将混合物在室温下搅拌。将沉淀的晶体过滤，用所使用的溶剂(0.5mL，2.5v/w)洗涤。将所得晶体减压干燥，以下表1所示收率和光学纯度得到对应的盐形式。
通过用碳酸氢钠水溶液将所获得的盐转化成游离形式，然后将游离形式衍生化成3，5-二硝基苯甲酰基形式，从而分析光学纯度。
HPLC分析条件(光学纯度测定，在衍生化成3，5-二硝基苯甲酰基形式后进行分析)
柱：CHIRALPAK AS-RH×2(Daisel，4.6mm×150mm，5μm)
检测：220nm，柱温：40℃，流速：0.8ml/分钟
流动相：MeCN/5mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)＝55/45
保留时间：29.6分钟，31.8分钟，36.1分钟
(表1)
Figure BPA00001445998700271
(由非对映体的混合物进行光学拆分的步骤)
(实施例1)
[(1R，5S，6S)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯D-扁桃酸盐
Figure BPA00001445998700281
将乙腈(4.7L，8.6v/w)加入[6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(627.0g，净重：543.6g，2.05mol，85∶15非对映体的混合物)中，将混合物在40℃下搅拌。向反应溶液中加入D-扁桃酸(116.3g，0.76mmol，0.37eq.)，并将混合物在40℃下搅拌1小时，然后使之慢慢冷却到3℃。在3℃下搅拌1小时后，经过滤收集所得晶体。然后，在40℃的条件下将晶体减压干燥，得到[(1R，5S，6S)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯D-扁桃酸盐，为白色粉末(251.2g，收率：29.4％，97.6％ee，99.6％de)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm：1.04(3H，t，J＝7.6Hz)，1.28-1.35(1H，m)，1.39(9H，s)，1.96-2.11(4H，m)，2.28(1H，d，J＝15.6Hz)，2.33(1H，d，J＝15.6Hz)，2.36-2.40(1H，m)，2.72(1H，五重峰，J＝7.6Hz)，3.00(1H，d，J＝13.2Hz)，3.03(1H，d，J＝13.2Hz)，3.31(1H，br s)，4.54(1H，s)，5.21-5.23(1H，m)，7.13-7.25(3H，m)，7.35-7.37(2H，m)。
[α]20 D-104.4°(C＝0.108，MeOH)。
C24H35NO5的分析计算值：C，69.04；H，8.45；N，3.35；实测值C，69.15；H，8.46；N，3.46。
(实施例2)
[(1R，5S，6S)-6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(S)-O-乙酰基-扁桃酸盐
Figure BPA00001445998700291
将乙腈(10mL，5.0v/w)加入[6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(1.9g，8.0mmol，90∶10非对映体的混合物)中。向该混合物中加入(S)-O-乙酰基-扁桃酸(0.45eq.)，并将混合物在室温下搅拌。2.5小时后，将沉淀的晶体过滤，并用乙腈洗涤。将所得晶体减压干燥，得到[(1R，5S，6S)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(S)-O-乙酰基-扁桃酸盐，为白色晶体(0.904g，收率：26.2％，90.4％ee，99％de)。将这种白色晶体(620mg)悬浮于乙腈(6.2mL，10.0v/w)中，将悬浮液在室温下搅拌10分钟。将所得晶体过滤后，将所得晶体减压干燥，得到(S)-O-乙酰基-扁桃酸盐，为白色粉末(557.6mg，光学纯度：95.7％ee)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δppm：1.44-1.51(1H，m)，1.45(9H，s)，2.08-2.22(2H，m)，2.13(3H，s)，2.42(2H，s)，2.50-2.57(1H，m)，2.86(1H，五重峰，J＝7.6Hz)，3.06-3.16(1H，m)，3.25-3.33(2H，m)，5.65-5.70(1H，m)，5.74(1H，s)，5.95-5.99(1H，m)，7.25-7.34(3H，m)，7.47-7.51(2H，m)。
[α]20 D-18.9°(C 0.095，MeOH)。
IR(KBr)：cm-1：3046、2977、1726、1584、1235、1144、1028、752。
MS(FAB+)：m/z：238(游离+H)+，MS(FAB+NaI)：m/z：260(游离+Na)+，217(O-乙酰基-扁桃酸+Na)+。
C24H33NO6的分析计算值：C，66.80；H，7.71；N，3.25；实测值C，66.60；H，7.72；N，3.36。
(实施例3)
[(1R，5S，6S)-6-氨基甲基-3-甲基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯D-扁桃酸盐
将溶剂(2.5mL，10v/w)加入[6-氨基甲基-3-甲基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(237mg，1mmol，90∶10非对映体的混合物)中。向混合物中加入D-扁桃酸(0.5eq.)，将混合物在冰冷却条件下搅拌2小时。将沉淀的晶体过滤。将所得晶体减压干燥，以下表2所示收率和光学纯度得到D-扁桃酸盐。通过用碳酸氢钠水溶液将所获得的盐转化成游离形式，然后使游离形式衍生化成3，5-二硝基苯甲酰基形式，从而对光学纯度进行了分析。
Figure BPA00001445998700311
(表2)
  溶剂   收率   ee％a)
  1   乙腈   8.5％   48.5％ee
  2   乙酸乙酯   4.6％   79.9％ee
  3   甲苯   11.2％   85.0％ee
  4   环戊基甲基醚   13.8   82.4％ee
a)3，5-二硝基苯甲酰氯，HPLC
HPLC分析条件(光学纯度测定，在衍生化成3，5-二硝基苯甲酰基形式后进行分析)
柱：CHIRALPAK AS-RH×2(Daisel，4.6mm×150mm，5μm)
检测：220nm，柱温：40℃，流速：0.8ml/分钟
流动相：MeCN/5mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)＝55/45
保留时间：28.0分钟，23.6分钟，26.0分钟
1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δppm：1.45-1.51(1H，m)，1.45(9H，s)，1.82(3H，s)，2.02-2.14(2H，m)，2.41(2H，s)，2.42-2.55(1H，m)，2.85(1H，五重峰，J＝7.2Hz)，3.06-3.13(1H，m)，3.23(1H，d，J＝13.2Hz)，3.26(1H，d，J＝13.2Hz)，4.84(1H，s)，5.25-5.28(1H，m)，7.19-7.30(3H，m)，7.44-7.47(2H，m)。
[α]20 D-97.4°(C 0.102，MeOH)。
IR(KBr)：cm-1：3424、2974、2929、1722、1571、1366、1152、1060、755、701。
MS(FAB+)：m/z：252(游离+H)+，MS(FAB+NaI)：m/z：274(游离+Na)+，175(扁桃酸+Na)+.
(使酯基脱保护和形成盐的步骤)
(实施例4)
[(1R，5S，6S)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸对甲苯磺酸盐
将[(1R，5S，6S)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯D-扁桃酸盐(4.17g，10mmol)悬浮于甲苯(21ml)中。向悬浮液中依次加入三乙胺(2.09ml)和水(21ml)，并将混合物在室温下搅拌。20分钟后，分离并萃取有机层。将有机层用水(10ml)再次洗涤，然后减压浓缩，得到游离形式的[(1R，5S，6S)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯，为油状物质。向其中依次加入甲苯(16ml)和对甲苯磺酸一水合物(2.28g)，并将混合物在70℃下搅拌。搅拌期间，再加入甲苯(15ml)，3小时后，使混合物冷却。将沉淀的固体过滤，然后用甲苯洗涤后减压干燥，得到[(1R，5S，6S)-6-氨基甲基-3-乙基二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸对甲苯磺酸盐，为白色粉末(3.90g)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δppm：1.10(3H，t，J＝7.2Hz)，1.49(1H，dd，J＝7.4，12.4Hz)，2.06-2.20(4H，m)，2.37(3H，s)，2.49-2.55(1H，m)，2.51(2H，s)，2.87(1H，五重峰，J＝7.4Hz)，3.12(1H，br S)，3.29(1H，d，J＝13.3Hz)，3.33(1H，d，J＝13.3Hz)，5.31-5.32(1H，m)，7.22-7.25(2H，m)，7.69-7.72(2H，m)。
[α]20 D-56.1°(C 0.108，MeOH)。
IR(KBr)：cm-1：3149、2962、1708、1498、1237、1164、1038、1011、813、680、566。
MS(FAB+)：m/z：210(游离+H)+，412(2M游离+H)+。
(实施例5)
[(1R，5S，6S)-6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸苯磺酸盐
将[(1R，5S，6S)-6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯(S)-O-乙酰基-扁桃酸盐(116mg，0.269mmol)悬浮于茴香醚(0.58ml)中。向悬浮液中依次加入水(0.6ml)和三乙胺(0.045ml)，并将混合物在室温下搅拌。15分钟后，分离并萃取有机层。将有机层再次用水(300ml)洗涤，然后减压浓缩，得到含游离形式的[(1R，5S，6S)-6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸叔丁酯的茴香醚溶液。向其中加入苯磺酸(46mg)，并将混合物在70℃下搅拌1.25小时后使之冷却。将沉淀的固体过滤，经过滤的粉末通过倒入丙酮再次洗涤后，减压干燥，得到[(1R，5S，6S)-6-(氨基甲基)二环[3.2.0]庚-3-烯-6-基]乙酸苯磺酸盐，为白色粉末(55.5mg)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δppm：1.51(1H，dd，J＝7.6，12.4Hz)，2.12-2.20(2H，m)，2.51(2H，s)，2.51-2.57(1H，m)，2.88(1H，五重峰，J＝7.4Hz)，3.17-3.18(1H，m)，3.32(1H，d，J＝13.3Hz)，3.36(1H，d，J＝13.3Hz)，5.69-5.71(1H，m)，5.97-5.99(1H，m)，7.39-7.44(3H，m)，7.81-7.84(2H，m)。
[α]20 D-99.7°(C 0.09，MeOH)。
IR(KBr)：cm-1：3125、3054、2988、1705、1515、1412、1237、1163、1121、1016、730、689、621、563。
MS(FAB+)：m/z：182(游离+H)+，m/z：363(2M游离+H)+。
C16H21NO5S的分析计算值：C，56.62；H，6.24；N，4.13；实测值C，56.19；H，6.21；N，4.13。
序列表的自由原文
SEQ ID NO：1：人Cacna2d1前半片段的PCR正义引物。
SEQ ID NO：2：人Cacna2d1前半片段的PCR反义引物。
SEQ ID NO：3：人Cacna2d1后半片段的PCR正义引物。
SEQ ID NO：4：人Cacna2d1后半片段的PCR反义引物。
SEQ ID NO：5：载体pBluescript 2的多克隆位点。
Figure IPA00001445998200011
Figure IPA00001445998200021
Figure IPA00001445998200031
Figure IPA00001445998200041
Figure IPA00001445998200051
Figure IPA00001445998200061
Figure IPA00001445998200071

Claims (6)

1.一种通过光学拆分制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法：
Figure FPA00001445998600011
其中各取代基的定义如下：
R1：氢原子或C1-C6烷基，和
R2：氢原子或羧基保护基，
所述方法包括
将通式(II)、(III)、(IV)和(V)表示的化合物的混合物和旋光有机酸溶于溶剂中：
Figure FPA00001445998600012
然后析出晶体。
2.权利要求1的制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法，其中R1为氢原子、甲基或乙基。
3.权利要求1或2的制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法，其中R2为叔丁基。
4.权利要求1-3中任一项的制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法，其中所述旋光有机酸为选自以下的任何活性有机酸：
D-扁桃酸、L-扁桃酸、二对甲苯甲酰基-L-酒石酸、N-Boc-L-脯氨酸、(R)-α-甲氧基苯基乙酸、O-乙酰基-L-扁桃酸、二苯甲酰基-L-酒石酸、O-乙酰基-D-扁桃酸、N-Boc-L-丙氨酸、(S)-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸、二乙酰基-L-酒石酸、L-酒石酸、L-苹果酸、L-焦谷氨酸、(+)-樟脑酸、(S)-2-甲基谷氨酸、(+)-3-溴樟脑-8-磺酸、(-)-
Figure FPA00001445998600021
氧基乙酸和(S)-2-苯氧基丙酸。
5.权利要求1-4中任一项的制备通式(I)表示的化合物或其盐的方法，其中所述溶剂为选自以下的任何溶剂：
乙腈、乙酸乙酯、甲苯和环戊基甲基醚。
6.一种制备通式(X)表示的化合物或其盐的方法：
Figure FPA00001445998600022
其中各取代基的定义如下：
R1：氢原子或C1-C6烷基，
所述方法包括
通过权利要求1的制备方法制备通式(I)表示的化合物，和
然后进行使通式(I)表示的化合物的羧基保护基R2脱去保护的步骤或进行该脱保护步骤以及进一步形成酸或盐的步骤。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104755456A (zh) * 2013-07-08 2015-07-01 第一三共株式会社 光学活性的二环γ-氨基酸衍生物的制备方法
CN107667097A (zh) * 2015-05-27 2018-02-06 诺瓦色生物公司 3‑乙基双环[3.2.0]庚‑3‑烯‑6‑酮的对映体的分离
CN114195661A (zh) * 2021-12-21 2022-03-18 苏州楚凯药业有限公司 一种苯磺酸米洛巴林的制备方法
CN116462576A (zh) * 2023-04-21 2023-07-21 山东新时代药业有限公司 一种米洛巴林关键中间体的制备方法

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103402972A (zh) * 2011-03-10 2013-11-20 住友化学株式会社 光学活性1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸酯的制造方法
HUE037046T2 (hu) 2011-06-08 2018-08-28 Daiichi Sankyo Co Ltd Eljárás biciklusos vegyület elõállítására iminium són keresztül
ES2649968T3 (es) 2011-06-08 2018-01-16 Daiichi Sankyo Company, Limited Procedimiento de producción de un compuesto bicíclico vía transposición de Claisen
CA2859003C (en) 2011-12-15 2016-11-01 Daiichi Sankyo Company, Limited Optical resolution method for bicyclic compound using asymmetric catalyst
IN2014DN07923A (zh) 2012-04-10 2015-05-01 Daiichi Sankyo Companyltd
CN104334169B (zh) * 2013-04-04 2016-11-02 第一三共株式会社 包含氨基羧酸盐的固体组合物
EP3083572B1 (en) 2013-12-18 2019-02-13 Novassay SA Gamma-aminobutyric acid (gaba) analogues for the treatment of pain and other disorders
WO2016148263A1 (ja) 2015-03-19 2016-09-22 第一三共株式会社 抗酸化剤を含有する固形製剤
CA2980097C (en) 2015-03-19 2019-10-29 Daiichi Sankyo Company, Limited Solid preparation containing colorant
TW201806928A (zh) * 2016-07-01 2018-03-01 第一三共股份有限公司 胺基羧酸之酸加成鹽的結晶及其製造方法
CN114264751B (zh) * 2021-12-28 2024-02-27 江苏威凯尔医药科技有限公司 一种高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004031124A1 (en) * 2002-10-04 2004-04-15 Pfizer Limited Cyclic nitromethyl acetic acid derivatives

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100377289B1 (ko) * 1995-09-06 2003-08-09 씨제이 주식회사 신규피리돈카르복실산유도체의중간체합성에관한새로운광학분할방법
CN1303059C (zh) 1997-10-27 2007-03-07 沃尼尔·朗伯公司 作为药物的环状氨基酸及其衍生物
HN2000000224A (es) 1999-10-20 2001-04-11 Warner Lambert Co Aminoacidos biciclicos como agentes farmaceuticos
IL157932A0 (en) 2001-04-19 2004-03-28 Warner Lambert Co Fused bicyclic or tricyclic amino acids
KR20030047466A (ko) * 2001-12-10 2003-06-18 주식회사 코오롱 라세미 피페리딘 카르복시산 유도체의 광학분할 방법
US7465730B2 (en) 2002-07-11 2008-12-16 Merck & Co. Inc. Treatment of neuropathic pain with 6H-pyrrolo[3,4-d]pyridazine compounds
US8168181B2 (en) 2006-02-13 2012-05-01 Alethia Biotherapeutics, Inc. Methods of impairing osteoclast differentiation using antibodies that bind siglec-15
JP4479974B2 (ja) 2007-09-28 2010-06-09 第一三共株式会社 二環性γ−アミノ酸誘導体
EP2262761A1 (en) 2008-04-04 2010-12-22 Generics [UK] Limited Novel process
WO2010084798A1 (ja) * 2009-01-21 2010-07-29 第一三共株式会社 ３環性化合物
JP2010241796A (ja) * 2009-03-17 2010-10-28 Daiichi Sankyo Co Ltd 二環性γ−アミノ酸誘導体含有医薬組成物

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004031124A1 (en) * 2002-10-04 2004-04-15 Pfizer Limited Cyclic nitromethyl acetic acid derivatives

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALBERTO AVENOZA ET AL.: "Synthesis of enantiopure analogues of 3-hydroxyproline and derivatives", 《TETRAHEDRON: ASYMMETRY》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104755456A (zh) * 2013-07-08 2015-07-01 第一三共株式会社 光学活性的二环γ-氨基酸衍生物的制备方法
CN104755456B (zh) * 2013-07-08 2016-10-12 第一三共株式会社 光学活性的二环γ-氨基酸衍生物的制备方法
CN107667097A (zh) * 2015-05-27 2018-02-06 诺瓦色生物公司 3‑乙基双环[3.2.0]庚‑3‑烯‑6‑酮的对映体的分离
CN107667097B (zh) * 2015-05-27 2021-02-12 诺瓦色生物公司 3-乙基双环[3.2.0]庚-3-烯-6-酮的对映体的分离
CN114195661A (zh) * 2021-12-21 2022-03-18 苏州楚凯药业有限公司 一种苯磺酸米洛巴林的制备方法
CN114195661B (zh) * 2021-12-21 2023-12-22 苏州楚凯药业有限公司 一种苯磺酸米洛巴林的制备方法
CN116462576A (zh) * 2023-04-21 2023-07-21 山东新时代药业有限公司 一种米洛巴林关键中间体的制备方法
CN116462576B (zh) * 2023-04-21 2023-12-19 山东新时代药业有限公司 一种米洛巴林关键中间体的制备方法

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