CN113791146B - 食品中有机磷酸酯类污染物的检测方法及其样品处理方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种食品中有机磷酸酯类污染物的检测方法及其样品处理方法。该样品处理方法包括：在萃取池底部垫玻璃纤维滤纸后依次装入硅藻土、净化材料、食品样品和硅藻土，注入第一萃取溶剂进行第一加速溶剂萃取，得到第一萃取液，再注入第二萃取溶剂进行第二加速溶剂萃取，得到第二萃取液，合并第一萃取液和第二萃取液，吹干，得到处理后食品样品；净化材料由乙二胺‑N‑丙基硅烷、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成。所得处理后食品样品直接采用现有有机磷酸酯类污染物的检测方法中的一种或者多种进行检测。本发明操作简便、自动化程度高且检测结果准确，能够广泛的推广应用。

Description

食品中有机磷酸酯类污染物的检测方法及其样品处理方法

技术领域

本发明涉及有机磷酸酯类污染物的检测技术领域，具体涉及一种食品中有机磷酸酯类污染物的检测方法及其样品处理方法。

背景技术

有机磷酸酯(Organophosphate esters，OPEs)作为一类阻燃剂和增塑剂被广泛用于各类工业产品中，例如塑料、建筑材料、纺织品、家具和电子部件等。有机磷酸酯是通过物理混合而非化学键合的方法直接被加入到聚合物中，因此极易释放到空气、水体、灰尘以及淤泥沉淀物等环境介质中。近年来，有机磷酸酯在母乳、血清、尿液以及各种食品中均有检出。有研究表明，部分有机磷酸酯被认为是持久性环境污染物。毒理学研究表明，部分有机磷酸酯在高浓度和长时间暴露后具有致癌性、神经毒性、肾毒性、生殖毒性、肝毒性和内分泌紊乱等不良反应。

目前食品中有机磷酸酯类污染物检测的前处理技术主要有固相萃取、分散固相萃取、微波辅助萃取、基质固相分散萃取、超声辅助萃取和QuEChERS方法等，检测方法主要有气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测法和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测法等。针对不同的样品一般会采用适用的样品处理方法，以降低样品中其它物质对检测结果的干扰。目前对婴幼儿米粉中有机磷酸酯的检测方法及其样品处理方法鲜有报道。

米粉、小麦粉和玉米粉中分析痕量有机磷酸酯时，糖类、脂质、蛋白质等共提取基质成分会影响检测结果，因此选择合适的前处理技术，降低米粉、小麦粉和玉米粉基质中的杂质干扰，对准确分析米粉、小麦粉和玉米粉中痕量的有机磷酸酯具有重要意义。此外，由于各类有机磷酸酯的极性差别较大，在对米粉、小麦粉和玉米粉中多组分有机磷酸酯同时检测时，选择合适的提取溶剂对于满足宽极性范围化合物的提取效率至关重要。因此，建立一种准确、高效、自动化程度高的定量检测米粉、小麦粉和玉米粉中有机磷酸酯的方法对保障食品尤其婴幼儿食品安全具有重要意义。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种操作简便且检测结果准确的食品中有机磷酸酯类污染物的检测方法及其样品处理方法。

一种食品中有机磷酸酯类污染物检测的样品处理方法，包括步骤：

在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入第一硅藻土、净化材料、食品样品和第二硅藻土，注入第一萃取溶剂进行第一加速溶剂萃取，得到第一萃取液，再注入第二萃取溶剂进行第二加速溶剂萃取，得到第二萃取液，合并第一萃取液和第二萃取液，吹干，得到处理后食品样品；

所述净化材料由乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成。

所述食品包括米粉、小麦粉、玉米粉等中的一种或两种以上。

所述有机磷酸酯类污染物包括磷酸三甲酯(TMP)、磷酸三乙酯(TEP)、磷酸三丙酯(TPP)、磷酸三丁酯(TBP)、磷酸三(2-氯乙基)酯(TCEP)、磷酸三(2-氯异丙基)酯(TCPP)、磷酸三苯酯(TPPA)、磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)(TBEP)、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯(TDCPP)、磷酸甲苯二苯酯(CDPP)、磷酸三甲苯酯(TCP)、磷酸2-乙基己基二苯酯(EHDPP)等中的一种或多种。

为了降低或者避免样品中其它物质对检测结果的干扰，本发明针对食品例如米粉、小麦粉、玉米粉等样品的特点，利用本发明设计特定组成的净化材料吸附杂质、净化基质，结合两步采用不同萃取溶剂的加速溶剂萃取步骤，最终得到适用于有机磷酸酯类污染物检测方法的处理后食品样品。

采用本发明样品处理方法能够有效萃取食品中宽极性范围的多种有机磷酸酯类污染物，得到的处理后食品样品能够有效的克服食品中其他物质对有机磷酸酯类污染物检测的干扰，同时实现对食品中宽极性范围的多种有机磷酸酯的同时检测且检测结果准确。

为了达到更好的发明效果，进行以下优选：

所述第一硅藻土、净化材料、食品样品和第二硅藻土的质量比为2-3：0.05-0.2：1：2-3。进一步优选为第一硅藻土、净化材料、食品样品和第二硅藻土的质量比为2：0.1：1：3。硅藻土的加入可促进样品的分散，增大样品与萃取溶剂的接触面积，使萃取更加充分。此外，第一层硅藻土可利于吸附样品中的水分，第二层硅藻土用于填充萃取池，可减少萃取溶剂的使用量。

针对米粉、小麦粉和玉米粉等食品特点，PSA主要用于去除糖类、脂肪酸、有机酸和一些极性色素等，弗罗里硅土主要用于去除油脂和蜡质等，碱性氧化铝主要用于去除一些极性化合物，如氨基酸和水溶性维生素等，三者结合利于米粉、小麦粉和玉米粉等食品样品中杂质的吸附、基质的净化。为了保证本发明12种有机磷酸酯类污染物较高的回收率，所述净化材料中PSA、弗罗里硅土、碱性氧化铝的质量比优选为0.5-10：1-10：0.1-10。进一步优选为，所述净化材料中乙二胺-N-丙基硅烷、弗罗里硅土、碱性氧化铝的质量比为2-2.1：2：0.9-1。为了便于实验操作，PSA、弗罗里硅土、碱性氧化铝的质量比优选为2:2:1。

所述第一萃取溶剂选用甲酸化乙腈，其中甲酸的体积百分比为0.5％。鉴于多种有机磷酸酯类污染物的极性范围较宽，本发明先使用极性较强的体积百分比0.5％甲酸化乙腈对极性较强的目标物进行高效萃取。

所述第二萃取溶剂选用正己烷。第二萃取溶剂选用极性较弱的正己烷，可实现对12种宽极性范围的有机磷酸酯中极性较弱的目标物的高效萃取。

采用第一萃取溶剂和第二萃取溶剂分两步进行加速溶剂萃取，较混合萃取溶剂一步萃取的萃取更有效，两者具有显著性差异。

所述第一加速溶剂萃取的条件包括：萃取温度60℃-100℃(优选80℃)，萃取压力为1000psi-2000psi(优选1500psi)，静态萃取时间为5min-10min(优选5min)，萃取循环至少2次。从节约资源、便于操作等角度考虑，加热时间以4min-6min(优选5min)为宜，冲洗体积为40％-60％萃取池体积(优选40％萃取池体积)较为合适。

所述第二加速溶剂萃取的条件包括：萃取温度60℃-100℃(优选80℃)，萃取压力为1000psi-2000psi(优选1500psi)，静态萃取时间为5min-10min(优选5min)，萃取循环至少2次。从节约资源、便于操作等角度考虑，加热时间以4min-6min(优选5min)为宜，冲洗体积为40％-60％萃取池体积(优选40％萃取池体积)较为合适。

所述冲洗体积太小可能冲洗不完全，太大容易造成萃取液体积过大不便于收集、增加后续吹干操作时间等。

所述第一加速溶剂萃取的条件与所述第二加速溶剂萃取的条件可以相同也可以不同。

所述第一萃取溶剂和第二萃取溶剂的用量没有特别的限制，一般在静态萃取时保持样品完全浸没在萃取溶剂中为宜，冲洗时以冲洗完全为宜。

所述第一加速溶剂萃取与第二加速溶剂萃取均可采用加速溶剂萃取仪器，例如市售的加速溶剂萃取仪。

一种食品中有机磷酸酯类污染物检测方法，采用所述样品处理方法得到的处理后食品样品作为测试样品，直接采用有机磷酸酯类污染物的检测方法中的一种或者多种进行检测。具体包括：取测试样品，直接采用有机磷酸酯类污染物的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测法、有机磷酸酯类污染物的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测法等中的一种或多种方法检测测试样品中的有机磷酸酯类污染物。所述有机磷酸酯类污染物的检测方法可以是现有有机磷酸酯类污染物的检测方法，也可以是在现有有机磷酸酯类污染物的检测方法基础上简单做参数调整的检测方法。

所述测试样品优选采用甲醇水溶液复溶后，过滤，进样。

所述甲醇水溶液中甲醇与水的体积比优选为1:1。

所述有机磷酸酯类污染物的液相色谱-串联质谱检测法包括有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法，具有灵敏度高，检出限低，分析时间短的优点。所述有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法的色谱分析条件优选包括：

流动相A：甲醇；流动相B：含体积百分比0.1％甲酸的2mmol/L甲酸铵水溶液；梯度洗脱程序：流动相B在体积百分比80％下保持1min，在接下来的1min内降至体积百分比5％并保持2min，最后直接升至体积百分比80％并保持2min，余量为流动相A，总洗脱时间为6min。

有机磷酸酯在检测过程中常伴随空白污染，为尽量避免空白污染，实验过程中硅藻土和所有玻璃器皿均优选在400℃-500℃(最优选450℃)下加热4h-6h，然后用铝箔覆盖直至使用。

本发明所用的原料、试剂、仪器等均可采用市售产品。

本发明具有以下有益效果：

为了降低或者避免样品中其它物质对检测结果的干扰，本发明针对食品例如米粉、小麦粉、玉米粉等样品的特点，利用本发明设计特定组成的净化材料吸附杂质、净化基质，结合两步采用不同萃取溶剂的加速溶剂萃取步骤，最终得到适用于有机磷酸酯类污染物检测方法的处理后食品样品。

采用本发明样品处理方法得到的处理后食品样品能够有效的克服食品中其他物质对有机磷酸酯类污染物检测的干扰，同时实现对食品中宽极性范围的多种有机磷酸酯的同时检测。

本发明样品处理方法步骤简单，萃取过程高效，能够有效萃取食品中宽极性范围的多种有机磷酸酯类污染物，降低或者避免萃取出样品中其它干扰物质。

采用本发明样品处理方法得到的处理后食品样品作为测试样品进行有机磷酸酯类污染物仪器检测，自动化程度高，可以进行大批量样品的检测，且回收率高，检测效果好。

本发明操作简便、自动化程度高且检测结果准确，能够广泛的推广应用。

附图说明

图1为本发明萃取循环次数对目标物回收率的影响图；

图2为本发明萃取温度对目标物回收率的影响图；

图3为本发明净化材料组成比例及其对目标物回收率的影响图；其中，三角形三边分别为PSA、弗罗里硅土、碱性氧化铝的质量比例坐标；

图4为不同萃取溶剂对目标物回收率的影响图，其中，酸化乙腈-正己烷代表本发明采用甲酸化乙腈和正己烷分两步加速溶剂萃取。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，但本发明的保护范围并不局限于此。

以下实施例中：

有机磷酸酯类污染物包括磷酸三甲酯(TMP)、磷酸三乙酯(TEP)、磷酸三丙酯(TPP)、磷酸三丁酯(TBP)、磷酸三(2-氯乙基)酯(TCEP)、磷酸三(2-氯异丙基)酯(TCPP)、磷酸三苯酯(TPPA)、磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)(TBEP)、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯(TDCPP)、磷酸甲苯二苯酯(CDPP)、磷酸三甲苯酯(TCP)、磷酸2-乙基己基二苯酯(EHDPP)。

空白米粉样品，即不含有机磷酸酯类污染物的米粉样品。

实验过程中硅藻土和所有玻璃器皿均优选在450℃下加热5h，然后用铝箔覆盖直至使用。

1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液，即上述12种有机磷酸酯标准品浓度均为1mg/L的甲醇溶液。

有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法的分析条件如下：

超高效液相色谱条件为：ACQUITY UPLC C18色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)；柱温：40℃；流速：0.2mL/min；进样体积：5.0μL；流动相A：甲醇；流动相B：含0.1％(体积百分比)甲酸的2mmol/L甲酸铵水溶液。梯度洗脱程序：流动相B在体积百分比80％下保持1min，在接下来的1min内降至体积百分比5％并保持2min，最后直接升至体积百分比80％并保持2min，余量为流动相A，总洗脱时间为6min。

质谱条件为：离子源模式：电喷雾电离源；检测方式：多反应监测；扫描方式：正离子扫描；喷雾电压：4500V；离子源温度：500℃；气帘气压力：40psi；雾化气压力：50psi；辅助气压力：50psi。

待测物多反应监测参数见表1。

表1 12种有机磷酸酯定性离子对、定量离子对

(1)萃取循环次数

在空白米粉样品中添加适量1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液，得到单种有机磷酸酯添加量均为20μg/kg的样品。分别称取1.0g样品，改变萃取循环次数，第一加速溶剂萃取和第二加速溶剂萃取的萃取循环次数分别均为1次、2次、3次，在本发明相同条件下进行实验，具体包括：

在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g由PSA、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成的净化材料(净化材料中PSA/弗罗里硅土/碱性氧化铝的质量比为2:2:1)、1.0g待测米粉样品和3g第二硅藻土。注入第一萃取溶剂甲酸体积百分比0.5％的甲酸化乙腈，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为1次、2次或者3次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行第一加速溶剂萃取，得到第一萃取液。然后注入第二萃取溶剂正己烷，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为1次、2次或者3次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行第二加速溶剂萃取，得到第二萃取液。合并第一萃取液和第二萃取液，氮吹至干，残渣用4mL体积百分浓度50％甲醇水溶液涡旋复溶，取上清液于10000r/min离心5min，过0.22μm聚四氟乙烯(PTFE)滤膜，上机检测，检测方法采用有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法。

实验结果见图1，12种有机磷酸酯在萃取循环次数为2次和3次时，回收率值变化较小，有7种有机磷酸酯在萃取循环次数为3次时回收率较高。因此，优选至少2次，进一步优选3次。

(2)萃取温度

在空白米粉样品中添加适量1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液，得到单种有机磷酸酯添加量均为20μg/kg的样品。分别称取1.0g样品，改变萃取温度，分别为60℃、80℃、100℃、120℃，在本发明相同条件下进行实验，具体包括：

在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g由PSA、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成的净化材料(净化材料中PSA/弗罗里硅土/碱性氧化铝的质量比为2:2:1)、1.0g待测米粉样品和3g第二硅藻土。注入第一萃取溶剂甲酸体积百分比0.5％的甲酸化乙腈，在加热时间为5min，萃取温度为60℃、80℃、100℃或120℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为2次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行第一加速溶剂萃取，得到第一萃取液。然后注入第二萃取溶剂正己烷，在加热时间为5min，萃取温度为60℃、80℃、100℃或120℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为2次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行第二加速溶剂萃取，得到第二萃取液。合并第一萃取液和第二萃取液，氮吹至干，残渣用4mL体积百分浓度50％甲醇水溶液涡旋复溶，取上清液于10000r/min离心5min，过0.22μmPTFE滤膜，上机检测，检测方法采用有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法。

实验结果见图2，2种有机磷酸酯TBEP和TBP在萃取温度为60℃时，回收率达到最高值；8种有机磷酸酯TCEP、TEP、TMP、TPP、CDPP、TDCPP、TCP和EHDPP在萃取温度为80℃时，回收率达到最高值；随着温度的升高，回收率不再升高或略有降低；仅有TPPA和TCPP在100℃时回收达到最大值，但其与80℃时相比，回收率变化较小。因此，从节约能源的角度考虑，优选60℃-100℃，进一步优选80℃。

(3)净化材料组成及比例

在空白米粉样品中添加适量1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液，得到单种有机磷酸酯添加量均为20μg/kg的样品。设计三元混料配方实验，选用增强后单纯性质心混料设计，设计10个点10组不同比例PSA、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成的净化材料，10组实验的净化材料组成比例见表2以及图3。分别称取1.0g样品，改变净化材料的组成，在本发明相同条件下进行10组不同净化材料组成的实验，每组包括三次平行实验，计算平均值为该组结果，最后计算同一组12种目标物结果的平均值为该组的响应值，实验结果见图3。具体包括：

在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g净化材料(净化材料中PSA/弗罗里硅土/碱性氧化铝的质量比见表2以及图3)、1.0g待测米粉样品和3g第二硅藻土。注入第一萃取溶剂甲酸体积百分比0.5％的甲酸化乙腈，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为2次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行第一加速溶剂萃取，得到第一萃取液。然后注入第二萃取溶剂正己烷，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为2次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行第二加速溶剂萃取，得到第二萃取液。合并第一萃取液和第二萃取液，氮吹至干，残渣用4mL体积百分浓度50％甲醇水溶液涡旋复溶，取上清液于10000r/min离心5min，过0.22μmPTFE滤膜，上机检测，检测方法采用有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法。

将实验结果运用Design Expert 10拟合曲线进行方差分析，StatsoftStatistica 12.0绘制拟合曲线，拟合曲线方程为R＝0.7194×A+0.6924×B+0.7429×C+0.1771×A×B-0.5782×A×C+0.1305×B×C+7.46×A×A×B×C+3.25×A×B×B×C-1.45×A×B×C×C，其中A、B、C分别为PSA、弗罗里硅土和碱性氧化铝的比例分数，R为回收率/％。运用LINGO15.0计算极值，计算结果表明，PSA：弗罗里硅土：碱性氧化铝质量比为2.1:2.0:0.9时，12种有机磷酸酯的平均回收率最高，为83％。因此，为便于后续操作，优选PSA：弗罗里硅土：碱性氧化铝的质量比为2:2:1。

表2 10组实验的净化材料中三种材料的质量比例

组别	PSA	弗罗里硅土	碱性氧化铝
				1	0	0	10
2	0	5	5
				3	0	10	0
4	5	0	5
				5	5	5	0
6	10	0	0
				7	6.67	1.67	1.67
8	3.3	3.3	3.3
				9	1.67	6.67	1.67
10	1.67	1.67	6.67

(4)萃取溶剂加入顺序

在空白米粉样品中添加适量1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液，得到单种有机磷酸酯添加量均为20μg/kg的样品。

在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g由PSA、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成的净化材料(净化材料中PSA/弗罗里硅土/碱性氧化铝的质量比为2:2:1)、1.0g待测米粉样品和3g第二硅藻土。先注入萃取溶剂正己烷，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为3次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行加速溶剂萃取，得到一次萃取液，该一次萃取液中含油量较多。然后注入萃取溶剂甲酸体积百分比0.5％的甲酸化乙腈，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为2次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行加速溶剂萃取，得到二次萃取液，该二次萃取液中含油量较多。由于一次萃取液和二次萃取液中含油量较多，基质效应过大，干扰检测结果。

实施例1

取米粉样品，添加适量1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液至单种有机磷酸酯添加量均为2μg/kg，得到待测米粉样品。

在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g由PSA、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成的净化材料(净化材料中PSA/弗罗里硅土/碱性氧化铝的质量比为2:2:1)、1.0g待测米粉样品和3g第二硅藻土。注入第一萃取溶剂甲酸体积百分比0.5％的甲酸化乙腈，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为3次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行第一加速溶剂萃取，得到第一萃取液。然后注入第二萃取溶剂正己烷，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为2次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行第二加速溶剂萃取，得到第二萃取液。合并第一萃取液和第二萃取液，氮吹至干，残渣用4mL体积百分浓度50％甲醇水溶液涡旋复溶，取上清液于10000r/min离心5min，过0.22μm PTFE滤膜，上机检测，检测方法采用有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法。

检测结果：磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为91％、90％、90％、78％、75％、77％、83％、84％、75％、81％、73％、75％；平均回收率为81％；相对标准偏差(RSD)为1％-12％(n＝5)。

实施例2

除了“取米粉样品，添加适量1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液至单种有机磷酸酯添加量均为20μg/kg，得到待测米粉样品。”之外，其余操作同实施例1。

检测结果见图4：磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为86％、87％、76％、79％、74％、75％、73％、75％、74％、79％、71％、74％；平均回收率为77％；RSD为1％-8％(n＝5)。

实施例3

除了“取米粉样品，添加适量1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液至单种有机磷酸酯添加量均为100μg/kg，得到待测米粉样品。”之外，其余操作同实施例1。

检测结果：磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为90％、91％、87％、79％、74％、75％、78％、79％、72％、82％、77％、71％；平均回收率为80％；RSD为1％-8％(n＝5)。

对比例1

取米粉样品，添加适量1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液至单种有机磷酸酯添加量均为20μg/kg，得到待测米粉样品。

在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g由PSA、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成的净化材料(净化材料中PSA/弗罗里硅土/碱性氧化铝的质量比为2:2:1)、1.0g待测米粉样品、3g第二硅藻土。注入萃取溶剂由甲酸体积百分比0.5％的甲酸化乙腈与正己烷按体积比1:1混合而成(记作：酸化乙腈：正己烷1：1)，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为3次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行萃取，得到提取液。提取液氮吹至干，残渣用4mL体积百分浓度50％甲醇水溶液涡旋复溶，取上清液于10000r/min离心5min，过0.22μmPTFE滤膜，上机检测。检测方法采用有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法。

各有机磷酸酯的回收率见图4，磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为70％、70％、69％、55％、48％、67％、72％、72％、63％、65％、51％、60％；平均回收率为64％；RSD为1％-10％(n＝5)。可见，甲酸化乙腈与正己烷作为萃取溶剂一步加速溶剂萃取，8种有机磷酸酯TBP、TEP、TMP、TPPA、CDPP、TDCPP、TCP和EHDPP回收率较低，达不到检测要求。

对比例2

取米粉样品，添加适量1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液至单种有机磷酸酯添加量均为20μg/kg，得到待测米粉样品。

在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g由PSA、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成的净化材料(净化材料中PSA/弗罗里硅土/碱性氧化铝的质量比为2:2:1)、1.0g待测米粉样品、3g第二硅藻土。注入萃取溶剂由甲酸体积百分比0.5％的甲酸化乙腈与甲醇按体积比1:1混合而成(记作：酸化乙腈：甲醇1：1)，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，静态萃取时间为5min，萃取循环为3次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行萃取，得到提取液。提取液氮吹至干，残渣用4mL体积百分浓度50％甲醇水溶液涡旋复溶，取上清液于10000r/min离心5min，过0.22μmPTFE滤膜，上机检测。检测方法采用有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法。

各有机磷酸酯的回收率见图4，磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为55％、70％、55％、71％、70％、41％、56％、50％、31％、46％、7％、11％；平均回收率为47％；RSD为1％-10％(n＝5)。可见，甲酸化乙腈与甲醇作为萃取溶剂一步加速溶剂萃取，9种有机磷酸酯TBEP、TBP、TPPA、TCPP、TPP、CDPP、TDCPP、TCP和EHDPP回收率较低，达不到检测要求。

对比例3

取米粉样品，添加适量1mg/L有机磷酸酯混合标准溶液至单种有机磷酸酯添加量均为20μg/kg，得到待测米粉样品。

在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g由PSA、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成的净化材料(净化材料中PSA/弗罗里硅土/碱性氧化铝的质量比为2:2:1)、1.0g待测米粉样品、3g第二硅藻土。注入萃取溶剂由二氯甲烷与正己烷按体积比1:1混合而成(记作：二氯甲烷：正己烷1：1)，在加热时间为5min，萃取温度为80℃，萃取压力1500psi，萃取循环为3次，冲洗体积为40％萃取池体积的条件下对样品进行萃取，得到提取液。提取液氮吹至干，残渣用4mL体积百分浓度50％甲醇水溶液涡旋复溶，取上清液于10000r/min离心5min，过0.22μmPTFE滤膜，上机检测。检测方法采用有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法。

各有机磷酸酯的回收率见图4，磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为51％、66％、58％、23％、4％、39％、69％、60％、45％、40％、58％、63％；平均回收率为48％；RSD为2％-11％(n＝5)。可见，二氯甲烷与正己烷作为萃取溶剂一步加速溶剂萃取，12种有机磷酸酯TBEP、TCEP、TBP、TEP、TMP、TPPA、TCPP、TPP、CDPP、TDCPP、TCP和EHDPP回收率较低，达不到检测要求。

由图4可看出，与实施例2中甲酸体积百分比0.5％的甲酸化乙腈和正己烷依次进行两次萃取相比，对比例1运用体积百分比0.5％甲酸化乙腈/正己烷(1:1，v/v)作为萃取溶剂进行一次萃取的12种有机磷酸酯的回收率总体偏低，仅TCPP、TPP回收率相当，其余10种有机磷酸酯回收率明显低于实施例2(P<0.05，差异显著)。对比例2中，TPPA、TPP、CDPP、TDCPP、TCP、EHDPP极性相对较弱，使用极性较强的萃取溶剂体积百分比0.5％甲酸化乙腈/甲醇(1:1，v/v)进行萃取回收率低(均小于等于50％)，12种有机磷酸酯平均回收率低于50％；与实施例2相比，对比例2中12种有机磷酸酯的回收率总体偏低，12种有机磷酸酯回收率明显低于实施例2(P<0.05，差异显著)。对比例3中，由于TEP、TMP极性强，使用极性较弱的萃取溶剂二氯甲烷/正己烷(1:1，v/v)，TEP和TMP两种物质回收率在30％之下，其余10种有机磷酸酯回收率也偏低；与实施例2相比，对比例3中12种有机磷酸酯的回收率总体偏低，12种有机磷酸酯回收率明显低于实施例2(P<0.05，差异显著)。对比结果表明，本发明提出的在萃取池内加入净化材料(PSA/弗罗里硅土/碱性氧化铝)的条件下，依次注入甲酸体积百分比0.5％的甲酸化乙腈和正己烷进行两次萃取，可实现对宽极性范围内有机磷酸酯的高效准确的检测。

对比例4

除了“在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g净化材料(PSA)、1.0g待测米粉样品、3g第二硅藻土。”之外，其余操作同实施例2。

结果如图3所示，磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为88％、81％、81％、50％、24％、63％、87％、87％、72％、86％、67％、68％；平均回收率为71％；RSD为5％-15％(n＝3)。可见，PSA作为净化材料结合两步加速溶剂萃取，TEP和TMP的回收率小于等于50％，TPPA、TCP和EHDPP回收率较低，达不到检测要求。

对比例5

除了“在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g净化材料(弗罗里硅土)、1.0g待测米粉样品、3g第二硅藻土。”之外，其余操作同实施例2。

结果如图3所示，磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为62％、82％、72％、74％、79％、62％、61％、88％、63％、64％、56％、60％；平均回收率为69％；RSD为5％-15％(n＝3)。可见，弗罗里硅土作为净化材料结合两步加速溶剂萃取，7种有机磷酸酯TBEP、TPPA、TCPP、CDPP、TDCPP、TCP和EHDPP的回收率较低，达不到检测要求。

对比例6

除了“在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g净化材料(碱性氧化铝)、1.0g待测米粉样品、3g第二硅藻土。”之外，其余操作同实施例2。

结果如图3所示，磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为85％、74％、79％、62％、67％、63％、83％、85％、62％、76％、71％、69％；平均回收率为73％；RSD为5％-15％(n＝3)。可见，碱性氧化铝作为净化材料结合两步加速溶剂萃取，5种有机磷酸酯TEP、TMP、TPPA、CDPP和EHDPP的回收率较低，达不到检测要求。

对比例7

除了“在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g由PSA和弗罗里硅土组成的净化材料(其中，PSA与弗罗里硅土的质量比为1:1)、1.0g待测米粉样品、3g第二硅藻土。”之外，其余操作同实施例2。

结果如图3所示，磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为82％、84％、84％、50％、55％、71％、81％、83％、77％、84％、71％、69％；平均回收率为74％；相对标准偏差(RSD)为5％-15％(n＝3)。可见，PSA与弗罗里硅土的质量比为1:1作为净化材料结合两步加速溶剂萃取，3种有机磷酸酯TEP、TMP和EHDPP的回收率较低，达不到检测要求。

对比例8

除了“在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g由PSA和碱性氧化铝组成的净化材料(其中，PSA与碱性氧化铝的质量比为2:1)、1.0g待测米粉样品、3g第二硅藻土。”之外，其余操作同实施例2。

结果如图3所示，磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为74％、71％、70％、31％、27％、55％、63％、68％、58％、66％、57％、64％；平均回收率为59％；相对标准偏差(RSD)为5％-15％(n＝3)。可见，PSA与碱性氧化铝的质量比为2:1作为净化材料结合两步加速溶剂萃取，9种有机磷酸酯TEP、TMP、TPPA、TCPP、TPP、CDPP、TDCPP、TCP和EHDPP的回收率较低，达不到检测要求。

对比例9

除了“在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入2g第一硅藻土、0.1g由弗罗里硅土与碱性氧化铝组成的净化材料(其中，弗罗里硅土与碱性氧化铝的质量比为2:1)、1.0g待测米粉样品、3g第二硅藻土。”之外，其余操作同实施例2。

结果如图3所示，磷酸三(2-正丁氧乙酸酯)、磷酸三(2-氯乙基)酯、磷酸三丁酯、磷酸三乙酯、磷酸三甲酯、磷酸三苯酯、磷酸三(2-氯异丙基)酯、磷酸三丙酯、磷酸甲苯二苯酯、磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯、磷酸三甲苯酯、磷酸2-乙基己基二苯酯的回收率分别为82％、78％、84％、46％、36％、74％、68％、79％、83％、88％、107％、76％；平均回收率为75％；相对标准偏差(RSD)为5％～15％(n＝3)。可见，弗罗里硅土与碱性氧化铝的质量比为2:1作为净化材料结合两步加速溶剂萃取，3种有机磷酸酯TEP、TMP和TCPP的回收率较低，达不到检测要求。

将米粉样品换成小麦粉或玉米粉，检测结果与米粉相当。说明本发明样品处理方法适用于米粉、小麦粉、玉米粉等中的一种或两种以上食品样品。本发明限定范围内任意参数的组合均可实现本发明的效果。在此不再赘述。

Claims (9)

1.一种食品中有机磷酸酯类污染物检测的样品处理方法，其特征在于，包括步骤：

在不锈钢萃取池底部垫入玻璃纤维滤纸后依次装入第一硅藻土、净化材料、食品样品和第二硅藻土，注入第一萃取溶剂进行第一加速溶剂萃取，得到第一萃取液，再注入第二萃取溶剂进行第二加速溶剂萃取，得到第二萃取液，合并第一萃取液和第二萃取液，吹干，得到处理后食品样品；

所述净化材料由乙二胺-N-丙基硅烷、弗罗里硅土和碱性氧化铝组成；

所述食品包括米粉、小麦粉、玉米粉中的一种或两种以上；

所述第一萃取溶剂选用甲酸化乙腈，所述甲酸化乙腈中甲酸的体积百分比为0.5％；

所述第二萃取溶剂选用正己烷。

2.根据权利要求1所述的样品处理方法，其特征在于，所述第一硅藻土、净化材料、食品样品和第二硅藻土的质量比为2-3：0.05-0.2：1：2-3。

3.根据权利要求2所述的样品处理方法，其特征在于，所述第一硅藻土、净化材料、食品样品和第二硅藻土的质量比为2：0.1：1：3。

4.根据权利要求1所述的样品处理方法，其特征在于，所述净化材料中乙二胺-N-丙基硅烷、弗罗里硅土、碱性氧化铝的质量比为0.5-10：1-10：0.1-10。

5.根据权利要求4所述的样品处理方法，其特征在于，所述净化材料中乙二胺-N-丙基硅烷、弗罗里硅土、碱性氧化铝的质量比为2-2.1：2：0.9-1。

6.根据权利要求1所述的样品处理方法，其特征在于，所述第一加速溶剂萃取的条件包括：萃取温度60℃-100℃，萃取压力1000psi-2000psi，静态萃取时间为5min-10min；萃取循环至少2次；

所述第二加速溶剂萃取的条件包括：萃取温度60℃-100℃，萃取压力1000psi-2000psi，静态萃取时间为5min-10min；萃取循环至少2次；

所述第一加速溶剂萃取的条件与所述第二加速溶剂萃取的条件相同或者不同。

7.一种食品中有机磷酸酯类污染物检测方法，其特征在于，采用权利要求1-6任一项所述样品处理方法得到的处理后食品样品作为测试样品。

8.根据权利要求7所述的食品中有机磷酸酯类污染物检测方法，其特征在于，取测试样品，直接采用有机磷酸酯类污染物的气相色谱-串联质谱检测法、有机磷酸酯类污染物的液相色谱-串联质谱检测法中的一种或多种方法检测测试样品中的有机磷酸酯类污染物。

9.根据权利要求8所述的食品中有机磷酸酯类污染物检测方法，其特征在于，所述有机磷酸酯类污染物的液相色谱-串联质谱检测法包括有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法，所述有机磷酸酯类污染物的超高效液相色谱-串联质谱检测法的色谱分析条件包括：

流动相A：甲醇；流动相B：含体积百分比0.1％甲酸的2mmol/L甲酸铵水溶液；梯度洗脱程序：流动相B在体积百分比80％下保持1min，在接下来的1min内降至体积百分比5％并保持2min，最后直接升至体积百分比80％并保持2min，余量为流动相A，总洗脱时间为6min。