BRPI0823228B1 - moduladores de cassete de ligação a atp - Google Patents

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BRPI0823228B1
BRPI0823228B1 BRPI0823228-8A BRPI0823228A BRPI0823228B1 BR PI0823228 B1 BRPI0823228 B1 BR PI0823228B1 BR PI0823228 A BRPI0823228 A BR PI0823228A BR PI0823228 B1 BRPI0823228 B1 BR PI0823228B1
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cftr
methyl
alkyl
amino
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BRPI0823228-8A
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Sara S. Hadida Ruah
Peter D. J. Grootenhuis
Frederick Van Goor
Mark T. Miller
Jason McCartney
Jinglan Zhou
Brian Bear
Mehdi Michel Djamel Numa
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Vertex Pharmaceuticals Incorporarted
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Publication date
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Abstract

MODULADORES DE CASSETE DE LIGAÇÃO A ATP Compostos da presente invenção e composições farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são úteis como moduladores de transportadores de Cassete de ligação de ATP ("ABC") ou fragmentos dos mesmos, incluindo Regulador de condutância de transmem-brana de fibrose cística ("CFTR"). A presente invenção também se refere a métodos de tratar doenças mediadas por transportador de ABC utilizando compostos da presente invenção.

Description

REFERÊNCIA REMISSIVA A PEDIDOS RELACIONADOS
O presente pedido reivindica a prioridade dos pedidos US números de série 61/112.152 e 61/112.145, os quais são ambos depositados em 6 de novembro de 2008. O teor integral desses pedidos é incorporado aqui na íntegra.
CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a moduladores de transportadores de cassete de ligação-ATP ("ABC") ou fragmentos dos mesmos, incluindo Regulador de condutância de transmembrana de fibrose cística ("CFTR"), composições dos mesmos e métodos dos mesmos. A presente invenção também se refere a métodos de tratar doenças mediadas por transportador ABC utilizando tais moduladores.
ANTECEDENTES da INVENÇÃO
Transportadores de ABC são uma família de proteínas de transportador de membrana que regulam o transporte de uma ampla variedade de agentes farmacológicos, drogas potencialmente tóxicas, e xenobiótiços, bem como ânions. Transportadores de ABC são proteínas de membrana homólogas que se ligam e utilizam trifosfato de adenosina celular (ATP) para suas atividades específicas. Alguns desses transportadores foram descobertos como proteínas de resistência a muitidrogas (como a glicoproteína MDRI-P, ou a proteína de resistência a multidrogas, MRPI), defendendo células de câncer malignas contra agentes quimioterapêuticos. Até a presente data, transportadores de ABC foram identificados e agrupados em 7 families com base em sua identidade de seqüência e função.
Transportadores de ABC regulam uma variedade de papeis fisiológicos importantes no corpo e fornecem defesa contra compostos ambientais prejudiciais. Devido a isso, representam alvos de droga em potencial importantes para o tratamento de doenças associadas a defeitos no transportador, prevenção de transporte de droga para fora da célula alvo, e intervenção em. outras doenças nas quais a modulação da atividade de transportador de ABC pode ser vantajosa.
Um membro da família de transportador de ABC comumente associado á doença é o canal de ânion mediado por ATP/cAMP, CFTR. CFTR é expresso em uma variedade de tipos de células, incluindo células epiteliais absortivas e secretoras, onde regula fluxo de ânion através da membrana, bem como a atividade de outros canais de íon e proteínas. Em células epiteliais, o funcionamento normal de CFTR é crítico para a manutenção, de transporte de eletrólito por todo o corpo, incluindo tecido digestivo e respiratório, CFTR é composto de aproximadamente 1480 aminoácidos que codificam uma proteína composta de urna repetição tandem de domínios de transmembrana, cada contendo seis hélices de transmembrana e um domínio de ligação de nucleotídeos. Os dois domínios de transmembrana são ligados por um domínio (R) regulador, 5 polar, grande com múltiplos sítios de fosforilação que regulam a atividade de canal e tráfego celular.
O gene que codifica CFTR foi identificado e seqüenciado (vide Gregory, R. J. e outros. (1990.) Nature 347:382-386; Rich, D. P. e outros (1990) Nature 347:3.58-362), (Riordan, J, 10 R. e outros (198$) Science 245:1066-1073). Um defeito nesse gene causa mutações em CFTR que resultam em Fibrose cística ("ÇF"), a doença genética fatal mais comum em seres humanos. A Fibrose cística afeta aproximadamente um em cada 2.500 crianças nos Estados Unidos. Na população geral dos Estados
Unidos, até 10 milhões de pessoas carregam uma única cópia do gene defeituoso sem efeitos de doença aparentes. Ao contrário, indivíduos com duas cópias do gene associado à CF sofrem de efeitos debilitantes e fatais de CF, incluindo doença crônica de pulmão.
Em pacientes com fibrose cística, mutações em CFTR expressas endogenamente em epitélio respiratório leva à secreção de ânion apical reduzida causando desequilíbrio em transporte de fluido e ions. A diminuição resultante em transporte de anions contribui para acúmulo aumentado de muco no pulmão e as infecções microbianas associadas que finalmente causam a morte em pacientes com CF. além de doença respiratória, pacientes com CF sofrem tipicamente de problemas gastrointestinais e insuficiência pancreática que, se deixada não tratada, resulta em morte. Além disso, a maioria de, homens com fibrose cística é infértil e a fertilidade é diminuída entre as mulheres com fibrose cística. Ao contrário dos efeitos graves de duas cópias do gene associado à CF, indivíduos com uma única cópia do gene associado à CF apresentam resistência aumentada à cólera e à desidratação resultando de diarréia - talvez explicando a freqüência relativamente elevada do gene CF na população.
A análise de sequência do gene de CFTR de cromossomos de CF revelou uma variedade de mutações que causam doença (Cutting, G. R. e outros. (1990) Nature 346:366^369; Dean, M. e outros. (19.90) Cell 61:863:870; e Kerem, B-S. e outros. (1989) Science 245:1073-1080; Kerem, B-S e outros. (1990) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87:8447-8451). Até a presente data, >1000 mutações que causam doença no gene CF foram identificadas (http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/). A mutação mais prevalente é uma deleção de fenil alanina na posição 508 da seqüência de aminoácido de CFTR, e é comumente mencionada como ΔF508-CFTR. Essa mutação ocorre em aproximadamente 70% dos casos de fibrose cística e é associada a uma doença grave.
A deleção de residuo 508 em ΔF508-CFTR evita que a proteína nascente dobre corretamente. Isso resulta na incapacidade da proteína mutante sair do ER, e traffic para a 5 membrana de plasma. Como resultado, o número de canais presentes na membrana é bem menor do que observado em células que expressam CFTR do tipo selvagem. Além de tráfego prejudicado, a mutação resulta em gating de canal defeituoso. Juntos, o número reduzido de canais na membrana e o gating defeituoso levam a transporte de anion reduzido através de epitélio levando a transporte de fluido e ion defeituoso. (Quinton, P. M. (1990), FASEB J. 4: 2709-2727). Os estudos mostraram, entretanto, que os números reduzidos de ΔF508-CFTR na membrana são funcionais, embora menores do que CFTR do 15 tipo selvagem. (Dalemans e outros (1991), Nature Lond. 354: 526-528; Denning e outros, supra; Pasyk e Foskett (1995), J. Cell. Biochem.. 270: 12347-50) . Além de ΔF508-CFTR, outras mutações que causam doença em CFTR que resultam em tráfego defeituoso, síntese, e/ou gating de canal poderiam ser 20 reguladas ascendentemente ou descendentemente para alterar a secreção de ânions e modificar progresso e/ou gravidade da doença.
Embora CFTR transporte uma variedade de moléculas além de ânions, é evidente que esse papel (o transporte de ânions) representa um elemento em um mecanismo importante de transportar ions e água através do epitélio. Os outros elementos incluem o canal Na+ epitelial, ENaC, co- transportador Na+/2C1~/K+, bomba Na+-K+-ATPase e os canais K+ de membrana basolateral, que são responsáveis pela absorção de cloreto na célula.
Esses elementos trabalham juntos para obter transporte direcional através do epitélio via sua expressão seletiva e localização na célula. Absorção de cloreto, ocorre pela atividade coordenada de ENaC e ÇFTR presente na membrana apical e a bomba Na+-K+-ATPase e canais Cl- expressos na superfície basolateral da célula. 0 transporte ativo secundário de cloreto a partir do lado luminál leva ao acúmulo de cloreto intracelular, que pode então deixar passivamente a célula através de canais Cl", resultando em um transporte vetorial. O arranjo de co-transportador Na+/2C1" ,/K+, bomba. Na+-K+ATPase e os canais K+ de membrana basolateral na superfície basolateral e CETP. no lado luminal coordenam a secreção de cloreto via CFTR no lado luminál. Como água provavelmente nunca é ativamente transportada ela própria, seu fluxo através de epitélio depende em minúsculos gradientes asmáticos transepiteliais gerados pelo fluxo de volume de sódio e cloreto.
Além de Fibrose cística, a modulação de atividade de
CFTR pode ser benéfica para outras doenças não causadas diretamente por mutações em CFTR, c.omó. doenças secretoras e outras doenças de dpbramento de proteina mediadas por CFTR. Essas incluem, porém não são limitadas a, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), doença de olho seco, e Sindrome de Sjogren.
COPD é caracterizada por limitação de fluxo de ar que é progressivo e não totalmente reversível. A limitação de fluxo de ar é devido à hipersecreção de muco, enfisema e bronquiolite. Ativadores de CFTR do tipo selvagem ou mutante oferecem um tratamento potencial de hipersecreção de muco e clearance mucociliar prejudicado que é comum em COPD. Especificamente, o aumento de secreção de ânion através de CFTR pode facilitar o transporte de fluido para o liquido de superfície de via aérea para hidratar o muco e viscosidade de fluido periciliar otimizado. Isso levaria a clearance mucociliar intensificada e uma redução nos sintomas associados à COPD. A doença de olho seco é caracterizada por diminuição em produção aquosa de lágrima e perfis de mucina, proteina e lipídeo de filme de lágrima anormais. Há muitas causas de. olho seco, algumas das quais incluem idade, cirurgia de olho Lasik, artrite, medicações, queimaduras térmicas/químicas, alergias e doenças, como Fibrose cística e síndrome de Sjogren. 0 aumento de secreção de ânion através de CFTR intensificaria o transporte de fluido a partir das células endoteliais de córnea e glândulas secretoras que circundam o olho para aumentar a hidratação de córnea. Isso ajudaria a aliviar os sintomas associados à doença de olho seco. Síndrome de Sjogren é uma doença auto-imune na qual o sistema imune ataca as glândulas que produzem umidade pro todo o corpo, incluindo o olho, boca, pele, tecido respiratório, fígado, vagina e intestino. Os sintomas incluem olho, boca e vagina secas, bem como doença do pulmão, A doença também é associada à artrite reumatóide, lúpus sistêmico, esclerose sistêmica, e polimiposite/dermatomiosite. Acredita-se que o tráfego de proteína defeituosa cause a doença, para a qual opções de tratamento são limitadas, moduladores de atividade de CFTR podem hidratar os vários órgãos afligidos pela doença e ajudam a elevar os sintomas associados.
Como discutido acima, acredita-se que a deleção de resíduo 508 em ΔF508-CFTR evite que a proteína nascente dobre corretamente, resultando na incapacidade dessa proteína mutante de sair do ER, e traffic para a membrana de plasma. Como resultado, quantidades insuficientes da proteína madura estão presentes na membrana de plasma e transporte de cloreto nos tecidos epiteliais é significativamente reduzido. Na realidade, esse fenômeno celular de processamento de ER defeituoso de transportadores de ABC pela maquinaria de ER foi mostrado como sendo a base subjacente não somente para doença de CF,, como para uma ampla gama de outras doenças isoladas e herdadas. Os dois modos em que a maquinaria ER podem funcionar erroneamente são por perda de acoplamento a exportação de ER das proteínas levando à degradação, ou pelo acúmulo de ER dessas proteínas dobradas erroneamente/defeituosas [Aridor M, e outros, Nature Med., 5(7), pág. 745- 751 (1999); Shastry, B,S., e outros, Neuroçhem. International, 43, pág. 1-7 (2003) ; Rutishauser, J., e outros, Swiss Med Wkly, 132., pág. 211-222 (2002); Morello, JP e outros, TIPS, 21, pág. 466- 469 (2000); Bross P,, e outros, Human Mut., 14, pág. 186-198 (1999)]. As doenças associadas à primeira classe d.e mau funcionamento de ER são fibrose cística (devido à ΔF508-CFTR como discutido, acima), enfisema hereditária (devido às al-antitripsina; variantes não Piz), hemocromatose hereditária, deficiências de fibrinólise-coagulação, como deficiência de proteína C, angioedema hereditária do tipo 1, deficiências de processamento de lipídeo, como hipercolesterol.emia familiar, quilomicronemia do tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenagem lisossomal, como doença de- célula-I/pseude- Hurler, mucopolissácarídeos (devido a enzimas de processamento lisossomal), Sandhof/Tay-Sachs (devido à β- hexosaminidase), Crigler-Najjar tipo II (devido a UDP- glucuronila-sialie-transierase), poliendoçrinopatia/hiperinsulemia, diabetes melitus (devido a receptor de insulina), ananismo Laron (devido a receptor de hormônio de crescimento), deficiência de mileoperoxidase, hipoparatiroidismo primário (devido a hormônio de preproparatiroide), melanoma (devido à tirosinase). As doenças associadas à classe mencionada por último de mau funcionamento de ER são CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário (devido à al-antitripsina (variante PiZ), hiper ti roidismo. congênito, osteogênese imperfeita (devido à procolágeno do tipo I, II, IV) , hipofibrinogenemia hereditária (devido a fibrinogênio), deficiência de ACT (devido à al-antiquimot.ripsina) , diabetes insipidus (Dl) , Dl neurofiseal (devido a hormônio vasopvessin/receptor V2), Dl neprogênico (devido a Aguaproin II), síndrome de Charcot- Marie Tooth (devido à proteína de mielina periférica 22), doença Perlizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas como doença de Alzheimer (devido à βAPP e presenilinas), doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, plasia supranuclear progressiva, doença de Pick, vários distúrbios neurológicos poliglutamina como Huntington, ataxia espinocerebular tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, dentato rubro palidoluisiana, e distrofia miotônica bem como encefalopatias espongiformes, como doença Creutzfeldt-Jakob hereditária (devido a defeito de processamento de proteina de Prion), doença de Fabry (devido à a-galactosidase lisossomal A) e síndrome de Straussler-Scheinker (devido a defeito de processamento de Prp).
Além de regulação ascendente de atividade de CFTR, a redução de secreção de ânion por moduladores de CFTR pode ser benéfica para o tratamento de diarréias secretoras, nas quais transporte de água epitelial é dramaticamente aumentado como resultado de transporte de cloreto ativado por secretagogo. O mecanismo envolve elevação de cAMP e estimulação de CFTR.
Embora haja inúmeras causas de diarréia, as principais consequências de doenças de diarréia, resultando de transporte excessivo de cloreto são comuns a todos e incluem desidratação, acidose, crescimento prejudicado e morte.
Diarréias agudas e crônicas representam um principal problema médico em muitas áreas do mundo. A diarréia é tanto um fator significativo em desnutrição como a principal causa de morte (5.000.000 mortes/ano) em crianças com menos de cinco anos de idade.
Diarréias secretoras são também uma condição, perigosa em pacientes de sindrome de imunodeficiência adquirida (AIDS) e doença de intestino inflamatório crônica (IBD). 16 milhões de viajantes para países em desenvolvimento provenientes de nações industrializadas anualmente desenvolvem diarréia, com a gravidade e número de casos de diarréia variando dependendo do país e área de viagem.
A diarréia em animais de celeiro e animais domésticos como vacas, porcos e cavalos, carneiros, cabras, gatos e cães, também conhecida como disenteria bovina, é uma causa principal de morte nesses animais. A diarréia pode resulta de qualquer transição principal, como desmama ou movimento 10 físico, bem como em resposta a uma variedade de infecções bacterianas ou virais e genericamente ocorre nas primeiras horas da vida do animal.
A bactéria que causa diarréia mais comum é E-coli. enterotoxogênica (ETEC) tendo o antígeno K99 pilus. Causas 15 virais comuns de diarréia incluem rotavirus e coronavirus, outros agentes infecciosos incluem criptosporídio, giárdia lamblia, e salmonella, entre outros.
Os sintomas de infecção rotaviral incluem excreção de fezes aquosas, desidratação e fraqueza. Coronavirus causa uma 20 doença mais severa nos animais recém-nascidos, e tem uma taxa de mortalidade mais elevada do que a infecção rotaviral, freqüentemente, entretanto, um animal novo pode ser infectado com mais de um vírus ou com uma combinação de microorganismos virais e bacterianos de uma vez. Isso aumenta dramaticamente a gravidade da doença.
Por conseguinte, há necessidade de moduladores de uma atividade de transportador ABC, e composições dos mesmos, que podem ser utilizados para modular a atividade do transportador de ABC na membrana de célula de um mamífero.
Há necessidade de métodos de tratar doenças mediadas por transportador de ABC utilizando tais moduladores de atividade de transportador de ABC.
Há necessidade de métodos de modular uma atividade de transportador de ABC em uma membrana de célula ex vivo de um mamífero.
Há necessidade de moduladores de atividade de CFTR que podem ser utilizados para modular a atividade de CFTR na membrana de célula de um mamífero.
Há necessidade de métodos de tratar doenças mediadas por CFTR utilizando tais moduladores de atividade de CFTR.
Há necessidade de métodos de modular atividade de CFTR em uma membrana de célula ex vivo de um mamífero.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Verificou-se agora que compostos da presente invenção, e composições farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são úteis como moduladores de atividade de transportador de ABC, particularmente atividade de CFTR. Esses compostos são
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Em algumas modalidades, o composto é
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Em outras modalidades, o composto é
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Ainda ern outras modalidades, o composto é
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Os compostos e composições farmaceuticamente aceitáveis são úteis para tratar ou diminuir a gravidade de uma variedade de doenças, distúrbios ou condições, incluindo, porém não limitados a, fibrose cística, enfisema hereditária, hemocromatose hereditária, deficiências de fibri.nólise de coagulação, como deficiência de proteína C, angioedema 10 hereditária do tipo 1, deficiências de processamento de lipídeo, como hipercolesterolemina familiar, quilomicronemia do tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenagem lisossomal, como doença de célula-I/pseudô-Hurler, muçopolissacarideos, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo 15 II, poliendocrinopatia/hiperinsulemia, diabetes melitus, ananismo laron, deficiência de mileoperoxidase, hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo congênito, osteogênese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (di), di neurofiseal, DI neprogênico, síndrome de Charcot-Marie Tooth, doença Perlizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas como doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, plasia supranuclear progressiva, doença de Pick, vários distúrbios neurológicos poliglutamina como Huntington, ataxia espinocerebular tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, dentato rubro palidoluisiana, e distrofia miotônica bem como encefalopatias espongiformes, como doença
Creutzfeldt-Jakob hereditária, doença de Fabry, síndrome de Straussler-Scheinker, COPD, doença de olho seco e doença de Sjogren.
Inesperadamente, os compostos da presente invenção possuem propriedades terapeuticamente vantajosas.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO T. Definições
Como utilizado aqui, as seguintes definições se
aplicarão a menos que de outro modo indicado.
O termo "transportador de ABC" como utilizado aqui significa uma proteína de transportador de ABC ou um fragmento da mesma compreendendo pelo menos um domínio de ligação, em que a proteina ou fragmento da mesma está presente in vivo ou in vitro. 0 termo "domínio de ligação" como utilizado aqui significa um domínio no transportador de ABC que pode se ligar a um modulador. Vide, por exemplo,
Hwang, T. C. e outros, J. Gen. Physiol. (1998): 111(3), 477- 90.
O termo "CFTR" como utilizado aqui significa regulador de condutància de transmembrana de fibrose cística ou uma .mutação do mesmo capaz de atividade reguladora, incluindo., porém não limitado a, ΔF508 CFTR e G551D CFTR (vide, por exemplo, http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/, para mutações de CFTR).
O termo "modulação" como utilizado aqui significa aumentar ou diminuir, por exemplo, atividade, por uma quantidade mensurável. Os compostos que modulam atividade de Transportador de ABC como atividade de CFTR por aumentar a atividade do Transportador de ABC, por exemplo, um canal de ânion de CFTR, são chamados agonistas. Os compostos que modulam a atividade de Transportador de ABC, como atividade de CFTR, por diminuir a atividade do Transportador de ABC, por exemplo, canal de ânion de CFTR, são chamados antagonistas. Um agonista interage com um Transportador de
ABC, como canal de anion de CFTR, para aumentar a capacidade do receptor transaduce. um sinal intracelular em resposta a ligação de ligando endógeno. Um antagonista interage com um Transportador de ABC, como CFTR, e compete com o(s) ligando(s) endógeno(s) ou substrato(s) para ligar sítio(s) no receptor para diminuir a capacidade do receptor fazer 5 transdução de um sinal intracelular em resposta à ligação de ligando endógeno.
A frase wtratar ou reduzir a gravidade de uma doença mediada por Transportador de ABC" se refere tanto a tratamentos para doenças que são diretamente causadas pelas 10 atividades de Transportador de ABC e/ou CFTR como alivio de sintomas de doenças não diretamente causadas pelas atividades de Transportador de ABC e/ou canal de ânion de CFTR. Os exemplos de doenças cujos sintomas podem ser afetados por atividade de transportador de ABC e/ou CFTR incluem, porém 15 não são limitadas a, fibrose cística, enfisema hereditária, hemocromatose hereditária, deficiências de fibrinólise de co.agulação, como deficiência de proteína C, angioedema hereditária do tipo 1, deficiências de processamento de lipídeo, como hipercolesterolemina familiar, quilomicronemia 20 do tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenagem lisossomal, como doença de çélula-I/pseudo-Hurler, mucopolissacarídeos, Sandhof/Tay-Sachs., Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulemia, diabetes melitus, ananismo laron, deficiência de mileoperoxidase, ’ » □ hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo congênito, osteogênese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (di), di neurofiseal, DI πeprogenico, sindrome de Charcot-Marie Tooth, doença Perlizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas como doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, plasia supranuclear progressiva, doença de Pick, 10 vários distúrbios neurológicos poliglutamina como Huntington, ataxia espinocerebular tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, dentato rubro palidoluisiana, e distrofia miotônica bem como encefalopatias espongiformes, como doença
Creutzfeldt-Jakob hereditária, doença de Fabry, sindrome de
Straussler-Scheinker, COPD, doença de olho seco e doença de S.j ogren.
Para fins da presente invenção, os elementos químicos são identificados de acordo com a Tabela periodica de elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75a
Ed. Adicionalmente, princípios gerais de química orgânica são descritos em "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausolito: .1999, e "March's Advanced Organic Chemistry", 5ta ed., Ed.-: Smith, M.B. e March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001, cujos teores integrais são pelo presente incorporados a título de referência.
Como descrito aqui, os compostos da invenção podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes, como são ilustrados genericamente acima, ou como exemplificados 5 por classes específicas, subclasses e espécie da invenção.
Corno utilizado aqui o termo "alifátiao" abrange os termos alquila, alquenila, alquinila, cada um. dos quais sendo opcionalmente substituído como exposto abaixo.
Como utilizado aqui, um grupo de "alquila" se refere, a um grupo de hidrocarboneto alifático saturado contendo 1-12 (por exemplo, 1-8, 1-6 ou 1-4). átomos de carbono, Um grupo de alquila pode ser reto qu ramificado. Os exemplos de grupos de alquila incluem, porém não são limitados a, metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butrla, terc- butila, n-pentila, n-heptila ou ,2-etil hexila. Ura grupo de alquila pode ser substituído (isto é, opcionalmente substituído) com um ou mais substituintes como halo, fosfo, cicloalifático [por exemplo, cicloalquila ou cicloalquenila] , heterocicloalifático [por exemplo, heterocciloalquila ou heterocicloalquenila], arila, heteroarila, alcóxi, aroíla, heteroaroíla, acila [por exemplo, carbonila (alifática), carbonila . (cicloalifática) , ou carbonila (heterocicloalifática)], nitro, ciano, amido [por exemplo, (cicloalquil alquil) carbonil amino, aril carbonil amino, aralquil carbonil amino, (heterocicloalqila) carbonil amino, (heterocicloalquil alquil) carbonil amino, heteroa.ril carbonil amino, hetexoaral.quil carbonil amino, alquil amino carbonila, cicloalquil amino carbonila, heterociclo alquil 5 amino carbonila, arilaminocarbonila ou heteroaril amino carbonila], amino [por exemplo, alifaticoamino, cicloalifaticoamino, ou heterocicloalifaticoamino], sulfonila [por exemplo, alifático-SO2-] , sulfinila, sulfanila, sulfoxi, uréia, tiouréia, sulfamoila, sulfamida, oxo, carboxi, 10 carbamσila, cicloalifaticóxi, heterociclσalifaticoxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroarilalcoxi, alcoxi carbonila, alquil carboniloxi ou hidróxi. Sem limitação, alguns exemplos de alquila substituída incluem cárboxilalquila (como HOOC-alquila, alcoxi carbonil alquila, 15 e alquil carbonilôxi alquila), cianoalquila, hidróxi alquila, alcoxi alquila, acil alquila, aralquila (alcoxi arila) alquila, (sulfonil amino) alquila (como (alquil-SOj-amino) alquila), aminoalquila, amidoalquila, (cicloalifático) alquila ou haloalquila.
Como utilizado aqui, um grupo de "alquenila" se refere a um grupo de carbono alifático que contém 2-8 (por exemplo, 2-12, 2-6 ou 2-4) átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla. Como um grupo de alquila, um grupo de alquenila pode .1 ser reto ou ramificado. Os exemplos de um grupo de alquenila I : . aMHmáiaiwCa^teaiiMWia8^a*8ast^MBswaafeWHa»»m«áM^^ incluem, porém não são limitados a alila, isoprenila, 2- butenila e 2-hexen.ila. Um grupo de alquenila pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes como halo, f.osfo, cicloalifático [por exemplo, cicloalquila ou 5 cicloalquenila], heterocicloalifático [por exemplo, heterocicloalquila ou heteroçicloalquenila], aril heteroarila, alcóxi, argila, heteroaroíla, acila [por exemplo, (alifático) carbonila, (cicloalifático) carbonila, ou (heterocicloalifático) carbonila], nitro, ciano, amido [por exemplo, (cicloalquil alquil) carbonilamino, aril carbonil amino, aralquil carbonil amino, (heterocicloalquila) carbonil amino, (heterocicloalquil alquil) carbonilamino, (heterocicloalquil alquil) carbonil amino, heteroaril carbonil amino, heteroaralquil carbonil amino alquil aminocarbonila, cicloalquil aminocarbonila, heterocicloalquil amino carbonila, arilamino carbonila, ou heteroaril amino carbonila], amido [por exemplo, alifaticoaminoa cicloalifaticoamino, heterocicloalifático amino, ou alifaticosulfonil amino], sulfonila [pox exemplo, alquil-SOj- , çicloalifãtico-S02-, ou aril-SO2-], sulfinil, sulfanil, sulfóxi, uréia, tiouréia sulfamoíla, sulfamida, oxo, carbóxi, carbamoíla., cicloalifaticos.i, heterocicloalifaticoxi, arilóxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroaralcoxi, alcóxi carbonila, alquil carbonil oxi ou hidróxi. Sem limitação-, I J 1 I j'24 alguns exemplos de alquenilas substituídas incluem ciano alquenil, alcóxi alquenila, acilalquenila, hidróxi alquenila, aralquenila (alcóxi arila) alquenila, (sulfonil amino) alquenila (como (alquila-SOa-alquenila), amino alquenila, 5 amidoalquenila, (cicloalifático) alquenila ou haloalquenila.
Como utilizado aqui, um grupo de "alquinila" se refere a um grupo de carbono alifático que contém 2-8 (por exemplo 2,12, 2-6, ou 2-4) átomos de carbono e tem pelo menos uma ligação tripla. Um grupo de alquinila pode ser reto ou ramificado. Os exemplos de um grupo de alquinila incluem., porém não são limitados a, propargila e butinila. Um grupo de alquinila pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes como aroíla, heteroaroíla, alcóxi, cicloalquiloxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, nitro, carbóxi, ciano, halo, hidróxi, sulfo, mercapto, sulfanil [por exemplo, alifaticosulfanila ou cicloalifaticosulfanila], sulfinila [por exemplo, alifaticosulfinila ou cicloalifaticosulfinila], sulfonila [por exemplo, alifático-SOz-, alifaticoamino-S02-, ou cicloalifatico-S02-] , amido [por exemplo, aminocarbonila, alquil aminocarbonila, alquil carbonil amino, ciclo alquila mino carbonila, • heterociclo alquila mino carbonila, cicloalquil carbonil amino, arilamino carbonila, aril carbonil amino, aralquil carbonil ami.no, (heterocicloalquila) carbonil amino, (cicloalquil alquil) carbonil amino, heteroaralquil carbonil amino, hetero aril carbonil amino ou heteroaril amino carbonila], uréia, tiouréia, sulfamoila, sulf amida, a.lcoxi carbonila, alquil carboniloxi, 5 cicloalifático, heterocicloalifático, arila, heteroarila, acila [por exemplo, (cicloalifático) carbonila oü (heterocicloalifatico) carbonila], amino [por exemplo, alifaticoamino], sulfoxi, oxo, carbóxi, carbamoíla, (cicloalifático) oxi, (heterocicloalifático) oxi ou 10 (heteroarila) alcoxi.
Como utilizado auui, um "amido"abranger tanto * "aminocarbonila"’ e "carbonila mino". Esses termos quando utilizados individualmente ou com relação a outro grupo se referem a um grupo de amido: como -N(RX)-C(O)-RY ou -C(0)~
N(RX)2, quando utilizados terminalmente e -C (.0)-N (RX) - ou -
N(RX)-C(0)- quando utilizados internamente, em que Rx e Ry são definidos abaixo.os exemplos de grupos de amido incluem alquil amido (como alquil carbonil amino oü alquil aminp carbonil), (heterocicloalifático) amido, (heteroaralquil) 20 amido, (heteroaril) amido, (heterocicloalquil) alquilamido, arilámido, aralquilamido, (cicloalquil) alquil amido ou cicloalquil amido.
Como utilizado aqui, um grupo de "amino"se refere a -
NRxYy em que cada de Rx e Ry é independentemente hidrogênio, alifático, cicloalifático, (cicloalifático) alifático, arila, aralif ático, heterocicloalifático, (heterocicloalifático) alifático, heteroarila, carboxi, sulfanila, sulfinila, súlfonila, (alifático) carbonil, (cicloalifático) carbonic, ((cicloalifático) alifático) carbonila, aril carbonila, (aralifático)carbonila, (heterocicloalifático) carbonila, ( (heterocicloalifático)alifático) carbonila, (heteroarila) carbonila, ou (heteroaràlifático) carbonila, cada um dos quais sendo definido aqui e sendo opcionalmente substituido. Os exemplos de grupos de amino incluem alquil amino, dialquil amino ou aril amino, Quando o termo "amino"não é o grupo terminal (por exemplo, alquilcarbonil amino), é representado por -NR*-. Rxtem o mesmo significado como definido acima.
Como utilizado aqui, um grupo "arila" utilizado individualmente ou como parte de uma fração maior como em "ara.lquila", "aralcoxi" ou "ariloxí alquila" se refere a sistemas de anel monocíclicos (por exemplo, fenila); bicíclicos (por exemplo, indenila, naftalenila, tetraidronaftila, tetraidroindenila); e tricíclicos (por exemplo, fluorenila, tetraidrofluorenila, ou tetraidroantracenila, antracenila) nos quais o sistema de anel monocíclico é aromático ou pelo menos um dos anéis em um sistema de anel bicíclico ou triciclico é aromático. Os grupos bicíclico e triciclico incluem anéis carbociclicos de 2-3 membros benzofundidos. Por exemplo, um grupo benzofundido inclui fenila fundida com duas ou mais frações carbocíclicas C4-s. Uma arila é opcionalmente substituída com um ou mais substituintes incluindo alifátiço [por exemplo, alquila, alquenila ou alquinila]; cicloalifático; (cicloalifático)ãlifático; heterocicloalifático; (heterocicloalifático) alifátiço; arila; heteroarila; alcóxi; (cicloalifático) oxi; (heterocicloalifático) oxi; ariloxi; heteroarilóxi; (aralifático) oxi; heteraralifático) oxi; aroíla; heteroaroíla; amino; 0x0 (em ura anel carbocíclico não aromático de uma arila bicíclica ou tricíclica benzofundida); nitro; carbóxi; amido; acila [por exemplo, (alifátiço) carbonila; (cicloalifático) carbonila; ((cicloalifático)alifátiço carbonila; (aralifático)carbonila; (heterocicloalifático)carbonila; ((heterocicloalifático) alifátiço) carbonila; ou (heteroaralifatico)carbonila]; sulfonila [por exemplo,alifáticp-SO2- ou amino-S02-]; sulfinila [por exemplo, alifático-S(O)- ou cicloalifático - S(O)-]; sulfanila [por exemplo, alifático-S-]; ciano; halo; hidróxi; mercapto; sulfoxi; uréia; tiouréia; sulfamoila; sulfamida; ou carbamoíla. Alternativamente, uma arila pode ser não substituída.
Exemplos não limitadores de arilas substituídas incluem haloarila [por exemplo, mono-, di(co.mo p,m-dialóarila) , e 28 (trialo)arila]; (carbóxi)arila [por exemplo, (alcoxi carbonil) arila, ((aralquil) carboniloxi) arila, é (alcoxi carbonil) arila], (amido)arila [por exemplo, aminocarbonila) arila, (((alquila mino) alquil) aminocarbonil) arila, (alquil carbonil) amino arila, (arilamino carbonil.) arila, e (((heteroaril) amino)carbonil) arila]; aminoarila [por exemplo, ((alquil sulfonil) amino) arila ou ((dialquil) amino) arila]; (cianoalqila) arila;. (alcoxi) arila; (sulfamoila) arila [por exemplo, (aminosulfonil) arila]; (alquil sulfonil)arila; (ciano)arila; (hidróxi alquila) arila; ((alcoxi) alquila) arila; (hidróxi) arila, ( (carbóxi)alquila)arila; (((dialquil)amino)alquil)arila; (nitroalquila)arila; ( ((alquilsulfonil)amino)alquil)arila; ((heterocicloalifático)carbonil)arila; ((alquilsulfonil)alquila)arila; (cianoalquila)arila; (hidroxialquila)arila; (alquilçarbonil)arila; alquilaril; (trialoalquil)arila; p-amino-m-alcoxicarbonilaril; p-amino-m- cianoaril; p-halo-m-aminoarila; ou (m-(heterocicloalifático)- o-(alquila))arila.
Como utilizado aqui, um ''aralifático"como um grupo de "aralquila"se refere a um grupo alifático (por exemplo, um grupo de alquila Ç1.-4) . que é substituido com um grupo de arila, "Alifático", "alquila"e "arila"são definidos aqui. Um exemplo de um aralifático como um grupo aralquila é benzila.
Como utilizado aqui, um grupo "aralquila" se refere a um grupo alquila (por. exemplo, um grupo alquila C1-..9) que é substituído com um grupo de arila. Tanto "alquila" como "arila" foram definidos acima. Um exemplo de um grupo aralquila é benzila. Uma aralquila é opcionalmer.te substituída com um ou mais substituintes como alifáti.co [por exemplo, alquila, alquenila, ou alquinila, incluindo çarboxialquila, hidróxi alquila, ou haloalquila como trifluorometila], cicloalifático [por exemplo, cicloalquila ou cicloalquenila], (cicloalquil) alquila, heterocicloalquila, (heterocicloalquila) alquila, arila, heteroarila, alçoxi, cicloalquilóxi, heterocicloalquilóxi, arilóxi, heteroarilóxi, aralquilóxi, heteroaralquilóxi, aroíla, heteroaroíla, nitro, carbóxi, alcóxi carbonila, alquil carboniloxi, amido [por exemplo aminocarbonila, alquil carbonilamino, cicloalquil carbonilamino, (cicloalquil alquil) carbonilamino, aril carbonil amino, aralquil carbonilaraino, (heterocicloalquil) carbonilamino, (heterocicloalquil alquil) carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, ou heteroaralquilcarbonilamino], ciano, halo, hidróxi, acila, mercapto, alquilsulfanila, sulfoxi, uréia, tiouréia, sulfamoila, sulfamida, oxo, ou carbamoíla.
Como utilizado aqui, um "sistema de anel bicíclico" inclui estruturas de 8-12 (por exemplo, 9, 10 ou 11) membros que formam dois anéis, em que os dois anéis têm pelo menos um átomo em comum (por exemplo, 2 átomos em oomum). Os sistemas de anel bicíclico incluem bicidoalif áticos (por exemplo, bicicloalquila ou bicicloalquenila), bicicloeteroalifáticos, arilas bicíclicas, e heteroarilas bicíclicas.
Como utilizado aqui, um grupo "carbociclo" ou "cicloalifático"abrange um grupo "cicloalquila" e um grupo "cicloalquenila", cada um dos quais sendo opcionalmente substituído como exposto abaixo.
Como utilizado aqui, um grupo "cicloalquila" se refere a um anel mono- ou bicíclico (fundido ou ligado) carbocíclico saturado de .3-10 (por exemplo 5-10) átomos de carbono. Os exemplos de grupos de cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, cielopentila, cícloexila, ci.cloeptila, adamantila, norbomila, eubila, octaidrq-indenila, decaidro- naftila, bicico[312.1]octila, biçiclo[2.2,2.Joctila, biciclo[3.3.1]nonila, biciclo[3.3.2.]decila, biciclo[2.2.2.]octila, adamantila ou ((amlnocarbonil) cicloalquil) cicloalquila. üm grupo "cicloalquenila", como utilizado aqui, se refere a um. anel carbocíclico não aromático de 3-10 (por exemplo, 4-8) átomos de carbono tendo uma ou mais ligações duplas. Os exemplos de grupos de cicloalquenila incluem çiclopentenila, 1,4-cicloexa-di-enila, cicloeptenila, cicloctenila, hexaidro-indenila, cctaidro-naftila, cicloexenila, Çiclopentenila, biciclo[2.2.2]octenila ou 5 biciclo[3.3.1]nonenila.
Üm grupo de cicloalquila ou cicloalquenila pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes como fósforo, alifático [por exemplo, alquila, alquenila, ou alquinila], cicloalifático, (cicloalifático) alifático, 10 heterocicloalifático, (heterocicloalifático) alifático, arila, heteroarila, alçoxi, (cicloalifático)oxi, (heterocicloalifático) oxi, arilóxi, heteroarilóxi, (aralifático)oxi, (heteroalifático), oxi, aroíla, heteroaaroíla, amino, amido , por exemplo, (alifático) 15 carbonil amino, (cicloalifático) carbonil amino, ((cicloalifático) alifático) carbonil amino, (aril) carbonil amino, (aralifático) carbonil ami.no, (heterocicloalifático) carbonil amino, ( (heterocicloalifático) alifático) carbonil amino, (heteroarila) carbonil amino, ou (heteroaralifático) carbonil amino], nitro, carbóxi [por exemplo, HOOC-, alcóxi carbonila ou alquil carbonilóxi], arila [por exemplo, (cicloalifático) carbonila, ( (cicloalifático) alifático) carbonila, (aralifático) carbonila, (heterocicloalifático) carbonila, ((heterocicloalifático) alifático) carbonila, 32 ou (heteroáral.ifático) carbonila], ciano, halo, hidróxi, mercapto, sul.fonila [por exemplo, alquila-SQ2- e arila-502-] , sulfinila [por exemplo, alquila-S(O)-], sulfanila [por exemplo, alquila-S-], sulfoxi, uréia, tioureia, sulfamoila, sulfamida, oxo, ou carbamoila.
Como utilizado aqui, o termo "heterociclo" ou "heterocicloalifático" abrange um grupo heterocicloalquila e um grupo heterocicloalquenila, cada um dos quais sendo opcionalmente substituido como exposto abaixo.
Como utilizado aqui, um grupo "heterocicloalquila" se refere a uma estrutura de anel saturada de 3-10 membros mono- óü bicicliça (fundida ou ligada) (por exemplo, 5 a 10 membros mono- ou biciclica) na qual um ou mais dos átomos de anel é um heteroátomo (por exemplo, N, 0, $, ou combinações dos mesmos). Os exemplos de um grupo heterocicloalquila incluem piperidila, piperazila, teetraidropiranila, tetraidrofurila, 1, 4-dioxola.ninla, 1,4-ditianila, 1,3-dioxolanila, oxazolidila, isoxazolidila, morfolinila, tiomorfolila, octaidrobenzofurila, octaidrocromenila, octaidrotiocromenila, octaidroindolila, octaidropirindinila, decaidroquinolinila, octaidrobenzo[b]tiofeneila, 2-oxa-biciclo[2.2.2]octila, 1- aza-biciclo[2.2.2]octila, 3-aza-biciclo[3.2.1] octila, e 2,6- dioxa-triciclo [3.3.31. O3’'] nonila. Um grupo heterocicloalquila monocíclico pode ser fundido com uma fração de fenila para formar estruturas, como tetraidroisoquinolina, que seria categorizado como heteroarilas.
Um grupo "heterocicloalquenila", como utilizado aqui, 5 se refere a uma estrutura de anel não aromática mono- ou bicíclicá (por exemplo, 5 a 10 membros mono- ou bioiclica) tendo uma ou mais ligações duplas, e em que um ou mais dos átomos de anel é um heteroátomo (por exemplo, N, O ou S) . heterociclcalifáticos monocíclicos e bicíclicos são numerados 10 de acordo com nomenclatura química padrão.
Um grupo heterocicloalquila ou heterocicloalquenila pode ser opci ona Imente substituído com um ou mais substituintes coroo fósforo, alifátiço [por exemplo, alquila, alquenila, oü alquinila], cicloalifático, (cicloalifático)alifátiço, heterocicloalifático, (heterocicloalifático)alifátiço, aril, heteroaril, alcóxi, (cicloalifático)oxi, (heterocicloalifático)oxi, ariloxi, heteroariloxi, (aralifático)oxi, (heteroaralifático)oxi, aroíla, heteroaroila, amino, amido [por exemplo, 20 (alifátiço)carbonilamino, (cicloalifático)carbon!lamino, ((cicloalifático) alifátiço)carbonilamino, (aril)carbonilamino, (aralifático)carbonilamino, (heterocicloalifático)carbonilamino, ((heterocicloalifático) alifátiço)carbonilamino, (heteroaril)carbonilamino, ou .fess® Íüsirâ»4kss~ss (heteroaralifático)earbonilamino], nitro, carbóxi [por exemplo, HOOC-, alccxioarbonil, ou alquilcarboniloxiJ, acil [por exemplo, (cicloalifátiço)carbonil, ((cicloalifático) alifático)carbonil, (aralifático)carbonil, (heterocicloalifático)carbonil, ((heterocicloalifático)alifático)carbonil, ou (heteroaralifático) carbonil] , nitro, ciano, halo, hidróxi., mercapto, sulfonila [por exemplo, alquilsulfonila ou arilsulfonila], sulfinila [por exemplo, alquilsulfinila], sulfan.ila [por exemplo, alquilsul.fanila], sulfoxi, uréia, tiouréia, sulfamoila, sulfamida, oxo, ou carbamoíla.
Um grupo de "heteroarila" como utilizado aqui, se refere a um sistema de anel monocíclico, bicíclico ou. tricíclico tendo 4 a 15 átomos de anel em que um ou mais dos átomos de anel é um heteroátomo (por exemplo, N, O, S, ou combinações dos mesmos) e nos quais o sistema de anel monocíclico é aromático ou pelo menos um dos anéis nos sistemas de anel bicíclico ou tricíclico é aromático. Um grupo de heteroarila inclui um sistema de anel benzofundidoo tendo 2 a 3 anéis. Por exemplo, um grupo benzofundido inclui benzo fundido com uma ou duas frações heterocicloalifáticas de 4 a 8 membros (por exemplo, indolizila, indolila, isoindolila, 3H-indolila, indolinila, benzo[b]furila, benzo[b]tiofenila, quinolinila ou isoquinolinila). Alguns exemplos de heteroarila são acetidinila, p.iridila, 1H- indazolila, furila, pirrolila, tienila, tiazolila, oxazolila, imidazollla, tetrazolila, benzofurila, isoquinolinila, benztiazolila, xanteno, tioxanteno, fenotiazina, diidroindol, benzo[1,3]dioxol, benzo[b]furila, benzo[b]tiofenila, índazolila, benzimidazolila, benztiazolila, purila, cinolila, quinolila, quinazolila, cinolila, ftalazila, quinazolila, quinoxalila, isoquinolila, 4H-quinolizila, benzo-1,2,5- tiadiazolila ou 1,8-naftiridila.
Sem limitação, heteroarilas monociclicas incluem furila, tiofenila, 2H-pirrolila, pirrolila, oxazolila,. tazolila, imidazollla, pirazolila, isoxazolila, isotiazolila, 1,3,4-tiadiazolila, 2H-piranila, 4-H-pranila, piridila, piridazila, pirimidila, pirazolila, pirazila ou 1,3,5- triazila. Heteroarilas monociclicas são numeradas de acordo com nomenclatura química padrão.
Sem limitação, heteroarilas bicíclicas incluem indolizila, indolila, isoindolila, 3H-indolila, indolinila, benzo[b]furila, benzo[b]tiofenila, quinolinila, isoquinolinila, indolizinila, isoindolila, indolila, benzo[b]furila, bexo[b]tiofenila, indazolila, benzimidazila, benztiazolila, . purinila, 4H-quinol:zila, qulnolíla, isoquinolila, cinolila, ftalazila, quinazolila, quinoxalila, 1,8-naftiridila ou pteridila. Heteroarilas bicíclicas são 36 numeradas de acordo com nomenclatura química padrão.
Uma. heteroarila é opcionalmente substituída com. um ou mais substituintes como alifático [por exemplo, alquil, alquenila ou alquinila]; cicloalifático; (cicloalifático)alifático; heterocicloalifático; (heterocicloalifático)alifático; aril; hetexoari1; alcoxi; (cicloalifático)oxi; (.heterocicloalifático) oxi; ariloxi; hetéroariloxi; (aralifático)oxi; (heteroaralifático)oxi; arpíla; heteroaroíla; amino; oxo (em. um anel carbocíclico ou heterocíclico não aromático de uma heteroarila bicíclica ou triciclica) ; carbóxi; amido.; acil [ e.g., alifáticocarbonil; (cicloalifático)carbonil; ((cicloalifático)alifático)carbonil; (aralifático)carbonil; (heterocicloalifático)carbonil; ((heterocicloalifático)alifático)carbonil; ou (heteroaralifático)carbonil] ; sulfonila [por exemplo, alifáticosulfonila ou aminosulfonila]; sulfinila [por exemplo, alifáticosulfinila] ; sulfanila [por exemplo., alifáticosulfanila]; nitro; ciano; halo; hidróxi; mercapto; sulfoxi; uréia; tiouréia; sulfamoila; sulfamida; ou carbamoila. Alternativamente, uma heteroarila pode ser não substituída.
Exemplos não limitadores de heteroarilas substituídas incluem (halo)heteroaril [por exemplo, mono- e di- (halo)heteroaril]; (carboxi)heteroaril [por exemplo, (aleoxicarbonil)heteroaril]; cianoheteroaril; aminoheteroaril [por exemplo, ((alquilsulfonila)amino)heteroaril e ((dialquil)amino)heteroaril]; (amido)heteroaril [por exemplo, 5 aminocarbonilheteroaril, ((alquilcarbonil)amino)heteroaril, ( ( ( (alquil)amino)alquil)aminocarbonil)heteroaril, (((heteroaril)amino)carbonil)heteroaril, ((heterocicloalifático)carbonil)heteroaril, e ((alquilcarbonil)amino)heteroaril]; (cianoalquil)heteroaril; .10 (alcoxi)heteroaril; (sulf arnoi la) hetero aril [por exemplo, (aminosulfonila)heteroaril]; (sulfonila)heteroaril [por exemplo, (alquilsulfonila)heteroaril]; (hidroxialqu.il) heteroaril; (alcoxialquil) heteroaril; (hidroxi)heteroaril; ((carboxi)alquil)heteroaril; (((dialquil)amino)alquil)heteroaril; (heterocicloalifático)heteroaril; (cicloalifático)heteroaril; (nitroalquil)heteroaril; (((alquilsulfonila)amino)alquil)heteroaril; ((alquilsulfonila)alquil)heteroaril; (cianoalquil)heteroaril; (acil)heteroaril [por exemplo, (alquilcarbonil)heteroaril]; (alquil)heteroaril, e (haloalquil)heteroaril [por exemplo, trihaloalquilheteroaril] .
Um grupo "heteroaralifático"(como um grupo heteroaralquila) como utilizado aqui, 38 alifátiço (por exemplo, um grupo de alquila Ci-«) que é substituído com um grupo de heteroarila. "Alifátiço", "alquila"e "heteroarila" foram definidos acima.
Um grupo de "heteroaralquila", como utilizado aqui, se refere a um grupo de alquila (por exemplo, um grupo de alquila Cj^) que è substituído com um grupo de heteroarila. Tanto "alquila"como "heteroarila"foram definidos acima. Um heteroaralquila é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes como alquil (incluindo earboxialquil, hidroxialquil, e haloalquil como trifluorometil), alquenila, alquinila, cicloalquil, (cicloalquil)alquil, heterocicloalquil/ (heterocicloalquil)alquil, aril, heteroaril, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, hetèróariloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, aroila, heteroaroila, nitro, carboxi, alcoxicarbonil, alquiIcarboniloxi, aminocarbonil, alquilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, ar i1carbonilami no, a ra1quilea rbon i1amino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, ciano, halo, hidroxi, acil, mercapto, alquilsulfanila, sulfoxi, uréia, tiouréia, sulfamoila, sulfamida, oxo, ôu carbamoíla.
Como utilizado aqui, "fração cíclica"e "grupo cíclico" 39 se referem a sistemas de. .anel mono-, bi- e triciclico incluindo cicloalifático, heterocicloalifático, arila ou heteroarila, cada um dos quais foi anteriormente definido.
Como utilizado aqui, um "sistema de anel bicíclico ligado" se refere a um sistema de anel heterocicloalifático bicíclico ou sistema de anel cicloalifático bicíclico no qual os anéis são ligados. Os exemplos de sistemas de anel bicíclico ligado incluem., porém não são limitados, a adamantanila, norbornanila, biciclo[3,2.1]octila, biciclo[2.2.2]octila, biciclo[3.3.1]nonila, biciclo[3.2.3]nonila, 2-oxabiciclo[2.2•2]octila, 1- azabiciclo. [2.2.2] octila, 3-azabiciclo[3.2.1] octila, e 2,6- díoxa-triciclo[3.3.1.Q3,7]nonila. Um sistema bicíclico ligado pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes como alquil (incluindo carboxialquil, hidroxialquil, e haloalquil como trifluorometil), alquenila, alquinila, cicloalquil, (cicloalquil)alquil, heterocicloalquil, (heterocicloalquil)alquil, aril, heteroaril, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, aroíla, heteroaroíla, nitro, carbóxi, alcoxicarbonil, alquil.carboniloxi, aminocarbonil, alquilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (hetexocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonílamino, heteroaralquilcarbonilamino, ciano, halo, hidroxi, aci.l, mercapto, alquilsulfanila, sulfoxi, uréia, tiouréia, sulfamoila, sulfamida, oxo, ou carbamoíla.
Como utilizado aqui, um grupo "acila" se refere a um grupo de formila ou RZ-C(O)- (como alquila-Ç(0)-, também mencionado como "alquil carbonila") onde Rxe "alquila" foram definidos anteriormente. Acetila e pivaloíla são exemplos de grupos de acila.
Como utilizado aqui, uma "aroíla" ou "heteroaroíla" se refere a uma arila-C(O)- ou uma heteroarila-C.(O) -. A porção de arila e heteroarila da araoíla ou heteroaroíla é opcionalmente substituída como anteriormente definido.
Como utilizado aqui, um grupo "alcoxi" se refere a um grupo de alquila-0- onde "alquila" foi definida anteriormente.
Como utilizado aqui, um grupo de "carbamoíla"se refere a um grupo tendo a estrutura -O-CO-NRXRYou -NRX-CO-O-RZ, em que Rxe RYforam definidos acima e Rz pode ser alifático, aril, aralifático, heterocicloalifático, heteroaril, ou heteroaralifático.
Como utilizado aqui, um grupo "carbóxi" se refere a - COOH, -COOR-, -OC(O)H, ~0C(0)Rx, quando utilizado como um 41 grupo terminal; ou -0C(0)- ou -C(O)u- quando utilizado como um grupo interno.
Como utilizado aqui, um grupo "haloalifático"se refere a um grupo alifátiço substituído com 1-3 halogênio. Por exemplo, o termo haloalquila inclui o grupo -CF3.
Como utilizado aqui, um grupo "mercapto"se refere a -SH.
Como utilizado aqui, um grupo"sulfo" se refere a -SO3H ou -SO3RX quando utilizado terminalmente ou -S(O)3- quando utilizado internamente.
Como utilizado aqui, um grupo "sulfamida" se refere à estrutura -NRX-S (O) 2-NRYR2 quando utilizado terminalmente, e -NRX-S (0) 2-NRY~ quando utilizado internamente, em que Rx, RY, e Rz foram definidos acima.
Como utilizado aqui, um grupo "sulfonamide"refere-se à estrutura -S (0) 2-NRxRt ou -KRX-S(0)2-Rz quando utilizado terminalmente; ou -S(0)2-NRx- ou -NRX -§(0)2- quando utilizado inter rarer, te, eir. que Rx, Ry, e Rz são definidos acima.
Como utilizado aqui um grupo "sulfanila"se refere a S-Rx quando utilizado terminalmente e -S- quando utilizado internamente, em que Rx foi definido acima. Qs exemplos de sulfanilas incluem alifático-S-, cicloalifático-S-, aril-S-, ou similar.
Como utilizado aqui um grupo "sulfinila" se refere a S(O)-RX quando utilizado terminalmente e -S(O)- quando utilizado internamente, em que R>: foi definido acima. Os grupos de sulfinila exemplares incluem alifático-S(0)-, aril- S(0)-f (cicloalifático(alifático))-S(0)cicloalquil-S(0) heterocicloalifátiço-S(0)-t heteroaril-S(0)ou similar.
Como utilizado aqui, um grupo "sulfonila” se refere a - S(O:)j-Rx quando utilizado terminalmente e -S(0)2- quando utilizado internamente, em que Rx foi definido acima. Os grupos de sulfenila exemplares incluem alifático-S(0) 2-, aril- S(0)2—, (cicloalifático (alifático) )-S.(0)2-, cicloalifático- S(0)2-, heterocicloalifático-S(0) 2-A heteroaril-S(0)2-, (cicloalifático(amido(alifático)))-S(0)2-ou similar.
Como utilizado aqui, um grupo "sulfoxi" se refere a O-SO-RX ou -SO-O-RX, quando utilizado terminalmente e -0-S(0)- ou —S(0)—0— quando utilizado internamente, onde Rx foi definido acima.
Como utilizado aqui, um grupo de "halogênio" òü "halo" se refere a flúor, cloro, bromo ou iodo.
Como utilizado aqui, um "alçoxicarbonil," que é abrangido pelo termo carbóxi, utilizado individualmente ou com relação a outro grupo se refere a um grupo como alquila - 0-C(0)-.
Como utilizado aqui, um "alcóxialquil" se refere a um grupo de alquila como alquila-0-alquil-, em que a alquila foi definida acima.
Como utilizado aqui, uma "carbonila" se refere a -C(0)- Como utilizado aqui, um "oxo" se refere a -O.
Como utilizado aqui, o termo "fosfo" ge refere, à fosfinatos e fosfonatos. Os exemplos de fosfinatos e fosfonatos incluem —P (0) (RF)2, W que Rp é alifático, alcóxi, ariloxi, heteroarilóxi, (cicloalifático) oxi, (heterocicloalifático)oxi arila, heteroarila, cicloalifático ou amino.
Como utilizado aqui, uma "aminoalquila" se refere a estrutura (Rx) íN-alquila-.
Como utilizado aqui, uma "cianoalquila" se refere à estrutura (NC)-alquila-.
Como utilizado aqui, um grupo "uréia"se refere à estrutura -NRx-C0-NRyRz e um grupo de "tiouréia"se refere á estrutura -NRx-CS-NRyRz quando utilizado terminalmente e -NRX- CO-NRy ou -MRx-CS-NRy- quando utilizado internamente, em que Rx, Ry e R2 foram definidos acima.
Como utilizado aqui, um grupo de "guanidina" gg refere 20 à estrutura -N~C (N (RxRy) ) N (R*Ry) ou -NRX-C (=NRX) NRxRysm que e Ry foram definidos acima.
Como utilizado aqui, o termo grupo de "amidino" se refere à estrututa -C= (NRX) N (RxRy) em que RK e RY foram definidos acima.
Em geral, o termo "vicinal"se refere à colocação de substituintes em um grupo que inclui dois ou mais átomos de carbono, em que os substituintes são ligados a átomos de carbono adjacentes.
Em geral, o termo "germinal" se refere à colocação de substituintes em um grupo que inclui dois ou mais átomos de carbono, em que os substituintes são ligados ao mesmo átomo de carbono.
Os termos "terminalmente" e "internamente" se referem à localização de um grupo em um substituinte. Um grupo é terminal quando o grupo está presente na extremidade do substituinte não adicionalmente ligada ao resto da estrutura química, carboxialquila, isto é, R*O(0)C-alquila é um exemplo de um grupo de carbóxi utilizado terminalmente. Um grupo é interno quando o grupo está presente nomeio de um substituinte da estrutura química. Alquil carbóxi (por exemplo, alquila-C(0)0- cu alquila-OC(0)-) e alquil carbóxiarila (por exemplo, alquila-C(0)-0-arila ou alquila- 0(CO)-arila) são exemplos de grupos de carbóxi utilizados internamente.
Como utilizado aqui, uma "cadeia alifática" se refere a um grupo alifátiço ramificado ou reto (por exemplo, grupos de alquila, grupos de alquenila ou grupos de alquinila). Uma cadeia alifática reta tem a estrutura -[CH2K-, èm que v é 1- 12. Uma cadeia alifática ramificada é uma cadeia alifática reta que é substituída com um ou mais grupos alifáticos. Uma cadeia alifática ramificada tem a estrutura —[CQQ]V- onde cada Q é independentemente um hidrogênio ou um grupo alifático; entretanto, Q será um grupo alifático em pelo menos uma ocorrência. 0 termo cadeia alifática inclui cadeias de alquila, cadeias de alquenila, e cadeias de alquinila, onde alquila, alquenila e alquinila são definidos acima.
A frase "opcionalmente substituída" é utilizada de forma intercambiável com a frase "substituída ou não. substituída". Como descrito aqui, os compostos da invenção podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes, como sào ilustrados genericamente acima, ou como exemplificados por classes específicas, subclasses e espécies da invenção. Como descrito aqui, as variáveis Ri, R? e R3 e outras variáveis contidas nas fórmulas descritas aqui abrangem grupos específicos, coroo alquila e arila., A menos que de outro modo observado, cada dos grupos específicos para as variáveis Ri, R2 e R3 e outras variáveis contidas nos mesmos pode ser opcionalmente substituída com um ou mais substituintes descritos aqui. Cada substituinte de um grupo específico é adicionalmente substituído opcionalmente com um a três de halo, ciano, oxo, alcoxi, hidróxi, amino, nitro, arila, cicloalifático, heterocicloalifático, heteroarila, haloalquila, e alquila. Por exemplo, um grupo de alquila pode ser substituído. com alquil sulfanila e o alquil sulfanila pode ser opcionalmente substituído com um a três de halo, ciano, oxo, alcóxi, hidróxi, amino, nitro, arila, haloalquila, e alquila. Como exemplo adicional, a porção de cicloalquila de um (cicloalquil) carbonil amino pode ser opcionalmente substituída com um a três de halo, ciano, alcóxi, hidróxi, nitro, haloalquila e alquila. Quando dois grupos de alcóxi são ligados ao mesmo átomo ou átomos 10 adjacentes, os dois grupos de alcóxi podem formar ura anel juntamente com o(sj átomo(s) ao qual são ligados.
Em geral, o termo "substituído" quer precedido pelo termo "opcionalmerite" ou não, se refere à substituição de radicais de hidrogênio em uma dada estrutura com o radical de 15 um substituinte especificado. Substituintes específicos são descritos acima nas definições e abaixo na descrição de compostos e exemplos dos mesmos. A menos que de outro modo indicado, um grupo opcionalmente substituído pode ter um substituinte em cada posição substituível do grupo, e quando 20 mais de uma posição em qualquer estrutura dada pode ser substituída com mais de um, substituinte selecionado de um grupo especificado, o substituinte pode ser igual ou diferente em cada posição. Um substituinte de anel, como heterocicloalquila, pode ser ligado a outro anel, como uma cicloalquila, para formar um sistema de anel espiro- bicíclico, por exemplo, os dois anéis partilham um átomo comum. Como uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica reconhecerá, as comb in ações de substituintes previstas por 5 essa invenção são aquelas combinações que resultam na formação de compostos estáveis ou quimicamente exequíveis.
Á frase "estável ou quimicamente exequível"como utilizado aqui, se refere a compostos que não são substancialmente alterados quando submetidos a condições para 10 permitir sua produção, detecção e preferivelmente sua recuperação, purificação e uso para uma ou mais das finalidades reveladas aqui. Em algumas modalidades, um composto estável ou composto quimicamente exequível é um que não é substancialmente alterado quando mantido em uma 15 temperatura de 40°Ç ou menos, na ausência de umidade ou outras condições quimicamente reativas, por pelo menos uma semana.
Como utilizado aqui, uma "quantidade eficaz" é definida como a quantidade exigida para conferir um efeito terapêutico 20 no paciente tratado, e é tipicamente determinada com base na idade, área superficial, peso e condição do paciente. Ã inter-relação de dosagens para animais e seres humanos (com base em miligramas por metro quadrado de superfície do corpo) é descrita por Freireich e outros, Cancer Chemother. Rep., 48 50: 219 (1966). A área superficial do corpo pode ser aproximadamente determinada a partir da altura e peso do paciente. Vide, por exemplo, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, New York, 537 (1970). Como utilizado aqui, "paciente" se refere a um mamífero, incluindo um ser humano.
A menos que de outro modo mencionado, estruturas representadas aqui pretendem incluir também todas as formas isoméricas (por exemplo enantioméricas, diastereoméricas e geométricas (ou de conformação)) da estrutura; por exemplo, as configurações R e S para cada centro assimétrico, isômeros de ligação dupla (Z) e (E) e isômeros de conformação (Z) e (E) . portanto, isômeros estereoquímicos únicos bem como misturas enantioméricas, diastereoméricas e geométricas (ou de conformação) dos presentes compostos estão compreendidos no escopo da invenção. A menos que mencionado de outro modo, todas as formas tautoméricas dos compostos da invenção estão compreendidas no escopo da invenção. Adicionalmente, a menos que de outro modo mencionado, estruturas representadas aqui pretendem incluir também compostos que diferem somente na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, compostos tendo as presentes estruturas, exceto pela substituição de hidrogênio por deutério ou trítio, ou a substituição de um carbono por um carbono enriquecido com 13C ou 14Ç estão compreendidos no escopo da presente invenção. Tais compostos são úteis, por exemplo, como ferramentas analíticas ou sondas em ensaios biológicos ou como agentes terapêuticos.
Os compostos da presente invenção são moduladores úteis de transportadores de ABC e são úteis no tratamento de doenças mediadas por transportador de ABC.
COMPOSTOS
Compostos da presente invenção são
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Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a uma compreendendo (i) um composto da presente invenção; e (ii) um veiculo farmaceuticamente aceitável. Em outra modalidade, a composição compreende ainda um agente adicional selecionado de um agente mucolítico, broncodilatador, uni antibiótico, um agente an ti-infective, um agente antiir.f larcatório, corretor CFTR, ou um agente 5 nutricional. Em outra modalidade, a composição compreende ainda um agente adicional selecionado de compostos revelados no pedido de patente US número de série 11/165.818, publicado como pedido de patente publicado US número 2006/0074075, depositado em 24 de junho de 2005, e pelo presente incorporado a titulo de referência na íntegra. Em outra modalidade, a composição compreende ainda N-(5-hidroxi-2,4- diterc-butil-fenil)-4-oxo-lH-quinolina-3-carboxamida. Essas composições são úteis para tratar as doenças descritas abaixo incluindo fibrose cística. Essas composições também são úteis 15 nos kits descritos abaixo.
Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a um método de aumentar o número de transportadores de ABC funcionais em uma membrana de uma célula, compreendendo a etapa de contatar a célula com um composto selecionado de
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Em uma modalidade desse método, a condição, doença, ou distúrbio é selecionado de fibrose cística, enfisema 5 hereditária, hemocromatose hereditária, deficiências de f ibrin.ólise de coagulação, como deficiência de proteína C, angi oedema hereditária do tipo 1, deficiências. de processamento de lipídeo, como hipercolesterolemina familiar, quilomicronemia do tipo 1, abétalipoproteinemia, doenças de 10 armazenagem lisossomal, como doença de célula-I ,/pseudo- Hurler, mucopolissacarídeos, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-
Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulemia, diabetes melitus, arianismo laron, deficiência de mileoperoxidase, hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo 5 congênito, osteogênese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (di), di neurofiseal, DI neprogênico, síndrome de Charcot-Marie Tooth, doença Perlizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas como doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral 10 amiotrófica, plasia supranuclear progressiva, doença de Pick, vários distúrbios neurológicos poliglutamina como Huntington, ataxia espinocerebular tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, dentate rubrd palidoluisiana, e distrofia miotônica bem como encefalopatias espongiformes, como doença 15 Creutzfeldt-Jakob hereditária, doença de Fabry, síndrome de
Straussler-Scheinker, COPD, doença de olho seco e doença de Sjogren.
Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a um kit para uso na medição da atividade de um transportador de
ABC ou um fragmento do mesmo em uma amostra biológica in vitro ou in vivo, compreendendo: i) Uma primeira composição compreendendo um composto selecionado de
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b) medir atividade do transportador de ABC ou um fragmento do mesmo.
Em uma modalidade, o kit compreende ainda instruções para a) contatar uma composição adicional com a amostra biológica; b.) medir a atividade do transportador de ABC ou um fragmento do mesmo na presença do composto adicional, e c) comparar a atividade do transportador de ABC na presença do composto adicional com a densidade do .transportador de ABC na presença da primeira composição.
Em uma modalidade, o kit é utilizado para medir a I i densidade de CFTR.
Em certas modalidades de todos os aspectos acima, o composto é
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Em outras modalidades de todos os aspectos acima, ô composto é
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Ainda em outras modalidades de todos os aspectos acima, o composto é
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ESQUEMÁS S.INTÉTICO'S GEN.ÉRICOS
Os compostos da presente invenção podem ser prontamente sintetizados de materiais de partida conhecidos ou comercialmente disponíveis por métodos conhecidos. Vias sintéticas exemplares para produzir compostos da presente invenção são fornecidas aqui.
FORMULAÇÕES, ADMINISTRAÇÕES E USOS
Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, composições farmaceuticamente aceitáveis são fornecidas, em que essas composições compreendem quaisquer dos compostos como descrito aqui., e opcionalmente compreendem um veiculo ou adjuvante aceitável farmaceuticamente. Em certas modalidades, essas composições compreendem ainda opcionalmente um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
Será também reconhecido que certos dos compostos da presente invenção podem existir em forma livre para tratamento, ou onde apropriado, como um derivado farmaceuticamente aceitável ou um pró-medicamento do mesmo. De acordo com a presente invenção, um derivado ou um pró- medicamento farmaceuticamente aceitável inclui, porém não é limitado a, sais, ésteres farmaceuticamente aceitáveis, sais de tais ésteres, pu qualquer outro aducto ou derivado que após administração a um paciente em necessidade é capaz de fornecer, direta ou indiretamente, um composto como de outro modo 'descrito aqui, ou um metabólito ou resíduo do mesmo.
Como utilizado aqui, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" se refere àqueles sais que estão, compreendidos no escopo de decisão médica correta, apropriado para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais inferiores sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e similar, e são comensuráveis com uma razão de risco/benefício razoável. Um "sal farmaceuticamente aceitável" significa 5 qualquer sal não tóxico ou sal de um éster de um composto da presente invenção que, após administração a um receptor, é capaz de fornecer, direta ou indiretamente, um composto da presente invenção ou um metabólito ativo de forma inibidora ou residuo do mesmo.
Sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na arte. Por exemplo, S.N. Berge e outros descrevem sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhe em J. Pharmaceutical Sciences, 1977,, 66, 1-19, incorporado aqui a titulo de referência. Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção incluem aqueles derivados de ácidos inorgânicos ou orgânicos apropriados e bases. Os exemplos de sais de adição de ácido não tóxicos, farmaceuticamente aceitáveis são sais de um grupo amino formado com ácidos inorgânicos como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido perclórico ou com ácidos orgânicos como ácido acético, ácido oxálico, ácido maléico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malônico ou utilizando outros métodos utilizados na técnica como permuta de ions. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adipate, alginate, ascorbato, aspartato, benzenesulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, camforato, camforsulfonatc, citrato, ciclopentanepropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonatp, formato, 5 fumarato, glucoheptonate, g.licerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidroiodeto, 2-hidroxi- etanosúlfonato, lactobionato, lactato, laurato, sulfato de laurila, malato, maleato, malonato, metanesulfonato, 2- naftalenesulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, 10 palmitato, pamoato, péctinato, persulfate, 3-fenil propionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p- toluenesulfonato, undecanoato, sais de valerato, e similar. Sais derivados de bases apropriadas incluem metal alcalino, metal alcalino terroso, amónio e sais de N+(alquila CL-JÍ. A presente invenção também prevê a quaternização de quaisquer grupos contendo nitrogênio básicos dos compostos revelados aqui. Produtos dispersáveis ou solúveis em óleo ou água podem ser obtidos por tal quaternização. Sais de metal alcalino ou alcalino terroso representativos incluem sódio, litio, potássio, cálcio, magnésio e similar. Sais farmaceuticamente aceitáveis adicionais incluem, quando apropriado, amónio não tóxico, amónio quaternário, e cátions de amina formados utilizando contra-ions como haleto, hidróxido, carboxilato, hl sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquila inferior e sulfonato de arila.
Como descrito acima, as composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção compreendem adicionalmente um veiculo ou adjuvante farmaceuticamente aceitável, que, como utilizado aqui, inclui todos e quaisquer solventes, diluentes, ou outro veículo liquido, meios auxiliares de suspensão ou dispersão, agentes ativos superficiais, agentes isotôni.cos, agentes de espessamento ou emulsif icantes, preservativos, aglutinantes sólidos, lubrificantes e similares, como adequado à forma de dosagem especifica desejada. Remington's Pharmaceutical Sciences, décima sexta edição, E. W. Martin (Mack. Publishing Co., Easton, Pa., 1980) revela vários veiculos utilizados na formulação de composições farmaceuticamente aceitáveis e técnicas conhecidas para a preparação dos mesmos. Exceto até onde qualquer meio de veículo convencional é incompatível com os compostos da invenção, como por produzir qualquer efeito biológico indesejável ou de outro modo interagir em um modo prejudicial cora qualquer outro componente(s) da composição farmaceuticamente aceitável, seu uso é considerado como estando compreendido no escopo da presente invenção. Alguns exemplos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, porém não são limitados a, permutadores de ion, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas de soro, como albumina de soro humano, substâncias de tampão como fosfates, glicina, ácido sórbico, ou sorbato de potássio, misturas de glicerídeo parcial de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrôlitos, como sulfato de protamina, fosfato de hidrogênio dissódico, fosfato de hidrogênio de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, tríssilicato de magnésio, polivinil pirrolidona, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloco de polioxipropileno-polietileno, gordura de lã, açúcares como lactose, glicose e sacarose; amidos como amido de milho e amido de batata; celulose e seus derivados como carbóxi metil celulose de sódio, etil celulose e acetato de celulose; tragacanto em pó; malte; gelatina; talco; excipientes como 1.5 manteiga de cacau e ceras de supositório; óleos como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão; óleo de açafrão; óleo de gergelim; azeite; óleo de milho e óleo de soja; glicóis; como propileno glicol ou polietileno glicol; ésteres como oleato de etila e laurato de etila; Agar; agentes de tamponamento como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio, ácido algínico; água livre de pirógeno; solução salina isotoniça; solução de Ringer; álcool de etila, e soluções de tampão de fosfato, bem como outros lubrificantes compatíveis não tóxicos como sulfato de lauril de sódio e estearato de magnésio, bem como agentes de coloração, agentes de liberação, agentes de revestimento, agentes edulcorantes, aromatizantes e de perfumar, preservativos e ántioxidantes também podem estar presentes na composição, de acordo com a decisão do formulador.
Ainda em outro aspecto, a presente invenção provê um método de tratar uma condição, doença ou distúrbio influenciado por atividade de transportador de ABC. Em certas modalidades, a presente invenção provê um método de tratar uma condição, doença ou distúrbio influenciado por uma deficiência de atividade de transportador ABC, o método compreendendo administrar uma composição compreendendo um composto selecionado de 308-312, 313, 315, 316, 318, 320 e 322 a um sujeito, preferivelmente um mamifero necessitando do mesmo.
Em certas modalidades preferidas a presente invenção provê um método de tratar fibrose cística, enfisema hereditária, hemocromatose hereditária, deficiências de fibrinólise de coagulação, como deficiência de proteína C, angioedema hereditária do tipo 1, deficiências de processamento de lipídeo, como hipercolesterolemina familiar, quilomicronemía do tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenagem lisossomal, como doença de célula-I/pseudo-
Hurler, mucopolissaçarídeos, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-
Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulemia, diabetes melitus, ananismo laron, deficiência de mileoperoxidase, hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipoparatiroidismo primário, melanoma, 5 CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo congênito, osteogênese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (di), di neurofiseal, DI neprogênico, síndrome de Charcot-Marie Tooth, doença Perlizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas como 10 doença de Alzheimer, doença de Parkinson., esclerose lateral amiotrófica, plasia supranuclear progressiva, doença de Pick, vários distúrbios neurológicos poliglutamina como Huntington, ataxia espinocerebular tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, dentato rubro palidoluisiana, e distrofia miotôníca 1.5 bem como encefalopatias espongi formes, como doença
Creutzfeldt-Jakob hereditária (devido a defeito de processamento de proteína de prion), doença de Fabry, síndrome de Straussler-Scheinker, diarréia secretora, doença de rim policístico, doença pulmonar obstrutiva crônica 20 (COPD) , doença de olho seco e doença de Sjogren, compreendendo a etapa de administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um composto selecionado de 309-312, 313, 315, 316, 318, 320 e 322, ou uma modalidade preferida do mesmo como exposto acima.
De acordo com uma modalidade preferida alternativa, a presente invenção provê um método de tratar fibrose cística compreendendo a etapa de administrar ao mamifero uma composição compreendendo a etapa de administrar ao mamifero uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um composto selecionado de 308-312, 313, 315, 316, 318, 320 e 322, ou uma modalidade preferida do mesmo como exposto acima.
De acordo com a invenção uma "quantidade eficaz"' do composto ou composição farmaceuticamente aceitável é aquela quantidade eficaz para tratar ou diminuir a gravidade de um ou mais de fibrose cistica, enfisema hereditária, hemoçromatose hereditária, deficiências de fibrinólise de coagulação, como deficiência de proteina C, angioedema hereditária do tipo 1,- deficiências de processamento de lipídeo, como hipercolesterolemina familiar, quilomicronemia do tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenagem lisossomal, como doença de célula-I/pseudo-Hurler, mucopolissacarideos, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulemia, diabetes melitus, ananfsmo laron, deficiência de mileoperoxidase, hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo congênito, osteogênese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (di), di neurofiseai, DI neprogênico, síndrome de Charcot-Marie Tooth, doença Perlizaeus-Merzbaçher, doenças neurodegenerativas como doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral 5 amiotrófica, plasia supranuclear progressiva, doença de Pick, vários distúrbios neurológicos poliglutamina como Huntington, ataxia espinocerebular tipo I, atrofia muscular espinal e bulhar, dentato rubro palidoluisiana, e distrofia miotônica bem como encefalopatias espongi.form.es, como doença 10 Creutzfeldt-Jakob hereditária, doença de Fabry, síndrome de
Strausslex-Scheinker, diarréia secretora, doença de rim policístico, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), doença de olho seco e doença de Sjogren.
Os compostos e composições, de acordo com o método da 15 presente invenção podem ser administrados utilizando qualquer quantidade e qualquer via de administração eficaz para tratar ou diminuir a gravidade de um ou mais de fibrose cística, enfisema hereditária, hemocromatose hereditária, deficiências de fibrinólise de coagulação, como deficiência de proteína C, 20 angioedema hereditária do tipo 1, deficiências de processamento de lipídeo, como hipercolesterolemina. familiar, quilomicronemia do tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenagem lisossomai, como doença de célula-I/pseudo- Hurler, mucopolissacarídeos, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-
Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulemia, diabetes melitus, ananismo laron, deficiência de mileoperoxidase, hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipoparatiroidismo primário, melanoma, CDG glicanose tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo congênito, osteogênese imperfeita, hipo.fi.br inogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (di), di neurofiseal, DI neprogênico, sindrome de Charcot-Marie Tooth, doença Perlizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas como doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, plasia supranuclear progressiva, doença de Pick, vários distúrbios neurológicos poliglutamina como Huntington, ataxia espinocerebular tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, dentate rubro palidoluisiana, e distrofia miõtônica bem como encefalopatias esppngiformes, como doença Creutzfeldt-Jakob hereditária, doença de Fabry, sindrome de Straussler-Scheinker, diarréia, doença de rim policistico, doença pulmonar obstrutiva Crônica (COPD), doença de olho seco e doença de Sjogren.
A quantidade exata exigida variará de sujeito para sujeito, dependendo da espécie, idade e condição geral do sujeito, a gravidade .da. infecção, o agente específico, seu modo de administração e similar. Os compostos da invenção são preferivelmente formulados em forma de unidade de dosagem. pars facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A expressão "forma de unidade de dosagem"como utilizado aqui se refere a uma unidade fisicamente discreta de agente apropriado para o paciente a ser tratado. Será entendido, entretanto, que o uso diário total dos compostos e composições da presente invenção será decidido pelo médico atendent.e no escopo de decisão médica correta. 0 nível de dose' eficaz específico para qualquer paciente ou organismo especifico dependerá de uma variedade de fatores incluindo o distúrbio sendo tratado e a gravidade dó distúrbio; a atividade do composto específico empregado; a composição especifica empregada; a idade, peso corpóreo, saúde geral, sexo e dieta do paciente; o tempo de administração, via de administração, e taxa de excreção do composto específico empregado; a duração do tratamento; drogas utilizadas em combinação ou coincidente com o composto específico empregado, e fatores similares bem conhecidos na arte médica. 0 termo "paciente", como utilizado aqui, significa um animal, preferivelmente um mamífero, e mais preferivelmente um ser humano.
As composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser administradas a seres humanos e outros animais por via oral, retal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, topicamente (como por pós, 69 unguentos, ou gotas), bucal, como uma pulverização oral ou nasal, ou similar, dependendo da gravidade da infecção sendo tratada. Em certas modalidades, os compostos da invenção podem ser administrados por via oral ou parenteral em niveis de dosagem de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg e preferivelmente de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 25 mg/kg, de peso corpóreo do sujeito por dia, uma ou mais vezes pór dia, para obter o efeito terapêutico desejado.
Formas de dosagem líquida para administração oral incluem, porém não são limitadas a, emulsões farmaceuticamente aceitáveis, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires. Além dos compostos ativos, as formas de dosagem liquida podem conter diluentes inertes comumente utilizados na técnica como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes de solubilização e emulsificantes como álcool de etila, álcool de isopropila, carbonato de etila, acetato de etila, álcool de benzila, benzoato de benzila,. propileno glicol, 1,3-butileno glicol, dimetil formamida, óleos (em particular, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, germe, azeite, mamona e gergelim), glicerol, álcool de tetraidrofurfurila, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitano, e misturas dos mesmos. Além de diluentes inertes, as composições orais também podem incluir 70 adjuvantes como agentes umectantes, agentes de emulsificação e suspensão, agentes edulcorantes, aromatizantes e de perfumar. Preparados injetáveis, por exemplo, suspensões oleaginosas ou aquosas injetáveis estéreis podem ser formuladas de acordo com a técnica conhecida utilizando agentes umectantes ou de dispersão apropriados e agentes de suspensão. O preparado injetável estéril também pode ser uma solução, suspensão ou emulsão injetável estéril em um diluente ou solvente aceitável paranteralmente não tóxico, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis, que podem ser empregados estão água, solução de Ringer, U.S.P. e solução de cloreto de sódio isotôniça. Além disso, óleos fixos estéreis são convencignalraenté empregados como solvente ou meio de suspensão. Para essa finalidade qualquer óleo fixo suave pode ser empregado incluindo mono- ou diglicerideos sintéticos. Além disso, ácidos graxos como ácido oléico são utilizados na preparação de injetáveis.
As formulações injetáveis podem ser esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro de retenção bacteriana, ou por incorporar agentes de esterilização na forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas ou dispersas em água estéril ou outro meio injetável estéril antes do uso.
Para prolongar o efeito de um composto da presente invenção, é frequentemente desejável diminuir a absorção do composto a partir de injeção subcutânea ou intramuscular, isso pode ser realizado pelo uso de uma suspensão líquida de 5 material cristalino ou amorfo com solubilidade em água ruim.
A taxa de absorção do composto depende então de sua taxa de dissolução que, por sua vez, pode depender do tamanho de cristal e forma cristalina. Altemativamente, a absorção retardada de uma forma de composto administrada por via 10 parenteral é realizada por dissolver ou suspender o composto em um veiculo de óleo. Formas de depósito injetáveis são feitas por formar matrizes de microencapsular do composto em polímeros biodegradáveis como polilãctide-poliglicolide. Dependendo da razão de composto para polímero e da natureza 15 do polímero específico empregado, a taxa de liberação de composto pode ser controlada. Os exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). Formulações injetáveis de depósito são também preparadas por reter o composto em lipossomas ou microemulsões que são 20 compatíveis com tecidos do corpo.
Composições para administração retal ou vaginal são preferivelmente supositórios que podem ser preparados por misturar os compostos da presente invenção com excipientes ou veículos não irritantes apropriados como manteiga de cacau, 72 polietileno glicol ou uma cera de supositório que são sólidos em temperatura ambiente porém líquidos em temperatura corporal e portanto derretem no reto ou cavidade vaginal e liberam o composto ativo.
Formas de dosagem sólidas para administração oral incluem cápsulas, tabletes, pílulas, pós, e grânulos. Em tais formas de dosagem sólidas, o composto ativo é misturado com pelo menos um excipiente ou veiculo farmaceuticamente aceitável, inerte como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio e/ou a) cargas ou diluentes como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol e ácido silícico, b) aglutinantes como, por exemplo, carbóxi metil celulose, alginatos, gelatina, polivini.l pirrolidona, sacarose, e acácia, c) umectantes como glicerol, d) agentes desintegrastes como Agar-agar, carbonato de cálcio, amido de tapioca ou batata, ácido alginico, certos silicates, e carbonato de sódio, e) agentes de retardar solução como parafina, f) aceleradores de absorção como compostos de amónio quaternário, g) agentes umectantes como, por exemplo, álcool de cetíla e monoestearato de glicerol, h) absorventes como caulim e argila de bentonita, e i) lubrificantes como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, sulfato de lauril de sódio, e misturas dos mesmos. No caso de cápsulas, tabletes e pílulas, a forma de dosagem 73 pode compreender também agentes de tamponamentó.
Composições sólidas de um tipo similar também podem ser empregadas como cargas em cápsulas de gelatina de enchimento mole e duro utilizando tais excipientes como lactose ou açúcar de leite bem como polietileno glicóis de elevado peso molecular e similar. As formas de dosagem sólidas de tabletes, drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e invólucros como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. Podem conter opcionalmente agentes de opacificar e podem ser também de uma composição que liberam o(s) ingrediente(s) ativo(s) somente, ou preferivelmente, em certa parte do trato intestinal, opcionalmente, em um modo retardado. Os exemplos de co,posições de incorporação que podem ser utilizados incluem substâncias poliméricas e ceras. As composições sólidas de um tipo similar também podem ser empregadas como cargas em cápsulas de gelatina de enchimento mole e duro utilizando tais excipientes como lactose ou açúcar de leite bem como polietileno glicóis de elevado peso molecular e similar.
Os compostos ativos também podem estar em forma microencapsulada com um ou mais excipientes como observado acima. As formas de dosagem sólidas de tabletes, drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com ÜzHí 74 revestimentos e invólucros como revestimentos entéricos, revestimento de controlar liberação e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. Em tais formas de dosagem sólidas o composto ativo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte como sacarose, lactose ou amido. Tais formas de dosagem podem compreender também, como é prática normal, substancias adicionais diferentes de diluentes inertes, por exemplo, lubrificantes de formar tablete e outros meios auxiliares de formar tablete como estearato de magnésio e celulose microcristalina. No caso de cápsulas, tabletes e pílulas, as formas de dosagem também podem compreender agentes de tamponamen.to. Podem conter opcionalmente agentes de opacificar e também podem ser de uma composição que liberam o(s) ingrediente(s) ativo (s) somente, ou preferivelmente, em certa parte do trato intestinal, opcionalmente, em um modo retardado. Os exemplos de composições de incorporação que podem ser utilizados incluem substâncias poliméricas e ceras.
Formas de dosagem para administração tópica ou transdérmica de um composto da presente invenção incluem unguentos, pastas, cremes, loções, géis, pós, soluções, pulverizações, inalantes ou adesivos. O componente ativo é misturado sob condições estéreis com um veículo farmaceuticamente aceitável e quaisquer preservativos ou tampões necessários que podem set exigidos. Formulação oftálmica, gotas para os ouvidos e gotas para os olhos são também considerados como estando compreendidos no escopo da presente invenção. Adicionalmente, a presente invenção considera -o uso de adesivos transdérmicos, que têm a vantagem adicional de fornecer distribuição controlada de um composto para o corpo. Tais formas de dosagem são preparadas por dissolver ou dispensar o composto no meio adequado. Intensificadores de absorção também podem ser utilizados para aumentar o fluxo do composto através da pele. A taxa pode ser controlada por fornecer uma membrana de controlar taxa ou por dispersar o composto em uma matriz de polímero ou gel.
Como descrito genericamente acima, os compostos da invenção são úteis como moduladores de transportadores de ABC. Desse modo, sem desejar ser limitado por qualquer teoria específica, os compostos e composições são particularmente úteis para tratar ou diminuir a gravidade de uma doença, condição ou distúrbio onde hiperatividade ou inatividade de transportadores de ABC é influenciada na doença, condição ou distúrbio. Quando hiperatividade ou inatividade de um transportador de ABC é influenciada em uma doença, condição ou distúrbio específico, a doença, condição ou distúrbio também pode ser mencionada como uma "doença, condição ou distúrbio mediado por transportador de ABC". Por conseguinte, em outro aspecto, a presente invenção provê um método para tratar ou diminuir a gravidade de uma doença, condição ou distúrbio onde a hiperatividade ou inatividade de um transportador de ABC é influenciada no estado de doença.
A atividade de um composto utilizado na presente invenção como um modulador de um transportador de ABC pode ser ensaiada de acordo com métodos descritos genericamente na técnica e nos exemplos da presente invenção.
Será também reconhecido que os compostos e composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser empregados em terapias de combinação, isto é, os compostos e composições farmaceuticamente aceitáveis podem ser administrados simultaneamente com, antes de ou subsequente a um ou mais outros procedimentos médicos ou terapêuticos desejados. A combinação especifica de terapias (terapêutica ou procedimentos) para empregar em um regime de combinação levará em consideração compatibilidade das terapêuticas e/ou procedimentos desejados e do efeito terapêutico desejado a ser obtido. Será também reconhecido que as terapias empregadas podem obter um efeito desejado para o mesmo distúrbio (por exemplo, u.m composto inventivo pode ser administrado simultaneamente com outro agente utilizado para tratar o mesmo distúrbio), ou podem obter efeitos diferentes (por exemplo, controle de quaisquer efeitos adversos). Como utilizado aqui, agentes terapêuticos adicionais que são normalmente administrados para tratar ou evitar uma doença ou condição; específica, são: conhecidos como "apropriados para a doença, ou condição sendo tratada."
A quantidade de agente terapêutico adicional presente nas composições da presente invenção será não mais do que a quantidade que seria normalmente administrada, em uma composição compreendendo aquele agente terapêutico como o único agente ativo. Preferivelmente, a quantidade de agente 10 terapêutico adicional nas composições atualmente reveladas variará de aproximadamente 50% a 100% da quantidade normalmente presente em uma composição que compreende aquele agente como o único agente terapeuticamente: ativo.
Os compostos da presente invenção ou composições fa.rmaceuticamente aceitáveis dos mesmos também podem ser incorporados em composições para revestir um dispositivo médico implantâvel, como prótese, válvulas artificiais, enxertos vasculares, stents e cateteres. Por conseguinte, a presente invenção, em outro aspecto, inclui uma composição 20 para revestir um dispositivo implantâvel que compreende um composto da presente invenção como descrito genericamente acima, e. em classes e subclasses aqui, e um veículo apropriado para revestir o dispositivo implantâvel. Ainda em outro aspecto, a presente invenção inclui um. dispositivo implantável revestido com uma composição compreendendo um composto da presente invenção como descrito genericamente acima e nas classes e subclasses dã presente invenção, e um veículo apropriado para revestir o dispositivo implantável. Revestimentos apropriados e o preparado geral de dispositivos implantáveis revestidos são descritos nas patentes US 6.099.562; 5.886.026; e 5.304.121. os revestimentos são tipicamente materiais poliméricos biocompatíveis como um polímero de hidrogel, polimetil dissiloxano, policaprolactona, polietileno glicol, ácido poliláctico, acetato de vinil etileno, e misturas dos mesmos. Os revestimentos podem ser adicionalmente opcionalmente cobertos por uma camada superior apropriada de fluorossilicone, polissacarídeos, polietileno glicol, fosfolipídeos ou combinações dos mesmos para transmitir características de liberação controlada na composição.
Outro aspecto da invenção refere-se à modulação de atividade de transportador de ABC em uma amostra biológica ou um paciente (por exemplo, in vitro ou in vivo), cujo método compreende administrar ao paciente, ou contatar a amostra biológica com um composto da fórmula I ou uma composição compreendendo o composto. 0 termo "amostra biológica", como utilizado aqui, inclui sem limitação, culturas de célula óu extratos das mesmas, material de biópsia obtido de um mamífero ou extratos do mesmo, e sangue, saliva, urina, fezes, sêmen, lágrimas, ou outros fluidos óu extratos corpóreos dos mesmos.
A modulação de atividade de transportador de ABC em uma amostra biológica e útil para uma variedade de fins que são conhecidos por uma pessoa versada na técnica. Os exemplos de tais finalidades incluem, porém não são limitados ao estudo de transportadores de ABC em fenómenos biológicos e patológicos; e a avaliação comparativa de novos moduladores de transportadores de ABC.
Ainda, em outra modalidade, um método de modular atividade de um canal de ânion in vitro ou in vivo, é fornecido compreendendo a etapa de contatar o canal com um composto selecionado de 308-312, 313, 315, 316, 318, 320 e 322. Em modalidades preferidas, o canal de anion é um canal de cloreto ou um canal de bicarbonato. Em outras modalidades preferidas, o canal de ânion é um canal de cloreto.
De acordo com uma modalidade alternativa, a presente invenção provê um método de aumentar o número de transportadores de ABC funcionais em uma membrana de uma célula, compreendendo a etapa de contatar a célula com um composto selecionado de 308-312, 313, 31S, 316, 318, 320 e 322. 0 termo "transportador de ABC funcional" como utilizado aqui significa um transportador de ABC que é capaz de atividade de transporte. Em modalidades preferidas, o transportador de ABC funcional é CFTR.
De acordo com outra modalidade preferida, a atividade do transportador de ABC é medido por medir o potencial de 5 voltagem de transmembrana. O meio para medir o potencial de voltagem através de. uma membrana na amostra biológica pode empregar quaisquer dos métodos conhecidos na arte, como ensaio de potencial de membrana óptica ou outros métodos eletrofisiológicos.
O ensaio de potencial de membrana óptica utiliza sensores FRET sensíveis à voltagem descritos por Gonzalez e Tsien (vide Gonzalez, J. E. e R. Y,. Tsien (1995) "Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells" Bipphys J69(4): 1272-80, e Gonzalez, J. E, e R. Y.
Tsien (1997) "Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer" Chem Biol 4(4): 269-77) em combinação com instrumentação para medir alterações de fluorescência como a Leitora de sonda de ion/voltagem (VIPR) (vide Gonzalez, J. E., K. Cades, e 20 outros. (1999) "Cell-based assays and instrumentation for screening ion-channel targets" Drug Disçov Today 4(9): 431- 439) .
Esses ensaios sensíveis à voltagem são baseados na alteração em transferência de energia ressonante de fluorescência (FRETO entre o corante sensível à voltagem, solúvel em membrana, DiSBAC2(3) e um fosfolipídio fluorescente, CC2-DMPE, que é fixado na folhinha externa da membrana de plasma e atua como um doador de FRET, Alterações 5 em potencial de membrana (Vm) fazem com que o DiSBAC2(3) negativamente carregado redistribua através da membrana de plasma e a quantidade de transferência de energia de CC2-DMPE muda de acordo. As alterações em emissão de fluorescência podem ser monitoradas utilizando VIPR™ II, que é um 10 manipulador de líquido integrado e detector fluorescente projetado para conduzir screens baseadas em células em placas de microtitulo de 96 ou 384 cavidades.
Em outro aspecto a presente invenção provê um kit para uso na medição de atividade de um transportador de ABC ou um 15 fragmento do mesmo em uma amostra biológica in vitro ou in vivo compreendendo (i) uma composição que compreende um composto selecionado entre 308-312, 313, 315, 316, 318, 320 e 322 ou quaisquer das modalidades acima; e (ii) instruções para a) contatar a composição com a amostra biológica e b) 20 medir atividade do transportador de ABC ou um fragmento do mesmo. Era uma modalidade, o kit compreende ainda instruções para a) contatar uma composição adicional com a amostra biológica; b) medir a atividade do transportador de ABC ou um fragmento do mesmo na presença do composto adicional, e c) 82 comparar a atividade do transportador de ABC na presença de um composto selecionado de 308-312, 313, 315, 316, 318, 320 e 322. Em modalidades preferidas, o kit é utilizado para medir a densidade de CFTR.
Para que a invenção descrita aqui possa ser mais completamente entendida, os seguintes exemplos são expostos. Deve ser entendido que esses exemplos são para fins ilustrativos somente e não devem ser interpretados de modo algum como limitando a presente invenção.
PREPARADOS E EXEMPLOS
Procedimento geral I: bloco de construção de ácido
Carboxilico
Figure img0015
Cloreto de benzil trietil amónio (0,025 equivalente) e o composto dialo apropriado (2,5 equivalentes) foram adicionados a uma acetonitrila de fenila substituída. A mistura foi aquecida a 70oC e então hidróxido de sódio a 50% (10 equivalentes) foi lentamente adicionado à mistura. A reação foi agitada a 70°C por 12-2 4 horas para assegurar formação completa da fração de cicloalquila e então aquecida a 130°C por 24-48 horas para assegurar conversão completa da nitrila em ácido carboxílico. A mistura de reação preta / marro escuro foi diluida com água e extraida com diclorometano três vezes para remover produtos secundários. A solução aquosa básica foi acidificada com ácido clorídrico concentrado até pH menor do que um e o precipitado que começou a se formar em pH 4 foi filtrado e lavado com 1 M de ácido clorídrico duas vezes. 0 material sólido foi dissolvido em diclorometano e extraído duas vezes com 1 M de ácido clorídrico e uma vez com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio.. A solução orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e evaporada até secura para fornecer o ácido ciclo, alquil carboxílico. Os rendimentos foram tipicamente maiores do que 90%. Exemplo 1: 1-benzo [1, 3]dioxol-5-ila- acido
Ciclopropanocarboxilico
Figure img0016
Uma Mstüra de 1—(benzçi[d]' [1,,3]di'Q'xDl-5-ila)' acetonitrila (5,10 g, 31,7 mmol), l-bromp-2-cloro-etano (9,00 mL 109 mmol), e cloreto de benzil trietil amónio (0,181 g, 20 0,795 mmol) foi aquecida a 70°C e então 50% (peso/peso) de hidróxido de sódio aquoso (26 mLO foi lentamente adicionado à mistura. A reação foi agitada a 70°C por 24 horas e então aquecida a ISO^C por 48 horas. A -mistura de reação marrom escuro foi diluída com água (400 mL) e extraída uma vez com um volume igual de acetato de etila e uma vez com um volume igual de diclorometano, A solução aquosa básica foi acidificada com ácido clorídrico concentrado até pH menor do que um e o precipitado filtrado e lavado com 1 M de ácido clorídrico. O material sólido foi dissolvido em diclorometano (4 00 mL) e extraído duas vezes com volumes iguais de 1 M ácido clorídrico e uma vez com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e evaporada até secura para fornecer um sólido branco até levemente quase branco (5,23 g, 80%). ESI-MS m/z calc. 206.1, encontrado 207.1 (M+l)+. Tempo de retenção 2.37 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-dβ) δ 1.07-1.11 (m, 2H) , 1.38-1.42 (m, 2H), 5.98 (s, 2H) , 6.79 (m, 2H) , 6.88 (m, 1H), 12.26 (s, 1H). Exemplo 2: 1-(2,2-difluor-benzo[1,3]dioxol-5-íla)-ácido ciclopropanocarboxílico
Figure img0017
Figure img0018
Éster metilico de 2,2-difluor-benzo [ 1,3] dioxol-5-ácido 5 carboxilico
Uma solução de 5-bromo-2,2-difluor-benzo[1, 3]dioxol (11,8 g, 50,0 mmol) e tetraquis(trifenil fosfina) paládio (Q) [pd(PPh3)9, 5,70 g, 5,00 mmol] em metanol (20 mL) contendo acetonitrila (30 mL) e trietil amina (10 mL) foi agitada sob uma atmosfera de monóxido de carbono (55 PSI) a 75°C. (temperatura de banho de óleo) por 15 horas. A mistura de reação resfriada foi filtrada e o filtrado foi evaporado até secura. O residuo foi purificado por cromatografia de coluna de silica gel para fornecer éster metilico de 2,2-difluor- benzo[1,3]dioxol-5-áaido carboxilico bruto (11,5 g), que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.
Figure img0019
(2,2-difluor-benzo[1,3]dioxol-5-ila)-metanol
Éster metílico de 2,2-difluor-bepzo[1, 3]dioxol-5-ácido carboxílico bruto (11,5) dissolvido em 20 mL de tetraidrofurano anidro (THF) foi lentamente adicionado a uma suspensão de hidreto de alumínio de litio (4,10 g, 106 mmol) em THF anidro (100 mL) a 0°C. a mistura foi então aquecida até a temperatura ambiente. Após ser agitada em temperatura ambiente por 1 hora, a mistura de reação foi resfriada até 03C e tratada com água (4,1 g) , seguido por hidróxido de sódio (10% de solução aquosa, 4,1 mL). A pasta resultante foi filtrada e lavada com THF. O filtrado combinado foi evaporado até secura e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel para fornecer (2,2-difluor- benzo [1, 3] dioxol-5-ila) -metanol (7,2 g, 38 mmol, 76% em duas etapas) como um óleo incolor
Figure img0020
5-clorometil-2,2-difluor-benzo[1,3]dioxol
Cloreto de tionila (45 g, 38 mmol) foi lentamente adicionado a uma solução, de (2,2-difluor-benzo [ 1,3] dioxol-5- ila)-metanol (7,2 g, 38 mmol) em diclorometano (200 mL) a 0°C. a mistura resultante foi agitada durante a noite, em temperatura ambiente e então evaporada até secura. 0 resíduo foi dividido entre uma solução aquosa de bicarbonato de sódio saturado (100 mL) e diclorometano (100 mL). A camada aquosa separada foi extraida com diclorometano (150 mL) e a camada orgânica foi seαa sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada até secura para fornecer 5-clorometil-2,2-diflugr- benzo[1,3]dioxol bruto (4,4 g) que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.
Figure img0021
(2,2-difluor-benzo[1,3]dioxol-5-ila)-acetonitrila
Uma mistura de 5-clorometil-2,2-difluor- benzo[1,3]dioxol bruto (4,4 g) e cianeto de sódio (1,36 g, 27,8 mmol) em sulfóxido de diroetila (50 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi derramada em gelo e extraida com acetato de etila (300 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e evaporada 15 até secura para fornecer (2,2-difluor-benzo[1,3]dioxol-5- ila)-acetonitrila bruto (3,3 g) que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.
Figure img0022
1-(2,2-difluor-benzo[ 1,3]dioxol-5-ila)- ciclopropanocarbonitrila
Hidróxido de sódio (50% solução aquosa, 10 mL) foi lentamente adicionada a uma mistura de (2,2-difluor- benzo[1,3]dioxol-5-ila)-acetonitrila bruto, cloreto de benzil trietil amónio (3,00 g, 15,3 mmol)., e l-bromo-2-cloroetano (4,9 g, 38 mmol) a 70°C.
A mistura foi agitada durante a noite a 70°C antes da mistura de reação ser diluida com água (30 mL) e extraida com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e evaporadas até secura para fornecer 1-(2,2-difluor-benzo[1,3]dioxol-5-ila- ciclópropanocarbon.i trila bruto, que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.
Figure img0023
1- (.2,2-dif luor-benzo [1,3] dioxol-5-ila) -ácido ciclopropanocarboxilico 1-(2,2-difluor-benzo[1,3]dioxol-5-ila)- ciclopropanocarbonitrila (bruto da última etapa) foi submetido a refluxo em 10% de hidróxido de sódio aquoso (50 mL) por 2,5 horas. A mistura de reação resfriada foi lavada com éter (100 mL) e a fase aquosa foi acidificada até pH 2 com 2M ácido cloridrico. O sólido precipitado foi filtrado para fornecer 1-(2,2-difluor-benzo[1,3]dioxol-5-ila)-ácido ciclopropanocarboxilico como um sólido branco (0,15 gf 1,6% em quatro etapas). ESl-MS m/z calo. 242.04, encontrado 241.58 (M+1)-; 1H NMR (CDC13) δ 7.14-7.04 (m, 2H), 6.98-6.96 (m, 1H), 1.74-1.64 (m, 2H) , 1.26-1,08 (m, 211).
A seguinte tabela 2 contém uma lista de blocos de construção de ácido carboxílico que eram comercialmente disponíveis, ou preparados por um do.s três métodos descritos acima: Tabela 2: blôcas d'e c'on3tri1çâo de ácicío 'carboxílico
Figure img0024
2-bromo-4-terc-butil-fenil amina
A uma solução de 4-terc-butil-fenil amina (447 g, 3,00 mol) em DMF (500 mL) foi adicionado em gotas NBS (531 g, 3,00 mol) em DMF (500 mL) em temperatura ambiente. Após conclusão, 5 a mistura de reação foi diluída com. água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, salmoura, seca sobre Na2SO4 e concentrada. O produto bruto foi diretamente utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional,
Figure img0025
2-bromo-4-terc-butil-fenil amina (160 g, 0,71 mol) foi adicionado em gotas a H2SO4 (41.0 mL) em temperatura ambiente para fornecer uma solução clara. Essa solução clara foi então resfriada a -5 até -10°C. uma solução de KNO3 (83 g, 0,82 15 mol) em H2SO4 (410 mL) foi adicionada em gotas enquanto a temperatura foi mantida entre -5 a -10°C. após conclusão, a mistura de reação foi derramada em gelo / água e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 5% de Na2CO3 e salmoura, secas sobre Na2S04e concentradas. O 20 resíduo fõi purificado por uma cromatografia de coluna (acetato de etila/éter de petróleo 1:10) para fornecer 2- bromo-4-terc-butil-4-nitro-fenil amina como um sólido amarelo (150 g, 78%).
Figure img0026
4-terc-butil-5-nitro-2-nitro-2-trimetil silanil etinil-fenilo amina
A uma mistura de 2-bromo-4-terc-butil-5-nitro-fen.il amina (.27,3 g, 100 mmol) em tolueno (200 mL) e água (100 mL) foi adicionado Et3N (27,9 mL, 200 mmol), Pd(PPh3) 2CI2 (2,11 g, 3,00 mmol), Cul (950 mg, 0,500 mmol.)' e trimetil silil acetileno (21,2 mL, 150 mmol) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi aquecida a 70°C em um frasco de pressão vedado por 2,5 h, resfriado até a temperatura ambiente e filtrado através de um tampo curto de Celite. A massa de filtro foi lavada com EtOAc. O filtrado combinado foi lavado com 5% de solução de NH4OH e água, seco sobre Na2SC>4 e concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (0 - 10% de acetato de etila/éter de petróleo) para fornecer 4-terc-butil-5-nitro-2-trimet il silanil etin.il-fenil amina como um liquido viscoso marrom (25 g, 81%).
Figure img0027
5-terc-butil-6-nitro-lH-indol
A uma solução de 4-terc-but il-5-n.itro-2-trimetil 92 silanil etinil-feπilamina (25 g, 86 mmol) em DMF (100 ml) fói adicionado Cui (8,2 g, 43 mmol) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura foi aquecida a 135°C em um frasco de pressão vedado durante a noite, resfriado até a temperatura ambiente e filtrado através de um tampo curto de Celite. A massa de filtro foi lavada com EtOAc, O filtrado combinado foi lavado com água, seco sobre Na2SO4 e concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (10 - 20% de acetato de etila/hexano) para fornecer 5-terc-butil- 6-nitro-lH-indol como um sólido amarelo (13 g, 69%).
Figure img0028
5-terc-butil-1H-indol-6-ilamina
Níquel Raney (3 g) foi adicionado a 5-terc-butil-6- nitro-lH-indol (15 g, 67 mmol) em metanol (100 mL). A mistura foi agitada sob hidrogênio (1 atm) a 30 °C por 3 h. o catalisador foi filtrado. 0 filtrado foi seco sobre Na2SO4 e concentrado. O óleo viscoso marrom escuro bruto foi purificado por cromatografia de coluna (10 - 2.0% de acetato de etila/éter de petróleo para fornecer 5-terc-butil-lH- indol-6-ilamina como um sólido cinza (11 g, 87%) . 1H NMR. (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.3 (br s, 1H) , 7.2 (s, IH) , 6.9 (m, 1H)., 6.6 (s, 1H), 6.1 (m, 1H), 4.4 (br s, 2H) , 1.3 (s, 9H). 93 Exemplo 4: 5~amino-2-terc-butil-lH-indol-4-carbonitrila
Figure img0029
a) KCN, DMSO; b) Pd/C, EtOAc
Etapa a: 2-terc-butil-5-nitro-lH-indol-4-carbonitrila
A uma solução de 2-terc-but.il-4-flúor-5-nitro-lH-indol (4,0 g, 17 mmol) em DMSO' (30 mL) foi adicionado KCN (3,4 g, 51 mmol). A mistura foi agitada a 70oC por 3 horas, e derramada em água (80 mL) e extraída com acetato de etila (50 ml x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob vácuo. O residuo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (7% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer 2- terc-butil-5-nitro-lH-indol-4-carbonitrila (2,2 g, 53%). 1H NMR (DMSO, 300 MHz) 5 12.23 (br s, 1 H) , 8.09 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 7.75 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 6.50 (s, 1 H), 1.38 (s, 9 H). MS (ESI) m/z; 244.2 [M+H+].
Etapa b: 5-amino-2-terc-butil-lH-indol-4-carbonitrila
A uma solução de 2-terc-butil-5-nitro-lH-indol-4- carbonitrila (550 mg, 2,3 mmol) em EtOAc (10 mL) foi adicionado Ni Raney (0,1 g) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (1 atm) em 94 temperatura ambiente por 1 h. o catalisador foi filtrado sobre Celite e o filtrado foi evaporado a vácuo para fornecer 5-amino-2-tetc-butil-lH-indol-4-carbonitrila (250 mg, 51%). 1H NMR (DMSO, 300 MHz) δ 10.93 (br s, 1 H), 7.25 (d, J = 8.7 5 Hz, 1 H) , 6.49 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 5.94 (d, J = 2.1 Hz, 1 H), 5.40 (br s, 2 H) , 1.30 (s, 9 H) . MS (ESI) m/z: 214.0 [M+H+]. Exemplo 6: N- (2-terc“butil-4-cianc-lH-indol-5-il)-1- (2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5- 10 ila)çiclopropanocarboxamida
Figure img0030
Etapa a: N-.(2-terç-butil-4-ciano-lH-indol-5-ila)-1-(2,2_ difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila)Çiclopropanocarboxamida 1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila) cloreto de ciclopropanocarbonila (26 mg, 0,1 mmol) foi adicionado a uma solução de 5-amino-2-terc-butil-lH-indol-4-carbonitrila (21 mg, 0,1 mmol) e trietil amina (41,7 yL, 0,3 mmol) em DMF (1 mL). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, a seguir filtrada e purificada por HPLC de fase inversa para fornecer o produto, N-(2-terc-butil-4-ciano-lH- indol-5-ila) -1- (2,2-difluorobenzo [d] [1,3] dioxol-5-1 ila)çiclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 437.2, 95 encontrado 438.7 (M+l)+. Tempo de retenção 2.10 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.48 (s, 1H) , 8.88 (s, 1H) , 7.52 (d, J - 8.5 Hz, 2H), 7.41 (d, J= 8.3 Hz, 1H) , 7.32 (dd, J = 1.5, 8.3 Hz.,. 1H) , 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 6.21 (d, J = 1.8 5 Hz, 1H), 1.51 - 1.4.9 (m, 2H) , 1.36 (s, 9H) , 1.18 - 1.16 (m, 2H) . Exemplo 7: N-(2-terc-butil-4-ciano-l-(2-hidroxi etil)- lH-indol-5-ila)-1-(2,2-diflúorobenzo[d][1,3] dioxol-5-ila) ciclopropanocarboxamida
Figure img0031
Etapa a: 2-terc-butil-l-(2-hidroxietil)-5-nitro-lH- indol-4-carbonitrila
Uma mistura de 2-terc-butil-5-nitro-lH-indol-4- 15 carbonitrila (200 mg, 0,82 mmol), 2-iodoetanol (77 uL, 0,98 mmol), carbonato de césio (534 mg, 1,64 mmol) e DMF (1,3 mL) foi aquecida a .90°C durante a noité. Então mais 2-iodoetanol (77 uL, 0,98 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada a 909C por 3 dias. A mistura de ração foi dividida entre acetato de etila e água. A camada aquosa foi lavada com acetato de etila e então as camadas de acetato de etila combinadas foram lavadas com água (x3) e salmoura, secas 5 sobre MgSÕ4 e concentradas. 0 residuo foi purificado por cromatografia de coluna C50 - 100% CH2C13 - hexanos) para fornecer o produto como um sólido amarelo (180 mg, ~25% de pureza por NMR, o produto co-elui com o material de partida de indol) . ESI-MS jft/z calc. 2'87.1, encontrado: 288.5 (M+l)+. 10 Tempo de retenção 1.59 minutos. 1H NMR (4 00. MHz, DMSO-d6) δ 12.23 (s, 1H), 8.14 (d, J = 9.1 Hz, 1H) , 8.02 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.10 (t, J = 5.5 Hz, 1H) , 4.55 (t, J = 6.3 Hz, 2.H), 3.78 - 3.73 (m, 2H) e 1.49 (s, 9H) ppm.
Etapa b: 5-amino-2-terc-butil-l-(2-hidroxi etila)-1H- 15 indol-4-carbonitrila
A uma solução de 2-terc-butila-l-(2-hidroxiétila)-5- nitrc-lH-indol-4-carbonitrila (180 mg, 0,63 mmol) em etanol (6 mL) sob atmosfera de N2 foi adicionado Pd-C (5% era peso, 18 mg). A reação foi lavada com N2 (g) e então com H2 (g) e 20 agitada sob H2 (atm) em temperatura ambiente por 1,5 horas. A reação foi filtrada sobre Celite e concentrada para fornecer o produto (150 mg, 93%). %). ESI-MS m/z calc. -257.2, encontrado 258.5 (M+l)+. Tempo de retenção 1.26 minutos.
Etapa c: N-(2-terc-butil-4-ciano-l-(2-hidroxietil)-1H- indol-5-ila)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila) Çiclopropanocarboxamida 1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dióxol-5-ila) cloreto de ciclopropanocarbonila (196 mg, 0,75 mmol) foi adicionado a uma solução de 5-amino-2-terc-butila-l-(2-hidroxi etila)-1H- indol-4-carbonitrila (150 mg, 0,58 mmol) e trietil amina (242 uL, 1,74 mmol) em diclorometano (2 mL) . A reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi diluída com diclorometano e extraída com solução de IN HCI (x2) , solução de NaHCO2 saturado (x2) , salmoura, seca sobre MgSOí, filtrada e concentrada. 0 resíduo foi dissolvido em DMSO e purificado por HPLC de fase inversa para fornecer o produto, N-(2-terc-butil-4-ciano-l-(2-hidroxi etil)-IH-indol- 5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila) çiclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 481.2, encontrado 482,5 (M+l)+. Tempo de retenção 1.99 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.93 (s, 1H), 7.71 (d, 8.8 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 6.28 (s, 1H), 5.05 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.42 (t, 6.8 Hz, 2H), 3.70 - 3.65 (m, 2H), 1,51 - 1.48 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.19 - 1.16 (m, 2H) . Exemplo 8: 2- (2-terc-butil-5-(1-(2,2- difluorobennzo[d][1,3]dipxol-5-ila)ciclopropano carboxamido)- 6-flúor-lH-indol-l-ila)-N, N, N-cloreto de trimetiletanamínio
Figure img0032
Etapa a: terc-butil 2“ (2-terc-butil-5-(1-(2,2- difluorobenzo[d][1,3]dioxcl-5-il) ciclopropanocarboxamido)-6- flúor-lH-indol-l-ila) etil carbamato 5 A 1-(2,2-diflúorobenzoId][1,3]dioxol-5-ila) ácido ciclopropanocarboxilico (90,14 mg, 0,3722 mmol) em cloreto de tionila (81,28 uL, 1,117 mmol) foi adicionado [<J,N-d±metil formamida (8,204 uL, 0,1064 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos antes que 10 cloreto de tionila em excesso e N,N-dimetil formamida fossem removidos a vácuo para fornecer o cloreto de ácido., O cloreto de ácido foi então dissolvido em diclorometano (1,5 mL) e adicionado lentamente a uma solução de terc-butil 2-(5-amino- 2-terc-butil-6-flúgr-lH-indol-l-ila) carbamato de etila 15 (1.56,1 mg, 0,4467 mmol) e trietil amina (155,6 uL, 1,117 mmol) em diclorometano (1,5 mL) . A mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente por 21 horas. A mistura de reação foi diluida com diclorometano (5 mL) e 99 lavada com IN HCI aquoso (5 mL) e uma solução de NaHCO3 aquosa saturada (5 mL) . A camada orgânica foi seca sobre NazSOzi, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna em silica gel (0-30% de acetato de etila em hexano) para fornecer terç- butil 2-(2-terc-butil-5-(1-(2,2-difluorobenzo [d] [1,3]dioxol- 5-ila) ciclopropanocarboxamido)-6-flúor-lH-indol-l-ila) carbamato de etila como um sólido branco (140 mg, 66%). ESI- MS m/z calc. 573,2, encontrado 574.7 (M+l)+. Tempo de retenção 2.41 minutos, 1H NMR (400.0 MHz, DMSO) d 8.35 (s, 1H), 7.53 (s, 1H) , 7.44 - 7.41 (m, 2H) , 7,34 - 7.29 (m, 2H) , 7.13 - 7.10 (m, 1H), 6.17 (s, 1H), 4.24 - 4.20 (m, 2H), 3.20 - 3.17 (m, ,2H), 1.48-1.45 (na, 2H) , 1.41 (s, 18H) e 1.15-1.12 (m, 2H) ppm.
Etapa b: N-(.1-(2-aminoetila)-2-terc-buitl-6-f Iuor-1H- ir.doi-5-ila) - (2,2-difluorobenzo [d] [1,3] dioxol-5- ila)ciclopropanocarboxamida A uma solução de terç-butil 2-(2-terc-butil-5-(1-(2,2- difluorobenzo[dl[1,3]dioxol-5-ila) ciclopropanocarboxamido)- 6-fIúor-lH-indol-l-ila) carbamato de etila (137,5 mg, 0,24 mmol) em diclorometano (1,8 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (444 uL, 5,8 mmol) e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora, a reação foi diluída çom diclorometano e lavada com solução de NaHCO3 aquosa saturada (3 mL) e salmoura (3 mL) . A camada orgânica foi seca sobre Na^SOí, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (0-10% de metanol em diclorometano) para fornecer N-(l- 5 (2-aminoetila)-2-terc-butila-6-fluor-lH-indol-5-ila)-1-(2,2- diflúorobenzo[d][[1,3]dioxol-5-ila) ciçlopropano carboxamida como um sólido branco (93,7 mg, 82%). ESI-MS m/z calc. 473.19, encontrado 474.5 (M+l)+. Tempo de retenção 1.61 minutos. 10 Etapa c: 2-(2-terc-butil-5-(1-(2,2- diflúorobenzo[d] [ 1, 3]dioxo.l-5-il) ciclopropanocarboxamido)-6- flúor-lH-indol-l-ila)-N,N,N-cloreto de trimetil etanamínio A uma solução clara de N-(1-(2-aminoetil)-2-terc-butil- 6-fluor-lH-indol-5-ila)-1-(2,2-diflúorobenzo[d] [1,3]dioxol-5- 15 ila) ciclopropanocarboxamido (50 mg, 0,1056 mmol) em N,N- dimetil formamida (1 mL), iodeto de metila (336,8mg, 147,7 uL, 2,37 mmol) e trietil amina (106,9 mg, 147,2 uL, 1,05 mmol) foram adicionados e a mistura foi aquecida a 80GC por 2 horas, O produto bruto foi purificado per HPLC preparativo de 20 fase inversa. 22 mg desse produto foram dissolvidos em 1.25 M HCI em metanol (112 uL, 0,14 mmol) e aquecido a 60°C por 1 hora, a reação foi resfriada até a temperatura ambiente. O produto foi primeiramente seco e então dissolvido em diclorometano e seco novamente.. Esse procedimento foi repetido quatro vezes para fornecer 2-(2-terc-butil-5—(1- (2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila) ciclopropanocarboxamido)-6-flúor-lH-indol-l-ilã)-N,N,N- cloreto de trimetil etanamínio. ESI-MS m/z calc. 516.25, encontrado 516.7 (M+l)+. Tempo de retenção 1.69 minutos. 1H NMR (400.0 MHz, DMSO) d 8.43 (.s, 1H) , 7.53 (s, 1H) , 7.45 - 7.41 (m, 2H), 7.36 - 7.31 (m, 2H) , 6.27 (s, 1H), 4.74 - 4.70 (m, 2H) , 3.57 - 3.53 (m, 2H) , 3.29 (s, 9H), 1.48 - 1.42 (m, 11H), e 1.15 (dd, J = 3.9, 6,8 Hz, 2H) ppm.
Exemplo 9: 2-(4-(terc-butil dimetil sililcxi)-2-metil butano-2-ila)-6-flúor-5-nitro-lH-indol
Figure img0033
Etapa a: 3-f lúor-4-n.itroanilina
Uma mistura de N-(3-flúor-4-nitro-fenila)-2,2-dimetil- propionamida (87,0 g, 0,36 mol) em CH2CI2 (400 mL) e 6N de ácido clorídrico (800 mL) foi aquecida até refluxo por 2 horas. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com 1000 mL de acetato de etila e carbonato de potássio (500,0 g) foi adicionada em porções, h solução aquosa foi separada e a 102 camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre Na2SOz anidro. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida, o residuo foi purificado por cromatografia de coluna em silica gel (éter de petróleo / acetato de etila 30: 5 1) para fornecer 3-flúor-4-nitroapilina (56,0 g, 99%). 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8.07 (t, J = 8.7 Hz, 1 H), 7.86 (dd, J = 2.1, 13,2 Hz 1 H), 7.59 (brs, 2 H), 7.22 (s, 1 H).
Etapa b: 2-bromo-5-flúor-4-nitroanilina A uma solução de 3-fJúor-4-nitroanilina (56 g, 0,36 10 mol) em ácido acético (500 mL) foi adicionado em gotas bromo (17,7 mL, 0,36 mol) durante 1 hora, a mistura de ração foi agitada por 1 hora a 0-5°C em um banho de gelo. A mistura de reação foi basificada com Na2Ç03saturado e extraida com acetato de etila (.200 mL x 3) , As camadas orgânicas 15 combinadas foram lavadas com salmoura., secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um. residuo que foi purificado por cromatografia de coluna em silica gel (éter de petróleo / acetato de etila. 10 : 1) para fornecer 2-brcmo5-flúor-4-nitroanilin.a (45,6 g, 20 84%) como um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, ÇDC13) § 8.29 (d, J = 7.6 Hz, 1 H) , 653 (d, J = 12,4. Hz, 1 H) , 4.94 (br s, 2 H) .
Etapa c: 5-(2-amino-4-flúor-5-nitrofenila)-3,3-dimetil A uma solução de 2-bromo-5-flúor-4-nitroanilina (45,7 g, 0,19 mol) e 3,3-dimetil pent-4-inoato de etila (88,3 g, 0,57 mol) em Et3N (700 mL) foi adicionado PdiPPh^jCig (13,8 g, 0,02 mol) e Cui (3,6 g, 0,02 mol) sob Nj, A mistura de 5 reação foi agitada a 70°C por 8 horas. A mistura de reação foi diluida com 500 mL de acetato de etila e 1500 m.L de água. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraida σom acetato de etila (500 mL x3) , as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura ô sedas sobre Na^SO^ 10 anidro, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por cromatografia de coluna em silica gel (éter de petróleo / acetato de etila 10:1) para fornecer etila-5-(2-amino-4-flúor-5-nitrofenila)-3,3-dimetil pent-4- ino-ato (34,5,. 57%). 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8.05 (d, J = 15 8.1Hz, 1 H) , 6.36 (d, J = 13,2 Hz, 1 H) , 5.60 (brs, 2 H) , 4.16 (q, J = 7.2 Hz, 2 H) , 2.51 (s, 2 H) , 1.40 (s, 6 H) , 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3 H).
Etapa d: 3-(6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)3-metil butanoato de etila
A uma mistura de 5-(2mai.no-4-f lúor-5-nitrof enila)-3,3- dimetil pent-4ino.ato de etila (34,5 g, 0,11 mol) e PdCla (10,4 g, . 58,6 nmol) em CH3CN (350 mL) foi aquecida até refluxo por 1,5 horas. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente. Acetato de etila (300 mL) foi adicionado, o precipitado foi filtrado e lavado com metanol.
O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (éter de petróleo. / acetato de etila 40:1) para fornecer 3- 5 (6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-3-metil butanoato de etila (34,0 g, 98%) como um sólido amarelo escuro. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 10.11 (brs,. 1 H) , 8.30 (d, J = 7.2 Hz, 1 H) , 7,14 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 6.35 (d, J = 1.5 Hz,, 1 H) , 4.17 (q, J = 7.2 Hz, 2 H) , 2,69 (s, 2 H) , 1,51 (s, 6 H), 1.25 (t, J = 10 7.2 Hz, 3 H). 3-(6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-3-metil butano-l-ol
A uma solução de 3-(6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-3- metil butanoato de etila (34 g, 0,11 mol) em CH2CI2 seco (400 mL) foi adicionado DIBAL-H em gotas (283,4 mL, 0,27 mol.) durante 2 horas a -78QC. A mistura de reação foi agitada por 10 horas a -78°C e então resfriada bruscamente por adição de água (200 mL) . 0 precipitado foi filtrado e lavado com metanol. O filtrado foi extraído com CH2CI2 (20 0 mL x3) , as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SOa anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (éter de petróleo / acetato de etila 50:1) para fornecer 3-(6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-3—metil buta.no-1- 105 ol (6,6 g, 22%). IH NMR (400 MHz, CDC13) δ 9.35 (brs, 1 H) , 8.30 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7,11 (d, J = 12.0 Hz, 1 H), 6.35 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 3.74 (t, J = 6.4 Hz, 2 H) , 1,9 (t, J = 6.4 Hz, 2 H), 1.4 (s, 6 H).
Etapa f: 2-(4-(terc-butil dimetil sililoxi)-2-metil butanó-2-ila)-6-flúor-5-nitro-lH-indol
A uma solução de 3- (6-fluor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-3- metil butano-l-ol (6,6 g, 25 mmol) em CH2C12(80 mL) foi adicionado TBSCI (3,7 g, 25 nmol) e imidazol (4,2 g, 62 nmol) a 0pC. a mistura de reação foi agitada em. temperatura ambiente por 12 horas. O precipitado foi filtrado e lavado com o metanol, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (éter de petróleo / acetato de etila 10:1) para fornecer o produto desejado como um sólido marrom (5,0 g, 53%). 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 9.80 (brs, 1 H) , 8.30 (d, J = 7.2 Hz, 1 HJ, 7.05 (d, J = 11,7 Hz, 1 H) , 6.33 (t, J = 1.2 Hz, 1 H)., 3.7 (t, J = 6.0 Hz, 2 H) , 1.91 (t, J = 6.0 Hz, 2 H) , 1.42 (s , 6 H) , 0.94 (s , 9 H) , 0.12 (s , 6 H) . MS (ESI) m/z (M+H+): 381.1,
Exemplo 10: 2,2-dimetil but-3inoato de benzila
Figure img0034
Etapa a: 2,2-dimetil-3-oxobutanoato de metila
A uma suspensão de NaH (28,5 g, 0,718 mol, 60%) em THF (27 0 mL) foi adicionada em gotas uma solução de éster metilico de 3-oxo-ácido buti.rico (78,6 g, 0,677 mol) em THF (7Q mL) a 0°C. a mistura foi agitada por 0,5 hora a 0°C. Mel (99,0 g, 0,698 mol) foi adicionado em gotas a 0°C. a mistura resultante foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada por 1 hora, NaH (28,5 g, 0,7'18 mol, 60%) foi adicionado em porções a 0°C e a mistura resultante foi continuada a agitar por 0,5 h a 0°C. Mel (99,0 g, 0,698 mol) foi então adicionado em gotas a 0°C. a mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura foi derramada em água gelada. A camada orgânica foi separada. A fase aquosa foi extraida com EtÓAc (300 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas e evaporadas sob pressão reduzida para fornecer 2,2-dimetil-3-oxobutanoato de metila (52 g, 53%) que foi utilizada diretamente na etapa seguinte.
Etapa b: 3-cloro-2,2-dimetil but-3-enoato de metila
A uma suspensão de PCI5 (161 g, 0,772 mol) em diclorometano (600 ml) foi adicionado em gotas 2,2-dimetil-3- oxobutanoato de metila (52 g, 0,361 mol, bruto da última etapa) a Q°C, seguido pela adição de aproximadamente 20 gotas de DMF seco. A mistura foi aquecida em refluxo durante a noite. Após resfriamento, a mistura de reação foi lentamente derramada em água gelada. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraida com diclorometano (300 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de NaHCO3aquosa saturada e secas sobre NasSO^ anidro. O solvente foi evaporado para fornecer o produto, 3-cloro-2,2- dimetilbut-3-enoato de metila que foi utilizado sem purificação adicional (47 g, 82%).
Etapa c: 3-cloro-2,2-dimetil but-3-ácido enóico
Uma mistura de 3-cloro-2,2-dimetil but-3-enoato de metila (42,0 g, 0,26 mol) e NaOH (1.2,4 g, 0,31 mol). em água (300 mL) foi aquecida em refluxo durante a noite. Após resfriamento, a mistura de reação foi extraida cpm éter. A camada orgânica continha 20 g de 3-cloro-2,2-dÍmetilbut-3- enoato de metila (48% recuperados). A camada aquosa foi acidificada com solução de HCI a 20% fria e foi extraida com éter (250 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas e evaporadas sob pressão reduzida para fornecer 3- cloro-2,2-dimetil but-3-àcido enoico (17 g, 44%), que foi utilizado diretamente na etapa seguinte. 108
Etapa d: 2,2-dimetil but-3-ácido inóico
A um frasco de três gargalos (500 mL) foi adicionado NaNHj (17,8 g, 0,458 mmol, pelotas) e DMSO (50 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente até que não mais NH3 (g) foi desprendido. Uma solução de 3-eloro-2,2-dimetil but-3- ácido enóico (17,0 g, 114 mmol) em DMSO (50 mL) foi adicionada em gotas a 0°C. a mistura foi aquecida e agitada a 50°C por 5 horas, a seguir agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi derramada em solução de HCI a 20% fria, e então extraída três vezes com éter. Os extratos de éter foram secos sobre NajSOí anidro e concentrados para fornecer uma razão de 6:1 de material de partida e produto de alcine. O resíduo foi seco novamente utilizando éter e NapSO^ e submetido novamente às condições de reação acima. A mistura de reação foi elaborada do mesmo modo para fornecer 2,2 dimetil but-3-ácido inóico (12,0 g, 94%), 2,2-dimetil but-3-inoato de benzila
A uma solução agitada de 2,2-dimetil but-3-ácido inóico (87,7 g, 0,782 mmol) e álcool de benzila (114,6 g, 0,938 mol) em diclorometano (800 mL) foi adicionado DCC (193,5 g, 0,938 mmol) a -20°C. a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e então o solvente foi evaporado a vácuo. O: resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (2% de acetato de etila em éter de petróleo como eluente) para fornecer 2,2-dimetil but-3-inoβtP de benzila (100 g, 59 % de rendimento). 1H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7.37-7.36 (m, 5 H) , 5,19 (s, 2 H), 2.28 (s, 1 H), 1.52 (s, 6 H) . Exemplo 11: 2-(1-(terc-butil dimetil sililóxi)-2-metil prcpanq-2-ila)-6-flúor-5-nitro-ÍH-indol
Figure img0035
Etapa a: 4- (2-amino-4-flúor-5-nitro.fenila)i-2,2-dimetil but- 3inoato de benzila
A uma solução de 2-bromo-5-flúor-4-nitroanilina (23,0 g, 0/1 mol) em Et3N (250 mL) foi adicionado 2,2-dimetil but- 3-anidrido in.óico de benzóico (59,0 g, 0,29 mol), Cui (1,85 g) e Rd (PPha) aClij (2,3 g) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 8 0°C durante a noite. Após resfriar até a temperatura ambiente, a reação foi resfriada bruscamente com água e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (100 mL x 3) . A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4anidro, o solvente foi evaporado a vácuo., O residuo foi 110 purificado por cromatografia em silica gel (10% de acetato de etila em éter de petróleo) para fornecer 4-(2-amino-4-flúor- 5-nitrofenila)-2,2-dimetil but-3-inoato de benzila (20,0 g, 56%). 1H NMR (400 MHz, CDC13) 8.05 (d, J = 8.4 Hz, 1 H) , 7,39-7.38 (m, 5 H) , 6.33 (d, J = 13.2 Hz, 1 H) , 5.20 (s, 2 H), 4.89 (br s, 2 H), l.βl (s, 6 H) .
Etapa b: 2-(6-fluor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2-metil propanoato de benzila
à uma solução de 4-(2-amino-4-flüor-5-nitrdfenila)-2,2- diraetil but-3-inoato de benzila (20,0 g, 56 mmol) em acetonitrila (100 mL) foi adicionado PdCÍ2 (5,0 g, 28 mmol) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 80°C durante a noite. A mistura foi filtrada e o solvente foi evaporado a vácuo, o residuo foi purificado por cromatografia em silica gel (10% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer 2-(6- flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2-metil propanato de benzila (18,0 g, 90%). 1H NMR (300 MHz, CDC13) 8.96 (br s, 1 H), 8.33 (d, J = 7.2 Hz, 1 H) 7.35-7.28 (m, 5 H) 7.08 (d, J = 11.7 Hz, 1 H) , 6.47 (s, 1 H), 5.18 (s, 2 H) 1.69 (s, 6 H) .
Etapa c: 2-(6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2-metil propano-l-ol
A uma solução de 2-(6-flúor-S-nitro-lH-indol-2-ila)-2- metil propanoato de benzila (18,0 g, 0,05 mol) em CH2C12 (100 mL) foi. adicionado DIBAL-H (12 mL) a -78°C. a mistura foi agitada por 1 h naquela temperatura e foi aquecida ate a temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente com água e a camada aquosa foi extraida com EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre NaaSO^ .5 anidro, o solvente foi evaporado a vácuo. O residuo foi purificado por cromatografia em silica gel (10% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer 2-(6-flúor-5-nitro-lH-indol- 2-ila)-2-metil propano-1- ol (10,0 g, 77%). 1H NMR (300 MHz, CDC13) 9.37 (s, 1 H) , 8.32 (d, J = 7.2 Hz, 1 H) , 7.11 (d, J = 10 11.7 Hz, 1 H) , 6.36 (s, .1 H), 3.73 (d, J = 5.1 Hz 2 H) , 1.97 (t, J = 5.1 Hz, 1 H), 1.39 (s, 6 H) .
Etapa d: 2-(1-(terc-butil dimetil sililóxi)-2-metil propano-2-ila)-6-flúor-5-nitro-lH-indo1
A uma solução agitada de 2-(6-flúor-5-nitro-lH-indol-2- ila)-2-metil propano-l-ol (10,0 g) em CH2CI2 foi adicionado TBSÇ1 (8,9 g) , imidazol (8,1 g, 0,12 mol) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante a noite. O solvente foi evaporado a vácuo e o residuo foi purificado por cromatografia em silica gel (10% de EtOAc em éter de 20 petróleo) para fornecer 2-(1-(terc-butil dimetil sililóxi)-2- metil propano-2-ila)-6-flúor-5-nitro-lH-indol (5,3 g, 38%). 1H NMR (300 MHz, CDC13) 9.51 (s, 1 H) , 8.31 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) , 7.02 (d, J= 11.7 Hz, 1 H), 6.32 (s, 1 H), 3.63 (s, 2 H), 1.35 (s, 6 H), 0.99 (s, 9 H), 0.11 (s, 6 H). Exemplo 12: 6-flúor-1, l-dimetil-7-nitro-2,3-diidro-lH- pirrolo[1,2-a] indol, (R)-3-(1~((2,2-dimetil -1,3-dioxolano- 4-ila) metila) -6-flúox-5-nitro-lH-indol-2-i.la) -3-metil butano-l-ol, 2- (4—.(( (R) -2, 2-dimetil-l, 3-dioxolano-4-ila) 5 metóxi)-2-metil butano-2-ila)- 1-(((R)-2,2-dimetil-l,3- dioxolano-4-ila) metila)-6-flúor-5-nitro-lH-indol, 3-(6- flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-3-metil butano-l-ol e (R)—2—(4— ((2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4-ila) metoxi)-2-metil butano-2- ila)-6-flúor-5-nitro-lH-indol
Figure img0036
Etapa a: 6-flúor-l,l-dimetil-7-nitro-2,3-diidro-lH- pirrolo[1,2-a] indol, (R)-3- (1- ((2,2-dimetil -1,3-dioxolano- 4-ilâ) metila)-6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-3-metil 20 butano-l-ol, 2-(4-(((R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4-ila) metóxi)-2-metil butano-2-ila)- 1-(((R)-2,2-dimetil-l,3- dioxolano-4-ila) metila)-6-flúor-5~nitro-lH-indol, 3-(6- flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-3-metil butano-l-ol e (R)-2-(4- ((2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4-ila) metoxi)-2-metil butano-2- ila) -6-flúor-5-nitro-lH-indol
A uma solução de 2-(4-(terc-butil dimetil sililóxi)-2- métil butano-2-ila)-6-flúor-5-nitro-lH-indol (1,3 g, 5,0 mmol) e (S)-(2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4-ila) metila 4-metil 5 benzeno sulfonato (2,86 g, 10,0 mmol) em DMF (10 mL) foi adicionado Cs2CO3 (4,88 g, 15,0 mmol). A mistura foi aquecida a 90°C por 24 horas. A reação foi dividida entre acetato de etila e água, A camada aquosa foi extraida com acetato de etila e as camadas orgânicas combinadas- foram lavadas com 10 salmoura e secas sobre MgSO4. Após a remoção de solvente, o residuo foi purificado por cromatografia de coluna (10-50% de acetato de etila - hexano) para fornecer 6-flúor—1,1-dimetil- 7-nitro-2,3-diidro-lH-pirrolo[1,2-a] indol (600 mg, 48%)., ESI-MS m/z calc. 248.1, encontrado 249.2 (M+HÍ+. Tempo de 15 retenção 2,00 minutos; 2-(4-(((R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolano- 4-ila)metóxi)-2-metil butano-2-ila)-1-(((R)-2,2-dimetil-l,3- dioxolano-4-ila)metila)-6-fluor-5-nitro-lH-indol (270 mg, contendo um pouco de (R)-2-(4-((2,2-dimetila-l,3-dioxolano-4- ila)metóxi)-2-metil butano-2-ila)-6-flúor-5-itro-lH-indol). ESI-MS m/z calc. 494.2 e 380,2, encontrado 495.4 e 381.4 (M+D+. Tempo de retenção 2.12 e 1.92 minutos; (R)-3- (1- ((2,2-dimetil-l,3-dioxdlan-4-ila)metila)-6-fluor-5-nitre-lH- indol-2-ila)-3-metilbutano-l-ol (1,0 g, contendo um pouco de 3-(6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-3-metilbutano-l-ol), ESI- 114 MS m/z calc. 380.2 e 266.1, encontrado 381.2 e 267.2 (M+l)+. Tempo de retenção 1.74 e 1.48 minutos. Exemplo 13: (R)-2-(1-( (2,2-dimetil-l,.3-dioxolano-4- ila)metila)-6-fluor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2-metil propano- 1-0.1 e 3-(6-flúor-5-nit.ro-lH-indol-2-ila)-3-metil butano-l-ol
Figure img0037
Uma mistura contendo (R)-2-(l-((2,2-dimetila-l,3- dioxolano-4-ila)metila)-6-fluor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2- metilpropano-l-ol e 3-(6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-3- metil butano-l-ol foi obtida seguindo o procedimento mostrado acima iniciando de 2-(1-(terc-butil dimetil sililóxi)-2-meti.1 propano-2-ila) -6f luor-5-nitro-lH-indol. (R) -2- (1- ( (.2, 2- dimetila-1,3-dioxolan-4-ila) metila)-6-fluor-5-nitro-lH-indol- 2-ila)-2-met±lpropan-l-ol, ESI-MS m/z calc. 366.2, encontrado 367.2 (M+l)+. Tempo de retenção 1.71 minutos; 3-(6-flúor-5- nitro-lH-indol-2-ila)-3-meuilbutan-l-ol, ESI-MS m/z calc, 252.1, encontrado 253.4 (M+l)+. Tempo de retenção 1.42 minutos. Exemplo 14: (R) -1- (2,2,-difluorobenzo[d] [1,3]dioxol-5- ila)-N-(1-(2,3-diidróxipropila)-6-fluor-2-(4-hidroxi-2-metil butanp-2-ilá)-IH-indol -5-ila) ciclopropanocarboxamida
Figure img0038
Etapa a: (R)-3-(5-amino-1-( (2,2-dímetil-1, 3-dixolan-4-ila) metila) -6-fíúQr-1!i-índ'ol-2-ila) -3-metil butano.-.1-01
A uma solução de (R)-3-(5-amino-l-((2,2-dimetil-l,3- diθxolan-4-ila) metila)-6-flúor-lH-indol-2-ila)-3-metil butano-l-ol contendo um pouco de 3-(6-flúor-5-nitro-lH- indol-2-ila)-3-metil butano-l-ol (500 mg, 1,3 mmol) em etanol (10 mL) foi adicionado formato de amónio (500 mg, 7,9 mmol) e Pd/C (10%, 139 mg, 0,13 mmol),. A mistura foi submetida a refluxo por 5 min. o catalisador de Pd foi removido através de filtração através de Celite e lavado com etanol. 0 filtrado foi evaporado até secura e purificado por cromatografia de coluna (30-50% de acetato de etila-hexanos) para fornecer (R)-3-(5-amino-l-( (2,2- dimetil-1,3-dioxolan-4-ila) metila)-6-flúor-lH-indol-2- ila)-3-metil butano-l-ol (220 mg, 48%, contém um pouco de 3-(5-amino-6-flúor-lH-indol-2-ila)-3-metil butano-l-ol). ESI-MS m/z calc. 350.2 encontrado 351.4 (M+l)+. Tempo de retenção 0,94 minutos. 116
Etapa b» (R)-1-(2,2-difluorobenzo [d] [1,3] dioxol-5-i.la)- N- (1- ( (2, 2-dimetil-l, 3-dioxol an-4-ila). metila) -6-flúor-2- (4- hidroxi-2-metil butano-2-ila)-lH-indol-5-ila) Çiclopropanocarboxamida
A uma mistura de 1-(2,2-difluorobenzo[d] [1,3]dioxol-5- _la)-ácido ciclopropanocarboxílico (183 mg, 0,75 mmol), (R)~ 3- (5-amino-l- ( (2,2-dimetil-l, 3-dioxolano-4-ila )met ila-6- fluor-lH-indol-2-ila)-3-metil butano-l-ol contendo um pouco de 3-(5-amino-6-flúor-lH-indol-2-ila)-3-metil butano-l-ol (220 mg, 0,63 mmol) e HATU (287 mg, 0,75 mmol) em DMF (3,0 mL) foi adicionado trietil amina (0,21 mL, 1,5 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e então dividida entre acetato de etila e água. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre MgSO^. Após remoção de solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (20-40% de acetato de etila hexanos) para fornecer R)-1-(2,2-difluorobenzo[dl[1,3]dioxol- 5-ila) -N- (1- ( (2,2-dimetil-l, 3-dioxolan-4-ila) metila) -~6- flúor-2-(4-hidroxi-2-metil butano-2-ila)-lH-indol-5-ila) çiclopropanocarboxamida (315 mg, 87%, contém um pouco de 1- (2,2-dif luorobenzo [d] [1,3] dioxol-5-ila)-N-.( 6-flúor-2-(4- hidroxi-2-metil butano-2-ila)-lH-indol-5-ila) Çiclopropanocarboxamida). ESI-MS m/z calc. 574.2 encontrado 117 575-7 (M+l)+. Tempo de retenção 2.08 minutos.
Etapa ç: (R)-1- (2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila)- N-(1-(2,3-diidroxipropila) -6-fluor-2- (4-hidroxi-2-metil butano-2-ila)-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida
A uma solução de (R) -1-(2,2 — difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila)-K-(1-(2,2-dimetil- 1,3- dioxolano-4-ila) metila- 6-flúor-2-(4-hidroxi-2-metil butano- 2-ila)-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida contendo um pouco de 1- (2,2-difluorobenzo [d] [1, 3]dioxol-5-ila) -N- (6- fluor-2-(4-hidroxi-2-metil butano-2-ila)-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida (315 mg, 0,55 mmol) em metanol (3 mL) e água (0,3 mL) foi adicionado p-TsQH.H^O (21 mg, 0,11 mmol). A mistura foi aquecida a 80°C por 30 minutos. A reação foi dividida entre acetato de etila e água e a camada aquosa foi extraida com acetato de etila duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de NaHCOj saturada e salmoura e secas sobre MgSOí. Após a remoção de solvente, o residuo foi purificado por cromatografia de coluna (20-80% de acetato de etila - hexanos) para fornecer (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila)-N-(1-(2,3- diidroxipropila)-6-fluor-2-(4-hidroxi-2-metil butano-2-ila)- lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida (92 mg, 31%). ESI-MS m/z calc. 534.2, encontrado 535,5 (M+l)+. Tempo de retenção 1.72 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-dβ) δ 8.32 (s, 1H), 7.53 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.43-7.31 (m, 4H), 6.17 (s, 1H), 4.97 - 4.92 (m, 2H), 4.41 (dd, J = 2.4, 15.0 Hz, 1H)., 4.23 (t, J = 5.0 Hz, 1H) , 4.08 (dd, J = 8.6, 15.1 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H) , 3.48 - 3.44 (m, 1H) , 3.41 - 3.33 (ra, 1H) , 3.20 (dd, 7.4, 5 12.7 Hz, 2H), 1.94 - 1.90 (m, 2H), 1.48 - 1.45 (m, 2H), 1.42 (s, 3H) , 1..41 (s, 3H) e 1.15 - 1,12 (m, 2H) ppm. Exemplo 15: 1-(2,2-diflúorobenzo[d] [1,3]dioxol-5- ila) -N- (2- (4- ( (S) -2,3-diidroxiproppxi.) -2-m.etilbutan-2-ila) -1- ((R)-2,3-diidrcxdpropila)-6-fluor-lH-indcl-5- 10 ila)ciclopropanocarboxamida e (S)-l-(2,2- diflúorobenzoid][1,3]dioxol-5-ila)-N-(2-(4-(2,3- diidroxipropoxi)-2-metilbutan-2-ila)-6-fluor-lH-indol-5- i1a)ci clop ropan oca rboxamida
Figure img0039
1- (2, 2-difluorobenzo [d] [1,3]dioxol-5-ila),-N- (2- (4-(.(S)-'2, 3- diidroxipropoxi)-2-metilbútan-2-ila)-1-((R)-2,3- diidroxipropila)-6-fluor-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida e (S)-l-(2,2- diflúorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila)-N-(2-(4-(2,3- 20 diidroxipropoxi)—2-metiIbutan—2-ila)-6-fluor-lH-indol-5- 119 ila)çiclopropanocarboxamida 1- (2,2-dif luorobenzo [d] [1,3.] dioxol-5-ila)-N- (2- (4- ( (SJ - 2,3-diidroxipropoxi)-2-metilbutan-2-ila)-1-((R)-2,3- diidroxipropila) -ê-fluor-lrí-indol-S-ila) 5 Çiclopropanocarboxamida e (S)-1-(2,2- dif luorobenzo [d] [1,3] dioxol-5-i.la)-N- (2- (4- (2,3- diidroxipropoxi)-2-metilbutan-2-ila)-6-fluor-lH-indol-5- ila)çiclopropanocarboxamida foram feitos seguindo um esquema similar como mostrado acima começando a partir de 2—(4—(((R) — 10 2,2-dimetila-l,3-dioxolano-4-ila)metóxi)-2-metil butano-2- ila)-1-(((R)-2,2-dimetila-l, 3-dioxolano-4-ila)metila-6- flúor-5-nitro-lH-indol contendo um pouco de (R)-2-(4-((2,2- dimetil-1,3-dioxolano-4-ila)metóxi)-2-metil butano-2-ila)-6- flúor-5-nitro-lH-indol). 1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol- 15 5-ila). -N-(2-(4-((S)-2,3-diidroxipropoxi)-2-metil butano-2- ila)-1-(R)-2,3-diidroxipropila)-6-flúor-lH-indol-5-ila Çiclopropanocarboxamida, ESI-MS m/z calc. 608.2, encontrado 609.5 (M+l) + . Tempo de retenção 1.67 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 7.53 (s, 1H) , 7.43 - 7.31 (m, 20 4H) , 6.19 (s, 1H) , 4.95 - 4.93 (m, 2H), 4.51 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.42 - 4.39 (m, 2H), 4.10 - 4.04 (m, 1H) , 3.86 (s, 1H), 3.49 - 3.43 (m, 2H), 3.41 - 3.33 (m, 1H) , 3.30 - 3.10 (m, 6H.) , 2.02 - 1.97 (m, 2H), 1.48 - 1.42 (m, 8H) e 1.13 (dd, J = 4.0, 6.7 Hz, 2H) ppm ; (S)-l-(2,2- 120 difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila)-N- (2-(4-(2,3- dihidroxipropoxi) -2-metilbutan-2-ila) -6-fluor-lH-indol-5- ila) ciclopropanocarboxamida, ESI-MS m/z calc. 534.2, encontrado 535.5 ,(M+1) + . Tempo de retenção 1.S1 minutos. IH NMR (400 MHz, DMSO-dβ) δ 10.91 (d, J= 1.5 Hz, IH) , 8.30 (s, IH), 7.53 (s, IH), 7.42 - 7.33 (m, 3H), 7.03 (d, J = 10.9 Hz, IH), 6.07 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 4.56 (d, J- 5.0 Hz, IH), 4.43 (t, J = 5.7 Hz, IH), 3.51 - 3.4 6 (in, IH) , 3.31 - 3.13 (m, 6H), 1.88 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.48 - 1.45 (m, 2H), 1.31 (s, 6H) e 1.15 - 1,12 (m, 2H) ppm.
Exemplo 16: 1- (2,2-difluorobenzo[d] [1,3]dipxol-5-ila)- N-(6-fluor-2-(l-hidroxi-2-metil propano-2-ila)-lH-indol-5- ila) ciclopropanocarboxamida
Figure img0040
1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila)-N-(6-fluor-2- (l-hidroxi-2-metil propano-2-ila) -lH-indo.l-5-ila) ciclopropanocarboxamida 1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila)-N-(6-fluor-2- ,(l-hidroxi-2-mefc.il propano-2-ila) -lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida foi feito seguindo o esquema mostrado acima iniciando a partir de uma mistura contendo (R)-2-(l- ((2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4-ila)metila)-6-fluor-5-nitro-lH- indol-2-ila)- 2-metil propano-l-ol e 3-(6-flúor-5-nitro-lH- indol-2-ila) -3-metil butano-l-ol. ESI-MS m/z calc. 44 6,2, encontrado 4 47.5 (M-f-l) + . Tempo de retenção 1.9 8 minutos. IH NMR (4 00 MHz, CDC13) δ 8.68 (s, IH) , 8.20 (d, J = 7.7 Hz, 5 IH), 7.30 - 7.21 (m, 3H) , 7.12 (d, J «= 8.2 Hz, IH) , 6.94 (d, J= 11.2 Hz, IH), 6.18 (s, IH), 3.64 (s, 2H), 1.75 (dd, J = 3.8, 6.8 Hz, 2H), 1.34 (s, 6H) e 1.14 (dd, J = 3.9, 6.9 Hz, 2H) ppm.
Exemplo 17: (R)-1-(2,2-Difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5- 10 ila)-N-(1-(2,3-diidroxipropila)-6-fluor-2-(l-hidrpxi-2- metilpropan-2-ila)-lH-indol-5-ila)ciclopropanocarboxamida
Figure img0041
Etapa a: (R)-benzila-2-(1-((2, 2-dimetila-l, 3-dioxolan- 4-ila)metila)-6-fluor-5-nitro-lH-indQl-2-ila)-2- met:Ipropanoato e ( (S)~2r2-dimeril-l,3-dioxolano-4-ila) metila 2-(1-(((R)-2,2-dimeti1-1,3-dioxolan-4-ila) metila)-6- flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila) -2-metil propanoato Carbonato de césio (8,23 g, 25,3 mmol) foi adicionado a 122 uma mistura de 2-(6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2-metil propanoato de benzila (3,0 g, 8,4 mmol) e (S)-(2,2-dimetil- 1,3-dloxolcn-4-ila) metila 4-metil benzeno sulfonato (7,23 g, 25,3 mmol) em DMF (17 mL) . A reação foi agitada a 80°C por 4.6 horas sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi então dividida entre acetato de etila e água. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas de acetato de etila combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO<, filtradas e concentradas. O produto bruto, um óleo marrom viscoso que contém os dois produtos mostrados acima, foi pego diretamente para a etapa seguinte sem purificação adicional. (R)-Benzila 2 - (1- ((2,2-dimetila-l,3-dioxolan-4-ila)metila)-6- fluor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2-metilpropanoato, ESI-MS m/z calc. 470.2, encontrado 471.5 (M+l)+. Tempo de retenção 2.20 minutos. ( (S) -2,2-Dimeti.l-l, 3-dioxolan-4-ila) metila 2-(l- (((R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-ila)metila)-6-fluor-5-nitro- lH-in.dol-2-ila) -2-metil propanoato, ESI-MS m/z calc. 494.5, encontrado 4 95.7 (M+D+. Tempo de retenção 2.01 minutos.
Etapa b: ®-2-(1-((2,2-dimetil-l, 3-dioxolan-4-ila) metila)-6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila) -2-metil propano-l-ol À mistura de reação bruta obtida na etapa (a) foi dissolvido em THF (42 mL) e resfriado em um banho de água gelada. LiAlH4 (16,8 mL de 1M solução 16,8 mmol) foi adicionado em gotas. Após término da adição, a reação foi agitada por um periodo adicional de 5 minutos. A reação foi resfriada bruscamente sobre Celite, e os sólidos foram lavados com THF e acetato de etila. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia de coluna (30-60% de acetato de etila - hexanos) para obter o produto como um óleo marrom (2,68 g, 87% em 2 etapas). ESI-MS m/z calc. 366.4, encontrado 367.3 (M+l)+. Tempo de retenção 1.68 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) § 8.34 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.65 (d, J= 13.4 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 4.94 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.64 - 4.60 (m, 1H), 4.52 - 4.42(m, 2H), 4.16 - 4.14 (m, 1H), 3.76 - 3.74 (m, 1H), 3.63 - 3.53 (m, 2H), 1.42 (s, 3H) , 1.3:8 - 1.36 (m, 6H) e 1,19 (s, 3H) ppm
Etapa c: (R)-2-(5-amino-l-((2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4- ila) metila)-6-fIúor-1H-indo1-2-ila)-2-metil propano-l-ol (R)-2- (1- ( (2,2-dimetil-l, 3-dioxolano-4-ila) metila)-6- flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2-metil propano-l-ol (2,5 g, 6,82 mmol) foi dissolvido etanol (70 mL) e a reação foi lavada com N2. A seguir Pd-C (250 mg, 5% em peso) foi adicionado. A reação foi lavada com nitrogênio novamente e então agitada sob H2(atm) . Após 2,5 horas somente conversão parcial no produto foi observada, por LCMS. A reação foi filtrada através de Celite e concentrada. 0 resíduo foi submetido npvamente às condições acima. Após 2 horas LCMS indicou conversão completa no produto. A mistura de reação 124 foi filtrada através de Celite. 0 filtrado foi concentrado para fornecer o produto como um sólido preto (1,32 g, 79%). ESI-MS m/z calc. 336.2, encontrado 337.5 (M+l) + . Tempo de retenção 0.86 minutes. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.17 (d, 5 J = 12.6 Hz, 1H) , 6.76 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 6.03 (s, 1H) , 4,79 - 4.76 (m, 1H) , 4.46 (s, 2H), 4.37 - 4.31 (m, 3H),4.06 (dd, J = 6.1, 8.3 Hz, 1H), 3.70 - 3.67 (m, 1H), 3.55 - 3.52 (m, 2H), 1.41 (s, 3H), 1.32 (s, 6H) e 1.21 (s, 3H) ppm.
Etapa d: (R)-1-(2,2-diflúorobenzo[d][1,3] 10 dioxol-5-ila)-N-(1- ( (2,2-dimetil-l, 3-dioxolan-4-ila) metila)- 6-flúor-2-(l-hidroxi-2-metil propano-2-ila)-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida DMF (3 gotas) foi adicionado a uma mistura de agátação de 1-{2r 2-diflúorobenzo [d] [1,3] dioxol-5-ila) ácido 15 ciclopropanocarboxilico (1,87 g, 7,7 mmol) e cloreto de tionila (1,30 mL, 17,9 mmol). Após 1 hora uma solução clara tinha se formado. A solução foi concentrada a vácuo e então tolueno (3 mL) foi adicionado e a. mistura foi concentrada novamente. A etapa de tolueno foi repetida mais uma vez e o 20 residuo foi colocado em vácuo elevado por 10 minutos. O cloreto de ácido foi então dissolvido em diclorometano (10 mL) e adicionado a uma mistura de (R)-2-(5-amino-l-((2,2- dimetil-1,3-dioxolan—4-ila) metila) -6-f lúor-lH-indol-2-üa) - 2-metil propano-l-ol (.1,8 g, 5,4 mmol) e trietil amina (2,24 125 mL, 16,1 mmol) em diclorometano (45 mL) . A reação foi agitada em temperatura ambiente pox 1 hora, a reação foi lavada com IN solução HCI, solução de NaHC.Cg saturada e salmoura, seca sobre MgjSOí e concentrada para fornecer o produto como um 5 sólido espumoso preto (3 g, 100%). ESI-MS m/z calc. 560.6, encontrado 561.7 (M+l)+. tempo de retenção 2.05 minutos-. 1H NMR (400 MHz, DMSQ-d6) δ 3.31 (s, 1H) , 7.53 (s, 1H) , 7.42 - 7.40 (m, 2H), 7.34 - 7.30 (m, 3H), 6.24 (s, 1H), 4.51 - 4.48 (m, 1H), 4.39 - 4.34 (m,2H), 4.08 (dd, J = 6.0, 8.3 Hz, 1H) , 10 3.69 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.58 - 3.51 (m, 2H), 1.48 - 1..45 (m, 2H) , 1.39 (s, 3H) , 1.34 - 1.33 (m, 6H), 1.18 (s, 3H) e 1.14 - 1.12. (m, 2H) PPM.
Etapa e: (R)-1-(2,2-diflurobenzo[d] [1,3]dioxol-5-ila)- N-(1-(2,3-diidroxipropila)-6-fluor-2-(l-hidroxi-2-metil 15 propano-2-ila)-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida (R) -1- (2,2-diflurobenzo[d] [1,3]dioxol-5-ila)-N-(1-(2,2- dimetila-1,3-dioxolano-4-il)metila-6-fluor-2-(l-hidroxi-2- meti.l propano-2-ila)-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida (3,0 g, 5,4 mmol). foi dissolvido em metanol (52 ml). 20 Água (5,2 mL) foi adicionada seguido por p-TsOH.HjO (204 mg, 1,1 mmol). A reação foi aquecida a 80°C por 45 minutos. A solução foi concentrada e então dividida entre acetato de etila e solução de NaHCO3 saturada. A camada de acetato de etila foi seca sobre MgSO4 e concentrada. O residuo foi purificado por cromatografia de coluna (50-100% de acetato de etila - hexanos) para fornecer o. produto como um sólido espumoso colorido creme. (1,3 g, 47% ee >98% por SFC). ESI-MS m/z calc. 520,5, encontrado 521.7 (M+l)+. Tempo de retenção 5 1.69 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 8.31 (s, 1H) ,. 7.53 (s, 1H), 7.42 - 7.38 (m, 2H), 7.33 - 7.30 (m, 2H) , 6.22 (s, 1H), 5.01 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.90 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.75 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.40 (dd, J = 2.6, 15,1 Hz, 1H), 4.10 (dd, J = 8.7, 15.1 Hz, 1H), 3.90 (s, 1H) , 3.65 - 3.54 (m, 10 2H) , 3.48 - 3.33 (m, 2H), 1.48 - 1.4 5 (m, 2H) , 1.35 (s, 3.H) , 1.32 (s, 3H) e 1.14 - 1.11 (m, 2H) ppm. Exemplo 18: (S)-1-(2,2-Difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5- ila)-N-(1-(2,3-dihidroxÍpropila)-6-fluor-2-(l-hidroxi-2- metilpropan-2-ila)-lH-indol-5-ila)Çiclopropanocarboxamida
Figure img0042
Etapa a; (S)-benzila 2-(1-((2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-ila) metila)-6-flúor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2-metil propanoato e ((R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4-ila) metila 2-(1-( ((S)-2,2- dimet 11-1,3-dioxolano-4-ila) metila-6-flúor-5-n.itro-lH-indol- 2-ila) -2-metil propanoato Carbonato de césio (2,74 g, 8,4 mmol) foi adicionado a uma irdstura de 2- (6-flúor-5-nitro-lH-indo.l-2-ila)-2-metil propanoato de benzila (1,0 g, 2,8 mmol) e (S)- (2,2-dimetil- 1,3-dioxolano-4-ila)metila 4-metil benzeno sulfonate (3,21 g, 11,2 mmol) em DMF (5,6 mL).. A reação foi agitada a 80°C por 64 horas sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi então dividida entre acetato de etila e água. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas de acetato de etila combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas. 0 produto bruto, um óleo marrom viscoso que contém os dois produtos mostrados acima, foi pego diretamente para a etapa seguinte sem purificação adicional. (S)-Benzila 2-(1-((2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4-ila)metila)-6- fluor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2-metilpropanoato, ESI-MS m/z calc, 470.2, encontrado 471.5 (M+l)+. Tempo de retenção 2.22 minutos. ( (R)-2,2-Dimetil-l., 3-dioxolano-4-ila)metila 2-(l- ( ((S)-2,2-dimetila-l,3-dioxolano-4-ila)metila)-6-fluor-5- nitro-lH-indol-2-ila)-2-metilpropanoato, ESI-MS m/z calc. 494.5, encontrado 495.5 (M+l)+. Tempo de retenção 2.03 minutos.
Etapa b: (S)-2-(1-( (2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4- ila)metila-6-fluor-5-nitro-lH-indol-2-ila)-2-metil propano-1- ol A mistura de reação bruta de (S)-benzila-2-(I-((2r2- 5 dimetil-1,3-dioxolano-4-ila) metila-6-flúor-5-nitro-lH-indol- 2-ila)-2-metil propanoato e ((R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4- i.la) metila 2-(1- (( (S)-2,2-d.imetiI-l, 3-dioxolano-4-ila) metila-6-flúor-5-nitro-1H-indo1-2-ila)-2-metil propanoato foi dissolvido em THF (15 mL) e resfriado em um banho de água gelada. LÍAIH4 (2,8 mL de 1 M solução, 2,8 mmol) foi adicionado em gotas. Após término, da adição a reação foi agitada por 5 minutos. A reação foi resfriada bruscamente por adição de água (0,5 ml) -r 15% solução NaOH (0,5 mL) e então água (1,5 ml). A mistura foi filtrada sobre Celite, e os sólidos foram lavados com THF e acetato de etila. 0 filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia de coluna (30- 60% de acetato de etila - hexanos) para obter o produto como um óleo marrom (505 mg, 49% em 2 etapas. ESI-MS m/z calc. 366.4, encontrado 367.3 (M+l)+. Tempõ' de retenção 1.68 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.34 (d, d - 7.6 Hz, 1H), 7.65(d, J = 13.5 Hz, 1H) , 6.57 (s, 1H) , 4.94 (t, J = 5.4 Hz, 1H) , 4.64 - 4.60 (m, 1H) , 4.52 - 4.42 (m, 2H), 4.14 (dd, J = 6.2, 8.4 Hz, 1H), 3.74 (dd, J = 7.0, 8.3 Hz, 1H), 3.63 - 3.53 (m,2H), 1.42 (s, 3H) , 1-37 (m, 6H) e 1.19 (s, 3.H) ppm.
Etapa c: (S)-2-(5-amino-l-((2,2-dimetil-l,3-dioxolano- 4-ila) metila)-6-flúpr-lH-indpl-2-ila) -2-metil propano-l-ol (S)-2-,(1 —((2,2-dimetila-1,3-dioxolano-4-ila) metila)-6- flúor-5-nitrc-lH-indol-2-ila) -2-metil propano-l-ol (500 mg, 5 1,4 mmol) foi dissolvido etanol (15 mL) e a reação foi lavada com N?. A seguir Pd-C (50 mg, 5% em peso) foi adicionado. A reação foi lavada com nitrogênio novamente e então agitada sob (atm) . Após 1 hora somente conversão parcial do produto foi observada por LCMS. A reação foi filtrada através 10 de Celite e concentrada. 0 resíduo foi submetido novamente às condições acima. Após 1 hora LÇMS indicou conversão completa do produto. A. mistura de reação foi filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado para fornecer, o produto como um sólido preto (420 mg, 91%). ESI-MS m/z calc. 336.2, 15 encontrado 337.5 (Mtl)H. Tempo de retenção 0.90 minutes. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.17 (d, J = 12.6 Hz, 1H) , 6.76 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H) , 4.78 (br s, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.41 - 4.27 (m, 3H), 4.06(dd, J = 6.1, 8.3 Hz, 1H), 3.70 - 3.67 (m, 1H), 3.53 (dd, J = 10.7, 17.2 Hz, 2H), 1.40 (s, 3H), 20 1.32 (s, 6H) e 1.21 (s, 3H) ppm.
Etapa d: (S)-1-(2;,2-difluorobenzo [d] [1,3] dioxol-5-ila)- N-(1-((2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4-ila) metila-6-flúor-2- (1- hidrodxi-2-metil propano-2-ila)-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida DMF (3 gotas) foi adicionado a uma mistura de agitação de 1-(2,2-difluorobenzp [d][.l, 3] dioxol-5-íla) ácido ciclopropanocarboxilico (187m g, 0,8 mmol) e cloreto de tionila (0, 13 mL, 1, 8 mmol) . Após 30 minutos uma solução 5 clara tinha se formado. Uma pequena quantidade foi misturada piperidina para testar que o cloreto ácido tinha se formado. A solução foi concentrada no rctovap e então tolueno (1 mL) foi adicionado e a mistura foi concentrada novamente. A etapa de tolueno foi repetida mais uma vez e o residuo foi colocado 10 em vácuo elevado por 10 minutos,. 0 cloreto de ácido foi então dissolvido em diclorometano (2 mL) e adicionado a uma mistura de (S)-2-(5-amino-l-((2, 2-dimetil-l,3-dioxclano-4-ila) metila)-6-flúor-lH-indol-2-ila)-2-metil propano-l-ol (200 mg, 0,6 mmol) e trietil amina (0,25 mL, 1,8 mmol) em 15 diclorometano (4 mL). A reação foi .agitada em temperatura ambiente por 4 5 minutos. A reação foi lavada com IN HCI solução, solução de NaHCCh saturada e salmoura, seca sobre MgSbí e concentrada para fornecer o produto como um sólido espumoso preto (320 mg, 96%). ESI-MS m/z calc. 560.6, 20 encontrado. 561.5 (M+D + . Tempo de retenção 2.05 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.31 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.42 - 7.40 (m, 2H), 7.34 - 7.30 (m, 3H),.6.24 (s, 1H) , 4.84 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.51 - 4.46 (m, 1H) , 4.41 - 4.32 (m, 2H), 4.08 (dd, J = 6.0, 8.3 Hz, 1H) , 3.71 - 3.67 (m, 1H) , .3.58 - 3.50 131 (m, 2H) , 1.48 - 1.45 (m, 2H), 1.40 (s, 3K) , 1.34 - 1.33 (m, 6H), 1-18 (s, 3H) e 1.14 - 1.12 (m, 2H) ppm.
Etapa e: (S)-1- (2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-ila)- N- (1- (2, 3-diidroxi propila) -6-fluor-2- (l-hidroxi-2-metil propano-2-ila)-lH-indol-5-ila) ciclopropano carboxamida (S)-1-(2,2-difluorobenzo[d] [1,3]dioxol-5-ila)-N- (1- (2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4-ila)metila)-β-fluor-2-(1- hidroxi-2-metil propano-2-ila)-lH-indol-5-ila ciclopropano carboxamida (290 g, 0,5 mmol) foi dissolvido em metanol (5 mL) . Água (0,5 mL) foi adicionada seguido por p-TsOH.I-hO (20 mg, 0,1 mmol). A reação foi aquecida a 80°C por 45 minutos, A solução foi então dividida entre acetato de etila e solução de NaHCO3saturada. A camada de acetato de etila foi seca sobre MgSOí e concentrada. 0 residuo foi purificado por cromatografia de coluna (50-100% de acetato de etila - hexanos) para fornecer o produto como um sólido espumoso colorido creme. (146 mg, 54 %, ee>97% by SFC). ESI-MS m/z çalc. 520.5, encontrado 521.5 (M+l)+, Tempo de retenção 1.67 minutes. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.31 (s, 1H), 7.53 (d, J = 1.1 Hz, 1H) , 7.42 - 7,37 (m, 2H) , 7.33 - 7.30 (m, 2H) , 6.22 (s, 1H) , 5.01 (d, J = 5.0 Hz, 1H) , 4.91 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.75 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.42 - 4.38 (m, 1H) , 4.10 (dd, J = 8.8, 15.1 Hz, 1H ), 3.90 (s, 1H) , 3.64 - 3.54 (m, 2H), 3.48. - 3.33 (m, 2H) , 1.4 8 - 1.4 5 (m, 2H) , 1.35 (s, 3H) , 1.32 (s, 3H) e 1.14 - 1,11 (m, 2H) ppm.
Exemplo 19: (R)-1-(benzo[d][1,31dioXol-5-ila)-N-(2- terc-butila-1-(2,3-diidroxipropila)-6-fluor-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida
Figure img0043
(R)-1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ila)-N-(2-terc-butila-l- (2,3-diidroxipropila)-6-fluor-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida foi preparado utilizando um procedimento experimental similar ao exemplo 72 a partir de 10 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ila) ácido ciclopropanocarboxilico e 2-terc-butila-6-fluor-5-nitro-lH-indol.
Exemplo 20: (5)-1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ila)-N-(2- terc-butila-1-(2, 3-diidroxipropila)6-fluor-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida
Figure img0044
(S)-1-(benzo[d] [1,3]dioxol-5-ila)-N-(2-terc-butila-l- (2, 3-diidroxipropila)6-fluor-lH-indol-5-ila) ciclopropanocarboxamida foi preparado utilizando um 133 procedimento experimental similar ao exemplo 72 a partir de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ila)-ácido ciclopropanocarboxilico e 2-terc-butila-6-flúor-5-nitro-lH-indol. Uma pessoa versada na arte química pode utilizar os 5 exemplos e esquemas juntamente com metodologias sintéticas conhecidas para sintetizar compostos da presente invenção, incluindo os compostos na. tabela 3 abaixo. Tabela 3: dados .físicos dos compostos exemplares.
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Exemplo 21: ensaios para detectar e medir Propriedades de compostos de correção de ΔF508-CFTR Métodos ópticos de potencial de membrana para ensaiar propriedades de compostos de modulação ΔF508-CFTR. 0 ensaio utiliza corantes de sentir voltagem fluorescente para medir alterações em potencial de membrana utilizando uma leitora de placa fluorescente (por exemplo, FLIPR III, Molecular Devices, Inc.) como uma leitura para aumento em ΔF508-CFTR funcional em células NTH 3T3. A força de acionamento para a resposta é a criação de um gradiente de ion de cloreto em combinação com ativação de canal por uma etapa de adição de liquido única após as células terem sido anteriormente tratadas com compostos e subsequentemente 139 carregadas com um corante de sentir voltagem. Identificação de compostos de correção Para identificar moléculas pequenas que corrigem o defeito de tráfego associado a ΔF508--CFTR;. um formato de ensaio de HTS de adição única foi desenvolvido. Placas de ensaio contendo células são incubadas por ~2-4 horas em incubador de cultura de tecido a 37 °C, 5% CO2, 90% de umidade, As células estão então prontas para exposição de composto após aderir ao fundo das placas de ensaio, As células foram incubadas em meio isento de soro por 16-24 horas em incubador de cultura de tecido a 37 °C, 5% de CO2, 90% de umidade na presença ou ausência (controle negativo) do composto de teste. As células foram subsequentemente enxaguadas 3X com solução Ringers Krebs e carregadas com um corante de redistribuição de sentir voltagem. Para ativar ΔF508-CFTR, 10 uM forskolin e o potenciador de CFTR, genisteína (20 uM) foram adicionados juntamente com meio isento de CI em cada cavidade. A adição de meio isento de CI promoveu efluxo de CI em resposta à ativação de ΔF508-CFTR e a despolarização de membrana resultante foi opticamente monitorada utilizando corantes dè sensor de voltagem. Identificação de compostos de potenciador atósSKáeíi Para identificar potenciadores de ΔF508-CFTR, um formato de ensaio de HTS de adição dupla foi desenvolvido. Esse ensaio de HTS Utiliza corantes de sentir voltagem fluorescente para medir alterações em potencial de membrana no FLIPR III como uma medição para aumento em gating (condutância) de ΔF508-CFTR em células NIH 3T3 ΔF508-CFTR corrigidas em temperatura. A força de acionamento para a resposta é um gradiente de íon Cl em combinação com ativação de canal com forskolin em uma etapa de adição de líquido única utilizando uma leitora de placa fluorescente como FLIPR III após as células terem sido previamente tratadas com compostos de potenciado.r (ou controle de veiculo DMSO) e subsequentemente carregadas com um corante de redistribuição. Soluções: Solução de banho número 1: (em mM) NaCl 150, KCI 4.5, CaC12 2, MgC12 1, HEPES 10, pH 7.4 com NaOH. Solução de banho isenta de cloreto: sais de cloreto na solução de banho número 1 são substituídos com sais de gluconato. Cultura de células Fibroblastos de camundongo NTH3T3 expressando estavelmente ΔF508-CFTR são utilizados para medições ópticas de potencial de membrana. As células são mantidas a 37 °C em 5% Ç02 e 90% de umidade em meio de Eagle modificado de Dulbecco suplementado com 2 mM de glutamina, 101 de soro bovino fetal, 1 X NEAA, B-ME., 1 X pen/strep, e 25 mM HEPES em frascos de cultura de 175 m2 . para todos os ensaios ópticos, 5 as células foram semeadas a ~20.000/çavidade em placas revestidas com matrigel de 384 cavidades e cultivadas por 2 h a .37 °C antes de cultivar a 27°C por 24 horas para o ensaio de potençiador. Para os ensaios de correção, as células são cultivadas a 27°C ou 37°c com e sem compostos por 16 - 24 10 horas.
Ensaios eletrofisiológicos para ensaiar propriedades de
compostos de modulação de ΔF508-CFTR
1. ensaio de câmara Ussing Experimentos de câmara Ussing foram realizados em células epiteliais de via aérea polarizada expressando ΔF508- C.FTR para caracterizar adicionalmente os moduladores ΔF508- CFTR identificados nos ensaios ópticos. Epitélios de via aérea CF e não CF foram isolados de tecido bronquial, cultivados como anteriormente descrito (Galietta, L.J.V., 20 Lantero, S., Gazzolo, A., SaccO, O., Romano, L., Rossi, G.A. , & Zegarra-Mpran, O. (1998) In Vitro Cell. Dev. Biol. 34, 478- 481) , e revestidos sobre filtros Costar® SnapwellTM que foram pré-revestidos com meios condicionados por NIH3T3. Após quatro dias o meio apical foi removido e as células foram, cultivadas -em uma interface de líquido ar por >14 dias antes dp uso. Isso resultou em uma monocamada de células colunares totalmente diferenciadas que foram ciliadas, aspectos que são 5 característicos de epitélio de via aérea. HBE não CF foram isolados de não fumantes que não tinham nenhuma doença de pulmão conhecida. CF-HBE foram isolados de pacientes homozigotos para ΔF508-CFTR. HBE cultivados em inserções de cultura de célula 1.0 Çostar® Snapwell™ foram, montados em uma câmara Ussing (Physiologic Instruments, Inc.., San Diego, CA), e a resistência transepitelial e corrente de curto-circuito na presença de um gradiente Cl basolateral para apical (Isc) foram medidos utilizando um sistema de braçadeira de tensão (Department of Bioengineering, .University of Iowa, XA) . Resumidamente, HBE foram examinados sob condições de registro de braçadeira de tensão (Vhold - Q mV) a 37 °C. a solução basolateral continha (em mM) 145 NaCl, 0.83 K2HPO4, 3.3 KH2PO4, 1.2 MgC12, 1.2 CaC12, 10 Glicose, 10 HEPES (pH ajustado para 7.35 com NaOH) e a solução apical continha (em mM) 145 NaGluconate, 1.2 MgC12, 1.2 CaC12, 10 glicose, 10 HEPES (pH ajustado para 7.35 com NaOH). Identificação de compostos de correção Protocolo típico utilizou um gradiente de concentração CI de membrana basolateral para apical. Para estabelecer esse gradiente, ringer normal foi utilizado na membrana basolateral, ao passo que NaCI apical foi substituído por 5 gluconato de sódio equimolar (titulado até pH 7,4 com NaoH) para fornecer um gradiente de concentração CI grande através do epitélio. Todos os experimentos foram realizados com monoçamadas intactas. Para ativar totalmente ΔF508-CFTR, forskolin (10 uM), inibidor de PDE, IBMX (100 uM) e potenciador CFTR, genisteína (50 uM) foram adicionados ao lado apical. Como observado em outros tipos de células, incubação em baixas temperaturas de células FRT e células epiteliais bronquiais humanas isoladas de pacientes CF doentes (CF-HBE) expressando ΔF508-CFTR aumenta a densidade funcional de CFTR na membrana de plasma. Para determinar a atividade de compostos de correção, as células foram incubadas com composto de teste por 24 - 4 8 horas a 37 °C e foram subsequentemente lavadas 3X antes do registro. 0 ISG mediado por genisteína e cAMP nas células tratadas com composto foi normalizado para controles de 37 °C e expressas como percentagem de atividade de atividade de CFTR em wt-HBE. A pré-incubação das células com o composto de correção aumentou significativamente o ISc mediado por genisteina e cAMP comparado com os controles de 37 °C. Identificação de compostos de potenciador Protocolo típico utilizou um gradiente de concentração de CX de membrana basolateral para apical. Para estabelecer esse gradiente, ringers normal foi utilizado na membrana basolateral, ao passo que NaCI apical foi substituído por gluconato de sódio equimolar (titulado até pH 7,4 com NaOH) para fornecer um gradiente de concentração CX grande através do epitélio. Forskolin (10 uM) e todos os compostos de teste foram adicionados ao lado apical das inserções de cultura de célula. A eficácia dos potenciadores ΔF508-CFTR putativos foi comparada com aquela do potenciador conhecido, genisteina.
2. Registros de sujeição de patch Corrente CX total em células ΔF508-NIH3T3 foi monitorado utilizando a configuração de registro de adesivo- perfurado como anteriormente descrito (Rae, J., Cooper, K., Gates, P., & Watsky, M. (1991) J. Neurosci. Methods 37, 15- 26). registros de braçadeiras de tensão foram realizados a 22°C utilizando um amplificador de sujeição de patch Axopatch 200B (Axon Instruments Inc., Foster City, CA). A solução de pipeta continha (em mM) 150 N-metil-D-glucamina (NMDG)-Cl, 2' MgÇl2, 2 CaCl2, 10 EGTA, 10 HEPES, e 240 pg/ml amfotericin-B 14b (pH ajustado para 7,35 com HCI) . 0 meio extracelular continha (em mN) 150 NMDG-C1, 2 MgClj, 2 CaCl^, 10 HEPES' (pH ajustado para 7.35 com HCI). A geração de pulso, aquisição de dados e análise foram realizados utilizando um PC equipado 5 com uma interface Digidata 1320 A/D em combinação com Çlampex 8 (Axon Instruments Inc.). Para ativar ΔF508-CFTR, 10 uM forskolin e 20 uM genisteína foram adicionados ao banho e a relação de voltagem-corrente foi monitorada a cada 30 segundos. Identificação de compostos de correção Para determinar a atividade de compostos de correção para aumentar a densidade de ΔF508-CFTR funcional na membrana de plasma, os requerentes utilizaram as técnicas de registro de adesivo perfurado acima descritas para medir a densidade 15 de corrente após 24 h de tratamento cqm os compostos de correção. Para ativar totalmente ΔF508-CFTR, 10 uM forskolin e 20 uM genisteína foram adicionados às células. De acordo com as condições de registro dos requerentes, a densidade de corrente após 24 h de incubação a 27°C era mais elevada do 20 que aquela observada após 2 4 h de incubação a 37°C. esses resultados são compatíveis com os efeitos conhecidos de incubação em baixa temperatura na densidade de ΔF508-CFTR na membrana de plasma. Para determinar os efeitos de compostos 146 de correção em densidade de corrente de CFTR, as células foram incubadas com 10 uM do composto de teste por 24 horas a 37 ΩC e a densidade de corrente foi comparada com o.s controles de 27°C e 37°C (% de atividade). Antes do registro, as células foram lavadas 3X com meio de registro extracelular para remover qualquer composto de teste restante. A pré- incubação com 10 uM de compostos de correção aumentou significativamente a corrente dependente de genisteina e cAMP com os controles de 37PC, Identificação de compostos de potenciador A capacidade des potenciadores ΔF508-CFTR de aumentar a corrente CI AF508-ÇFTR macroscópica (TAFÕOS)eti células NIH3T3 expressando e.st ave Intente ΔF508—CFTR foi também pesquisadas utilizando técnicas de registro de adesivo perfurado. Os potenciadores identificados a partir dos ensaios ópticos evocaram um aumento dependente de dose em ZAFÔOO com potência e eficácia similares observadas nos ensaios ópticos. Em todas as células examinadas, o potencial de reversão antes e durante aplicação de potenciador era em torno de -30 mV, que é o Eci calculado (-28 mV) . Cultura de células Fibroblastos de camundongo NIH3T3 expressando estavelmente ΔF5O8-CFTR são utilizados para registros de célula integral. As células são mantidas a 37°C em. 5% CO2 e 90% de umidade em meio de Eagle modificado de Dulbecco suplementado com 2 mM de glutamina, 10% de soro bovino fetal, 1 X NEAA, B-ME, 1 X pen/strep, e 25 mM HEPES em frascos de cultura de 175 cm2. Para registros de célula integral, 2.500 - 5.000 células foram semeadas em lâminas de microscópio de vid.ro revestidas com poli-L-lisina e cultivadas por 24 - 4 8 horas a 27°C antes do uso para testar a atividade de potenciadores; e incubadas com ou sem o composto de correção a 37°C para medir a atividade de corretores.
3. Registros de canal único A atividade de gating de wt-CFTR e ΔF508-CFTR corrigido em temperatura expresso em células NIH3T3 foi observada utilizando registros de adesivo de membrana de dentro para fora cortados como anteriormente descrito (Dalemans, W. , Barbry, P., Champigny, G., Jallat, S., Dott, K., Dreyer, D., Crystal, R.G., Pavirani, A., Lecocq, J-P., Lazdunski, M. (199.1) Nature 354, 526 - 528) utilizando um amplificador de sujeição de patch Axopatch 200B (Axon Instruments Inc.). a pipeta continha (em mM) : 150 NMDG, 150 ácido aspártico, 5 CaClz, 2 MgCl2, e 10 HEPES (pH ajustado para 7.35 com base Tris) , O banho continha (em mM) .150 NMDG-C1, 2 MgCl2, 5 EGTA, 10 TES, e 14 Tris base (pH ajustado para 7.35 com HCI). Após corte, tanto wet como ΔF508-CFTR foram ativados por 148 adicionar 1 mM Mg-ATP, 75 nM da subunidade catalítica de proteína cinase dependente de cAMP (PKA; Promega Corp. Madison, WI), e 10 mM NaF para inibir fosfatases de proteina, que evitaram esgotamento de corrente. O potencial de pipeta 5 foi mantido a 80 mV. A atividade de canal foi analisada de adesivos de membrana contendo < canais ativos. O número máximo de aberturas simultâneas determinou o número de canais ativos durante o curso de um experimento. Para determinar a amplitude de corrente de canal único, os dados registrados de 120 s de atividade de ΔF508-C.FTR foram filtrados "off-line"a 100 Hz e então utilizados para construir histogramas de amplitude de todos os pontos que foram adaptados com funções multigaussianas utilizando software Bio-Patch Analysis (Bio- Logic Comp. França). A corrente microscópica total e probabilidade de abertura (Po) foram, determinados de 120 s de atividade de canal. O Po. foi determinado utilizando o software Bio-Patch ou da relação Po= I/i(N), onde I = corrente média, i = amplitude de corrente de canal único e N = número de canais ativos em adesivo. Cultura de células Fibroblastos de camundongo NIH3T3 expressando ΔF508- CFTR são utilizados para registros de sujeição de patch de membrana cortada. As células são mantidas a 37 °C em 5%CO2 e 149 90% umidade em meio de Eagle modificado de Dulbecco suplementado com 2 mM de glutamina, 10% de soro bovino fetal, 1 X NEAA, B-ME, 1 X pen/strep, e 25 mM HEPES em frascos de cultura de 175 cm2. Para registros de canal único, 2.500 - 5 5.000 células foram semeadas em lâminas de microscópio de vidro revestidas de poli-L-lisina e cultivadas por 24 48 h a 27°C antes de uso. Verificou-se que os compostos da presente invenção apresentam atividade de correção como medido no ensaio 10 descrito acima. Qs compostos da invenção são úteis como moduladores de transportadores de cassete de ligação ATP. Utilizando os procedimentos descritos acima, as atividades, isto é, ECõOs, dos compostos da presente invenção foram medidas para ser de 15 aproximadamente 3.8 nM a aproximadamente 13,5 uM. Além disso, utilizando aqueles métodos descritos acima, as eficácias de compostos da presente invenção foram medidas para ser de aproximadamente 35% a aproximadamente 110%. Na tabela 4, os seguintes significados se aplicam: 20 EC50: "+++" significa <2 uM; "++" significa entre 2 uM e 5 uM; "+" significa entre 5 uM e 25 uM. % Eficácia: significa < 25%; '■'++" significa entre 25% e 100%; "4-++" significa > 100%. Tabela 4.
Figure img0051
Outras modalidades Deve ser entendido que embora a invenção tenha sido descrita com relação à descrição detalhada da mesma, a descrição acima pretende ilustrar e não limitar o escopo da 5 invenção, que é definido pelo escopo das reivindicações apensas. Outros aspectos, vantagens e modificações estão compreendidas no escopo das seguintes reivindicações.

Claims (12)

1. Composto caracterizado pelo fato de apresentar a fórmula:
Figure img0052
2. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender: (i) um composto como definido na reivindicação 1; e (ii) um veiculo farmaceuticamente aceitável.
3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica compreende ainda um agente adicional selecionado dentre um agente mucolitico, um broncodilatador, um antibiótico, um agente anti-infeccioso, um agente anti-inflamatório, um corretor de CFTR, um potencializador de CFTR, e um agente nutricional.
4. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o agente adicional é um potencializador de CFTR.
5. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o potencializador de CFTR é N-(5-hidroxi-2,4-di-terc-butil- fenil)-4-oxo-lH-quinolino-3-carboxamida.
6. Método in vitropara aumentar o número de transportadores ABC funcionais em uma membrana de uma célula in vitrocaracterizado pelo fato de compreender a etapa de contatar a referida célula com o composto que possui a fórmula:
Figure img0053
7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o transportador ABC é CFTR.
8. Uso do composto como definido na reivindicação 1 caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para tratar uma condição, doença ou distúrbio em um paciente comprometido pela atividade transportadora de ABC, em que a referida condição, doença ou distúrbio é selecionado de fibrose cistica, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária, deficiências de fibrinólise- coagulação, tal como deficiência de proteina C, angioedema hereditário do tipo 1, deficiências de processamento de lipideo, tais como hipercolesterolemina familiar, quilomicronemia do tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, como doença de célula-I/pseudo- Hurler, mucopolissacaridoses, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler- Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulemia, diabetes melitus, nanismo de laron, deficiência de mieloperoxidase, hipoparatireoidismo primário, melanoma, glicanose CDG tipo 1, enfisema hereditário, hipertireoidismo congênito, osteogênese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (Dl), Dl neurofiseal, Dl neprogênico, sindrome de Charcot-Marie Tooth, doença de Perlizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas, tais como doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, plasia supranuclear progressiva, doença de Pick, vários distúrbios neurológicos de poliglutamina, tais como Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinhal e bulbar, dentato rubro palidoluisiana e distrofia miotônica, bem como encefalopatias espongiformes, tais como doença de Creutzfeldt-Jakob hereditária, doença de Fabry, sindrome de Straussler-Scheinker, DPOC, doença do olho seco e doença de Sjogren.
9. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a condição, doença ou distúrbio é fibrose cistica.
10. Kit para uso na medição da atividade de um transportador ABC ou de um fragmento do mesmo em uma amostra biológica in vitroou in vivo caracterizado pelo fato de que compreende: (i) uma primeira composição que compreende o composto como definido na reivindicação 1; e (ii) instruções para: a) colocar a composição em contato com a amostra biológica; b) medir a atividade do referido transportador ABC ou um fragmento do mesmo.
11. Kit, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que compreende ainda instruções para: a) colocar uma composição adicional em contato com a amostra biológica; b) medir a atividade do referido transportador ABC ou um fragmento do mesmo na presença do referido composto adicional; e c) comparar a atividade do transportador ABC na presença do composto adicional com a densidade do transportador ABC na presença da referida primeira composição.
12. Kit, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o kit é usado para medir a densidade de CFTR.
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