JP3018032B2

JP3018032B2 - グリコヘモグロビンの自動測定方法

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Publication number: JP3018032B2
Application number: JP8281719A
Authority: JP
Inventors: 道男仲
Original assignee: Arkray Inc
Current assignee: Arkray Inc
Priority date: 1987-07-14
Filing date: 1996-10-02
Publication date: 2000-03-13
Anticipated expiration: 2015-03-13
Also published as: JPH09178719A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、高速液体クロマト
グラフィを原理とするグリコヘモグロビンの改良された
自動測定方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】ヘモグロビンに糖が結合したグリコヘモ
グロビン（ＨｂＡ₁）は糖尿病患者に多く見られ、殊に
ＨｂＡ_1cは人間ドック等の健康スクリーニングや糖尿病
の長期コントロールの指標として重要な測定項目となっ
てきている。これは、ＨｂＡ_1cがグリコヘモグロビン
（ＨｂＡ₁）中最も多く存在し、糖尿病での増加も他の
成分に比べて著しく多い上に、ＨｂＡ_1cの値が、過去１
〜３カ月間の平均空腹時血糖値と良い相関関係を示すこ
とによる。

【０００３】ところで、グリコヘモグロビンにはＨｂＡ
_1cの他にＨｂＡ_1a、ＨｂＡ_1b等があり、これらは比色
法，電気泳動法，ミニカラム法，高速液体クロマトグラ
フィなどにより分画測定される。この内臨床検査の分野
では、所要時間や分離性能の点から最近は高速液体クロ
マトグラフィ（ＨＰＬＣ法）が繁用されている。

【０００４】ただ、過去の血糖値と良い相関を示すのは
ＨｂＡ_1cの内安定型と言われるもので、他に割合は少な
いが不安定型のものがある。その割合は、健常人で空腹
時全ＨｂＡ_1c中１０〜１５％程度と言われている。この
不安定型ＨｂＡ_1cは、ヘモグロビンのβ鎖Ｎ端末とグル
コースの還元性端末とが可逆的にＳｈｉｆｆ塩基結合し
たもので、血糖濃度に依存して比較的短時間の内に生成
分解する。従って、糖尿病患者が健常人よりも多く、全
ＨｂＡ_1cに対し１０〜２０％にも及ぶことがある。ま
た、空腹時よりも食後の方が多くなり、採血時の状態に
大きく影響される。

【０００５】一方安定型ＨｂＡ_1cは、不安定型ＨｂＡ_1c
から緩徐に持続的に且つ不可逆的に生成され、過去の長
期にわたる血糖レベルをよく反映する。従って、安定型
のみを分離して測定することが望ましい。しかし、両者
は構造的に究めて類似しており、液体クロマトグラフィ
での分離はかなり困難である。

【０００６】これに対処する一つの方法として、長さの
長い高分解能カラムを用いて、分離性能を向上させるこ
とが行われている。この方法は化学処理によるグリコヘ
モグロビンの変性を来たしにくい利点はあるが、良好に
分離させるには１検体に十数分以上もの分析時間を必要
とする。そのため、測定検体数の増加や緊急時の測定に
十分対処できない欠点があった。更に、このタイプのも
のはカラムが長いために装置が大型化するし高価にな
る。

【０００７】一方、安定型ＨｂＡ_1cを分離測定するもう
一つの方法として、前処理で不安定型ＨｂＡ_1cを化学的
に分解除去する方法がある。これは、不安定型ＨｂＡ_1c
がグルコースと一時的に結合（Ｓｈｉｆｆ塩基結合）し
ているため分解しやすいことに着目したものである。例
えば、洗浄赤血球を等張リン酸緩衝液（３７℃，４時
間）や生理食塩水（室温，１４時間）でインキュベイト
して不安定型ＨｂＡ_1cからグルコースを分離させる方法
がある。

【０００８】或いは、全血に溶血試薬を加えて３５℃で
十数時間インキュベイトする方法もある。これは、試料
を溶血させ希釈することで不安定型ＨｂＡ_1cの濃度を減
少させるもので、特にpH６以下の酸性領域で効果が大き
く反応も早いし、温度を上げると効果が大きい。更に、
従来ミニカラム法に使用されているホウ酸を含む市販の
不安定型ＨｂＡ_1c除去試薬を加えるとより効果がある。

【０００９】しかし、これらの前処理は時間がかかると
ともに、不安定型ＨｂＡ_1cの分解に伴って他のグリコヘ
モグロビンや純ヘモグロビン（ＨｂＡ₀）の分解や変性
も同時に進行する。

【００１０】また溶血するタイプでは、溶血後の経過時
間や測定までの経過温度によって安定型ＨｂＡ_1cの量も
変動してしまう欠点があった。特に、多数の検体を自動
測定する場合に血液試料を分解試薬を含む溶血液で希釈
しておくと、待機中の検体のうち、後で測定する検体の
経過時間が長くなり、分解反応が過剰に進行して検体が
変性してしまう欠点があった。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、高速液体ク
ロマトグラフィにより不安定型ＨｂＡ_1c除去試薬（分解
試薬）を用いて迅速なグリコヘモグロビンの分析を行な
うとともに、不安定型ＨｂＡ_1c以外のグリコヘモグロビ
ンの分解や変性を押さえて高精度で再現性良く安定型Ｈ
ｂＡ_1cの測定を行なう方法を提供することを目的とす
る。また本発明は、装置の構造が比較的シンプルで試料
の取り扱いや準備に手が掛からないグリコヘモグロビン
分析方法を提供することを目的とする。

【００１２】更に本発明は、高速液体クロマトグラフ装
置において試料（血液試料に限らない）と反応試薬の混
合液の温度をコントロールするのに最適な試料導入バル
ブを提供することを目的とする。

【００１３】

【課題を解決するための手段】上記目的は、多数の血液
試料を全血或いは血球層のまま待機させておき、測定の
順番がきた時点でサンプリングして速やかに不安定型Ｈ
ｂＡ_1c除去試薬を含む溶血液で希釈して混合し、混合開
始から一定の定められた時間経過後に、高速液体クロマ
トグラフ装置のカラムに注入することにより達成され
る。尚、以下「試料」とは試料容器に採取した全血試料
（或いは血球層）を言い、「検体」とはこの試料を溶血
液で希釈した混合液を言う。

【００１４】更に、混合液（検体）をカラムに注入する
までに加温することにより反応を促進し、より迅速な測
定をなすことができる。この加温を、試料導入バルブの
試料ループ部分で行なうと、他に加温ゾーンを設けたり
余分な検体を加温する必要もなく、省スペース化や省エ
ネルギー化が図れる。

【００１５】またマニュアルで試薬を混合する手間を省
き、マニュアル混合による誤差や、混合後測定までの試
料の変性を防ぐことにより達成される。

【００１６】次に、本発明方法の手順や測定装置の構成
を説明する。まず、各患者や被検者から採取された血液
試料は、採血管やサンプリングカップ等の試料容器に入
れられ、全血或いは血球層のまま試料保持部に待機させ
ておく。全血或いはそれを遠心分離した血球層を使用す
るので前処理が不要で簡便である。尚、血球層を使用す
るのは、血漿を他の検査に使用した残りを有効に利用す
る場合も想定してのことであるが、全血でも長時間待機
させておくと底の方に血球成分が沈降する。これらに対
処するために、サンプリングは試料容器の底に近い部分
から行なうとよい。尚、サンプリングされた血液試料中
の赤血球の割合にバラツキがあっても、ＨｂＡ₀や他の
ＨｂＡ₁に対するＨｂＡ_1cの割合は各試料毎に一定故、
問題はない。血液試料には、通常抗凝固剤を加える。抗
凝固剤としては、ヘパリン、ＥＤＴＡ−２Ｎａ等通常市
販のものが使用できる。

【００１７】各試料容器は、ラックやスネークチェン，
ターンテーブル等の保持手段に多数保持され、順次サン
プリング位置に送り込まれる。

【００１８】サンプリング部では、ポンプの吸引作用で
サンプリングノズルから所定量（１乃至数μl 程度）の
試料が吸引され、別途供給される不安定型ＨｂＡ_1c除去
試薬を含んだ溶血液により希釈され、混合される。希釈
倍率は、数十〜数百倍、特に１００〜４００倍程度であ
る。

【００１９】サンプリングや希釈の手順は、各種ポンプ
の構造や組合せ等により種々な構成や変形例が考えられ
るが、要は測定直前の数十秒〜数分以内にサンプリング
した血液試料を除去試薬を含む溶血・洗浄液で希釈し、
混合開始後一定の時間経過後に試料導入バルブを介して
カラム内に注入できる構成のものであればよい。これら
の動作は自動的に且つ連続して行えるものであること、
汚染防止の工夫がなされていることが必要である。

【００２０】不安定型ＨｂＡ_1c除去試薬としては、ホウ
酸やリン酸化合物、或いはこれらを含む市販の試薬等が
用いられる。pHは酸性のものがよい。溶血剤は、一般市
販のものが用いられる。

【００２１】カラムとしては、例えば球状イオン交換ゲ
ル（陽イオン、陰イオン）を充填したような高速液体ク
ロマトグラフィ用のものが用いられ、この分離能により
検体の処理時間が規制される。

【００２２】溶血後の反応の進み具合は当然に不安定型
ＨｂＡ_1c除去試薬の性能に左右されるが、また反応開始
後の経過時間と経過温度の関数ともなる。測定に要する
時間は、サンプリングや希釈混合、送液、洗浄等の操作
をする時間と加温時間の和であり、多数の試料を処理す
るには測定時間が短い方がよい。従って、試薬の不安定
型ＨｂＡ_1c分解能力が低ければ、不都合例えば試料の変
質を来さない範囲で検体（混合液）の送路を加温するこ
とにより反応時間の短縮が図れる。この場合、分析時間
や試薬の分解能力を勘案して、測定までの時間が一定に
なるように、試料導入バルブ部分を含む送路の全体或い
は一部を温度コントロールする。加温温度は、試薬の分
解能力や加温時間を考慮して、３０℃〜６５℃より好ま
しくは４０〜５５℃程度とする。６５℃以上では蛋白質
の変性が起こり好ましくない。３０℃以下だと、夏期で
は冷却の必要性が生じることもある。

【００２３】次に、洗浄液について説明する。洗浄液
は、前回の検体を測定した後汚染を防止するためにサン
プリングノズルや各流路を洗浄するものである。しか
し、本発明ではサンプリンした試料を溶血液で希釈混合
する構成を採っているため、本来洗浄液と溶血液の２系
統の送液系が必要となる。勿論この構成でもかまわない
が、両者を併用し溶血・洗浄液として用いると、送液ポ
ンプが１個少なくてすむし、配管や送液シーケンスが簡
単になる利点がある。

【００２４】また本発明では、血液試料と溶血液との混
合開始から一定時間経過後に混合液（検体）のカラムへ
の注入を行わせる構成をとっている。従って、何らかの
理由、例えばラックの移動がスムースにいかなかったと
か、割込み測定をするタイミングが合わなかった等によ
り、次回の注入タイミングから逆算して混合開始が間に
合わない場合には、その回の混合や注入を行わずに空の
測定動作を行わせることが望ましい。この混合タイミン
グのずれは、１種類の溶離液を用いる場合には問題にな
らない。しかし、濃度やpHが異なる２種以上の溶離液を
用いる場合には、注入タイミングが狂うとカラム内のバ
ランスを崩すことによる。

【００２５】

【発明の実施の形態】次に、本発明方法を具現化したグ
リコヘモグロビン測定装置の一例を示して、本発明方法
を詳細に説明する。尚、本例では、溶血液と洗浄液を共
通に使用し、試料導入バルブの試料ループで検体を加温
している。

【００２６】第１図は、本発明方法を実施化したグリコ
ヘモグロビン自動測定装置の一例を示すフローダイヤグ
ラム、第２図は同じくサンプリング部のフローダイヤグ
ラム、第３図は試料導入バルブの概略斜視図である。

【００２７】この装置は、全血試料或いは血球層を入れ
た複数の試料容器を保持しプールしておく試料保持部１
と、試料のサンプリングや溶血液との希釈混合を行なう
サンプリング部２、溶離液や溶血・洗浄液、廃液の各容
器を収納するボトルユニット部３、試料導入バルブやカ
ラム，測光手段等を含む分析部４の他、プログラムや入
力した指令に基づき装置全体の作動を制御し，測定値の
記憶や演算を行い，その結果を患者番号や測定日時等と
ともにプリンター等の表示装置に出力する記憶・制御
部、作動指令の入力等を行なう操作キーボード等から構
成される。記憶・制御部は、例えばマイクロコンピュー
タ５が用いられ、また表示装置には他にデジタル表示器
が用いられる。

【００２８】次に、各部の構成や動作を説明する。まず
試料保持部１は、複数の試料容器６を保持したラック７
を多数組載置するようになっており、各ラック７は試料
容器６を順次サンプリング位置に置くように矢印方向に
駆動される。また緊急測定のための割込測定ポート８を
設けてもよい。

【００２９】サンプリング部２には、２つのノズル９、
１０を備えたサンプリングノズル機構１１と、溶血・洗
浄液ポンプ（Ｐ₁）、試料吸引ポンプ（Ｐ₂）、検体導
入ポンプ（Ｐ₃）及び希釈分注槽１２が設けられてい
る。試料吸引ポンプ（Ｐ₂）の容量は１〜数μｌ、洗浄
液ポンプ（Ｐ₁）と検体導入ポンプ（Ｐ₃）の容量は数
百μｌである。サンプリングノズル機構１１は、回転と
ともに上下動する。尚、溶血・洗浄液１３は前記した不
安定型ＨｂＡ_1c分解試薬や溶血剤を試料の希釈液に溶解
したもので、本例ではこの液を各ポンプやノズルその他
の流路の洗浄用と併用している。また、本発明で試料１
４とは試料容器６に採取した全血試料或いは血球層を言
い、検体１５とはこの試料１４を溶血・洗浄液１３で数
十〜数百倍に希釈したものを云う。

【００３０】サンプリング部２では、まず試料吸引ポン
プ（Ｐ₂) を駆動して所定量の試料１４を第１のノズル
９から吸引する。次に、希釈分注槽１２上にサンプリン
グノズル機構１１を移動して第２のノズル１０から溶血
・洗浄液１３を吐出させ、第１のノズル９の外壁を洗浄
する。この目的のために、第２のノズル１０の先端を第
１のノズル９の方に曲げてある。廃液は、廃液バルブ１
６を通ってボトルユニット部３のドレインボトル１７に
導かれる。次いで、ポンプ（Ｐ₁）・（Ｐ₂）を駆動し
て、希釈分注槽１２にサンプリングした試料１４と所定
量の溶血・洗浄液１３を吐出する。この吐出で両者１３
・１４は撹拌される。更に、第１のノズル９で吸入・吐
出を繰り返して十分に撹拌混合するようにしてもよい。
この混合された検体１５を、検体導入ポンプ（Ｐ₃）の
吸入作用によって第１のノズル９から吸引し分析部４の
試料導入バルブ１８に送り込む（第１図、第２図の状
態）。

【００３１】その後、希釈分注槽１２，配管，第１のノ
ズル９外壁等を溶血・洗浄液１３で洗浄し、廃液を廃棄
して次の試料吸引に備える。

【００３２】一方、試料導入バルブ１８の試料ループ１
８ａに送り込まれた検体１５は、該試料ループ１８ａ内
に保持され、加温される。試料ループ１８ａは、第３図
に示すようにループ加温器１８ｂで囲まれ、さらに保温
カバー１８ｃで該ループ加温器１８ｂと試料導入バルブ
１８の主要部を覆う。図中、符号１８ｄは検体用出入
管、１８ｅは溶離液用出入管、１８ｆはモータ、１８ｇ
はギヤボックス、１８ｈは保温用のブロックである。保
温カバー１８ｃは、このブロック１８ｈにねじ止めされ
る。

【００３３】この方式による加温は、試料ループ１８ａ
内にある検体のみが確実に加温されるのでエネルギーに
無駄がないし、加温しない部分即ち不安定型ＨｂＡ_1cが
十分に分離除去されていない検体がカラム１９に注入さ
れる危険性もない。

【００３４】次いで試料導入バルブ１８のモータ１８ｆ
が回転して第４図の如き状態となり、試料ループ１８ａ
内の検体１５はボトルユニット部３から送られてくる溶
離液により押し出されて、カラム１９に注入される。検
体１５の各成分即ちＨｂＡ_1a、ＨｂＡ_1b、ＨｂＡ_1c、Ｈ
ｂＡ₀等は、カラム１９内で分離され、順次光度計２０
で測光されてドレイン容器２１に廃棄される。測光結果
はマイクロコンピュータ５に送られ、各分画パターンと
ピークの溶出時間, 各成分の含有％等が演算されプリン
ター２２で描出される。尚、カラム１９の前には夾雑物
を除去するフィルター２４を配置し、全体を恒温槽２５
内に収納しておくと安定した測定が行える。

【００３５】以上の操作を、第２図に基づきポンプ（Ｐ
₁）・（Ｐ₂）・（Ｐ₃）の作動及び溶血・洗浄液１３
用の流路切り換えバルブ３８・３９の流路状態について
まとめると、表１のようになる。尚、各ポンプの↓は吸
引、↑は排出、無記入は停止を示す。

【表１】

【００３６】前記操作において、試料１４のサンプリン
グ量を1.５μｌ、これを希釈する溶血・洗浄液１３量
を４５０μｌとすると希釈倍率は３００倍となる。また
検体１５の加温時間や温度は、不安定型ＨｂＡ_1c除去試
薬の分解能力によるが、本出願人が”２１Ｈ”なる名称
で販売している、リン酸化合物系の不安定型ＨｂＡ_1c除
去試薬を含む溶血液を使用した場合、上記希釈倍率のも
ので、４８℃だと２分４０秒が最適な条件である。尚、
６０℃では２分、４０℃では３分、３３℃では４分で不
安定型ＨｂＡ_1cの分解がほぼ完全に行なわれる。

【００３７】ところで、本例では３種類の溶離液を用い
ている。各溶離液（Ａ）・（Ｂ）・（Ｃ）は、送液シー
ケンスに基づき加熱コイル２６、冷却コイル２７、脱泡
装置２８・２９・３０を通り、夫々切り換えバルブ３１
・３２・３３によって順次マニホルド３４に送り込まれ
る。マニホルド３４で一つの流路となった各溶離液は、
送液ポンプ３５で試料導入バルブ１８に圧送され、続い
てカラム１９に注入され、検体１５を搬送しつつ光度計
２０を通ってドレイン容器２１に到る。図中符号３６は
圧力検出器、３７はダンパである。

【００３８】第１図及び第２図中、符号３８・３９は溶
血・洗浄液１３用の流路切り換えバルブ、４０は同じく
溶血・洗浄液１３用の液切れセンサー、４１はドレイン
ボトル１７用の吸引エアポンプ、４２は表示器、４３は
操作キーボードである。

【００３９】以上の説明は連続的に並べられた試料を測
定する場合であり、この場合常に一定のシーケンスで作
動させれば希釈から注入までの時間は一定になる。しか
し、採血の時間的バラツキ等で試料容器がラック７等に
不連続に置かれている場合等では、次の試料を捜すため
に余分な不規則の時間が必要である。緊急測定のために
割込みポートに試料容器をセットした場合にも、血液試
料の吸引タイミングがずれることがある。そこで、検体
１５のカラム１９への注入が終わった時点で次の試料を
捜しておき、次の注入の時間から逆算して必要なタイミ
ングで希釈を開始させるようにするとよい。

【００４０】希釈開始について、既に次回の注入に間に
合わないことが判明しておれば、その回は混合やカラム
への検体の注入を取りやめ、一回の測定分の送液ケーシ
ングを続けることで、濃度やpHの異なる３種類の溶離液
を用いる場合でもカラムの平衡条件を崩すことなく安定
した測定を続行させることができる。

【００４１】従来法との比較（等張リン酸緩衝液による血球洗浄法との比較）その
結果は表２に示す通り、従来法による不安定型ＨｂＡ_1c
分画の除去と同等の効果が得られた。血球洗浄法と２１
Ｈを併用したものを比較対象としたが、これ以上の不安
定型ＨｂＡ_1c分画の低下や、変性によるＡ₁ａ＋ｂ成分
の増加も認められなかった。尚、前処理もせず、不安
定型ＨｂＡ_1c除去試薬も用いない場合（２１Ｌ）、全て
の値が高い。Ｌ−Ａ₁ｃ＋Ｓ−Ａ₁ｃに於ける２１Ｌと
他の処理の差が不安定型ＨｂＡ_1cと推察できる。本例で
は、不安定型ＨｂＡ_1cは、ヘモグロビン全体の約０.7％
である。

【表２】

【００４２】測定は以下の条件によった。・２１Ｌ：不安定型ＨｂＡ_1c除去試薬を含まない溶血・
洗浄液。ノニオン系界面活性剤１ｇ／ｌリン酸２水素カリ０.1g ／ｌリン酸１水素カリ０.3ｇ／ｌ pH７．５・２１Ｈ：不安定型ＨｂＡ_1c除去試薬を含む溶血・洗浄
液ノニオン系界面活性剤１ｇ／ｌリン酸化合物０.1g ／ｌＫＯＨ０.3ｇ／ｌ pH６・“Ｓ”＋２１Ｌ：血球洗浄法（３７℃）で６時間イン
キュベートしたもの。Ｓは、Ｓａｌｉｎｅを示す。等張
リン酸緩衝液（１４容）に洗浄赤血球（１容）を加え：
連続回転混和しながら３７℃で６時間インキュベーショ
ンすることにより、不安定型ＨｂＡ_1cを除去する。その
後、血球層を分取し、２１Ｌで３００倍に希釈して測
定。・“Ｓ”＋２１Ｈ：Ｓａｌｉｎｅに２１Ｈを負荷した。
Ｓ＋２１Ｌと同様に等張リン酸緩衝液で処理した血球層
を分取し、２１Ｈで３００倍に希釈して測定。・検体：健常人。採血直後に実験。・測定条件：何れも、実施例の方法による。加温温度４
８℃、加温時間２分４０秒、測定時間４分。ｎ＝５。

【００４３】本発明方法は、以上詳述したように高速液
体クロマトグラフィを原理とするグリコヘモグロビンの
自動測定方法の改良に係り、各患者から採取した多数の
血液試料を全血或いは血球層のまま試料保持部に待機さ
せておき、測定の直前（数十秒〜数分前）にサンプリン
グして不安定型ＨｂＡ_1c除去試薬を含む溶血・洗浄液に
より釈液混合し、混合開始から一定時間経過後に高速液
体クロマトグラフ装置のカラムに注入するようにしたも
のである。また、必要に応じて希釈後カラムに注入する
までに加温するものである。

【００４４】

【発明の効果】従って、高性能の長いカラムを用いる
従来方法に比べて大幅に迅速な測定が行えるとともに、
それと同等程度の精度を得ることができる。マニュア
ルで試薬を混合する手間を省き、手作業希釈による誤差
のない正確な測定が可能になる。全血或いはそれを遠
心分離した血球層を使用するので前処理が不要である。
予め溶血試薬で希釈しておかないので、測定までの試
料の変性がなく、不安定型ＨｂＡ_1c以外のグリコヘモグ
ロビンの分解や変性を押さえて安定型ＨｂＡ_1cの正確な
測定ができる。測定値が不安定型ＨｂＡ_1cの影響を受
けないので、採血の時間的制約がなく、患者に負担をか
けない。更に、測定直前に試料を溶血し、常に一定の
タイミングでカラムに注入されるので、安定した分析が
可能となる。特に、試料が不連続でセットされた場合で
も、カラムの平衡化条件を崩すことがないので、クロマ
トパターンが安定する。等多くの優れた効果を有するも
のである。

【００４５】一方、本発明の試料導入バルブは、試料液
と反応試薬を一定時間所定温度に加温するものである。
そして、試料ループ内にある検体のみを確実に加温でき
るのでエネルギーに無駄がないし、加温しない部分がカ
ラムに注入される危険性もなく、正確に制御できる。ま
た、従来の試料導入バルブに簡単な改良を施すだけで簡
単に得られるし、他に加温装置を設けなくてもよいの
で、余分なスペースが入らない等の利点がある。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明方法を実施化したグリコヘモグロビン自
動測定装置の一例を示すフローダイヤグラムである。

【図２】図１と同様のサンプリン部のフローダイヤグラ
ムである。

【図３】試料導入バルブの概略斜視図である。

【図４】カラムへの検体注入時の試料導入バルブの状態
を示す平面図である。

【符号の説明】

１試料保持部２サンプリング部４分析部６試料容器９、10 ノズル 11 サンプリングノズル機構 12 希釈分注槽 13 溶血・洗浄液 14 試料 15 検体 18 試料導入バルブ 19 カラムＰ₁ 溶血・洗浄液ポンプＰ₂ 試料吸引ポンプＰ₃ 検体導入ポンプ

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩＧ０１Ｎ 33/72 Ｇ０１Ｎ 33/72 Ａ 35/10 35/06 Ｆ (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 30/20 G01N 30/04 G01N 30/26 G01N 30/88 G01N 33/50 G01N 33/72 G01N 35/10

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】高速クロマトグラフィーによりグリコヘモ
グロビンの分画を測定する装置において、不安定型Ｈｂ
Ａ_１ｃ除去試薬を含む溶血液を、試料ループを含む各流
路やサンプリングノズル部を洗浄する洗浄液として使用
することを特徴とするグリコヘモグロビンの自動測定装
置。
【請求項２】試料容器に採取した多数の血液試料を全血
或いは血球層のまま待機させ、試料容器を順次サンプリ
ング部に送り込み、サンプリングノズルから吸収した血
液試料を不安定型ＨｂＡ_１ｃ除去試薬を含む溶血液と混
合して希釈させ、該混合液に一部を試料導入バルブの試
料ループに導き、混合開始から一定時間後にカラムに注
入して、不安定型ＨｂＡ_１ｃを除去或いは低減した状態
で測定するものである請求項１記載のグリコヘモグロビ
ンの自動測定装置。