CN102242199B

CN102242199B - 一种检测牛LXRa基因多态性的方法

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Publication number: CN102242199B
Application number: CN2011101361573A
Authority: CN
Inventors: 马云; 李荣荣; 李芬; 杨婷; 王新庄; 林峰; 石奎林; 陈宁博
Original assignee: Xinyang Normal University
Current assignee: Xinyang Normal University
Priority date: 2011-05-25
Filing date: 2011-05-25
Publication date: 2013-07-03
Anticipated expiration: 2031-05-25
Also published as: CN102242199A

Abstract

本发明公开了一种基于LXRa基因多态性进行牛育种的方法，筛选具有特定LXRa基因的牛作为父本和/或母本进行育种，其特征在于所述的LXRa基因的1514位点序列TT。通过本发明的方法，能够培育出在体高、体斜长和腰角宽等指标上都更加优良的牛，促进我国的肉牛养殖行业的快速发展。

Description

一种检测牛LXRa基因多态性的方法

技术领域

本发明涉及牛育种方法，具体涉及通过牛LXRa基因多态性检测来进行牛育种的方法。

背景技术

牛肉肉质鲜美、营养丰富、蛋白质含量要比一般肉类高，其不仅含有人类所必需的一切氨基酸，还具有低胆固醇、低脂肪的优点，是人类肉类食品中的佳品。从上世纪60年代开始，国际市场对牛肉的需求持续增长，世界的肉牛业在快速发展，而我国也成为继美国、巴西之后的世界第三大牛肉生产国。随着人民生活水平的不断提高，肉食结构的改善，牛肉的消费量呈现持续增长的局面，目前我国每年仍需要进口大量的高档牛肉。优质牛肉产品成为世界人民消费的发展趋势，但牛肉质量正成为制约我国肉牛业发展的一个瓶颈。

培育优质的肉牛品种一要注重生长速度、肌肉丰度和育肥速度；二要重视肉质性状和生长性状。在西方国家，肌内脂肪、嫩度、背膘厚等指标是作为育种的重要指标；在东方国家，日本和韩国特别重视从本国的役用牛品种培育出适合自己本国人民口味的优质肉牛品种。意大利皮埃蒙特牛、日本和牛及韩国韩牛都是从本土品种选育而成的颇具特色的优质肉牛品种，其品味独特、肉质优良、产肉率高，价格也比其他牛肉高。

肉牛品种是肉牛产业中的关键，要生产高品质的牛肉就需要有优良的肉牛品种。我国的黄牛品种资源丰富、肉质良好、适应性强，有清香之特色，是世界牛品种资源的宝库。但我国黄牛在历史上以役用为主，要作为规模化产肉品种还是有一些差距的。我国本地黄牛多具有产肉少、育肥速度慢、后躯不发达的缺点，加之品种内个体间肉用性能差异较大(陈幼春，2001)，没有系统化的选育，高档肉块相对较少，因而肉牛生产的规模和效益与国外专门化肉牛品种相比较差。但在一些群体或者部分个体上，我国本地黄牛具有很好的肉用性能(陈幼春，1990；邱怀，1986)，若经过高强度的品种内选育，很有可能在较短时间内培育出我国特有的优质肉牛品种。

在育种进程中，韩牛和皮埃蒙特牛为了保持自身品种牛肉肉质的特性没有引入外源血统，而是通过纯繁育种选育的，这为我国本地黄牛选育提供了丰富的经验(许尚忠，2005)。我国育种工作者从1981年开始通过引种和杂交等方法对本地黄牛品种进行改良，经过20年的努力成功选育了中国西门塔尔牛品种，这是一个肉乳兼用的新品种。2007年，我国又成功培育了“夏南牛”，这是我们国家第一个肉牛品种，它是以法国夏洛来牛为父本，我国本地黄牛南阳牛为母本，采用了正反回交、导入杂交和横交固定的育种技术培育出来的，填补了我们国家肉牛品种的空白。但引进外来品种和我国本地品种杂交并不能从根本上加快我国肉牛业的发展，新品种也不一定能很快适应当地的自然条件及人民的口味的需要，同时也不能最大效率的利用我国优良的地方品种资源。据报道，我国本地黄牛品种，如秦川牛和晋南牛分别有5-10％和20-26％的个体不亚于国外优质肉牛品种的性能特点(张英汉，2001)。因此，我们要充分利用本地黄牛品种的优质资源，应用现代分子生物技术并结合传统育种方法，培育具有我国特色的优良品质肉牛。

鲁西牛

鲁西牛(LuXi Cattle，LX)主要分布于山东省菏泽市，作为五大地方良种黄牛之一，其生长速度较快、肉用性能好、役用能力强，肉质细嫩、柔软多汁、大理石花纹明显，耐粗饲，体躯高大结实、性情温和，是选育中国肉牛的基础(石璞等2006)。缺点是需要耗费大量的粗、精饲料，现牛存栏数少，杂交利用过度，对纯种保护没有重视(王淑辉等2007)。

郏县红牛

郏县红牛(JiaXian Catltle，JX)主产于我国河南省平顶山市郏县及周边地区，是我国八大优良地方黄牛品种之一。其体格较大、结构匀称、体质结实、肌肉发达，被毛红色、毛短且富有光泽，遗传稳定、抗逆性强且耐粗饲，对地理环境的适应性及分布的广泛性是其他品种不可比拟的(张花菊等2005，2006)。郏县红牛肉用性能较好，具有明显的大理石花纹，肉质细嫩、肉味香醇、色泽鲜红，具有很好的生产潜力，可以向肉役兼用型、肉用型牛品种发展，缺点是后躯不发达、生长缓慢(马桂变等2009)。

秦川牛

秦川牛(QinChuan Cattle，QC)主要分布于陕西关中一带，因产于八百里秦川而得名，在地方黄牛品种中体型最高大。其皮质优良、肉质鲜美、适应性强、遗传稳定、役肉兼用，被誉为“国之瑰宝”(蒋洪茂等1993)，是中国五大优良黄牛品种之一，在国际市场上占有重要的地位，国内市场上也高于其它牛品种价格。缺点是产肉效率低、饲料利用率低，正在向肉牛品种的方向选育(陈宏等2002；张岩2004)。

南阳牛

南阳牛(NangYang Cattle，NY)主要分布于河南省南阳市，是我国五大优良黄牛品种之一，役肉兼用型的黄牛品种。其体型高大、结构紧凑、皮薄毛细、肌肉发达、耐粗饲，产肉能力强、大理石纹明显、肉质细嫩，毛色以黄色为主(王冠立2000；张玉才等 2010)。缺点是生长发育缓慢、不耐寒、产肉率一般、饲料利用率低(王建钦2006)。

DNA分子标记是指能够反映生物种群间或个体间基因组上某段DNA片段差异性的技术，常用电泳谱带的形式直接反映DNA水平上的遗传多态性，这项研究开始于19世纪80年代。随着DNA分子标记研究的深入，它在动物遗传及动物育种上也发挥了重要作用。

分子育种即分子标记辅助选择育种(MAS)，是应用分子数量遗传学的理论及技术来改良畜禽品种，是传统育种理论和方法的发展，其包括转基因动物育种和基因组育种。前者采用基因转移技术，外源DNA被导入另种动物基因组上，培育出新品系；其是在DNA水平上对目标性状的基因进行选择，选种准确率得到很大提高，且选育时间由传统育种的8～10代缩短到2～3代，克服了传统动物育种方法的缺陷，加快了品种改良和新品种培育的进展(陈宏等2008；陈丹霞等2009)。后者是以基因组和比较基因组研究为基础，利用DNA分子标记技术对动物数量性状基因座位进行筛选，或者通过标记辅助淘汰清除不利基因而达到改良品系性状的目的。

DNA分子标记可以用来构建家畜的基因图谱、预测家畜杂种优势、鉴定品种或个体、分析亲缘关系或遗传分化和保护遗传资源。在肉牛育种进程中，育种工作者希望通过选择与生长或肉质性状密切相关的DNA标记，达到提高育种准确性和早期选种的目的，以期在动物品种选育中获得较快的进展。随着基因组计划的逐步实施以及深入发展，分子标记育种已经在动物遗传育种过程中发挥着愈来愈重要的作用，也正不断呈现出广阔的应用前景，并带来巨大的效用和经济价值。

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)是基因组DNA序列中某一个特定核苷酸发生改变而引起的多态性，它包括单个碱基的插入或者缺失、碱基转换或者颠换等，是生物基因组中最广泛存在的一类变异(刘万清等1998；Halushka M K等1999)。1996年，这个概念由美国人Lander提出，被称为“第三代DNA遗传标记”。前两代以序列的长度差异作为遗传标记，SNPs则是以由单个碱基改变而造成的单链构象的差异为标记。SNPs分布广泛，每一千个核苷酸中就可能出现一个碱基突变(Bond C等1998)。

SNPs的特点是(1)高多态性。虽然每个SNP就只有2种变异体，其变异程度也不如微卫星或者小卫星DNA强，但是在整体上SNPs数量巨大，占基因组所有已知多态性的90％以上(Lewis R 2002)。(2)高遗传稳定性。SNPs的遗传稳定性高，在漫长历史上先形成的SNPs在群体中会稳定遗传，常有很高的频率，而后形成的则所占的频率较低(BrookesA J1999)。同时，SNPs在各地各群体中所占比例也并非相同，但仍然有大约85％是共通的(Cargill M 1999)。(3)检测方法多。SNP是由单个核苷酸突变引起的，凡是可以检测点突变的方法都可以用于鉴定SNPs位点。检测分析SNPs的技术很多，常用且有代表性的有限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism， RFLP)、单链构象多态性分析(single strand conformaion polymorphism，SSCP)、寡核苷酸连接分析(oligo-nucleotide ligation assay，OLA)、变性梯度凝胶电泳分析(denaturinggradient gel electrophoresis，DGGE)等(方唯意等2003)。本实验中采用的是RFLP、SSCP和DNA直接测序法。(4)功用广泛。DNA分子标记的的研究一直很活跃，其功用也十分广泛。研究者们常利用DNA分子标记技术对可以用家畜基因图谱进行构建，鉴定分析品种优势和起源进化等，对保护生物多样性和遗传资源发挥了重要作用。

肝x受体(liver X receptors，LXRs)家族有两个亚型，LXRα(NR1H3)及LXRβ(NR1H2)，是1994年在人和鼠上分离得到的(Apfel et al.1994；Shinar et al.1994；Song etal.1994)。LXRβ在各组织中都有表达，LXRα则仅仅在脂类代谢旺盛的组织表达，如肝脏、肾脏、脾脏和肠(Qin et al.2009)。序列分析表明LXRα和LXRβ在配体结合区及DNA结合区具有77％的高同源性。

LXRα结构中包含核心的DNA结合区(DBD)和配体结合区(LBD)，与维甲酸X受体(RXR)结合形成异源二聚体LXR/RXR，再与配体结合后引起异源二聚体与靶基因上特异的DNA元件(LXRE)结合，从而调节靶基因在转录水平上的表达。此途径在维持机体内胆固醇和脂肪的代谢平衡中具有非常重要的作用(Wu and Zhao 2009；Kim etal.2008)。

LXRα调控Angptl3基因，可激活甾醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory elementbinding protein-1C，SREBP1C)的表达，从而在脂肪酸代谢中也发挥重要作用，导致肝脏内脂肪的积聚和血浆中甘油三酯水平的升高，甚至引起肝脂肪变性(黄晓宇等2006；ChaJY et al.2007；Zhou J et al.2008；Yan qin et al.2009)。韩春春发现鹅LXRαmRNA基因在填饲条件下表达丰度增加(韩春春等2009)。于浩则发现猪LXRα基因的表达在3-12月龄间随着月龄的增大表达量增加(于浩等2009)。LXRα介导的信号转导途径对胆固醇合成、外源胆固醇的吸收及逆转运有重要调节作用(Millatt LJ et al.2003)。当胆固醇在血管壁细胞内过多时，通过激活细胞膜上ATP结合盒转运子A1(ABCA1)将细胞内多余的胆固醇转移到血浆HDL分子上运回肝脏代谢，这一过程称为胆固醇的逆向转运(reverse cholesterol transport，RCT)(Sabine Rode et al.2008；朱静和王素莉2009)。LXRα也是糖代谢的重要调控者(Stuinig et al.2002)。LXRα能被胰岛素诱导表达，抑制糖异生关键酶(曾建涛等2008)，故LXRα可作为糖尿病治疗中重要的药物作用靶点。LXRα还参与调节特异与非特异的免疫反应。LXRα基因敲除小鼠更容易感染李斯特(Listeria)细菌，而LXRβ基因敲除小鼠没有这种现象，这表明LXRα发挥了重要的保护作用(Joseph SB et al.2004)。

发明内容

本发明的目的在于，通过分析牛LXRα基因的单核苷酸多态性，并将其与生产性状进行关联分析，以筛选出SNP位点以辅之于育种，加快牛育种进程。

为了实现上目的，本发明采取如下技术方案：

一种基于LXRa基因多态性进行牛育种的方法，筛选具有特定LXRa基因的牛作为父本和/或母本进行育种，其特征在于所述的LXRa基因的1514位点序列TT。

在本发明的一个优选实施方式中，进一步的，所述的LXRa基因的1028位点序列为CC。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的牛为鲁西黄牛或郏县红牛，优选为鲁西黄牛。

本发明还涉及具有特定LXRa基因的牛筛选方法，包括提取待筛选牛的DNA，其特征在于采用GACCCCTTGTGTCTCTCTTTC和ATCGTGTCCGACTCTCTGC作为PCR引物对牛DNA进行扩增；或者采用GACCCCTTGTGTCTCTCTTTC和ATAGCGGACTGCGGCGT作为PCR引物对牛DNA进行扩增；并进一步包括对扩增产物进行凝胶电泳检测。

在本发明的一个优选实施方式中，还包括GAGTTTTCAGGTCGGAGAGA和TAGGCACGAGAACCAGCAC作为PCR引物对牛DNA进行扩增；并进一步包括对扩增引物进行凝胶电泳检测。

通过本发明的方法，能够培育出在体高、体斜长和腰角宽等指标上都更加优良的牛，促进我国的肉牛养殖行业的快速发展。

附图说明

图1牛LXRa基因P1(561bp)对引物扩增结果；

图2牛LXRa基因P2(455bp)和P3(139bp)对引物扩增结果

图3牛LXRa基因P1对引物测序图谱

图4牛LXRa基因P2对引物测序图谱；

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

1引物设计与合成

以GenBank公布的牛LXRa基因(登录号：NC_007313)和ANGPTL4基因(登录号：NC_007305)序列为参照，使用Primer Premier 5.0软件设计引物，送南京金斯瑞公司合成，具体信息见表1。

表1牛LXRa基因和ANGPTL4基因引物相关信息

Table 1 Primers information of bovine LXRαand ANGPTL4 gene

2引物稀释

将引物管8000r/min瞬时离心1min，根据引物单提示加入适量的灭菌双蒸水配制成浓度为100μM的贮存液，用时将其稀释到10μM。贮存液保存于-20℃冰箱备用，稀释液放置于4℃冰箱。

3优化PCR反应条件

PCR反应使用的是天根公司的双组分试剂，25μL扩增体系为所含的各成分为灭菌双蒸水10.5μL、Mix组分12.5μL、上下游引物各0.5μL、DNA样品1μL和Taq DNA聚合酶0.2μL。PCR反应程序为94℃预变性5min，94℃变性30s、T℃退火40s、72℃延伸40s、35个循环，72℃后延伸5min。

根据预测的引物退火温度，在其上下10℃范围进行梯度PCR，筛选每对引物的最佳退火温度，并进行PCR反应条件的优化。

4PCR扩增产物检测

配制2％浓度的琼脂糖凝胶，取3μL PCR产物加入点样孔，在120V条件下电泳30min，EB染色后在凝胶成像系统下观察结果并拍照，PCR产物扩增情况可与Marker(上样量为2μL)条带进行对照。

5PCR-SSCP

根据优化好的PCR反应条件进行PCR扩增，并抽取部分PCR产物样品进行琼脂糖凝胶电泳检测，待确定PCR产物明亮且无非特异性扩增后可进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。

本实验采用30％丙烯酞胺(29∶1)配方配制10％或12％聚丙烯酰胺凝胶。

(1)将每套玻璃板和梳子清洗干净后晾干，玻璃板与胶条组装好后用夹子固定。

(2)按配方配制好所需要的凝胶，混匀后沿玻璃板上边缘缓缓倒入(尽量不要产生气泡，否则电泳时DNA单链所遇电泳阻力不一致而导致电泳条带变歪)。倒胶后，立刻插上梳子，保证梳子齿和液面间没有留下气泡。灌好凝胶的玻璃板可平置于桌面上，静置40min，待其充分聚合。

(3)小心从玻璃板上拔掉梳子，用蒸馏水冲洗点样孔，将玻璃板安装到电泳槽上，并在电泳槽内加入1×TBE，电泳液要没过点样孔。电泳槽接通电源，250V电压下预电泳5-10min。

(4)PCR产物变性：96孔变性板上每一孔中加入6μL变性缓冲液和4μL PCR产物，用宽胶带对其密封，振荡器上轻轻震荡混匀，将变性板置于PCR仪上开启程序，98℃条件下变性10min后立即置于事先准备好的冰中，静置5min。

(5)取出变性产物，将其全部上样，加入到点样孔中。打开电源，250V电压条件下电泳15-30min后再以130V电压条件下电泳4h。根据PCR产物大小，聚丙烯酰胺凝胶的浓度、电泳的电压和时间是需要摸索确定的。

(6)电泳结束后关闭电源，从电泳槽上取下玻璃板，轻轻的从玻璃板上分离凝胶置于蒸馏水中，并做好标记。蒸馏水清洗2次。

(7)预先配制0.1％的AgNO₃溶液，倒入盛有凝胶的平盘中，避光条件下放置于水平摇床上100r/min震荡30min。0.1％AgNO₃溶液回收，蒸馏水清洗凝胶2-3次，每次30s左右。

(8)倒入少量现用现配的2％NaOH溶液到盛有凝胶的平盘中漂洗1次，再将剩余的2％NaOH溶液倒入进行显色反应，100r/min水平摇床上震荡直至条带清晰可见(约20-30min)。

(9)条带清晰后倒掉2％NaOH显色液，加入适量蒸馏水洗2次。轻轻将凝胶置于凝胶成像系统中照相并保存于密封带中。

6PCR-RFLP

根据扩增混合DNA样品的PCR产物测序结果，利用DNAStar或者DNAMan软件将其与候选基因参照序列进行比对，筛查碱基突变位点，利用BioXM(Version 2.6)软件分析并选择合适的酶切位点。当不存在合适的常用限制性内切酶时，可引入错配碱基，构成合适的常用限制性内切酶的酶切位点，重新设计引物并优化PCR反应条件。

根据已经优化的PCR反应条件进行PCR反应，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，确定目的条带明亮且没有非特性扩增时方可进行酶切反应。

MspI限制性酶酶切反应体系如表2：

表2MspI限制性酶酶切体系

Table 2 Reaction system of MspI restricted enzyme

XhoI限制性酶酶切体系如表3：

表3XhoI限制性酶酶切体系

Table 2 Reaction system of XhoI restricted enzyme

MspI和XhoI限制性酶的最适反应温度都是37℃，按照表2和3配制酶切反应体系，并将其置于37℃恒温箱过夜，约14h。消化完成后，将酶切产物从恒温箱取出，并8000r/min瞬时离心约15s待用。本实验酶切产物所含的DNA片段长度差异较小，故采用高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测各样品的酶切效果。配制12％的聚丙烯酰胺(29∶1)凝胶，吸取6μL酶切样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，上样前酶切产物无需98℃高温变性，可直接加入到点样孔中，200V条件下电泳2h。具体过程参考PCR-SSCP步骤。

牛LXRa基因的多态性检测

牛LXRa基因CDS区全长1344bp，共9个外显子，实验共设计8对引物涵盖了整个编码区，但只在外显子2和4、内含子1和5位点检测到4个SNPs位点，故其余对引物PCR扩增及测序结果都没有列出。

1牛LXRa基因的PCR扩增结果

牛LXRa基因经P1-P6对引物PCR扩增和琼脂糖电泳检测后，结果见说明书附图1，2，由此得知目的条带清晰明亮，无非特异性扩增。

2牛LXRa基因SNPs位点测序结果

以构建好的DNA混合样品和随机选取的2个个体为模板，按照优化的最佳PCR条件进行PCR扩增。PCR产物经2％琼脂糖电泳检测，确定目的条带清晰明亮且无非特异扩增后送至南京金斯瑞生物公司进行双向测序。测序结果利用DNAStar软件，和牛LXRa基因(登录号：NC_007313)进行序列比对，筛选SNPs位点。

牛LXRa基因P1对引物的测序结果得出牛LXRa基因1028bp处发生T＞C的突变，位于内含子1，此处突变不影响编码氨基酸的改变。野生型为TT基因型、突变型为CC基因型、杂合型为TC。

牛LXRa基因P2对引物的测序结果得出牛LXRa基因1514bp处发生T＞C的突变，此处碱基突变密码子由GAT＞GAC，为天门冬氨酸的同义突变。野生型为TT基因型、突变型为CC基因型、杂合型为TC。

3牛LXRa基因遗传结构分析及其多态性与生长性状的关联分析

表4牛LXRα-I1位点PCR-SSCP的遗传结构分析

Table 4 Genetic diversity of bovine LXRα-I1 locus in six populations

本研究以373头牛为研究对象，利用设计的P1对引物对牛LXRa-I1位点进行遗传检测。由表4所示，6个牛品种都发现了3种基因型，分别是TT、TC和CC。等位基因T在黄牛品种秦川牛(QC)群体中为优势基因，所占的比例为0.7715；等位基因C在高原牦牛(GY)群体中为优势基因，所占比例为0.9490，占有绝对优势；鲁西牛(LX)、郏县红牛(JX)、渤海黑牛(BH)和南阳牛(NY)4个黄牛品种群体中等位基因T和C的比例大致相当。该基因座的PIC值在5个黄牛群体中均为0.25＜PIC＜0.5，属于中度多态；在高原牦牛(GY)群体中PIC＜0.25，属于低度多态；说明该基因座在黄牛群体中的多态性高、遗传变异较大、选择潜力也相对较大。卡方检测显示该位点在5个黄牛群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05)，而在高原牦牛群体中处于不平衡状态(P＜0.05)。

表5牛LXRα-I1位点多态性与生长性状的关联分析

Table 5 Association analysis between different genotypes and growth traits at LXRα-I1 locus in LXand JX cattle(mean±SD)

注：同一性状中标有不同小写字母a、b的平均值间差异显著(P＜0.05)；标有不同大写字母A、B的差异显著(P＜0.01)。

Note：Different small letter within the same column differ significantly(P＜0.05)；different capital letterwithin the same column differ highly significantly(P＜0.01).

如表5所示，对鲁西牛(LX)群体和郏县红牛(JX)群体不同基因型与其生长性状之间进行了最小二乘均值差异显著性检验。结果表明，鲁西牛群体在体高指标上，CC基因型显著高于TC基因型(P＜0.05)；在体斜长指标上，CC基因型极显著高于TC基因型(P＜0.01)，在其他生长性状指标上，各基因间差异不显著(P＞0.05)。郏县红牛群体不同基因型对生长性状的影响不显著(P＞0.05)。对大多数生长性状指标，鲁西牛群体的平均值略高或者与郏县红牛群体一致。

4牛LXRa-E2位点遗传结构分析及其多态性与生长性状的关联分析

表6牛LXRα-E2位点PCR-SSCP的遗传结构分析

Table 6 Genetic diversity of bovine LXRα-E2 locus in six populations

利用设计的P3对引物对牛LXRα-E2位点进行遗传检测，结果见表6。5个黄牛品种(LX、JX、BH、QC和NY)均发现3种基因型，分别是TT、TC和CC，整体而言等位基因T的频率略高于C；高原牦牛(GY)只发现2种基因型，为TT和CC，等位基因C为优势基因且占有绝对优势。同时，该位点的PIC值在5个黄牛群体中均处于中度多态(0.25＜PIC＜0.5)，高原牦牛则处于低度多态(PIC＜0.25)，说明该基因座在黄牛群体上的遗传变异较大、多态性高、选择潜力大。卡方检测显示该位点在秦川牛(QC)群体处于Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05)。

表7牛LXRα-E2位点多态性与生长性状的关联分析

Table 7 Association analysis between different genotypes and growth traits at LXRα-E2 locus in LX andJX cattle(mean±SD)

如表7所示，鲁西牛(LX)群体体高指标上TT基因型显著高于TC基因型(P＜0.05)。郏县红牛(JX)在体高、体斜长和腰角宽指标上，TT基因型极显著高于TC基因型(P＜0.01)；体重、胸围和腹围指标上，TT基因型显著高于TC基因型(P＜0.05)。在各项生长性状指标上，鲁西牛群体的平均值都略高于郏县红牛群体。

应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims

1.一种检测牛LXRa基因多态性的方法，其特征在于，包括提取待筛选牛的DNA，采用GACCCCTTGTGTCTCTCTTTC和ATAGCGGACTGCGGCGT作为PCR引物对牛DNA进行扩增；还包括采用GAGTTTTCAGGTCGGAGAGA和TAGGCACGAGAACCAGCAC作为PCR引物对牛DNA进行扩增；并进一步包括对扩增产物进行凝胶电泳检测；所述的LXRa基因的1514位点序列为TT，LXRa基因的1028位点序列为CC。

2.如权利要求1所述的检测牛LXRa基因多态性的方法，其特征在于，所述的牛为鲁西黄牛或郏县红牛。