CN108226315B - 一种检测多黏菌素e残留量的分析方法 - Google Patents

一种检测多黏菌素e残留量的分析方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108226315B
CN108226315B CN201611161739.6A CN201611161739A CN108226315B CN 108226315 B CN108226315 B CN 108226315B CN 201611161739 A CN201611161739 A CN 201611161739A CN 108226315 B CN108226315 B CN 108226315B
Authority
CN
China
Prior art keywords
polymyxin
mobile phase
sample
residual quantity
20mmol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201611161739.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108226315A (zh
Inventor
冯军
张喜全
薛春佳
夏春光
吴勇
江竹莲
朱裕辉
姜旖旎
郭新昆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Duomirui Biological Technology Co ltd
Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Duomirui Biological Technology Co ltd
Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Duomirui Biological Technology Co ltd, Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry, Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd filed Critical Shanghai Duomirui Biological Technology Co ltd
Priority to CN201611161739.6A priority Critical patent/CN108226315B/zh
Publication of CN108226315A publication Critical patent/CN108226315A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108226315B publication Critical patent/CN108226315B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

本发明属于药物分析领域，涉及一种检测多黏菌素E残留量的分析方法，具体涉及一种检测多黏菌素E甲磺酸钠中多黏菌素E残留量的高效液相色谱(HPLC)分析方法。本发明提供的检测多黏菌素E甲磺酸钠样品中多黏菌素E残留量的高效液相色谱分析方法具有重复性好，灵敏度高的特点，能更好的控制CMS药物的质量，保证用药安全。

Description

一种检测多黏菌素E残留量的分析方法
技术领域
本发明属于药物分析领域，涉及一种检测多黏菌素E残留量的分析方法，具体涉及一种检测多黏菌素E甲磺酸钠中多黏菌素E残留量的高效液相色谱(HPLC)分析方法。
背景技术
近十年革兰氏阴性耐药菌问题日益突出，由多重耐药革兰氏阴性菌所引起的致死率非常高，其中鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌耐药最严重，其临床治疗面临着巨大挑战。2010年8月以来陆续报道的产NDM-1(New Delhi Metallo-β-lactamase 1，I型新德里金属β-内酰胺酶)泛耐药肠杆菌科细菌(以下简称NDM-1细菌，俗称超级细菌)，由于其广泛耐药性导致感染治疗十分困难。国外的研究表明NDM-1细菌仅对多黏菌素E和替加环素敏感。由于替加环素对绿脓杆菌没有活性，而且对特定器官的感染疗效还没有验证。因此，多黏菌素类药物成为了治疗革兰氏阴性耐药菌感染的最后防线，其在临床上主要用于耐药(包括碳青霉烯类抗生素)绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌引起严重感染的治疗。
临床使用的多黏菌素类药物主要有多黏菌素B、多黏菌素E和多黏菌素E甲磺酸钠(Colistimethate sodium，CMS)。硫酸多黏菌素E在我国已上市多年，并且已被中国药典收录(名称为硫酸黏菌素)，而多黏菌素E甲磺酸钠在我国没有上市，在国外作为治疗严重多重耐药性细菌感染的底线药物已经上市多年，已被欧洲药典和美国药典收录。多黏菌素B和多黏菌素E结构中均含有5个游离氨基，这些氨基的存在使得这两种药物具有非常高的抗菌活性，同时也表现出较高的毒性(主要为肾毒性和神经毒性)。对多黏菌素E的5个氨基进行磺基甲基化修饰可以得到多黏菌素E甲磺酸钠(Colistimethate sodium，CMS)。CMS在体内会逐渐转化为多黏菌素E发挥药效作用，其毒性相比于直接使用多黏菌素E显著下降。
由于多黏菌素E毒性较高，需要严格控制其在CMS中的残留量。目前欧洲药典和美国药典均使用硅钨酸法检测游离的多黏菌素E是否超标，试验中采用肉眼进行观察沉淀的多少，误差较大。经试验发现，该法的检测限为0.2％。
发明内容
本发明一方面提供一种检测多黏菌素E甲磺酸钠样品中多黏菌素E残留量的高效液相色谱分析方法，其特征在于，使用亲水填料基质且基质表面键合有弱酸阳离子交换基团的色谱柱，采用梯度洗脱的方式分离多黏菌素E甲磺酸钠和多黏菌素E，在色谱分离设备上记录样品中的多黏菌素E的峰面积以及已知浓度的多黏菌素E的峰面积，按照外标法计算出样品中多黏菌素E的残留量。
在本发明的一些实施方案中，所述亲水填料基质选自交联葡聚糖、交联琼脂糖、羟基化甲基丙烯酸聚合物或亲水硅胶。
在本发明的一些实施方案中，所述弱酸阳离子交换基团为羧甲基。
在本发明的一些实施方案中，所述亲水填料基质且基质表面键合有弱酸阳离子交换基团的色谱柱选自Hitrap CM sepharose FF柱或TSKgel CM-5PW柱。
在本发明的一些实施方案中，其中梯度洗脱使用的流动相为：流动相A为20mmol/L磷酸盐缓冲液，pH6.7；流动相B为20mmol/L磷酸盐缓冲液，1.5M NaClO4，pH6.7。
本发明再一方面提供一种检测多黏菌素E2甲磺酸钠样品中多黏菌素E2残留量的高效液相色谱分析方法，其特征在于，使用亲水填料基质且基质表面键合有弱酸阳离子交换基团的色谱柱，采用梯度洗脱的方式分离多黏菌素E2甲磺酸钠和多黏菌素E2，在色谱分离设备上记录样品中的多黏菌素E2的峰面积以及已知浓度的多黏菌素E2的峰面积，按照外标法计算出样品中多黏菌素E2的残留量。
在本发明的一些实施方案中，所述亲水填料基质选自交联葡聚糖、交联琼脂糖、羟基化甲基丙烯酸聚合物或亲水硅胶。
在本发明的一些实施方案中，所述弱酸阳离子交换基团为羧甲基。
在本发明的一些实施方案中，所述亲水填料基质且基质表面键合有弱酸阳离子交换基团的色谱柱选自Hitrap CM sepharose FF柱或TSKgel CM-5PW柱。
在本发明的一些实施方案中，其中梯度洗脱使用的流动相为：流动相A为20mmol/L磷酸盐缓冲液，pH6.7；流动相B为20mmol/L磷酸盐缓冲液，1.5M NaClO4，pH6.7。
本发明提供的检测多黏菌素E甲磺酸钠样品中多黏菌素E残留量的高效液相色谱分析方法具有重复性好，灵敏度高的特点，能更好的控制CMS药物的质量，保证用药安全。
本发明提供的检测多黏菌素E2甲磺酸钠样品中多黏菌素E2残留量的高效液相色谱分析方法具有重复性好，灵敏度高的特点，能更好的控制CMS药物的质量，保证用药安全。
附图说明
图1：硫酸多黏菌素E及多黏菌素E甲磺酸钠的HPLC分析图(Hitrap CM sepharoseFF柱)。图2：硫酸多黏菌素E2及多黏菌素E2甲磺酸钠的HPLC分析图(Hitrap CM sepharoseFF柱)。图3：硫酸多黏菌素E2及多黏菌素E2甲磺酸钠的HPLC分析图(TSKgel CM-5PW柱)。
具体实施方式
以下实施例用于更好地理解本文所公开的主题，而不是以实施例方式加以限制。
实施例1
色谱柱为Hitrap CM sepharose FF，其填料基质为交联琼脂糖，表面键合羧甲基离子交换基团，柱体积(CV)为5ml。在HPLC分析系统上按照以下条件进行分析：流动相A为20mmol/L磷酸盐缓冲液，pH6.7；流动相B为20mmol/L磷酸盐缓冲液，1.5M NaClO4，pH6.7，设置柱温30℃；设置检测波长为215nm。将多黏菌素E甲磺酸钠用水溶解成100mg/ml；将硫酸多黏菌素E用水溶解成1mg/ml。分别取0.1ml进样于预先用20％B相平衡的色谱柱中，按照以下梯度进行洗脱：20％B,2CV；100％B,6CV。分析图谱参见图1。通过对多黏菌素E峰面积以外标法进行计算，160801批多黏菌素E甲磺酸钠中残留的多黏菌素E含量为0.12％。
实施例2
色谱柱为Hitrap CM sepharose FF，其填料基质为交联琼脂糖，表面键合羧甲基离子交换基团，柱体积(CV)为5ml。在HPLC分析系统上按照以下条件进行分析：流动相A为20mmol/L磷酸盐缓冲液，pH6.7；流动相B为20mmol/L磷酸盐缓冲液，1.5M NaClO4，pH6.7，设置柱温30℃；设置检测波长为215nm。将多黏菌素E2甲磺酸钠用水溶解成100mg/ml；将硫酸多黏菌素E2用水溶解成1mg/ml。分别取0.1ml进样于预先用A相平衡的色谱柱中，按照以下梯度进行洗脱：100％A,2CV；20％B,3CV；100％B,6CV。分析图谱参见图2。通过对多黏菌素E2峰面积以外标法进行计算，160601批多黏菌素E2甲磺酸钠中残留的多黏菌素E2含量为0.04％。
实施例3
色谱柱为TSKgel CM-5PW，其填料基质为羟基化甲基丙烯酸聚合物，表面键合羧甲基离子交换基团。在HPLC分析系统上按照以下条件进行分析：流动相A为20mmol/L磷酸盐缓冲液，pH6.7；流动相B为20mmol/L磷酸盐缓冲液，1.5mol/L NaClO4，pH6.7；流速为1.0ml/min；设置柱温30℃；设置检测波长为215nm。将多黏菌素E2甲磺酸钠用水溶解成100mg/ml；将硫酸多黏菌素E2用水溶解成1mg/ml。分别取20μl进样并按照下表梯度进行洗脱。分析图谱参见图3。通过对多黏菌素E2峰面积以外标法进行计算，160802批多黏菌素E2甲磺酸钠中残留的多黏菌素E2含量为0.02％。
保留时间(min) A％ B％
0 100.0 0.0
3.00 100.0 0.0
3.50 85.0 15.0
7.00 85.0 15.0
7.50 0.0 100.0
15.00 0.0 100.0
16.00 100.0 0.0

Claims (2)

1.一种检测多黏菌素E甲磺酸钠样品中多黏菌素E残留量的高效液相色谱分析方法，其特征在于，使用亲水填料基质且基质表面键合有弱酸阳离子交换基团的Hitrap CMsepharose FF色谱柱或TSKgel CM-5PW色谱柱，采用梯度洗脱的方式分离多黏菌素E甲磺酸钠和多黏菌素E，在色谱分离设备上记录样品中的多黏菌素E的峰面积以及已知浓度的多黏菌素E的峰面积，按照外标法计算出样品中多黏菌素E的残留量，其中梯度洗脱使用的流动相为：流动相A为20mmol/L磷酸盐缓冲液，pH6.7；流动相B为20mmol/L磷酸盐缓冲液，1.5MNaClO4，pH6.7。
2.一种检测多黏菌素E2甲磺酸钠样品中多黏菌素E2残留量的高效液相色谱分析方法，其特征在于，使用亲水填料基质且基质表面键合有弱酸阳离子交换基团的Hitrap CMsepharose FF色谱柱或TSKgel CM-5PW色谱柱，采用梯度洗脱的方式分离多黏菌素E2甲磺酸钠和多黏菌素E2，在色谱分离设备上记录样品中的多黏菌素E2的峰面积以及已知浓度的多黏菌素E2的峰面积，按照外标法计算出样品中多黏菌素E2的残留量，其中梯度洗脱使用的流动相为：流动相A为20mmol/L磷酸盐缓冲液，pH6.7；流动相B为20mmol/L磷酸盐缓冲液，1.5M NaClO4，pH6.7。
CN201611161739.6A 2016-12-15 2016-12-15 一种检测多黏菌素e残留量的分析方法 Active CN108226315B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611161739.6A CN108226315B (zh) 2016-12-15 2016-12-15 一种检测多黏菌素e残留量的分析方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611161739.6A CN108226315B (zh) 2016-12-15 2016-12-15 一种检测多黏菌素e残留量的分析方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108226315A CN108226315A (zh) 2018-06-29
CN108226315B true CN108226315B (zh) 2022-04-12

Family

ID=62650569

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611161739.6A Active CN108226315B (zh) 2016-12-15 2016-12-15 一种检测多黏菌素e残留量的分析方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108226315B (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102033111A (zh) * 2009-09-24 2011-04-27 杨更亮 反相高效液相色谱法分离多黏菌素e甲磺酸钠及其类似物
CN102190710A (zh) * 2010-01-22 2011-09-21 上海医药工业研究院 多黏菌素e2组合物及其制备方法和用途
CN102230920A (zh) * 2011-03-24 2011-11-02 深圳市谱尼测试科技有限公司 一种超高液相色谱-串联质谱对动物源性食品中多粘菌素e残留量的测定方法
CN102236005A (zh) * 2011-04-18 2011-11-09 林维宣 一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法
CN103946233A (zh) * 2011-11-18 2014-07-23 诺瓦克塔生物系统有限公司 多黏菌素衍生物
WO2014195405A1 (en) * 2013-06-07 2014-12-11 Xellia Pharmaceuticals Aps Characterization of colistimethate sodium (cms)

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2010311759B2 (en) * 2009-10-30 2015-09-24 Xellia Pharmaceuticals Aps Method for purification of colistin and purified colistin components

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102033111A (zh) * 2009-09-24 2011-04-27 杨更亮 反相高效液相色谱法分离多黏菌素e甲磺酸钠及其类似物
CN102190710A (zh) * 2010-01-22 2011-09-21 上海医药工业研究院 多黏菌素e2组合物及其制备方法和用途
CN102230920A (zh) * 2011-03-24 2011-11-02 深圳市谱尼测试科技有限公司 一种超高液相色谱-串联质谱对动物源性食品中多粘菌素e残留量的测定方法
CN102236005A (zh) * 2011-04-18 2011-11-09 林维宣 一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法
CN103946233A (zh) * 2011-11-18 2014-07-23 诺瓦克塔生物系统有限公司 多黏菌素衍生物
WO2014195405A1 (en) * 2013-06-07 2014-12-11 Xellia Pharmaceuticals Aps Characterization of colistimethate sodium (cms)

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A Simple HPLC Method for the Separation of Colistimethate Sodium and Colistin Sulphate;Ligai Bai et al.;《Journal of Chromatograph and Separation Techniques》;20110212;第2卷(第1期);第1页第2栏第3-4段、第2页第2栏第6-7段、图2-3 *
Development and validation of a UHPLC–MS/MS assay for colistin methanesulphonate (CMS) and colistin in human plasma and urine using weak-cation exchange solid-phase extraction;Miao Zhao et al.;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20160305;第124卷;第1节 *
鸡蛋内黏菌素类药物残留量检测方法的建立;曾建勇等;《河南农业科学》;20141231;第43卷(第1期);第131-135页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN108226315A (zh) 2018-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Dafale et al. Selection of appropriate analytical tools to determine the potency and bioactivity of antibiotics and antibiotic resistance
Ferrone et al. Air assisted dispersive liquid-liquid microextraction with solidification of the floating organic droplets (AA-DLLME-SFO) and UHPLC-PDA method: Application to antibiotics analysis in human plasma of hospital acquired pneumonia patients
Klinker et al. Beyond vancomycin: the tail of the lipoglycopeptides
Dafale et al. Development and validation of microbial bioassay for quantification of Levofloxacin in pharmaceutical preparations
Rodrigues et al. The effectiveness of voriconazole in therapy of Candida glabrata’s biofilms oral infections and its influence on the matrix composition and gene expression
Ferrone et al. Development and validation of a fast micro-extraction by packed sorbent UHPLC-PDA method for the simultaneous determination of linezolid and ciprofloxacin in human plasma from patients with hospital-acquired pneumonia
Nishikawa et al. Prostatic penetration of meropenem in humans, and dosage considerations for prostatitis based on a site-specific pharmacokinetic/pharmacodynamic evaluation
Wang et al. Impact of polymyxin resistance on virulence and fitness among clinically important gram-negative bacteria
Kraiczy et al. In vitro activities of fluoroquinolones against the spirochete Borrelia burgdorferi
Cai et al. Comparation of vancomycin penetration into cerebrospinal fluid in postoperative intracranial infection and community‐acquired meningitis patients
Marena et al. Biological properties and analytical methods for micafungin: a critical review
CN108226315B (zh) 一种检测多黏菌素e残留量的分析方法
ES2964983T3 (es) Método para controlar impurezas de la ciclosporina en un gel oftálmico
Jin et al. Brain penetration of colistin in mice assessed by a novel high-performance liquid chromatographic technique
Hong-huan et al. PK/PD study of tigecycline in severely infected patients with continuous renal replacement therapy
de Cássia Bergamaschi et al. Effect of sodium diclofenac on the bioavailability of amoxicillin
Sidrim et al. β-Lactam antibiotics and vancomycin inhibit the growth of planktonic and biofilm Candida spp.: an additional benefit of antibiotic-lock therapy?
Rana et al. Effect of tolfenamic acid co-administration on pharmacokinetics of cefquinome following intramuscular administration in sheep.
Shalaby et al. Disposition kinetics of cefquinome in healthy rabbits following intramuscular and oral administration
CN112336693A (zh) 一种快速控制和评价马昔腾坦片释放的方法
Respaud et al. High‐Performance Liquid Chromatography Assay for Moxifloxacin in Brain Tissue and Plasma: Validation in a Pharmacokinetic Study in a Murine Model of Cerebral Listeriosis
Walczak-Skierska et al. Study of chromatographic behavior of antibiotic drugs and their metabolites based on quantitative structure-retention relationships with the use of HPLC-DAD
Orsini et al. Pharmacokinetics of imipenem‐cilastatin following intravenous administration in healthy adult horses
Russo et al. Approved medication of water with enrofloxacin to treat turkey colibacillosis: Assessment of efficacy using a PK/PD approach
Li et al. Pharmacokinetics and cerebrospinal fluid penetration of norvancomycin in Chinese adult patients

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant