CN102241733A - 鹿骨胶原多肽螯合钙及肠溶胶囊和制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种鹿骨胶原蛋白多肽螯合钙肠溶胶囊,同时还公开了其制备方法,是一种新型的多肽螯合钙制剂,从增加钙的吸收及促进胶原蛋白代谢两方面预防及治疗由于年龄增长、绝经等导致的骨质疏松。通过多肽螯合钙鹿骨多胶原多肽的保护作用,增强这种生物活性肽的生物利用度,发挥其增强免疫力等多种生理功能;将鹿骨胶原多肽螯合钙制备成肠溶胶囊,保护其中的多肽螯合钙免受胃酸环境的破坏,增加口服生物利用度。
Description
技术领域
本发明涉及生物制品的提取加工技术领域,特别是提供了一种鹿骨胶原蛋白多肽螯合钙及其肠溶胶囊制剂,同时还公开了它们的制备方法。
背景技术
鹿骨是鹿科动物梅花鹿或马鹿的骨骼。鹿骨作为药用由来已久,主要功能为“补虚赢,强筋骨”。现代中医研究也表明,鹿骨是补钙护钙之佳品,能够大幅度提高骨骼密度,使骨骼更强韧,对预防和治疗骨质疏松有非常好的效果。
目前,鹿骨在骨质疏松方面活性的专利主要有三类:一类是鹿骨胶原蛋白类,包括胶原蛋白和胶原多肽等,能够促进骨骼中的胶原蛋白的代谢,一定程度上改善骨质疏松症状;通常人体的骨质处于一个动态的平衡过程,随着年龄的增长,骨的生成和胶原蛋白、钙的流失可能处在不平衡状态,易引发骨质疏松症等骨质疾病。资料表明仅有钙的补充摄入并不能有效地预防骨质疏松的发生,还需要有骨胶原的补充。第二类是鹿骨钙类,主要是鹿骨中提取出的天然钙类,由于其钙为天然钙,易被人体吸收,对提高骨钙含量具有一定作用;第三类是胶原蛋白与葡萄糖酸钙等,其特点是综合了上述两类产品的优点,从补充钙质及胶原蛋白两方面改善骨质疏松症状,提高骨密度,增加骨钙含量。
但是由于胶原蛋白(或多肽)及钙源在胃肠道中的吸收较少,使其生物利用度较低。即使将两种物质简单的混合也不能改变这一限制,本发明鹿骨胶原多肽螯合钙的特点是,多肽鳌合钙制品在补钙的同时,促进机体胶原蛋白的代谢。更值得注意的是,由于螯合的存在形式,同时增加了钙和胶原多肽在胃肠道的吸收。而肠溶胶囊的包裹,避免了在胃内的酸性环境中多肽的降解,使其选择性的在钙的吸收部位——肠道中释放,增加其口服生物利用度。对预防及治疗由于年龄增长、绝经等导致的骨质疏松具有更好的效果。
本发明的另一个目的在于,通过多肽螯合钙鹿骨多胶原多肽的保护作用,增强这种生物活性肽的生物利用度,发挥其增强免疫力等多种生理功能。
发明内容
本发明公开一种鹿骨胶原蛋白多肽螯合钙,解决了现有鹿骨胶原蛋白多肽等补钙产品口服生物利用度小的问题,具有吸收好,具有增强骨质、提高机体免疫能力等多种生理功能。
本发明公开一种鹿骨胶原蛋白多肽螯合钙肠溶胶囊,避免由于胃内的酸性环境对鹿骨胶原多肽螯合钙的破坏,影响其活性的发挥。
本发明还提供了鹿骨胶原多肽螯合钙及肠溶胶囊的制备方法,适用于工业化生产。
本发明的鹿骨胶原多肽螯合钙,是一种在溶液中稳定性大于可溶性多肽钙盐,小于有机钙沉淀的一种非离子鹿骨胶原多肽和钙形成的螯合物。
本发明所述鹿骨胶原多肽螯合钙的制备方法:采用酶水解及超声辅助法提取鹿骨中的胶原蛋白,水解酶的用量为500-600u/g;将得到的胶原蛋白水解成胶原多肽,水解蛋白酶的用量为3000-3500u/g,并和鹿骨钙或无机钙源进行化学螯合,经过冷冻干燥制得。
在上述鹿骨胶原多肽螯合钙的制备方法,所使用的蛋白酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶或Pellvit C碱性蛋白酶;所使用的钙源包括氯化钙、硫酸钙等无机钙源及制备得到的鹿骨钙。
本发明的鹿骨胶原多肽螯合钙肠溶胶囊,其特征是由以下原料按重量份数比制成的:
鹿骨胶原多肽螯合钙30-50、维生素D 5-10、稀释剂70-100、保护剂0.5-5、润滑剂0.5-2。
所述鹿骨胶原多肽螯合钙肠溶胶囊的制备方法,其特征在于是按比例称取上述原料,将得到鹿骨胶原多肽螯合钙冷冻干燥成粉状,加入维生素D、稀释剂、润滑剂及保护剂,混合均匀后,装入肠溶型胶囊壳中。
以下试验表明:本发明鹿骨胶原多肽螯合钙的治疗骨质疏松的活性可以通过以维甲酸构建的大鼠骨质疏松的模型中反应。
分组设置:对照组;模型组;本发明低浓度组、本发明中浓度组、本发明高浓度组。模型构建以后,分别灌胃40天,分别测定大鼠的骨矿量及骨密度,见表1和表2.
表1 不同的设置组对大鼠骨矿量的影响
分组 | 椎骨量 | 股骨量 | 骸骨量 | 全身骨量 |
对照组 | 0.535士 0.093 | 0.244士 0.036 | 0.417士 0.073 | 10.74士1.244 |
模型组 | 0.354士0.110 | 0.205士0.021 | 0.329士0.079 | 5.256士1.492 |
本发明低浓度 | 0.456士0.114* | 0.228土 0.043 | 0.396士0.054* | 10.559士1.652 |
本发明中浓度 | 0.563士0.065* | 0.237士 0.094 | 0.335士 0097 | 9.51士1.750* |
本发明高浓度 | 0.489士0.109* | 0.246士 0.014 | 0.368土 0.066 | 9.726士0.570 |
[0016] 表2不同的设置组对大鼠骨密度的影响
分组 | 腰椎骨 | 股骨 | 髓骨 | 全身骨密度 |
对照组 | 0.2433士0.126 | 0.2178土0.0119 | 0.2486士0.0320 | 0.2375士0.161 |
模型组 | 0.2224土0.0144## | 0.1938土0.0088## | 0.2236土0.0199# | 0.2183土0.0087## |
本发明低浓度 | 0.2444土0.0180** | 0.2035土0.0170 | 0.2310土0.0121 | 0.0343土0.0079** |
本发明中浓度 | 0.2430土0.0206** | 0.2063土0.0009** | 0.2424土0.0219* | 0.2395土0.0193** |
本发明高浓度 | 0.2550土0.0111* | 0.2274土0.0094** | 0.2584土0.0114* | 0.2532土0.0151** |
注:P<0.05* ;P<0.01**;P<0.05#;P<0.01##。
总结:从表中可以看出,本发明在高、中、低浓度时均对大鼠的骨矿量及骨密度有显著的影响,对维甲酸构建的骨质疏松模型大鼠有一定的治疗作用。
多肽鳌合钙制品在补钙的同时,对钙在肠道的吸收和利用有协同作用。通常人体的骨质处于一个动态的平衡过程,随着年龄的增长,骨的生成和胶原蛋白、钙的流失可能处在不平衡状态,易引发骨质疏松症等骨质疾病。资料表明仅有钙的补充摄入并不能有效地预防骨质疏松的发生,还需要有骨胶原的补充。
本发明的积极效果在于:提供一种新型的多肽螯合钙制剂,从增加钙的吸收及促进胶原蛋白代谢两方面预防及治疗由于年龄增长、绝经等导致的骨质疏松。通过多肽螯合钙鹿骨多胶原多肽的保护作用,增强这种生物活性肽的生物利用度,发挥其增强免疫力等多种生理功能;将鹿骨胶原多肽螯合钙制备成肠溶胶囊,保护其中的多肽螯合钙免受胃酸环境的破坏,增加口服生物利用度。
具体实施方式
以下给出几个具体实施例,但本发明不受具体实施例限制。
实施例1
首先称取粉碎的鹿骨10kg经过脱脂、脱钙及去除杂蛋白处理后,加入500u/g的胃蛋白酶;调节pH至1.7,37℃下孵育8h,加入70000mL的水,超声提取2h,浓缩至3500mL,喷雾干燥;加入3000u/g的木瓜蛋白酶,调节pH至5.7,55℃,水解2h,加入10000mL水,超声提取1.5h,浓缩至500mL,喷雾干燥。加入8000mL的去离子水,加入160g氢氧化钙,混合均匀,调节pH至7.0,在55℃下反应3h,加入4倍体积的95%乙醇,5000rpm离心10min,收集上清液,旋转蒸发浓缩至800ml,冷冻干燥即得;茚三酮-硫酸钠法鉴定为鹿骨胶原多肽螯合钙。
实施例2
称取粉碎的鹿骨10kg经过脱脂、脱钙及去除杂蛋白处理后,加入600u/g的Pellvit C碱性蛋白酶,调节pH至9,40℃下孵育8h,加入100000mL的水,超声提取2h,浓缩至3500mL,喷雾干燥。加入3000u/g的胃蛋白酶,调节pH至1.7,37℃,水解2h,加入10000mL水,超声提取1.5h,浓缩至500mL,喷雾干燥。加入8000mL的去离子水,加入160g鹿骨钙,混合均匀,调节pH至7.0,在55℃下反应1.5h,加入4倍体积的95%乙醇,5000rpm离心10min,收集上清液,旋转蒸发浓缩至800ml,冷冻干燥即得;茚三酮-硫酸钠法鉴定为鹿骨胶原多肽螯合钙。
实施例3
称取粉碎的鹿骨10kg经过脱脂、脱钙及去除杂蛋白处理后,加入600u/g的胰蛋白酶,调节pH至8,37℃下孵育8h,加入80000mL的水,超声提取2h,浓缩至3500mL,喷雾干燥。加入3500u/gl的Pellvit C碱性蛋白酶,调节pH至9,40℃下孵育,水解2h,加入10000mL水,超声提取1.5h,浓缩至500mL,喷雾干燥。加入8000mL的去离子水,加入200g氯化钙,混合均匀,调节pH至7.0,在50℃下反应2h,加入4倍体积的95%乙醇,5000rpm离心10min,收集上清液,旋转蒸发浓缩至800ml,冷冻干燥即得;茚三酮-硫酸钠法鉴定为鹿骨胶原多肽螯合钙。
实施例4
称取粉碎的鹿骨10kg经过脱脂、脱钙及去除杂蛋白处理后,,加入500u/g的木瓜蛋白酶,调节pH至5.7,55℃下孵育8h,加入90000mL的水,超声提取2h,浓缩至3500mL,喷雾干燥。加入3500u/g的胰蛋白酶,调节pH至8,37℃下孵育,水解2h,加入10000mL水,超声提取1.5h,浓缩至500mL,喷雾干燥。加入8000mL的去离子水,加入200g硫酸钙,混合均匀,调节pH至7.0,在55℃下反应3h,加入4倍体积的95%乙醇,5000rpm离心10min,收集上清液,旋转蒸发浓缩至800ml,冷冻干燥即得;茚三酮-硫酸钠法鉴定为鹿骨胶原多肽螯合钙。
实施例5
称取实施例1中制备的鹿骨胶原多肽螯合钙50g,加入维生素D5g,微晶纤维素90g,硬脂酸镁1份及卡波姆3 g,混合均匀,以每粒中1.2g的量装入空的肠溶胶囊中。
实施例6
称取制备的多鹿骨胶原多肽螯合钙30 g,加入维生素D10 g,淀粉70 g,微粉硅胶1份及卡波姆3 g,混合均匀,以每粒中1.2g的量装入空的肠溶胶囊中。
实施例7
称取制备的鹿骨胶原多肽螯合钙50 g,加入维生素D5 g,乳糖80 g,硬脂酸镁1 g及卡波姆5 g,混合均匀,以每粒中1.2g的量装入空的肠溶胶囊中。
实施例8
称取制备的鹿骨胶原多肽螯合钙30 g,加入维生素D5 g,环糊精100 g,微粉硅胶2 g及卡波姆3 g,混合均匀,以每粒中1.2g的量装入空的肠溶胶囊中。
本发明的鹿骨胶原多肽螯合钙通过茚三酮-硫酸钠法鉴定:
多肽与钙的螯合物是一种特殊物质,它不是多肽钙盐,在水中以离子形式存在,也不像无机沉淀那样不溶于水,即其稳定性大于可溶性无机盐,小于无机沉淀。硫酸钠化学鉴定法正是基于多肽螯合钙的这种性质建立的。其具体方法如下:(1)称取实施例中的鹿骨胶原多肽螯合钙5g,溶解在50mL的蒸馏水中,加入5-8滴茚三酮试剂,加热煮沸2-3min,观察溶液颜色变化。(2)另取鹿骨胶原多肽螯合钙5g,溶解在50mL的蒸馏水中,加入过量的硫化钠,混匀,静置0.5-4h,观察是否有沉淀产生。(3)过滤,滤液中加入5-8滴茚三酮试剂,加热煮沸2-3min,观察溶液颜色变化。
结果鉴定:在步骤(1)中观察溶液颜色变化时,溶液不发生颜色变化,即仍未黄色,证明该溶液不含有游离多肽或多肽盐;在步骤(2)中观察到有白色沉淀产生,说明溶液中含有钙成分;在步骤(3)中观察溶液颜色变化时,溶液由原来的黄色变为紫红色,说明溶液中含有游离多肽,这是由于形成了硫酸钙沉淀后破坏了多肽螯合钙,使多肽游离出来。由以上三个现象可以证明鹿骨胶原多肽与钙源的反应产物为螯合物,即鹿骨胶原多肽螯合钙。
Claims (6)
1. 一种鹿骨胶原多肽螯合钙,其特征在于是一种在溶液中稳定性大于可溶性多肽钙盐,小于有机钙沉淀的一种非离子鹿骨胶原多肽和钙形成的螯合物。
2. 根据权利要求1所述鹿骨胶原多肽螯合钙的制备方法:采用酶水解及超声辅助法提取鹿骨中的胶原蛋白,水解酶的用量为500-600u/g;将得到的胶原蛋白水解成胶原多肽,水解蛋白酶的用量为3000-3500u/g,并和鹿骨钙或无机钙源进行化学螯合,经过冷冻干燥制得。
3. 根据权利要求2中所述鹿骨胶原多肽螯合钙的制备方法,其特征在于:所使用的蛋白酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶或Pellvit C碱性蛋白酶。
4. 根据权利要求2中所述鹿骨胶原多肽螯合钙的制备方法,其特征在于:所使用的钙源包括氯化钙、硫酸钙等无机钙源及制备得到的鹿骨钙。
5. 一种鹿骨胶原多肽螯合钙肠溶胶囊,其特征是由以下原料按重量份数比制成的:鹿骨胶原多肽螯合钙30-50、维生素D 5-10、稀释剂70-100、保护剂0.5-5、润滑剂0.5-2。
6. 根据权利要求5所述鹿骨胶原多肽螯合钙肠溶胶囊的制备方法,其特征在于是按比例称取上述原料,将得到鹿骨胶原多肽螯合钙冷冻干燥成粉状,加入维生素D、稀释剂、润滑剂及保护剂,混合均匀后,装入肠溶型胶囊壳中。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20111116 |