CN102236005A

CN102236005A - 一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法

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Publication number: CN102236005A
Application number: CN2011100967393A
Authority: CN
Inventors: 林维宣; 孙兴权; 蒋维旗; 董伟峰
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2011-04-18
Filing date: 2011-04-18
Publication date: 2011-11-09
Anticipated expiration: 2031-04-18
Also published as: CN102236005B

Abstract

本发明涉及分析化学、食品安全领域。一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，样品经TCA-乙腈体系沉淀蛋白、甲醇-0.1%甲酸水溶液体系提取，OasisHLB固相萃取柱净化后，采用EclipseXDB-C₁₈分析柱，以乙腈—0.1﹪甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱，电喷雾、正离子扫描模式分离与检测四种多肽类抗生素。四种多肽类抗生素检出限分别为：粘杆菌素25μg/kg，杆菌肽A100μg/kg，多粘菌素B 250μg/kg，维吉尼霉素M₁20μg/kg。回收率粘杆菌素74.9～88.1％，杆菌肽A76.2～89.0％，多粘菌素B76.6～81.2%，维吉尼霉素77.3～86.9％。变异系数（CV%）分别为：粘杆菌素5.7～15.1％，杆菌肽A7.2～15.7％，多粘菌素B6.0～8.0%，维吉尼霉素9.5～18.6％。检测限、回收率和精密度等技术指标满足国内外检测的有关要求。

Description

一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法

技术领域

本发明涉及分析化学、食品安全领域，具体地说，是一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，尤其涉及杆菌肽、多粘菌素B、粘杆菌素、维吉尼霉素等四种兽药残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。

背景技术

多肽类抗生素（peptides）是由多粘杆菌或产气孢子杆菌的培养液中提取制得。常用的多肽类抗生素有杆菌肽（Bacitracin）、多粘菌素B（Polymyxin B）、粘杆菌素（Colistin）、维吉尼霉素(Virginiamycin)等。每种多肽类抗生素都是一种含有多种组分的化合物。多肽类抗生素可分别抗革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、绿脓杆菌、真菌、病毒、螺旋体、原虫的感染，对败血症、呼吸道感染、泌尿系统感染、牛乳腺炎等疾病，小剂量时抑菌，大剂量时杀菌，被广泛用于家禽、猪、牛等的饲料添加剂和兽药，用来促进动物的生长和治疗畜禽疾病。

随着多肽类抗生素应用的增加，人们逐渐发现其在动物体内的残留，可通过肉、蛋、奶等动物源食品传递给人类。多肽类抗生素的毒性较大，除对细菌细胞膜损伤外，对动物细胞膜也起作用，主要对肾、神经系统有一定毒性。因此，多肽类抗生素在动物源产品中的残留问题给人们身体健康带来了较大的隐患，

目前，多肽类兽药残留量的检测方法主要有微生物法、免疫分析法、高效液相色谱法、毛细管电泳法和液相色谱-质谱等方法。GB/T 20743-2006《猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的测定液相色谱-串联质谱法》公开了猪组织中杆菌肽残留量的检测方法；GB/T 22981-2008《牛奶和奶粉中杆菌肽残留量的测定液相色谱-串联质谱法》公开了牛奶和奶粉中杆菌肽残留量的检测方法；SN0295-93《出口禽肉中杆菌肽残留量检验方法杯碟法》公开了禽肉中杆菌肽残留量检测方法；SN0668-1997《出口肉及肉制品中粘菌素残留量检验方法杯碟法》公开了肉及肉制品中粘菌素残留量检测方法； GB/T 20765-2006《猪肝脏、肾脏、肌肉组织中维吉尼霉素M1残留量的测定液相色谱-串联质谱法》公开了猪组织中维吉尼霉素M1残留量的检测方法；GB/T 22991-2008《牛奶和奶粉中维吉尼霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法》公开了牛奶和奶粉中维吉尼霉素残留量的检测方法；SN/T1134-2002《进出口肉及肉制品中维吉尼霉素残留量检验方法杯碟法》公开了肉及肉制品中维吉尼霉素残留量检测方法。

上述多肽类兽药残留分析方法中，大多只限于单个抗生素残留量的检测，且前处理方法繁琐。本发明旨在利用LC-MS/MS检测技术，建立一种可同时检测动物源食品中杆菌肽A、粘杆菌素、多粘菌素B、维吉尼霉素M1等多种多肽类抗生素残留量检测和确证方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有不足问题，提供一种液相色谱/串联质谱法检测动物源食品中多种多肽类兽药残留量的方法，可方便、准确、高效地同时检测动物源食品中杆菌肽、多粘菌素B、粘杆菌素、维吉尼霉素等四种兽药残留量。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，包括以下步骤：

1、样品提取：

（1）称取已切碎的肌肉、肾脏或肝脏样品1.0～3.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠，再加入5～15mL三氯乙酸溶液和1～3mL乙腈，9 500 rpm均质 2 min后，4℃下8 500 rpm离心10 min。上清液经快速定量滤纸转移至另一离心管。残渣中加入提取液超声提取10 min，振荡提取10 min，4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸转移至同一离心管（合并两次提取上清液），待脱脂。

（2）乳样品：称取牛奶样品1～3.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠和0.5～1.5 mL盐酸溶液，涡旋1 min后再加入20～30 mL提取液，超声提取10 min，振荡提取10 min，然后4℃下8 500 rpm离心10 min。上清液经快速定量滤纸过滤于另一离心管，待脱脂。

2、提取液脱脂

向上步所得提取上清液离心管中加入正己烷5～15mL，涡旋2 min，4℃下6 000 rpm离心5 min。去掉上层（正己烷层）液，得下层液待固相萃取柱净化。

3、固相萃取柱净化

将上步经脱脂的样品提取液转移至已活化好的HLB 固相萃取柱（甲醇、水各6mL活化），上样后先用5 mL水洗涤，弃去流出液。再用5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10 mL刻度试管中，整个固相萃取净化过程控制流速不超过2 mL/min。洗脱液在40℃水浴上用氮气吹干，残留物用标样溶解液溶解定容到1.0 mL，混匀，过0.22 μm 微孔滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

4、液相色谱-质谱/质谱仪测定

按照液相色谱－质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，质谱分离采用在正离子模式下进行母离子全扫描，再对其子离子进行全扫描。通过被测样品的质谱和相关信息，得到其定性和定量结果。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。定量测定时采用标准曲线法。

作为优选，在步骤1（1）中所述三氯乙酸的使用浓度为1%。

作为优选，在步骤1（2）中所述盐酸溶液的使用浓度为6 mol/L。

作为优选，在步骤1中所述提取液为甲醇-0.1﹪甲酸水溶液体系（2：5，V/V）。

作为优选，在步骤3中所述HLB固相萃取柱为Oasis ，500 mg/6 mL。

作为优选，在步骤3中所述标样溶解液为甲醇-0.1%甲酸水溶液体系（1：4，V/V）。

作为优选，在步骤4中所述液相色谱分析条件为：

a) 色谱柱：反相C18色谱柱

b) 流动相A：乙腈；流动相B：0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱。

c) 柱温：30℃

d) 流速：0.5～1 mL/min

e) 进样量：10～20 μL

作为优选，所述反相C18柱为Eclipse XDB-C₁₈分析柱（150mm×4.6 mm, 5μm）。

作为优选，所述梯度洗脱程序为：

0～2分钟，流动相A10%，流动相B90%；

2～4分钟，流动相A10～60%，流动相B90～40%；

4～7分钟，流动相A60%，流动相B40%；

7.01～10分钟，流动相A10%，流动相B90%.

作为优选，在步骤4中所述质谱条件为：

a) 离子源：电喷雾离子源

b) 扫描方式：正离子扫描

c) 检测方式：多反应监测(MRM)

d) 电喷雾电压（IS）：5500.00 V

e) 雾化气（GS1）：55.00 Psi

f) 辅助气（GS2）：35.00 L/min

g) 气帘气（CUR）：12.00 Psi

h) 离子源温度（TEM）：650℃

i) 分别设定母离子、子离子、去簇电压（DP）、碰撞室入口电压（EP）、碰撞室出口电压（CXP）、碰撞气能量（CE）。

作为优选，在步骤4中标准工作溶液的配置方法为：配置单个标准储备液时，杆菌肽A、粘杆菌素、多粘菌素B选用0.1%甲酸水溶液为溶剂，维吉尼霉素储备液选用甲醇为溶剂；配置混合标准储备液时，选用甲醇-0.1%甲酸水溶液体系（1：4，V/V）为溶剂。

进一步地，所述动物源食品选自猪肉、猪肝、猪肾和牛奶。

进一步地，所述多肽类兽药包括杆菌肽、多粘菌素B、粘杆菌素、维吉尼霉素至少一种。

由于采用上述技术方案，本发明的有益效果在于：

1、建立了动物组织（肌肉、肝脏、肾脏、牛奶）中粘杆菌素、杆菌肽A和多粘菌素B和维吉尼霉素M1等多肽类抗生素残留量的液相色谱-串联质谱法检测方法。实现了对四种多肽类兽药的同时检测。

2、对动物组织、肝脏、肾脏和牛奶等富含蛋白质的样品采用1%三氯乙酸水溶液和乙腈去除蛋白质，对乳样品采用6 mol/L盐酸溶液去除蛋白质，结合均质法提取、低温高速离心分离，再利用甲醇－0.1﹪甲酸水溶液采用超声、振荡提取、低温高速离心的方式进行提取和分离，提取效率高，提取液中杂质溶出少。

3、提取液采用正己烷液脱脂、HLB固相萃取柱净化，通过对HLB固相萃取柱净化条件的优化，具有较好的净化效果，并保证四种多肽类兽药都有较高的回收率。

4、利用液相色谱-质谱/质谱多反应模式（MRM）检测，具有抗干扰能力强的特点。

5、与以往的方法比较，具有简单、快速、准确、高效等优点，四种多肽类抗生素检测低限分别为：粘杆菌素 25 μg/kg，杆菌肽A 100 μg/kg，多粘菌素B 250μg/kg，维吉尼霉素M1 20 μg/kg。平均回收率分别为：粘杆菌素74.9～88.1％，杆菌肽A 76.2～89.0％，多粘菌素B 76.6～81.2%，维吉尼霉素77.3～86.9％。变异系数（CV%）分别为：粘杆菌素5.7～15.1％，杆菌肽A 7.2～15.7％，多粘菌素B 6.0～8.0 %，维吉尼霉素9.5～18.6％。方法的检测低限满足国内外相关法规的要求，精密度、回收率等技术指标符合相关标准的规定。

6、本发明可应用于动物产品中多肽类兽药残留的检验中，对促进我国动物源食品的进出口贸易，确保食品安全，保障人类身体健康都具有十分重要的意义。

附图说明：

图1为多肽类兽药标准溶液的提取离子流图；

图2～图5分别为空白猪肉、猪肝、猪肾、牛奶样品添加多肽类兽药标准溶液（杆菌肽A 100μg/kg、粘杆菌素25μg/kg、多粘菌素B 20μg/kg、维吉尼霉素M1 250μg/kg）提取离子流图。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不局限于具体实施例。

实施例1 猪肝中多种多肽类兽药残留量的检测方法

1、样品提取：称取已切碎的猪肝样品2.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠，再加入10 mL 1% 三氯乙酸和2 mL 乙腈，9 500 rpm均质 2 min后，4℃下8 500 rpm离心10 min。上清液经快速定量滤纸转移至另一离心管。残渣中加入15 mL提取液超声提取10 min，振荡提取10 min，4℃下8 500 rpm离心10 min。合并两次提取上清液，待脱脂。

2、提取液脱脂：向上步所得提取上清液离心管中加入正己烷5～15mL，涡旋2 min，4℃下6 000 rpm离心5 min。去掉上层（正己烷层）液，得下层液待固相萃取柱净化。

3、固相萃取柱净化：将上述所得样品提取液转移至已活化好的Oasis HLB 净化柱（甲醇、水各6mL活化），上样后先用5 mL水洗涤，弃去流出液。再用5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10 mL刻度试管中，整个固相萃取净化过程控制流速不超过2 mL/min。洗脱液在40℃水浴上用氮气吹干，残留物用标样溶解液溶解定容到1.0 mL，混匀，过0.22 μm 微孔滤膜，供仪器测定。

4、液相色谱-质谱/质谱仪测定

液相色谱分析条件：

a) 色谱柱：Eclipse XDB-C18柱（150mm×4.6 mm, 5μm）

b) 流动相：乙腈－0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱程序见表1。

c) 柱温：30℃

d) 流速：0.8 mL/min

e) 进样量：10 μL

表1 梯度洗脱程序

时间（min）	0.1%的甲酸水溶液（%）	乙腈（%）
			0.00	90	10
2.00	90	10
			4.00	40	60
7.00	40	60
			7.01	90	10
10.00	90	10

质谱条件：

a) 离子源：电喷雾离子源

b) 扫描方式：正离子扫描

c) 检测方式：多反应监测(MRM)

d) 电喷雾电压（IS）：5500.00 V

e) 雾化气（GS1）：55.00 Psi

f) 辅助气（GS2）：35.00 L/min

g) 气帘气（CUR）：12.00 Psi

h) 离子源温度（TEM）：650℃

i) 其它参数见表2。

表2 质谱参数

Figure DEST_PATH_RE-171773DEST_PATH_IMAGE002

DP-去簇电压；EP-碰撞室入口电压；CXP-碰撞室出口电压；CE-碰撞气能量

5、线性关系：将标准储备液逐级稀释，制备六个不同浓度的系列混合标准工作液，见表3。按浓度从低到高顺序，依照上述色谱条件和质谱条件测定。每一浓度测定3次，按其标准溶液浓度 Y（ng/mL）与对应的峰面积平均值 X（cps）作标准曲线图，计算回归方程和相关系数，结果见表4。由于粘杆菌素含有粘杆菌素A和粘杆菌素B两个组分，制作标准曲线以及以后的定量分析时，均采用其峰面积的加和进行相关分析。

表3 系列标准工作液

标准物质	系列标准工作液，ng/mL
		杆菌肽A	100,200,500,1000,1500,3000
粘杆菌素	25,50,100,300,1000,2000
		多粘菌素B	250,500,750,1000,1500,3000
维吉尼霉素M₁	20,40,100,200,600,2000

表4 标准曲线及线性范围

组分	线性范围（ng/mL）	回归方程	相关系数
				杆菌肽A	100 ～ 3000	Y=67.80 X-432	0.9997
粘杆菌素	25 ～ 2000	Y=31.96X-2922	0.9985
				多粘菌素B	250 ～3000	Y=2.33 X+ 740	0.9992
维吉尼霉素M₁	20 ～ 2000	Y=579.00 X-460	0.9997

6、回收率和精密度：准确称取不含多肽类兽药的猪肝样品，添加3个不同含量水平的多肽类兽药混合标准溶液,添加水平见表5，每个浓度进行6个平行样品，按上述依照上述色谱条件和质谱条件进行分析。回收率和变异系数计算结果见表6。

表5 回收率和精密度试验添加水平(μg/kg)

标准物质	添加水平1	添加水平2	添加水平3
				杆菌肽A	100	500	750
粘杆菌素	25	150	500
				多粘菌素B	20	100	300
维吉尼霉素M₁	250	500	750

表6 猪肝中添加多肽类药物精密度试验结果(n=6)

Figure DEST_PATH_RE-RE-DEST_PATH_IMAGE003

由表6结果可见：猪肝中多肽类药物三个添加水平的平均回收率分别为：杆菌肽A 82.5～89.0 %、粘杆菌素 78.4～88.1%、维吉尼霉素77.3～85.2%；变异系数（CV%）分别为：杆菌肽A 9.2 ～11.3 %、粘杆菌素11.2～13.4%、维吉尼霉素11.9～18.6%；

需要说明的是：根据国际上对肌肉、肝脏、肾脏样品中多粘菌素B没有限量要求，因此每进行添加回收实验；而对牛乳样品，添加回收实验增加了多粘菌素B。

7、检测低限：以猪肝的空白样品进行添加试验，以3倍信噪比求得方法对待测的4种多肽类兽药的检出限（LOD）。多肽类类抗生素在猪肝样品中的检测低限分别为：杆菌肽A 100 μg/kg，多粘菌素B 250 μg/kg，粘杆菌素 25 μg/kg，维吉尼霉素M₁ 20 μg/kg。

8、方法优化过程：

①流动相的选择：由于采用电喷雾(ESI)模式，而ESI电离机理中一个重要的过程为去溶剂化，乙腈粘度较低，容易气化，故选择乙腈-水体系作为流动相。为改善色谱分离效果，向水相中添加甲酸，其作用是改善色谱分离，提高溶液的离子化程度，提高质谱响应，多肽类抗生素在酸性条件下稳定。但甲酸的浓度过高质谱响应降低，确定水相中甲酸溶液的最佳浓度为0.1﹪。

②离子扫描模式的选择：多肽类抗生素在负离子扫描模式下质谱响应很弱，而在正离子扫描模式下则得到了明显的分子离子峰。

③质谱条件优化：用多肽类抗生素标准溶液在正离子模式下进行母离子全扫描，选取离子丰度最高的离子为母离子。然后以母离子为目标离子，再通过CE、CXP的调节优化，选取丰度较高，较为稳定的子离子。最后通过质谱仪的自动优化功能对初步获得的条件进一步优化，并兼顾多肽类抗生素各成分灵敏度的不同而对离子源条件有所偏重，最终建立了质谱条件。

④提取溶剂的选择：动物组织、肝脏、肾脏中多肽类抗生素的检测，去除蛋白质是十分重要的步骤。在选择蛋白沉淀剂的同时兼顾了其相应的对待测物的提取作用。鉴于三氯乙酸沉淀蛋白并不影响多肽的提取，选取1%三氯乙酸作为蛋白沉淀剂，并根据待测四种多肽的理化性质，增加了乙腈作为辅助沉淀剂和提取剂，效果较好。而对于牛奶样品，则可通过加入一定量的浓盐酸以去除蛋白等杂质。根据多肽的理化性质，并考虑到其在酸性条件下稳定，选定甲醇－0.1﹪甲酸水溶液作为提取溶剂，实验表明当甲醇和0.1﹪甲酸水溶液体积比为2:5时提取效果最佳。

⑤提取方式的选择：为了增加提取效率，本实验在对动物组织、肝脏、肾脏提取时利用均质法进行提取，提取后采用低温高速离心分离，可以使蛋白等大分子物质沉降。第二步利用甲醇－0.1﹪甲酸水溶液体系进行提取时采用超声、振荡的方式进行提取主要是利用超声波辐射压强产生的强烈空化效应、机械振动、乳化、扩散等多级效应，增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，加速目标成分进入溶剂，以提高提取效率。

⑥样品净化条件的选择：采用正己烷脱脂、固相萃取（SPE）柱净化技术。 Oasis HLB 固相萃取柱的填料是一种新型反相吸附剂，具有亲水亲脂平衡特性，可以保持其在水中湿润，并且对极性和非极性化合物有很宽的适用范围。试验表明洗脱剂甲醇用量大于5.0mL时，洗脱液体积的变化对回收率的影响不明显。

实施例2 牛奶中多种多肽类兽药残留量的检测方法

1、样品提取：称取牛奶样品2.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠和6 mol/L盐酸1 mL，涡旋1 min后再加入提取液25 mL，超声提取10 min，振荡提取10 min，然后4℃下8 500 rpm离心10 min。上清液经快速定量滤纸过滤后转移至另一离心管，待脱脂。

2、提取液脱脂：同实例1。

3、固相萃取柱净化：同实例1。

4、液相色谱-质谱/质谱仪测定：同实例1。

5、线性关系试验：同实例1。

6、回收率和精密度试验：准确称取不含多肽类兽药的牛奶样品，添加3个不同含量水平的多肽类兽药混合标准溶液,添加水平见表5，每个浓度进行6个平行样品，按上述依照上述色谱条件和质谱条件进行分析。回收率和变异系数计算结果见表7。

表7 牛奶中添加多肽类药物精密度试验结果(n=6)

Figure DEST_PATH_RE-377102DEST_PATH_IMAGE004

由表7结果可见：牛奶中多肽类药物三个添加水平的平均回收率分别为：杆菌肽A 76.4～81.8 %、粘杆菌素74.9～87.6%、维吉尼霉素83.7～86.9%、多粘菌素B 76.6～81.2%；变异系数（CV%）分别为：杆菌肽A 8.1～13.5 %、粘杆菌素5.7～9.9%、维吉尼霉素10.4～14.3 %；多粘菌素B 6.0～8.0%。

7、检测低限测定：同实例1。

Claims

1.一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

（1）样品提取：

①称取已切碎的肌肉、肾脏或肝脏样品1.0～3.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠，再加入5～15mL三氯乙酸溶液和1～3mL乙腈，9 500 rpm均质 2 min后，4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸转移至另一离心管，残渣中加入提取液超声提取10 min，振荡提取10 min，4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸转移至同一离心管（合并两次提取上清液），待脱脂；

②乳样品：称取牛奶样品1～3.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠和0.5～1.5 mL盐酸溶液，涡旋1 min后再加入20～30 mL提取液，超声提取10 min，振荡提取10 min，然后4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸过滤于另一离心管，待脱脂；

（2）提取液脱脂

向上步所得提取上清液离心管中加入正己烷5～15mL，涡旋2 min，4℃下6 000 rpm离心5 min，去掉上层（正己烷层）液，得下层液待固相萃取柱净化；

（3）固相萃取柱净化

将上步经脱脂的样品提取液转移至已活化好的HLB 固相萃取柱（甲醇、水各6mL活化），上样后先用5 mL水洗涤，弃去流出液，再用5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10 mL刻度试管中，整个固相萃取净化过程控制流速不超过2 mL/min，洗脱液在40℃水浴上用氮气吹干，残留物用标样溶解液溶解定容到1.0 mL，混匀，过0.22 μm 微孔滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定；

（4）液相色谱-质谱/质谱仪测定

按照液相色谱－质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，质谱分离采用在正离子模式下进行母离子全扫描，再对其子离子进行全扫描，通过被测样品的质谱和相关信息，得到其定性和定量结果，定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物，定量测定时采用标准曲线法。

2.根据权利要求1所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（1）中所述三氯乙酸的使用浓度为1%；所述盐酸溶液的使用浓度为6 mol/L；所述提取液为甲醇-0.1﹪甲酸水溶液体系（2：5，V/V）。

3.根据权利要求1所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（3）中所述HLB固相萃取柱为Oasis ，500 mg/6 mL。

4.根据权利要求1所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（3）中所述标样溶解液为甲醇-0.1%甲酸水溶液体系（1：4，V/V）。

5.根据权利要求1所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（4）中所述液相色谱分析条件为：

色谱柱：反相C18色谱柱

流动相A：乙腈；流动相B：0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱

柱温：30℃

流速：0.5～1 mL/min

进样量：10～20 μL。

6.根据权利要求5所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于所述反相C18柱为Eclipse XDB-C₁₈分析柱（150mm×4.6 mm, 5μm）。

7.根据权利要求5所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于所述梯度洗脱的梯度变化为：

0～2分钟，流动相A10%，流动相B90%；

2～4分钟，流动相A10～60%，流动相B90～40%；

4～7分钟，流动相A60%，流动相B40%；

7.01～10分钟，流动相A10%，流动相B90%。

8.根据权利要求1所述的一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（4）中所述质谱条件为：

离子源：电喷雾离子源

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测(MRM)

电喷雾电压（IS）：5500.00 V

雾化气（GS1）：55.00 Psi

辅助气（GS2）：35.00 L/min

气帘气（CUR）：12.00 Psi

离子源温度（TEM）：650℃

分别设定母离子、子离子、去簇电压（DP）、碰撞室入口电压（EP）、碰撞室出口电压（CXP）、碰撞气能量（CE）。

9.根据权利要求1所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（4）中标准工作溶液的配置方法为：配置单个标准储备液时，杆菌肽A、粘杆菌素、多粘菌素B选用0.1%甲酸水溶液为溶剂，维吉尼霉素储备液选用甲醇为溶剂；配置混合标准储备液时，选用甲醇-0.1%甲酸水溶液体系（1：4，V/V）为溶剂。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于所述动物源食品选自猪肉、猪肝、猪肾和牛奶的至少一种；所述多肽类兽药包括杆菌肽、多粘菌素B、粘杆菌素、维吉尼霉素的至少一种。