CN102272127A

CN102272127A - Atp-结合盒转运蛋白调节剂

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Publication number: CN102272127A
Application number: CN2008801326311A
Authority: CN
Inventors: S.S.H.鲁亚; P.D.J.格鲁滕惠斯; F.范古尔; M.T.米勒; J.麦卡特尼; 周竞兰; B.伯尔; M.M.D.努马
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2008-11-06
Filing date: 2008-11-12
Publication date: 2011-12-07
Also published as: RU2011122461A; NO2019015I1; JP2014208719A; LTC2365972I2; AU2008363828A1; JP2016147887A; HK1216526A1; HRP20150288T1; CY2019023I1; IL239713A; CA2742821A1; ES2532753T3; ZA201103883B; KR20160013251A; CY1116067T1; EP2365972A1; CN108117546A; JP5728611B2; JP2015127345A; KR20110082188A

Abstract

本发明化合物及其药学上可接受的组合物是有用的包括囊性纤维化跨膜转导调节因子(“CFTR”)的ATP-结合盒(“ABC”)转运蛋白或其片段的调节剂。本发明还涉及使用本发明化合物治疗ABC转运蛋白介导的疾病的方法。

Description

ATP-结合盒转运蛋白调节剂

相关申请的交叉参照

本申请要求2008年11月6日提交的美国临时专利申请序号61/112,152以及61/112/145的优先权，其全部内容通过引用结合于本文。

技术领域

本发明涉及包括囊性纤维化跨膜转导调节因子(“CFTR”)的ATP-结合盒(“ABC”)转运蛋白或其片段的调节剂、其组合物和应用方法。本发明还涉及使用此类调节剂治疗ABC转运蛋白介导的疾病的方法。

背景技术

ABC转运蛋白是调节转运大多数药物、潜在的毒性药物和异生素以及阴离子的膜转运蛋白的蛋白家族。ABC转运蛋白是结合和利用细胞三磷酸腺苷(ATP)作为其特殊活性的同源膜蛋白。一些这样的转运蛋白被发现作为多药抗性蛋白(如MDRI-P糖蛋白质或多药抗性蛋白，MRPI)，使恶性癌细胞对化疗药物产生抵抗。迄今为止，已经鉴定出48种ABC转运蛋白并基于它们的序列特征和功效将它们分成7个家族。

ABC转运蛋白调节体内多种重要的生理作用并且提供对于有害环境的化合物的防御。因此，它们表现为重要的潜在药物标靶，以治疗与转运蛋白缺陷相关的疾病，阻止药物转运出靶细胞和干预其中调节ABC转运蛋白活性可为有益的其它疾病。

通常与疾病相关的ABC转运蛋白家族的一个成员是cAMP/ATP-介导的阴离子通道，CFTR。CFTR在包括吸收性和分泌性上皮细胞的多种细胞类型中表达，在那里它调节阴离子跨膜流动，以及其它离子通道和蛋白质的活性。在上皮细胞中，CFTR的正常功能对于维持电解质周身转运，包括在呼吸和消化组织的转运是重要的。CFTR由约1480个氨基酸组成，其编码细胞膜上形成跨膜区域的串联重复(tandem repeat)的蛋白质，每一个含六个跨膜螺旋区和一个核苷酸结合域。两个跨膜域由具有调节通道活性和细胞运输的多重磷酸化位点的大的、极性的、调节性的(R)-域连接。

已对编码CFTR的基因进行鉴定和测序(见Gregory，R.J.等(1990)Nature 347：382-386；Rich，D.P.等(1990)Nature 347：358-362)、(Riordan，J.R.等(1989)Science 245：1066-1073)。该基因的缺陷引起CFTR突变生产囊性纤维化(“CF”)，此为人最常致命的遗传性疾病。在美国，约每2,500个婴儿中有一个受到囊性纤维化的侵袭。在全美人口中，多至1000万人携带有缺陷的基因的单拷贝而没有明显的疾病表现。与此形成对照的是，具有CF相关基因的双拷贝的人罹患CF的衰弱和致命表现，包括慢性肺病。

在患有囊性纤维化的患者中，在呼吸上皮中内源性表达的CFTR的突变导致减少顶端阴离子分泌，引起离子和液体转运失衡。作为结果的阴离子转运减少，引起粘液在肺中聚集的增加和随后伴随的微生物感染，最终引起CF患者死亡。除了呼吸性疾病，CF患者还典型地罹患胃肠疾病和胰腺机能不全，一旦放任不予治疗，将导致死亡。另外，多数患囊性纤维化的男性无生育能力，并且患囊性纤维化的女性的生育能力降低。与CF相关基因的双拷贝的严重影响形成对照的是，具有CF相关基因的单拷贝的人表现出对于霍乱和由腹泻导致的脱水的抵抗增强—或许解释为CF基因在人群中具有相当高的频率。

CF染色体的CFTR基因的序列分析已经揭示了多种疾病发生突变(Cutting，G.R.等(1990)Nature 346：366-369；Dean，M.等(1990)Cell 61：863：870；以及Kerem，B-S.等(1989)Science 245：1073-1080； Kerem，B-S等(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：8447-8451)。迄今为止，已经鉴定了引起CF基因的突变的>1000种疾病(http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/)。最普遍的突变是于CFTR氨基酸序列的第508位的苯丙氨酸的缺失，并且常常被称为ΔF508-CFTR。此突变发生在约70％的囊性纤维化病例中并且与严重疾病有关。

ΔF508-CFTR中第508位残基的缺失阻止新生的蛋白质正确地折叠。此导致抑制突变体蛋白出ER和通过质膜。作为结果，存在于膜上的通道数量比在表达野生型CFTR的细胞中的观察到的大大减少。除了减少通行，该突变还导致通道门控缺失。膜中通道数量的减少和门控的缺失一起导致阴离子转运通过上皮减少，引起离子和液体转运缺陷。(Quinton，P.M.(1990)，FASEB J.4：2709-2727)。然而，研究显示，尽管少于野生型CFTR，膜中ΔF508-CFTR数量的减少是功能性的。(Dalemans等(1991)，Nature Lond.354：526-528；Denning等，同上；Pasyk和Foskett(1995)，J.Cell.Biochem.270：12347-50)。除了ΔF508-CFTR，其它引起导致通行、合成和/或通道门控缺失的CFTR突变的疾病，可通过向上或向下调节以改变阴离子分泌并改变疾病进程和/或严重程度。

虽然CFTR转运除了阴离子之外的多种分子，清楚的是此作用(阴离子的转运)表示转运离子和水通过上皮细胞的重要机制中的一个要素。另外的要素包括上皮Na⁺通道、ENaC、Na⁺/2Cl^-/K⁺辅助-转运蛋白、Na⁺-K⁺-ATP酶泵和基底膜K⁺通道，负责将氯摄取入细胞内。

这些要素共同作用通过它们的在细胞中的选择性表达和定位，实现通过上皮细胞的定向转运。通过存在于顶端膜的ENaC和CFTR的协调的活性以及在细胞基底面表达的Na⁺-K⁺-ATP酶泵和Cl-通道，发生氯吸收。从管腔侧继发性主动转运氯导致细胞内氯聚集，此然后可经由Cl^-通道被动离开细胞，产生矢量转运。Na⁺/2Cl^-/K⁺辅助-转运蛋白、Na⁺-K⁺-ATP酶泵和基底膜K⁺通道在基底面和CFTR在管腔侧的排列协调经由在管腔侧的CFTR的氯分泌。由于水很可能地不自身进行主动转运，其流过上皮依赖于由钠和氯的大量流动产生的微小的透过上皮的渗透梯度。

除了囊性纤维化，CFTR活性的调节可对不是直接由CFTR突变引起的其它疾病有益，所述疾病为诸如分泌性疾病和其它由CFTR介导的蛋白质折叠疾病。这些疾病包括，但不限于慢性阻塞性肺病(COPD)、干眼病和Sjögrens’s综合征。

COPD以进行性且不完全可逆的气流受限为特征。气流受限是由于粘液过度分泌、肺气肿和细支气管炎。突变体或野生型CFTR的激活剂对在COPD中常见的粘液过度分泌和减弱的粘液纤毛清除功能提供可能的治疗。具体是，增加阴离子通过CFTR的分泌可促进液体转运进入气道表面液体以使粘液水合并且使纤毛流体粘性最优化。此将导致纤毛清除功能增强并且减轻与COPD相关的症状。干眼病以泪液产生减少以及泪膜脂质、蛋白和粘蛋白特性不正常为特征。干眼有许多原因，其中的一些包括年龄、准分子激光(Lasik)眼科手术、关节炎、药物治疗、化学/热烧伤、过敏和疾病，诸如囊性纤维化和Sjögrens’s综合征。经由CFTR增加阴离子分泌将促进液体从角膜内皮细胞和眼周围的分泌腺转运以增加角膜水合。此将有助于减轻干眼病相关症状。Sjögrens’s综合征是自身免疫性疾病，其中免疫系统侵袭全身产生水份的腺体(moisture-producing glands)，包括眼、口、皮肤、呼吸组织、肝、阴道和肠。症状包括干眼、口干和阴道干燥以及肺病。该疾病还与类风湿性关节炎、系统性狼疮、系统性硬化症和多发性肌炎/皮肌炎相关。相信蛋白转运缺陷引起该疾病，对于该病的可选治疗方法有限。CFTR活性调节剂可与受该病累及的器官水合并且有助于解除相关症状。

如上所讨论的，相信ΔF508-CFTR的第508位残基的缺失阻止新生蛋白正确的折叠，导致该突变体蛋白质不能出ER并转运至质膜。结果，不足量的成熟蛋白存在于质膜和氯在上皮组织内的转运显著减少。事实上，由ER机制所致的该ABC转运蛋白的有缺陷的ER代谢过程的细胞现象，已经显示为不仅是CF病的基础，而且是大量其它单独的和遗传病的基础。ER机制可能失灵的两个途径是，或者通过降低与ER输出蛋白的偶连导致降解，或者通过ER聚集这些缺陷/错误折叠的蛋白质[Aridor M，等，Nature Med.，5(7)，pp 745-751(1999)；Shastry，B.S.，等，Neurochem.International，43，pp 1-7(2003)；Rutishauser，J.，等，Swiss Med Wkly，132，pp 211-222(2002)；Morello，JP等，TIPS，21，pp.466-469(2000)；Bross P.，等，HumanMut.，14，pp.186-198(1999)]。与第一类ER功能障碍相关的疾病是囊性纤维化(如以上所讨论的，由于错误折叠的ΔF508-CFTR)、遗传性肺气肿(由于a1-抗胰蛋白酶；非Piz变量)、遗传性血色素沉着病、凝血-纤维蛋白溶解缺陷，诸如蛋白质C缺乏、1型遗传性血管性水肿、脂质代谢过程缺陷(Lipid processing deficiencies)，诸如家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症(Abetalipoproteinemia)、溶酶体贮积病，诸如I-细胞疾病/假胡尔勒氏(pseudo-Hurler)病、粘多糖病(由于溶酶体代谢酶)、Sandhof/Tay-Sachs(源于β-氨基己糖苷酶)、II型克-纳综合征(Crigler-Najjar)(源于UDP-葡糖醛酸基-唾液酸基(glucuronyl-sialyc)-转移酶)、多发性内分泌病/高胰岛素血症、糖尿病(源于胰岛素受体)、拉龙侏儒(源于生长激素受体)、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退(源于前甲状旁腺激素)、黑色素瘤(源于酪氨酸酶)。与后一类ER功能障碍相关的疾病是CDG 1型糖基化病(Glycanosis)、遗传性肺气肿(源于α1-抗胰蛋白酶(PiZ变量)、先天性甲状腺功能亢进症、成骨不全(源于I、II、IV型原骨胶原)、遗传性低纤维蛋白原血症(源于纤维蛋白原)、ACT缺乏(源于α1-抗糜蛋白酶)、尿崩症(DI)、神经生理性尿崩症(Neurophyseal DI)(源于血管加压素(vasopvessin)激素/V2-受体)、肾原性尿崩症(源于水通道蛋白(Aquaporin)II)、进行性神经性肌萎缩(Charcot-Marie Tooth)综合征(源于外周髓鞘蛋白22)、佩-梅病(Perlizaeus-Merzbacher disease)、神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默病(源于βAPP和早老蛋白(presenilins))、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克(Pick’s)病、几种多聚谷氨酰胺神经性障碍，诸如亨廷顿(Huntington)舞蹈病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓和延髓性肌萎缩、齿状核红核苍白球路易体萎缩症(Dentatorubal pallidoluysian)和强直性肌营养不良，以及海绵状脑病(Spongiform encephalopathies)，诸如遗传性克-雅病(Creutzfeldt-Jakob disease)(源于朊病毒蛋白代谢过程缺陷)、法布里病(源于溶酶体α-半乳糖苷酶A)和施特劳斯纳(Straussler-Scheinker)综合征(源于Prp代谢过程缺陷)。

除了向上调节CFTR活性，通过CFTR调节剂减少阴离子分泌可有益于治疗分泌性腹泻，其中作为促分泌素激活氯转运的结果，上皮细胞水转运引人注目地增加。此机制包括提升cAMP并刺激CFTR。

腹泻有多种原因，腹泻病的主要因果关系，最常见的由过多氯转运产生，包括脱水、酸毒症、生长减慢和凋亡。

在世界许多地区，急性和慢性腹泻呈现为主要的疾病。腹泻是不足5岁的儿童营养不良和致死(5,000,000人死亡/年)的重要因素。

分泌性腹泻也是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)和慢性炎性肠病(IBD)患者的危险病症。每年从工业化国家到发展中国家去的1600万旅游者发生腹泻，腹泻严重程度和病例数，依旅游目的国和地区的不同而异。

家畜和宠物，诸如牛、猪和马、绵羊、山羊、猫和狗的腹泻，也已知为家畜腹泻病，是这些动物致死的主因。腹泻可由任何主要的变化，诸如断奶或身体运动引起，以及应答于多种细菌或病毒感染，并且一般发生在这些动物生命的最初几个小时内。

产生腹泻的最常见的细菌是具有K99菌毛抗原的肠毒性(enterotoxogenic)E-coli(ETEC)。腹泻的常见的致病病毒包括轮状病毒和冠状病毒。其它感染性因素，包括隐孢子虫(cryptosporidium)、蓝伯氏贾第虫和沙门氏菌属等。

轮状病毒感染的症状包括排泄水样粪便、脱水和虚弱。与轮状病毒感染相比，冠状病毒在新生动物中引起更严重的疾病并且具有更高的死亡率。然而，通常，年幼动物可被多于一种病毒感染，或者同时被病毒和细菌微生物感染。此极大地加大了该病的严重程度。

因此，需要可用于调节哺乳动物细胞膜上的ABC转运蛋白活性的ABC转运蛋白活性调节剂及其组合物。

需要使用这样的ABC转运蛋白活性调节剂治疗ABC转运蛋白介导的疾病的方法。

需要在体外哺乳动物细胞膜中调节ABC转运蛋白活性的方法。

需要可用于调节哺乳动物细胞膜上的CFTR活性的CFTR活性调节剂。

需要使用这样的CFTR活性调节剂治疗CFTR-介导的疾病的方法。

需要在体外哺乳动物细胞膜中调节CFTR活性的方法。

发明概述

现在已经发现，本发明化合物及其药学上可接受的组合物，作为ABC转运蛋白活性，尤其是CFTR活性的调节剂是有用的。这些化合物是：

和

在一些实施方案中，化合物是

。在其他实施方案中，化合物是

。在另外的实施方案中，化合物是

。

这些化合物和药学上可接受的组合物用于治疗多种疾病、紊乱或病症或减轻所述多种疾病、紊乱或病症的严重程度，所述多种疾病、紊乱或病症包括，但不限于囊性纤维化、遗传性肺气肿、遗传性血色素沉着病、凝血-纤维蛋白溶解缺陷，诸如蛋白质C缺乏、1型遗传性血管性水肿、脂质代谢过程缺陷，诸如家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症、溶酶体贮积病，诸如I-细胞疾病/假胡尔勒氏病、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-萨病(Sandhof/Tay-Sachs)、II型克-纳综合征(Crigler-Najjar)、多发性内分泌病/高胰岛素血症、糖尿病、拉龙侏儒、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退、黑色素瘤、CDG1型糖基化病、遗传性肺气肿、先天性甲状腺功能亢进症、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血症、ACT缺乏、尿崩症、神经生理性尿崩症、肾原性尿崩症、进行性神经性肌萎缩综合征、佩-梅病、神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克病、几种多聚谷氨酰胺神经性障碍，诸如亨廷顿舞蹈病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓和延髓性肌萎缩、齿状核红核苍白球路易体萎缩症和强直性肌营养不良，以及海绵状脑病，诸如遗传性克-雅病、法布里病、施特劳斯纳综合征、COPD、干眼病或Sjögrens's病。

出乎意料的是，本发明化合物具有治疗上的优异特性。

发明详述

I.定义

如本文使用的，除非另有所指，将应用以下定义。

如本文使用的，术语“ABC-转运蛋白”指ABC-转运蛋白的蛋白或其片段，其包含至少一个结合域，其中所述蛋白质或其部分存在于体内或体外。如本文使用的，术语“结合域”指在ABC-转运蛋白上的可结合至调节剂的域。参见，如，Hwang，T.C.等，J.Gen.Physiol.(1998)：111(3)，477-90。

如本文使用的，术语“CFTR”指囊性纤维化跨膜传导调节因子或其可能具有调节因子活性的突变体，包括，但不限于ΔF508 CFTR和G551D CFTR(参见，如，http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/，对于CFTR突变体)。

如本文使用的，术语“调节”指如，可测量地提高或降低，如活性。通过提高ABC转运蛋白，如，CFTR阴离子通道的活性，调节ABC转运蛋白活性，诸如CFTR活性的化合物，被称为激动剂。通过降低ABC转运蛋白，如，CFTR阴离子通道的活性，调节ABC转运蛋白活性，诸如CFTR活性的化合物，被称为拮抗剂。激动剂与ABC转运蛋白，诸如CFTR阴离子通道相互作用，提高受体转导应答于内源性配体结合的细胞内信号的能力。拮抗剂与ABC转运蛋白，诸如CFTR相互作用并且与内源性配体或底物竞争受体上的结合位点，以降低受体转导应答于内源性配体结合的细胞内信号的能力。

短语“治疗ABC转运蛋白介导的疾病或减轻所述疾病的严重程度”是指治疗直接由ABC转运蛋白和/或CFTR活性引起的疾病和减缓不直接由ABC转运蛋白和/或CFTR阴离子通道活性引起的疾病的症状。可由ABC转运蛋白和/或CFTR活性影响到的症状的疾病实例包括，但不限于囊性纤维化、遗传性肺气肿、遗传性血色素沉着病、凝血-纤维蛋白溶解缺陷，诸如蛋白质C缺乏、1型遗传性血管性水肿、脂质代谢过程缺陷，诸如家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症、溶酶体贮积病，诸如I-细胞疾病/假胡尔勒氏病、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-萨病(Sandhof/Tay-Sachs)、II型克-纳综合征(Crigler-Najjar)、多发性内分泌病/高胰岛素血症、糖尿病、拉龙侏儒、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退、黑色素瘤、CDG1型糖基化病、遗传性肺气肿、先天性甲状腺功能亢进症、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血症、ACT缺乏、尿崩症(DI)、神经生理性尿崩症、肾原性尿崩症、进行性神经性肌萎缩综合征、佩-梅病、神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克病、几种多聚谷氨酰胺神经性障碍，诸如亨廷顿舞蹈病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓和延髓性肌萎缩、齿状核红核苍白球路易体萎缩症和强直性肌营养不良，以及海绵状脑病，诸如遗传性克-雅病、法布里病、施特劳斯纳综合征、COPD、干眼病或Sjögrens's病。

为了本发明的目的，依据《化学和物理手册》(Handbook ofChemistry and Physics)第75版，CAS版本的元素周期表，确定化学元素。再有，有机化学的一般原理在Thomas Sorrell的《有机化学》(“Organic Chemistry”，University Science Books，Sausolito：1999)和Smith，M.B.和March，J.，John Wiley & Sons编著的第五版《March’s高等有机化学》(“March’s Advanced Organic Chemistry”，New York:2001)中描述，全部内容通过引用结合于本文。

如本文所描述的，本发明化合物可任选被一个或多个取代基取代，如在上文所概述的，或通过本发明的具体类别、亚类和种类所举例说明的。

如本文使用的，术语“脂族的”包含术语烷基、链烯基、炔基，其中每一个如以下所提到的被任选取代。

如本文使用的，“烷基”指含1-12个(如，1-8个、1-6个或1-4个)碳原子的饱和脂族烃基。烷基可为直链或支链。烷基的实例包括，但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正-戊基、正-庚基或2-乙基己基。烷基可被一个或多个取代基取代(即，任选取代)，所述取代基为诸如卤代、膦酸基(phospho)、脂环族基[如，环烷基或环烯基]、杂脂环族基[如，杂环烷基或杂环烯基]、芳基、杂芳基、烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、酰基[如，(脂族)羰基、(脂环族)羰基或(杂脂环族)羰基]、硝基、氰基、酰胺基[如，(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、烷基氨基羰基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、芳基氨基羰基或杂芳基氨基羰基]、氨基[如，脂族氨基、脂环族氨基或杂脂环族氨基]、磺酰基[如，脂族-SO₂-]、亚磺酰基、硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰、磺酰胺、氧代、羧基、氨基甲酰基、脂环族氧基、杂脂环族氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷氧基、杂芳基烷氧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基或羟基。不受任何限制，某些取代烷基的实例包括羧基烷基(诸如HOOC-烷基、烷氧基羰基烷基和烷基羰基氧基烷基)、氰基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰基烷基、芳烷基、(烷氧基芳基)烷基、(磺酰基氨基)烷基(诸如(烷基-SO₂-氨基)烷基)、氨基烷基、酰胺基烷基、(脂环族)烷基或卤代烷基。

如本文使用的，“链烯基”指含2-8个(如，2-12个、2-6个或2-4个)碳原子和至少一个双键的脂族碳基团。如烷基一样，链烯基可为直链或支链。链烯基的实例包括，但不限于烯丙基、异戊二烯基、2-丁烯基和2-己烯基。链烯基可被一个或更多个取代基任选取代，所述取代基为诸如卤代、膦酸基、脂环族基团[例如环烷基或环烯基]、杂脂环族基团[例如杂环烷基或杂环烯基]、芳基、杂芳基、烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、酰基[如，(脂族)羰基、(脂环族)羰基或(杂脂环族)羰基]、硝基、氰基、酰胺基[如，(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基烷基氨基羰基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、芳基氨基羰基或杂芳基氨基羰基]、氨基[如，脂族氨基、脂环族氨基、杂脂环族氨基或脂族磺酰基氨基]、磺酰基[如，烷基-SO₂-、脂环族-SO₂-或芳基-SO₂-]、亚磺酰基、硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰、磺酰胺、氧代、羧基、氨基甲酰基、脂环族氧基、杂脂环族氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷氧基、杂芳基烷氧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基或羟基。取代的链烯基的某些实例包括但不限于氰基链烯基、烷氧基链烯基、酰基链烯基、羟基链烯基、芳烯基、(烷氧基芳基)链烯基、(磺酰基氨基)链烯基(如(烷基-SO₂-氨基)链烯基)、氨基链烯基、酰氨基链烯基、(脂环族)链烯基或卤代链烯基。

如本文使用的，“炔基”指含2-8个(如，2-12个、2-6个或2-4个)碳原子和至少一个三键的脂族碳基团。炔基可为直链或支链。炔基的实例包括，但不限于炔丙基和丁炔基。炔基可被一个或更多个取代基任选取代，所述取代基为诸如芳酰基、杂芳酰基、烷氧基、环烷氧基、杂环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷氧基、硝基、羧基、氰基、卤代、羟基、硫代、巯基、硫烷基[如，脂族硫烷基或脂环族硫烷基]、亚磺酰基[如，脂族亚磺酰基或脂环族亚磺酰基]、磺酰基[如，脂族-SO₂-、脂族氨基-SO₂-或脂环族-SO₂-]、酰胺基[如，氨基羰基、烷基氨基羰基、烷基羰基氨基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、环烷基羰基氨基、芳基氨基羰基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、杂芳基羰基氨基或杂芳基氨基羰基]、脲、硫脲、氨磺酰、磺酰胺、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、脂环族基团、杂脂环族基团、芳基、杂芳基、酰基[如，(脂环族)羰基或(杂脂环族)羰基]、氨基[如，脂族氨基]、磺酰基、氧代、羧基、氨基甲酰基、(脂环族)氧基、(杂脂环族)氧基或(杂芳基)烷氧基。

如本文使用的，“酰胺基”包括“氨基羰基”和“羰基氨基”两者。当单独使用或与另一个基团结合使用时，这些术语指酰胺基，诸如在末端使用时为-N(R^X)-C(O)-R^Y或C(O)-N(R^X)₂-和在中间使用时为-C(O)-N(R^X)-或-N(R^X)-C(O)-，其中R^X和R^Y定义如下。酰胺基的实例包括烷基酰胺基(诸如烷基羰基氨基或烷基羰基氨基)、(杂脂环族)酰胺基、(杂芳烷基)酰胺基、(杂芳基)酰胺基、(杂环烷基)烷基酰胺基、芳基酰胺基、芳烷基酰胺基、(环烷基)烷基酰胺基或环烷基酰胺基。

如本文使用的，“氨基”指-NR^XR^Y，其中每一R^X和R^Y独立为氢、脂族基团、脂环族基团、(脂环族)脂族基团、芳基、芳脂族基团、杂脂环族基团、(杂脂环族)脂族基团、杂芳基、羧基、硫烷基、亚磺酰基、磺酰基、(脂族)羰基、(脂环族)羰基、((脂环族)脂族)羰基、芳基羰基、(芳脂族)羰基、(杂脂环族)羰基、((杂脂环族)脂族)羰基、(杂芳基)羰基或(杂芳脂族)羰基，其中每一个基团在本文定义并且被任选取代。氨基的实例包括烷基氨基、二烷基氨基或芳基氨基。当术语“氨基”不是末端基团(如，烷基羰基氨基)时，它表示为-NR^X-。R^X具有如上定义的相同含义。

如本文使用的，“芳基”单独使用或作为较大基团如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中的一部分时，指单环(如，苯基)；双环(如，茚基、萘基、四氢萘基、四氢茚基)；以及三环(如，芴基四氢芴基或四氢蒽基、蒽基)环系统，其中所述单环环系统是芳族环或双环或三环环系统中的至少一个环为芳族环。双环和三环基团包括苯并稠合的2-3元碳环。例如，苯并稠合的基团包括与两个或更多个C_4-8碳环部分稠合的苯基。芳基被一个或更多个取代基任选取代，所述取代基包括脂族[如，烷基、链烯基或炔基]；脂环族；(脂环族)脂族；杂脂环族；(杂脂环族)脂族；芳基；杂芳基；烷氧基；(脂环族)氧基；(杂脂环族)氧基；芳氧基；杂芳氧基；(芳脂族)氧基；(杂芳脂族)氧基；芳酰基；杂芳酰基；氨基；氧代(在苯并稠合的双环或三环芳基的非芳族碳环上)；硝基；羧基；酰胺基；酰基[如，(脂族)羰基；(脂环族)羰基；((脂环族)脂族)羰基；(芳脂族)羰基；(杂脂环族)羰基；((杂脂环族)脂族)羰基；或(杂芳脂族)羰基]；磺酰基[如，脂族-SO₂-或氨基-SO₂-]；亚磺酰基[如，脂族-S(O)-或脂环族-S(O)-]；硫烷基[如，脂族-S-]；氰基；卤代；羟基；巯基；硫氧基；脲；硫脲；氨磺酰；磺酰胺；或氨基甲酰基。或者，芳基可为未取代的。

取代的芳基的非限制性实例包括卤代芳基[如，单-、二(诸如对、间-二卤代芳基)和(三卤代)芳基]；(羧基)芳基[如，(烷氧基羰基)芳基、((芳烷基)羰基氧基)芳基和(烷氧基羰基)芳基]；(酰胺基)芳基[如，(氨基羰基)芳基、(((烷基氨基)烷基)氨基羰基)芳基、(烷基羰基)氨基芳基、(芳基氨基羰基)芳基和(((杂芳基)氨基)羰基)芳基]；氨基芳基[如，((烷基磺酰基)氨基)芳基或((二烷基)氨基)芳基]；(氰基烷基)芳基；(烷氧基)芳基；(氨磺酰)芳基[如，(氨基磺酰基)芳基]；(烷基磺酰基)芳基；(氰基)芳基；(羟基烷基)芳基；((烷氧基)烷基)芳基；(羟基)芳基、((羧基)烷基)芳基；(((二烷基)氨基)烷基)芳基；(硝基烷基)芳基；(((烷基磺酰基)氨基)烷基)芳基；((杂脂环族)羰基)芳基；((烷基磺酰基)烷基)芳基；(氰基烷基)芳基；(羟基烷基)芳基；(烷基羰基)芳基；烷基芳基；(三卤代烷基)芳基；对-氨基-间-烷氧基羰基芳基；对-氨基-间-氰基芳基；对-卤代-间-氨基芳基；或(间-(杂脂环族)-邻-(烷基))芳基。

如本文使用的，“芳脂族”诸如“芳烷基”指被芳基取代的脂族基团(如，C_1-4烷基)。“脂族”、“烷基”和“芳基”在本文中定义。芳脂族诸如芳烷基的实例为苄基。

如本文使用的，“芳烷基”指被芳基取代的烷基(如，C_1-4烷基)。“烷基”和“芳基”均在上面定义。芳烷基的实例是苄基。芳烷基被一个或更多个取代基任选取代，所述取代基为诸如脂族[如，烷基、链烯基或炔基、包括羧基烷基、羟基烷基或卤代烷基诸如三氟甲基]、脂环族[如，环烷基或环烯基]、(环烷基)烷基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、杂环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷氧基、杂芳烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、酰胺基[如，氨基羰基、烷基羰基氨基、环烷基羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基或杂芳烷基羰基氨基]、氰基、卤代、羟基、酰基、巯基、烷基硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰、磺酰胺、氧代或氨基甲酰基。

如本文使用的，“双环系统”包括形成两个环的8-12(如，9、10或11)元结构，此两个环具有至少一个共用原子(如，2个共用原子)。双环系统包括双脂环族(如，双环烷基或双环烯基)、双环杂脂族基团、双环芳基和双环杂芳基。

如本文使用的，“碳环”或“脂环族”包括“环烷基”和“环烯基”，其中每一个基团是如上提到的被任选取代。

如本文使用的， “环烷基”指3-10个(如，5-10个)碳原子的饱和的碳环单环-或双环(稠合或桥连)的环。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基、降冰片基、立方烷基(cubyl)、八氢-茚基、十氢-萘基、双环[3.2.1]辛基、双环[2.2.2]辛基、双环[3.3.1]壬基、双环[3.3.2.]癸基、双环[2.2.2]辛基、金刚烷基或((氨基羰基)环烷基)环烷基。

如本文使用的，“环烯基”指具有一个或更多个双键的3-10个(如，4-8个)碳原子的非芳族碳环。环烯基的实例包括环戊烯基、1，4-环己-二-烯基、环庚烯基、环辛烯基、六氢-茚基、八氢-萘基、环己烯基、环戊烯基、双环[2.2.2]辛烯基或双环[3.3.1]壬烯基。

环烷基或环烯基可被一个或更多个取代基任选取代，所述取代基为诸如磷(phosphor)、脂族[如，烷基、链烯基或炔基]、脂环族基团、(脂环族)脂族基团、杂脂环族基团、(杂脂环族)脂族基团、芳基、杂芳基、烷氧基、(脂环族)氧基、(杂脂环族)氧基、芳氧基、杂芳氧基、(芳脂族)氧基、(杂芳脂族)氧基、芳酰基、杂芳酰基、氨基、酰胺基[如，(脂族)羰基氨基、(脂环族)羰基氨基、((脂环族)脂族)羰基氨基、(芳基)羰基氨基、(芳脂族)羰基氨基、(杂脂环族)羰基氨基、((杂脂环族)脂族)羰基氨基、(杂芳基)羰基氨基或(杂芳脂族)羰基氨基]、硝基、羧基[如，HOOC-、烷氧基羰基或烷基羰基氧基]、酰基[如，(脂环族)羰基、((脂环族)脂族)羰基、(芳脂族)羰基、(杂脂环族)羰基、((杂脂环族)脂族)羰基或(杂芳脂族)羰基]、氰基、卤代、羟基、巯基、磺酰基[如，烷基-SO₂-和芳基-SO₂-]、亚磺酰基[如，烷基-S(O)-]、硫烷基[如，烷基-S-烷基]、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰、磺酰胺、氧代或氨基甲酰基。

如本文使用的，术语“杂环”或“杂脂环族”包括杂环烷基和杂环烯基，其中每一个基团如以下提到的被任选取代。

如本文使用的，“杂环烷基”指3-10元单环-或双环(稠合或桥连)(如，5-至10-元单环-或双环)的饱和环结构，其中一个或更多个环原子是杂原子(如，N、O、S或其组合)。杂环烷基的实例包括哌啶基、哌嗪基(piperazyl)、四氢吡喃基、四氢呋喃基、1，4-二氧戊环基、1，4-二噻烷基、1，3-二氧戊环基、

唑烷基、异

唑烷基、吗啉基、硫代吗啉基(thiomorpholyl)、八氢苯并呋喃基、八氢色烯基、八氢硫色烯基、八氢吲哚基、八氢吡啶基、十氢喹啉基、八氢苯并[b]噻吩基、2-氧杂-双环[2.2.2]辛基、1-氮杂-双环[2.2.2]辛基、3-氮杂-双环[3.2.1]辛基和2，6-二

烷-三环[3.3.1.0^3,7]壬基。单环杂环烷基可与苯基部分稠合，以形成诸如四氢异喹啉的结构，其被分类为杂芳基。

如本文使用的，“杂环烯基”指具有一个或更多个双键的单环-或双环(如，5-至10-元单环-或双环)非-芳环结构，且其中一个或更多个环原子是杂原子(如，N、O或S)。依据标准化学命名法对单环和双环杂脂族编号。

杂环烷基或杂环烯基可被一个或更多个取代基任选取代，所述取代基为诸如磷、脂族[如，烷基、链烯基或炔基]、脂环族基团、(脂环族)脂族基团、杂脂环族基团、(杂脂环族)脂族基团、芳基、杂芳基、烷氧基、(脂环族)氧基、(杂脂环族)氧基、芳氧基、杂芳氧基、(芳脂族)氧基、(杂芳脂族)氧基、芳酰基、杂芳酰基、氨基、酰胺基[如，(脂族)羰基氨基、(脂环族)羰基氨基、((脂环族)脂族)羰基氨基、(芳基)羰基氨基、(芳脂族)羰基氨基、(杂脂环族)羰基氨基、((杂脂环族)脂族)羰基氨基、(杂芳基)羰基氨基或(杂芳脂族)羰基氨基]、硝基、羧基[如，HOOC-、烷氧基羰基或烷基羰基氧基]、酰基[如，(脂环族)羰基、((脂环族)脂族)羰基、(芳脂族)羰基、(杂脂环族)羰基、((杂脂环族)脂族)羰基或(杂芳脂族)羰基]、硝基、氰基、卤代、羟基、巯基、磺酰基[如，烷基磺酰基或芳基磺酰基]、亚磺酰基[如，烷基亚磺酰基]、硫烷基[如，烷基硫烷基]、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰、磺酰胺、氧代或氨基甲酰基。

如本文使用的，“杂芳基”指具有4-15个环原子的单环、双环或三环环系统，其中一个或更多个环原子是杂原子(如，N、O、S或其组合)，并且，其中所述单环环系统是芳族环或双环或三环环系统中的至少一个环是芳族环。杂芳基包括具有2-3个环的苯并稠合的环系统。例如，苯并稠合的基团包括与一个或两个4-8元杂脂环族部分(如，中氮茚基(indolizyl)、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、喹啉基或异喹啉基)稠合的苯并基团。杂芳基的一些实例是吖丁啶基(azetidinyl)、吡啶基、1H-吲唑基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、

唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、异喹啉基、苯并噻唑基、呫吨、噻吨、吩噻嗪、二氢吲哚、苯并[1，3]间二氧杂环戊烯、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基(puryl)、噌啉基、喹啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基(phthalazyl)、喹唑啉基、喹喔啉基、异喹啉基、4H-喹嗪基、苯并-1，2，5-噻二唑基或1，8-萘啶基(naphthyridyl)。

不受任何限制，单环杂芳基包括呋喃基、噻吩基、2H-吡咯基、吡咯基、唑基、噻唑基(thazolyl)、咪唑基、吡唑基、异

唑基、异噻唑基、1，3，4-噻二唑基、2H-吡喃基、4-H-吡喃基(pranyl)、吡啶基、哒嗪基(pyridazyl)、嘧啶基、吡唑基、吡唑基(pyrazyl)或1，3，5-三嗪基(triazyl)。依据标准化学命名法对单环杂芳基编号。

不受任何限制，双环杂芳基包括中氮茚基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、喹啉基、异喹啉基、中氮茚基、异吲哚基、吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-萘啶基或蝶啶基。依据标准化学命名法对双环杂芳基编号。

杂芳基被一个或更多个取代基任选取代，所述取代基为诸如脂族[如，烷基、链烯基或炔基]；脂环族基团：(脂环族)脂族基团：杂脂环族基团：(杂脂环族)脂族基团：芳基；杂芳基；烷氧基；(脂环族)氧基；(杂脂环族)氧基；芳氧基；杂芳氧基；(芳脂族)氧基；(杂芳脂族)氧基；芳酰基；杂芳酰基；氨基；氧代(在双环或三环杂芳基的非芳族碳环或杂环上)；羧基；酰胺基；酰基[如，脂族羰基；(脂环族)羰基；((脂环族)脂族)羰基；(芳脂族)羰基；(杂脂环族)羰基；((杂脂环族)脂族)羰基；或(杂芳脂族)羰基]；磺酰基[如，脂族磺酰基或氨基磺酰基]；亚磺酰基[如，脂族亚磺酰基]；硫烷基[如，脂族硫烷基]；硝基；氰基；卤代；羟基；巯基；硫氧基；脲；硫脲；氨磺酰；磺酰胺；或氨基甲酰基。或者杂芳基可为未取代的。

取代的杂芳基的非限制性实例包括(卤代)杂芳基[如，单-和二 -(卤代)杂芳基]；(羧基)杂芳基[如，(烷氧基羰基)杂芳基]；氰基杂芳基；氨基杂芳基[如，((烷基磺酰基)氨基)杂芳基和((二烷基)氨基)杂芳基]；(酰胺基)杂芳基[如，氨基羰基杂芳基、((烷基羰基)氨基)杂芳基、((((烷基)氨基)烷基)氨基羰基)杂芳基、(((杂芳基)氨基)羰基)杂芳基、((杂脂环族)羰基)杂芳基和((烷基羰基)氨基)杂芳基]；(氰基烷基)杂芳基；(烷氧基)杂芳基；(氨磺酰)杂芳基[如，(氨基磺酰基)杂芳基]；(磺酰基)杂芳基[如，(烷基磺酰基)杂芳基]；(羟基烷基)杂芳基；(烷氧基烷基)杂芳基；(羟基)杂芳基；((羧基)烷基)杂芳基；[((二烷基)氨基)烷基]杂芳基；(杂脂环族)杂芳基；(脂环族)杂芳基；(硝基烷基)杂芳基；(((烷基磺酰基)氨基)烷基)杂芳基；((烷基磺酰基)烷基)杂芳基；(氰基烷基)杂芳基；(酰基)杂芳基[如，(烷基羰基)杂芳基]；(烷基)杂芳基和(卤代烷基)杂芳基[如，三卤代烷基杂芳基]。

如本文使用的，“杂芳脂族基团”(诸如杂芳烷基)指被杂芳基取代的脂族基团(如，C_1-4烷基)。“脂族”“烷基”和“杂芳基”已在上面定义。

如本文使用的，“杂芳烷基”指被杂芳基取代的烷基(如，C_1-4烷基)。“烷基”和“杂芳基”均已在上面定义。杂芳烷基被一个或更多个取代基任选取代，所述取代基为诸如烷基(包括羧基烷基、羟基烷基和卤代烷基诸如三氟甲基)、链烯基、炔基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、杂环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷氧基、杂芳烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、氨基羰基、烷基羰基氨基、环烷基羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、氰基、卤代、羟基、酰基、巯基、烷基硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰、磺酰胺、氧代或氨基甲酰基。

如本文使用的，“环部分”和“环状基团”指包括脂环族基团、杂脂环族基团、芳基或杂芳基的单-、二-和三环环系统，其中每一个已在前文定义。

如本文使用的，“桥连的双环系统”指其中的环是桥连的双环杂环脂环系统或双环脂环族环系统。桥连的双环系统的实例包括，但不限于金刚烷基、降冰片烷基、双环[3.2.1]辛基、双环[2.2.2]辛基、双环[3.3.1]壬基、双环[3.2.3]壬基、2-氧杂-双环[2.2.2]辛基、1-氮杂-双环[2.2.2]辛基、3-氮杂-双环[3.2.1]辛基和2，6-二氧杂-三环[3.3.1.0³ ^， ⁷]壬基。桥连的双环系统可被一个或更多个取代基任选取代，所述取代基为诸如烷基(包括羧基烷基、羟基烷基和卤代烷基诸如三氟甲基)、链烯基、炔基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、杂环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷氧基、杂芳烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、氨基羰基、烷基羰基氨基、环烷基羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、氰基、卤代、羟基、酰基、巯基、烷基硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰、磺酰胺、氧代或氨基甲酰基。

如本文使用的，“酰基”指甲酰基或R^X-C(O)-(诸如-烷基-C(O)-，还指“烷基羰基”)，其中R^X和“烷基”已在前文定义。乙酰基和新戊酰基是酰基的实例。

如本文使用的，“芳酰基”或“杂芳酰基”指芳基-C(O)-或杂芳基-C(O)-。芳酰基或杂芳酰基的芳基和杂芳基部分如前文定义的被任选取代。

如本文使用的，“烷氧基”指烷基-O-基团，其中“烷基”已在前文定义。

如本文使用的，“氨基甲酰基”指具有结构-O-CO-NR^XR^Y或-NR^X-CO-O-R^Z的基团，其中R^X和R^Y已在上面定义，并且R^Z可为脂族基团、芳基、芳脂族基团、杂脂环族基团、杂芳基或杂芳脂族基团。

如本文使用的，“羧基”在用作末端基团时指-COOH、-COOR^X、-OC(O)H、-OC(O)R^X；在用作中间基团时为或-OC(O)-或-C(O)O-。

如本文使用的，“卤代脂族”基团指被1-3个卤原子取代的脂族基团。例如，术语卤代烷基包括基团-CF₃。

如本文使用的，“巯基”指-SH。

如本文使用的，“磺基(sulfo)”基团在末端使用时指-SO₃H或-SO₃R^X，或在中间使用时指-S(O)₃-。

如本文使用的，“磺酰胺”基团在末端使用时指结构-NR^X-S(O)₂-NR^YR^Z以及在中间使用时指-NR^X-S(O)₂-NR^Y-，其中R^X、R^Y和R^Z已在上面定义。

如本文使用的，“氨磺酰”基团在末端使用时指结构-S(O)₂-NR^XR^Y或-NR^X-S(O)₂-R^Z；或者在中间使用时指-S(O)₂-NR^X-或-NR^X-S(O)₂-，其中R^X、R^Y和R^Z在上面定义。

如本文使用的，“硫烷基”在末端使用时指-S-R^X，而在中间使用时-S-，其中R^X已在上面定义。硫烷基的实例包括包括脂族-S-、脂环族-S-、芳基-S-等。

如本文使用的，“亚磺酰基”在末端使用时指-S(O)-R^X，而在中间使用时指-S(O)-，其中R^X已在上面定义。亚磺酰基的实例包括脂族-S(O)-、芳基-S(O)-、(脂环族(脂族))-S(O)-、环烷基-S(O)-、杂脂环族-S(O)-、杂芳基-S(O)-等。

如本文使用的，“磺酰基”在末端使用时指-S(O)₂-R^X，而在中间使用时指-S(O)₂-，其中R^X已在上面定义。磺酰基的实例包括脂族-S(O)₂-、芳基-S(O)₂-、(脂环族(脂族))-S(O)₂-、脂环族-S(O)₂-、杂脂环族-S(O)₂-、杂芳基-S(O)₂-、(脂环族(酰氨基(脂族)))-S(O)₂-等。

如本文使用的，“硫氧基”在末端使用时指-O-SO-R^X或-SO-O-R^X，而在中间使用时指-O-S(O)-或-S(O)-O-，其中R^X已在上面定义。

如本文使用的，“卤素”或“卤代”基团指氟、氯、溴或碘。

如本文使用的，由术语羧基构成的“烷氧基羰基”，单独或与另一个基团联用时指诸如烷基-O-C(O)-的基团。

如本文使用的，“烷氧基烷基”指烷基，诸如烷基-O-烷基-，其中烷基已在上面定义。

如本文使用的，“羰基”指-C(O)-。

如本文使用的，“氧代”指＝O。

如本文使用的，术语“膦酸基”指亚膦酸基和膦酸基。亚膦酸基和膦酸基的实例包括-P(O)(R^P)₂，其中R^P是脂族基团、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、(脂环族)氧基、(杂脂环族)氧基芳基、杂芳基、脂环族或氨基。

如本文使用的，“氨基烷基”指结构(R^X)₂N-烷基-。

如本文使用的，“氰基烷基”指结构(NC)-烷基-。

如本文使用的，在末端使用时，“脲”基指结构-NR^X-CO-NR^YR^Z以及“硫脲”基指结构-NR^X-CS-NR^YR^Z，而在中间使用时，指-NR^X-CO-NR^Y-或-NR^X-CS-NR^Y-，其中R^X、R^Y和R^Z已在上面定义。

如本文使用的，“胍基”指结构-N＝C(N(R^XR^Y))N(R^XR^Y)或-NR^X-C(＝NR^X)NR^XR^Y，其中R^X和R^Y已在上面定义。

如本文使用的，术语“脒基”指结构-C＝(NR^X)N(R^XR^Y)，其中R^X和R^Y已在上面定义。

一般，术语“邻位”指取代基在包含两个或更多个碳原子的基团中的排位，其中所述取代基连接至邻近的碳原子。

一般，术语“偕位”指取代基在包含两个或更多个碳原子的基团中的排位，其中所述取代基连接至同一个碳原子。

术语“在末端”和“在中间”指基团在取代基中的定位。当所述基团出现在取代基末尾并不再结合其余的化学结构时是末端基团。羧基烷基，即R^XO(O)C-烷基是末端使用羧基的实例。当所述基团出现在化学结构的取代基的中间时，为中间基团。烷基羧基(如，烷基-C(O)O-或烷基-OC(O)-)和烷基羧基芳基(如，烷基-C(O)O-芳基-或烷基-O(CO)- 芳基-)是在中间使用时的羧基的实例。

如本文使用的，“脂族链”指支链或直链脂族基团(如，烷基、链烯基或炔基)。直链脂族链具有结构-[CH₂]_v-，其中v是1-12。支链脂族链是被一个或更多个脂族基团取代的直链脂族链。支链脂族链具有结构-[CQQ]_v-，其中Q独立是氢或脂族基团；然而，至少在一种情况下Q将会是脂族基团。术语脂族链包括烷基链、烯基链和炔基链，其中烷基、链烯基和炔基在上面定义。

短语“任选取代的”与词组“取代的或未取代的”交互使用。如在本文描述的，本发明化合物可任选被一个或更多个取代基取代，所述取代基为诸如以上通常阐述的或如由本发明具体的类别、亚类和种类作为例证的基团。如在本文描述的，变量R₁、R₂和R₃及包含在本文所述结构式中的其它变量包括具体的基团，诸如烷基和芳基。除非另外指明，变量R₁、R₂和R₃及含在其中的其它变量的每一具体的基团，可被一个或更多个本文描述的取代基任选取代。特定基团的每一取代基再被一个至三个选自以下的基团任选取代：卤代、氰基、氧代、烷氧基、羟基、氨基、硝基、芳基、脂环族基团、杂脂环族基团、杂芳基、卤代烷基和烷基。例如，烷基可被烷基硫烷基取代，而烷基硫烷基可被一个至三个选自以下的基团任选取代：卤代、氰基、氧代、烷氧基、羟基、氨基、硝基、芳基、卤代烷基和烷基。作为又一个例子，(环烷基)羰基氨基的环烷基部分可被一个至三个选自以下的基团任选取代：卤代、氰基、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基和烷基。当两个烷氧基连接同一个原子或相邻的原子时，两个烷氧基可与它们连接的原子一起形成环。

一般，术语“取代”不论前面带有术语“任选”与否，均指以特定的取代基置换给定结构中的氢基。特定的取代基在以上的定义中和以下化合物及其实施例的说明中描述。除非另有所指，任选取代的基团可在基团的每一可取代的位上有取代基，并且在任何给定的结构中多于一个位可被多于一个选自特定的基团的取代基取代时，则所述取代基在每个位上可或者相同或者不同。环取代基，诸如杂环烷基，可联合于另一个环，诸如环烷基，形成螺接-双环系统，如，两个环共享一个共同的原子。如本领域普通技术人员将会认识到的是，由本发明预想的取代基的联合是那些导致形成稳定的或化学上可行的化合物的联合。

如本文使用的，短语“稳定的”或“化学上可行的”指在经受使它们的生成、检测和优选回收、纯化和应用于本文公开的一个或更多个目的的条件时基本不改变的化合物。在一些实施方案中，稳定的化合物或化学上可行的化合物是在保持40℃或以下温度、缺乏湿度或其它化学反应条件下至少一周时基本不改变的化合物。

如本文使用的，有效量被定义为需要对向所治疗的患者赋予治疗效应的量，所述量典型地根据患者的年龄、体表面积、体重和病症确定。剂量对于动物或人的相互关系(基于每平方米体表面积毫克计)由Freireich等，Cancer Chemother.Rep.，50：219(1966)描述。体表面积可由患者的身高和体重大致确定。参见，如，Scientific Tables，GeigyPharmaceuticals，Ardsley，New York，537(1970)。如本文使用的，“患者”指哺乳动物，包括人。

除非另有规定，本文中描述的结构还意欲包括该结构的所有异构形式(如，对映体、非对映异构体和几何(或构象)形式)；例如，每一个不对称中心的R和S构型、(Z)和(E)双键异构体和(Z)和(E)构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映体、非对映异构体和几何(或构象)形式混合物在本发明范围之内。除非另有规定，本发明化合物的所有互变异构形式在本发明范围之内。加之，除非另有规定，本文中描述的结构还意欲包括仅存在一个或多个同位素富集原子不同的化合物。例如，具有本发明结构的化合物，除了由氘或氚置换氢，或由¹³C-或¹⁴C富集的碳置换碳外，在本发明范围之内。这样的化合物，例如，可用作生物学检验中的分析工具或探针，或用作治疗剂。

本发明化合物是有用的ABC转运蛋白调节剂并且在治疗ABC转运蛋白介导的疾病中是有用的。

II.化合物

本发明的化合物是

在另一个方面，本发明涉及包括(i)本发明的化合物；和(ii)药学上可接受载体的药物组合物。在另一个实施方案中，所述组合物进一步包括选自以下的另外的附加剂：溶粘蛋白剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、CFTR矫正药或营养剂。在另一个实施方案中，所述组合物进一步包括选自公开于美国专利申请序号第11/165,818中的化合物，提交于2005年6月24日，公开为美国专利申请第2006/0074075号, 全部内容通过引用结合于本文。在另一个实施方案中，所述组合物进一步包括N-(5-羟基-2,4- 二叔-丁基-苯基)-4-氧代-lH-喹啉-3-羧酰胺。这些组合物用于治疗以下描述的包括囊性纤维化的疾病。这些组合物在以下描述的试剂盒中也是有用的。

在另一方面，本发明涉及增加细胞膜中功能性ABC转运蛋白数量的方法，所述方法包括使所述细胞与选自下式的化合物接触的步骤。

在此方法的一个实施方案中，所述疾病、紊乱或病症包括囊性纤维化、遗传性肺气肿、遗传性血色素沉着病、凝血-纤维蛋白溶解缺陷，诸如蛋白质C缺乏、1型遗传性血管性水肿、脂质代谢过程缺陷，诸如家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症、溶酶体贮积病，诸如I-细胞疾病/假胡尔勒氏病、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-萨病(Sandhof/Tay-Sachs)、II型克-纳综合征(Crigler-Najjar)、多发性内分泌病/高胰岛素血症、糖尿病、拉龙侏儒、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退、黑色素瘤、CDG1型糖基化病、遗传性肺气肿、先天性甲状腺功能亢进症、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血症、ACT缺乏、尿崩症、神经生理性尿崩症、肾原性尿崩症、进行性神经性肌萎缩综合征、佩-梅病、神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克病、几种多聚谷氨酰胺神经性障碍，诸如亨廷顿舞蹈病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓和延髓性肌萎缩、齿状核红核苍白球路易体萎缩症和强直性肌营养不良，以及海绵状脑病，诸如遗传性克-雅病、法布里病、施特劳斯纳综合征、COPD、干眼病和Sjögren’s病。

在另一方面，本发明涉及本用于检测体外或体内生物样品中ABC转运蛋白或其片段活性的试剂盒，所述试剂盒包含

(i) 第一组合物,含有选自以下的化合物

和

以及

b)检测所述ABC转运蛋白或其片段的活性。

在一个实施方案中，试剂盒进一步包含使用说明书，用于说明如何：a)使另外的组合物与生物样品接触；b)在有所述另外的化合物的存在下，检测所述ABC转运蛋白或其片段的活性；和c) 将在另外的化合物的存在下的ABC转运蛋白的活性，与在第一组合物下存在下的ABC转运蛋白的密度进行比较。

在一个实施方案中，试剂盒用于测定CFTR的密度。

在上述各个方面的某些实施方案中，化合物是

。

在上述各个方面的其他实施方案中，化合物是

。

在上述各个方面的还有一些实施方案中，化合物是

。

IV.通用合成流程

本发明的化合物可容易地由市售可获得的或通过已知方法获得的已知起始原料合成。在此提供制备本发明化合物的示例性合成途径。

V.制剂、施用和用途

因此在本发明的另一个方面，提供药学上可接受的组合物，其中这些组合物包含如本文描述的任一化合物并任选包含药学上可接受的载体、辅助剂或媒介物。在某些实施方案中，这些组合物还任选包含一种或多种另外的治疗剂。

还将认识到的是，某些本发明化合物可以用于治疗的游离形式存在，或适当时，作为其药学上可接受衍生物或前药。依据本发明，药学上可接受的衍生物或前药包括，但不限于药学上可接受的盐、酯、这样的酯的盐或任何其它加合物或衍生物，当施用于需要的患者时，能够直接或间接提供如本文描述的化合物或其代谢物或残余物。

如本文使用的，术语“药学上可接受的盐”指那些在正确的医学判断(sound medical judgment)范围内的盐，其适宜用于接触人和较低级动物的组织而不产生毒性、刺激性、变态反应等，并且与合理的效益/风险比相称。“药学上可接受的盐”指本发明化合物的的任何非毒性盐或酯的盐，当将它们施用于接受者时，能够直接或间接提供本发明化合物或其具抑制活性的代谢物或残余物。

药学上可接受的盐为本领域熟悉。例如，S.M.Berge等在J.Pharmaceutical Sciences，1977，66，1-19(此文通过引用结合于本文)中详细描述了药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上可接受的盐包括那些衍生于适宜的无机和有机酸以及碱的盐。药学上可接受的无毒性酸加成盐的实例是与无机酸形成的氨基的盐，所述无机酸为诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和过氯酸，或与有机酸形成的盐，所述有机酸为诸如乙酸、草酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸，或通过使用在本领域使用的其它方法，诸如离子交换下所成的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天门冬胺酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖苷盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫代氰酸盐、对-甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。衍生自适宜的碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。本发明还构思本文公开的化合物的任何含碱性氮基团的季铵化作用。通过这样的季铵化作用得到可水或油溶解的或分散的产品。典型的碱金属盐或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁盐等。适当时，更多的药学上可接受的盐包括采用带有相反电荷的离子，诸如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐形成的无毒性的铵、季铵和胺阳离子盐。

如上所描述的，本发明药学上可接受的组合物另外包含药学上可接受的载体、辅助剂或媒介物，如本文使用的，包括任何的和所有的溶剂、稀释剂或其它液体溶媒、分散或混悬辅助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、滑润剂等，与所需的具体剂型相称。E.W.Martin编著的雷氏药学大全(Remington’sPharmaceutical Sciences)第十六版(Mack出版公司，Easton，Pa.，1980)公开了多种用于配制药学上可接受的组合物的载体及其制备的已知技术。除非任何常规载体介质与本发明化合物不相容，诸如通过产生任何不想要的生物学效应，或另外以有害的方式与药学上可接受的组合物中的任何成分发生相互作用，其使用预期在本发明范围内。可作为药学上可接受的载体的原料的一些实例包括，但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白，诸如人血清白蛋白，缓冲物质，诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，诸如鱼精蛋白硫酸盐、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅胶、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、羊毛脂、糖类诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和纤维素乙酸酯；粉末化黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂诸如可可酯和栓剂用蜡；油类诸如花生油、棉籽油；红花油；芝麻油；橄榄油；玉米油和大豆油；二醇；诸如丙二醇或聚乙二醇；酯类诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂诸如氢氧化镁和氢氧化铝；褐藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏(Ringer’s)溶液；乙醇和磷酸盐缓冲溶液，和其它无毒性的适配滑润剂诸如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂，依据配药师的判断，防腐剂和抗氧化剂也可存在于组合物中。

在又一方面，本发明提供治疗涉及ABC转运蛋白活性的病症、疾病或紊乱的方法。在某些实施方案，本发明提供治疗涉及缺乏ABC转运蛋白活性的病症、疾病或紊乱的方法，所述方法包括给有需要的受治疗者，优选哺乳动物施用包含选自308-312、313、315、316、318、320和322化合物的组合物。

在某些优选的实施方案中，本发明提供治疗以下疾病的方法，所述疾病是囊性纤维化、遗传性肺气肿、遗传性血色素沉着病、凝血-纤维蛋白溶解缺陷，诸如蛋白质C缺乏、1型遗传性血管性水肿、脂质代谢过程缺陷，诸如家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症、溶酶体贮积病，诸如I-细胞疾病/假胡尔勒氏病(Pseudo-Hurler)、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-萨病(Sandhof/Tay-Sachs)、II型克-纳综合征(Crigler-Najjar)、多发性内分泌病/高胰岛素血症、糖尿病、拉龙侏儒、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退、黑色素瘤、CDG 1型糖基化病、遗传性肺气肿、先天性甲状腺功能亢进症、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血症、ACT缺乏、尿崩症(DI)、神经生理性尿崩症、肾原性尿崩症、进行性神经性肌萎缩综合征、佩-梅病、神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克病、几种多聚谷氨酰胺神经性障碍，诸如亨廷顿舞蹈病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓和延髓性肌萎缩、齿状核红核苍白球路易体萎缩症和强直性肌营养不良，以及海绵状脑病，诸如遗传性克-雅病(源于朊病毒蛋白质代谢过程缺陷)、法布里病、施特劳斯纳病、分泌性腹泻、多囊性肾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、干眼病和Sjögrens’s综合征，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效量的、包含选自308-312、313、315、316、318、320和322化合物或以上所列出的其优选实施方案的组合物的步骤。

依据备选的优选的实施方案，本发明提供治疗囊性纤维化的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效量的、包含选自308-312、313、315、316、318、320和322化合物或其以上所列出的优选的实施方案的组合物的步骤。

依据本发明，化合物或药学上可接受的组合物的“有效量”是有效治疗以下一种或多种疾病或减轻它们的严重程度的量，所述疾病是囊性纤维化、遗传性肺气肿、遗传性血色素沉着病、凝血-纤维蛋白溶解缺陷，诸如蛋白质C缺乏、1型遗传性血管性水肿、脂质代谢过程缺陷，诸如家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症、溶酶体贮积病，诸如I-细胞疾病/假胡尔勒氏病、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-萨病、II型克-纳综合征、多发性内分泌病/高胰岛素血症、糖尿病、拉龙侏儒、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退、黑色素瘤、CDG 1型糖基化病、遗传性肺气肿、先天性甲状腺功能亢进症、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血症、ACT缺乏、尿崩症(DI)、神经生理性尿崩症、肾原性尿崩症、进行性神经性肌萎缩综合征、佩-梅病、神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克病、几种多聚谷氨酰胺神经性障碍，诸如亨廷顿舞蹈病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓和延髓性肌萎缩、齿状核红核苍白球路易体萎缩症和强直性肌营养不良，以及海绵状脑病，诸如遗传性克-雅病、法布里病、施特劳斯纳病、分泌性腹泻、多囊性肾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、干眼病和Sjögrens’s综合征。

依据本发明方法，可使用有效治疗以下一种或多种疾病或减轻它们的严重程度的任何量和任何施用途径来施用所述化合物和组合物，所述疾病是囊性纤维化、遗传性肺气肿、遗传性血色素沉着病、凝血-纤维蛋白溶解缺陷，诸如蛋白质C缺乏、1型遗传性血管性水肿、脂质代谢过程缺陷，诸如家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症、溶酶体贮积病，诸如I-细胞疾病/假胡尔勒氏病、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-萨病、II型克-纳综合征、多发性内分泌病/高胰岛素血症、糖尿病、拉龙侏儒、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退、黑色素瘤、CDG 1型糖基化病、遗传性肺气肿、先天性甲状腺功能亢进症、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血症、ACT缺乏、尿崩症(DI)、神经生理性尿崩症、肾原性尿崩症、进行性神经性肌萎缩综合征、佩-梅病、神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克病、几种多聚谷氨酰胺神经性障碍，诸如亨廷顿舞蹈病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓和延髓性肌萎缩、齿状核红核苍白球路易体萎缩症和强直性肌营养不良，以及海绵状脑病，诸如遗传性克-雅病、法布里病、施特劳斯纳病、分泌性腹泻、多囊性肾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、干眼病和Sjögrens’s综合征。

所需要的精确量将依据受治疗者与受治疗者之间的差异而有所不同，这取决于种属、年龄和受治疗者的一般状况、感染的严重程度、具体的药剂、其施用模式等。优选以易于施用和均一剂量的剂量单位形式配制本发明化合物。如本文使用的表达“剂量单位形式”指适于被治疗患者的物理离散的药物单位。然而，应该理解，本发明化合物和组合物的每天总用量将由主治医生在合理的医学判断范围内决定。针对任何具体患者或生物体的特定的有效剂量水平将有赖于多种因素，包括被治疗的紊乱和紊乱的严重程度；所使用的特定化合物的活性；所使用的特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用次数、施用途径和所使用的特定化合物的排泄速率；治疗持续时间；与所用特定化合物联合或同时使用的药物等医学领域熟悉的因素。如本文使用的，术语“患者”指动物，优选哺乳动物，且更优选人。

可依据被治疗的感染的严重程度，经口服、直肠、胃肠外、脑室内(intracisternally)、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉剂、软膏剂或滴剂)、颊下(bucally)、作为口或鼻喷雾剂等，给人和其它动物施用本发明的药学上可接受的组合物。在某些实施方案，可按受治疗者体重计以每天约0.01mg/kg至约50mg/kg，优选约1mg/kg至约25mg/kg的剂量水平，一天一次或多次，经口服或胃肠外施用本发明化合物，以获得需要的治疗效应。

用于口服施用的液体剂型包括，但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物，液体剂中可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如，水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄基醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是，棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、丙三醇、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀释剂，口服组合物还可包括辅助剂，诸如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂。

可依据已知技术，使用适宜的分散剂或润湿剂和助悬剂配制可注射的制剂，例如，灭菌可注射的水性的或油质的混悬液。灭菌可注射制剂还可为在无毒性胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的灭菌可注射的溶液剂、混悬剂或乳剂，例如，作为在1，3-丁二醇中的溶液剂。在可使用的可接受的溶媒和溶剂中的是水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的、不易挥发的油常规用作溶剂或助悬介质。为此目的，可使用的任何温和的、不易挥发的油，包括合成的单甘油酯或甘油二酯。另外，脂肪酸诸如油酸用于可注射制剂中。

可注射的制剂可为已灭菌的，例如，通过用截留细菌的滤器过滤，或在用前通过将杀菌剂与以可溶解或分散于灭菌水或其它灭菌的可注射的介质中的灭菌固体组合物的形式混合实现。

为了延长本发明化合物的效应，经常值得做的是减缓化合物由皮下或肌肉注射的吸收。此可通过使用水溶性差的结晶的或非结晶原料的液体混悬液实现。那么，化合物的吸收速率依赖于其溶解速率，转而依赖于其晶体大小和晶形。或者，胃肠外施用的化合物形式的延迟吸收，通过将化合物溶解或悬浮于油性溶媒中实现。通过在生物可降解的聚合物诸如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微囊基质而制备可注射的贮库(depot)形式。依赖于化合物对聚合物的比率和所用的具体聚合物的性质，可控制化合物的释放速率。其它生物可降解的聚合物的实例，包括聚(原酸酯)和聚(酐)。也可通过将化合物包封在与肌体组织相容的脂质体或微乳剂中，制备贮库型可注射制剂。

用于直肠或阴道施用的组合物优选栓剂，其可通过将本发明化合物与适宜的无刺激性赋形剂或载体混合制备，所述赋形剂或载体为诸如在室温下为固体而在体温下为液体并因此在直肠或阴道腔熔化并释放活性化合物的可可酯、聚乙二醇或栓剂用蜡。

用于口服施用的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的、药学上可接受的赋形剂或载体混合，所述赋形剂或载体为诸如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或a)填充剂或增量剂诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂，例如，羧甲基纤维素、藻酸、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶，c)湿润剂诸如丙三醇，d)崩解剂诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻聚剂(retarding agents)诸如石蜡，f)吸收促进剂诸如季铵化合物，g)润湿剂，例如，十六烷基醇和丙三醇单硬脂酸酯，h)吸收剂诸如高岭土和斑脱土和i)滑润剂诸如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型中还可包含缓冲剂。

相似类型的固体组合物也可在使用这样的赋形剂如乳糖或乳糖以及高分子量聚乙二醇等的软和硬填充的明胶胶囊剂中用作填充剂。可用包衣材料和外壳诸如肠溶衣材料以及制药领域熟悉的其它包衣材料，制备片剂、糖衣丸剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型。它们可任选含有遮光剂并且还为一组合物，它们在肠道的某一部分，任选以延时的方式，仅或优先释放活性成分。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。相似类型固体组合物还可也可在使用这样的赋形剂如乳糖或乳糖以及高分子量聚乙二醇等的软和硬填充的明胶胶囊剂中用作填充剂。

活性化合物还可与以上提到的一个或更多个赋形剂形成微囊形式。可用包衣材料和外壳诸如肠溶衣材料、控制释放包衣材料以及制药领域熟悉的其它包衣材料，制备片剂、糖衣丸剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型。在这样的固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性稀释剂诸如蔗糖、乳糖或淀粉混合。在常规实践中，这样的剂型除包含惰性稀释剂外，还可包含另外的物质，如，成片滑润剂和其它成片辅剂如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型中还可包含缓冲剂。它们可任选含有遮光剂并且还可为一组合物，它们在肠道的某一部分，任选以延时的方式，仅或优先释放活性成分。可使用的包埋组合物的实例包括聚合体物质和蜡。

用于局部或透皮施用的本发明化合物剂型，包括软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液剂、喷雾剂、吸入剂或贴片剂。活性成分与药学上可接受的载体以及如可需要时任何必需的防腐剂或缓冲剂在灭菌条件下混合。眼用制剂、滴耳剂和滴眼剂也预期包含在本发明范围内。再有，本发明包括在提供控制传递化合物至体内方面具有更多优势的透皮贴片的应用。通过将化合物溶解或分散在适当的介质中，制备这样的剂型。还可使用吸收促进剂以增加化合物透过皮肤。通过或者提供速率控制膜或者通过使化合物分散于聚合物基质或凝胶中，可控制速率。

如以上一般描述的那样，本发明化合物用作ABC转运蛋白调节剂。因此，不希望受任何特殊理论的束缚，该化合物和组合物特别用于治疗涉及ABC转运蛋白过度活动或不活动的疾病、病症或紊乱或减轻它们的严重程度。当ABC转运蛋白过度活动或不活动涉及具体疾病、病症或紊乱时，则该疾病、病症或紊乱也可被称为“ABC转运蛋白-介导的疾病、病症或紊乱”。因此，在另一个方面，本发明提供用于治疗在疾病状态中涉及ABC转运蛋白过度活动或不活动的疾病、病症或紊乱或减轻它们的严重程度的方法。

可依据本领域通常描述的和本文实施例中描述的方法，分析用于本发明中作为ABC转运蛋白调节剂的化合物的活性。

还将意识到的是，可在联合疗法中使用本发明化合物和药学上可接受的组合物，即可与一个或更多个其它需要的疗法或医疗程序(medical procedures)同时、在所述疗法或医疗程序之前或之后施用化合物和药学上可接受的组合物。在联合方案中使用的具体的疗法(治疗或程序)的联合，将考虑其与需要的治疗和/或程序的兼容性以及考虑所需达到的治疗效应。还将意识到的是，所使用的疗法可在相同的紊乱(例如，可与另一个用于治疗相同紊乱的药物同时施用本发明化合物)上实现想要的效应，或者，它们可达到不同的效应(如，控制任何不良反应)。如本文使用的，正常施用以治疗或预防特定疾病或病症的另外的治疗剂，已知为“适于被治疗的疾病或病症”的。

存在于本发明组合物中的另外的治疗剂的数量，将只是将正常地施用的包含作为唯一活性剂的该治疗剂的组合物的数量。优选地，在目前公开的组合物中的另外的治疗剂的数量，将在正常地存在于组合物的数量的约50％-100％的范围内，所述组合物包含作为唯一治疗活性剂的该药物。

还可将本发明化合物或其药学上可接受的组合物整合进用于对可植入性装置，诸如假体(prostheses)、人工瓣膜、人造血管、支架和导管进行包被的组合物中。因此，在另一个方面，本发明包括用于包被植入装置的组合物，所述组合物包含如在以上一般描述的以及本文以类别和亚类描述的本发明化合物，和适宜用于包被所述可植入性装置的载体。在又一方面，本发明包括用组合物包被的可植入装置，所述组合物包含如在以上一般描述的以及本文以类别和亚类描述的本发明化合物，和适用于包被可植入装置的载体。适宜的包衣材料和包被的植入装置的一般制备在美国专利6,099,562；5,886,026；以及5,304,121中描述。包衣材料典型地为生物相容性聚合材料，诸如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯基乙酸乙烯酯及其混合物。包衣材料可任选再用适宜的氟代硅酮、聚多糖、聚乙二醇、磷脂或其组合涂层最外层而被包被(topcoat)，以赋予组合物的控释特性。

本发明的另一个方面涉及调节生物样品或患者(如，体外或体内)中的ABC转运蛋白活性，所述方法包括给患者施用式I化合物或包含所述化合物的组合物，或者使所述生物样品与式I化合物或包含所述化合物的组合物接触。如本文使用的，术语“生物样品”包括，但不限于细胞培养物或其提取物；从哺乳动物获得的活组织检查材料或其提取物；以及血液、唾液、尿液、粪便、精液、泪液或其它体液或其提取物。

生物样品中的ABC转运蛋白活性的调节用于为本领域技术人员已知的多种目的。这样的目的的实例包括，但不限于ABC转运蛋白在生物和病理现象中的研究；以及比较评价新的ABC转运蛋白调节剂。

在又一个实施方案中，提供在体外或体内调节阴离子通道活性的方法，所述方法包括使所述通道与选自308-312、313、315、316、318、320和322化合物接触的步骤。在优选的实施方案中，所述阴离子通道是氯通道或碳酸氢根通道。在其它优选的实施方案中，所述阴离子通道是氯通道。

依据备选的实施方案，本发明提供增加细胞膜中功能性ABC转运蛋白数量的方法，所述方法包括使所述细胞与选自308-312、313、315、316、318、320和322化合物接触的步骤。如本文使用的，术语“功能性ABC转运蛋白”指能够具有转运活性的ABC转运蛋白。在优选的实施方案中，所述功能性ABC转运蛋白是CFTR。

依据另一个优选的实施方案，通过测量跨膜电位检测ABC转运蛋白的活性。在生物样品测量跨膜电位的方法可使用本领域任何已知方法，诸如光感膜电位测试法(optical membrane potential assay)或其它的电生理学方法。

光感膜电位测试法利用由Gonzalez和Tsien(参见，Gonzalez，J.E.和R.Y.Tsien(1995) “Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells” Biophys J 69(4)：1272-80和Gonzalez，J.E.和R.Y.Tsien(1997) “Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescenceresonance energy transfer” Chem Biol 4(4)：269-77)描述的电压敏感性FRET传感器，联合应用测量荧光变化的仪器，诸如电压/离子探针读表(Voltage/Ion Probe Reader)(VIPR)(参见，Gonzalez，J.E.，K.Oades，等(1999) “Cell-based assays and instrumentation for screening ion-channeltargets”Drug Discov Today 4(9)：431-439)进行。

这些电压敏感性测试基于膜-溶性、电压敏感性染料，DiSBAC₂(3)与连接至质膜的外层(outer leaflet)并作为FRET供体的荧光磷脂，CC2-DMPE之间的荧光能量共振转移(FRET)的变化。膜电位(V_m)的变化引起带负电荷的DiSBAC₂(3)通过质膜重新分布，并且因此使自CC2-DMPE的能量转移的量发生变化。可使用VIPR^TM II监测荧光发射的变化，VIPR^TM II是一体化的液体处理器(integrated liquidhandler)和设计在96-或384-孔微滴定板中实施细胞基筛选技术(cell-based screens)的荧光检测器。

在另一个方面，本发明提供用于在体外或体内、在生物样品中检测ABC转运蛋白或其片段活性的试剂盒，所述试剂盒包含(i)由选自308-312、313、315、316、318、320和322或任何上述实施方案组成的组合物；和(ii)使用说明书，用于说明如何：a)使该组合物与生物样品接触；以及b)检测所述ABC转运蛋白或其片段的活性。在一个实施方案中，所述试剂盒还包含使用说明书，用于说明如何：a)使另外的组合物与生物样品接触；b)在有所述另外的化合物的存在下，检测所述ABC转运蛋白或其片段的活性；和c.)将在另外的化合物的存在下的ABC转运蛋白的活性，与存在选自308-312、313、315、316、318、320和322组合物下ABC转运蛋白的密度进行比较。优选的实施方案中，试剂盒用于测定CFTR的密度。

为了更全面地理解本文描述的本发明，提出以下实施例。应该理解这些实施例仅仅是用于举例说明的目的，并以任何方式构成对本发明的限制。

VI.制备和实施例

通用方法I：羧酸构件

将苄基三乙基氯化铵(0.025当量)和适宜的二卤代化合物(2.5当量)加入到取代的苯基乙腈中。将该混合物于70℃加热，然后将50％氢氧化钠(10当量)缓慢加入到该混合物中。将反应物于70℃搅拌12-24小时，以确保环烷基部分形成的完成，然后于130℃加热24-48小时，以确保完成由腈向羧酸的转化。深棕色/黑色反应混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取3次，以除去副产物。碱性水溶液用浓盐酸酸化至pH小于1，在pH4时开始形成沉淀，过滤沉淀物并用1M盐酸洗涤2次。使固体物质溶于二氯甲烷并用1M盐酸萃取2次，用饱和氯化钠水溶液萃取1次。有机溶液经硫酸钠干燥并蒸发至干，得到环烷基羧酸。收率和纯度通常大于90％。

实施例1:1-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基-环丙烷羧酸

将2-(苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)乙腈(5.10g31.7mmol)、1-溴-2-氯-乙烷(9.00mL 109mmol)和苄基三乙基氯化铵(0.181g，0.795mmol)的混合物于70℃加热，然后将50％(wt./wt.)氢氧化钠水溶液(26mL)缓慢加入到该混合物中。于70℃搅拌该反应物24小时，然后于130℃加热48小时。深棕色反应混合物用水(400mL)稀释，用等体积的乙酸乙酯萃取1次并用等体积的二氯甲烷萃取1次。碱性水溶液用浓盐酸酸化至pH小于1，过滤沉淀物并用1M盐酸洗涤。使固体物质溶于二氯甲烷(400mL)，用等体积的1M盐酸萃取2次，用饱和氯化钠水溶液萃取1次。有机溶液经硫酸钠干燥并蒸发至干，得到白色至浅灰白色固体(5.23g，80％) ESI-MS m/z计算值206.1，实测值207.1(M+1)⁺。保留时间2.37分钟。¹H NMR (400 MHz, DMSO- d₆) δ 1.07-1.11 (m, 2H), 1.38-1.42 (m, 2H), 5.98 (s, 2H), 6.79 (m, 2H), 6.88 (m, 1H), 12.26 (s, 1H)。

实施例2：1-(2,2-二氟-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷羧酸

2,2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-羧酸甲基酯

于75℃(油浴温度)，将5-溴-2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯(11.8g，50.0mmol)和四(三苯膦)钯(0)[Pd(PPh₃)₄、5.78g，5.00mmol]在含有乙腈(30mL)和三乙胺(10mL)的甲醇(20mL)溶液在一氧化碳气氛(55PSI)下搅拌15小时。过滤冷却的反应混合物并将滤液蒸发至干。残留物经硅胶柱层析纯化，得到粗品2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-羧酸甲基酯(11.5g)，其直接用于下一步骤。

(2,2-二氟-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-甲醇

于0℃，将溶于20mL无水四氢呋喃(THF)的粗品2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-羧酸甲基酯(11.5g)缓慢加入到氢化锂铝(4.10g，106mmol)在无水THF(100mL)中的悬浮液中。然后使该混合物升温至室温。于室温下搅拌1小时后，使该混合物冷却至0℃并用水(4.1g)处理，随后用氢氧化钠(10％水溶液，4.1mL)处理。过滤得到的浆状物并用THF洗涤。使合并的滤液蒸发至干，残留物经硅胶柱层析纯化，得到(2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-甲醇(7.2g，38mmol，76％经两步)，为无色油状物。

5-氯甲基-2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯

于0℃，将亚硫酰氯(45g,38mmol)缓慢加入到(2，2-二氟-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-甲醇(7.2g,38mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中。将得到的混合物于室温下搅拌过夜，然后蒸发至干。使残留物分配于饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)和二氯甲烷(100mL)之间。分离的含水层用二氯甲烷(150mL)提取和有机层经硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干，得到粗品5-氯甲基-2，2-二氟-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯(4.4g)，其直接用于下一步骤。

(2,2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈

将粗品5-氯甲基-2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯(4.4g)和氰化钠(1.36g，27.8mmol)在二甲亚砜(50mL)中的混合物于室温下搅拌过夜。将反应混合物倾入冰中，用乙酸乙酯(300mL)萃取。有机层经硫酸钠干燥并蒸发至干，得到粗品(2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈(3.3g)，其直接用于下一步骤。

1-(2,2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷甲腈

于70℃，将氢氧化钠(50％水溶液，10mL)缓慢加入到粗品(2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈，苄基三乙基氯化铵(3.00g，15.3mmol)和1-溴-2-氯乙烷(4.9g，38mmol)的混合物中。

于70℃，将该混合物搅拌过夜，然后用水稀释(30mL)反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥并蒸发至干，得到粗品1-(2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷甲腈，其直接用于下一步骤。

1-(2,2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷羧酸

将1-(2,2-二氟-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷甲腈(得自上个步骤的粗品)在10％氢氧化钠水溶液(50mL)回流2.5小时。冷却的反应混合物用乙醚(100mL)洗涤，水相用2M盐酸酸化至pH 2。过滤沉淀的固体，得到1-(2，2-二氟-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷羧酸，为白色固体(0.15g，1.6％经四步)。ESI-MS m/z计算值242.04，实测值241.58(M+1)+； 1H NMR (CDCl₃) δ 7.14-7.04 (m, 2H), 6.98-6.96 (m, 1H), 1.74-1.64 (m, 2H), 1.26-1.08 (m, 2H)。

下表2含有可市售获得的或通过上述三种方法之一制备的羧酸构件一览表：

表2：羧酸构件

名称	结构
		1-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基环丙烷-1-羧酸
1-(2,2-二氟苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷-1-羧酸

实施例3：5-叔-丁基-1H-吲哚-6-基胺

2-溴-4-叔-丁基-苯基胺

于室温下，向4-叔-丁基-苯基胺(447g，3.00mol)的DMF(500mL)溶液中滴加入在DMF(500mL)中的NBS(531g，3.00mol)。加入完成后，反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。有机层用水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。粗产物无须进一步纯化而直接用于下一步骤。

2-溴-4-叔-丁基-5-硝基-苯基胺

于室温下，将2-溴-4-叔-丁基-苯基胺(160g，0.71mol)滴加入到H₂SO₄(410mL)中，得到澄清溶液。然后将该澄清溶液冷却至-5和-10℃。滴加入KNO₃(83g，0.82mol)的H₂SO₄(410mL)溶液，同时使温度维持在-5至-10℃。完成后，将反应混合物倾入冰/水中并用EtOAc提取。合并的有机层用5％Na₂CO₃和盐水洗涤，经 Na₂SO₄干燥并浓缩。残留物经柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚1:10)，得到2-溴-4-叔-丁基-5-硝基-苯基胺，为黄色固体(150g，78％)。

4-叔-丁基-5-硝基-2-三甲基硅烷基乙炔基-苯基胺

在氮气氛下，向2-溴-4-叔-丁基-5-硝基-苯基胺(27.3g，100mmol)在甲苯(200mL)和水(100mL)的混合物中加入Et₃N(27.9mL，200mmol)、Pd(PPh₃)₂Cl₂(2.11g，3.00mmol)、CuI(950mg，0.500mmol)和三甲基甲硅烷基乙炔(21.2mL，150mmol)。在密封的压力烧瓶中，将该反应混合物于70℃加热2.5h，冷却至室温，通过硅藻土短塞过滤。用EtOAc洗涤滤饼。合并的滤液用5％NH₄OH溶液和水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。粗产物胶柱层析纯化(0-10％乙酸乙酯/石油醚)，得到4-叔-丁基-5-硝基-2-三甲基硅烷基乙炔基-苯基胺，为棕色粘稠液体(25g，81％)。

5-叔-丁基-6-硝基-1H-吲哚

在氮气氛下，向4-叔-丁基-5-硝基-2-三甲基硅烷基乙炔基-苯基胺(25g，86mmol)的DMF(100mL)溶液中加入CuI(8.2g，43mmol)。在密封的压力烧瓶中，将该反应混合物于135℃加热过夜，冷却至室温，通过硅藻土短塞过滤。用EtOAc洗涤滤饼。合并的滤液用水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。粗产物胶柱层析纯化(10-20％乙酸乙酯/己烷)，得到5-叔-丁基-6-硝基-1H-吲哚，为黄色固体(13g，69％)。

5-叔-丁基-1H-吲哚-6-基胺

将Raney镍(3g)加入到在甲醇(100mL)中的5-叔-丁基-6-硝基-1H-吲哚(15g，67mmol)中。于30℃，将该混合物在氢气(1 atm)搅拌3h。过滤除去催化剂。滤液经Na₂SO₄干燥并浓缩。粗品深棕色粘稠油经胶柱层析纯化(10-20％乙酸乙酯/石油醚)，得到5-叔-丁基-1H-吲哚-6-基胺，为灰色固体(11g，87％)。¹H NMR(300MHz，DMSO-d6) δ 10.3(br s，1H)，7.2(s，1H)，6.9(m，1H)，6.6(s，1H)，6.1(m，1H)，4.4(brs，2H)，1.3(s，9H)。

实施例4：5-氨基-2-叔-丁基-1H-吲哚-4-腈

a) KCN, DMSO; b) Pd/C, EtOAc

步骤a: 2-叔-丁基-5-硝基-lH-吲哚-4-腈

将KCN (3.4 g, 51 mmol)加入到在DMSO(30mL)中的2-叔-丁基-4-硝基-1H-吲哚(4.0g，17mmol)溶液中。于70℃，将该混合物在氢气搅拌3h，倒入水中(80 mL)并用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并在真空下浓缩。粗产物经硅胶柱层析(石油醚中含有7% EtOAc)纯化，得到2-叔-丁基-5-硝基-lH-吲哚-4-腈 (2.2 g, 53%)。¹H NMR(DMSO ，300MHz) δ 12.23(br s，1H)，8.09 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 7.75 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 6.50 (s, 1 H), 1.38 (s, 9 H). MS (ESI) m/z: 244.2 [M+H⁺]。

步骤b: 5-氨基-2-叔-丁基-5-硝基-lH-吲哚-4-腈

在氮气下将Raney镍(0.1g)加入到在EtOAc(10mL)中的2-叔-丁基-5-硝基-lH-吲哚-4-腈(550mg，2.3mmol)溶液中。于室温，将该混合物在氢气(1 atm)下搅拌1h。硅藻土过滤除去催化剂，在真空中蒸发滤液，得到5-氨基-2-叔-丁基-5-硝基-lH-吲哚-4-腈(250mg，51％)。¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 10.93(br s，1H)，7.25 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 6.49 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 5.94 (d, J = 2.1 Hz, 1 H), 5.40 (br s, 2 H), 1.30 (s, 9 H)。MS (ESI) m/z: 214.0 [M+H⁺]。

实施例6：N-(2-叔-丁基-4-氰基-lH-吲哚-5-基)-l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺

步骤a: N-(2-叔-丁基-4-氰基-lH-吲哚-5-基)-l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺

将l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基) 环丙烷碳酰氯(26 mg, 0.1 mmol) (0.1g)加入到在DMF (1 mL)中的5-氨基-2-叔-丁基-5-硝基-lH-吲哚-4-腈(21 mg, 0.1 mmol) 和三乙胺(41.7 μL, 0.3 mmol)溶液中。该反应在室温下过夜搅拌，然后过滤并经反相HPLC纯化以获得产物N-(2-叔-丁基-4-氰基-lH-吲哚-5-基)-l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺。ESI-MS m/z calc. 437.2, 发现438.7 (M+l)⁺。保留时间2.10分钟。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ11.48 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 1.5, 8.3 Hz, IH), 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.21 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 1.51 - 1.49 (m, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.18 - 1.16 (m, 2H)。

实施例7：N-(2-叔-丁基-4-氰基-l-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-基)-l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺

步骤a: 2-叔-丁基-1-(2-羟乙基)-5-硝基-lH-吲哚-4-腈

将2-叔-丁基-1-5-硝基-lH-吲哚-4-腈(200 mg, 0.82 mmol)、2-碘乙醇(77μL, 0.98 mmol), 碳酸铯(534 mg, 1.64 mmol) 和DMF (1.3 mL)混合物加热至90℃过夜。然后加入更多的2-碘乙醇(77μL, 0.98 mmol)，该反应在90℃搅拌3天。该反应混合物在乙酸乙酯和水间分配。水层用乙酸乙酯洗涤，然后将合并的乙酸乙酯层用水(x3)和盐水洗涤，经MgSO₄干燥并浓缩。粗产物经柱层析(50-100% CH₂Cl₂ -己烷)纯化以得到黄色固体产物(180mg, 经NMR检测纯度-25%, 产物与吲哚起始原料一起洗脱)。ESI-MS m/z 计算值 287.1, 实测值288.5(M+l)⁺。保留时间1.59分钟。¹H NMR NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12.23 (s, 1H), 8.14 (d, J=9.1 Hz,1H), 8.02 (d, J = 9.1 Hz,1H), 6.60 (s, 1H), 5.10 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.78-3.73 (m, 2H) 和1.49 (s, 9H) ppm。

步骤b: 5-氨基-2-叔-丁基-1-(2-羟乙基)-lH-吲哚-4-腈

在N₂下将Pd-C (5% wt, 18 mg)加入到在乙醇 (6mL)中的2-叔-丁基-1-(2-羟乙基)-5-硝基-lH-吲哚-4-腈(180 mg, 0.63 mmol)溶液中。该反应用N₂ (g)然后用H₂ (g)冲洗，在H₂(atm)室温下搅拌1.5小时。该反应通过硅藻土过滤并且浓缩以得到产物(150 mg, 93 %)。ESI-MS m/z 计算值 257.2, 发现258.5(M+l)⁺。保留时间1.26分钟。

步骤c：N-(2-叔-丁基-4-氰基-l-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-基)-l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺

将l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷碳酰氯(196 mg, 0.75 mmol) 加入到在二氯甲烷(2 mL)中的5-氨基-2-叔-丁基-1-(2-羟乙基)-lH-吲哚-4-腈(150 mg, 0.58 mmol) 和三乙胺 (242 μL, 1.74 mmol)溶液中。该反应在室温下搅拌过夜。该反应的混合物用二氯甲烷稀释并且在1N HCl(x2)、饱和NaHCO₃溶液(x2)、盐水下萃取，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。该残留物在DMSO中溶解，并通过反相HPLC纯化以获得产物，N-(2-叔-丁基-4-氰基-l-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-基)-l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺。ESI-MS m/z 计算值 481.2, 实测值482.5 (M+l)⁺。保留时间1.99分钟。¹H NMR NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ8.93 (s, 1H), 7.71 (d, J = 8.8 Hz, IH), 7.51 (s, IH), 7.42 (d, J = 8.3 Hz, IH), 7.33 (d, J = 1.6 Hz, IH), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, IH), 6.28 (s, IH), 5.05 (t, J = 5.6 Hz, IH), 4.42 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.70 - 3.65 (m, 2H), 1.51 - 1.48 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.19 - 1.16 (m, 2H)。

实施例8:2-(2-叔-丁基-5-(l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺) -6-氟-1H-吲哚-1-基)- N,N,N-三甲基氯乙铵

步骤a：2-(2-叔-丁基-5-(l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺)-6-氟-1H-吲哚-1-基)-氨基甲酸叔丁基乙酯

将N,N –二甲基甲酰胺(8.204 μL, 0.1064 mmol)加入至在亚硫酰氯(81.28 μL, 1.117 mmol)中的l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸(90.14 mg, 0.3722 mmol)。在真空移除过量亚硫酰氯和N,N –二甲基甲酰胺以获得酰基氯前在室温下搅拌该反应混合物30分钟。然后将酰基氯溶解在二氯甲烷(1.5 mL)中，然后慢慢地将其加入至在二氯甲烷(1.5 mL)中的2-(5-氨基-2-叔丁基-6-氟-1H-吲哚-1-基) 氨基甲酸叔丁基乙酯(156.1 mg, 0.4467 mmol)和三乙胺 (155.6μL, 1.117 mmol)溶液中。该反应混合物在室温下搅拌21小时。反应混合物用二氯甲烷(5 mL)稀释，并用1N HCl水溶液(5mL)以及饱和NaHCO₃溶液(5mL)冲洗。该有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗产物经硅胶柱层析(在已烷0-30% 中的乙酸乙酯)纯化以得到白色固体的2-(2-叔-丁基-5-(l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺)-6-氟-1H-吲哚-1-基)-氨基甲酸叔丁基乙酯(140 mg, 66%)。ESI-MS m/z 计算值 573.2, 实测值574.7 (M+l)⁺。保留时间2.41分钟。¹H NMR NMR (400 MHz, DMSO) d 8.35 (s, IH), 7.53 (s, IH), 7.44 - 7.41 (m, 2H), 7.34 - 7.29 (m, 2H), 7.13 - 7.10 (m, IH), 6.17 (s, IH), 4.24 - 4.20 (m, 2H), 3.20 - 3.17 (m, 2H), 1.48-1.45 (m, 2H), 1.41 (s, 18H) and 1.15-1.12 (m, 2H) ppm。

步骤b：N-(1-(氨基乙基)-2-叔-丁基-6-氟-1H-吲哚-5-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺

将三氟乙酸(444μL,5.8 mmol)加入至在二氯甲烷(1.8 mL)中的2-(2-叔-丁基-5-(l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺)-6-氟-1H-吲哚-1-基)-氨基甲酸叔丁基乙酯(137.5 mg, 0.24 mmol)溶液中。该混合物在室温下搅拌1小时。用二氯甲烷稀释该反应，并用饱和NaHCO₃溶液(3mL)和盐水(3mL)洗涤。该有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗产物经硅胶(在二氯甲烷中的0-10% 甲醇)柱层析纯化以得到白色固体的N-(1-(氨基乙基)-2-叔-丁基-6-氟-1H-吲哚-5-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺(140 mg, 66%)。ESI-MS m/z 计算值 573.2, 实测值474.5 (M+l)⁺。保留时间1.61分钟。

步骤c：2-(2-叔-丁基-5-(l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺) -6-氟-1H-吲哚-1-基)- N,N,N-三甲基氯乙铵

将碘代甲烷(336.8 mg, 147.7 μL, 2.37 mmol)和三乙胺(106.9 mg, 147.2 μL, 1.05 mmol)中加入在N,N–二甲基甲酰胺(1 mL)中的N-(1-(氨基乙基)-2-叔-丁基-6-氟-1H-吲哚-5-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺(50 mg, 0.1056 mmol)澄清溶液中。在80℃加热该混合物2小时。粗产物经反相制备HPLC纯化。将22mg产物溶解在甲醇（112 μL, 0.14 mmol)在中的1.25M HCl中。在60℃加热1小时。该反应在室温下冷却。首先干燥产物，然后将其溶解在二氯甲烷中，并再次干燥。重复四次上述步骤以得到2-(2-叔-丁基-5-(l-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酰胺) -6-氟-1H-吲哚-1-基)- N,N,N-三甲基氯乙铵(140 mg, 66%)。ESI-MS m/z 计算值 516.25, 实测值516.7 (M+l)⁺。保留时间1.69分钟。¹H NMR NMR (400 MHz, DMSO)d 8.43 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.45 - 7.41 (m, 2H), 7.36 - 7.31 (m, 2H), 6.27 (s, 1H), 4.74 - 4.70 (m, 2H), 3.57 - 3.53 (m, 2H), 3.29 (s, 9H), 1.48 - 1.42 (m, 11H), and 1.15 (dd, J = 3.9, 6.8 Hz, 2H) ppm。

实施例9:2-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚

步骤a：3-氟-4-硝基苯胺

将在CH₂Cl₂ (400 mL)和6N盐酸(800 mL)中的N-(3-氟-4-硝基-苯基)-2, 2-二甲基-丙酰胺(87.0 g, 0.36 mol)的混合物加热回流2小时。该反应混合物冷却至室温。该反应混合物用1000mL乙酸乙酯稀释，并且分批加入碳酸钾(500.0 g)。分离该水溶液，且有机层用盐水洗涤，并经无水Na₂SO₄干燥。减压干燥以除去该溶剂。该残留物经硅胶(石油醚/乙酸乙酯30:1)柱层析纯化以得到3-氟-4-硝基苯胺(56.0 g, 99 %)。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.07 (t, J = 8.7 Hz, 1 H), 7.86 (dd, J= 2.1, 13.2 Hz 1 H), 7.59 (brs, 2 H), 7.22 (s, 1 H)。

步骤b：2-溴-5-氟-4-硝基苯胺

在1小时内向在醋酸(500 mL)中的3-氟-4-硝基苯胺(56 g, 0.36mol)溶液中滴加溴(17.7 mL, 0.36 mol)。该反应混合物在0-5℃冰浴中搅拌1小时。该反应混合物用饱和Na₂CO₃碱化，并用乙酸乙酯(200 mL x 3)提取。用盐水洗涤该合并的有机层，经无水Na₂SO4干燥，过滤并减压浓缩以获得残留物，该残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯10:1)纯化以得到黄色固体的2-溴-5-氟-4-硝基苯胺(45.6 g, 84 %)。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ8.29 (d, J =7.6 Hz, 1 H), 653 (d, J=12.4 Hz, 1 H), 4.94 (br s, 2 H)。

步骤c： 5-(2-氨基-4-氟-5-硝基苯基)-3,3-戊-4-炔酸乙酯

在N₂下将Pd(PPh3)₂Cl₂ (13.8 g, 0.02 mol)和CuI (3.6 g, 0.02 mol)加入在Et₃N (700 mL)中的2-溴-5-氟-4-硝基苯胺 (45.7g, 0.19mol)和3,3-二甲基戊-4-炔酸乙酯(88.3 g, 0.57 mol)溶液中。该反应混合物用500 mL乙酸乙酯和1500 mL水稀释。分离该有机层，并用乙酸乙酯(500 mLx3)提取水层，该合并的有机层用盐水洗涤，并经无水MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该残留物经硅胶(石油醚/乙酸乙酯10:1)柱层析纯化以得到5-(2-氨基-4-氟-5-硝基苯基)-3,3-戊-4-炔酸乙酯(34.5 g, 57 %)。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ8.05 (d, J = 8.1Hz, 1 H), 6.36 (d, J = 13.2 Hz, 1 H), 5.60 (brs, 2 H), 4.16 (q, J = 7.2 Hz, 2 H), 2.51 (s, 2 H), 1.40 (s, 6 H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3 H)。

步骤d: 3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-丁酸甲乙酯

将在CH₃CN (350 mL) 中5-(2-氨基-4-氟-5-硝基苯基)-3,3-戊-4-炔酸乙酯(34.5 g, 0.11 mol)和PdCl₂ (10.4 g, 58.6 nmol)混合物加热以回流1.5小时。冷却该反应混合物至室温。加入乙酸乙酯(300 mL)，滤除沉淀物并用甲醇洗涤。减压浓缩该滤液，该残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯40:1)纯化以得到深黄色固体的3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-丁酸甲乙酯。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ10.11 (brs, 1 H), 8.30 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.14 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 6.35 (d, J = 1.5 Hz, 1 H), 4.17 (q, 7 = 7.2 Hz, 2 H), 2.69 (s, 2 H), 1.51 (s, 6 H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3 H)。

步骤e：3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇

在-78℃下2小时内将DIBAL-H (283.4 mL, 0.27 mol)滴入在无水CH₂Cl₂(400 mL)中的3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-丁酸甲乙酯(34 g, 0.11 mol)溶液中。将反应混合物在-78℃搅拌10小时，随后加入水(200 mL)淬灭。滤除沉淀物并用甲醇洗涤。用CH₂Cl₂(200 mLx3)萃取滤液，合并的有机层用盐水洗涤，并经无水Na₂SO₄干燥，减压浓缩。该残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯50:1)纯化以得到3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇(6.6 g, 22 %)。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃)δ9.35 (brs, 1 H), 8.30 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.11 (d, J = 12.0 Hz, 1 H), 6.35 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 3.74 (t, J = 6.4 Hz, 2 H), 1.9 (t, J = 6.4 Hz, 2 H), 1.4 (s, 6 H)。

步骤f：2-(4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚

在0℃下将TBSCl (3.7 g, 25 nmol)和咪唑(4.2 g, 62 nmol)加入在干燥CH₂Cl₂(80 mL)中的3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇(6.6 g, 25 mmol)溶液中。该反应混合物在室温下搅拌12小时。滤除沉淀物并用甲醇洗涤。减压浓缩该滤液。该残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯10:1)纯化以得到棕色固体的期望产物(5.0 g, 53 %)。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃)δ9.80 (brs, 1 H), 8.30 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.05 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 6.33 (t, J = 1.2 Hz, 1 H), 3.7 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 1.91 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 1.42 (s , 6 H), 0.94 (s , 9 H), 0.12 (s , 6 H)。MS (ESI) m/z M+H⁺): 381.1。

实施例10：苄基 2,2-二甲基丁-3-炔酸酯

步骤a： 2,2-二甲基-3-氧代丁酸甲酯

在0℃下将在THF (70 mL)中的3-氧代-丁酸甲酯(78.6 g, 0.677 mol)滴入在THF (270 mL)中的NaH (28.5 g, 0.718 mol, 60%)混悬液中。该混合物在0℃下搅拌0.5小时。0℃滴入MeI (99.0 g, 0.698 mol)。加热该反应混合物至室温并搅拌1小时。在0℃分批加入NaH (28.5 g, 0.718 mol, 60%)，且在0℃继续搅拌所得混合物0.5小时，然后在0℃滴入MeI (99.0 g, 0.698 mol)。加热该反应混合物至室温并搅拌过夜。将混合物倒入冰水浴中。分离有机层，用EtOAc (300 mL x 3)分离水层。干燥合并的有机层并减压浓缩以得到2,2-二甲基-3-氧代丁酸甲酯(52 g, 53%)，粗产物无须进一步纯化而直接用于下一步骤。

步骤b： 3-氯-2,2-二甲基丁-3-烯酸甲酯

在0℃下将2,2-二甲基-3-氧代丁酸甲酯(52 g, 0.361 mol, 从上一步粗提取)滴入在二氯甲烷 (600 mL)中的PCl₅ (161 g, 0.772 mol)混悬液中，随后滴入大约20滴无水DMF。将混合物加热回流过夜。冷却后，将该混合物慢慢倒入冰水中。分离该有机层，用二氯甲烷(300 mL x 3)提取水相。合并的有机层用饱和NaHCO₃溶液(5mL)冲洗，经无水Na₂SO4干燥。蒸发溶剂以得到产物3-氯-2,2-二甲基丁-3-烯酸甲酯 (47 g, 82%)，粗产物无须进一步纯化而直接用于下一步骤。

步骤c：3-氯-2,2-二甲基丁-3-烯酸

将在水(300 mL)中的3-氯-2,2-二甲基丁-3-烯酸甲酯(42.0 g, 0.26 mol)和NaOH (12.4 g, 0.31 mol)的混合物加热回流过夜。冷却后，用乙醚萃取该反应混合物。该有机层含有20g 3-氯-2,2-二甲基丁-3-烯酸甲酯(回收48 %)。水层用冷的20%HCl溶液酸化，并用乙醚(250 mL x 3)萃取。干燥合并的有机层并减压蒸发，得到3-氯-2,2-二甲基丁-3-烯酸(17 g, 44 %)，在下一个步骤中直接使用。

步骤d：2,2-二甲基丁-3-炔酸

将NaNH₂ (17.8 g, 0.458 mmol, 颗粒) 和DMSO (50 mL)加入三颈烧瓶(500 mL)中。在室温搅拌该混合物直至不再发出NH₃ (g)。在0℃下滴入在DMSO (50 mL)中的3-氯-2,2-二甲基丁-3-烯酸 (17.0 g, 114 mmol)溶液。加热该混合物并在50℃下搅拌5小时，随后在室温搅拌过夜。将混合物倒入冷的20% HCl溶液中，随后用乙醚萃取三次。乙醚萃取物经无水Na₂SO₄干燥并浓缩使得起始原料与炔产物比率为6:1。用乙醚和Na₂SO₄再次干燥残留物并再次经历上述反应条件。以相同方法下耗尽反应混合物得到2,2-二甲基丁-3-炔酸(12.0 g, 94 %)。

2,2-二甲基丁-3-炔酸苄基酯

在-20℃下将DCC (193.5 g, 0.938 mmol)加入到二氯甲烷(800 mL)中的2,2-二甲基丁-3-炔酸(87.7 g, 0.782 mmol) 搅拌的溶液中。在室温该混合物搅拌过夜，随后在真空中蒸发溶剂。该残留物经硅胶柱层析(在石油醚中的2%乙酸乙酯，作为洗脱液)纯化以得到2,2-二甲基丁-3-炔酸苄基酯(100 g, 产率59 %)。¹H NMR (CDCl₃,400 MHz)δ7.37-7.36 (m, 5 H), 5.19 (s, 2 H), 2.28 (s, 1 H), 1.52 (s, 6 H)。

实施例 11: 2-(l-(叔-丁基-二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基丙-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚

步骤 a: 4-(2-氨基-4-氟-5-硝基苯)-2,2-二甲基丁-3-炔酸苄基酯

在室温下将苯甲基-2,2-二甲基丁-3-炔酸酐(59.0 g, 0.29 mol)、CuI (1.85 g)和Pd(PPh₃)₂Cl₂(2.3 g)加入到在Et₃N (250 mL)中的2-溴-5-氟-4-硝基苯胺(23.0 g, 0.1 mol)溶液中。该混合物在80℃搅拌过夜。冷却至室温后，用水淬灭该反应，且水层用乙酸乙酯 (100 mL x 3)提取。合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，真空蒸发该溶剂。该残留物经硅胶柱层析(在石油醚中的10% 乙酸乙酯)纯化得到4-(2-氨基-4-氟-5-硝基苯)-2,2-二甲基丁-3-炔酸苄基酯(20.0 g, 56%)。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 8.05 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 7.39-7.38 (m, 5 H), 6.33 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 5.20 (s, 2 H), 4.89 (br s, 2 H), 1.61 (s, 6 H)。

步骤 b: 2-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸苄基酯

在室温下将PdCl₂ (5.0 g, 28 mmol)加入到在乙腈 (100 mL)中的4-(2-氨基-4-氟-5-硝基苯)-2,2-二甲基丁-3-炔酸苄基酯(20.0 g, 56 mmol)溶液中。该混合物在80℃搅拌过夜。过滤该混合物，并在真空中蒸发该溶剂。该残留物经硅胶柱层析(在石油醚中的10% EtOAc)纯化以得到2-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸苄基酯 (18.0 g, 90%)。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) 8.96 (br s, 1 H), 8.33 (d, J = 7.2 Hz, 1 H) 7.35-7.28 (m, 5 H) 7.08 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 6.47 (s, 1 H), 5.18 (s, 2 H) 1.69 (s, 6 H)。

步骤 c: 2-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-l-醇

在-78℃将DIBAL-H (12 mL)加入到在CH₂Cl₂(100 mL)中的2-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸苄基酯(18.0 g, 0.05 mol) 溶液中。在室温下搅拌该混合物1小时，且加热至室温。用水淬灭该反应，水层用 EtOAc (100 mL x 3)萃取。合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，在真空下蒸发该溶剂。该残留物经硅胶柱层析(在石油醚中的10% EtOAc)纯化以得到2-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-l-醇 (10.0 g, 77%)。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) 9.37 (s, 1 H), 8.32 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.11 (d, J= 11.7 Hz, 1 H), 6.36 (s, 1 H), 3.73 (d, J = 5.1 Hz 2 H), 1.97 (t, J = 5.1 Hz, 1 H), 1.39 (s, 6 H)。

步骤 d: 2-(l-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基丙-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚

在室温下将TBSCl (8.9 g)、咪唑(8.1g, 0.12 mol)加入到在CH₂Cl₂(100 mL)中的2-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-l-醇(10.0 g)搅拌的溶液中。该混合物搅拌过夜。在真空下蒸发该溶剂。残留物经硅胶柱层析(在石油醚中的10% EtOAc)纯化得到2-(l-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基丙-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚 (5.3 g, 38 %)。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) 9.51 (s, 1 H), 8.31 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.02 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 6.32 (s, 1 H), 3.63 (s, 2 H), 1.35 (s, 6 H), 0.99 (s, 9 H), 0.11 (s, 6 H)。

实施例 12: 6-氟-l,l-二甲基-7-硝基-2,3-二氢-lH-吡咯并[l,2-a]吲哚、(R)-3-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇、2-(4-(((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲氧基)-2-甲基丁-2-基)-l-(((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚、3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇和(R)-2-(4-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚

步骤a：6-氟-l,l-二甲基-7-硝基-2,3-二氢-lH-吡咯并[l,2-a]吲哚、(R)-3-(l- ((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇、2- (4-(((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲氧基)-2-甲基丁-2-基)-l-(((R)-2,2-二甲基- l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚、3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇和(R)-2-(4-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚

将Cs₂CO₃ (4.88 g, 15.0 mmol)加入到在DMF (10 mL)中的2-(4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚(1.9 g, 5.0 mmol)和(S)-(2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基 4-甲基苯磺酸酯(2.86 g, 10.0 mmol) 溶液中。混合物在90℃下加热24小时。该反应物在乙酸乙酯和水间分配。水层用乙酸乙酯萃取，合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥。去除溶剂后，残留物柱层析(10-50%乙酸乙酯–己烷)纯化得到6-氟-l,l-二甲基-7-硝基-2,3-二氢-lH-吡咯并[l,2-a]吲哚(600 mg, 48%)。ESI-MS m/z 计算值 248.1,实测值249.2 (M+l)⁺。保留时间2.00分钟; 2-(4-(((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲氧基)-2-甲基丁-2-基)-l-(((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚(270 mg, 含有一些(R)-2-(4-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚)。ESI-MS /n/z 计算值 494.2和380.2,实测值495.4 和381.4(M+l)⁺。保留时间2.12和1.92分钟; (R)-3-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇 (1.0 g, 含有一些3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇)。ESI-MS m/z 计算值 380.2和266.1, 实测值381.2 and 267.2 (M+l)⁺。保留时间1.74 和1.48分钟。

实施例 13: (R)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-l-醇和3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁- l-醇

根据上述显示的步骤由2-(l-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-甲基丙-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚获得含有(R)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5- 硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-l-醇和3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁- l-醇的混合物。(R)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-l-醇, ESI-MS m/z 计算值 366.2, 实测值367.2 (M+l)⁺。保留时间1.71分钟; 3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇, ESI-MS m/z 计算值 252.1,实测值253.4 (M+l) (M+l)⁺。保留时间1.42分钟。

实施例 14:(R)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-(2,3-二羟丙基)-6-氟-2-(4-羟基-2-甲基丁-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

步骤 a: (R)-3-(5-氨基-l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇

将甲酸铵(500 mg, 7.9 mmol)和Pd/C (10%, 139 mg, 0.13 mmol)加入到在乙醇(10 mL)中的含有一些3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇的(R)-3-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基- lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇(500 mg, 1.3 mmol)溶液中。该混合物回流5分钟。经硅藻土过滤去除Pd催化剂并用乙醇洗涤。滤液蒸发至干燥，并经柱层析(30-50%乙酸乙酯-己烷)纯化以提供(R)-3-(5-氨基-l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇(220 mg, 48 %, 含有一些3-(5-氨基-6-氟-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇)。ESI-MS m/z 计算值 350.2,实测值 351.4 (M+l)⁺。保留时间0.94分钟。

步骤 b:(R)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-2-(4-羟基-2-甲基丁-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

将三乙胺(0.21 mL, 1.5 mmol)加入到在DMF (3.0 mL) 中的l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙基羧酸(183 mg, 0.75 mmol)、含有一些3-(5-氨基-6-氟-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇的(R)-3-(5-氨基-l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇(220 mg, 0.63 mmol)和HATU (287mg, 0.75 mmol)的混合物中。该反应在室温下搅拌过夜，随后在乙酸乙酯和水间分配。水层用乙酸乙酯提取并且合并的有机层用盐水洗涤并经MgSO4干燥。去除溶剂后，该残留物经柱层析(20-40%乙酸乙酯-己烷)纯化以得到(R)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-2-(4-羟基-2-甲基丁-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺(315 mg, 87 %, 含有一些l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(6-氟-2-(4-羟基-2-甲基丁-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺)。ESI-MS m/z 计算值 574.2，实测值 575.7 (M+l)⁺。保留时间2.08分钟。

步骤 c: (R)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(4-羟基-2-甲基丁-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基咪唑羧酰胺

将p-TsOH.H2O (21 mg, 0.11 mmol)加入到在甲醇 (3 mL)和水(0.3 mL)中的含有一些l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(6-氟-2-(4-羟基-2-甲基丁-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺的(R)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-((2,2-二甲基- l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-2-(4-羟基-2-甲基丁-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺(315 mg, 0.55 mmol)的溶液中。混合物在80℃加热30分钟。该反应在乙酸乙酯和水间分配，且水层用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤并经MgSO₄干燥。去除溶剂后，该残留物经柱层析纯化(20-80%乙酸乙酯-己烷)以提供(R)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-(2,3-二羟丙基)-6-氟-2-(4-羟基-2-甲基丁-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺 (92 mg, 31%)。ESI-MS m/z 计算值 534.2, 实测值 535.5 (M+l)+。保留时间1.72分钟。¹H NMR (400 MHz, DMSO-J6)δ8.32 (s, 1H), 7.53 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.43 - 7.31 (m, 4H), 6.17 (s, 1H), 4.97 - 4.92 (m, 2H), 4.41 (dd, J = 2.4, 15.0 Hz, 1H), 4.23 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 8.6, 15.1 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.48 - 3.44 (m, 1H), 3.41 - 3.33 (m, IH), 3.20 (dd, J = 7.4, 12.7 Hz, 2H), 1.94 - 1.90 (m, 2H), 1.48 - 1.45 (m, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.41 (s, 3H) and 1.15 - 1.12 (m, 2H) ppm。

实施例 15: l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-(4-((S)-2,3-二羟基丙氧基)-2-甲基丁-2-基)-l-((R)-2,3-二羟丙基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺和(S)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-(4-((S)-2,3-二羟基丙氧基)-2-甲基丁-2-基)-l-((R)-2,3-二羟丙基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺和(S)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

根据上面显示的类似方法由含有一些(R)-2-(4-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚)的2-(4-(((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲氧基)-2-甲基丁-2-基)-l-(((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚起始制备l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-(4-((S)-2,3-二羟基丙氧基)-2-甲基丁-2-基)-l-((R)-2,3-二羟丙基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺和(S)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺。l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N- (2-(4-((S)-2,3-二羟基丙氧基)-2-甲基丁-2-基)-l-((R)-2,3-二羟丙基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺, ESI-MS m/z 计算值 608.2, 实测值 609.5 (M+l)⁺。保留时间1.67分钟。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.43 - 7.31 (m, 4H), 6.19 (s, 1H), 4.95 - 4.93 (m, 2H), 4.51 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.42 - 4.39 (m, 2H), 4.10 - 4.04 (m, 1H), 3.86 (s, 1H), 3.49 - 3.43 (m, 2H), 3.41 - 3.33 (m, 1H), 3.30 - 3.10 (m, 6H), 2.02 - 1.97 (m, 2H), 1.48 - 1.42 (m, 8H) 和1.13 (dd, J = 4.0, 6.7 Hz, 2H) ppm ; (S)- 1 -(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)-2-甲基丁-2-基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺, ESI-MS m/z 计算值 534.2, 实测值 535.5 (M+l)⁺。保留时间1.81分钟。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.91 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 3H), 7.03 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.51 - 3.46 (m, 1H), 3.31 - 3.13 (m, 6H), 1.88 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.48 - 1.45 (m, 2H), 1.31 (s, 6H) 和1.15 - 1.12 (m, 2H) ppm。

实施例 16: l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(6-氟-2-(l-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基) 环丙基羧酰胺

1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

根据上面显示的类似方法由含有(R)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-l-醇和3-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-3-甲基丁-1-醇的混合物起始制备l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(6-氟-2-(l-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺。ESI-MS m/z 计算值 446.2, 实测值 447.5 (M+l)⁺。保留时间1.88分钟。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃)δ8.68 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.30 - 7.21 (m, 3H), 7.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 6.18 (s, 1H), 3.64 (s, 2H), 1.75 (dd, J = 3.8, 6.8 Hz, 2H), 1.34 (s, 6H) 和1.14 (dd, J = 3.9, 6.9 Hz, 2H) ppm。

实施例 17: (R)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-(2,3-二羟丙基)-6-氟-2-(l-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

步骤a: (R)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸苄基酯和((S)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基2-(1-(((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸酯

将碳酸铯 (8.23 g, 25.3 mmol)加入到在DMF (17 mL)中的2-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸苄基酯 (3.0 g, 8.4 mmol)和(S)-(2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(7.23 g, 25.3 mmol)的混合物中。在氮气80 ℃下该反应搅拌46小时。该混合物随后在乙酸乙酯和水间分配。水层用乙酸乙酯提取。合并的乙酸乙酯层用盐水洗涤，经MgSO4干燥, 过滤并浓缩。粗提产物为粘稠的棕色油，含有上述两个产物，粗产物无须进一步纯化而直接用于下一步骤。(R)- 2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸苄基酯, ESI-MS m/z 计算值 470.2, 实测值 471.5 (M+l)⁺。保留时间2.20分钟。((S)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基2-(l-(((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸酯, ESI-MS m/z 计算值 494.5, 实测值 495.7 (M+l)⁺。保留时间2.01分钟。

步骤b: (R)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-1-醇

将步骤(a)获得的粗反应混合物溶解在THF (42 mL)中。并在冰水浴中冷却。滴加LiAlH₄ (16.8 mL，1 M 溶液, 16.8 mmol)。滴加完成后，另外搅拌该反应5分钟。加入水(1 mL)、15% NaOH溶液(1 mL)然后是水 (3 mL)淬灭该反应。该混合物经硅藻土滤过，固体用THF和乙酸乙酯洗涤。浓缩该滤液，并经柱层析(30-60%乙酸乙酯-己烷)纯化以得到棕色油产物(2.68g, 87 %，经过2步骤)。ESI-MS m/z 计算值 366.4, 实测值 367.3 (M+l)⁺。保留时间1.68分钟。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ8.34 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 4.94 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.64 - 4.60 (m, 1H), 4.52 - 4.42(m, 2H), 4.16 - 4.14 (m, 1H), 3.76 - 3.74 (m, 1H), 3.63 - 3.53 (m, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.38 - 1.36 (m, 6H) 和1.19 (s, 3H) ppm。

步骤c: (R)-2-(5-氨基-l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-1-醇

在N₂下将(R)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-1-醇 (2.5 g, 6.82 mmol) 溶解在乙醇 (70 mL) 中。随后加入Pd-C (250 mg, 5% wt)。将该反应再次用氮气吹洗，随后在H₂ (atm)下搅拌。2.5小时后，经LCMS只有观察到部分转化为产物。该反应用硅藻土过滤并浓缩。上述条件下再次处理残留物。2小时后LCMS表明全部转化为产物。用硅藻土过滤反应混合物。浓缩该滤液以得到黑色固体产物(1.82 g, 79 %)。ESI-MS m/z 计算值 336.2, 实测值 337.5 (M+l)⁺。保留时间0.86分钟。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ7.17 (d, J = 12.6 Hz, IH), 6.76 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 4.79 - 4.76 (m, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.37 - 4.31 (m, 3H),4.06 (dd, J = 6.1, 8.3 Hz, 1H), 3.70 - 3.67 (m, 1H), 3.55 - 3.52 (m, 2H), 1.41 (s, 3H), 1.32 (s, 6H) 和1.21 (s, 3H) ppm。

步骤d: (R)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-2-(l-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

将DMF (3滴)加入到l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙基羧酸(1.87 g, 7.7 mmol)和亚硫酰氯(1.30 mL, 17.9 mmol)的搅拌混合物中。1小时后形成澄清溶液。在真空下浓缩该溶液，随后加入甲苯(3 mL)，该混合物再次浓缩。再次重复甲苯步骤，在高真空中放置该残留物10分钟。随后将酰基氯溶解在二氯甲烷(10 mL)中，并加入在二氯甲烷 (45 mL)中的(R)-2-(5-氨基-l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-l-醇 (1.8 g, 5.4 mmol)和三乙胺(2.24 mL, 16.1 mmol)的混合物。该反应在室温下搅拌1小时。该反应用1N HCl溶液、饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤，经MgSO₄干燥并浓缩以得到黑色泡沫状固体产物(3g, 100%)。 ESI-MS m/z 计算值 560.6, 实测值 561.7 (M+l)⁺。保留时间2.05分钟。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ8.31 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.42 - 7.40 (m, 2H), 7.34 - 7.30 (m, 3H), 6.24 (s, IH), 4.51 - 4.48 (m, 1H), 4.39 - 4.34 (m,2H), 4.08 (dd, J = 6.0, 8.3 Hz, 1H), 3.69 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.58 - 3.51 (m, 2H), 1.48 - 1.45 (m, 2H), 1.39 (s, 3H), 1.34 - 1.33 (m, 6H), 1.18 (s, 3H)和1.14 - 1.12 (m, 2H) ppm。

步骤e: (R)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-(2,3-二羟丙基)-6-氟-2-(l-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

将(R)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-2-(l-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺(3.0 g, 5.4 mmol)溶解在甲醇(25 mL)中。加入水(5.2 mL)，随后加入p-TsOH.H₂O (204 mg, 1.1 mmol)。加热反应至80℃45分钟。该溶液浓缩并随后在乙酸乙酯和饱和NaHCO₃溶液间分配。乙酸乙酯层经MgSO₄干燥并浓缩。该残留物经柱层析(50-100 %乙酸乙酯-己烷)纯化以得到有色泡沫状固体膏剂的产物(1.3 g, 47 %, ee >98%，通过SFC检测)。ESI-MS m/z 计算值 520.5, 实测值521.7 (M+l)⁺。保留时间1.69分钟。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ8.31 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.42 - 7.38 (m, 2H), 7.33 - 7.30 (m, 2H), 6.22 (s, 1H), 5.01 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.90 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.75 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.40 (dd, J = 2.6, 15.1 Hz, 1H), 4.10 (dd, J = 8.7, 15.1 Hz, 1H), 3.90 (s, 1H), 3.65 - 3.54 (m, 2H), 3.48 - 3.33 (m, 2H), 1.48 - 1.45 (m, 2H), 1.35 (s, 3H), 1.32 (s, 3H) 和1.14 - 1.11 (m, 2H) ppm。

实施例18: (S)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-yI)-N-(l-(2,3-二羟丙基)-6-氟-2-(l-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

步骤 a: (S)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸苄基酯和((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基 2-(l-(((S)-2,2- 二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸酯

将碳酸铯 (2.74 g, 8.4 mmol) 加入到在DMF (5.6 mL)中的2-(6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸苄基酯 (1.0 g, 2.8 mmol)和(S)-(2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯 (3.21 g, 11.2 mmol)的混合物中。在氮气下80℃搅拌该反应64小时。该混合物随后在乙酸乙酯和饱和水间分配。水层用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。该粗产物为粘稠的棕色油，其包含上述的两个产物，粗产物无须进一步纯化而直接用于下一步骤。(S)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸苄基酯, ESI-MS m/z 计算值 470.2, 实测值471.5 (M+l)⁺。保留时间2.22分钟。((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基 2-(l-(((S)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸酯, ESI-MS m/z 计算值 494.5, 实测值495.5 (M+l)⁺。保留时间2.03分钟。

步骤 b: (S)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-1-醇

将(S)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸苄基酯和((R)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基 2-(l-(((S)-2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙酸酯的粗反应混合物混合物溶解在THF (15 mL)中，并在冰水浴中冷却。滴加LiAlH₄ (2.8 mL ，1 M 溶液, 2.8 mmol)。滴加后完成反应搅拌5分钟。加入水(0.5 mL)、15% NaOH溶液(0.5 mL)然后是water (1.5 mL)淬灭该反应。该混合物经硅藻土滤过，固体用THF和乙酸乙酯洗涤。浓缩该滤液，并经柱层析(30-60%乙酸乙酯-己烷)纯化以得到棕色油产物(505 mg, 49 %，经过2步骤)。ESI-MS m/z 计算值 366.4, 实测值367.3 (M+l)⁺。保留时间1.68分钟。¹H NMR (400 MHz ,DMSO-d6) δ 8.34 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.65(d, J = 13.5 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 4.94 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.64 - 4.60 (m, 1H), 4.52 - 4.42 (m, 2H), 4.14 (dd, J = 6.2, 8.4 Hz, 1H), 3.74 (dd, J = 7.0, 8.3 Hz, 1H), 3.63 - 3.53 (m,2H), 1.42 (s, 3H), 1.37 (m, 6H) 和1.19 (s, 3H) ppm。

步骤c: (S)-2-(5-氨基-l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-lH-吲哚- 2-基)-2-甲基丙-1-醇

将(S)-2-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-5-硝基-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-1-醇 (500 mg, 1.4 mmol) 溶解在乙醇 (15 mL) 中，用N₂吹洗反应。随后加入Pd-C (50 mg, 5% wt)。将用N₂再次吹洗该反应，随后在H₂ (atm)下搅拌。1小时后，经LCMS只有观察到部分转化为产物。该反应用硅藻土过滤并浓缩。上述条件下再次处理残留物。1小时后LCMS表明全部转化为产物。用硅藻土过滤反应混合物。浓缩该滤液以得到黑色固体产物(420 mg, 91 %)。ESI-MS m/z 计算值 336.2, 实测值337.5 (M+l)⁺。保留时间0.90分钟。¹H NMR (400 MHz ,DMSO-d6)δ7.17 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 4.78 (br s, IH), 4.46 (s, 2H), 4.41 - 4.27 (m, 3H), 4.06(dd, J = 6.1, 8.3 Hz, 1H), 3.70 - 3.67 (m, 1H), 3.53 (dd, J = 10.7, 17.2 Hz, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.32 (s, 6H) 和1.21 (s, 3H) ppm。

步骤d: (S)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-2-(l-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

将DMF (3滴)加入到l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙基羧酸(187 mg, 0.8 mmol)和亚硫酰氯(0.13 mL, 1.8 mmol)的搅拌混合物中。30分钟后形成澄清溶液。混合入小量哌啶以测试酰基氯已形成。在旋转蒸发仪下浓缩该溶液，随后加入甲苯，并再次浓缩该组合物。再次重复甲苯步骤，在高真空中放置该残留物10分钟。随后将酰基氯容积在二氯甲烷(2 mL)中，并加入在二氯甲烷 (4 mL)中的(S)-2-(5-氨基-l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-lH-吲哚-2-基)-2-甲基丙-l-醇 (200 mg, 0.6 mmol)和三乙胺(0.25 mL, 1.8 mmol)的混合物。该反应在室温下搅拌45分钟。该反应用1N HCl溶液、饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤，经MgSO₄干燥并浓缩以得到黑色泡沫状固体产物(320 mg, 96 %)。ESI-MS m/z 计算值 560.6, 实测值561.5 (M+l)⁺。保留时间2.05分钟。¹H NMR (400 MHz ,DMSO-d6)δ8.31 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.42 - 7.40 (m, 2H), 7.34 - 7.30 (m, 3H), 6.24 (s, 1H), 4.84 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.51 - 4.46 (m, 1H), 4.41 - 4.32 (m, 2H), 4.08 (dd, J = 6.0, 8.3 Hz, 1H), 3.71 - 3.67 (m,1H), 3.58 - 3.50 (m, 2H), 1.48 - 1.45 (m, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.34 - 1.33 (m, 6H), 1.18 (s, 3H) 和1.14 - 1.12 (m, 2H) ppm。

步骤e: (S)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-(2,3-二羟丙基)-6-氟-2-(l-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

将(S)-l-(2,2-二氟苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(l-((2,2-二甲基-l,3-二氧环戊基-4-基)甲基)-6-氟-2-(l-羟基-2-甲基丙-2-基)-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺 (290 g, 0.5 mmol)溶解在甲醇(5 mL)中。加入水(0.5 mL)，随后加入p-TsOH.H₂O (20 mg, 0.1 mmol)。加热反应至80℃45分钟。该溶液随后在乙酸乙酯和饱和NaHCO₃溶液间分配。乙醚层经MgSO₄干燥并浓缩。该残留物经柱层析(50-100 % 乙酸乙酯-己烷)纯化以得到有色泡沫状固体膏剂的产物(146 mg, 54 %, ee >97%，通过SFC检测)。ESI-MS m/z 计算值 520.5, 实测值521.5 (M+l)⁺。保留时间1.67分钟。¹H NMR (400 MHz ,DMSO-d6)δ8.31 (s, 1H), 7.53 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.42 - 7.37 (m, 2H), 7.33 - 7.30 (m, 2H), 6.22 (s, IH), 5.01 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.91 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.75 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.42 - 4.38 (m, 1H), 4.10 (dd, J = 8.8, 15.1 Hz, 1H), 3.90 (s, IH), 3.64 - 3.54 (m, 2H), 3.48 - 3.33 (m, 2H), 1.48 - 1.45 (m, 2H), 1.35 (s, 3H), 1.32 (s, 3H) and 1.14 - 1.11 (m, 2H) ppm。

实施例19：(R)-l-(苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-叔-丁基-l-(2,3-二羟丙基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺

用类似实施例72的实验方法从l-(苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙基羧酸和2-叔-丁基-6-氟-5-硝基-lH-吲哚制备(R)-l-(苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-叔-丁基-l-(2,3-二羟丙基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺。

实施例20：(S)-l-(苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-叔-丁基-l-(2,3-二羟丙基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基咪唑羧酰胺

用类似实施例72的实验方法从l-(苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙基羧酸和2-叔-丁基-6-氟-5-硝基-lH-吲哚制备(S)-l-(苯并[d][l,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-叔-丁基-l-(2,3-二羟丙基)-6-氟-lH-吲哚-5-基)环丙基羧酰胺。

化学领域的技术人员可使用实施例和流程，结合已知的合成方法来合成本发明的化合物，包括在下表3中的化合物。

表3：实验化合物的物理参数。

实施例21：用于检定和检测化合物ΔF508-CFTR的修正性质的分析

用于分析化合物的ΔF508-CFTR调节性质的膜电位光学方法

该分析利用荧光电压传感染料，使用荧光板读数器(例如 FLIPR III，Molecular Devices，Inc.)测定跨膜电位的改变，以作为NIH 3T3细胞中功能性ΔF508-CFTR增加的读出值。对该响应的驱动力在于，在预先用化合物处理细胞、然后加载电压传感染料后，通过单独液体添加步骤产生的与通道活化相关的氯离子梯度。

校正化合物的鉴别

为了鉴别校正与ΔF508-CFTR有关的运输缺陷的小分子，开发了单加入HTS测定模式。在37℃、5％CO₂ 、90％湿度下将包含细胞的测定板在组织培养孵育箱内孵育～2-4小时。然后在粘附到测定板底部后准备将细胞暴露于化合物。

在有或没有(阴性对照)测试化合物的存在下，在37℃、5％CO₂ 、90％湿度下，在组织培养孵育箱内，将细胞在无血清的培养基中孵育16-24小时。随后将细胞用Krebs Ringer溶液冲洗3次，并加载电压敏感再分布染料。为了活化ΔF508-CFTR，向每孔加入10μM福司扣林和CFTR强化剂染料木素(20μM)以及无Cl^--培养基。无Cl^-- 培养基的加入促进响应于ΔF508-CFTR活化的Cl^--流出，使用电压敏感染料光学监测所致膜的去极化。

增强剂化合物的鉴别

为了鉴别ΔF508-CFTR的增强剂，开发双加HTS测定模式。这种HTS测定法使用荧光电压敏感染料，以测定 FLIPR-III上的膜电位改变，作为温度校正的ΔF508-CFTR NIH 3T3细胞中ΔF508-CFTR门控(电导)增加的测量值。用于该响应的驱动力是Cl^--离子梯度与在单一液体添加步骤中用福司扣林进行通道活化的结合，其中在预先用强化剂化合物(或DMSO媒介物对照)处理细胞,然后加载再装载染料后使用荧光培养板读出器例如 FLIPR-III。

溶液：

浴溶液#1：(以mM计)NaCl 160，KCl 4.5，CaCl₂ 2，MgCl₂ 1，HEPES 10，pH 7.4，NaOH。

无氯浴溶液：浴溶液#1中的氯化物盐用葡糖酸盐替代。

细胞培养

将稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3小鼠成纤维细胞用于膜电位光学检测。于37℃、5％CO₂和90％湿度下，将细胞保持在添加了2mM谷氨酰胺、10％胎牛血清、1X NEAA、β-ME、1X青霉素-链霉素和25mM HEPES的Dulbecco’s改良Eagle’s培养基的175cm²的培养瓶中。为了进行所有的光学分析，将细胞以~20,000个/孔的密度接种于涂敷了人工基底膜的384-孔板上并于37℃培养2小时，随后于27℃培养24小时用于增强剂分析。为了进行校正分析，将细胞于27℃或37℃，在有或没有化合物的情况下培养16-24小时。

测定化合物的ΔF508-CFTR调节性质的电生理测定法

1.Ussing室测定法

对表达ΔF508-CFTR的极化气道上皮细胞进行Ussing室实验，以进一步表征在光学测定法中鉴别的ΔF508-CFTR调节剂。从支气管组织中分离非-CF和CF气道上皮细胞，如上所述培养(Galietta，L.J.V.，Lantero，S.，Gazzolo，A.，Sacco，O.，Romano，L.，Rossi，G.A.，& Zegarra-Moran，O.(1998)In Vitro Cell.Dev.Biol.34，478-481)，在用NIH3T3-条件培养基预包被的Costar® Snapwell^TM滤膜上铺板。4天后，除去顶部培养基，使细胞在空气液体界面上生长＞14天，然后使用。这产生完全分化的柱状细胞单层，其具纤毛，这些特征属于气道上皮细胞的特征。非-CF HBE分离自不具有任何已知肺病的不吸烟者。CF-HBE分离自对ΔF508-CFTR而言纯合型的患者。

将生长在Costar® Snapwell^TM细胞培养插件(insert)上的HBE固定在Ussing室(Physiologic Instruments，Inc.，San Diego，CA)内，使用电压钳系统(Department of Bioengineering，University of Iowa，IA)测定在有底外侧至顶部Cl-梯度(I_SC)的存在下经上皮电阻和短路电流。简言之，在37℃、在电压钳记录条件下(V保持＝0mV)检验HBE。底外侧溶液包含(以mM计)145NaCl、0.83K₂HPO₄、3.3KH₂PO₄、1.2MgCl₂、1.2CaCl₂、10葡萄糖、10HEPES(用NaOH将pH调整至7.35)，顶部溶液包含(以mM计)145葡糖酸Na、1.2MgCl₂、1.2CaCl₂、10葡萄糖、10HEPES(用NaOH将pH调整至7.35)。

校正化合物的鉴别

典型的方案采用底外侧至顶端膜Cl^-浓度梯度。为了建立这种梯度，对底外侧膜使用正常的林格氏溶液(ringer)，而顶端NaCl被等摩尔葡糖酸钠替代(用NaOH滴定至pH 7.4)，得到跨越上皮的大幅Cl^-浓度梯度。所有实验均是用完整单层进行的。为了充分活化ΔF508-CFTR，向顶侧施加福司扣林(10μM)和PDE抑制剂IBMX(100μM)，继之以加入CFTR强化剂染料木素(50μM)。

正如在其他细胞类型中所观察到的，在低温下孵育稳定表达ΔF508-CFTR的FRT细胞和分离自患CF病患者(CF-HBE)的人支气管上皮细胞会增加CFTR在质膜中的功能密度。为了测定校正化合物的活性，将细胞与测试化合物在37℃下一起孵育24-48小时，随后洗涤3次，然后记录。将cAMP-和染料木素-介导的化合物-处理的细胞I_SC相对于37℃对照校准，以wt-HBE中CFTR活性百分比表示。与37℃对照相比，细胞与校正化合物预孵育显著增加cAMP-和染料木素-介导的I_SC。

强化剂化合物的鉴别

典型的方案采用底外侧至顶端膜Cl^-浓度梯度。为了建立这种梯度，对底外侧膜使用正常的林格液，而顶端NaCl被等摩尔葡糖酸钠替代(用NaOH滴定至pH 7.4)，得到跨越上皮的大幅Cl^-浓度梯度。向细胞培养插件顶面加入福司扣林(10μM)和所有测试化合物。比较假定的ΔF508-CFTR强化剂与已知强化剂染料木素的功效。

2. 膜片钳记录

如上所述使用穿孔-膜片记录构件监测ΔF508-NIH3T3细胞中的总Cl^-电流(Rae，J.，Cooper，K.，Gates，P.，& Watsky，M.(1991)J.Neurosci.Methods 37，15-26)。使用Axopatch 200B膜片钳放大器(Axon Instruments Inc.，Foster City，CA)在22℃进行电压钳记录。移液管溶液包含(以mM计)150N-甲基-D-葡糖胺(NMDG)-Cl、2MgCl₂、2 CaCl₂、10 EGTA、10 HEPES和240μg/ml两性霉素-B(用HCl调整至pH 7.35)。胞外培养基包含(以mM计)150NMDG-Cl、2MgCl₂、2CaCl₂、10HEPES(用HCl调整至pH 7.35)。使用安装了Digidata 1320A/D界面的PC与Clampex 8(Axon Instruments Inc.)进行脉冲发生、生成、数据获取和分析。为了活化ΔF508-CFTR，向浴中加入10μM福司扣林和20μM染料木素，每隔30sec监测一次电流-电压相关性。

校正化合物的鉴别

为了测定校正化合物增加功能性ΔF508-CFTR在质膜中的密度的活性，我们使用上述穿孔-膜片-记录技术在用校正化合物处理24小时后测定电流密度。为了完全活化ΔF508-CFTR，向细胞中加入10μM福司扣林和20μM染料木素。在我们的记录条件下，在27℃24小时孵育后的电流密度高于在37℃24小时孵育后观察到的电流密度。这些结果与在质膜中ΔF508-CFTR密度下低温孵育的已知效果一致。为了测定校正化合物对CFTR电流密度的效果，将在37℃细胞与10μM测试化合物一起孵育24小时，将电流密度与27℃和37℃的对照组比较(％活性)。记录前，用胞外记录介质将细胞洗涤3次，以除去任何测试化合物。与10μM校正化合物一起预孵育比37℃对照组显著增加了cAMP-和染料木素-依赖性电流。

强化剂化合物的鉴别

还使用穿孔-膜片-记录技术研究了ΔF508-CFTR强化剂增加稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3细胞中宏观ΔF508-CFTR Cl^-电流(I_Δ _F508)的能力。从光学测定法中鉴别的强化剂引起I_Δ _F508剂量-依赖性增加，其具有与在光学测定法中观察到的类似的功效和效力。在检验的全部细胞中，施加强化剂前后的逆转电位均在-30mV左右，为计算的E_C1(-28mV)。

细胞培养

使用稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3小鼠成纤维细胞进行全细胞记录。在175cm²培养烧瓶中，将细胞维持在37℃下、在5％CO2和90％湿度中和Dulbecco改进Eagle培养基中，其中补充有2mM谷氨酰胺、10％胎牛血清、1X NEAA，β-ME、1X青霉素/链霉素和25mM HEPES。就全细胞记录而言，将细胞按2,500-5,000个细胞接种在聚-L-赖氨酸-包被的玻璃盖玻片上，在27℃下培养24-48小时，然后用于测试强化剂活性；在37℃与或不与校正化合物一起孵育，以测定校正剂活性。

3.单通道记录

使用Axopatch 200B膜片钳放大器(Axon Instruments Inc.)，如上所述利用所切除的内侧外翻膜片观察在NIH3T3细胞中稳定表达的经过wt-CFTR和温度校正的ΔF508-CFTR的门控活性(Dalemans，W.，Barbry，P.，Champigny，G.，Jallat，S.，Dott，K.，Dreyer，D.，Crystal，R.G.，Pavirani，A.，Lecocq，J-P.，La zdunski，M.(1991)Nature 354，526-528)。移液管包含(以mM计)：150NMDG、150天冬氨酸、5CaCl₂、2MgCl₂和10HEPES(用Tris碱将pH调整至7.35)。浴包含(以mM计)：150NMDG-Cl、2MgCl₂、5EGTA、10TES和14Tris碱(用HCl将pH调整至7.35)。切下后，通过添加1mM Mg-ATP、75nM催化亚单位的cAMP-依赖性蛋白激酶(PKA；Promega Corp.Madison，WI)和10mM NaF以抑制蛋白磷酸酶来活化wt-和ΔF508-CFTR，从而防止电流减少。将移液管电位维持在80mV。分析来自包含≤2活性通道的膜片的通道活性。在实验过程中同时开放的最大数量确定了活性通道数量。为了测定单通道电流振幅，在100Hz“离线”过滤来自120sec的ΔF508-CFTR活性的数据，然后用于构建全-点振幅直方图，使用 Bio-Patch Analysis软件(Bio-Logic Comp.France)、用多高斯函数拟合。根据120sec的通道活性确定总微观电流和开放概率(Po)。使用Bio-Patch软件或由相关性P_o＝I/i(N)确定P_o，其中I＝电流平均值，i＝单通道电流振幅，N＝膜片中的活性通道数量。

细胞培养

使用稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3小鼠成纤维细胞进行切下膜的膜片钳记录。在175cm²培养烧瓶中，将细胞维持在37℃下、在5％CO₂和90％湿度中和Dulbecco改进Eagle培养基中，其中补充有2mM谷氨酰胺、10％胎牛血清、1X NEAA，β-ME、1X青霉素/链霉素和25mMHEPES。就单通道记录而言，将细胞按2,500-5,000个细胞接种在聚-L-赖氨酸-包被的玻璃盖玻片上，在27℃下培养24-48小时后使用。

如以上分析中的测量，发现本发明的化合物显示校正活性。

本发明的化合物用作ATP结合盒转运蛋白的调节剂。采用上述方法，测定出本发明化合物的活性(即EC₅₀)为从约3.8nM-约13.5μM。而且，采用上述的这些方法，测定出本发明化合物的效力为从约35％-约110％。

表4中，应用如下含义：

EC50：“+++”指＜2uM；“++”指2uM至5uM之间；“+” 指5uM至25uM之间。

%活性：“+”指＜25%；“++”指25%至100%之间；“+++”指>100%。

表4

其它实施方案

应该理解，已经结合本文中详细的说明对本发明进行描述，之前的说明意欲对本发明进行阐述而不对本发明的范围有所限制，本发明的范围由所附的权利要求书的范围限定。其它方面、优点和改良均包含在以下权利要求书的范围内。

Claims

1. 选自下式的化合物：

和

。

2. 化合物

。

3. 化合物

。

4. 化合物

。

5. 药物组合物包含：

(i) 根据权利要求1的化合物；和

(ii) 药学上可接受的载体。

6. 权利要求5的组合物，进一步包含一种选自以下的附加剂：溶粘蛋白剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、CFTR矫正药、CFTR增强剂或营养剂。

7. 权利要求5或6的组合物，其中化合物为

。

8. 权利要求5或6的组合物，其中化合物为

。

9. 权利要求5或6的组合物，其中化合物为

。

10. 一种增加细胞膜中功能性ABC转运蛋白数量的方法，所述方法包括使所述细胞与选自下式化合物接触的步骤

和

。

11. 权利要求10的方法，其中ABC转运蛋白为CFTR。

12. 权利要求10或11的方法，其中化合物为

。

13. 权利要求10或11的方法，其中化合物为

。

14. 权利要求10或11的方法，其中化合物为

。

15. 一种治疗患者由ABC转运蛋白活性引起的疾病、紊乱或病症的方法，包括将选自下式的化合物施用于所述患者。

和

。

16. 根据权利要求15的方法，其中所述疾病、紊乱或病症选自囊性纤维化、遗传性肺气肿、遗传性血色素沉着病、凝血-纤维蛋白溶解缺陷，诸如蛋白质C缺乏、1型遗传性血管性水肿、脂质代谢过程缺陷，诸如家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症、溶酶体贮积病，诸如I-细胞疾病/假胡尔勒氏病、粘多醣病、桑德霍夫病/泰-萨病、II型克-纳综合征、多发性内分泌病/高胰岛素血症、糖尿病、拉龙侏儒、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退、黑色素瘤、CDG 1型糖基化病、先天性甲状腺功能亢进症、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血症、ACT缺乏、尿崩症(DI)、神经生理性尿崩症、肾原性尿崩症、进行性神经性肌萎缩、佩-梅病、神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克病、几种多聚谷氨酰胺神经性障碍，诸如亨廷顿舞蹈病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓和延髓性肌萎缩、齿状核红核苍白球路易体萎缩症和强直性肌营养不良，以及海绵状脑病，诸如遗传性克-雅病(源于朊病毒蛋白代谢过程缺陷)、法布里病、施特劳斯纳综合征、COPD、干眼病和Sjögrens's病。

17. 权利要求15或16的方法，其中化合物为