CN1022249C

CN1022249C - 2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物的制备方法

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Publication number: CN1022249C
Application number: CN88106380A
Authority: CN
Inventors: 多田幸雄; 上村敦彦; 安本三治; 武田节夫; 齐藤等; 采见宪男
Original assignee: Dapeng Pharmaceutical Co; Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Dapeng Pharmaceutical Co; Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1987-07-31
Filing date: 1988-08-01
Publication date: 1993-09-29
Anticipated expiration: 2003-08-01
Also published as: EP0301873A3; DK171236B1; ATE106891T1; US4946951A; AU2002288A; EP0301873A2; CA1313866C; DK423988D0; CN1032169A; DE3889993T2; DK423988A; AU610913B2; KR890002223A; FI89497B; FI883584A0; ES2053742T3; FI883584A; FI89497C; DE3889993D1; NO883387D0

Abstract

本发明公开了式(I)的2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物或其盐的制备方法

其中R₁和R₂的一个苄基，其苯环上可任选地具有一个、二个或三个选自C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤代C₁-C₃烷基、卤素原子、羟基和硝基的取代基，而另一个是具有2-20个碳原子的氨基酸残基。该化合物用于治疗癌。

Description

本发明涉及新的2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物及其盐。这些化合物抗癌活性高、抗病毒活性优良，并用作抗肿瘤剂或抗病毒剂。

2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷（FudR）显示抗肿瘤活性高，但毒性大，提出一个在安全范围受到限制的问题。

为了克服这个问题，开发了各种各样的2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物。例如日本未审查的专利公开No.61，591/1985和No.106，593/1985公开一系列2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物。被公开的2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物在某种程度上减轻了这个问题，但在抗肿瘤活性上并不满意，并在治疗学指数、吸收作用等等方面不足。

我们进行广泛研究以克服现有技术中的上述问题，和成功地开发了新的2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物，这些衍生物比常用的2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物抗肿瘤活性高、对人体更安全。本发明是基于这个新的发现完成的。

本发明提供式（Ⅰ）代表的2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物，

（Ⅰ）

其中：

R₁和R₂中的一个是苄基，其苯环上可以任意有从C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤代C₁-C₃烷基、卤素原子、羟基和硝基中选择的取代基，而另一个是氨基酸残基。

根据本发明式（Ⅰ）的化合物的特征是：该化合物用作抗肿瘤剂和抗病毒剂，毒性低、溶水快和安全范围宽。

在式（Ⅰ）中用R₁和R₂代表的苄基中，取代基的具体实施例如下。

烷基作苄基取代基的实例是有1到6个碳原子的直链或支链烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲-丁基、叔-丁基、戊基、己基，等等。

烷氧基作取代基的实例是有1到6个碳原子的直链或支链烷基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基、戊氧基、己氧基，等等。

卤素原子作取代基的实例是氟、氯、溴、碘。

卤代烷基作取代基的实例是有1到3个碳原子，而且用1到3个卤素原子取代的烷基，如氯甲基、溴甲基、三氟甲基、1，2-二氯乙基、1，2-二氟乙基、2，2，2-三氟乙基，等等。

用R₁或R₂代表的苄基上取代基的数目最好是1、2或3。

任意地有1到3个取代基的苄基的最好实例是苄基和在苯环上有1或2个取代的苄基，如2-氯苄基、3-氯苄基、4-氯苄基、2-溴苄基、3-溴苄基、4-溴苄基、2-氟苄基、3-氟苄基、4-氟苄基、2，4-二氯苄基、3，4-二氯苄基、2-氯-4-溴苄基、2-三氟甲基苄基、4-三氟甲基苄基、4-硝基苄基、2， 4-二硝基苄基、2-甲基苄基、4-甲基苄基、4-乙基苄基、4-叔丁基苄基、4-甲氧基苄基、3-乙氧基苄基、4-羟基苄基、2，4-二羟基苄基、2-甲基-3-硝基苄基，等等。

一般来说，在苯环上有1或2个卤素原子的苄基是最好的。

在此所用的术语“氨基酸残基”是指从氨基酸的羧基中除去OH基团后所剩下的一价基团。在此所用的术语“氨基酸”意指包括天然氨基酸和合成的氨基酸，每个化合物至少含一个氨基和至少一个羧基，并在每个分子中有2到20个碳原子。

天然氨基酸的实例是有机体蛋白质成份的那些氨基酸，如丙氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、精氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸、羟基脯氨酸、脯氨酸，等等。不是有机体蛋白质组份，但在活的有机体中起重要作用的天然氨基酸和合成氨基酸也都包括在内，其实例是肌氨酸、肌酸、高胱氨酸、半胱氨酸磺酸、正亮氨酸、异丝氨酸、高丝氨酸、羟基赖氨酸、正缬氨酸、脱氢缬氨酸、鸟氨酸、精氨基琥珀酸、二羟基苯丙氨酸、3-碘酪氨酸、3，5-二碘酪氨酸、甲状腺素、α、γ-二氨基丁酸、2，3-二氨基琥珀酸、α-氨基己二酸、α，β-二氨基丙酸、酵母氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、β-氨基丁酸、ε-氨基己酸、acediasulfone、伞菌氨酸、aranocine、杀腺癌菌素、苯丙氨酸氮芥、鹅膏蕈氨酸，等等。另外的实例是乙酰丝氨酸、乙酰苏氨酸、苄基天冬氨酸，等等，即取代氨基酸，它有乙酰基、乙氧基羰基、苄氧基羰基或苄基作氨基酸的羟基、氨基或羧基的取代基，如丝氨酸、苏氨酸和类似的羟氨酸、天冬酰胺、鸟氨酸、赖氨酸和至少有二个氨基的类似碱性氨基酸、谷氨酸、天冬氨酸和至少有二个羧基的类似酸性氨基酸。

在本发明的化合物中，用R₁或R₂所代表的氨基酸残基中，α-氨基酸残基是好的。比较好的是作为蛋白质组分的氨基酸残基。这些氨基酸残基具体实例是丙氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、精氨酸、羟基赖氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸、羟基脯氨酸、脯氨酸等的残基。最好的是丙氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、0-乙酰丝氨酸、缬氨酸、亮氨酸、赖氨酸、天冬氨酸-β-苄酯、苯丙氨酸、组氨酸、脯氨酸等的残基。

根据本发明的氨基酸残基，可以包括用式（f）表示的那些氨基酸残基：

-CO-B-NR¹⁰R¹¹（f）

其中B是任意有苯基或低级烷硫基的低级亚烷基，R¹⁰和R¹¹每一个代表氢原子或低级烷基，或与连接它们的氮原子合在一起形成哌啶环，并该氨基酸残基也包括吡咯烷基羰基或哌啶基羰基，其中羰基不连接在杂环的氮原子上。

关于式（f）的氨基酸残基，可任意有苯基或低级烷硫基和用B代表的低级亚烷基的实例是任意有苯基或C₁-C₆直链或支链烷硫基的C₁-C₆直链或支链亚烷基，如亚甲基、甲基亚甲基、乙基亚甲基、异丙基亚甲基、异丁基亚甲基、叔丁基亚甲基、1，2-亚乙基、1，3-亚丙基、1，4-亚丁基、2-甲基1，3-亚丙基、1，5-亚戊基、1，6-亚乙基、苯基亚甲基、苄基亚甲基、5-苯基戊基亚甲基、3-苯基1，6-亚己基、甲硫基亚甲基、2-甲硫基乙基亚甲基、己硫基亚甲基、异丙硫基甲基亚甲基、3-叔-丁硫基1，6-亚己基，等等。用R¹⁰和R¹¹所代表的低级烷基的实例是有1到6个碳原子的直链或支链的烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔-丁基、戊基、己基，等等。

依据本发明的2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物的盐，包括酸加成盐，酸能与氨基酸的氨基形成盐，和碱的加成盐，碱能与氨基酸的羧基形成盐，等等。能形成盐的有用酸的实例是无机酸，如盐酸、溴化氢、磷酸、硝酸、硫酸、亚硫酸，等等;有机酸，如对-甲苯磺酸、甲磺酸、酒石酸、邻苯二甲酸、富马酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、抗坏血酸、亚麻酸、油酸、尼克酸、间三硝基苯基磺酸，等等。能形成盐的有用碱的实例是氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠，等等。

用式（Ⅰ）代表的本发明的化合物可以用下面的反应图解-1和-2中所示的方法制备。

<反应图解-1>

其中：

R₁和R₂定义如上;R₃和R₄中一个是氢原子，而另一个是苄基，其苯环上可以任意有从C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤代C₁-C₃烷基、卤素原子、羟基和硝基中选择的取代基;R₅和R₆中的一个是在N-位置上有一个保护基的一个氨基酸残基，而另一个是苄基，其苯环上可任意有从C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤代C₁-C₃烷基、卤素原子、羟基和硝基中选择的取代基，而A是在N-位置上有保护基的氨基酸残基。

把化合物（Ⅱ）和氨基酸（Ⅲ）进行酯缩合可制备化合物（Ⅳ）。氨基酸可以其本身或以反应衍生物如卤化物、酸酐等的形式使用。氨基酸的N-位保护基的实例包括一般在现有技术中所用的那些基团，如叔-丁氧基羰基（Boc）、三氯乙氧基羰基、苄氧基羰基、有1至3个取代基如甲氧基、甲基、硝基等苄氧基羰基。通常在碱性化合物和缩合剂存在下于无水溶液中，将化合物（Ⅱ）和化合物（Ⅲ）进行酯缩合作用。有用的溶剂实例是芳香族碳氢化合物，如苯、甲苯、二甲苯，等等;卤代碳氢化合物;如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷，等等;醚，如乙醚、二恶烷、四氢呋喃，等等;吡啶、硝基甲烷、二甲基甲酰胺，等等。有用的碱性化合物的实例是三烷基胺、吡啶、二烷基氨基吡啶、皮考啉、二甲基吡啶、和类似叔胺、碳酸钠、碳酸钡和类似的金属碳酸盐，等等，其中二烷基氨基吡啶，特别是二（C₁-C₃烷基）氨基吡啶如二甲基氨基吡啶、二乙基氨基吡啶或类似物是最好的。有用的缩合剂的实例是对-甲苯磺酰氯、2，4，6-三异丙基苯磺酰氯（TPS氯化物）和类似芳基磺酰氯、烷基磺酰氯（特别是C₁-C₃烷基磺酰氯如甲磺酰氯、乙磺酰氯或类似物）、N，N-二环己基碳化二亚胺（DCC），亚硫酰氯、磷酰氯，等等，其中DCC和TPS氯化物是较好的。所用化合物（Ⅲ）对每摩尔化合物（Ⅱ）的量大约是1到1.5摩尔。碱性化合物和缩合剂对每摩尔化合物（Ⅱ）的量大约是1到5摩尔。进行反应通常在温度大约-50℃到室温下进行。

如果需要的话，这样所得到的化合物（Ⅳ）可以进行去除保护基团的反应。用常规方法进行这个反应。如在溶剂存在下，用0.5-5N盐酸溶液进行该反应。这个反应除去保护氨基酸残基的基团，生成化合物（Ⅰ）的盐酸化合物（1′）。有用的溶剂包括二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二恶烷，等等。

<反应图解-2>

其中：

R₁和R₂定义同上;A¹是在N-位置上有保护基的氨基酸残基;X是卤素原子;R₇和R₈中的一个是氢原子，而另一个是在N-位置上有保护基的氨基酸残基，R₉是苄基，其在苯环上可任意有从C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤化C₁-C₃烷基、卤素原子，羟基和硝基中选择的取代基。

在碱性化合物存在下，于溶剂中将FudR和氨基酸卤化物反应制备化合物（Ⅵ）。在三氟甲磺酸存在下，化合物（Ⅵ）和取代的或未取代的亚氨酸苄酯（Ⅶ）进行反应，由此除去保护氨基酸残基的基团，得到三氟甲磺酸盐形式的化合物（1″）。

在式（Ⅴ）中用X代表的卤素原子的实例是氯和溴。

有用的溶剂和有用的碱性化合物包括在上面反应图解-1的描述中已提到的实例。对每摩尔FudR来说，使用大约1到1.5摩尔氨基酸卤化物和大约0.1到0.5摩尔碱性化合物。反应在温度大约-50℃到室温下进行，反应约在2到12小时内完成。

在化合物（Ⅵ）和取代或未取代的亚胺基酸苄酯（Ⅶ）之间的反应，对每个摩尔化合物（Ⅵ）来说，使用大约1到5摩尔化合物（Ⅶ）和大约0.01到0.5摩尔三氟甲磺酸。对于上面反应列举的溶剂可以用于这个反应中。反应温度在室温到接近溶剂沸点的范围内。反应时间大约2到12小时。

用反应图解1或2的方法制备的本发明的化合物的盐酸盐及三氟甲基磺酸盐，可以用常规的、迄今为止在现有技术中普遍使用的盐交换反应转换成其它所需的盐。例如，用反应图解-1或-2的方法所得到的化合物，溶解在氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠或类似碱的水溶液中，中和酸加成盐，以后将所需要的酸成分加入，生成所需要的酸加成盐，随后进行冷冻干燥。

用上面描述的方法制备的本发明的化合物可以用常用的分离方法例如柱色谱法进行分离，并且可以用常用提纯方法如重结晶进行提纯。

关于作为药物的组合物的应用，本发明的衍生物与药理上可接收的适当载体结合，并将这种混合物按照具体配制方法制成合适的制剂形式。有用的载体包括在现有技术中已知的那些物质，如赋形剂、粘合剂、润滑剂、着色剂、分解剂，等等。药物组合物的典型制剂形式是如片剂、胶囊、颗粒剂、粉剂、液体、皮下或类似非肠道使用的针剂、塞入直肠的栓剂，等等。

本发明的化合物作为有效成份用药物组合物的剂量单位中所含的量，可以按照制剂的形式适当决定，与常规药物制剂中所用量没有很大不同。通常有效成份的最好剂量是每剂量单位约25-500mg。本发明的化合物可以通过常规方法配制成合适的制剂形式。

这样所得的药物的组合物的剂量随病人的症状严重程度、体重、年令和其它因素而变化。每日剂量按成人计的有效成分约为50-2000mg，药物组合物每天可以单一剂量或分2-4剂量使用。

实施例

下面列举实施例和制剂实例说明本发明，并以药理试验结果解释本发明。

与实施例中NMR数据有关，用在“H”符号的右方或“C”或“N”符号的右方作角标的数字是指在化合物中的位置。因此例如术语“H⁶”或“C₆-H”指氢与在6-位置上的碳原子连接。同样如术语“H^3′、H^4′H^5′”或“C_{3′、4′、5′}-H”表明氢与在3′-、4′-、5′-位上的碳原子连接。

实施例1

2.44克量的0^3′-三苯甲基-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷溶于15毫升四氢呋喃（THF）中。加入氢化钠（0.5克），并于60℃搅拌混合物30分钟。加入0.63克苄氯和0.375克碘化钠，该混合物于60℃反应6小时。用1N HCl水溶液中和反应混合物，并浓缩。将20毫升0.5N HCl的甲醇溶液加到残余物中，该混合物于室温搅拌一夜。用饱和的NaHCO₃水溶液中和反应混合物，并浓缩。20毫升氯仿加到残余物中，用过滤收集沉淀物。沉淀物溶于乙酸乙酯，并用水洗涤溶液，芒硝上干燥并浓缩，得到O^5′-苄基-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷。这样得到的化合物悬浮在15毫升二氯甲烷中。0.84克Boc-甘氨酸、1.24克DCC和0.05克二甲基氨基吡啶加到该悬浮液中。在室温下搅拌混合物一夜。过滤反应混合物，并浓缩滤液。将残余物和5毫升4NHCl的二恶烷溶液进行混合，搅拌混合物30分钟，并加入20毫升乙醚。用过滤收集沉淀结晶物，用甲醇-乙醚提纯，得到1.28克下面表1中所示的化合物1。

实施例2

除了用于制备所希望的化合物所需要的起始物质不同外，重复实施例1的同样步骤。制备下面表1所示化合物2到11和28到30重复该步骤。

实施例3

2.44克O^5′-三苯甲基-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷溶于15毫升THF中。将0.5克氢氧化钠粉末和0.225克3A分子筛粉（商标，美国Linde公司产品）加到溶液中。该混合物加热回流2小时，随后加0.845克对-氯苄氯和0.15克碘化钠。该混合物加热回流2小时，并放置冷却。过滤反应混合物，并用15毫升饱和氯化胺水溶液中和滤液和用饱和氯化钠水溶液洗涤。在芒硝上干燥有机层和浓缩。将20毫升0.5N HCl的甲醇溶液加到残余物中，并搅拌混合物一夜。用饱和的NaHCO₃水溶液中和混合物，并浓缩。将THF（20毫升）加到残余物中，并用饱和NaCl水溶液洗涤该混合物，在芒硝上干燥和浓缩。浓缩物从乙醇中重结晶，得到1.32克O^3′-对-氯苄基-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷。将1.07克DCC和0.73克Boc-甘氨酸溶于12毫升THF中。将1.32克O^3′-对-氯苄基-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷和0.05克二甲基氨基吡啶加到该溶液中。该混合物于室温下搅拌5小时，和过滤。浓缩滤液，并将5毫升4N HCl的二恶烷溶液加到残余物中。该混合物搅拌30分钟后加入20毫升乙醚，过滤出沉淀结晶物，并从乙醇-异丙醇中重结晶，得到下面表1中所示的0.83克化合物12。

实施例4

除了用于制备所希望的化合物的所需要的起始物质不同外，重复实施例3的同样步骤，制备下面表1中所示化合物13-22的每一个。

实施例5

0.10克O^3′-对-氯苄基-O^5′-丙氨酰-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷盐酸盐溶于4毫升的1∶1水和氯仿的混合物中。将0.018克NaHCO₃在搅拌下加到该溶液中。搅拌该混合物10分钟，并分离氯仿层。将0.10克4-甲苯磺酸的2毫升甲醇溶液逐滴加入上述混合物中，并过滤白色沉集物，从甲醇-乙醚中重结晶，得到下面表1所示0.105克化合物23。

实施例6

除了用于制备所希望化合物所需要的起始物质不同外，重复实施例5的同样步骤，制备下面表1所示化合物24到27每一个。

实施例7

2.44克2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷溶于25毫升吡啶中。加入Boc-甘氨酰氯化物（0.97克）。该混合物用冰冷却反应3小时。随后蒸出溶剂，将水加到残余物中，用二氯甲烷萃取混合物，并在芒硝上干燥萃取物，并浓缩。将残余物溶于25毫升二氯甲烷中。2.14克亚氨酸对-氯苄酯和0.75克三氟甲基磺酸加到该溶液中。该混合物于室温下反应3小时，并蒸出溶剂。将饱和NaHCO₃水溶液加到残余物中使溶液呈碱性。用乙醚萃取溶液，并在芒硝上干燥萃取物。加氯化氢，过滤出沉淀结晶物，并使过滤物从甲醇-乙醚中重结晶，得到下面表1所示的0.75克化合物12。

实施例1到7中所制备的化合物1到30的化学结构和物理化学常数列于下面表1中。

表1

化合物1

结构：R₁＝

，

R₂＝NH₂CH₂CO-

形式（盐）：盐酸盐

结晶形状：无定形

收率：57.5%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.7-12.0（b，1H，NH），7.96（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.34（s，5H，芳族的），6.14（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.54（s，2H，

），3.80-4.30（m，1H，H^4′），3.85（s，2H，NH₂CH₂CO₂-），3.50-3.80（m，2H，H^5′），2.0-2.2（m，2H，H^2′）。

化合物2

结构：R₁＝

R₂＝NH₂CH₂CO-

形式（盐）：盐酸盐

收率：63%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.6-12.0（b，1H，NH），7.96（d，1H，H⁶），7.35（s，4H，芳族的），6.20（t，1H，J＝7Hz，H^1′）， 4.50（s，2H，

），3.90-4.50（m，1H，H^4′），3.50-3.90（m，2H，H^5′），3.84（s，2H，NH₂CH₂CO₂-），2.1-2.4（m，2H，H^2′）。

化合物3

结构：R₁＝NH₂CH₂CO-，

R₂＝

形式（盐）：盐酸盐

收率：71%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.7-12.0（b，1H，NH），7.95（d，1H，H⁶），7.0-7.6（m，4H，芳族的），6.13（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.52（s，2H，

），3.9-4.4（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.85（s，2H，NH₂CH₂CO₂-），3.64（b，2H，H₂O），2.1-2.3（m，2H，H^2′）.

化合物4

结构：R₁＝NH₂CH₂CO-，

R₂＝

形式（盐）：盐酸盐

收率：62%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.8-12.0（b，1H，NH），7.98（d，1H，H⁶），7.4-7.8（m，4H，芳族的），6.14（t，1H，J＝7Hz，H^1′）， 4.65（s，2H，

），3.9-4.3（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.85（s，2H，NH₂CH₂CO₂-），3.37（b，2H，H₂O），2.0-2.5（m，2H，H^2′）.

化合物5

结构：R₁＝NH₂CH₂CO-，

R₂＝

形式（盐）：盐酸盐

收率：52%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.7-11.9（b，1H，NH），7.95（d，1H，H⁶），8.15（d，J＝9Hz，芳族的），7.62（d，J＝9Hz，芳族的），6.14（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.70（s，2H，

），3.90-4.30（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.85（s，2H，NH₂CH₂CO₂-），3.64（b，2H，H₂O），2.1-2.4（m，2H，H^2′）.

化合物6

结构：R₁＝NH₂CH₂CO-，

R₂＝

形式（盐）：盐酸盐

收率：72%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.7-11.9（b，1H，NH），8.01（d，1H，J＝7Hz，H⁶）， 7.27（2H，d，J＝9Hz，芳族的），6.94（2H，d，J＝9Hz，芳族的），6.11（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.45（s，2H，

），3.90-4.20（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.85（s，2H，NH₂CH₂CO₂-），3.60（b，2H，H₂O），2.10-2.40（m，2H，H^2′）.

化合物7

结构：R₁＝NH₂CH₂CO-，

R₂=

形式（盐）：盐酸盐

收率：65%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.8-12.0（b，1H，NH），7.98（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.20-7.60（m，芳族的），6.11（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.49（s，2H，-CH₂ ），3.90-4.20（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.85（s，2H，NH₂CH₂CO₂-），3.34（b，2H，H₂O），2.00-2.40（m，2H，H^2′）.

化合物8

结构：R₁＝NH₂CH₂CO-，

R₂＝

形式（盐）：盐酸盐

收率：78%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.7-12.0（b，1H，NH），7.99（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.20-7.60（m，4H，芳族的），6.13（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.54（s，2H，），3.90-4.20（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.85（s，2H，NH₂CH₂CO₂-），3.36（b，2H，H₂O），2.0-2.40（m，2H，H^2′）.

化合物9

结构：R₁＝NH₂CH₂CH₂CO-，

R₂＝

形式（盐）：盐酸盐

收率：63%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.7-11.90（b，1H，NH），8.10（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.23（s，4H，芳族的），6.12（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.49（s，2H，

），3.90-4.20（b，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.40（b，2H，H₂O），2.97（t，J＝8Hz，NH₂CH₂CH₂CO₂-），2.67（t，J＝8Hz，NH₂CH₂CH₂CO₂-），2.66（q，J＝8Hz，），2.12-2.40（m，2H，H^2′），1.17（t，J＝8Hz ）.

化合物10

结构：

形式（盐）：盐酸盐

收率：79%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.8-11.90（b，1H，NH），7.98（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.20-7.60（m，3H，芳族的），6.13（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.55（s，2H，

），4.00-4.40（b，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.35（b，2H，H₂O），2.10-2.50（m，2H，H^2′），1.50-1.9（m，1H，（CH₃）₂CHC（NH₂）HCO₂-），0.7-1.2（m，6H，（CH₃）₂CHC（NH₂）HCO₂-）.

化合物11

结构：R₁＝NH₂（CH₂）₅CO-，

R₂＝

形式（盐）：盐酸盐

收率：76%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.7-11.9（b，1H，NH），8.00（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.1-7.2（m，4H，芳族的），6.12（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.52（s，2H，），4.0-4.4（b，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.34（b，2H，H₂O），3.0（t，J＝8Hz，NH₂（CH₂）₄CH₂CO₂-，2.10-2.50（m，2H，H^2′），1.0-2.5（m，8H，NH₂（CH₂）₄CH₂CO₂-）， 2.29（s，3H，）.

化合物12

结构：R₁＝NH₂CH₂CO-，

R₂＝

形式（盐）：盐酸盐

结晶形状：无定形

收率：72%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.7-11.9（b，1H，NH），8.02（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.40（s，4H，芳族的），6.13（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.55（s，2H，

），4.0-4.4（b，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.84（s，2H，NH₂CH₂CO₂-），3.34（bs，2H，H₂O），2.10-2.50（m，2H，H^2′）.

化合物13

结构：R₁＝

，

R₂＝

形式（盐）：盐酸盐

收率：78%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.8-12.0（b，1H，NH），8.00（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.40（s，4H，芳族的），6.12（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.55（s，2H，

），3.90-4.4（b，4H，H^3′，H^4′，H^5′），4.00（m，1H，CH₃C（NH₂）HCO₂-），3.35（bs，2H，H₂O），2.10-2.50（m，2H，H^2′），1.43（d，3H，J＝8Hz，CH₃C（NH₂）HCO₂-）.

化合物14

结构：

形式（盐）：盐酸盐

收率：82%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.0-11.5（b，1H，NH），7.95（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.35（s，4H，芳族的），6.10（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.50（s，2H，

），4.00-4.40（b，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.80（d，1H，（CH₃）₂CHC（NH₂）HCO₂-），3.30（bs，2H，H₂O），2.10-2.50（m，2H，H^2′），1.50-1.90（b，1H，（CH₃）₂CHC（NH₂）HCO₂-），0.70-1.10（m，6H，（CH₃）₂CHC（NH₂）HCO₂-）.

化合物15

结构

，

形式（盐）：盐酸盐

收率：77%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.50-11.90（b，1H，NH），7.96（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.40（s，4H，芳族的），6.15（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.53（s，2H，

），3.60-4.20（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.25（t，1H，J＝11Hz，（CH₃）₂CHCH₂C（NH₂）HCO₂-），2.12-2.50（m，2H，H^2′），1.20-1.90（m，3H，（CH₃）₂CHCH₂C（NH₂）HCO₂-），1.00（s，3H，），0.90（s，3H，

），

化合物16

结构：

形式（盐）：盐酸盐

收率：81%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.50-12.00（b，1H，NH），8.00（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.40（s，4H，芳族的），6.15（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.60（s，2H，

），4.01-4.42（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.85（d，1H，J＝6Hz，CH₃CH₂C（CH₃）HC（NH₂）HCO₂-），3.20-3.40（m，2H，H₂O），2.20-2.40（b，2H，H^2′），1.80-2.40（b，1H，CH₃CH₂C（CH₃）HC（NH₂）HCO₂-），0.70-1.80（m，8H，CH₃CH₂C（CH₃）HC（NH₂）HCO₂-）.

化合物17

结构

形式（盐）：盐酸盐

收率：75%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.8-12.0（b，1H，NH），8.22（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.41（s，4H，芳族的），6.14（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.61（s，2H，），4.00-4.40（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.20-3.40（m，2H，H₂O），2.10-2.50（b，2H，H^2′），2.0（s，3H，CH₃CO₂CH₂C（NH₂）HCO₂-）.

化合物18

结构：

形式（盐）：盐酸盐

收率：74%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.80-12.00（b，1H，NH），7.98（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.38（s，4H，芳族的），6.10（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.52（s，2H，

），3.95-4.45（b，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.15-3.45（m，2H，H₂O），3.40（t，1H，CH₃SCH₂CH₂C（NH₂）HCO₂-），2.85-2.90（m，2H，CH₃SCH₂CH₂C（NH₂）HCO₂-），2.20-2.40（b，2H，H^2′），2.20（s，3H，CH₃SCH₂CH₂C（NH₂）HCO₂-），1.50-1.60（m，2H，CH₃SCH₂CH₂C（NH₂）HCO₂-）.

化合物19

结构

形式（盐）：盐酸盐

收率：73%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.8-12.0（b，1H，NH），8.00（d，1H，J＝7Hz，H⁶）， 7.39（s，4H，芳族的），7.35（s，4H，

），6.11（t，1H，J＝7Hz，H^1′），5.11（s，2H，

），4.52（s，2H，），3.95-4.40（b，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.10（bs，2H，H₂O），2.10-2.40（b，2H，H^2′）.

化合物20

结构：

形式（盐）：盐酸盐

收率：26%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.45-11.90（b，1H，NH），7.95（d，1H，J＝7Hz，H⁶），7.35（s，4H，芳族的），6.13（t，1H，J＝7Hz，H^1′），4.50（s，2H，

），3.95-4.45（b，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.10-3.65（b，1H，NH₂（CH₂）₄C（NH₂）HCO-），3.20-3.40（m，2H，H₂O），2.65-3.10（b，2H，NH₂CH₂（CH₂）₃C（NH₂）HCO₂-），2.10-2.50（m，2H，H^2′），1.00-2.10（b，6H，NH₂CH₂（CH₂）₃C（NH₂）HCO₂-）.

化合物21

结构：

形式（盐）：盐酸盐

收率：79%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.90（b，1H，NH），8.00（d，1H，J＝8Hz，H⁶），7.40（s，4H，芳族的），7.23（s，5H，芳族的，

），6.10（t，1H，J＝8Hz，H^1′），4.50（s，2H，），4.00-4.40（b，5H，H^3′，H^4′，H^5′，），3.20-3.50（m，2H，H₂O），3.19（s，2H，），2.00-2.15（b，2H，H^2′），1.08（t，1H，J＝8Hz，乙醚（溶剂）

化合物22

结构：

形式（盐）：1/2酒石酸盐

收率：80%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

7.60（s，1H，

），7.40（s，4H，芳族的），6.90（s，1H，

），6.10（t，1H，J＝8Hz，H^1′），4.50（s，2H，

），3.80-4.40（m，5H，H^3′，H^4′，H^5′，

，2.80-3.05（m，2H，

），2.10-2.40（m，2H，H^2′）.

化合物23

结构：

Form（salt）：

结晶形状：无定形

收率：82%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.65-12.00（b，1H，NH），7.95（d，1H，J＝8Hz，H⁶），7.20，7.38，7.78&7.90（s，4H，

），7.40（s，4H，芳族的），6.11（t，1H，J＝8Hz，H^1′），4.55（s，2H，= ），3.90-4.40（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.72，（m，1H，CH₃C（NH₂）HCO₂-），3.38（s，2H，H₂O），2.20-2.40（b，2H，H^2′），2.23（s，3H，

），1.40（d，3H，J＝8Hz，CH₃C（NH₂）HCO₂-）.

化合物24

结构：

形式（盐）：1/2马来酸盐

收率：38%

¹H-NMR TMS 内标物

δ（DMSO-d₆）

12.45（s，1H

），7.95（d，1H，J＝8Hz，H⁶），7.40（s，4H，芳族的），6.30（s，1H，

），6.10（t，1H，J＝8Hz，H^1′），4.52（s， 2H，

），3.90-4.42（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），4.05（q，1H，J＝8Hz，CH₃C（NH₂）HCO₂-），3.38（b，2H，H₂O），2.18-2.40（m，2H，H^2′），1.39（d，1H，J＝8Hz，CH₃C（NH₂）HCO₂-）.

化合物25

结构：

形式（盐）：1/2酒石酸盐

收率：57%

¹H-NMR TMS 内标物

δ（SMSO-d₆）

11.80-12.00（b，1H，NH），7.98（d，1H，J＝8Hz，H⁶），7.39（s，4H，芳族的），6.10（t，1H，J＝8Hz，H^1′），4.50（s，2H，

），4.00-4.50（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），4.40（s，1H，

），4.00（m，1H，CH₃C（NH₂）HCO₂-），3.40（b，2H，H₂O），2.20-2.40（m，2H，H^2′），1.40（d，3H，J＝8Hz，CH₃C（NH₂）HCO₂-）.

化合物26

结构：

形式（盐）：1/3柠檬酸盐

收率：74%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.70-12.10（b，1H，NH），10.0-12.0（b，2H，

），7.95（d，1H，J＝8Hz，H⁶），7.40（s，4H，芳族的），6.11（t，1H，J＝8Hz，H^1′），4.51（s，2H，

），4.00-4.50（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），4.05（m，1H，CH₃C（NH₂）HCO₂-），3.35（b，2H，H₂O），2.72（s，2H，

），2.20-2.39（m，2H，H^2′），1.39（d，3H，J＝8Hz，CH₃C（NH₂）HCO₂-）.

化合物27

结构：

形式（盐）：磷酸盐

收率：40%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.65-12.00（b，1H，NH），7.90（d，1H，J＝8Hz，H⁶），7.40（s，4H，芳族的），6.05（t，1H，J＝8Hz，H^1′），4.50（s，2H，），4.00-4.50（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），4.00（m，1H，CH₃C（NH₂）HCO₂-），3.35（b，2H，H₂O），2.15-2.40（m，2H，H^2′），1.40（d，3H，J＝8Hz，CH₃C（NH₂）HCO₂-）.

化合物28

结构：R₁＝NH₂CH₂CO-，

R₂＝

形式（盐）：-

收率：75%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.80-12.00（b，1H，NH），7.90（d，1H，J＝8Hz，H⁶），7.40（s，4H，芳族的），6.15（t，1H，J＝8Hz，H^1′），4.54（s，2H，），4.00-4.50（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），4.06（2H，s，NH₂CH₂CO₂-），3.32（b，2H，H₂O），2.10-2.50（m，2H，H^2′）.

化合物29

结构：

形式（盐）：盐酸盐

收率：63%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.80-12.10（b，1H，NH），8.03（d，1H，J＝8Hz，H⁶），9.3-10.2（b，1H，

），7.41（s，4H，芳族的），6.13（t，1H，J＝8Hz，H^1′），4.56（s，2H，

），4.00-4.50（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.22（b，2H，H₂O），2.00-2.50（m，2H，H^2′）.

化合物30

结构：R₁＝NH₂CH₂CO-，

R₂＝

形式（盐）：盐酸盐

收率：53%

¹H-NMR TMS内标物

δ（DMSO-d₆）

11.7-11.9（b，1H，NH），9.37-（bs，

），7.92（d，1H，J＝8Hz，H⁶），7.14（d，J＝8Hz，2H，芳族的），6.70（d，J＝8Hz，2H，芳族的），6.08 （t，1H，J＝8Hz，H^1′），4.52（s，2H，），4.0-4.4（m，4H，H^3′，H^4′，H^5′），3.82（s，2H，NH₂CH₂CO₂-），3.35（bs，2H，H₂O），2.0-2.45（m，2H，H^2′）.

实施例8

（A）5′-0-〔N-（叔丁氧基羰基）甘氨酰〕-3′-0-（4-氯苄基）-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷的制备

在冰冷却及搅拌下，将6.13克二环己基碳化二亚胺加入到含9.45克N-（叔丁氧基羰基）-甘氨酸的60毫升乙腈溶液中三小时后，将产生的二环己基脲滤出，浓缩滤液。油状残余物溶于15毫升无水吡啶中，并向该溶液中加入5.00克3′-0-（4-氯苄基）-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷。该混合物在室温放置三小时后，再于温度40℃放置30分钟。于室温下向混合物加入5毫升水后混合物放置30分，然后进行浓缩。残余物溶于50毫升乙酸乙酯中，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗三次，用饱和氯化钠水溶液洗二次，接着该溶液用无水硫酸镁干燥并浓缩。残余物放入硅胶柱中并用1%甲醇-氯仿洗脱，得到5.33克（75%）5′-0-〔N-（叔丁氧基羰基）甘氨酰〕-3′-0-（4-氯苄基）-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷。

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.85（1H，bs，NH），7.94（1H，d，J＝7Hz，C₆-H），7.40（4H，s，C₆H₄Cl），7.20（1H，t，J＝6Hz，OCONH），6.14（1H，t，J＝6Hz，C₁，-H），4.54（2H，s，CH₂C₆H₄Cl），4.30-4.16（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）， 3.74（2H，d，J＝6Hz，CH₂CO），2.38-2.32（2H，m，C₂，-H），1.37（9H，s，CH₃X3）

（B）和（C）

按照上面（A）中所述的步骤和使用适当的起始物质，制备出表2所示的化合物。在表2中，化合物用式（Ⅰ）中的R₁和R₂基团表示。该方法适用于下列各表。同样在表2和随后各表中，术语“Str”代表“结构”。

表2

实施例8（B）

结构：

收率：43%

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.85（1H，s，NH）

7.93（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.69（1H，t，J＝6Hz，OCONH）

7.39（4H，s，C₆H₄Cl）

7.33（5H，s，C₆H₅）

6.13（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

5.04（2H，s，CH₂H₆H₅）

4.53（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.30-4.14（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.83（2H，d，J＝6Hz，CH₂CO）

2.37-2.27（2H，m，C_2′-H）

实施例8（C）

结构：

收率：73%

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.86（1H，bs，NH）

7.92（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.62（1H，t，J＝6Hz，OCONH）

7.40（4H，s，C₆H₄Cl）

7.29（2H，d，J＝9Hz，C_3，5-H，甲氧基苄基的）

6.90（2H，d，J＝9Hz，C_2，6-H，甲氧基苄基的）

6.15（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.97（2H，s，CH₂C₆H₄OCH₃）

4.53（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.30-4.19（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.84（2H，d，J＝6Hz，CH₂CO）

3.74（3H，s，OCH₃）

2.32-2.20（2H，m，C_2′-H）

8.04（1H，d，J＝7Hz，C₆-H），7.41（4H，s，C₆H₄Cl），6.15（1H，t，J＝6Hz，C₁，-H），4.56（2H，s，CH₂C₆H₄Cl），4.41-4.15（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H），3.83（2H，s，CH₂CO），2.44-1.99（2H，m，C_2′-H）

元素分析：C₁₈H₁₉ClFN₃O₆·HCl·H₂O

计算值：C，44.83%;H，4.60%;N，8.71%

实验值：C，44.64%;H，4.91%;N，8.43%

实施例9-17

使用适当的起始物质，按照例8（A）的步骤和之后的例8（E）的步骤进行，从而可获得在下面表3中所示的化合物。然而，在例12中所予期的化合物可通过例8（A）步骤获得。

表3

实施例9

结构：

收率：27%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.83（1H，bs，NH）

8.54（3H，bs，NH₂，HCl）

8.01（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.35（5H，s，C₆H₅）

6.14（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.56（2H，s，CH₂C₆H₅）

4.40-4.16（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.82（2H，s，CH₂C：O）

2.42-2.29（2H，m，C_2′-H）

实施例10

结构：

收率：28%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.86（1H，bs，NH）

9.48（3H，bs，NH₂，HCl）

8.04（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.29（2H，d，J＝8Hz，C_3，5-H，苯环的）

6.94（2H，d，J＝8Hz，C_2，6-H，苯环的）

6.13（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.48（2H，s，CH₂C₆H₄-OCH₃）

4.39-4.18（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.82（2H，s，CH₂CO）

2.37-2.28（2H，m，C_2′-H）

实施例11

结构：

收率：88%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.86（1H，bs，NH）

8.67（3H，bs，NH₂，HCl）

8.04（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.68-7.25（4H，m，C₆H₄Br）

6.17（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.60（2H，s，CH₂C₆H₄Br）

4.43-4.20（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.83（2H，s，CH₂CO）

2.41-2.35（2H，m，C_2′-H）

实施例12

结构：

收率：26%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.83（1H，bs，NH）

10.82（1H，bs，HCl）

7.98（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.41（4H，s，C₆H₄Cl）

6.23-6.06（1H，m，C_1′-H）

4.55（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.33-4.16（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.46-2.79（8H，m，

）

2.46-2.28（2H，m，C_2′-H）

1.87-1.40（6H，m，

）

实施例13

结构：

（L）

收率：55%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.80（1H，bs，NH）

9.30（2H，bs，NH，HCl）

8.00（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.40（4H，s，C₆H₄Cl）

6.14（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.56（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.42-4.16（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.83（1H，d，J＝5Hz，CHCO）

2.43-2.08（3H，m，C_2′-H，（CH₃）₂CH-）

0.97，0.93（each 3H，d，J＝7Hz，CH₃）

实施例14

结构：

（L）

收率：51%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.80（1H，bs，N₃-H）

8.82（3H，bs，NH₂，HCl）

8.02（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.41（4H，s，C₆H₄Cl）

6.14（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.57（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.41-4.20（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

4.00-3.80（1H，m，CHCO）

2.53-2.32（m，C_2′-H，用DMSO聚结）

1.85-1.67（3H，m，-CH₂CH（CH₃）₂）

0.86（6H，d，J＝5Hz，CH₃×2）

实施例15

结构：

收率：63%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.86（1H，bs，NH）

9.99（2H，bs，proline NH，Hcl）

8.03（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.41（4H，s，C₆H₄Cl）

6.14（1H，t，J＝6Hz，C₁-H）

4.57（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.42-4.27（5H，m，C_{3′，4′，5′}-H， CHCO）

3.39-3.18（4H，m，-NHCH₂CH₂CH₂）

2.40-2.32（2H，m，C_2′-H）

2.08-1.85（2H，m，-NHCH₂CH₂CH₂）

实施例16

结构：

收率：61%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d）δ：

11.86（1H，bs，NH）

8.19（3H，bs，NH₂，HCl）

7.97（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.41（4H，s，C₆H₄Cl）

6.12（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.55（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.31-4.18（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.03（2H，t，J＝6Hz，-CH₂CO）

2.77（2H，t，J＝6Hz，NCH₂）

2.34（2H，t，J＝5Hz，C_2′-H）

实施例17

结构：

收率：91%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.86（1H，bs，NH）

9.22（2H，NH，HCl）

7.94（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.41（4H，s，C₆H₄Cl）

6.12（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.54（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.28-4.16（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.18-1.83（11H，m，

实施例18

5′-0-苄基-2′-脱氧-5-氟-3′-甘氨酰尿嘧啶核苷盐酸盐的制备

将0.78克N-（叔丁氧基羰基）甘氨酸和1.80克2，4，6-三异丙基苯磺酰氯加到含1.00克5′-0-苄基-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷的30毫升无水吡啶溶液中。将混合物于室温下反应一夜。

反应混合物减压浓缩，在乙酸乙酯和水之间分配剩余物。用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤有机层，在无水硫酸镁上干燥，并减压浓缩。残余物放入硅胶柱中，用1%甲醇-氯仿洗脱进行纯化，得到1.06克所需要的5′-0-苄基-3′-0-〔N-（叔丁氧基羰基）甘氨酰〕-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷。

接着，将上面制备的化合物（中间体）溶解在10毫升的10%的盐酸-二恶烷中，并在室温下搅拌2小时。反应混合物减压浓缩，剩余物置于硅胶柱中，用10%甲醇-氯仿洗脱进行纯化，得到0.77克（60%）所需要的5′-0-苄基-2′-脱氧-5-氟-3′-0-甘氨酰尿嘧啶核苷盐酸盐。

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

9.10（3H，bs，NH₂，HCl），7.97（1H，d，J＝7Hz，C₆-H），

7.35（5H，s，C₆H₅），6.22（1H，t，J＝6Hz，C₁，-H），

5.36（1H，bs，C₃，-H），4.58（2H，s，CH₂C₆M₅），

4.27（1H，bs，C₄，-H），3.81（2H，s，CH₂CO），

3.77-3.71（2H，m，C₅，-H），

2.55-2.31（C₂，-H，用DMSO聚结）

实施例19-26

按照例18的步骤和用适当的起始物质，制备下面表4所示的化合物。

表4

实施例19

结构：

收率：67%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.78（1H，bs，NH）

8.55（3H，bs，NH₂，HCl）

8.02（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.62-7.41（3H，m，C₆H₃Cl₂）

6.16（1H，t，J＝7Hz，C_1′-H）

4.61（2H，s，CH₂C₆H₃Cl₂）

4.43-4.15（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.83（2H，s，CH₂CO）

2.52-2.29（C_2′-H，用DMSO聚结）

实施例20

结构：

收率：80%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.70（1H，bs，NH）

8.55（3H，bs，NH₂，HCl）

8.01（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.28-7.11（4H，m，C₆H₄CH₃）

6.13（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.51（2H，s，CH₂-C₆H₄-CH₃）

4.40-4.19（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.82（2H，s，CH₂CO）

2.46-2.31（5H，m，C_2′-H， -C₆H₄-CH₃）

实施例21

结构：

收率：9%

形状：油状物

NMR（DMSO-d₆）δ：

8.97（3H，bs，NH₂，HCl）

7.99（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.61-7.29（4H，m，C₆H₄Cl）

6.16（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.76-4.24（6H，m，CH₂C₆H₄Cl， C_{3′，4′，5′}-H）

3.85（2H，s，CH₂CO）

2.54-2.33（C_2′-H，用DMSO聚结）

实施例22

结构：

（L）

收率：17%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

8.61（3H，bs，NH₂，HCl）

7.98（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.40（4H，s，C₆H₄Cl）

6.14（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.55（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.41-4.05（5H，m，C_{3′，4′，5′}-H，CH）

2.43-2.29（2H，m，C_2′-H）

1.42（3H，d，J＝7Hz，CH₃）

实施例23

结构：

收率：50%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

9.01（3H，bs，NH₂，HCl）

8.01（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.42-7.26（4H，m，C₆H₄Cl）

6.16（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.57（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.41-4.15（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.80（2H，s，CH₂CO）

2.54-2.31（C_2′-H，用DMSO聚结）

实施例24

结构：

（L）

收率：19%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

9.23（3H，bs，NH₂，HCl）

7.95（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.40（4H，s，C₆H₄Cl）

7.26（5H，s，C₆H₅）

6.12（1H，t，J＝7Hz，C_1′-H）

4.49（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.31-4.05（5H，m，C_{3′，4′，5′}-H，CH）

3.21-3.08（2H，m，CH₂C₆H₅）

2.29-2.19（2H，m，C_2′-H）

实施例25

结构：

（L）

收率：23%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.78（1H，bs，NH）

8.78（3H，bs，NH₂，HCl）

8.01（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.41（4H，s，C₆H₄Cl）

6.13（1H，t，J＝6Hz，C_1′-H）

4.56（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.42-4.05（5H，m，C_{3′，4′，5′}-H，CHCO）

2.66-2.02（9H，m，C_2′-H， CH₃-S-（CH₂）₂-）

实施例26

结构：

收率：72%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.78（1H，bs，NH）

8.55（3H，bs，NH₂，HCl）

8.01（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.50-7.08（4H，m，C₆H₄F）

6.13（1H，t，J＝6Hz，C₁-H）

4.54（2H，s，CH₂C₆H₄F）

4.41-4.14（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.83（2H，s，CH₂CO）

2.46-2.28（2H，m，C_2′-H）

实施例27

3′-0-（4-氯苄基）-2′-脱氧-5′-0-（3-二乙基氨基丙酰基）-5-氟尿嘧啶核苷盐酸盐的制备

将0.56毫升三乙胺和0.50毫升氯甲酸异丁酯加入含3-二乙基氨基丙酸盐酸盐的30毫升四氢呋喃的冷却到-15℃的溶液中，得到混合酸酐。

向混合物中加入1.00克的3′-0-（4-氯苄基）-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷和0.50毫升三乙胺，并在室温下搅拌混合物一夜，过滤掉不溶物，浓缩滤液。残余物置于硅胶柱中，用5%甲醇-氯仿洗脱进行纯化，得到0.10克（7%）的3′-0-（4-氯苄基）-2′-脱氧-5′-0-（3-二乙基氨基丙酰基）-5-氟尿嘧啶核苷盐酸盐。

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

11.96（1H，bs，NH），7.98（1H，d，J＝7Hz，C₆-H），

7.41（4H，s，C₄H₆Cl），6.16（1H，t，J＝6Hz，C₁，-H），

4.55（2H，s，CH₂C₆H₄Cl），

4.27-4.23（4H，m，C_{3′，4′，5′}，-H），

3.19-2.94（8H，m，CH₂CH₂CO，CH₂CH₃X2）

2.41-2.33（2H，m，C₂，-H）

1.21（6H，t，J＝7Hz，CH₃X2）

实施例28

3′-0-（4-氯苄基）-2′-脱氧-5-氟-5′-0- 甘氨酰尿嘧啶核苷L-酒石酸盐的制备

将2毫升4N盐酸-二恶烷加入例8（A）得到的0.50克5′-0-（N-（叔丁氧基羰基）甘氨酰）-3′-0-（4-氯苄基）-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷中，并将混合物于室温下放置15分钟。然后，蒸出溶剂，残余物溶于少量水中，用饱和碳酸氢钠水溶液使溶液成为弱碱性，并用40毫升乙酸乙酯萃取三次，在无水硫酸镁上干燥乙酸乙酯层，将含有0.14克L-酒石酸的乙酸乙酯溶液加入其中，然后将混合液浓缩到大约40毫升。过滤所形成的沉淀物，得到0.38克（65%）的3′-0-（4-氯苄基-2′-脱氧-5-氟-5′-0-甘氨酰尿嘧啶核苷L-酒石酸盐

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

7.97（1H，d，J＝7Hz，C₆-H），7.40（4H，s，C₆H₄Cl），

7.26（7H，bs，NH，NH₂，OHX2，COOH X 2），

6.14（1H，t，J＝6Hz，C₁，-H），4.54（2H，s，

CH₂C₆H₄Cl），4.43-4.20（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H），

4.06（2H，s，HOOCCHOHCHOHCOOH），

3.75（2H，s，CH₂CO），2.41-2.28（2H，m，C_2′-H）

实施例29和30

按照实施例28的步骤，并使用适当的起始物质，制备表5所示的化合物。

表5

实施例29

结构：

收率：65%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

7.98（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.74（5H，bs，NH，NH₂，COOH×2）

7.40（4H，s，C₆H₄Cl）

6.52（2H，s，HOOCCH＝CHCOOH）

6.14（1H，t，J＝7Hz，C₁-H）

4.54（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.38-4.18（4H，m，C_{3′，4′，5′}-H）

3.64（2H，s，CH₂CO）

2.40-2.28（2H，m，C_2′-H）

实施例30

结构：

收率：58%

形状：吸湿粉末

NMR（DMSO-d₆）δ：

8.30（2.5H，bs，NH₂和SO₃H×1/2）

7.98（1H，d，J＝7Hz，C₆-H）

7.49（1H，d，J＝8Hz，对甲苯磺酸酯 C_2，6-H×1/2）

7.40（4H，s，C₆H₄Cl）

7.11（1H，d，J＝8Hz，对甲苯磺酸酯 C_3，5-H×1/2）

6.24-6.08（1H，m，C_1′-H）

4.54（2H，s，CH₂C₆H₄Cl）

4.42-4.38（2H，m，C_3′，4′-H）

4.23-4.20（2H，m，C_5′-H）

3.87（2H，s，-CH₂CO）

2.42-2.28（3.5H，m，C_2′-H和CH₃×1/2）

药物学试验Ⅰ

本发明的化合物12用来测试抗肿瘤作用，以证明这个化合物的用途。

试验方法：

（a）测定抗肿瘤活性的方法

将每次量为5×10⁶个细胞的肉瘤-180组织，被皮下移植到雄性ICR/JCC种鼠的背部（鼠重量27-30克）。试验化合物配成弱酸水溶液的形式。移植后24小时，连续七天，每天给每一只鼠（每组7只）口服剂量为1.0毫升/100克体重的该溶液一次，并且，移植后24小时，连续七天，每天给对照组每一只鼠口服1.0毫升/100克体重的不含试验化合物弱酸性溶液一次。

移植后第10天，肿瘤被移出体外，并称重计算服用含有试验化合物组的肿瘤的平均重量，以及对照组的相应重量。达到抑制50%肿瘤的有效剂量（ED₅₀）由剂量一反应曲线测定。体重增加的50%抑制剂量（IB₅₀）由剂量-体量变化曲线测定。治疗指数（T.I.＝IB₅₀/ED₅₀）由下面表6所示的结果测定。

表6

ED₅₀IB₅₀T.I.

mg/kg/天 mg/kg/天

化合物12 0.75 3.60 4.80

O^3′-对-氯苄基-2′-

脱氧-5-氟尿嘧啶核苷 0.94 1.54 1.64

表6说明化合物12比0^3′-对-氯苄基-2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷有较好的效果和较大的治疗指数，因此具有优良的抗癌效果。

药物学试验Ⅱ

用生理盐水将在ICR鼠腹水内每次培养的肉瘤-180稀释，并以每次2×10⁷个细胞将肉瘤-180皮下移植到雄性ICR鼠的背部。移植24小时后，将溶解在消毒的生理盐水中的试验化合物每天一次，连续七天，注入每只鼠的静脉中。

移植后第十天，将固体肿瘤从鼠的背部皮下分离出测定肿瘤的重量。这样测出试验化合物组的肿瘤重量（T）与对照组的肿瘤重量（C）的比率（T/C）。其中T/C为0.5的50%肿瘤抑制剂量（ED₅₀值）由剂量-反应曲线和比率（T/C）测定。表7说明结果。

表7

下面列出的是制备实列，说明含有本发明化合物的药物制剂的制备。

制备实例1

胶囊剂的制备

将化合物3，乳糖、结晶纤维素和谷物淀粉按下列比例混合，再按下面所示的量加入硬脂酸镁，用适当的包胶囊机将每胶囊约为293毫克混合物包上胶囊。

成份毫克/胶囊

化合物3 200.0

乳糖 30.0

结晶纤维素 50.0

谷物淀粉 10.0

硬脂酸镁 3.0

293.0

制备实例2

颗粒剂的制备

将化合物7，乳糖、结晶纤维素和谷物淀粉按下面比例混合。加入10%羟基丙基纤维素的乙醇溶液，捏合混合物并以适当的造粒机制成颗粒。颗粒进行干燥，并调节其为12-42目。用适当包覆机，按下面所示的量，将所得的颗粒状物用羟基丙基甲基纤维素包覆并调节其为12-24目。

成份毫克/胶囊

化合物7 200.0

乳糖 200.0

结晶纤维素 311.0

谷物淀粉 200.0

羟基丙基纤维素 10.0

羟基丙基甲基纤维素 70.0

脂肪酸单甘油酯 3.5

二氧化钛 5.5

1000.0

制备实例3

片剂的制备

将化合物1，谷物淀粉，甘醇酸纤维素钙按下列的比例混合。加入10%的羟基丙基纤维素的乙醇溶液，然后，捏合混合物，用适当的造粒机造粒，颗粒进行干燥。按下面的比例加入硬脂酸镁和硅酸酐，用适当的压片机将混合物压成片，并且用羟基丙基甲基纤维素包覆。

成份毫克/胶囊

化合物1 200.0

谷物淀粉 5.0

甘醇酸纤维素钙 20.0

羟基丙基纤维素 2.0

硬脂酸镁 2.5

硅酸酐 2.5

羟基丙基甲基纤维素 19.999

Macrogol 6000 0.001

二氧化钛 2.0

254

制备实例4

栓剂的制备

“Witepsol W-35”（商标，西德Dynamite Nobel公司的产品）在约60℃熔化，溶液在温度约45°保持。按下列比例将溶液和化合物5进行混合，用适当的栓剂制备机制成每个1克的栓剂。

成份毫克/栓剂

化合物5 400.0

Witepsol W-35 600.0

1000.0

制备实例5

实施例13的化合物 50毫克

乳糖 97毫克

结晶纤维素 50毫克

硬脂酸镁 3毫克

制成含有上述组合物的胶囊（每个200毫克）。

制备实例6

实施例14的化合物 10毫克

乳糖 184毫克

结晶纤维素 100毫克

硬脂酸镁 6毫克

制成含有上述组合物的胶囊（每个300毫克）。

制备实例7

实施例19的化合物 10毫克

乳糖 240毫克

谷物淀粉 340毫克

羟基丙基纤维素 10毫克

制成含有上述组合物的颗粒（每个包覆物600毫克）。

制备实例8

实施例8（E）的化合物 10毫克

Macrogol 300 500毫克

注射用蒸馏水（适量）

配制成含有上述组合物的注射液（每安瓿5毫升）。

制备实例9

制备一千个口服片剂，每个都含有实施例22中得到的10毫克化合物，每个都含有下列组合物。

实施例22的化合物 10毫克

乳糖（日本药典） 45毫克

谷物淀粉（″） 25毫克

结晶纤维素（″） 25毫克

甲基纤维素（″） 1.5毫克

硬脂酸镁（″） 1毫克

将实施例22的化合物、乳糖、谷物淀粉、结晶纤维素完全混合，并且用5%的甲基纤维素水溶液将混合物制成颗粒。这样得到的颗粒通过200目的筛，并小心干燥。干燥颗粒通过200目的筛，与硬脂酸镁混合，混合物压成片剂。

制备实例10

实施例9的化合物 10毫克

Macrogol 500毫克

注射用蒸馏水适量

配制成含有上述组合物的注射液（每安瓿5毫升）。

制备实例11

实施例8（E）的化合物 0.4克

聚乙二醇1000 30克

聚乙二醇6000 50克

净化水 20克

制备含有上述组合物的栓剂，每个重2.5克。

Claims

1、一种制备式(Ⅰ)的2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷衍生物或其盐的方法，

(Ⅰ)

式中R₁和R₂中的一个是苄基，其苯环上可任选地具有一个、二个或三个选自C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤代C₁-C₃烷基、卤素原子、羟基和硝基的取代基，而另一个是具有2-20个碳原子的氨基酸残基，该方法包括：

(1)将下式的化合物

式中，R₃和R₄中的一个是氢原子，而另一个是苄基，其苯环上可任选地具有一个、二个或三个选自C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤代C₁-C₃烷基、卤素原子、羟基和硝基的取代基，

与下式的氨基酸或其反应衍生物进行反应，

式中A是在其N-位置上有保护基团的具有2-20个碳原子的氨基酸残基，而且在需要时可从得到的化合物中除去保护基，或者

(2)将下式的2′--脱氧尿嘧啶核苷衍生物

式中R₇和R₈中的一个是氢原子，而另一个是在其N-位置上有保护基团的具有2-20个碳原子的氨基酸残基，

与下式的亚胺酸苄脂在三氟甲基磺酸存在下进行反应，

其中R₉是苄基，其苯环上可任选地具有一个、二个或三个选自C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤代C₁-C₃烷基、卤素原子、羟基和硝基的取代基，

在需要时，可将用以上方法所得到的化合物进行盐的交换反应。

2、根据权利要求1所述的方法，其中，所述氨基酸残基可由下式表示

式中B是可任选地带有苯基或低级烷硫基的低级亚烷基、而R¹⁰和R¹¹各代表氢原或低级烷基，或与连接它们的氮原子结合在一起形成哌啶环。

3、根据权利要求1所述的方法，其中，所述氨基酸残基是在杂环上的羰基不和氮原子连在一起的吡咯烷基羰基或哌啶羰基。

4、根据权利要求1所述的方法，其中所述氨基酸残基是下述氨基酸中的一种氨基酸的残基：丝氨酸、苏氨酸、精氨酸、羟基赖氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、色氨酸、酪氨酸、组氨酸、羟基脯氨酸、β-氨基丙酸、0-乙酰基赖氨酸或天冬氨酸-β-苄基酯。