CN102297801A - 分析用试样制备用稀释液 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种分析用试样制备用稀释液,所述稀释液可以制备分析用试样,并且能够以较高的精度进行测定,所述分析用试样能够通用于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法、以及通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法。使用于制备分析用试样的稀释液的离子强度为0.06~0.16。特别是,对于制备可通用于通过酶电极法测定血液试样中的葡萄糖浓度的方法以及通过液相色谱法测定前述血液试样中的糖化血红蛋白浓度的方法的测定用试样而言是有用的。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于制备分析用试样的稀释液,所述分析用试样可通用于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法、通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法。
背景技术
在生物体试样等被检试样的物质分析方法中,有电极法、液相色谱法等各种方法,它们被广泛活用于研究、医疗的现场。
通过电极法分析物质的方法适用于例如糖尿病的筛查、治疗中通常实施的基于酶电极法的血液中的葡萄糖浓度的测定(专利文献1、2)。在此方法中,使葡萄糖氧化酶(GOD)或葡萄糖脱氢酶(GDH)等与血液试样中的葡萄糖反应,对随此产生的通过酶反应产物(过氧化氢等)或铁氰化钾等中间体(Mediator)的氧化还原反应所生成的电流进行测定,通过平衡点法(终点法)、微分法(速率法,rate method)等的运算,从而求出血液试样中的葡萄糖浓度。
通过液相色谱法分析物质的方法适用于例如糖尿病的筛查、治疗中通常实施的基于液相色谱法的血液中的糖化血红蛋白浓度的测定(专利文献3、4)。在此方法中,利用所带电荷的不同在分析柱中分离成HbA1c、HbF等成分,基于表示各组分的洗脱时间与洗脱量(例如吸光度等光学信息)的关系的色谱图,从而求出血液试样中的糖化血红蛋白浓度。
以往,上述那样的使用电极法的分析以及使用液相色谱法的分析是分别进行的。例如,用酶电极法测定葡萄糖浓度的血液分析装置与用液相色谱法测定糖化血红蛋白浓度的血液分析装置作为各自独立的装置而存在。
本发明人等进行了一种血液分析装置的开发,所述血液分析装置可求得更高的有用性,可共通地使用所制备的测定用试样测定葡萄糖浓度以及糖化血红蛋白浓度这两者(专利文献5)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开平9-33533号公报
专利文献2:日本特开2005-148058号公报
专利文献3:日本特开5-5730号公报
专利文献4:日本特开平9-178719号公报
专利文献5:国际公开第2008/035748号小册子
发明内容
发明要解决的课题
在被检试样的电极法分析以及液相色谱法分析两者中,共同使用一种分析用试样的情况下,由于制备试样的稀释液相同,因而有时会在分析精度上引发问题。
例如,在用共同的测定用试样来进行前述的基于酶电极法的葡萄糖浓度的测定以及基于液相色谱法的糖化血红蛋白浓度的测定的血液分析装置中,会产生如下的问题。首先,在此处使用的GOD电极法中,可利用下述机理:由GOD固定化膜分解葡萄糖,作为酶反应产物的过氧化氢到达过氧化氢电极,通过施加外部电压从而引起氧化还原反应,从而在阴极和阳极之间有电流流动;但是由于此时稀释液成为支持电解液,因此如果其离子强度高,那么检测性能变良好。
另一方面,在此处使用的液相色谱法中,所带电荷因糖化血红蛋白的种类不同而不同,利用这一现象而分离为HbA1c、HbF等成分,因此如果稀释液的离子强度高则分离能力降低。
因此,关于针对于被检试样中的第一对象物的电极法分析、以及针对于前述被检试样中的第二对象物的液相色谱法分析,既要使得用于制备供于这两个分析体系的分析用试样的稀释液相同,又要同时提高两个对象物的分析精度,两者难以兼顾。
鉴于这样的状况,本发明的课题在于提供一种稀释液,其可制备通用于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法、以及通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法的分析用试样,并且可以以较高的精度进行测定。
用于解决问题的方案
为了解决上述课题,本发明人等进行了深入研究。其结果,发现如下情况,从而完成本发明:离子强度为0.06~0.16的范围的稀释液适于作为被检试样中的第一对象物的电极法分析、以及前述被检试样中的第二对象物的液相色谱法分析这两种分析体系的共同稀释液。
即,本发明如下。
(1)一种稀释液,其特征在于,其为用于制备分析用试样的稀释液,离子强度为0.06~0.16,所述分析用试样可通用于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法、以及通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法。
(2)根据(1)所述的稀释液,其特征在于,通过电极法分析前述被检试样中的第一对象物的方法为使用与前述被检试样中的第一对象物反应的酶的方法。
(3)根据(1)或(2)所述的稀释液,其中,通过电极法分析前述被检试样中的第一对象物的方法为通过酶电极法测定前述被检试样中的葡萄糖浓度的方法,
通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法为通过液相色谱法测定前述被检试样中的糖化血红蛋白浓度的方法。
(4)根据(1)~(3)所述的稀释液,其特征在于,前述被检试样为血液。
(5)根据(1)~(4)中的任一项所述的稀释液,其特征在于,稀释液中所含的离子为选自钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯化物离子、磷酸根离子以及碳酸氢根离子中的1种或2种以上。
(6)根据(4)或(5)所述的稀释液,其进一步含有溶血剂。
(7)根据(6)所述的稀释液,其中,前述溶血剂为选自皂苷、聚氧乙烯烷基芳基醚、高级脂肪族醇、烷基芳基聚醚醇、磺酸酯化合物或硫酸酯化合物的聚氧化乙烯二醇或聚氧乙烯醚、山梨醇脂肪酸酯的聚氧乙烯加成物、以及氯化铵中的1种或2种以上。
(8)一种试剂盒,其特征在于,其包含稀释液和溶血剂,其为用于制备分析用试样的试剂盒,所述分析用试样可通用于通过电极法分析血液试样中的第一对象物的方法以及通过液相色谱法测定前述血液试样中的第二对象物的方法,混合前述稀释液与前述溶血剂时的离子强度为0.06~0.16。
(9)根据(8)所述的试剂盒,其中,前述溶血剂为选自皂苷、聚氧乙烯烷基芳基醚、高级脂肪族醇、烷基芳基聚醚醇、磺酸酯化合物或硫酸酯化合物的聚氧化乙烯二醇或聚氧乙烯醚、山梨醇脂肪酸酯的聚氧乙烯加成物、以及氯化铵中的1种或2种以上。
(10)一种分析方法,其特征在于,其为包含如下工序的分析方法:
将用于制备分析用试样的稀释液与被检试样混合而制备分析用试样的工序;
对于前述分析用试样,通过电极法来分析第一对象物的第一分析工序;
对于前述分析用试样,通过液相色谱法来分析第二对象物的第二分析工序;
前述稀释液为(1)~(7)中的任一项所述的稀释液。
(11)根据(10)所述的分析方法,
前述第一分析工序为通过酶电极法测定前述分析用试样中的葡萄糖浓度的工序,
前述第二分析工序为通过液相色谱法测定前述分析用试样中的糖化血红蛋白浓度的工序。
(12)一种分析装置,其特征在于,其为具备如下机构的分析装置:
容纳用于制备分析用试样的稀释液的稀释液瓶;
将从前述稀释液瓶供给的前述稀释液与被检试样混合而制备分析用试样的分析用试样制备机构;
对于由前述分析用试样制备机构制备的分析用试样,通过电极法来分析第一对象物的第一对象物分析机构;
对于由前述分析用试样制备机构制备的分析用试样,通过液相色谱法来分析第二对象物的第二对象物分析机构;
前述稀释液为(1)~(7)中的任一项所述的稀释液。
(13)根据(12)所述的分析装置,其中,
前述第一对象物分析机构用酶电极法测定前述分析用试样中的葡萄糖浓度,
前述第二对象物分析机构通过液相色谱法测定前述分析用试样中的糖化血红蛋白浓度。
(14)离子强度为0.06~0.16的稀释液在制备分析用试样中的用途,其中,所述分析用试样通用于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法、以及通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法。
(15)根据(14)所述的用途,其特征在于,前述通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法为使用与前述被检试样中的第一对象物反应的酶的方法。
(16)根据(14)或(15)所述的用途,其中,前述通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法为通过酶电极法测定前述被检试样中的葡萄糖浓度的方法,
通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法为通过液相色谱法测定前述被检试样中的糖化血红蛋白浓度的方法。
(17)根据(14)~(16)所述的用途,其特征在于,前述被检试样为血液。
(18)根据(14)~(17)中的任一项所述的用途,其特征在于,稀释液中所含的离子为选自钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯化物离子、磷酸根离子以及碳酸氢根离子中的1种或2种以上。
(19)根据(17)或(18)所述的用途,其中,稀释液进一步含有溶血剂。
(20)根据(19)所述的用途,其中,前述溶血剂为选自皂苷、聚氧乙烯烷基芳基醚、高级脂肪族醇、烷基芳基聚醚醇、磺酸酯化合物或硫酸酯化合物的聚氧化乙烯二醇或聚氧乙烯醚、山梨醇脂肪酸酯的聚氧乙烯加成物、以及氯化铵中的1种或2种以上。
发明的效果
本发明提供一种稀释液,其可制备通用于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法、以及通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法的分析用试样并且可以以较高的精度进行测定。
附图说明
图1所示为本发明的分析方法的流程图。
图2所示为稀释液的离子强度对葡萄糖浓度以及血红蛋白A1c测定性能的影响的图表。
具体实施方式
本发明的稀释液用于制备分析用试样,所述分析用试样可通用于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法、以及通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法。
前述电极法只要是能够利用电极来分析物质的方法,那么可以为任意方法,例如使用酶的酶电极法,但是不限定于此。在前述酶电极法中,作为固定化于电极的酶,可例示出以下的酶。第一对象物为葡萄糖的情况下,可列举出葡萄糖氧化酶(GOD)、葡萄糖脱氢酶(GDH)等酶电极法一般使用的酶;优选为GOD,但是不限于这些。另外,第一对象物为乳酸的情况下,可列举出LDH(乳酸脱氢酶)、细胞色素c依赖型D-乳酸脱氢酶、细胞色素c依赖型L-乳酸脱氢酶、NAD(P)-依赖型酶D-乳酸脱氢酶、NAD(P)-依赖型酶L-乳酸脱氢酶、LOD(乳酸氧化酶),但是不限于这些。
前述液相色谱法可优选适用于在第二对象物为糖化血红蛋白的情况,但是不限定于此。此处,对于基于液相色谱法的糖化血红蛋白的测定,通过在利用分析柱的组分分离之后测定各组分的血红蛋白的吸收波长处的吸光度而进行。作为所使用的分析柱,可列举出:填充剂为硅胶、聚甲基丙烯酸酯、聚羟基甲基丙烯酸酯、聚乙烯基醇、苯乙烯·二乙烯基苯共聚物等通常用于糖化血红蛋白的分离的分析柱。
在本发明中,被检试样包含第一对象物和第二对象物,优选列举出血液试样,但是不限定于此。
在本发明的稀释液中,离子强度为0.06~0.16,更优选为0.08~0.14,进一步优选为0.10~0.12。予以说明,在本发明中,离子强度是指:针对溶液中的全部离子种类,将各种离子的摩尔浓度m与电荷z的2次方的乘积进行相加,进而将其乘以1/2从而得到,可使用下述式(A)来算出。
I=(∑Ci·Zi2)/2 (A)
此处,Ci、Zi分别为溶液中的第i种离子的浓度及电荷。如果离子强度大于0.16,那么无法良好地进行第二对象物的基于液相色谱柱的分离,第二对象物的分析精度差。如果离子强度小于0.06,那么利用电极法的第一对象物的检测性能差。此处,被检试样被本发明的稀释液稀释通常的稀释倍率,例如稀释至50~200倍左右。使用离子强度处于此范围的稀释液而制备的分析用试样可共通地供于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法以及通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法,并且可实现高精度的分析。特别是,对于制备能够通用于通过酶电极法测定血液试样中的葡萄糖浓度的方法、以及通过液相色谱法测定前述血液试样中的糖化血红蛋白浓度的方法的测定用试样而言是有用的。
本发明的稀释液中所含的离子的种类并无特别限定,例如选自钠离子(Na+)、钾离子(K+)、钙离子(Ca2+)、镁离子(Mg2+)、氯化物离子(Cl-)、磷酸根离子(PO4 3-)以及碳酸氢根离子(HCO3 -)中的1种或2种以上。这是因为,在测定血液样本中的成分时,使用与生物体内所含的离子同种的离子,从而成为更稳定的测定体系。此处,离子的价数没有特别要求。
本发明的稀释液使用生成上述离子的碱金属、碱土金属的盐等电解质来制作。
本发明的稀释液在不妨碍本发明的效果的范围内还可含有溶血剂。作为用于破坏血液样本中的血球成分的血球膜的溶血剂,可列举出:皂苷等糖苷、聚氧乙烯烷基芳基醚、高级脂肪族醇、烷基芳基聚醚醇、磺酸酯化合物或硫酸酯化合物的聚氧化乙烯二醇或聚氧乙烯醚、山梨醇脂肪酸酯的聚氧乙烯加成物等表面活性剂、氯化铵等公知的溶血剂。溶血剂可预先添加于本发明的稀释液中,也可在制备测定用试样时与血液样本同时添加或在其前后添加。
另外,在不妨碍本发明的效果的范围,本发明的稀释液可含有适当量的公知的防腐剂等任意的添加物。
在本发明中,稀释液与溶血剂组合或与包含溶血剂的溶液组合,可以制成用于制备分析用试样的试剂盒,所述分析用试样可通用于通过电极法分析血液试样中的第一对象物的方法以及通过液相色谱法测定前述血液试样中的第二对象物的方法。在此情况下,容纳了稀释液的容器、容纳了溶血剂或包含溶血剂的溶液的容器作为不同的包装而包含于试剂盒。此处,混合稀释液与溶血剂或包含溶血剂的溶液时离子强度为0.06~0.16,更优选为0.08~0.14,进一步优选为0.10~0.12。
如果使用此试剂盒来制备分析用试样,则该分析用试样可共通地供于通过电极法分析血液试样中的第一对象物的方法以及通过液相色谱法分析前述血液试样中的第二对象物的方法。
本发明的稀释液可适用于包含如下工序的分析方法:(i)将用于制备分析用试样的稀释液与被检试样混合而制备分析用试样的工序;(ii)对于前述分析用试样,通过电极法来分析第一对象物的第一分析工序;(iii)对于前述分析用试样,通过液相色谱法来分析第二对象物的第二分析工序。本方法欲参照图1的流程图。本方法中优选的是,前述第一分析工序(ii)为通过酶电极法测定前述分析用试样中的葡萄糖浓度的工序、前述第二分析工序(iii)为通过液相色谱法测定前述分析用试样中的糖化血红蛋白浓度的工序,但不限定于此。通过将本发明的稀释液用作前述分析用试样制备工序(i)中的稀释液并进行前述分析方法,从而可实现以较高的精度来分析被检试样中的第一对象物和第二对象物两者。
本发明的稀释液可适用于:具备有稀释液瓶、分析用试样制备机构、第一对象物分析机构、第二对象物分析机构的分析装置中的第一对象物和第二对象物的分析。
此处,稀释液瓶用于容纳本发明的稀释液。试样制备机构通过将从前述稀释液瓶供给的本发明的稀释液与被检试样混合而制备分析用试样。第一对象物分析机构通过电极法对由前述试样制备机构制备的分析用试样中的第一对象物进行测定。第二对象物分析机构通过液相色谱法对同样地由前述试样制备机构制备的分析用试样中的第二对象物进行分析。在此分析装置中,本发明的稀释液作为用于制备分析用试样的稀释液而起作用,所述分析用试样通用于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法以及通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法。此处本分析装置优选可列举出,前述第一对象物分析机构用酶电极法测定前述分析用试样中的葡萄糖浓度、前述第二对象物分析机构通过液相色谱法测定前述分析用试样中的糖化血红蛋白浓度的分析装置,但是不限定于此。
本发明的稀释液可兼作为此分析装置内的路径以及测定机构的洗涤液。
实施例
以下列举实施例,从而进一步详细说明本发明,但是本发明不仅限于这些实施例。
实施例1
对制备被检试样的稀释液的离子强度对第一对象物和第二对象物的分析性能的影响进行了研究。在本实施例中,第一对象物为葡萄糖,第二对象物为糖化血红蛋白,由以下的方法测定被检血液试样中的这些物质的各自浓度,对其测定性能进行评价。
制备含有不同浓度的支持电解质(碱金属、碱土金属等)的缓冲液,制作各种离子强度的稀释液。对于使用了这些稀释液稀释被检血液试样的测定用试样,使用GOD电极来测定葡萄糖浓度。另外,对于前述测定用试样,通过使用离子交换柱的液相色谱仪测定糖化血红蛋白A1c浓度。测定仪器使用通常的测定中所使用的通用的测定仪器。
此处,前述被检血液试样使用葡萄糖浓度以及糖化血红蛋白A1c浓度全都已知的被检血液试样,分别为100mg/dL及5%。算出通过上述测定的测定值与已知浓度值的偏差作为测定准确性(%)。葡萄糖浓度的此测定准确性为97~103%的范围、糖化血红蛋白A1c浓度的此测定准确性为99~101%的范围的情况下,可以说测定精度高。在各项目上设定为不同的基准,这是因为,葡萄糖较大地受到小时至日水平的短期的样品提供者的临床状态的影响,与此相对,糖化血红蛋白A1c表示数月水平的中长期的样品提供者的临床状态,不发生短期的变动。
将稀释液的各离子强度下的葡萄糖以及糖化血红蛋白的各测定准确性的结果示于图2。由此可知:在稀释液的离子强度为0.090~0.124的范围内,葡萄糖浓度以及糖化血红蛋白A1c浓度两者的测定精度都高,进而,在离子强度为0.100~0.120的范围测定精度尤其高。
产业上的可利用性
由于使用本发明的稀释液可共通地供于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法以及通过液相色谱法分析前述被检试样中的第二对象物的方法,并且可实现高精度的分析,因此在产业上非常有用。特别是适用于制备可通用于通过酶电极法测定血液试样中的葡萄糖浓度的方法、以及通过液相色谱法测定前述血液试样中的糖化血红蛋白浓度的方法的测定用试样,可在糖尿病的筛查、治疗上发挥作用。
Claims (13)
1.一种稀释液,其特征在于,其为用于制备分析用试样的稀释液,离子强度为0.06~0.16,所述分析用试样可通用于通过电极法分析被检试样中的第一对象物的方法、以及通过液相色谱法分析所述被检试样中的第二对象物的方法。
2.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,通过电极法分析所述被检试样中的第一对象物的方法为使用与所述被检试样中的第一对象物反应的酶的方法。
3.根据权利要求2所述的稀释液,其中,
通过电极法分析所述被检试样中的第一对象物的方法为通过酶电极法测定所述被检试样中的葡萄糖浓度的方法,
通过液相色谱法分析所述被检试样中的第二对象物的方法为通过液相色谱法测定所述被检试样中的糖化血红蛋白浓度的方法。
4.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,所述被检试样为血液。
5.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,稀释液中所含的离子为选自钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯化物离子、磷酸根离子以及碳酸氢根离子中的1种或2种以上。
6.根据权利要求4所述的稀释液,其进一步含有溶血剂。
7.根据权利要求6所述的稀释液,其中,所述溶血剂为选自皂苷、聚氧乙烯烷基芳基醚、高级脂肪族醇、烷基芳基聚醚醇、磺酸酯化合物或硫酸酯化合物的聚氧化乙烯二醇或聚氧乙烯醚、山梨醇脂肪酸酯的聚氧乙烯加成物、以及氯化铵中的1种或2种以上。
8.一种试剂盒,其特征在于,其包含稀释液和溶血剂,其为用于制备分析用试样的试剂盒,所述分析用试样可通用于通过电极法分析血液试样中的第一对象物的方法以及通过液相色谱法测定所述血液试样中的第二对象物的方法,混合所述稀释液与所述溶血剂时的离子强度为0.06~0.16。
9.根据权利要求8所述的试剂盒,其中,所述溶血剂为选自皂苷、聚氧乙烯烷基芳基醚、高级脂肪族醇、烷基芳基聚醚醇、磺酸酯化合物或硫酸酯化合物的聚氧化乙烯二醇或聚氧乙烯醚、山梨醇脂肪酸酯的聚氧乙烯加成物、以及氯化铵中的1种或2种以上。
10.一种分析方法,其特征在于,其为包含如下工序的分析方法:
将用于制备分析用试样的稀释液与被检试样混合而制备分析用试样的工序;
对于所述分析用试样,通过电极法来分析第一对象物的第一分析工序;
对于所述分析用试样,通过液相色谱法来分析第二对象物的第二分析工序;
所述稀释液为权利要求1所述的稀释液。
11.根据权利要求10所述的分析方法,其中,
所述第一分析工序为通过酶电极法测定所述分析用试样中的葡萄糖浓度的工序,
所述第二分析工序为通过液相色谱法测定所述分析用试样中的糖化血红蛋白浓度的工序。
12.一种分析装置,其特征在于,其为具备以下机构的分析装置:
容纳用于制备分析用试样的稀释液的稀释液瓶;
将从所述稀释液瓶供给的所述稀释液与被检试样混合而制备分析用试样的分析用试样制备机构;
对于由所述分析用试样制备机构制备的分析用试样,通过电极法来分析第一对象物的第一对象物分析机构;
对于由所述分析用试样制备机构制备的分析用试样,通过液相色谱法来分析第二对象物的第二对象物分析机构;
所述稀释液为权利要求1所述的稀释液。
13.根据权利要求12所述的分析装置,其中,
所述第一对象物分析机构通过酶电极法测定所述分析用试样中的葡萄糖浓度,
所述第二对象物分析机构通过液相色谱法测定所述分析用试样中的糖化血红蛋白浓度。
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