CN102321151B - 一种硫糖肽的纯化工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及化学药物硫糖肽技术领域一种硫糖肽的纯化工艺。包括将硫糖肽粗品溶解于氯化钠溶液中；配制pH为6.0浓度为1wt%、4wt%和10wt%的氯化钠缓冲溶液；离子层析柱预处理；样品上柱：上完样品用1wt%的氯化钠缓冲液冲洗；洗涤：用4wt%的氯化钠缓冲液洗涤离子交换柱；洗脱：用10wt%氯化钠缓冲液洗脱离子交换柱得洗脱液；超滤脱盐：将洗脱液过滤，超滤脱盐；沉淀干燥：用乙醇将浓缩液沉淀，所得沉淀脱水干燥，得到纯化的硫糖肽。经过纯化的硫糖肽，纯度能达到99.5%以上，硫含量15.3%以上，弥补了硫糖肽纯度不高，硫含量偏低的缺陷，可以作为标准品使用，节约了购买标准品的成本。

Description

一种硫糖肽的纯化工艺
技术领域    
本发明涉及化学药物硫糖肽技术领域，特别涉及一种硫糖肽的纯化工艺。
背景技术   
硫糖肽是由猪十二指肠的提取物糖肽，经过硫酸化得到的一种硫酸多酯。硫糖肽是胃保护和抗溃疡药物，适用于治疗十二指肠溃疡和胃炎。目前在意大利上市，国内尚未见报道。药物的药效与硫含量的高低息息相关。现有硫糖肽原料药一般存在纯度不高，一般低于95%，硫含量偏低，一般低于14.8%，会严重影响药效的发挥。
发明内容   
为了解决以上问题，本发明提供了一种纯化硫糖肽、提高硫含量的硫糖肽的纯化工艺。
    本发明是通过以下方式实现的：
一种硫糖肽的纯化工艺，包括以下步骤：
（1）样品准备：将硫糖肽粗品溶解于1wt%的氯化钠溶液中，硫糖肽浓度为5wt%，用醋酸调节pH值为6.0；
（2）缓冲溶液的配制：分别配制浓度为1wt%、4wt%和10wt%的氯化钠缓冲溶液，分别加入醋酸0.05M，调节pH为6.0；
（3）离子层析柱预处理：离子交换柱中填充琼脂糖凝胶6B，填充体积与被分离样品的体积比为1：2，用10wt%的氯化钠缓冲溶液冲洗离子交换柱，缓冲液用量为3倍树脂体积，然后用1wt%的氯化钠缓冲溶液平衡离子交换柱，缓冲液用量为3倍树脂体积；
（4）样品上柱：流速控制2倍树脂体积/h，上完样品后，用1wt%的氯化钠缓冲溶液冲洗，缓冲液用量为1倍树脂体积；
（5）洗涤：用4wt%的氯化钠缓冲溶液洗涤离子交换柱1小时，流速为2倍树脂体积/h；
（6）洗脱：用10wt%氯化钠缓冲溶液洗脱离子交换柱1小时，流速为2倍树脂体积/h，得洗脱液；
（7）超滤脱盐：将洗脱液用孔径0.45μm滤膜过滤，然后用3万分子量的超滤膜进行超滤脱盐至盐度2%，再浓缩至洗脱液体积的3/4；
（8）沉淀、干燥：用95%以上的乙醇按体积比1:1将浓缩液在搅拌条件下沉淀，所得沉淀脱水干燥，得到纯化的硫糖肽。
琼脂糖凝胶6B载量为110mg/mL，粒径45-165μm。
本发明的有益效果：经过纯化的硫糖肽，纯度能达到99.5%以上，硫含量15.3%以上，弥补了硫糖肽纯度不高，硫含量偏低的缺陷，可以作为标准品使用，节约了购买标准品的成本。
附图说明   
附图1为使用本发明纯化工艺纯化得到的硫糖肽使用液相色谱法检测得到的谱图，
附图2为购自韩国的硫糖肽标准品使用液相色谱法检测得到的谱图。
具体实施方式
实施例1
硫糖肽的纯化工艺，包括以下步骤：
（1）样品准备：取硫糖肽粗品10g，纯度为85%，含硫量为14.5%，溶解于1wt%的氯化钠溶液中，硫糖肽浓度为5wt%，用醋酸调节pH值为6.0，共200mL；
（2）缓冲溶液的配制：分别配制浓度为1wt%、4wt%和10wt%的氯化钠缓冲溶液，分别加入醋酸0.05M，调节pH为6.0；
（3）离子层析柱预处理：离子交换柱中填充载量为110mg/ml的DEAE-sepharose 6B， 填充100ml，用10wt%的氯化钠缓冲液冲洗离子交换柱，缓冲液用量为300mL，然后用1wt%的氯化钠缓冲液平衡离子交换柱，缓冲液用量为300mL；
（4）样品上柱：流速控制200mL/h，上完样品后，用1wt%的氯化钠缓冲液冲洗，缓冲液用量为100mL；
（5）洗涤：用4wt%的氯化钠缓冲液洗涤离子交换柱1小时，流速为200mL/h；
（6）洗脱：用10wt%氯化钠缓冲液洗脱离子交换柱1小时，流速为200mL/h，得洗脱液200mL；
（7）超滤脱盐：将洗脱液用孔径0.45μm滤膜过滤，然后用3万分子量的超滤膜进行超滤脱盐至盐度2%，再浓缩至150ml；
（8）沉淀、干燥：用95%的乙醇按体积比1:1将浓缩液在搅拌条件下沉淀，所得沉淀脱水干燥，得到纯化的硫糖肽。
以韩国的硫糖肽标准品作为标准，采用外标法测得本发明纯化工艺得到的硫糖肽含量为102%，硫含量为15.5%，谱图如附图1和附图2所示。说明本发明的纯化工艺得到的硫糖肽纯度已经超过硫糖肽标准品，本身已经可以作为标准品使用。

Claims (2)

1.一种硫糖肽的纯化工艺，其特征是包括以下步骤：
（1）样品准备：将硫糖肽粗品溶解于1wt%的氯化钠溶液中，硫糖肽浓度为5wt%，用醋酸调节pH值为6.0；
（2）缓冲溶液的配制：分别配制浓度为1wt%、4wt%和10wt%的氯化钠缓冲溶液，分别加入醋酸0.05M，调节pH为6.0；
（3）离子层析柱预处理：离子交换柱中填充琼脂糖凝胶6B，填充体积与被分离样品的体积比为1：2，用10wt%的氯化钠缓冲溶液冲洗离子交换柱，用量为3倍树脂体积，然后用1wt%的氯化钠缓冲溶液平衡离子交换柱，用量为3倍树脂体积；
（4）样品上柱：流速控制2倍树脂体积/h，上完样品后，用1wt%的氯化钠缓冲溶液冲洗，用量为1倍树脂体积；
（5）洗涤：用4wt%的氯化钠缓冲溶液洗涤离子交换柱1小时，流速为2倍树脂体积/h；
（6）洗脱：用10wt%氯化钠缓冲溶液洗脱离子交换柱1小时，流速为2倍树脂体积/h，得洗脱液；
（7）超滤脱盐：将洗脱液用孔径0.45μm滤膜过滤，然后用3万分子量的超滤膜进行超滤脱盐至盐度2%，再浓缩至洗脱液体积的3/4；
（8）沉淀、干燥：用95%以上的乙醇按体积比1:1将浓缩液在搅拌条件下沉淀，所得沉淀脱水干燥，得到纯化的硫糖肽。
2.根据权利要求1所述的纯化工艺，其特征在于琼脂糖凝胶6B载量为110mg/mL，粒径45-165μm。
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汤日玲.硫糖肽的制备及其抗胃溃疡的活性研究.《中国优秀硕士论文全文数据库》.2010,19,46.
硫糖肽的制备及其抗胃溃疡的活性研究;汤日玲;《中国优秀硕士论文全文数据库》;20100930;19页第2.1.2节（2） *

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