CN102319322A - 一种抗辐射药物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种抗辐射的药物，特别是涉及一种以中药为原料药制备的抗辐射药物。治疗及预防生殖系统辐射危害的问题，包括下列质量比例的药物：枸杞子90-150份、菟丝子90-150份、肉苁蓉40-70份、覆盆子40-70份、熟地黄25-40份。本发明药物可以以常规的中药制剂方法制备成任何一种常用口服剂型，如丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。本药物具有补肾、填精、益气的功效，用于抗电离辐射、保护生精细胞效果明显。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗辐射的药物，特别是涉及一种以中药为原料药制备的抗辐射药物。
背景技术
随科学技术的发展和人们生活水平的改善，生活中使用和接触到了越来越多具有能够产生辐射电器设备和其他辐射源，这些辐射源产生了大量的电磁波、微波、放射线等，一定程度上危害着人类健康。在众多的危害结果中，男性生殖细胞对各类有害因素的敏感性较其它组织高，极易受到损伤。现代医学研究证实人体衰老的最主要标志为性衰老和性衰弱。因此，研制用于预防及治疗男性生殖养生、补肾抗电离辐射、增强免疫力的中药具有十分重要的意义。
目前补肾复方制剂品种繁多，现代药理学证明某些补肾中药具有强壮作用，对生殖系统有雄激素样作用，增加生殖器官重量，提高记忆能力。有实验证实中医药补肾法能使γ射线照射受损害的睾丸曲细精管，经治疗后得到明显改善，睾丸组织学研究证实补肾法确实有促进睾丸的生精作用；日本学者应用汉方ツムヲ- 补中益气汤(TJ-41)主要由人参、黄芪、苍术、当归等药味组成，实验证实该方可使抗代射药阿霉素所致曲细精管受损精子数、运动率、精子畸形率得以恢复；临床应用补肾汉方八味地黄丸、牛车肾气丸等均可提高精子运动能力，改善精液质量；《中华放射医学与防护杂质》2008年第三期“枸杞多糖对受照射大鼠生殖系统的保护作用”，揭示了枸杞多糖能够有效减少辐射对生殖系统的损害。国内亦有报道以枸杞子、菟丝子、女贞子等药味组成的八子生精汤临床治疗少精症收到较好效果，精液化验精子数量及活力比治疗前增加50%以上，精子畸形率低于20%具有提高精子计数、活动率、活动力，减少精子畸形作用。但是这些研究尚未形成产品。
近年中医药抗辐射的研究日益增多，具有许多明显的优点。中药预防和治疗电离辐射前景广阔，但目前仍存在相当不足，且大多数补肾法多以温补肾阳为主，治疗上只求速效，专以益火助阳，虽可取效于一时，而长期应用则有耗精灼阴伤身之弊。所以采用中医理论，根据阴阳互根，精气互生之原理，“善补阳者，必于阴中求阳，则阳得阴助而化生无穷；善补阴者，必于阳中求阴，则阴得阳升而泉源不竭”。通过补肾、填精、益气治则，滋肾阴助肾阳、佐以益气以生精，保持肾中精气充盛，在阴阳并补的同时考虑阴阳消长的动态变化，以求阴阳平衡，使机体阴平阳秘，抵御外界不利因素对生殖细胞的损害，廷缓生殖细胞衰老，以调整脏腑生理功能，改善、强壮人体机能，防治早衰及生殖功能减退。因此研究具有免受X线、60Co照射等抗电离辐射有害因素损伤，增强免疫力、保护生精细胞、延缓生殖细胞衰老的中药迫在眉睫。
在已申请的专利数据库中，也公开了若干种能够抗辐射的中药组合，但是这些药物的抗辐射功效主要体现在对抗辐射直接引起的肌体损伤方面，针对生殖系统损伤的抗辐射药物还未见有报道。
发明内容
本发明的目的是为了治疗及预防生殖系统辐射危害的问题，提供一种抗辐射的药物。
本发明技术方案如下，一种抗辐射药物，包括下列质量比例的药物：枸杞子90-150份、菟丝子90-150份 、肉苁蓉40-70份、覆盆子40-70份 、熟地黄25-40份。本发明药物可以以常规的中药制剂方法制备成任何一种常用口服剂型，如丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。
本药物具有补肾、填精、益气的功效，用于抗电离辐射、保护生精细胞效果明显。
本抗辐射药物在上述药物组合的基础上，还包括了人参 10-20份、山药10-20份 、车前子（盐炙）20-30份 、五味子（醋蒸）10-20份 。用于抗电离辐射、保护生精细胞效果显著。
本抗辐射药物在上述药物组合的基础上，还包括了鹿茸1.5-3份、茯苓7-10份、当归 7-10份、麦冬7-10份、黄柏2-3.5份、牛膝7-10份、杜仲7-10份、蛇床子7-10份、远志7-10份、巴戟天7-10份、甘草2-3.5份。用于抗电离辐射、保护生精细胞效果更为显著。
加工方法可以采用中药制剂的常规方法，在制备任何一种剂型前，都需要先制备得到本发明药物的活性组分。活性组分的提取方法可以有煎煮法、回流法，水提醇沉法，蒸馏法，渗漉法等。
本发明所述的药物中，枸杞子、菟丝子，枸杞子偏于补肾阴．菟丝子偏于补肾阳，二药合为君药，意在滋肾阴助肾阳，以补常本不足之阴阳，易于亏损之精气，又由于阴阳一体，互根互用．阴阳并补以生气血精髓；当归补血助熟地养血滋阴，补精益髓，肉苁蓉补肾阳益精血，复盆子益肾固精，鹿茸壮肾阳以阳中求阴，益精血，强筋骨，调冲任，五药合用，共同为臣，加强君药补益肾精功效．配以人参补气以生精；山药、茯苓二药合用健脾以增强运化水谷精微而化生精血之源，补益后天之精，且升清降浊，以防纯补滋腻：车前子利湿解毒，五味子补肾涩精，牛膝、杜仲、巴戟天、蛇床子补肾、壮腰膝、强筋骨，以求标本同治；麦冬、黄柏滋阴降火，佐制温补偏重，调整阴阳平衡。甘草调和诸药并具解百毒之功，诸药合用滋肾阴助肾阳，益气生精，补血填精，阴阳相济，相得益彰，共收补肾、填精、益气之功效。
方案一、取枸杞子1120g、菟丝子1120g、肉苁蓉560g、覆盆子560g、熟地黄336g克；
提取方法：具体制备方法包括以下步骤：
a) 按比例取上述药味加水浸泡4小时，水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，浓缩至相对密度为1.34-1.40(60-65℃)的清膏；
b) 在清膏中加炼蜜适量，混匀，60℃减压干燥，粉碎，粉末制粒、整粒，分装，Co60灭菌，得到本发明药物。
动物实验：对60Co照射小鼠免疫功能的影响
1 主要材料
受试物：由本发明药物组合制成的颗粒剂。
试剂： 完全RPMl1640培养液：F1ow Lab Scoland；刀豆蛋白A（Con A）：Sigma；植物血凝素（PHA）：广州医药工业研究所；3H—TdR：上海原子能研究所。
细胞株YaK-1：山西省肿瘤研究所提供。
仪器：多头细胞样品收集器（DYQ-2型）：绍兴坡圹医疗器械厂；LS5000CE
照射条件：60Co每天照射一次，剂量率1.05GY/min，总剂量3GY。
动物：昆明种雄性清洁级小鼠，体重24±2g，中国辐射防护研究院实验动物室提供。
2 实验方法
取小鼠50只，随机分为正常对照、模型对照、本发明颗粒低（0.5g/kg）、中（1g/kg）、高（2g/kg）剂量共5组，每日灌胃一次，灌胃给药第8天除正常对照组外，其余各组每天均60Co照射一次，灌胃容积20ml/kg，连续21天，正常对照及模型对照给等量蒸馏水。
第22天，从眼球后静脉丛取血0.01ml加入1.5%HAC 0.2ml，光镜下记录白细胞（WBC）计数，剖腹无菌取脾脏称重并换算成重量指数，称重后放入平皿中，经研磨过滤，用完全RPMIl640培养液配成细胞悬液，以备淋巴细胞转化率、IL-2、NK细胞活性测定，摘取胸腺称重。
3 指标监测
3.1 白细胞数、胸腺及脾重的测定
3.2 淋巴细胞转化率、IL-2、NK细胞活性测定
3 结果
3.1 对60Co照射小鼠白细胞数、胸腺及脾重的影响
本发明颗粒低、中、高剂量组对受60Co照射小鼠WBC、胸腺重比模型对照组有升高趋势；但高剂量组脾重比模型对照组显著升高（P<0.05），结果见表1.1。
表1.1 本发明颗粒对60Co照射小鼠白细胞、胸腺、脾重量数的影响（n=10，X±SD）
| 组 别 | 剂量（g/kg） | WBC（×109/L） | 胸腺（mg/10g） | 脾（mg/10g） |
| 正常对照 | - | 10.9±3.2 | 40.6±6.9 | 55.7±6.8 |
| 模型对照 | - | 5.3±2.0*** | 31.9±8.9* | 43.3±8.8** |
| 本发明颗粒低剂量 | 0.5 | 6.0±2.0 | 36.7±7.8 | 46.9±7.0 |
| 本发明颗粒中剂量 | 1.0 | 6.1±1.5 | 37.9±8.0 | 49.4±7.0 |
| 本发明颗粒高剂量 | 2.0 | 6.5±1.6 | 38.9±9.6 | 53.8±9.9* |
与模型对照组比较 * P<0.05、** P<0.01、*** P<0.001
3.2 对60Co照射小鼠淋巴细胞转化率、IL-2、NK细胞活性的影响
本发明颗粒低、中、高剂量均显著升高60Co照射小鼠淋巴细胞转化率（P<0.05 ，P<0.01）；本发明颗粒中、高剂量比模型对照组显著升高60Co照射小鼠IL-2作用（P<0.01）；模型对照组小鼠经60Co照射后NK细胞活性无明显影响，本发明颗粒中、高剂量组比模型对照组显著提高NK细胞活性（P<0.05），结果见表1.2。
表1.2 本发明颗粒对60Co照射小鼠淋巴细胞转化率、IL-2、NK细胞活性的影响（n=10，X±SD）
| 组别 | 剂量（g/kg） | 淋巴细胞转化率cpm | IL-2细胞活性cpm | NK活性（%） |
| 正常对照 | - | 7607±3447 | 626±339 | 10.1±5.4 |
| 模型对照 | - | 2042±1745*** | 309±283* | 13.1±7.6 |
| 本发明颗粒低剂量 | 0.5 | 4155±2525* | 503±301 | 16.1±7.6 |
| 本发明颗粒中剂量 | 1.0 | 5347±2905** | 832±493** | 21.0±6.9* |
| 本发明颗粒高剂量 | 2.0 | 8180±5919** | 860±489** | 21.1±6.5* |
与模型对照组比较 * P<0.05 ** P<0.01
方案二、取枸杞子1120g、菟丝子1120g、肉苁蓉560g、覆盆子560g、熟地黄336g克；人参 140g、山药140g、车前子（盐炙）280g、五味子（醋蒸）140g、
提取方法：具体制备方法包括以下步骤：
a) 人参加水煎浸泡4小时，水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液备用；
b) 上述残渣与其余八味加水浸泡4小时，水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与人参煎煮滤液合并，浓缩至相对密度为1.34-1.40(60-65℃)的清膏；
c) 在清膏中加炼蜜适量，混匀，60℃减压干燥，粉碎，粉末制粒、整粒，分装，Co60灭菌，得到本发明药物。
动物实验：对X照射雄性小鼠实验研究
1 主要材料
受试物：由本发明药物组合制成的颗粒剂。
试剂：睾酮放免试剂盒（美国DPC公司出品，TTT2 0364）。
照射条件：每日1X线照射次，距离40cm，剂量率0.62Gy/分，剂量：3Gy。
动物：昆明种雄性清洁级小鼠，体重(20±2)g，由山西省中医药研究院实验动物室提供，许可证编号为SCXK（晋）2010-0002。
2 实验方法
取小鼠100只，随机分为空白对照、模型对照、本发明颗粒低（0.5g/kg）、中（1g/kg）、高（2g/kg）剂量共5组，每日灌胃一次，灌胃容积20ml/kg，除空白对照组，其余各组于灌胃1周后进行X线照射，每日1次，每组分为两批，分别连续灌胃4周和7周，正常对照及模型对照给等量生理盐水。
分别于照射后3周、6周杀检取附睾刺破尾部管壁置生理盐水中涂片计数1000条精子中活动精子数目为精子活动率；0.5%伊红染色区别死（着色）、活（未着色）精子，计数100条精子中活动精子数目为存活力；瑞氏染色制精子标本，进行判定计数100精子中畸形精子（头部畸形、体部畸形、尾部畸形、头和体混合畸形）数；对照射后6周小鼠眼眶取血，分离血清按放免药盒说明在FT-646放免测量仪进行γ放射活性计数测定血清睾丸酮含量。
3 指标监测
3.1 睾丸生精功能精子活动率、存活率、畸形率的测试
3.2 血清睾丸酮含量测定
3 结果
3.1 对小鼠睾丸生精功能精子活动率、存活率、畸形率的影响
本发明颗粒高剂量组对X线照射3周后精子活动率较模型对照组显著增加（P<0.01），照射6周后中剂量组活动率显著增加（P<0.01）。
本发明颗粒中、高剂量组对X线照射3周后精子存活率较模型对照组显著增加（P<0.05），照射6周后中、高剂量组存活率显著增加（P<0.01，P<0.05）。
本发明颗粒低、中、高剂量组对X线照射3周后精子畸形率较模型对照组显著减少（P<0.05，P<0.01， P<0.01），照射6周后中、高剂量组畸形率显著减少（P<0.05），结果见表2.1。
表2.1 本发明颗粒对X线照射小鼠精子活动率、存活率、畸形率的影响(n=10,X±SD)(%)
注：与模型对照组比：* P<0.05 ** P<0.01 *** P<0.001
3.2 对睾丸分泌雄激素血清睾丸酮含量的影响
模型对照组血睾酮显著低于空白对照组（P<0.05）；本发明颗粒高剂量组小鼠血睾酮明显高于模型对照组（P<0.05），结果见表2.2。
表2.2 本发明颗粒对X线照射小鼠分泌雄激素的影响（n=10，X±SD）
| 组别 | 剂量(g/kg) | 血清睾丸酮（nmol/L） |
| 空白对照 | 18.9±21.5* | |
| 模 型 对 照 | 3.8±1.3 | |
| 本发明颗粒低剂量 | 0.5 | 7.9±10.1 |
| 本发明颗粒中剂量 | 1.0 | 10.8±14.3 |
| 本发明颗粒高剂量 | 2.0 | 20.9±23.9* |
注：与模型对照组比：* P<0.05
方案三、取枸杞子1120g、菟丝子1120g、肉苁蓉560g、覆盆子560g、熟地黄336g克；人参 140g、山药140g、车前子（盐炙）280g、五味子（醋蒸）140g。
鹿茸21g、茯苓84g、当归 84g、麦冬84g、黄柏28g、牛膝84g、杜仲84g、蛇床子84g、远志84g、巴戟天84g、甘草28g。
具体制备方法包括以下步骤：
a) 鹿茸、人参加水煎浸泡4小时，水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液备用；
b) 上述残渣与其余十八味加水浸泡4小时，水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与鹿茸、人参煎煮滤液合并，浓缩至相对密度为1.34-1.40(60-65℃)的清膏；
c) 在清膏中加炼蜜适量，混匀，60℃减压干燥，粉碎，粉末制粒、整粒，分装，Co60灭菌，得到本发明药物，以下该药物命名为康乃精颗粒。
一、对X照射雄性小鼠实验研究
1材料
1.1 药物
康乃精颗粒（1.5g/袋） 山西省中医药研究院实验动物室提供，批号940531，临用时温开水配成2.5%、5%、10%混悬液；睾酮放免试剂盒（美国DPC公司出品，TTT2 0364）。
1.2动物
小鼠：昆明种，清洁级，雄性，体重(20±2)g，由山西省中医药研究院实验动物室提供，许可证编号为SCXK（晋）2010-0002。
2 方法
2.1 分组与给药
取小鼠100只，随机分为空白对照、模型对照、康乃精颗粒低（0.5g/kg）、中（1g/kg）、高（2g/kg）剂量共5组，每日灌胃一次，灌胃容积20ml/kg，于照射前1周及照射后连续灌胃至杀检，每组分为两批，分别连续灌胃4周和7周，正常对照及模型对照给等量生理盐水。
2.2 X线照射模型制备
除空白对照组，其余各组于灌胃1周后进行X线照射，每日1次，距离40cm，剂量率0.62Gy/分，剂量：3Gy制造辐射模型。
2.3 指标监测
2.3.1 一般状况观察
照射后定期观察小鼠全身状况：神色、皮毛、色泽。
2.3.2 自主活动测试（旷野法）
于照射3周后称体重，进行旷野实验法测自主活动，方法简述如下：旷野箱为100×100×40cm无盖箱，底部划分为36个等格，在箱上方约100cm处挂100W灯泡2个，亮灯时进行实验。记录小鼠放入箱后2分钟的内活动的格数。一只小鼠四肢走到一格内算走动一格。
2.3.3 睾丸生精功能的测试
（1）精子活动率：两批小鼠分别于照射后3周、6周杀检取一侧附睾刺破尾部管壁置生理盐水中涂片计数1000条精子中活动精子数目为精子活动率；
（2）精子存活率：0.5%伊红染色区别死（着色）、活（未着色）精子，计数100条精子中活动精子数目为存活率。
（3）精子畸形率：瑞氏染色制精子标本，参照标准，对3周、6周照射后小鼠进行判定计数100条精子中畸形精子（头部畸形、体部畸形、尾部畸形、头和体混合畸形）数。
2.3.4 血清睾丸酮含量测定
眼眶取血，分离血清按放免药盒说明在FT-646放免测量仪进行γ放射活性计数测定血清睾丸酮含量。
2.3.5 病理组织结构学检查
（1）电镜观察：另一侧附睾4%戊二醛和1%锇酸固定，递度乙醇脱水，环氧树脂618包埋，超薄切片，双染色，JEM-100CXⅡ透射电镜观察。
（2）光镜观察：取睾丸、前列腺-贮精囊称重，取睾丸常规制片进行组织学检查，并经MISA型图象分析曲细精管直径曲细精管最小管径进行线段长度测量。
3 结果
3.1 对X-照射小鼠一般状况、自主活动的影响
模型小鼠1周后出现神色呆板，欠活跃、毛色无光泽、毛发明显脱落而稀疏，且逐渐加重；各给药组小鼠神色、毛色、毛发密度均有明显改善，且优于正常对照组小鼠，各组体重无明显差异。
自主活动受X照射模型组有减少趋势，给药组均较模型组有增多趋势，并与正常组无差异，结果见表3.1。
表3.1 康乃精颗粒对X线照射小鼠体重、旷野活动的影响（n=10，X±SD）
| 组 别 | 体重（g） | 平均活动格数 |
| 空白对照 | 37.7±7.16 | 20.1±7.5 |
| 模 型 对 照 | 38.5±6.5 | 14.5±6.5 |
| 康乃精颗粒低剂量 | 40.5±3.67 | 18.1±6.9 |
| 康乃精颗粒中剂量 | 38.7±1.53 | 21.9±7.2 |
| 康乃精颗粒高剂量 | 38.9±1.95 | 23.5±6.5 |
3.2 康乃精颗粒对X线照射小鼠生殖系统的影响
3.2.1 对小鼠生殖器官重量的影响
模型对照组X线照射后，睾丸3周和6周的湿重和指数均显著低于空白对照组，显著低于空白对照组，而3周湿重、6周湿重和指数比空白对照有减少趋势；康乃精颗粒低剂量对照射小鼠前列腺-贮精囊3周湿重显著高于模型组，高剂量对照射小鼠睾丸3周湿重和前列腺-贮精囊3周湿重、指数显著高于模型组，结果见表3.2。
表3.2康乃精颗粒对X线照射小鼠生殖器官重量的影响（n=10，X±SD）
注：1. n=10，与模型对照组比： * P<0.05 ** P<0.01 *** P<0.001
2. 3周、6周为X线照射后3周、6周，以下同
3.2.2 对小鼠睾丸生精功能（精子活动率、存活率、畸形率）的影响
康乃精颗粒中、高剂量组对X线照射3周后精子活动率较模型对照组显著增加（P<0.05 ，P<0.01），但受照6周后活动率未见显著性差异。
康乃精颗粒中、高剂量组对X线照射3周后精子存活率较模型对照组显著增加（P<0.05 ，P<0.01），照射6周后高剂量组存活率显著增加（P<0.01）。
康乃精颗粒低、中、高剂量组对X线照射3周后精子畸形率较模型对照组显著减少（P<0.01），但照射6周后畸形率无显著性差异，见表3.3。
表3.3 康乃精颗粒对X线照射小鼠精子活动率、存活率、畸形率的影响(n=10,X±SD)(%)
注：与模型对照组比：* P<0.05 ** P<0.01 *** P<0.001
3.2.3 对睾丸分泌雄激素的影响
模型对照组血睾酮低于正常对照组，但无显著性差异；康乃精颗粒中剂量组小鼠血睾酮明显高于模型对照组（P<0.05），结果见表3.4。
表3.4 康乃精颗粒对X线照射小鼠分泌雄激素的影响（n=16，X±SD）
| 组别 | 剂量(g/kg) | 血清睾丸酮（nmol/L） |
| 空白对照 | 16.4±23.7 | |
| 模 型 对 照 | 2.7±1.3 | |
| 康乃精颗粒低剂量 | 0.5 | 6.6±12.9 |
| 康乃精颗粒中剂量 | 1.0 | 29.6±35.9* |
| 康乃精颗粒高剂量 | 2.0 | 11.7±15.5 |
注：与模型对照组比：* P<0.05
3.2.4 对X线照射小鼠睾丸生殖细胞病理组织结构的影响
（1） 精子超微结构（电镜）
空白对照组：精子头部由核和顶体构成，核染色质电子密高，核前方有帽状顶体，尾部中段中心为轴丝，是一对位于中心和9对位于周围的微管组成，轴丝外间有致密纤维和螺旋排列的线粒体鞘。尾段只有轴丝（图1）；
X线照射模型组：精子头部形状不规则，有圆形，长条形或不定形，有的精子头部膨大或皱缩，顶体扩张，核染色质丢失，核结构疏松、电子密度降低，并拌有中央透亮区，核膜间隙扩大（图2），中段线粒体也出现较明显的损伤；螺旋排列的线粒鞘破坏，线粒体排列紊乱不规则，有的线粒体变性形成致密块状结构，嵴不清楚，甚至出现线粒体鞘的崩解（图3）；
康乃精颗粒给药组：中剂量组精子头部形状较规则，核染色质电子密度较受照组高，但仍可见头部核大小不同染色质分布不均，并有核膜间隙的轻度扩张，有的帽状顶体呈锯齿状结构（图4），中段线粒体鞘损伤程度减轻，但仍出现中段线粒体排列疏密不一，有的线粒鞘呈锯齿状或哑铃形缩窄（图5，6）；高剂量组精子头、尾部结构恢复比较正常，头部形状大小较规则，核染色质电子密度高，核周围间隙未见扩张，除仍观察到有些核染色质分布不均（图7，8），精子尾部中段线粒体排列不甚规则外，其余结构基本恢复正常。
（2）对睾丸组织学结构、曲细精管直径的影响（光镜）
①对睾丸组织学结构的影响
空白对照组：曲细精管大小、形状，管腔口径大致相似，管壁厚，由4-6层不同发育阶段的生精细胞组戎，各层细胞排列整齐、规则有序，结构清晰。自小管基膜至腔面依次为精原细胞层、初级精母细胞层、次级精母细胞层、精子细胞层，各层细胞形态结构正常，最内层成熟精子数量多，腔内充满红染细丝，呈疏松网状结构；
X线照射模型组：部分曲细精管体积缩小，管腔变小，管壁显著变薄，仅由1-3层生精细胞组成，精子细胞和成熟精子很少或缺如，管腔空而无物或仅见少量红染细丝散在，有些曲细精管之生精细胞失去正常规则有序的分层结构，仅见稀疏散在的生精细胞与均质性或丝状红染物质混杂在一起，形成大片充满管腔，细胞界不清，细胞间不见精子细胞和成熟精子，有些曲细精管管壁由4-6层生精细胞组成，排列整齐有序，但无成熟精子形成；
康乃精颗粒给药组：中剂量组部分曲细精管显示与正常对照组相似的形态结构，部分曲细精管，管壁由4-6层排列有序的生精细胞组成，但成熟精子很少或缺如，有些曲细精管仍显示与受照组相似的改变；高剂量组大部分曲细精管显示与正常对照组相似的形态结构，部分曲细精管管壁由4-6层排列规则有序的生精细胞组成，但成熟精子很少或缺如。
②对睾丸曲细精管直径的影响
康乃精颗粒低、高剂量组曲细精管内径显著长于模型对照组（P<0.01），低、中、高剂量组曲细精管外径、外径-内径值显著长于模型对照组（P<0.01，P<0.001），
由此表明康乃精颗粒低、中、高剂量均明显增加X线照射小鼠曲细精管管壁厚度，见表3.5。
表3.5 康乃精颗粒对X线照射小鼠曲细精管直径的作用（X±SD）（μm）
| 组别 | 曲细精管数 | 内径 | 外径 | 外径-内径 |
| 空白对照 | 253 | 73.8±16.4** | 156.3±18.4*** | 82.5±17.4*** |
| 模 型 对 照 | 418 | 69.2±17.6 | 121.4±22.9 | 52.2±20.3 |
| 康乃精颗粒低剂量 | 304 | 80.9±16.4** | 143.9±20.4*** | 63.0±18.4** |
| 康乃精颗粒中剂量 | 229 | 69.3±17.0 | 145.0±21.1*** | 75.7±19.1*** |
| 康乃精颗粒高剂量 | 231 | 70.0±14.3** | 148.8±15.4*** | 78.1±14.9*** |
注：与模型对照组比：** P<0.01 *** P<0.001
二、对60Co照射小鼠免疫功能的影响
1 材料
1.1药品 康乃精颗粒 （山西省中医药研究院提供，批号：94053l，1.5 g/袋）。临用时温开水配成2.5%、5%、10%混悬液。
1.2试剂 完全RPMl1640培养液：F1ow Lab Scoland；刀豆蛋白A（Con A）：Sigma；植物血凝素（PHA）：广州医药工业研究所；3H—TdR：上海原子能研究所。
1.3细胞株YaK-1：山西省肿瘤研究所提供。
1.4仪器 扭力天平：上海分析仪器厂；多头细胞样品收集器（DYQ-2型）：绍兴坡圹医疗器械厂；LS5000CE液闪仪：美国Beckman。蔡氏显徽镜：德国；扭力天平：上海分析仪器。
1.5动物
小鼠：昆明种，清洁级，雄性，体重24±2g，由中国辐射防护研究院实验动物室提供。
2 方法
2.1 分组与给药
取小鼠50只，随机分为正常对照、模型对照、康乃精颗粒低（0.5g/kg）、中（1g/kg）、高（2g/kg）剂量共5组，每日灌胃一次，灌胃容积20ml/kg，连续21天，正常对照及模型对照给等量蒸馏水。
2.2 60Co照射模型制备
灌胃给药第8天除正常对照组外，其余各组每天均60Co照射一次，剂量率1.05GY/min，总剂量3GY。
2.3 指标监测
2.3.1 一般状况观察
照射后定期观察小鼠全身状况：神色、皮毛、色泽。
2.3.2 白细胞数、胸腺及脾重的测定
第22天，从眼球后静脉丛取血0.01ml加入1.5%HAC 0.2ml，光镜下记录白细胞（WBC）计数，剖腹摘取胸腺、无菌取脾脏用扭力天平称重并换算成重量指数。
2.3.2 淋巴细胞转化率、IL-2、NK细胞活性测定
第22天，摘眼球取血，无菌取脾脏，称重后放入平皿中，经研磨过滤，用完全RPMIl640培养液配成细胞悬液，以备淋巴细胞转化率、IL-2、NK细胞活性测定。
（1）淋巴细胞转化率测定：取1×105/0.1ml脾细胞培养液分别加conA（5μg/mL）0.1ml于96孔培养板，于CO2孵箱培养72小时，于收获前12小时加3H-TdR 0.2μci/孔，收集细胞，测cpm，
（2）lL-2测定
IL-2上清液诱导：将1×107/ml脾细胞悬液加conA 5μg/m1分装于25ml培养瓶，置含5%CO2、湿度饱和的培养箱，37℃温育48小时。离心收获上清液，小瓶分装-20℃保存。
ConA活化的小鼠脾淋巴细胞的制备：制成5×106/ml脾淋巴细胞悬液，加ConA 10μg/ml，置25m1培养瓶中温育96h，细胞用l0mg/ml甲基甘露糖甙α-mm的Hank′s液洗二次，及含10%人AB混合血清RPMll640洗一次。调节细胞浓度为1×106/ml作为测定IL-2的反应细胞。
IL-2活性测定：在96孔微量平底细胞培养板中，每孔加反应细胞1×105/ml和等量1/8稀释的IL-2上清液（-20℃保存的），对照孔加0. lml培养液，均1孔3份，每孔加100mg/ml的α-mm20μl，置含5%CO237℃温育48h。终于培养前16小时加3H-TdR 0.5μci/孔。用多头细胞样品收集器收获于纤维纸上，Beckman液体闪烁计计数器测cpm，
（3）NK细胞活性测定：以3H-TdR 标记，YaK-1作为靶细胞，脾细胞为
效应细胞。效靶比值E/T=20：1，共培养16小时，收集细胞，测cpm。
按下式计算NK活性，
。
3 结果
3.1 一般状况影响
60Co照射照射后一周，模型对照组小鼠出现毛色灰暗，康乃精颗粒组毛色有光泽接近于正常对照组，
3.2 对60Co照射小鼠白细胞数、胸腺及脾重的影响
康乃精颗粒低、中、高剂量组对受60Co照射小鼠WBC有升高趋势。结果见表3.6。康乃精颗粒低、中、高剂量组对受60Co照射小鼠胸腺重比模型对照组有升高趋势，但中剂量组比模型对照组显著升高脾重（P<0.05），结果见表3.7。
表3.6康乃精颗粒对60Co照射小鼠白细胞数的影响（n=10，X±SD）
| 组 别 | 剂量（g/kg） | WBC（×109/L） |
| 正常对照 | - | 9.3±2.2 |
| 模型对照 | - | 3.3±1.5*** |
| 康乃精颗粒低剂量 | 0.5 | 4.0±1.3 |
| 康乃精颗粒中剂量 | 1.0 | 4.3±1.3 |
| 康乃精颗粒高剂量 | 2.0 | 4.2±1.5 |
与模型对照组比较 *** P<0.001
表3.7康乃精颗粒对60Co照射小鼠胸腺、脾重量的影响（n=10，X±SD）
| 组 别 | 剂量（g/kg） | 胸腺（mg/10g） | 脾（mg/10g） |
| 正常对照 | - | 45.3±6.4 | 59.4±7.0 |
| 模型对照 | - | 35.2±9.3* | 47.2±8.9** |
| 康乃精颗粒低剂量 | 0.5 | 40.3±8.5 | 50.2±7.9 |
| 康乃精颗粒中剂量 | 1.0 | 42.1±9.9 | 55.6±8.7* |
| 康乃精颗粒高剂量 | 2.0 | 40.3±8.2 | 53.9±7.3 |
与模型对照组比较 * P<0.05 ** P<0.01
3.3 对60Co照射小鼠淋巴细胞转化率、IL-2、NK细胞活性的影响
3.3.1 淋巴细胞转化率的影响
康乃精颗粒低、中、高剂量均显著升高60Co照射小鼠淋巴细胞转化率（P<0.05 ，P<0.01），结果见表3.8。
表3.8康乃精颗粒对60Co照射小鼠淋巴细胞转化率的影响（n=10，X±SD）
| 组别 | 剂量（g/kg） | cpm |
| 正常对照 | - | 7575±3444 |
| 模型对照 | - | 1999±1761** |
| 康乃精颗粒低剂量 | 0.5 | 4085±2536* |
| 康乃精颗粒中剂量 | 2.0 | 4752±2464* |
| 康乃精颗粒高剂量 | 1.0 | 8480±6079** |
与模型对照组比较 * P<0.05 ** P<0.01
3.3.2 lL-2的影响
康乃精颗粒中、高剂量均显著升高60Co照射小鼠IL-2作用（P<0.01， P<0.05），结果见表3.9。.
表3.9 康乃精颗粒对60Co照射小鼠IL-2的影响（n=10，X±SD）
| 组别 | 剂量（g/kg） | cpm |
| 正常对照 | - | 582±317 |
| 模型对照 | - | 283±296* |
| 康乃精颗粒低剂量 | 0.5 | 664±495 |
| 康乃精颗粒中剂量 | 1.0 | 962±576** |
| 康乃精颗粒高剂量 | 2.0 | 825±530* |
与模型对照组比较 * P<0.05 ** P<0.01
3.3.3 NK细胞活性的影响
模型对照组小鼠经60Co照射后NK细胞活性无明显影响，这与文献报道一致。康乃精颗粒中、高剂量组均显著提高NK细胞活性（P<0.05，P<0.01），结果见表3.10。
表3.10对60Co照射小鼠NK细胞活性的影响（n=10，X±SD）
| 组别 | 剂量（g/kg） | NK活性（%） |
| 正常对照 | - | 8.7±5.6 |
| 模型对照 | - | 11.5±7.8 |
| 康乃精颗粒低剂量 | 0.5 | 15.9±7.8 |
| 康乃精颗粒中剂量 | 1.0 | 19.1±7.3* |
| 康乃精颗粒高剂量 | 2.0 | 20.4±5.7** |
与正常对照组比较 * P<0.05 ** P<0.01
本发明所述的药物中、高剂量明显改善受X线照射雄小鼠全身状况，提高模型组小鼠生殖器官重量，改善模型组小鼠生殖细胞结构及生精、雄激素分泌功能，表明可提高小鼠生精细胞对X-线电离辐射的抵抗力。可免受X线、60Co照射等抗电离辐射有害因素损伤，
本发明所述的药物中、高剂量对60Co照射小鼠淋巴细胞转化率、IL-2、NK细胞活性有明显升高作用；对60Co照射所致小鼠WBC数、胸腺重减低有升高趋势，中剂量对脾重减低有明显升高作用，表明本发明对60Co照射小鼠免疫功能有增强作用。保护生精细胞、延缓生殖细胞衰老，服用方便，是预防及抗辐射、增强免疫力的有效药物，具有开发、推广价值。
附图说明
图1 为正常小鼠精子超微结构电镜图
图2、3为受X-线照射小鼠精子超微结构电镜图
图4 为给予低剂量康乃精受照小鼠精子头部超微结构电镜图
图 5、6为给予低剂量康乃精受照小鼠精子线粒体结构电镜图
图7、8 为 给予高剂量康乃精受照小鼠精子超微结构电镜图。
具体实施方式
实施例1、一种抗辐射药物，包括下列质量比例的药物：枸杞子1500克、菟丝子900克 、肉苁蓉700克、覆盆子400克、熟地黄400克。可以以常规的中药制剂方法制备成丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。
实施例2、一种抗辐射药物，包括下列质量比例的药物：枸杞子900克、菟丝子1500克、肉苁蓉400克、覆盆子700克、熟地黄250克。可以以常规的中药制剂方法制备成丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。
上述两实施例经过动物实验，其效果与方案一动物实验部分效果一致。
实施例3、一种抗辐射药物，包括下列质量比例的药物：枸杞子1500克、菟丝子900克 、肉苁蓉700克、覆盆子400克、熟地黄400克、人参 100克、山药200克、车前子（盐炙）200克、五味子（醋蒸）200克。可以以常规的中药制剂方法制备成丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。
实施例4、一种抗辐射药物，包括下列质量比例的药物：枸杞子900克、菟丝子1500克、肉苁蓉400克、覆盆子700克、熟地黄250克、人参 200克、山药100克、车前子（盐炙）300克、五味子（醋蒸）100克。可以以常规的中药制剂方法制备成丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。
上述两实施例经过动物实验，其效果与方案二动物实验部分效果一致。
实施例5、一种抗辐射药物，包括下列质量比例的药物：枸杞子1500克、菟丝子900克 、肉苁蓉700克、覆盆子400克、熟地黄400克、人参 100克、山药200克、车前子（盐炙）200克、五味子（醋蒸）200克、鹿茸15克、茯苓100克、当归 70克、麦冬100克、黄柏20克、牛膝100克、杜仲70克、蛇床子100克、远志70克、巴戟天100克、甘草20克。可以以常规的中药制剂方法制备成丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。
实施例6、一种抗辐射药物，包括下列质量比例的药物：枸杞子900克、菟丝子1500克、肉苁蓉400克、覆盆子700克、熟地黄250克、人参 200克、山药100克、车前子（盐炙）300克、五味子（醋蒸）100克、鹿茸30克、茯苓70克、当归 100克、麦冬70克、黄柏35克、牛膝70克、杜仲100克、蛇床子70克、远志100克、巴戟天70克、甘草35克。可以以常规的中药制剂方法制备成丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。
上述两实施例经过动物实验，其效果与方案三动物实验部分效果一致。
Claims (6)
1.一种抗辐射药物，其特征在于：包括下列质量比例的药物：枸杞子90-150份、菟丝子90-150份 、肉苁蓉40-70份、覆盆子40-70份 、熟地黄25-40份。
2.根据权利要求1所述的抗辐射药物，其特征在于：还包括人参 10-20份、山药10-20份 、车前子20-30份 、五味子10-20份 。
3.根据权利要求1或2所述的抗辐射药物，其特征在于：还包括鹿茸1.5-3份、茯苓7-10份、当归 7-10份、麦冬7-10份、黄柏2-3.5份、牛膝7-10份、杜仲7-10份、蛇床子7-10份、远志7-10份、巴戟天7-10份、甘草2-3.5份。
4.根据权利要求1所述的种抗辐射药物，其特征在于：包括下列质量比例的药物：枸杞子112 份、菟丝子112份、肉苁蓉56份、覆盆子56份、熟地黄33.6份。
5.根据权利要求2所述的种抗辐射药物，其特征在于：还包括下列质量比例的药物：人参 14份、山药14份、车前子28份、五味子14份。
6.根据权利要求3所述的种抗辐射药物，其特征在于：还包括鹿茸2.1份、茯苓8.4份、当归 8.4份、麦冬8.4份、黄柏2.8份、牛膝8.4份、杜仲8.4份、蛇床子8.4份、远志8.4份、巴戟天8.4份、甘草2.8份。
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