CN115184499B - 一种有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同检测方法及应用 - Google Patents

一种有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同检测方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同检测方法及应用。包括以下步骤：样品冷干均质，加入回收率指示剂和萃取溶剂，使用加速溶剂萃取法提取化合物，萃取液浓缩后置换溶剂，分成A和B两等份；试样A使用酸性层析柱净化有机氯农药和卤代阻燃剂，试样B使用中性层析柱净化有机磷酸酯；洗脱液浓缩后定容，加入内标；样品中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯分别使用气相色谱‑电子捕获器、气相色谱质谱联用仪和液相色谱质谱联用仪测定分析。本发明具有回收率高、重现性好和灵敏度高的特点，适用于标准化的制定。

Description

一种有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同检测方法 及应用
技术领域
本发明涉及分析化学技术领域，具体涉及一种有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同检测方法及应用。
背景技术
有机氯农药作为一种高效广谱杀虫剂，是世界上应用最广泛的化学品之一。它的化学性质稳定，毒性大，脂溶性强，不易分解，具有持久性、生物累积性和潜在致癌性。卤化阻燃剂和有机磷酸酯被广泛应用于各种商品以提高产品安全性，其已被证实是内分泌干扰物，并具有生殖毒性与遗传毒性。
生物样品监测是评估持久性有机污染物环境暴露程度及其潜在健康效应的有效手段之一。有机氯农药或溴代阻燃剂等持久性、疏水性较强的化合物进入生物体后会被生物储存于脂肪组织，并缓慢地随粪便排出。显然，粪便作为一种有效且非侵入性生物监测样本类型，可以以最小的创伤和干扰来提供生物体内化学品暴露信息。研究发现人类血清中多溴联苯醚浓度和粪便中的浓度存在显著正相关性。因此，检测生物粪便中持久性有机污染物对分析生物的暴露风险有着重要的意义。
目前鲜有研究对粪便中持久性有机污染物进行分析，归因于粪便样品中干扰物复杂，难以净化，且有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯三类化合物所包含单体化合物数量多，物化性质差异大，对粪便中此三类化合物的协同分析监测提出挑战，因而亟需一种粪便中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同提取检测方法以提高分析准确性和高效性。
发明内容
本发明旨在建立一种有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯单体化合物分析检测流程，采用以下技术方案：
样品中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯协同提取分析，包括以下步骤：样品预处理、样品萃取、样品净化、样品浓缩定容和样品分析；所述样品分析中分析目标含有13种有机氯农药、30种卤代阻燃剂和16种有机磷酸酯。
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同检测方法。
本发明的另一目的在于，提供上述有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同检测方法的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同检测方法，具体步骤如下：
(1)将样品干燥并均质化；
(2)取均质化后的样品，萃取，浓缩后分成等质量的两等份试样A和试样B；
(3)将试样A加入酸性复合硅胶柱，洗脱，浓缩后得到浓缩的洗脱液A；
(4)将试样B加入中性复合层析柱，洗脱，浓缩后得到浓缩的洗脱液B；
(5)取浓缩的洗脱液A，使用气相色谱仪电子捕获检测器(GC-ECD)检测有机氯农药；
(6)取浓缩的洗脱液A，使用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)检测卤代阻燃剂；
(7)取浓缩的洗脱液B，使用液相色谱质谱联用仪(LC-MS/MS)检测有机磷酸酯。
优选的，所述的步骤(1)中的干燥为冷冻干燥，进一步优选为-47℃下冷冻干燥48h。
优选的，所述的步骤(1)中的均质化为用研钵磨成粉末。
优选的，所述的步骤(1)中的样品为粪便样品。
优选的，所述的步骤(1)中的干燥为冷冻干燥。
优选的，所述的步骤(1)中还包含以下步骤：
加入有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯回收率指示剂。
优选的，上述的回收率指示剂中有机氯农药为Delta-HCH和Epsilon-HCH；卤代阻燃剂为BDE-77和BDE-166；有机磷酸酯为d12-TCEP和MTPP。
优选的，所述的步骤(2)中的萃取为使用加速溶剂萃取仪(ASE)萃取。
优选的，所述的步骤(2)中的萃取条件为萃取温度80～100℃；萃取溶剂正己烷:二氯甲烷(体积比：1～2:1～2)；萃取压力1000～2000psi，热平衡时间3～7min，静态萃取时间8～12min，淋洗体积10～20mL，循环次数2～4次，清洗1～2次，溶剂用量40～50mL；进一步优选为萃取温度90℃，萃取溶剂正己烷:二氯甲烷(体积比：1:1)，萃取压力1500psi，热平衡时间5min，静态萃取时间10min，淋洗体积15mL，循环次数3次，清洗2次，溶剂用量：45mL。
优选的，所述的步骤(2)中浓缩的具体步骤为：
往浓缩管装入萃取液前准确称量其重量，加入萃取液，萃取液在温和氮气下浓缩后使用1mL正己烷溶剂置换两次。
优选的，所述的步骤(2)中样品分成等质量的两等份的具体步骤为：
将样品定容至4mL左右，称量样品与浓缩管总重量，得到样品重量后，转移一半重量样品到另一个浓缩管中，得到两等份样品。
优选的，所述的步骤(3)中使用的酸性复合硅胶柱的填料由下至上分别为：中性氧化铝，中性二氧化硅，酸性二氧化硅和无水硫酸钠；进一步优选为中性氧化铝2～4cm，中性二氧化硅2～4cm，酸性二氧化硅5～7cm和无水硫酸钠1～2cm，更进一步优选为中性氧化铝3cm，中性二氧化硅3cm，酸性二氧化硅6cm和无水硫酸钠1cm；使用前用30mL的正己烷淋洗复合硅胶柱。
优选的，上述中性氧化铝、中性二氧化硅分别加入3％的超纯水，平衡12h后使用；超纯水作用为去活化。
优选的，上述酸性二氧化硅的制备方法为中性二氧化硅和浓硫酸(分析纯)按照质量比为56:44混合均匀。
优选的，所述的步骤(3)中使用的酸性复合硅胶柱为含有聚四氟乙烯塞子的玻璃层析柱，内径1～2cm，长2～30cm；进一步优选为内径1cm，长25cm。
优选的，所述的步骤(3)中的洗脱为使用洗脱溶剂洗脱，进一步优选为使用正己烷与二氯甲烷的混合溶剂进行洗脱，更进一步优选为使用40mL正己烷与二氯甲烷、体积比为1:1的混合溶剂进行洗脱。
优选的，所述的步骤(3)中的浓缩的具体步骤为：将洗脱液置于浓缩管中，用温和氮气流浓缩至0.5～1mL并用1mL正己烷置换1～2次，转移至尖底衬管中，再次浓缩至100～200μL；进一步优选为用温和氮气流浓缩至0.5mL并用1mL正己烷置换2次，转移至尖底衬管中，再次浓缩至150μL。
优选的，所述的步骤(4)中使用的中性复合层析柱填料由下至上分别为：中性氧化铝，中性二氧化硅，弗罗里硅土和无水硫酸钠；进一步优选为中性氧化铝2～4cm，中性二氧化硅2～4cm，弗罗里硅土2～4cm和无水硫酸钠1～2cm，更进一步优选为中性氧化铝3cm，中性二氧化硅3cm，弗罗里硅土3cm和无水硫酸钠1cm；使用前用30mL的正己烷淋洗复合层析柱。
优选的，上述中性氧化铝、中性二氧化硅和弗罗里硅土分别加入3％的超纯水，平衡12h后使用；超纯水作用为去活化。
优选的，所述的步骤(4)中使用的酸性复合硅胶柱为含有聚四氟乙烯塞子的玻璃层析柱，内径1～2cm，长2～30cm；进一步优选为内径1cm，长25cm。
优选的，所述的步骤(4)中的洗脱为使用洗脱溶剂洗脱，进一步优选为使用正己烷与二氯甲烷的混合溶剂和乙酸乙酯进行洗脱，更进一步优选为使用40mL正己烷与二氯甲烷、体积比为1:1的混合溶剂和40mL乙酸乙酯进行洗脱。
优选的，所述的步骤(4)中的浓缩的具体步骤为：将洗脱液置于浓缩管中，用温和氮气流浓缩至0.5～1mL后使用1～2mL正己烷置换一次，用1～2mL异丙醇置换一次，1～2mL甲醇置换一次，转移至尖底衬管中，再次浓缩至100～200μL；进一步优选为用温和氮气流浓缩至0.5mL后使用1mL正己烷置换一次，1mL异丙醇置换一次，1mL甲醇置换一次，转移至尖底衬管中，再次浓缩至150μL。
优选的，所述的步骤(5)在浓缩的洗脱液A中加入有机氯农药的内标，进一步优选为加入PCB155。
优选的，所述的步骤(5)中采用气相色谱-电子捕获探测器(GC-ECD)对步骤(3)中浓缩后洗脱液中的有机氯农药进行检测，色谱柱采用DB-5(柱长60m，内径0.25mm，液膜厚度0.1μm)。色谱柱升温程序为：初始温度100℃，保持1min，以1℃/min升至240℃；再以10℃/min升至280℃，保持20min。
优选的，所述的步骤(5)中检测的有机氯农药包括α-HCH、HCB、β-HCH、γ-HCH、γ-chlordane、α-Chlordane、T-Nona、p,p'-DDE、o,p'-DDD、p,p'-DDD、o,p'-DDT、EndosulfanSulfate和p,p'-DDT中的至少一种。
优选的，所述的步骤(6)在浓缩的洗脱液A中加入卤代阻燃剂的内标，进一步优选为加入BDE-118和BDE-181。
优选的，所述的步骤(6)中采用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)在电子俘获负电离(ECNI)模式下对步骤(3)中浓缩后洗脱液中的卤代阻燃剂进行检测，气相色谱仪参数：色谱柱选用Rtx-1614毛细管色谱柱(柱长15m，内径0.25mm，液膜厚度0.1μm)；载气为高纯度氦气(99.999％)；试剂气体为高纯度甲烷(99.97％)，流量保持在1.5mL/min；脉冲不分流进样模式，进样量为1μL。升温程序为：100℃，保持2min，以25℃/min升到250℃，然后以3℃/min升至270℃，然后25℃/min升到300℃，最后保持6min。进样口、传输线、离子源和四极杆的温度分别设定为240℃、280℃、200℃和106℃。
优选的，所述的步骤(6)中检测的卤代阻燃剂包括BDE-15、pTBX、PBBZ、BDE-17、BDE-28、BDE-49、BDE-71、BDE-47、BDE-66、BDE-100、BDE-119、BDE-99、EHTBB、BDE-85、BDE-126、BDE-154、BDE-153、α-HBCD、BDE-138、BDE-156、BDE-184、BDE-183、BDE-191、Syn-DP、BDE-197、Anti-DP、BDE-196、BDE-207、BDE-206和BDE-209中的至少一种。
优选的，所述的步骤(7)在浓缩的洗脱液B中加入有机磷酸酯的内标，进一步优选为加入d15-TEP、d15-TPP、d21-TPRP、d27-TNBP和d15-TDCIPP。
优选的，所述的步骤(7)中采用液相色谱质谱联用仪(LC-MS/MS)在电喷雾电离(ESI)模式下对步骤(4)中浓缩后洗脱液中的有机磷酸酯进行检测。高效液相色谱仪参数：色谱柱选用Acquity UPLC BEH C18柱(柱长50mm，内径2.1mm，填料粒径：1.7μm，沃特世)；流动相：A相为含有0.1％甲酸的超纯水，B相为含有0.1％甲酸的甲醇。液相梯度洗脱程序为：
喷雾针压力、气体流量、气体温度、毛细管电压、鞘气温度和鞘气流量分别设定为40psi、10L/min、260℃、3500V、375℃和12L/min。质谱扫描方式：多反应监测(MRM模式)。
优选的，所述的步骤(7)中检测的有机磷酸酯为TEP、TIPRP、TPRP、TNBP、TCEP、TCIPP、TPEP、TDCIPP、TBOEP、EHDP、TPHP、TOTP、TMTP、TIPPP、TDMPP和TDBPP中的至少一种。
上述检测方法在检测粪便样品中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯含量中的应用。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
本方法是针对样品中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯进行同步提取，分步净化，具有净化效果好、回收率高和重现性高的特点，可以减少所需的样品量和节省处理时间；分别使用气相色谱-电子捕获器(GC-ECD)、气相色谱质谱联用仪(GC-MS)和液相色谱质谱联用仪(LC-MS/MS)分析定量有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯，具有更低的检出限和更高的准确性。本发明能够对粪便中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯进行提取、净化和定量分析以适用于标准化的制定。
附图说明
图1为实施例1的样品中气相色谱质谱联用仪测定的卤代阻燃剂的总离子流图；
图2为实施例1的样品中液相色谱质谱联用仪测定的有机磷酸酯的总离子流图；
图3为实施例1的样品中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的加标回收率平均值(％)结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
下面实施方案中若未注明具体试验条件，则通常按照常规试验条件或按照试剂公司所建议的试验条件。所使用的材料、试剂等，若无特殊说明，均为从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
一种有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同检测方法，具体操作步骤如下：
(1)萃取池及所有的玻璃仪器使用前分别用丙酮、二氯甲烷、正己烷三种有机溶剂清洗。将从动物保护区采集的猴子粪便样品在-47℃下冷冻干燥48h，用研钵磨成粉末分装到铝箔纸中。
(2)称量0.5g冷冻干燥后的粪便样品于玻璃管中，加入0.1mL含有已知量的有机氯农药、卤代阻燃剂、有机磷酸酯目标物和回收率指示剂(回收率指示物中，有机氯农药的浓度为20ng/mL的Delta-HCH和Epsilon-HCH；卤代阻燃剂为6ng/mL的BDE-77和5ng/mL的BDE-166；有机磷酸酯为450ng/mL的的d12-TCEP和MTPP)的溶液，混匀得到加标后的样品。加标后的样品使用加速溶剂萃取仪得到萃取液，萃取条件为：萃取温度：90℃；萃取溶剂：正己烷:二氯甲烷(体积比：1:1)；萃取压力：1500psi；热平衡时间：5min；静态萃取时间：10min；淋洗体积：15mL；循环次数：3次；清洗：2次；溶剂用量：45mL。样品以2500rpm离心10min，将上层萃取液转移至干净的浓缩管中，分成两等份。具体操作为：浓缩管装入萃取液前准确称量其重量，加入萃取液，萃取液在温和氮气下浓缩后使用1mL正己烷溶剂置换两次，使用正己烷将样品定容至4mL，称量样品与浓缩管总重量，得到样品重量后，转移一半重量样品到另一个浓缩管中，得到质量相等的A和B两份试样；
(3)试样A用于测定有机氯农药和卤代阻燃剂，使用酸性复合硅胶柱净化。所用的层析柱为含有聚四氟乙烯塞子的玻璃层析柱，内径：1cm，长：25cm，层析柱中的填料从下至上为中性氧化铝(3cm，3％水去活化)，中性二氧化硅(3cm，3％水去活化)，酸性二氧化硅(6cm，中性硅胶:浓硫酸质量比为56:44，3％水去活化)和无水硫酸钠(1cm)，使用前用30mL的正己烷淋洗填料。加载2mL样品于上述酸性复合层析柱后使用40mL正己烷:二氯甲烷(体积比：1:1)洗脱目标化合物。洗脱液置于浓缩管中，用温和氮气流浓缩至0.5mL并用正己烷置换2次，转移至尖底衬管中，再次浓缩至150μL，得到浓缩后的洗脱液A。
(4)试样B用于测定有机磷酸酯，使用中性复合层析柱净化。所用的层析柱为含有聚四氟乙烯塞子的玻璃层析柱，内径：1cm，长：25cm，层析柱中的填料从下至上为中性氧化铝(3cm，3％水去活化)，中性二氧化硅(3cm，3％水去活化)，弗罗里硅土(3cm，3％水去活化)和无水硫酸钠(1cm)，使用前用30mL的正己烷淋洗填料。加载2mL的样品于上述层析柱后使用40mL正己烷:二氯甲烷(体积比：1:1)和40mL乙酸乙酯洗脱目标物。80mL的洗脱液合并于浓缩管中，使用温和的氮气浓缩至0.5mL后使用1mL正己烷置换一次，1mL异丙醇置换一次，1mL甲醇置换一次，转移至尖底衬管中，再次浓缩至150μL，得到浓缩后的洗脱液B。
(5)取步骤(3)中得到的浓缩的洗脱液A，加入内标PCB155，采用气相色谱仪(GC)-63Ni电子捕获探测器(ECD)检测有机氯农药，色谱柱采用DB-5(柱长60m，内径0.25mm，液膜厚度0.1μm)。色谱柱升温程序为：初始温度100℃，保持1min，以1℃/min升至240℃；再以10℃/min升至280℃，保持20min。
(6)取步骤(3)中得到的浓缩的洗脱液A，加入内标BDE-118和BDE-181，采用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)在电子俘获负电离(ECNI)模式下检测卤代阻燃剂。气相色谱仪参数：色谱柱选用Rtx-1614毛细管色谱柱(柱长15m，内径0.25mm，液膜厚度0.1μm)；载气为高纯度氦气(99.999％)；试剂气体为高纯度甲烷(99.97％)，流量保持在1.5mL/min；脉冲不分流进样模式，进样量为1μL。升温程序为：100℃，保持2min，以25℃/min升到250℃，然后以3℃/min升至270℃，然后25℃/min升到300℃，最后保持6min。进样口、传输线、离子源和四极杆的温度分别设定为240℃、280℃、200℃和106℃。
(7)取步骤(4)中得到的浓缩的洗脱液B，加入内标d15-TEP、d15-TPP、d21-TPRP、d27-TNBP和d15-TDCIPP，采用液相色谱质谱联用仪(LC-MS/MS)在电喷雾电离(ESI)模式下检测有机磷酸酯。超高效液相色谱仪参数：色谱柱选用Acquity UPLC BEH C18柱(柱长50mm，内径2.1mm，填料粒径：1.7μm，沃特世)；流动相：A相为含有0.1％甲酸的超纯水，B相为含有0.1％甲酸甲醇。
表1液相梯度洗脱程序
喷雾针压力、气体流量、气体温度、毛细管电压、鞘气温度和鞘气流量分别设定为40psi、10L/min、260℃、3500V、375℃和12L/min。质谱扫描方式：多反应监测(MRM模式)。
结果与数据分析：按照上述方法进行加标回收率实验，分别对13种有机氯农药、30种卤代阻燃剂和16种有机磷酸酯进行测定，图1为实施例1的样品中气相色谱质谱联用仪测定的卤代阻燃剂的总离子流图；图2为实施例1的样品中液相色谱质谱联用仪测定的有机磷酸酯的总离子流图；表2为实施例1粪便中检测的目标化合物缩写、CAS号、回收率指示剂(SS)、内标(IS)和仪器分析定性定量离子。图3为实施例1粪便中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的加标回收率平均值(％)。
有机氯农药单体平均回收率在65～130％之间，标准误差(SD)<15％。卤代阻燃剂和有机磷酸酯的平均回收率分别为67％～113％和66％～120％，标准误差均小于12％。回收率指示剂的平均回收率均在70～120％之间，表明该方法对于粪便中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯有较好的回收率及重现性。本发明实现了对粪便中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯多种化合物同步提取、协同检测的可能，具有处理分析时间短、灵敏度高、分离效果好等特点。
表2实施例1粪便中检测的目标化合物缩写、CAS号、回收率指示剂(SS)、内标(IS)和仪器分析定性定量离子
对比例1
实验材料和步骤同实施例1，区别在于步骤(3)和步骤(4)净化过程使用硅胶柱(6cm)净化样品，洗脱溶剂依次为40mL正己烷:二氯甲烷(体积比：1:1)和40mL丙酮:二氯甲烷(体积比：7:3)洗脱目标物。样品中卤代阻燃剂和有机磷酸酯含量使用实施例1中仪器分析方法测定。
对比例2
实验材料和步骤同实施例1，区别在于步骤(3)和步骤(4)净化过程使用复合层析柱净化。层析柱中的填料从下至上为中性氧化铝(3cm)，中性二氧化硅(3cm，3％水去活化)，弗罗里硅土(3cm，3％水去活化)和无水硫酸钠(1cm)，使用前用30mL的正己烷淋洗填料。样品加载于上述层析柱后使用依次为40mL正己烷:二氯甲烷(体积比：1:1)和40mL丙酮:二氯甲烷(体积比：7:3)洗脱目标物。样品中卤代阻燃剂和有机磷酸酯含量使用实施例1中仪器分析方法测定。
对比例3
实验材料和步骤同实施例1，区别在于步骤(3)和步骤(4)净化过程使用C18柱(1g)净化样品，洗脱溶剂为12mL乙腈。洗脱液在温和氮气下浓缩至干，复溶在1mL正己烷中，随后使用复合层析柱进一步净化样品。层析柱中的填料从下至上为中性氧化铝(3cm)，中性二氧化硅(3cm，3％水去活化)，弗罗里硅土(3cm，3％水去活化)和无水硫酸钠(1cm)，使用前用30mL的正己烷淋洗填料。样品加载于上述层析柱后，洗脱液依次为40mL正己烷:二氯甲烷(体积比：1:1)和40mL丙酮:二氯甲烷(体积比：7:3)。样品中卤代阻燃剂和有机磷酸酯含量使用实施例1中仪器分析方法测定。
对比例4
实验材料和步骤同实施例1，区别在于步骤(3)和步骤(4)净化过程使用C18柱(1g)净化样品，洗脱溶剂为12mL乙腈。洗脱液在温和氮气下浓缩至干，复溶在1mL正己烷中，随后使用复合层析柱进一步净化样品。层析柱中的填料从下至上为中性氧化铝(3cm)，中性二氧化硅(3cm，3％水去活化)，弗罗里硅土(3cm，3％水去活化)和无水硫酸钠(1cm)，使用前用30mL的正己烷淋洗填料。样品加载于上述层析柱后，洗脱液依次为40mL正己烷:二氯甲烷(体积比：1:1)和40mL丙酮:二氯甲烷(体积比：7:3)。样品中卤代阻燃剂和有机磷酸酯含量使用实施例1中仪器分析方法测定。
使用对比例1、2、3和4方法处理粪便样品后卤代阻燃剂目标物的回收率范围分别为40～135％、46～278％、0～181％和0～228％；有机磷酸酯目标物的回收率范围分别为7～134％、0～125％、20～190％和81～199％。基于质控数据结果，使用上述方法无法达到质量控制与质量保证要求。
表3使用比例1、2、3和4方法处理粪便样品后卤代阻燃剂和有机磷酸酯的回收率均值与标准偏差(％)
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实施例2
采用实施例1中的处理分析方法测定实际动物粪便样本中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯含量。这些动物粪便样本收集地区包括动物保护区(n＝10)、生物站(n＝12)和国家公园(n＝40)。
表4为动物粪便中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯回收率指示剂的回收率均值(％)、回收率中值(％)和标准偏差(SD)。其中，有机氯农药的回收率指示剂Epsilon-HCH和Delta-HCH的平均回收率分别为79±9.0％和78±11％；卤代阻燃剂的回收率指示剂BDE-77和BDE-166的平均回收率分别为86±3.5％、82±20％和48±7.6％；有机磷酸酯的回收率指示剂和MTPP的平均回收率分别为97±19％和93±15％。
动物保护区、生物站和国家公园粪便样本中有机氯农药的中值浓度总和分别为27、10和141.5ng/g，检出率最高的单体分别为α-HCH、β-HCH和HCB(检出率大于80％)。对于卤代阻燃剂，动物保护区中BDE-209、DPs和DBDPE的检出率为100％，生物站中DBDPE的检出率为75％，国家公园中BDE-47的检出率大于90％。其中，国家公园中卤代阻燃剂的总浓度最高，为24.5ng/g。粪便样品中有机磷酸酯TBOEP、TCIPP、TEP和TNBP的检测频率均高于60％，其中含量最高的是TBOEP(390ng/g)，其次是TCIPP(180ng/g)。
表4动物粪便中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯回收率指示剂的回收率均值(％)、中值(％)和标准偏差(SD)
从以上结果来看本发明方法可以用于检测实际的粪便样品，可以对粪便中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯进行同时提取，分步净化，协同检测。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯的协同检测方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）将样品干燥并均质化；
（2）取均质化后的样品，萃取，浓缩后分成等质量的两等份试样A和试样B；
（3）将试样A加入酸性复合硅胶柱，洗脱，浓缩后得到浓缩的洗脱液A；
（4）将试样B加入中性复合层析柱，洗脱，浓缩后得到浓缩的洗脱液B；
（5）取浓缩的洗脱液A，使用气相色谱仪电子捕获检测器检测有机氯农药；
（6）取浓缩的洗脱液A，使用气相色谱质谱联用仪检测卤代阻燃剂；
（7）取浓缩的洗脱液B，使用液相色谱质谱联用仪检测有机磷酸酯；
所述的步骤（2）中的萃取为使用加速溶剂萃取仪萃取；
所述的步骤（2）中的萃取条件为萃取温度80～100 ℃；萃取溶剂正己烷:二氯甲烷，体积比：1～2:1～2；萃取压力1000～2000 psi，热平衡时间3～7 min，静态萃取时间8～12min，淋洗体积10～20 mL，循环次数2～4 次，清洗1～2 次，溶剂用量40～50 mL；
所述的步骤（3）中使用的酸性复合硅胶柱的填料由下至上分别为：中性氧化铝3 cm，中性二氧化硅3 cm，酸性二氧化硅6 cm和无水硫酸钠1 cm；
所述的步骤（3）中的洗脱为使用正己烷与二氯甲烷的混合溶剂进行洗脱；
所述的步骤（4）中使用的中性复合层析柱填料由下至上分别为：中性氧化铝3cm，中性二氧化硅3 cm，弗罗里硅土3cm和无水硫酸钠1cm；
所述的步骤（4）中的洗脱为使用正己烷与二氯甲烷的混合溶剂和乙酸乙酯进行洗脱；
所述的步骤（5）中检测的有机氯农药包括α-HCH、HCB、β-HCH、γ-HCH、γ-chlordane、α-Chlordane、T-Nona、p,p'-DDE、o,p'-DDD、p,p'-DDD、o,p'-DDT、Endosulfan Sulfate和p, p'-DDT中的至少一种；
所述的步骤（6）中检测的卤代阻燃剂包括BDE-15、pTBX、PBBZ、BDE-17、BDE-28、BDE-49、BDE-71、BDE-47、BDE-66、BDE-100、BDE-119、BDE-99、EHTBB、BDE-85、BDE-126、BDE-154、BDE-153、α-HBCD、BDE-138、BDE-156、BDE-184、BDE-183、BDE-191、Syn-DP、BDE-197、Anti-DP、BDE-196、BDE-207、BDE-206和BDE-209中的至少一种；
所述的步骤（7）中检测的有机磷酸酯为TEP、TIPRP、TPRP、TNBP、TCEP、TCIPP、TPEP、TDCIPP、TBOEP、EHDP、TPHP、TOTP、TMTP、TIPPP、TDMPP和TDBPP中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：
所述的步骤（1）中的样品为粪便样品。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：
所述的步骤（1）中还包含以下步骤：
加入有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯回收率指示剂；
所述的回收率指示剂中有机氯农药为Delta-HCH和Epsilon-HCH；卤代阻燃剂为BDE-77和BDE-166；有机磷酸酯为d 12-TCEP和MTPP。
4.权利要求1～3任一检测方法在检测粪便样品中有机氯农药、卤代阻燃剂和有机磷酸酯含量中的应用。
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