CN110114670A - 血液分析方法及血液检查试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明的课题在于提供一种当测定微量的血液样本中的分析对象成分量时，在引起溶血的情况下能够以高精度进行多个分析对象成分的测定的血液分析方法及血液检查试剂盒。根据本发明，血液分析方法测定分析对象成分的浓度，并包括：用稀释液来稀释所采集的血液样本的工序；使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值而确定稀释倍率的工序；及分析血液样本中的分析对象成分的浓度的工序，所述血液分析方法测定血液样本中的溶血量，并对应于所测定的溶血量而校正稀释倍率，使用校正后的稀释倍率而分析分析对象成分的浓度。

Description

血液分析方法及血液检查试剂盒
技术领域
本发明涉及一种用于测定血液样本中的分析对象成分浓度的血液分析方法及血液检查试剂盒。
背景技术
通常，采血中有：普通采血，医生等某些有资格人员使用注射器从静脉采集血液；及自行采血，检查对象将采血针刺入到自身的手指等来采集血液。
通过普通采血而采集的血液，以被密封在采集容器中的状态输送到医疗机构或检查机构，在那里进行检查。在不分离出血球和血浆而输送血液的情况下，在医疗机构或检查机构，通过离心分离机将血液分离成血球和血浆之后进行检查。并且，在检查对象进行的自行采血中，采集后的血液通过分离膜而分离成血球和血浆，以该分离的状态被输送到检查场所，在那里进行检查。
专利文献1中记载有通过自行采血而采集的血液样本的检查方法。具体而言，记载有包括如下工序的活体试样中的应定量成分的定量方法：1)制备包括含有未定量容量而采集的应定量成分的未知容量的活体试样和含有一定量的指示物的一定量的水性溶液的定量用试样的工序；2)由含有一定量的指示物的一定量的水性溶液中的指示物浓度(C1)和定量用试样中的指示物的浓度(C2)来求出活体试样的稀释倍率(a)的工序；3)求出定量用试样中的应定量成分的浓度(Y)的工序；及4)根据由上述2)求出的活体试样稀释倍率(a)和由上述3)求出的定量用试样中的应定量物质的浓度(Y)来确定活体试样中的应定量成分的工序。
在专利文献2中记载有如下定量分析法：测定样本中的分析对象成分量，进而，测定除此以外的原本恒久性地存在于样本中的标准成分的量，由该标准成分的量和样本中的标准成分的已知浓度来确定样本的量，由该样本量和分析对象成分量来确定样本中的分析对象成分的浓度。
并且，在专利文献3中记载有如下方法：使用血液稀释定量器具，从人和动物采集微量血液，将其原样或者在稀释之后将一定量供给到其他机器和容器，或者直接供给到试剂。而且，在专利文献4中记载有如下方法：利用稀释用水溶液中的指示物的吸光度来对生物学的试样中的应定量成分的浓度进行定量。
专利文献5中公开了测定样本中的分析对象成分浓度的定量分析法，其测定样本中的分析对象成分量，进而，测定除此以外的恒久性地存在于样本中的标准成分的量，由该标准成分的量和样本中的标准成分的已知浓度来确定样本的量，由该样本量和分析对象成分量来确定样本中的分析对象成分的浓度，并记载有外部标准法中的稀释活体试样的分析方法。
在专利文献6中记载有如下方法：在通过测光法而实际测定存在于样本中的成分之前，将样本进行预反应并在反应中测定样本的溶血度，然后，使用通过使溶血度和干扰成分的测定误差贡献相关联而被确定的数值，之后，校正所得到的检查成分的测定值，由此构成一边避免因溶血而产生的测定误差，一边分析医学样本。
以往技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2003-161729号公报
专利文献2：日本特开2001-330603号公报
专利文献3：日本特开2009-122082号公报
专利文献4：日本特开2009-109196号公报
专利文献5：日本特开2016-118565号公报
专利文献6：日本特开平08-101191号公报
发明内容
发明要解决的技术课题
在专利文献1中记载的方法中，血液样本为微量的情况下，需要提高对血液样本量的稀释液的比例。然而，该情况下，由于在稀释血液样本前后稀释液的体积变化率非常小，因此内部标准物质的浓度的变化率小，存在测定值的重复再现性降低的问题。
在专利文献2中，将健康的人的总血量约100μL滴加于多孔质膜，分离出血球而展开了血清之后，添加150μL的生理盐水等渗PBS(Phosphate-buffered saline(磷酸盐缓冲盐水)：pH7.4)，将所得到的液体进行离心分离而得到的上清液作为分析试样进行了分析，但关于小于100μL的采血却未记载。
在专利文献3的方法中，用微量吸移管准确地采集10μL的血液量进行了分析，但不习惯于采血的患者进行采集的情况下，难以准确地采集一定量，通过包括误差的采血量而进行了检查的情况下，其结果，在测定值中包括误差。
专利文献4中所记载的测定方法是稀释倍率为10倍左右的测定，在进一步提高稀释倍率而充分地确保稀释血液量的情况下，与专利文献1同样，存在测定值的重复再现性降低的问题。
在专利文献5中记载的方法中记载有使用内部标准物质及外部标准物质而计算血液试样的稀释倍率，但若血液成分溶血，则血球和血浆中的标准成分浓度不同，因此导致血浆中的标准成分浓度受到血球中的标准成分的浓度的影响。例如在钠离子的情况下，血球中浓度低于血浆中浓度，因此在进行了溶血的情况下导致浓度降低，在将存在于血浆中的钠作为外部标准物质使用来确定稀释倍率的情况下产生非常大的误差。如上所述，在专利文献5的记载中，在产生了溶血的情况下，可能导致定量分析的测定精度会降低。
另一方面，为了减轻患者或受检者的疼痛感，期待一种由微量的血液样本测定多个对象物质的高精度的测定方法。该情况下，进行如下方法：稀释微量的血液，使能够使用于测定的容量增加以测定多个对象物质。该情况下，需要确定血液样本的稀释倍率。在专利文献6中公开了作为专利文献5的课题的溶血时校正对象物质的技术，但存在如下问题：未记载所稀释的血液的校正，没有关于由微量血液测定多个对象物质的记载，在微量的血液样本的情况下，可分析的对象物质受到限制。
如上所述，为了解决专利文献5的课题，在将根据血红蛋白的检测量而校正对象成分的方法应用到专利文献5的情况下，也由于在样本溶血的情况下血球和血浆中的标准成分浓度不同，因此导致血浆中的标准成分浓度受到血球中的标准成分浓度的影响的问题未得到解决，未能够进行由微量血液以高的测定精度进行多个对象物质的分析。
本发明目的在于提供一种用于测定血液样本中的分析对象成分浓度的血液分析方法及血液检查试剂盒，其中，如上所述，当测定微量的血液样本中的分析对象成分量时，在产生了溶血的情况下，设为能够以高精度进行多个分析对象成分的测定的血液分析方法及血液检查试剂盒。
用于解决技术课题的手段
本发明人等为了解决上述课题而经过深入研究的结果，发现在测定分析对象成分浓度的血液分析方法中，测定血液样本中的溶血量，并根据所测定的溶血量而校正稀释倍率，由此能够以高精度进行多个分析对象成分的测定，并完成了本发明，所述血液分析方法包括：用稀释液来稀释所采集的血液样本；使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值而确定稀释倍率；及分析血液样本中的分析对象成分的浓度。即，根据本发明，提供以下发明。
(1)一种血液分析方法，其测定分析对象成分的浓度，并包括：
用稀释液来稀释所采集的血液样本的工序；
使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值而确定稀释倍率的工序；及
分析血液样本中的分析对象成分的浓度的工序，所述血液分析方法，
测定上述血液样本中的溶血量，
根据上述所测定的溶血量而校正上述稀释倍率，
使用上述校正后的稀释倍率而分析上述分析对象成分的浓度。
(2)根据(1)所述的血液分析方法，其中，
上述血液分析方法通过使用血液检查试剂盒而进行，该血液检查试剂盒包括：
稀释液，用于稀释血液样本；
分离构件，用于从稀释后的血液样本中回收血浆成分；及
容器，用于容纳从稀释后的血液样本中回收的血浆成分。
(3)根据(2)所述的血液分析方法，其中，
上述稀释液含有不存在于血液中的标准成分，上述血液检查试剂盒是用于使用不存在于上述血液中的标准成分而分析血液样本中的分析对象成分浓度的血液检查试剂盒。
(4)根据(2)或(3)所述的血液分析方法，其中，
使用上述血液检查试剂盒从稀释后的血液样本中回收血浆成分，使用在所回收的血浆成分中，恒久性地存在的上述标准成分来确定稀释后的血液样本的稀释倍率，并分析血液样本中的分析对象成分的浓度。
(5)根据(2)至(4)中任一项所述的血液分析方法，其中，
上述稀释液含有不存在于血液中的标准成分，上述血液检查试剂盒使用不存在于上述血液中的标准成分来确定稀释后的血液样本的稀释倍率，并分析血液样本中的分析对象成分浓度。
(6)根据(1)至(5)中任一项所述的血液分析方法，其中，
上述恒久性地存在于血液中的标准成分是选自钠离子、氯离子、钾离子、镁离子、钙离子、总蛋白及白蛋白的至少一种物质。
(7)一种血液检查试剂盒，其用于在根据(1)至(6)中任一项所述的血液分析方法中使用，上述血液检查试剂盒包括：
稀释液，用于稀释血液样本；
分离构件，用于从稀释后的血液样本中回收血浆成分；及
容器，用于容纳从稀释后的血液样本中回收的血浆成分。
发明效果
根据本发明的血液分析方法及血液检查试剂盒，即使在血液样本溶血的情况下，也能够以进行高精度的分析。
附图说明
图1是本发明的实施方式所涉及的血液检查试剂盒的剖视图。
图2是表示溶血度、血浆中的总蛋白浓度及钾浓度的关系的图。
图3是表示溶血度、血浆中的钠浓度的关系的图。
图4是表示血浆中的总胆固醇浓度的、基于溶血度的有无校正的计算值的图。
图5是表示血浆中的肌酐浓度的、基于溶血度的有无校正的计算值的图。
具体实施方式
以下，对本发明进行详细说明。另外，用X～Y来表示的范围包括上限X和下限Y的值。有时将恒久性地存在于血液中的标准成分称作外部标准物质或外部标准。并且，有时将不存在于血液中的标准成分称作内部标准物质或内部标准。
本发明的目的在于提供一种血液分析方法，其为用于用缓冲液来稀释微量血液样本并分析对象成分的浓度，其中，当使用恒久性地存在于血液中的外部标准进行对象成分的分析时，能够以现有技术中所没有的精度求出稀释倍率。作为用于该目的的解决方式，测定血液样本中的溶血量，并对应于测定出的溶血量而校正稀释倍率，由此能够以高精度对分析对象成分的浓度进行分析。
根据本发明，在测定血液中的分析对象成分的测定方法中，在患者本身采集血液并用分离膜来过滤的情况下，能够实现能够进行高精度的对象物质测定的血液测定方法及血液分析试剂盒，所述对象物质测定中排除了由因分离速度等原因而产生的溶血引起的稀释倍率的误差因素。
本发明为一种血液分析方法，其测定分析对象成分的浓度，
上述血液分析方法包括：
用稀释液来稀释所采集的血液样本的工序；
使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值而确定稀释倍率的工序；
分析血液样本中的分析对象成分的浓度的工序；所述血液分析方法中，
测定血液样本中的溶血量，
对应于所测定的溶血量而校正稀释倍率，
使用校正后的稀释倍率而分析分析对象成分的浓度。
分析血液样本中的对象成分的浓度是指包括确定对象成分的浓度(即，将对象成分进行定量)，或者确定对象成分的浓度是规定的基准值以上，还是规定的基准值以下，且分析的方式并无特别的限定。
(溶血)
在本发明中，溶血是指通过振动或剪切等外部能量而破坏血球膜，由此血球内成分从血浆中溶出。若因血球中和血浆中的浓度不同而产生溶出，则导致血浆中的恒定性成分的浓度发生变化，并导致无法计算正确的稀释倍率。本发明中提供修正这些的方法。通过计算血浆中的血红蛋白浓度(mg/dL)而能够求出溶血的程度。在本发明中，将该血红蛋白浓度(mg/dL)值定义为溶血度。
在血浆中钠离子占阳离子的大部分，相对于此，在血球内，钾离子占阳离子的大部分，与血浆中的钠离子浓度相比，血球内的钠离子浓度非常低。并且，已知总蛋白量也与存在于血浆中的量不同，若产生溶血，则血浆中的钠离子浓度减少，总蛋白的浓度增加。从而，在作为用于测定稀释倍率的标准物质而使用这些钠离子或总蛋白的情况下，成为因产生溶血而所算出的稀释倍率产生偏差的结果，可能导致产生测定精度会降低。在本发明中，测定因溶血而溶出到血浆中的血红蛋白浓度，作为溶血度而确定溶血量，使用该溶血度来校正稀释液与血浆的混合物中的钠离子或总蛋白等标准物质的浓度，并使用所校正的标准物质的浓度来校正稀释倍率，使用该校正后的稀释倍率能够以高精度求出测定对象物质的血浆中的浓度。
〔血液样本的采集方法和采集量〕
在本发明中，采集血液样本并分析血液样本中的对象成分。本发明的血液分析方法中的血液的采集，可以由对象本身进行，也可以由医生等有资格人员进行。
作为优选方式，患者本人使用柳叶刀等带刀具的器具对指尖等制造伤口，采集渗出到皮肤外部的血液。为了减轻患者的负担，优选降低侵袭性并采集血液，更优选在采集血液时能够以无疼痛或疼痛感非常少的状态进行采血，该情况下，优选伤口的深度及大小较小，能够采集的血液也非常少。从而，用本发明的血液检查试剂盒来采集的样本的容量(即，采血量)优选为100μL以下，更优选为70μL以下，进一步优选为50μL以下。
〔恒久性地存在于血液中的标准成分〕
如上所述，关于血浆成分的稀释倍率高的稀释血浆的稀释后的对象成分，需要准确地分析存在于稀释前的血液的血浆中的对象成分的浓度。作为预先存在于稀释液中的物质的标准物质，在由其浓度变化率求出对象成分浓度的情况下，浓度变化的比例变得非常小，因此容易产生测定误差，存在测定的再现性变差的弊端。从而，本发明的血液分析方法通过使用恒久性地存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度的血液分析方法而进行。
在此，“使用”标准成分是指根据关于标准成分的标准值(恒定值)来确定用于分析对象成分浓度的稀释倍率。从而，使用恒久性地存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度，也是根据恒久性地存在于血液中的标准成分的恒定值(标准值)来确定稀释倍率，并分析对象成分的浓度。
恒久性地存在于血液中的标准成分，例如，可以举出钠离子、氯离子、钾离子、镁离子、钙离子、总蛋白及白蛋白等。血液样本的血清及血浆中所包含的这些标准成分的浓度为如下：钠离子浓度为134～146mmol/L(平均值：142mmol/L)、氯离子浓度为97～107mmol/L(平均值：102mmol/L)、钾离子浓度为3.2～4.8mmol/L(平均值：4.0mmol/L)、镁离子浓度为0.75～1.0mmol/L(平均值：0.9mmol/L)、钙离子浓度为4.2～5.1mmol/L(平均值：4.65mmol/L)、总蛋白浓度为6.7～8.3g/100mL(平均值：7.5g/100mL)、白蛋白浓度为4.1～5.1g/100mL(平均值：4.6g/100mL)。在本发明中，在为了缓解患者的疼痛感而采集的血液量非常少的情况下，也能够以高精度进行对象成分的测定。在所采集的血液为微量的情况下，需要以高精度测定存在于稀释液中的“恒久性地存在于血液中的标准成分”的浓度。若稀释倍率变高，则原来血液中所存在的成分的稀释液中的浓度降低，根据稀释倍率，在测定浓度时有可能包括测定误差。从而，将微量的血液成分稀释成稀释倍率高时，为了以充分高的精度检测上述标准成分，优选测定在微量的血液中以高浓度存在的标准成分。在本发明中，优选使用在恒久性地存在于血液样本中的成分中也以高浓度存在的钠离子(Na+)或氯离子(Cl-)。而且，恒久性地存在于上述血液中的标准成分中，最优选测定存在于血液中的量最高的钠离子。钠离子的平均值表示标准值(基准范围的中央值)，该值为142mmol/L，占血浆中的总阳离子的90摩尔％以上。
受检者的血液中血浆成分的占有率以容积的比率计约为55％，但因受检者的盐分摄取量的变化等变动。因此在通过本发明的血液分析方法而分析对象成分的情况下，使用恒久性地存在于血浆中的标准成分的标准值而确定血浆的稀释倍率，并使用所确定的稀释倍率来分析血液样本的血浆中的对象成分的浓度。该情况下，不存在血球的溶血，或者在即使存在溶血也少到能够忽略的程度的情况下，作为确定稀释倍率的方法，由血浆的稀释液中的外部标准物质(例如钠离子等)的测定值(浓度X)和包含于血液样本的血浆中的上述外部标准物质(例如钠离子等)已知浓度值(浓度Y；钠离子的情况下为142mmol/L)来算出血液样本中的血浆成分的稀释倍率(Y/X)，从而能够求出稀释倍率。使用该稀释倍率来测定血浆的稀释液中的对象成分的测定值(浓度Z)，通过在该测定值上乘以稀释倍率而可以测定实质上包含于血液样本的血浆中的分析对象成分的浓度[Z×(Y/X)]。
然而，患者或受检者在从血液的稀释液中分离血球等情况下，有时无法忽略血球尤其红血球被破坏，血球成分溶出到血液中的溶血的影响。本发明是关于这种情况也能够以高精度分析测定对象物质的血液分析方法。在本发明中，预先求出因溶血而溶出到血浆中的血红蛋白浓度与血浆中的标准成分浓度的变化的关系，由该关系来校正因血球的崩解而影响到稀释倍率的计算的、血浆稀释液中的标准物质浓度。通过如上所述校正稀释倍率，在本发明中，即使在已溶血的血液中也能够以高精度分析测定对象物质。
血浆中的外部标准物质(例如钠离子等)在已溶血的情况下发生变化。以钠离子为例，已溶血的情况的溶血度(血红蛋白浓度(mg/dL))与钠离子浓度变化量(mmol/L)X的关系由
式1：浓度变化量(X)＝-0.0482×溶血度(血红蛋白浓度(mg/dL))
来表示。在此，溶血度使用钠离子的已知浓度值(Y)、用稀释液来稀释血浆之后的血红蛋白的测定浓度值(W)、用稀释液来稀释血浆之后的钠离子浓度测定值(V)，能够通过下式进行近似。另外，已知浓度值(Y)的单位是mmol/L，钠离子浓度测定值(V)的单位是mmol/L。血红蛋白的测定浓度值(W)的单位是mg/dL。
式2：溶血度≈血红蛋白的测定浓度值(W)×(已知浓度值(Y)/钠离子浓度测定值(V))
使用由对应于该溶血的式1及式2求出的浓度变化量(X)，能够用已知浓度值(Y)与浓度变化量(X)之和来表示溶血时血浆中的外部标准物质的浓度值(Z)。另外，溶血时浓度值(Z)的单位是mmol/L。
式3：溶血时浓度值(Z)＝已知浓度值(Y)+浓度变化量(X)
从而，由血浆与稀释液的混合液中的外部标准物质(例如钠离子等)的浓度测定值(V)和溶血时外部标准物质的浓度值Z，能够通过下式而求出被校正的稀释倍率。该被校正的稀释倍率和血浆与稀释液的混合液中的测定对象物质的浓度测定值相乘，由此能够以高精度求出原本存在于血浆中的测定对象物质的浓度。
式4：被校正的稀释倍率＝溶血时浓度值(Z)/浓度测定值(V)
钠离子浓度及氯离子浓度能够通过例如火焰光度法、玻璃电极法、滴定法、离子选择电极法及酶活性法等而测定。
在钠离子的测定中，酶半乳糖苷酶的酶活性因钠离子而被活性化，因此能够使用以几μL来测定通过缓冲液而被稀释的非常低浓度钠离子试样的酶的测定方法。该方法能够适用于生物化学/免疫自动分析装置，在为了测定钠离子而不需要另一测定设备的方面效率高又经济。并且，作为标准物质，在使用总蛋白的浓度的情况下，作为总蛋白的测定方法，有双缩脲法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法(Bradford法)、劳里法、二辛可宁酸法(Bicinchoninic Acid：BCA)法、荧光法等公知的方法，根据测定试样的特性和灵敏度、试样量等，能够选择适合使用的方法。
并且，为了验证是否准确地进行基于溶血的校正，或者是否正常地进行血液稀释和血浆回收的方法，优选独立于血浆中的另一标准成分而另外求出稀释倍率，并确认该值是否与所求出的稀释倍率一致。一致是指在2个测定值(a，b)中，其差值相对于其平均值的比例即(a-b)/{(a+b)/2}×100为20％以下，优选为10％以下，更优选为5％以下。由此，可以验证血液样本中的对象成分的浓度的分析是否正常地进行。在此，作为除了钠离子及氯离子以外的恒久性地存在于血浆中的标准成分的例子，优选选自总蛋白或白蛋白，更优选为总蛋白。
〔不存在于血液中的标准成分〕
作为优选方式之一，使用恒久性地存在于血液中的标准成分和不存在于血液中的稀释液中的标准成分，并分析血液样本中的对象成分的浓度，也能够使用于由恒久性地存在于血液中的标准成分求出的稀释倍率的校正中。并且，也能够计算恒久性地存在于血液中的标准成分和稀释倍率。
不存在于血液中的标准成分能够添加到试剂盒中的稀释液(进行后述。)中而使用，以成为规定的浓度。作为不存在于血液中的标准成分，能够使用完全不包含于血液样本中的物质，或者即使包含也是极微量的物质。作为不存在于血液中的标准成分，优选使用对血液样本中的对象成分的测定不产生干扰的物质、不会因受到血液样本中的活体酶的作用而分解的物质、在稀释液中稳定的物质、不透过血球膜且不包含于血球中的物质、不吸附于缓冲液的保存容器上的物质、能够利用以高精度能够测定的检测系统的物质。
作为不存在于血液中的标准成分，优选即使在添加到稀释液的状态下长时间保管也稳定的物质。作为不存在于血液中的标准成分的例子，可以举出甘油三磷酸，作为碱金属，可以举出Li、Rb、Cs或Fr，而且，作为碱土类金属，可以举出Sr、Ba或Ra，其中，优选Li及甘油三磷酸。
这些不存在于血液中的标准成分在血液稀释后测定浓度时，通过添加第二试剂而显色，能够由该显色浓度来求出稀释血液中的浓度。例如，至于添加到稀释液中的锂离子的测定，能够利用螯合比色法(卤化卟啉螯合法：全氟-5,10,15,20-四苯基-21H,23H-卟啉)由生物化学自动分析装置以微量的血液容易测定大量的试样。
该情况下，在设为恒久性地不存在于血液中的标准成分的稀释液中的浓度C1、将血浆成分和稀释液进行了混合的混合液的恒久性地存在于血液中的标准成分的浓度C0的情况下，稀释倍率能够通过C1/(C1-C0)而求出。
血液检查试剂盒用于使用恒久性地存在于血液中的标准成分(也称作外部标准成分)和不存在于血液中的标准成分(也称作内部标准成分)来分析血液样本中的对象成分的浓度，通过使用该血液检查试剂盒，即，通过并用两种标准成分，能够实现可靠性更高的分析。
该情况下，优选由下述式5至8中的任一个式计算血液样本成分的稀释倍率，并对稀释液中的分析对象成分的浓度乘以上述稀释倍率，以分析血液样本的成分中的对象成分的浓度。
[数学式1]
式5：X＝(A+C)/(B+D)
式6：X＝{(A2+C2)1/2}/{(B2+D2)1/2}
式7：X＝a×(B+D)±b
(在此，a及b是系数，预先得到(B+D)和稀释倍率的数据，制作出式5中表示的标准曲线。)
式8：X＝A/B’
(在此，B’＝(A×D)/C。)
上述式中，如下定义A、B、C、D、B’及X。
A：含有内部标准成分的稀释液的测定吸光度
B：从A减去将血液样本成分进行了稀释的稀释液的吸光度的吸光度
C：作为恒定性物质的钠离子浓度为142mmol/L的所测定出的吸光度
D：将血液样本成分进行了稀释的稀释液的钠离子的吸光度
B’：基于由血浆钠的吸光度算出的稀释倍率的、稀释血浆中的不存在于血液中的标准成分的吸光度的校正值
X：血浆稀释倍率
作为求出稀释倍率时的另一种计算方法也优选如下方式：由使用了均方根法的式9计算稀释倍率，在稀释液中的分析对象成分的浓度上乘以由式9算出的稀释倍率，并分析血液样本成分中的对象成分的浓度。
[数学式2]
式9：X＝[{(A/B)2+(C/D)2}/2]1/2
血液样本的成分中的对象成分的浓度能够由稀释液中的对象成分的浓度根据上述稀释倍率而算出。
〔稀释液〕
在本发明的血液分析方法中，使用稀释液来稀释所采集的血液样本。用于稀释该血液样本的稀释液，优选为使用不含有恒久性地存在于血液中的标准成分的稀释液的方式。在本说明书中“不含有”是指“实质上不含有”。在此，“实质上不含有”是指完全不含有求出稀释倍率时所使用的恒定性物质，或者即使含有，也以对稀释了血液样本之后的稀释液的恒定性物质的测定不造成影响的程度的极微量的浓度含有的情况。在作为恒久性地存在于血液中的标准成分而使用钠离子或氯离子的情况下，优选作为稀释液而使用实质上不含有钠离子或氯离子的稀释液的方式。
在本发明中，在将患者或受检者所采集的血液样本进行稀释之后，能够输送到医疗机构或检查机构而分析对象成分的浓度。从采血到分析可能需要长时间，因此优选防止该期间稀释液中的血液的对象成分的分解和改性。在健康的人中，血液的pH通常以pH7.30～7.40程度保持为恒定。从而，为了防止对象成分进行分解和改性，稀释液优选为在pH6.5～pH8.0、优选在pH7.0～pH7.5、进一步优选在pH7.3～pH7.4的pH范围内具有缓冲作用的缓冲液，稀释液优选为含有抑制pH的变动的缓冲成分的缓冲液。
作为缓冲液的种类，已知有乙酸缓冲液(Na)、磷酸缓冲液(Na)、柠檬酸缓冲液(Na)、硼酸缓冲液(Na)、酒石酸缓冲液(Na)、Tris(三(羟甲基)氨基乙烷)缓冲液(Cl)、HEPES([2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸])缓冲液、磷酸缓冲生理盐水(Na)等。其中，作为pH7.0～pH8.0附近的缓冲液，具代表性的有磷酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液。然而，磷酸缓冲液含有磷酸的钠盐，Tris缓冲液的解离pKa为8.08，因此为了使其在pH7.0～pH8.0附近具有缓冲能力，通常，与盐酸组合而进行使用，HEPES的磺酸的解离的pKa为7.55，但为了调整离子强度恒定的缓冲溶液，通常，使用氢氧化钠、氯化钠及HEPES的混合物，由此，它们作为具有将pH保持为恒定的作用的缓冲液是有用的，但在本发明中，由于含有优选作为外部标准物质而使用的物质即钠离子或氯离子，因此不优选适用于本发明。
作为包含于本发明的试剂盒中的稀释液，优选使用不含有钠离子或氯离子的缓冲液。在本发明中使用的稀释液，优选包含：选自包括2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)、2-乙基氨基乙醇、N-甲基-D-葡糖胺、二乙醇胺及三乙醇胺的组中的至少1种氨基醇化合物；及选自包括Good's缓冲液(Good's buffer)中pKa为7.4附近的缓冲剂即也称作HEPES的2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸(pKa＝7.55)、也称作TES的N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸(pKa＝7.50)、也称作MOPS的3-吗啉代丙磺酸(pKa＝7.20)及也称作BES的N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙烷磺酸(pKa＝7.15)的组中的缓冲剂。上述中优选2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)与HEPES、TES、MOPS或BES的组合，而且，最优选2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)与HEPES的组合。
为了制备上述缓冲液，将氨基醇和Good's缓冲液以1:2～2:1、优选以1:1.5～1.5:1、进一步优选以1:1的浓度比进行混合即可。缓冲液的浓度不受限定，但氨基醇或Good's缓冲液的浓度为0.1～1000mmol/L，优选为1～500mmol/L，进一步优选为10～100mmol/L。
在缓冲液中，以稳定地保持分析对象成分为目的可以含有螯合剂、表面活性剂、抗菌剂、防腐剂、辅酶、糖类等。作为螯合剂，可以举出乙二胺四乙酸盐(EDTA)、柠檬酸盐、草酸盐等。作为表面活性剂，例如可以举出阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性表面活性剂或非离子表面活性剂。作为防腐剂，例如可以举出叠氮化钠和抗生物质等。作为辅酶，可以举出磷酸吡哆醛、镁及锌等。作为红血球稳定剂的糖类，可以举出甘露糖醇、葡萄糖、低聚糖等。尤其，通过添加抗生物质，能够抑制手指采血时从手指表面混入的一部分细菌的增殖，并能够实现因活体成分的细菌而引起的分解的稳定化。
这些缓冲液不包含恒久性地存在于血液中的标准成分和内部标准物质，且对测定系统不产生干扰是至关重要的。并且，优选通过这些缓冲液而被稀释的成分在生物化学/免疫自动分析装置的各种测定方法中也不会干扰测定，而且，血球也不会溶血或者在37℃下也能够稳定地保存活体成分。
血液样本中使用全血的情况下，需要用过滤器等分离经稀释的血液中的血球成分，因此将缓冲液的渗透压设为与血液相等(285mOsm/kg(mOsm/kg为在溶液的水1kg所具有的渗透压，表示离子的毫摩尔数))或血液以上，由此能够防止血球的溶血。渗透压能够通过不影响对象成分的测定、及恒久性地存在于血液中的标准成分的测定的盐类、糖类或缓冲剂等而调整为等渗。
〔稀释液的量、稀释倍率〕
作为血液检查，在检查肝功能、肾功能、新陈代谢等特定的器官、特定的疾病的情况下，为了获取器官和疾病特有的多个测定对象成分的信息而进行器官的状态、生活习惯的预测等，通常，同时进行多个测定对象成分的分析。例如，为了检查肝的状态，通常，测定ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(门冬氨酸氨基转移酶)、γ-GTP(γ-谷氨酰转肽酶)、ALP(碱性磷酸酶)、总胆红素、总蛋白、白蛋白等几种以上物质在血液中的浓度。如此，为了从一个血液样本中测定多个对象成分，也考虑到再次测定的可能性而需要一定程度的被稀释的血液的量。从而，作为稀释所采集的血液的稀释液，确保一定程度的量是至关重要的。试剂盒中的稀释液的量优选为血浆的容量的4倍以上(即，稀释倍率为血浆的容量的5倍以上)，更优选为10倍以上，进一步优选为14倍以上。例如，若将采血量设为50μL，则在血液量中的血浆量的比率为0.55的情况下，能够计算血浆的容量为27.5μL，若稀释液为360μL，则稀释倍率成为14倍。另外，若将由以血浆为基准的情况的稀释倍率通过计算而求出的血浆量设为R，将稀释液量设为S，则通过求出(R+0.55×S)/R能够概算以血液样本为基准的稀释倍率。血液分析中使用的稀释液的量相对于血液样本的容量优选为2.7倍以上，更优选为6.0倍以上，进一步优选为8.2倍以上。
〔用于从血液样本的稀释物中分离并回收血浆的分离器具〕
为了本发明的血液分析方法而被采集的血液样本有可能以被稀释的状态要经过长时间，直至进行分析。在这期间，例如若引起红血球的溶血，则存在于血球内的物质和酶等在血浆或血清中溶出，有可能对检查结果造成影响，并通过溶出的血红蛋白所具有的吸收，在由分析对象成分的光学吸收等光信息来测定分析对象成分量的情况下有可能造成影响。即使在溶血时，本发明也能够通过校正而以高精度进行对象物质的测定，但为了减少误差原因，优选将溶血的程度抑制成尽可能小。因此，优选将用于从血液样本的稀释物中分离并回收血浆的分离器具包括在血液检查试剂盒中的方式。分离器具的优选例为分离膜。分离膜例如能够如下使用：通过对血液样本的稀释液施加压力，由分离膜来捕获血球成分，并使血浆成分通过，从而分离血球并回收血浆成分。该情况下，优选使用抗凝血剂。并且，为了确保测定精度，优选使通过了分离膜的血浆不会向血球侧反流，为此，具体而言，能够将日本特开2003-270239号公报中记载的防反流构件作为试剂盒的构成要件。
[2]血液检查试剂盒
本发明的血液分析方法优选能够使用血液检查试剂盒而进行，所述血液检查试剂盒包括：稀释液，用于稀释血液样本；分离构件，用于从稀释后的血液样本中回收血浆成分；及容器，用于容纳从稀释后的血液样本中回收的血浆成分。
血液检查试剂盒更优选包括：采集器具，采集血液；第一容纳器具，容纳有稀释液；分离器具，用于从稀释后的血液样本中分离并回收血浆；保持器具，用于保持分离器具；第二容纳器具，用于容纳从稀释后的血液样本中回收的血浆。
血液检查试剂盒进一步优选除了上述器具以外，还包括用于将所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具。
作为本发明的血液检查试剂盒的一例，能够具备：用于稀释血液样本的成分的稀释液；容纳有稀释液的第一容纳器具；用于从通过稀释液而稀释后的血液样本中分离并回收血浆的分离器具；用于保持分离器具的保持器具；用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具；及用于使已容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具；在皮肤上制造伤口以使血液渗出到皮肤外部的针或柳叶刀、贴在伤口上的创可贴或消毒部件(例如浸渍异丙醇(70％异丙醇等)或乙醇等的无纺布)及操作说明书等。作为用于从稀释后的血液样本中回收血浆成分的分离器具，优选为分离膜的方式，更优选具有可分离血球成分的细孔的过滤器。
第一容纳器具及第二容纳器具可以将1个器具兼用作第一容纳器具及第二容纳器具，也可以是具备不同的器具的方式。为了使患者或进行稀释倍率的测定和分析对象成分的分析的测定者，可以确认稀释了容纳器具内的血液的稀释液，第一容纳器具及第二容纳器具优选由透明的原材料来制成。
保持分离器具的保持器具，优选为垫圈的方式。并且，作为密封器具，在容纳器具为筒形状的器具等的情况下，能够使用可以盖住开口的顶盖、具有螺旋状槽的盖或者橡胶塞子等。
根据上述结构，对血液和稀释液的混合容器赋予通过稀释液而稀释血液之后立即分离血浆血球的功能，由此能够赋予血液成分的稳定性和排除来自血球细胞的基于溶血的成分的变动的影响且血液采集后的试样的稳定性。
在本发明的血液分析方法中设为能够实现如下方法：即使为100μL以下的采血量，也能够以高的测定精度分析分析对象成分，在血液分析用血液检查试剂盒中优选包括操作说明书，该操作说明书记载有以100μL以下的较少的采血量也能够以高精度对患者进行测定等信息。
〔血液检查试剂盒的具体例〕
在优选方式之一中，血液分析用试剂盒包括稀释液、容纳有稀释液的第一容纳器具(也是用于容纳血液样本的稀释物的容纳器具。)、用于从用稀释液来稀释的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持分离器具的保持器具、用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具及用于使已容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具。作为具体的器具，能够使用例如日本专利第3597827号公报的图1至图13中所记载的器具。将日本专利第3597827号公报的图1作为本申请的图1而引用。
血液分离器具1具备采血容器2(有时也称作容纳有稀释液的容纳器具、第一容纳器具。也是用于容纳血液样本的稀释物的容纳器具。)、可嵌插于采血容器2中的筒体3(用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具)、可以盖装于筒体3上的顶盖活塞4、设置于顶盖活塞4的下端的密封盖5(密封器具)，使用之前，如图1所示，采血容器2的上端开口部通过顶盖6隔着密封件7而被封闭。本发明中的用于容纳稀释后的血液样本的容纳器具在图1的结构中对应于采血容器2和筒体3的组合。即，用于容纳稀释后的血液样本的容纳器具可以是1个，也可以是2个以上的组合。
采血容器2以透明的材质制成且呈圆筒状，其上端部在外表面形成有螺纹部8，内表面上突出设置有卡止部9。并且，在采血容器2的下端部形成有倒圆锥状底部10，在底部10的周围形成有圆筒状腿部11。腿部11具有与分析检查血液时使用的样品杯相同的外径，优选在其下端的对置的位置分别沿铅垂方向形成有狭缝槽12。而且，如图1所示，在采血容器2内也可以预先放入有所需要量例如500mm3的稀释液13。
筒体3由透明的材质制成且呈圆筒状，其上端部上形成有扩径部14。扩径部14经由薄壁部15而与主体部16连接。筒体3的下端部形成有缩径部18，在缩径部18的内表面形成有卡止突起部19。而且，在缩径部18的下端部形成有外锷部20(保持器具)，外锷部20的下端开口部通过过滤膜21(分离器具)而被覆盖，过滤膜21容许血液中的血浆的通过，并阻止血球的通过。
缩径部18的外周装配有硅橡胶制罩22(图1)。
顶盖活塞4由大致呈圆筒状的握持部26、与握持部26为同心且向下方延伸的芯棒部27构成。在握持部26的内侧上端部形成有筒体3的扩径部14可以嵌合的圆筒状的空间28，并且，其下方被螺刻，可以与螺纹螺合。芯棒部27其下端部29形成为销状，在下端部29可装卸地设置有密封盖5(参考图1)。密封盖5为硅橡胶制密封盖。
来自血液样本的稀释物的血浆的分离并回收操作，具体而言，如下进行。在容纳稀释液的采血容器2中放入所采集的血液之后，把持采血容器2的上部，一边注意避免产生气泡，一边将血液和稀释液充分地摇晃并混合。接着，将保持过滤膜21的筒体3(防止在血浆、血球分离时因环绕缸体侧面而产生的漏液)以过滤膜位于下方的方式插入到采血容器2中，并且缓慢地以一定的速度将过滤膜下压至采血容器2的底面。此时，血浆通过筒体3的过滤膜向上部上升，而血球残留在采血容器2的下部。之后，将顶盖活塞4缓慢地插入筒体3中，且由密封盖5来防止血浆和血球因反流的混合。
基于上述器具的血液分离方法的详细内容记载于日本专利第3597827号公报的0023～0026段落以及图12及图13中，该内容被引用于本说明书中。
本发明的血液分析用血液检查试剂盒中所包含的各要件的个数并无特别的限定，可以分别是1个，也可以是2个以上的多个。
从不易破损、卫生方面及价格等观点，本发明的血液分析用血液检查试剂盒中所包含的部件的材料优选为合成树脂。例如可以举出聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚偏氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙酸乙烯酯、聚氨酯、聚乙烯对苯二甲酸酯、聚乳酸、丙烯腈丁二烯苯乙烯树脂(ABS树脂)、丙烯腈-苯乙烯树脂(AS树脂)、丙烯酸树脂(PMMA)、聚碳酸酯、硅酮树脂等。
本发明的血液分析用血液检查试剂盒能够作为将各种部件全部收纳于收纳容器中的方式而提供。在本发明的血液分析用血液检查试剂盒中使用的部件将塑料、玻璃或橡胶作为原材料。
[3]其它
本发明还提供一种使用了本说明书的上述[1]及[2]中已说明的结构的血液检查试剂盒的血液分析方法。血液分析方法包括：对人的医疗行为(医生进行的行为)的方式和不是对人的医疗行为的方式(例如，采血人员为患者本身，且分析人员为除了医生以外的人员的方式、针对非人类动物的方式等)。本发明的血液分析方法可以通过对象本身采集血液的自行采血而实施，也可以通过医生等有资格人员使用注射器来采集血液的普通采血而实施。作为优选的方式，患者本人使用柳叶刀等带刀具的器具对指尖等制造伤口，采集渗出到皮肤外部的血液。
本发明的血液分析方法的成为对象的活体试样是血液，血液是包括血清或血浆的概念。血液的来源并不限定于人，也可以是除了人以外的动物(非人类动物)即哺乳类、鸟类及鱼类等。作为除了人以外的动物，例如可以举出马、牛、猪、羊、山羊、狗、猫、老鼠、熊、熊猫等。优选活体试样的来源是人。
在进行本发明的血液分析的情况下，分析的对象成分并无限定，血液中所包含的所有物质成为对象。例如可以举出临床诊断中使用的血液中的生物化学检查项目、肿瘤标志和肝炎的标志等各种疾病的标志等，可以举出蛋白质、糖、脂质、低分子化合物等。并且，测定时不仅物质浓度成为对象，而且酶等具有活性的物质的活性也成为对象。各对象成分的分析能够通过公知的方法而进行。
实施例
以下，关于本发明的实施例进行说明。
(稀释液的制备)
按以下组成制备了稀释液-1。渗透压表示使用OSMOATAT OM-6040(ARKRAY,Inc.制造)而测定的值。渗透压的单位是溶液的水1kg所具有的渗透压，表示离子的毫摩尔数。
HEPES 50mmol/L
2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)50mmol/L
D-甘露糖醇284mmol/L
氯化锂1mmol/L
EDTA-2K 0.8mmol/L
PALP(磷酸吡哆醛)0.05mmol/L
噻苯达唑0.0001质量％
阿米卡星硫酸盐0.0003质量％
硫酸卡那霉素0.0005质量％
美罗培南三水合物0.0005质量％
渗透压355mOsm/kg
pH 7.4
(钠浓度的测定)
上述制备出的稀释液的钠浓度的测定中，通过酶活性法而进行，该酶活性法利用β-半乳糖酶通过钠而进行活性化，并利用各稀释液中的钠浓度与β-半乳糖酶活性成比例关系的情况。具体而言，用不含钠离子的纯净水，将如上所述过滤的稀释液-1稀释成5倍之后秤量3μL，添加如下述制备的第一试剂52μL，在37℃下加热了5分钟，添加如下述制备的第二试剂26μL，通过用JCA-BM6050型生物化学自动分析装置(JEOL Co.,Ltd.制造)，在主波长410nm、副波长658nm下测定吸光度，由此求出了1分钟的吸光度的变化。由预先制成的校准曲线测定出钠浓度。
(钠测定试剂的制备)
制备出以下组成的钠测定试剂。
第一试剂
HEPES·LiOH(pH8.0)100mmol/L
D-甘露糖醇60mmol/L
N-乙酰半胱氨酸30mmol/L
硫酸镁1.52mmol/L
β-半乳糖酶1.1kU/L
TritonX-100 0.05质量％
第二试剂
HEPES·LiOH(pH8.0)100mmol/L
邻硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷15mmol/L
(血浆稀释混合液中的总蛋白浓度的测定)
进行了将双缩脲法作为测定原理的测定。准备双缩脲试剂：3.0mmol/L、硫酸铜400μL、酒石酸钾钠21.3mmol/L、NaOH 0.75mol/L，并与已稀释的血浆进行了混合。混合之后，在37℃下放置10分钟，一直等到在碱性条件下因血浆中的蛋白质和铜离子而形成540～560nm的呈青紫色的络合物，在545nm下测定吸光度，使用由标准溶液的吸光度得到的校准曲线，对血浆稀释混合液中的总蛋白浓度进行了定量。
1.样品制作
使用DEMECAL试剂盒(Leisure,Inc.制造)，将上述制备出的稀释液和与稀释倍率成为8.8倍的方式进行采集的血液进行测量并混合，制作出快速按压了制作稀释血浆时进行的分离作业的缸体的样品和缓慢地按压5秒钟以上的样品，制备出强制地产生溶血的试样和尽可能抑制了溶血的试样。通过以各种比例混合如此制备出的两个样品而制作出5种溶血度不同的样品。针对该5种样品，通过7180形日立自动分析装置，并使用血红蛋白定量试剂将血红蛋白浓度(mg/dL)进行定量，由此进行了溶血度的测定。将该血红蛋白浓度(mg/dL)设为溶血度。使用了自动分析装置和测定试剂的评价按照附件及操作说明书而所述。
2.基于标准成分的溶血度的影响的标准成分的准确度变动
作为存在于血液中的标准成分而使用总蛋白(TP)、钠离子(Na)、钾离子(K)，针对如上所述制作出的5种溶血度不同的样品，使用8.8倍的稀释倍率而求出未稀释状态的Na浓度、K浓度、TP浓度。图2及图3中示出在横轴上绘制血红蛋白的溶血度、在纵轴上绘制各自的浓度的图。如此，可知各含有浓度值对应于溶血度而变动。在血浆与稀释液的混合液中的标准成分的浓度在溶血时变高的情况下，表观稀释倍率变低，相反地，在标准成分的浓度变低的情况下，表观稀释倍率变高。
3.将总蛋白作为标准成分的情况的校正
对1.中制备出的5种溶血度不同的样品，通过7180形日立自动分析装置并使用上述TP浓度测定试剂而测定TP浓度，使用稀释倍率8.8算出各样品的血浆中的TP浓度。所算出的TP浓度应该成为与标准成分相同的值，但血浆中的TP浓度对应于溶血度而成为高值。这反映出血浆中的TP浓度因溶血而提高的结果。从而，在使用没有溶血的血浆中的TP浓度值(在未算出测定值的情况下为标准值)和血浆与稀释液的混合液中的TP浓度的测定值而如同下式求出稀释倍率的情况下，血浆与稀释液的混合液中的TP浓度测定值(A)对应于溶血度而变高，因此如(表1)所示表观稀释倍率变低。
式10：表观稀释倍率＝没有溶血的血浆中TP浓度值/TP浓度测定值(A)
没有溶血的血浆中TP浓度值及TP浓度测定值(A)的单位是g/dL。
在此，如下述所示，使用因溶血而增加的总蛋白的增加量，对血浆中的总蛋白浓度进行了校正。该校正是使用2.中求出的溶血度(血红蛋白浓度(mg/dL))和血浆稀释液中的血红蛋白测定浓度(U)并由下述式算出。
式11：校正TP浓度＝(没有溶血的血浆中的TP浓度值)-(血红蛋白测定浓度(U))×(稀释倍率)×0.0041
(式11中，0.0041表示溶血度与TP量的斜率)
校正TP浓度的单位是g/dL。
使用该校正TP浓度和TP浓度测定值(A)，关于5个样品，分别通过以下方法而算出稀释倍率。
式12：校正后稀释倍率＝校正TP浓度/TP浓度测定值(A)
将校正后的稀释倍率的计算结果记载于表1中。使用图2所示的溶血度和对应于溶血的TP浓度的关系而校正混合液中的被测定的TP浓度，由此确认到校正后的稀释倍率能够设为恒定。
4.总胆固醇(TC)的校正结果
使用在1.中使用的5个溶血度不同的样品，使用7180形日立自动分析装置及总胆固醇(TC)测定试剂而测定出总胆固醇(TC)作为分析对象成分。与3.同样地，在溶血校正前的总胆固醇浓度的计算中，对测定值乘以在3.中得到的表观稀释倍率值而算出。在溶血校正后的总胆固醇浓度的计算中，使用在3.中得到的校正后稀释倍率而算出。将算出的结果示于表1中。在不进行溶血校正的情况下，导致测定值对应于溶血度而降低，在溶血度高的情况下，导致误差大且低于基准范围的下限，但通过根据溶血度而校正稀释倍率而得到不受溶血度影响的结果。图4中示出有无溶血校正中的TC浓度相对于溶血度的变化的绘图。通过进行校正，可知无论溶血度如何，TC浓度也不发生变化。
[表1]
5.将钠设为标准成分的情况
在1.中使用的5种溶血度不同的样品中所包含的钠的测定中，使用7180形日立自动分析装置，并使用如上所述制备出的钠测定试剂进行了测定。与3.同样地，在溶血校正前的Na浓度的计算中，对Na浓度测定值乘以在3.中使用的8.8倍的稀释倍率的值而算出。将所算出的值(Na测定值)示于表2中。所算出的Na浓度应该成为与标准成分相同的值，但血浆中的Na浓度对应于溶血度而成为低值。这反映出血浆中的Na浓度因溶血而降低的结果。从而，在使用没有溶血的血浆中的Na浓度值(未算出测定值的情况下为标准值)和血浆与稀释液的混合液中的Na浓度的测定值如同下式求出稀释倍率的情况下，血浆与稀释液的混合液中的Na浓度测定值(B)对应于溶血度而变低，因此如表2所示，表观稀释倍率变高。
式13：表观稀释倍率＝没有溶血的血浆中的Na浓度值/Na浓度测定值(B)
没有溶血的血浆中的Na浓度值及Na浓度测定值(B)的单位是mmol/L。
在此，如下述所示，使用因溶血而减少的Na浓度的减少量，对血浆中的Na浓度进行了校正。该校正是使用在2.中求出的溶血度(血红蛋白浓度)和血浆稀释液中的血红蛋白测定浓度(U)并由下述式算出。
式14：校正Na浓度＝(没有溶血的血浆中的Na浓度值)+(血红蛋白测定浓度(U))×(稀释倍率)×0.0482
(式14中的0.0482表示在图3中求出的溶血度和Na量的斜率)
校正Na浓度的单位是mmol/L。
使用该校正Na浓度和Na浓度测定值(B)，关于5个样品，分别通过以下方法而算出稀释倍率。
式15：校正后稀释倍率＝校正Na浓度/Na浓度测定值(B)
将校正后的稀释倍率的计算结果记载于表2中。使用图3所示的溶血度和对应于溶血的Na浓度的关系而校正混合液中的被测定的Na浓度，由此确认到校正后的稀释倍率能够设为恒定。
6.肌酐(CRE)的校正结果
使用在1.中使用的5个溶血度不同的样品，使用7180形日立自动分析装置及肌酐(CRE)测定试剂而测定出肌酐(CRE)作为分析对象成分。与3.同样地，在溶血校正前的CRE浓度的计算中，对测定值乘以在5.中得到的表观稀释倍率的值而算出。在溶血校正后的CRE浓度的计算中，使用在5.中得到的校正后稀释倍率而算出。将所算出的结果示于表2中。在不进行溶血校正的情况下，导致测定值对应于溶血度而上升，在溶血度高的情况下，误差大且高于基准范围的上限，但通过根据溶血度而校正稀释倍率而得到不受溶血度的影响的结果。图5中表示有无溶血校正中的CRE浓度变化相对于溶血度的绘图。通过进行校正可知，无论溶血度如何，CRE浓度不发生变化。
[表2]
符号说明
1-血液分离器具，2-采血容器，3-筒体，4-顶盖活塞，5-密封盖，6-顶盖，7-密封件，8-螺纹部，9-卡止部，10-底部，11-腿部，12-狭缝槽，13-稀释液，14-扩径部，15-薄壁部，16-主体部，18-缩径部，19-卡止突起部，20-外锷部，21-过滤膜，22-罩，26-握持部，27-芯棒部，28-空间，29-下端部，31-高低差部，33-上端部，34-顶部。

Claims (7)

1.一种血液分析方法，该方法测定分析对象成分的浓度，并包括：
用稀释液来稀释所采集的血液样本的工序；
使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值来确定稀释倍率的工序；及
分析血液样本中的分析对象成分的浓度的工序，
其中，
所述血液分析方法测定所述血液样本中的溶血量，根据所述测定得到的溶血量来校正所述稀释倍率，使用所述校正后的稀释倍率来分析所述分析对象成分的浓度。
2.根据权利要求1所述的血液分析方法，其中，
所述血液分析方法通过使用血液检查试剂盒而进行，该血液检查试剂盒包括：
用于稀释血液样本的稀释液；
用于从稀释后的血液样本中回收血浆成分的分离构件；及
用于容纳从稀释后的血液样本中回收的血浆成分的容器。
3.根据权利要求2所述的血液分析方法，其中，
所述稀释液含有不存在于血液中的标准成分，所述血液检查试剂盒是用于使用不存在于所述血液中的标准成分来分析血液样本中的分析对象成分浓度的血液检查试剂盒。
4.根据权利要求2或3所述的血液分析方法，其中，
使用所述血液检查试剂盒从稀释后的血液样本中回收血浆成分，使用在所回收的血浆成分中恒久性地存在的所述标准成分来确定稀释后的血液样本的稀释倍率，并分析血液样本中的分析对象成分的浓度。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的血液分析方法，其中，
所述稀释液含有不存在于血液中的标准成分，所述血液检查试剂盒使用不存在于所述血液中的标准成分来确定稀释后的血液样本的稀释倍率，并分析血液样本中的分析对象成分浓度。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的血液分析方法，其中，
所述恒久性地存在于血液中的标准成分是选自钠离子、氯离子、钾离子、镁离子、钙离子、总蛋白及白蛋白中的至少一种物质。
7.一种血液检查试剂盒，其在权利要求1至6中任一项所述的血液分析方法中使用，所述血液检查试剂盒包括：
用于稀释血液样本的稀释液；
用于从稀释后的血液样本中回收血浆成分的分离构件；及
用于容纳从稀释后的血液样本中回收的血浆成分的容器。
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