CN102343257B - 改进的色谱介质的制备方法以及使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种通过自由基聚合来制备具有共价键合的聚合物链的单分散大孔聚合介质的改进方法。所述介质可以用于色谱纯化，获得具有改进的蛋白质结合容量和树脂选择性的聚合物载体，本发明还涉及所述介质的制备和使用方法。

Description

改进的色谱介质的制备方法以及使用方法
技术领域
本发明涉及一种通过自由基聚合来制备具有共价键合的聚合物配体链的单分散大孔聚合介质的改进方法。所述介质可以用于色谱纯化，获得具有改进的蛋白质结合容量、动力学性质和选择性的聚合物载体，本发明还涉及所述介质的制备和使用方法。
背景技术
在现代卫生保健当中，由活性有机体制得的治疗用蛋白质的重要性在日益提高。这些蛋白质提供了很多优于常规药物的优点，包括对目标疾病的专一性和功效的提高。哺乳动物的免疫系统使用很多蛋白质来控制和消除疾病威胁。随着基因和蛋白质工程学的发展，人们能够开发出许多“设计的”或者重组蛋白质疗法。这些疗法可能基于单独的蛋白质、化学改性的蛋白质、蛋白质片段或蛋白质结合体。在这些生物药物的生产中，人们广泛地采用色谱分离。随着工业日趋成熟，如果能够采用新颖的/先进的技术和方法来提高分离效果，将使得生物药物制造商能够将这些药物以更低的价格提供给更多的病人。
用来纯化蛋白质的常用色谱法包括亲和色谱法、生物亲和色谱法、离子交换色谱法、反相色谱法、疏水性相互作用色谱法、亲水性相互作用色谱法、尺寸排阻色谱法和混合模式色谱法(包括树脂的上述种类的组合)等。这些种类的色谱的应用和效率取决于溶质分子与色谱系统的固定相(色谱介质)之间的表面-表面相互作用的选择性，所述溶质分子和固定相各自都与液体流动相发生相互作用。很多种固定相色谱载体材料可以在市场上购得。
将产品与杂质成功分离的关键通常在于以下对象的正确组合：固定相、基础基质(化学组成和孔结构)和配体性质(配体种类、配体密度、孔结构、配体分布、配体长度和材料组成)，以及流动相或者溶液性质(缓冲剂种类、pH和电导性)。基础基质和配体的具体设计得到了色谱介质，色谱介质的特征包括一些关键属性，包括蛋白质结合容量、处理通量、选择性、床渗透性和化学稳定性。纯化方法包括主要结合产品(结合和洗脱)、主要结合杂质(流过)以及上述情况的组合(所谓的弱分配等)。在设计这些技术的时候，最关键的一点是控制上述色谱介质的性质，以便能够进行和确保可靠的分离，以得到纯化的蛋白质产品。
可以在很多种聚合物载体或基础基质上进行蛋白质分离。用于树脂或珠粒结构的常用材料包括多糖(琼脂糖、纤维素)、合成聚合物(聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯基醚和聚丙烯酰胺)以及陶瓷材料，例如二氧化硅、氧化锆和孔受控的玻璃。这些材料主要通过孔径通常约为200-的“扩散孔”吸附蛋白质。
薄膜和整体料也常用于色谱，特别是用于流通应用。常规的薄膜组合物包括合成聚合物，例如聚偏二氟乙烯、聚乙烯、聚醚砜，、尼龙和多糖，例如纤维素。人们已经由以下材料开发出了整体料：聚苯乙烯、多糖、聚甲基丙烯酸酯和其他合成聚合物、多糖和陶瓷。薄膜和整体型色谱与珠粒的区别在于，前者将蛋白质吸附在相同的“对流孔”中，所述对流孔控制薄膜和整体料的渗透性。常规的薄膜和整体型对流孔的孔径约为0.6-10微米。可以通过各种开发成熟的技术向这些基材添加配体。
通过使用聚合配体“触手(tentacle)”或“延伸剂(extender)”改进蛋白质结合容量和改进树脂选择性的做法包括例如通过接枝将聚合配体偶联在基础基质上，所述配体从基础基质的表面延伸出来。聚合配体延伸剂通常能够产生更大的结合容量和动力学性质，这是因为目标分子结合到聚合配体上的现象超过了蛋白质在聚合物载体表面上的单层吸附，因此延伸剂增大了配体可达性。
人们已经开发出了两种用来接枝聚合物延伸剂的标准方法，以便在聚合物载体上形成表面延伸剂，所述聚合物载体是例如用于分离蛋白质等的色谱中的那些，这两种方法是：1)通过表面基团接枝单体于载体(“接枝单体于”)，2)通过活性基团将预先形成的聚合物接枝到载体(“接枝聚合物到”)。
采用自由基聚合反应对来自聚合材料的单体进行接枝是一种开发成熟的技术。一般来说，所述反应可以由聚合表面材料引发，或者由溶液中的引发剂引发。
可以通过暴露于活性环境，例如温度、辐射、金属氧化或通过吸附的引发性物质的引发作用，在表面产生自由基，从而实现从表面引发自由基聚合。但是，这些“接枝单体于”的方法需要特别的设备严格控制溶液条件和/或需要以一定的方式对载体进行预先活化，例如用可聚合的连接剂、引发物质或特定的官能团进行预处理，因而使这种方法的实施变得复杂而耗时。
US5453186揭示了由多孔材料接枝聚合物的方法。本领域揭示了一种将聚合物配体接枝在包括双羟基官能团的聚合物载体上的方法。现有技术揭示的方法通过使用氧化还原聚合反应来控制链长度，在包括羟基的载体上接枝。Ce(IV)氧化还原法在惰性气氛下使用铈(IV)盐对来自聚合物载体表面的聚合配体进行接枝。通过控制单体的含量以及加入混合物的铈盐浓度来控制聚合物配体链长度。
尽管现有技术揭示了自聚合材料接枝聚合物的方法，但是该方法需要用特定的官能团对聚合物载体进行预处理。人们需要一种具有以下特点的方法，该方法可以从工艺中省去此额外的预处理步骤，同时能够保持所得到的总体聚合色谱材料的性能。
将聚合配体添加到聚合载体材料表面，提供了改进的蛋白质结合容量、蛋白质结合动力学性质，以及蛋白质选择性的潜在的变化。但是，随着蛋白质分离的要求变得更高，人们更迫切需要开发出新的技术和方法，以制造新颖的聚合结构。因此，人们需要开发出具有改进的蛋白质结合性质和蛋白质选择性的更宽范围的聚合载体基材，用于蛋白质分离。
基于以上所述的对可以用于蛋白质分离、具有改进的蛋白质结合容量和树脂选择性的新的聚合基材的需求，我们开发出了一种用来将聚合配体接枝在聚合载体基材上的新方法。
发明内容
根据本发明，提供了一种用于色谱的吸附剂材料，其包括固定在聚合载体上的聚合配体，
其中所述聚合载体包括合适的自由基接枝位点，
另外，所述聚合配体通过一个或多个共价键连接于所述聚合载体的合适的自由基接枝位点。
在本发明的第二个方面，提供了一种制备用于色谱的吸附剂材料的方法，该方法包括：
(i)提供聚合载体，所述聚合载体包括合适的自由基接枝位点；
(ii)通过官能单体的聚合产生聚合配体；以及
(iii)引发所述聚合载体与所述聚合配体之间的反应；
其中，所述聚合配体与所述聚合载体上的合适的自由基接枝位点反应。
在本发明的第三个方面，提供了一种从混合物分离化合物的方法，该方法包括：
(i)提供混合物；以及
(ii)使所述混合物与用于色谱的吸附剂材料接触，所述吸附剂包括固定在聚合载体上的聚合配体，
其中，所述聚合载体包括合适的自由基接枝位点，
另外，所述聚合配体通过一个或多个共价键连接于所述聚合物载体的合适的自由基接枝位点。
具体实施方式
在本文中，所有的范围都包都其所有的子范围。例如，范围″1-10″包括最小值1和最大值10之间(包括端值)的任意和全部的子范围，也即是说，在等于或大于最小值(1)和等于或小于最大值(10)之间的任意、全部的子范围，例如5.5-10。
如本文中所用，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数指代形式，除非文中另有明确说明。
在本文中，术语“聚合物配体”和“聚合配体”是同义词，术语“聚合载体”和“聚合物载体”也是同义词。
在本文中，术语“优选”、“更优选”和“最优选”不是为了指出一定更佳的形式，而是表示较宽的范围或组之内合适的更窄的范围。
与现有技术的方法相比，本发明不需要对聚合载体进行预处理或向聚合载体添加可聚合的连接剂。通过官能单体和/或链转移剂和引发剂聚合反应产生的聚合配体将与聚合载体和/或聚合载体主链上的合适的自由基接枝位点反应，形成共价连接。引发剂将引发单体在溶液中的聚合反应，在聚合载体的合适的自由基接枝位点处接枝在表面上。
本发明的聚合载体包括任意具有合适表面的聚合材料，所述合适表面用来接枝具有自由基部分的聚合配体。尽管本发明不需要可聚合的连接剂，但是本发明的体系也可以包含可聚合的连接基，只要不会带来任何破坏作用。本发明的聚合载体可以通过悬浮聚合、乳液聚合或分散聚合或其组合来制备。
所述聚合载体材料可以是颗粒材料，或者为小块、片材、管状、棒状或毛细涂层的形式。较佳的是，所述载体材料是颗粒材料，其体均粒度优选约为0.5-1500微米，优选约为0.7-800微米，最优选约为10-150微米。所述颗粒优选基本为球形。所述颗粒材料优选包括孔。所述颗粒载体材料的孔径、孔体积和比表面积可以根据使用的载体材料的种类、用来连接在载体上的聚合物的特性以及使用时所需的分离特性变化。颗粒状微粒的孔径可以约为20-
Figure BSA00000551101900051
优选约为200-最优选约为300-
Figure BSA00000551101900053
孔体积适合约为0.1-4毫升/克，优选约为0.3-2毫升/克，最优选约为0.5-1.5毫升/克。比表面积优选约为1-1000米2/克，优选约为25-700米2/克，最优选约为50-500米2/克。
可以用于本发明的其他“聚合载体”或“基础基质”包括但不限于任何具有扩散孔的材料。可以用于本发明的用于聚合物载体或基础基质的优选材料包括多糖、合成聚合物、琼脂糖、纤维素、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚乙烯基醚以及上述材料的杂合物或其组合。本发明的聚合载体具有合适的自由基接枝位点，这些自由基接枝位点允许聚合配体通过共价键键合。
自由基聚合配体接枝反应过程中的温度适合约为0-100℃，优选15-50℃，或者为50-90℃。所述反应混合物适合保持在空气气氛中，但是可以在惰性气氛下进行。
在一些实施方式中，所述聚合配体可以包含官能团。可以用于本发明的“官能团”的例子包括但不限于离子交换基团、生物亲和性基团、疏水性基团、亲硫性相互作用基团、螯合或螯合性基团、与目标化合物具有所谓的π-π相互作用的基团、氢键基团、亲水性基团，以及能够进一步转化为另外的官能团的非官能单体或中间单体(例如，甲基丙烯酸缩水甘油酯，其可以转化为离子交换配体)，以及它们的混合物。
可以用于本发明的“聚合配体”的例子包括但不限于包含以下基团的聚合物：离子交换基团、疏水性相互作用基团、亲水性相互作用基团、亲硫性相互作用基团、金属亲和性基团、亲和性基团、生物亲和性基团、混合形式的基团，还包括能够进一步转化为其他官能团的非官能聚合物或中间聚合物(例如聚甲基丙烯酸缩水甘油酯，其能够转化为离子交换聚合配体)，以及它们的混合物。可以用于本发明的一些优选的配体包括但不限于包含以下基团的聚合物：强阳离子交换基团，例如磺丙基、磺酸；强阴离子交换基团，例如氯化三甲基铵；弱阳离子交换基团，例如羧酸；弱阴离子交换基团，例如N，N-二乙基氨基乙基。
在此化学领域的一些实施方式中，在制备聚合配体的过程中向反应介质中加入链转移剂可能是有益的。合适的链转移剂包括例如卤代甲烷、二硫化物、硫醇和金属络合物。其他合适的链转移剂包括各种包含至少一个容易被抽提的氢原子的其它化合物，以及它们的混合物。链转移剂可以一次或多次加入，或者以线性或非线性的形式连续加入，可以在大部分或整个反应期间加入，或者在反应期间的有限的部分加入。向反应中加入链转移剂的量可以为0.01％-15％，更优选为0.1％-3％，最优选约为0.1％-1％。
可以用于本发明的“自由基引发剂”的例子包括但不限于能够与乙烯基单体反应而形成聚合配体的任意自由基引发剂，例如过氧化物，如氢过氧化叔丁基、氢过氧化枯烯；过乙酸化物，例如过乙酸、氯过苯甲酸；过硫酸盐，例如过硫酸铵、过硫酸钠、过二硫酸钾；偶氮引发剂，例如4，4’-偶氮二(4-氰基戊酸)、2959[纽约州霍桑市汽巴-嘉吉公司(Ciba-Geigy，Hawthorn，N.Y.)]、盐酸2，2′-偶氮二(2-脒基-丙烷)，等等，以及它们的混合物。所述接枝反应可以通过本领域已知的方法引发，优选采用热引发(加热)或紫外辐射。所述自由基引发剂可以是水溶性或油溶性的。将引发剂以0.01％-5％、更优选0.1％-2％的量加入反应中。
可以用来制备本发明的聚合配体的“官能单体”或“接枝单体混合物”的例子包括但不限于甲基丙烯酸酯、丙烯酸酯、甲基丙烯酰胺和丙烯酰胺。所述官能单体包括但不限于丙烯酸、2-丙烯酰氨基-2-甲基-1-丙磺酸、氯化-[3-(甲基丙烯酰氨基)丙基]三甲基铵、2-丙烯酰氨-乙醇酸、衣康酸或乙基乙烯基酮、甲基丙烯酸缩水甘油酯、N，N-二甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺、甲基丙烯酸羟丙酯、N-苯基丙烯酰胺、羟乙基丙烯酰胺，以及它们的组合。
在本文所述的接枝方法中，当在溶液中引发聚合物配体的聚合的时候，对条件的限制要比从聚合物载体表面生长聚合配体的条件限制宽松。
可以将交联剂、支化剂和非官能单体连接于聚合配体，用来控制聚合配体的形貌或相互作用。但是，这些交联剂或支化剂在聚合配体上的量很低，适合＜5％，更优选＜1％。合适的交联剂或支化剂包括但不限于单体，例如二甲基丙烯酸乙二酯、二乙烯基苯、丙基三甲基丙烯酸三甲酯和亚甲基二丙烯酸酯，或者多官能链转移剂。
本发明还包括在色谱分离法中将吸附剂材料用于色谱。这些色谱分离法可以是例如低压液相色谱、中压液相色谱、HPLC、超临界流体色谱(SFC)和模拟移动床(SMB)。
本发明还包括一种从混合物分离化合物的方法，该方法包括使所述混合物与本发明的用于色谱的吸附材料接触。
本发明的主要优点是利用配体接枝形成高容量离子交换树脂，该树脂用于分子(更具体来说是生物分子)的色谱俘获和/或纯化。
测试方法
摄取结合容量的测定：
溶液1(50mM Tris/HCl，pH 8.8)的制备
将12.1克三(羟甲基)氨基甲烷[购自费舍尔科学公司(Fisher Scientific)]加入2升的容量瓶中。将0.01N的HCl溶液(购自费舍尔科学公司)注入容量瓶至2升的刻度。给容量瓶盖上盖子，对其中的物料进行振摇。将该溶液静置5分钟，再次检查溶液的体积。再加HCl，将体积调节到2升的刻度。测得pH为8.8±0.05。给溶液贴上标签，放入4℃的冰箱保存。
溶液2的制备：2毫升/毫升的BSA[得自牛血清的白蛋白，购自希格玛-艾尔德里奇公司(Sigma-Aldrich)]溶液。
在玻璃广口瓶中称取0.806克BSA，将其加入403克溶液1中。轻轻混合该物料，以使其溶解。将溶液静置0.5小时，以确保BSA完全溶解。
BSA容量摄取程序
将1毫升去离子水缓慢地加入一个Bio-Rad Poly-Prep色谱柱中，以免夹杂空气。标记水的高度。将端塞从柱子取下。在通风橱中将所述柱子与总管相连。向所述柱子中加入更多的去离子水，对柱子施加轻微的真空，直至柱子底部保留1-2厘米的水以免夹杂空气。将实施例7的浆状溶液加入所述柱子中。始终在树脂上方保持水头。在柱子中测得1毫升的树脂。施加轻度真空，除去树脂上方的溶液，仅在树脂上方留下1-2厘米的溶液。当树脂水平位置落至低于1毫升标记以下的时候，在施加额外的真空的条件下，加入更多的树脂浆液。所述树脂珠粒从来不接触空气。填充的1毫升树脂用大约10毫升的去离子水淋洗，以代替浆状溶液，将液体排出，直至水位在填充床上方1-2厘米处。然后用10毫升的实施例6的溶液1冲洗填充的1毫升树脂。通过抽真空将溶液1从柱子中除去，将空气抽过柱子1分钟。将包含湿饼的一次性柱子从总管取下。
用刮刀将从柱子中取出的湿饼转移到8盎司的玻璃瓶中，加入200毫升溶液2(2毫克/毫升BSA溶液)。将玻璃瓶中的样品轻轻振摇18小时。
18小时之后，将样品从振荡器取出，让树脂沉淀15分钟。
在培养18小时之后，测量过滤后的上清液BSA溶液在278纳米处的紫外吸收结果，由此测定BSA结合容量。用装有溶液1的比色皿对紫外分光光度计调零。测量所有的样品、标样溶液和参比样[Q SepharoseTM快速流动离子交换树脂，购自GE健康护理公司(GE Healthcare)]在278纳米处的吸光度。
BSA结合容量的计算：
记录样品和参比样未结合BSA条件下的值(Q Sepharose FF)。用以下公式来确定结合容量：
方程式1
BSA容量＝[400-(样品毫克/毫升×200)]×1毫升＝毫克BSA/毫升树脂
实施例
实施例1
60微米GMA/GlyDMA多孔阴离子型交换剂的制备
向装有顶挂式搅拌器、冷凝器和温度探针的250毫升的玻璃反应器中加入50克单一尺寸的GMA/GlyDMA[60微米聚GMA-GlyDMA珠粒，甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)和甘油-1，3-二甲基丙烯酸酯(GlyDMA)，其通过美国专利申请第11/521668号的实施例25“制备60微米的GMA/EGDMA聚合物树脂”所述的方法制备]，共聚物湿饼(约25％固体)，向该反应器中的所述湿饼添加18克75％的氯化(3-丙烯酰氨丙基)-三甲基铵(购自希格玛-艾尔德里奇化学公司)。然后向反应器中加入0.6克过硫酸铵[购自阿科有机-费舍尔科学公司(Acros organics-Fisher Scientific)]、0.6克二盐酸2，2-偶氮二(2-甲基丙脒)(购自希格玛-艾尔德里奇化学公司)和68克去离子水。
在搅拌条件下，反应器在25℃的温度下保持30分钟。在空气中，在45分钟的时间内将反应器加热至80℃。反应器在空气中，在80℃保持5小时，然后冷却至50℃。使用60毫升的加液漏斗，在1小时时间内加入120毫升去离子水，在搅拌的条件下保持50℃的恒定温度。使用500毫升的玻璃料布氏漏斗对反应混合物进行过滤，对聚合物溶液的珠粒进行洗涤。使用1升去离子水。在树脂上测量了牛血清白蛋白(BSA)的平衡结合容量。BSA容量为141毫克/毫升。
实施例2
使用N，N，N，N-四甲基乙二胺进行60微米GMA/GlyDMA多孔阴离子型交换剂的制备
在装有顶挂式搅拌器、冷凝器和温度探针的250毫升玻璃反应器中加入50克单一尺寸的GMA/GlyMA共聚物湿饼(约25％的固体)，向该反应器中的该湿饼加入30克75％的氯化(3-丙烯酰氨丙基)三甲基铵(购自希格玛-艾尔德里奇化学公司)。然后向反应器中加入0.6克过硫酸铵(购自阿科有机-费舍尔科学公司(Acros organics-Fisher Scientific))、0.6克二盐酸2，2-偶氮二(2-甲基丙脒)(购自希格玛-艾尔德里奇化学公司)、20微升的N，N，N，N-四甲基乙二胺(购自希格玛-艾尔德里奇化学公司)和68克去离子水。
在搅拌的同时，反应器的温度在25℃保持30分钟，然后在空气中，在45分钟内将反应器加热至80℃。反应器在空气中，在80℃保持5小时，然后冷却至50℃。使用60毫升的加液漏斗，在1小时时间内加入120毫升去离子水，在搅拌的条件下保持50℃的恒定温度。使用500毫升的玻璃料布氏漏斗对反应混合物进行过滤，对珠粒进行洗涤，使其不含聚合物溶液。使用1升去离子水洗涤珠粒。在树脂上测量BSA(来自牛血清白蛋白，购自希格玛-艾尔德里奇公司)批料的平衡结合容量。牛血清白蛋白BSA容量为188毫克/毫升。
实施例3
通过水解的共聚物制备60微米GMA/GlyDMA多孔阴离子型交换剂
在装有顶挂式搅拌器、冷凝器和温度探针的250毫升玻璃反应器中加入50克单一尺寸的GMA/GlyMA共聚物湿饼(约25％的固体)，向该反应器加入150毫升1M的氢氧化钠溶液(购自费舍尔科学公司)。该混合物在25℃搅拌48小时，反应混合物用500毫升玻璃料布氏漏斗过滤，以洗涤珠粒，使其不含氢氧化钠溶液。使用1升去离子水洗涤珠粒。
然后，将30克所述湿滤饼材料放回250毫升的玻璃反应器中，向反应器加入18克75％的氯化(3-丙烯酰氨丙基)三甲基铵(购自艾尔德里奇化学公司)。然后向反应器中加入0.36克过硫酸铵(购自阿科有机-费舍尔科学公司)、40.5克去离子水。
在搅拌条件下，反应器在25℃的温度下保持30分钟。在空气中，在45分钟的时间内将反应器加热至80℃。反应器在空气中，在80℃保持18小时，然后冷却至50℃。使用60毫升的加液漏斗，在1小时时间内加入120毫升去离子水，在搅拌的条件下保持50℃的恒定温度。使用500毫升的玻璃料布氏漏斗对反应混合物进行过滤，对珠粒进行洗涤，使其不含聚合物溶液。使用1升去离子水。在树脂上测量BSA(来自牛血清白蛋白，购自希格玛-艾尔德里奇公司)批料的平衡结合容量。牛血清白蛋白BSA容量为101毫克/毫升。
实施例4
60微米GMA/GlyDMA多孔弱碱性阴离子型交换剂的制备
向装有顶挂式搅拌器、冷凝器和温度探针的250毫升玻璃反应器中加入30克单一尺寸的GMA/GlyDMA共聚物湿饼(约25％的固体)。
向反应器中加入18克N-[3-(二甲基氨基)丙基]甲基丙烯酰胺(购自艾尔德里奇化学公司)、0.36克过硫酸铵(购自阿科有机-费舍尔科学公司)和40.5克去离子水。
在室温下将反应器搅拌30分钟，然后在45分钟时间内将反应器加热至80℃。反应器在空气中，在80℃保持22小时，然后将反应器冷却至50℃。在30分钟的时间内，在搅拌的条件下，通过漏斗加入60毫升去离子水，在恒定温度下保持50℃。
将反应混合物冷却至室温。然后将反应混合物转移到600毫升的玻璃料布氏漏斗，过滤，直至珠粒不含聚合物溶液。用1升去离子水对珠粒洗涤1小时。BSA容量(牛血清白蛋白)为110毫克/毫升。
实施例5
使用链转移试剂进行60微米GMA/GlyDMA多孔阴离子型交换剂的制备
在装有顶挂式搅拌器、冷凝器和温度探针的2000毫升玻璃反应器中加入300克单一尺寸的GMA/GlyMA共聚物湿饼(约25％的固体)，向该反应器中的该湿饼加入180克75％的氯化(3-丙烯酰氨丙基)三甲基铵(购自希格玛-艾尔德里奇化学公司)。然后向该反应器中加入0.9克过硫酸铵(阿科有机-费舍尔科学公司)、60毫克3-巯基丙酸丁酯(希格玛-艾尔德里奇公司)和405克去离子水。
在搅拌条件下，反应器在25℃的温度下保持30分钟。在空气中，在45分钟的时间内将反应器加热至80℃。反应器在空气中，在80℃保持22小时，然后冷却至50℃。使用600毫升的加液漏斗，在1小时时间内加入500毫升去离子水，在搅拌的条件下保持50℃的恒定温度。使用2000毫升的玻璃料布氏漏斗对反应混合物进行过滤，对珠粒进行洗涤，使其不含聚合物溶液。使用10升去离子水。BSA(牛血清白蛋白，希格玛艾尔德里奇公司)批料容量为171毫克/毫升。

Claims (2)

1. 一种制备用于色谱法的吸附剂材料的方法，该方法包括:
(i)提供聚合载体，所述聚合载体包括合适的自由基接枝位点；
(ii)通过官能单体的聚合产生聚合配体，所述官能单体包括选自以下的单体：甲基丙烯酸酯、丙烯酸酯、甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺、以及它们的组合; 以及
(iii)引发所述聚合载体与所述聚合配体之间的反应；
其中，所述聚合配体与所述聚合载体上的合适的自由基接枝位点反应。
2.如权利要求1所述的制备用于色谱法的吸附剂材料的方法，其特征在于，加入自由基引发剂，以引发所述聚合载体和聚合配体之间的反应。
3. 如权利要求2所述的制备用于色谱法的吸附剂材料的方法，其特征在于，所述自由基引发剂是过氧化物、偶氮引发剂或者它们的混合物。
4. 如权利要求2所述的制备用于色谱法的吸附剂材料的方法，其特征在于，所述自由基引发剂是过氧乙酸盐、过硫酸盐或者它们的混合物。
5. 如权利要求1所述的制备用于色谱法的吸附剂材料的方法，其特征在于，所述聚合载体的体均粒度为0.5-500微米。 
6. 如权利要求1所述的制备用于色谱法的吸附剂材料的方法，其特征在于，通过官能单体聚合产生聚合配体的操作是在存在链转移剂的情况下进行的。
7. 一种用于色谱法的吸附剂材料，其通过权利要求1所述的方法制备。 
8. 如权利要求7所述的用于色谱法的吸附剂材料，其特征在于，所述聚合配体包含自由基物质。
9. 如权利要求7所述的用于色谱法的吸附剂材料，其特征在于，所述聚合配体包含官能团。 
10. 如权利要求7所述的用于色谱法的吸附剂材料，其特征在于，所述聚合载体的体均粒度为0.5-500微米。
11. 一种从混合物分离化合物的方法，所述方法包括 
(i)提供混合物；以及 
(ii)使所述混合物与用于色谱法的吸附剂材料接触，所述吸附剂材料通过权利要求1所述的方法制备。
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