CN101602785B - 一种硒化寡糖脱盐、纯化的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物化学领域，具体涉及一种利用活性炭柱对硒化寡糖进行快速脱盐和分离的方法，该方法可用于纯化化学方法制备的硒化寡糖。本发明是以活性炭柱作为脱盐、纯化体系，通过真空泵使层析柱的下方处于负压状态，在压力的作用下洗脱液迅速通过活性炭柱，在不同洗脱剂的作用下，将硒化寡糖中的盐分去掉并将不同分子量的硒化寡糖分离开。本发明所用设备简单，工艺易于操作，成本较低，工作时间较短，脱盐和分离纯化效果较好，回收率达到80％以上，可产业化，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域：
本发明涉及生物化学领域，尤其涉及一种利用活性炭柱对硒化寡糖进行快速脱盐和分离的方法，该方法可用于纯化化学方法制备的硒化寡糖。
技术背景：
目前研究表明人类很多疾病的发生、发展与体内的过氧化状态密切相关，例如糖尿病、肿瘤等，降低体内的过氧化状态是治疗或缓解病症的重要途径之一。谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是人体内重要的抗氧化酶，硒是谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性中心，对其发挥抗氧化作用具有重要作用。因此人体补硒可以提高体内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性，预防和缓解疾病的发生和发展。
目前补硒产品中的无机硒(如亚硒酸钠)具有毒性，安全性差，剂量难以控制；硒蛋白往往存在抗原性的问题；硒多糖虽然没有抗原性和毒性，但是由于分子量较大，难以吸收。硒化寡糖由于没有毒性和抗原性，分子量较小、易于吸收等特点，成为理想的补硒产品。但是硒化寡糖在制备的过程中使用了大量的无机硒作为反应底物，反应产物中存在大量的无机硒，必须将产物中的无机硒除掉，才能保证硒化寡糖的纯度和安全性。目前没有特别有效的技术能够在较短的时间内针对大量的硒化寡糖进行脱盐和纯化，生产受到限制，本发明就是针对化学方法制备硒化寡糖过程中脱盐和纯化的难题，利用廉价的活性炭为原料，建立硒化寡糖快速脱盐和纯化的方法。
发明内容：
本发明的目的是：针对化学法制备硒化寡糖过程中，产物中存在大量无机盐和无机硒，需要脱盐处理，另外硒化寡糖在分子量上存在一定差异等问题，建立以活性炭柱为系统的脱盐和分离方法。
本发明的原理是：经过处理的活性炭对寡糖和多糖具有吸附作用，但是对单糖和无机盐类吸附作用很小，因此可以通过蒸馏水洗脱，一次性将无机盐和单糖除掉；活性炭对寡糖的吸附作用与寡糖的分子量密切相关，分子量越大，吸附能力越强；活性炭的吸附性与洗脱液 有关，洗脱液中有机成分越多，吸附性越差，所以可以通过改变洗脱液中有机溶剂的含量使硒化寡糖逐一分开。
本发明的技术方案是：一种硒化寡糖快速脱盐、纯化的方法，具体步骤如下：
(1)活性炭的处理：以20％的乙酸溶液浸泡活性炭粉末，并煮沸20分钟，冷却后备用；
(2)将上述处理好的活性炭粉末填入层析柱中形成活性炭柱，以70-80℃热蒸馏水洗脱，直至洗脱液为中性；
(3)将活性炭柱冷却至室温；
(4)建立活性炭柱层析系统，该系统由层析柱1、活性炭粉末2、密封瓶塞3、抽虑瓶口4和抽虑瓶5组成，其中活性炭粉末2填入层析柱1中形成活性炭柱，层析柱1穿过密封瓶塞3与抽虑瓶5相通；
(5)将硒化寡糖溶解，缓慢的加入到活性炭柱层析系统中活性炭柱的顶端，此时真空泵不工作，硒化寡糖溶液缓慢渗入活性炭，并与活性炭充分结合；
(6)以常温的蒸馏水为洗脱液，打开真空泵，由于粉末状活性炭在层析柱中堆积较为密集，液体通过活性炭柱的速度较慢，因此真空泵从抽虑瓶口处抽气，使活性炭柱下端形成负压，将硒化寡糖中的无机硒、无机盐和单糖洗脱掉，脱盐和纯化的速度通过控制层析柱下端的负压程度来调节；
(7)分别以5％、15％、30％、40％的乙醇溶液为洗脱液洗涤活性炭柱层析系统，收集不同分子量的硒化寡糖，具体洗脱液的浓度根据硒化寡糖的性质决定，最后的洗脱液中可以加入5％的醋酸，最后的洗脱液可以加热至70℃。
本发明的有益效果是：简单易行，成本较低，不仅可以脱去硒化寡糖中存在的无机硒盐和其它的无机盐类，还可以通过改变洗脱液的成分，快速的将不同分子量的硒化寡糖分离开，寡糖的总得率在80％以上，且脱盐和纯化的速度可以灵活控制，可产业化，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为活性炭柱层析系统示意图。
图中：1、层析柱，2、活性炭粉末，3、密封瓶塞，4、抽虑瓶口，5、抽虑瓶。
具体实施方式
实施例1
硒化卡拉胶寡糖的脱盐与纯化：
以卡拉胶、亚硒酸钠、硫酸为原料合成硒化卡拉胶寡糖，反应产物中含有大量的亚硒酸钠、硫酸钠等无机盐，其中硒盐的含量达到40％，严重影响硒化卡拉寡糖的品质和安全性。按照本发明方法对合成的硒化卡拉胶寡糖进行脱盐与纯化，步骤如下：
(1)活性炭的处理：以20％的乙酸溶液浸泡，并煮沸20分钟，冷却后备用；
(2)将上述处理好的活性炭粉末填入层析柱中形成活性炭柱，以78℃的热蒸馏水洗脱，直至洗脱液为中性；
(3)将活性炭柱冷却至室温；
(4)建立活性炭柱层析系统，该系统由层析柱1、活性炭粉末2、密封瓶塞3、抽虑瓶口4和抽虑瓶5组成，其中活性炭粉末2填入层析柱1中形成活性炭柱，层析柱1瓶口穿过密封瓶塞3与抽虑瓶5相通；
(5)将硒化卡拉胶寡糖溶解，缓慢的加入到活性炭柱层析系统中活性炭柱的顶端，此时真空泵不工作，硒化卡拉胶寡糖溶液缓慢渗入活性炭，并与活性炭充分结合；
(6)以2％的BaCl2作为检测溶液，以蒸馏水为洗脱液进行洗脱，打开真空泵，通过控制层析柱下端的负压程度来控制脱盐和纯化的速度，直到洗脱液与BaCl2溶液不发生沉淀反应为止；
(7)分别以5％、15％、30％、40％的乙醇溶液洗脱，收集硒化卡拉胶寡糖。硒化卡拉胶寡糖经原子吸收法检测硒元素的含量达0.3％，硒化寡糖的的得率在80％。
Claims (2)
1.一种硒化寡糖的纯化方法，其特征在于，该方法步骤如下：
(1)活性炭的处理：以20％的乙酸溶液浸泡活性炭粉末，并煮沸20分钟，冷却后备用；
(2)将上述处理好的活性炭粉末填入层析柱中形成活性炭柱，以70-80℃的热蒸馏水洗脱，直至洗脱液为中性；
(3)将活性炭柱冷却至室温；
(4)建立活性炭柱层析系统，该系统由层析柱、活性炭粉末、密封瓶塞和抽滤瓶组成，其中活性炭粉末填入层析柱中形成活性炭柱，层析柱穿过密封瓶塞与抽滤瓶相通；
(5)将硒化寡糖溶解，缓慢地加入到活性炭柱层析系统中活性炭柱的顶端，此时真空泵不工作，硒化寡糖溶液缓慢渗入活性炭，并与活性炭充分结合；
(6)以常温的蒸馏水为洗脱液，打开真空泵，使活性炭柱下端形成负压，将硒化寡糖中的无机硒、其它的无机盐和单糖洗脱掉，脱盐和纯化的速度通过控制层析柱下端的负压程度来调节；
(7)根据硒化寡糖的性质，用不同浓度的乙醇溶液为洗脱液洗涤活性炭柱层析系统，收集不同分子量的硒化寡糖。
2.根据权利要求1所述的一种硒化寡糖的纯化方法，其特征在于，最后的乙醇洗脱液中加入5％的醋酸，最后洗脱液加热至70℃。
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