CN1073166A

CN1073166A - 羟肟酸衍生物

Info

Publication number: CN1073166A
Application number: CN92112985A
Authority: CN
Inventors: 矶村八州男; 赤松清二郎; 余田彻; 工藤雅文; 须贺亮
Original assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1991-11-06
Filing date: 1992-11-06
Publication date: 1993-06-16
Also published as: CA2122046A1; JPH05125029A; TW225519B; EP0613883A4; AU2799792A; US5442110A; WO1993009090A1; EP0613883A1; US5473100A

Abstract

通式(I)(式中R¹、R²、R³、R⁴、X和Y如说明书中所定义)所表示的化合物，其医药组合物及其制备方法。

本发明化合物有间质金属蛋白酶阻断作用，可作为结缔组织破坏亢进所致疾病的预防、治疗剂。

Description

本发明涉及能有效地预防和治疗因结缔组织破坏亢进所致疾病的羟肟酸衍生物，包括其制备方法及含羟肟酸衍生物的医药组合物等。

作为哺乳动物结缔组织的主要构成成分的胶原和糖蛋白等经间质金属蛋白酶（Matrix Metallo protease：MMP）特异性分解后，再被其它蛋白分解酶水解。间质金属蛋白酶迄今已知有胶原酶（MMP1）、明胶酶（MMP2）和糖蛋白酶（MMP3）等。这些间质金属蛋白酶与其体内抑制因子-组织抑制剂（Tissue Inhibitor of Metallo-protease：TIMP）和α₂-巨球蛋白等对结缔组织的代谢调节有很大关系。结缔组织破坏的亢进被认为是由于这种间质金属蛋白酶与机体内抑制剂的水平不平衡，导致间质金属蛋白酶过剩，从而由胶原和糖蛋白的分解而引起的。

因此，在结缔组织破坏亢进引起的所谓类风湿性关节炎、变形性关节炎等关节炎、牙周疾病、角膜溃疡、表皮水泡症、肿瘤性浸润及骨吸收疾病等的预防、治疗方面，可认为抑制间质金属蛋白酶分解作用的间质金属蛋白酶抑制剂在抑制组织破坏上是有用的。

迄今为止，进行了阻断胶原酶活性，抑制胶原分解的医药化合物的开发研究，报道了有大致区别的某种磷酸衍生物与羟肟酸衍生物。

特别与本发明化合物有关连的羟肟酸衍生物可举出特许公开发表公报平4-502008号（国际公开WO90/05719），在该公报中，揭示了以羟肟酸为基础的胶原酶阻断剂-以如下通式表示的化合物。

式中，R¹为C₁-C₆烷基、苯基、硫代苯基、取代苯基、苯基（C₁-C₆）烷基、杂环基、（C₁-C₆）烷基羰基、苯甲酰甲基或取代的苯甲酰甲基，或者，在n＝0时，R¹为R^X表示为下述基团-SR^X时的基团;

R²为氢原子或C₁-C₆烷基、C₁-C₆链烯基、苯基（C₁-C₆）烷基、环烷基（C₁-C₆）烷基或环链烯基（C₁-C₆）烷基;

R³为氨基酸侧链或C₁-C₆烷基、苄基、（C₁-C₆）烷氧基苄基、苄氧基（C₁-C₆）烷基或苄氧基苄基;

R⁴为氢原子或C₁-C₆烷基;

R⁵为氢原子或甲基;

n为0、1或2的整数;

A为C₁-C₆碳氢链，可任意地被1种或1种以上C₁-C₆烷基取代，也可为苯基或取代苯基。

然而，鉴于迄今的胶原酶阻断剂的药理学、毒理学或物理化学性质，作为间质金属蛋白酶阻断剂，期待在体内有确实药理活性或药理活性增强、对其他间质金属蛋白酶效力范围扩大、毒性减轻或溶解性改善等种种方面有所改进。

本发明者们找到了与已有的胶原酶阻断剂化学结构上不同的新型羟肟酸衍生物，认定其优良的胶原酶阻断活性，发现其可成为结缔组织破坏亢进所致疾病的预防、治疗剂，从而完成了本发明。

即本发明提供以如下通式

（式中符号表示如下意思：

R¹：可被从巯基、低级烷基硫代基、芳基硫代基和由低级酰基硫代基组成的一组中选择的取代基取代的低级烷基;

R²、R³和R⁴：相同或不同的低级烷基;

X：氧原子或硫原子;

Y：单键或低级亚烷基）

表示的化合物、其制药学上允许的盐、其制药学上允许的水合物、其制药学上允许的溶剂合物或其立体异构体。

本发明还提供上述化合物（Ⅰ）等的制造方法或含这些化合物的医药组合物。

本发明化合物（Ⅰ）在如下方面具有化学结构上的特征：与上述特许公开发表公报平4-502008号记载的化合物的R²对应的部分有-Y-X-R²，形成醚或硫醚结构。而且，在该公报实施例中仅仅揭示了R³为苄基的化合物，而本发明的化合物对应于该R³的基团为必定以低级烷氧基取代的苄基，这一点也是与该公报具体揭示的化合物化学结构不同之处。

特别是，上述公报中仅揭示体外胶原酶活性，而未揭示体内效果。

以下对本发明化合物进行详述。

在本说明书通式的定义上，“低级”意味着碳原子数为1至6的直链或支链碳链。

因此，“低级烷基”为直链或支链的C₁-C₆烷基，具体地为诸如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、异己基等。

特别是，R¹、R³和R⁴作为低级烷基与可被取代的低级烷基中的低级烷基，以直链或支链的C_1-4烷基为佳，尤以甲基为最佳。而且，作为R²的低级烷基中较好的为直链或支链C_1-4烷基，其中以丙基为最理想。

作为R¹的低级烷基的取代基的“低级烷基硫代基”，具体地可举出甲基硫代基、乙基硫代基、丙基硫代基、异丙基硫代基、丁基硫代基、异丁基硫代基、仲丁基硫代基、叔丁基硫代基、戊基硫代基、己基硫代基等直链或支链C_1-6烷基硫代基，其中甲基硫代基、异丙基硫代基等C_1-4烷基硫代基作为较好的基团。

作为取代基“芳基硫代基”，具体地可列举诸如苯基硫代基、甲苯基硫代基、甲氧苯基硫代基、萘基硫代基等C_6-10芳基硫代基，其中以苯基硫代基为佳。

作为取代基“低级酰基硫代基”，具体地可列举诸甲酰基硫代基、乙酰基硫代基、丙酰基硫代基、丁酰基硫代基、异丁基硫代基、戊酰基硫代基、己酰基硫代基等直链或支链的C_1-6酰基硫代基，其中以乙酰基硫代基为佳。

作为Y表示的“低级亚烷基”，具体地可列举诸如亚甲基、亚乙基、甲基亚乙基、1，3-亚丙基、亚丙基、1，4-亚丁基、1，5-亚戊基、1，6-亚甲基等直链或支链C_1-6烷基，其中以亚甲基等C_1-3亚烷基为佳。

本发明化合物（Ⅰ）与碱生成盐。本发明中也包括化合物（Ⅰ）的制药学业上可允许的盐。作为这样的盐，具体地可列举诸如与钠、钾等碱金属生成的盐，与镁，钙等碱土金属生成的盐，与铝生成的盐，与甲胺、乙胺、二甲胺、二乙胺、三甲胺、三乙胺、二乙醇胺、环己胺、赖氨酸、鸟氨酸等有机碱和氨生成的盐。

本发明化合物（Ⅰ）分子中至少有3个以上不对称碳原子，由于这些不对称碳原子的存在，至少存在8个以上立体异构体。本发明中包括化合物（Ⅰ）的光学对映体和非对映异构体等全部立体异构体及其混合物（外消旋体），本发明说明书、权利要求书中的术语“立体异构体”可理解为也含异构体混合物。

本发明进一步包括这些化合物（Ⅰ）的制药学上允许的水合物，制药学上允许的各种溶剂合物和结晶多形等。

本发明化合物（Ⅰ）中，较好的化合物为-Y-X-R²为丙氧基甲基或丙基硫代基的化合物，尤以-Y-X-R²为丙氧基甲基或丙基硫代基，同时R¹为烷基或低级烷基硫代甲基的化合物为特别好。

本发明的代表目的化合物举例如下：

（1）N^a-〔3-（N-羟基氨基甲酰）-4-甲基硫代-2-丙氧基甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺及其制药学上许可的盐和立体异构体。

（2）N^a-〔3-（N-羟基氨基甲酰）-4-异丙基硫代-2-丙氧基甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺及其制药学上许可的盐和立体异构体。

（3）N^a-〔3-（N-羟基氨基甲酰）-2-丙基硫代）丁酰基-N，O-二甲基酪氨酰胺及其制药学上许可的盐和立体异构体

以通式（Ⅰ）表示的本发明的目的化合物可利用其基本骨架及取代基特征，用各种合成法加以制备。以下所示为其代表性制法。

（反应式中，R¹、R²、R³、R⁴、X和Y意义同上，R^1-a为除去以巯基取代的低级烷基外与R¹相同的基团，R⁵为氢原子或保护基，R⁶为氢原子或C_1-5烷基，A¹为低级亚烷基）

就R¹为巯基取代的低级烷基以外的化合物而言，本发明化合物（Ⅰ）可按如下两种方法加以制备：制法A.将相应的羧酸（Ⅱ）或其活性衍生物与通式（Ⅲ）表示的可被保护的羟胺或其盐进行反应，接着按所需要的除去保护基;制法B.将通式（Ⅳ）表示的可被保护的羧酸或其活性衍生物与通式（Ⅴ）表示的胺或其盐反应，进行酰胺化，接着按所需要的除去保护基。当R¹为巯基低级烷基时，可用含相应的酰基硫代低级烷基的化合物（Ⅰ-a）加水分解的方法（制法C）制备本发明化合物（Ⅰ）。

以下详细介绍各有关制法。

制法A

本方法利用由羧酸或其活性衍生物制备羟肟酸的反应，可使用此常法。

作为化合物（Ⅱ）的活性衍生物，可列举：甲酯、乙酯、异丁酯、叔丁酯、苄酯、对甲氧基苄酯等通常的酯;与如酰氯那样的酰卤、对硝基苯酚等的苯酚类化合物和1-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑（HOBT）等N-羟胺类化合物反应所得的活性酯;对称型酸酐;烷基碳酸、对甲基苯磺酸等与其他有机酸反应所得的有机酸类的混合酸酐及与二苯基膦酰氯、N-甲基吗啉等反应所得的磷酸类的混合酸酐等。使用烷基碳酸混合酸酐，可容易地成为目的物，故特别有利。

使用游离的羧酸（Ⅱ）时，在双环己基碳化二亚胺（DCC）等缩合剂存在下进行反应。

反应随所使用的活性衍生物不同而不同。通常宜在N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、乙醚、二噁烷、四氢呋喃、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿等对反应惰性的有机溶剂或其混合溶剂中，将化合物（Ⅱ）或其活性衍生物与可被保护的羟胺或其盐以等摩尔量至一方略过量，在冷却至室温下进行反应。

在反应中，添加N-甲基吗啉、三甲胺、三乙胺、N，N-二甲基苯胺、吡啶、甲基吡啶、二甲基吡啶、三硝基甲苯B等碱，在使反应顺利进行上是有利的。

作为保护基，可用苄基、2，6-二氯苄基，2-硝基苄基等取代苄基等苄基类保护基和苄氧基羰基等酰基类保护基等等羟基保护基。这些保护基除了均可用接触还原法除去外，苄基类保护基用酸处理，酰基类保护基用碱性化，可容易地除去。

制法B

此本法是从羧酸或其衍生物制备酰胺，可采用酰胺化或肽化的常规方法。

在此方法中，活性衍生物为酰氯、酰溴之类的酰卤;酰基迭氮、与制法A相同的活性酯;对称型酸酐、与制法A相同的混合酸酐等。

在游离酸或上述活性酯中使化合物（Ⅳ）发生反应时，除了上述DCC外，还可在羰酰二咪唑、二苯基磷酰迭氮和二乙基磷酰苯胺等缩合剂的存在下进行反应。

本发明中，在HOBT-DCC法等活性酯与缩合剂共同存在下，反应尤为有利。

在与制法A制备羟肟酸的有机溶剂大致相同的有机溶剂中，将化合物（Ⅳ）或其活性衍生物与化合物（Ⅴ）或其盐以大致等摩尔量至一方略过量。通常于冷却至室温下进行反应较为有利。

同时，在与制法A同样碱的存在下进行反应，在反应的顺利进行上较为有利。

关于保护基及其除去，与制法A相同。

制法C

此方法是硫酯的加水分解，用氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化铵、碳酸铵和氨基甲酸铵等碱的水性溶剂进行处理而实施的。

其它制备方法

本发明化合物（Ⅰ）也可用上述制法C以外的取代基变换方法进行制备。以下就主要的取代基变换法加以说明。

（1）还原

由相应的R¹为低级链烯基或低级亚烷基的化合物还原可得到R¹为低级烷基的化合物。这种还原法可列举诸如加氢反应，较好地是在钯-炭等催化剂存在下的接触还原处理。催化剂还原反应是在甲苯、甲醇、乙醇等惰性溶剂中，在室温或加热下进行的。

（2）加成

a.在无溶剂或甲醇等惰性溶剂中，在室温下，用相应的R¹为低级链烯基或低级亚烷基的化合物对相应的低级烷基硫醇、芳基硫醇、硫代低级链烷酸作加成反应处理，可得到R¹为低级烷基硫代低级烷基、芳基硫代低级烷基、低级酰基硫代低级烷基的化合物。

b.用具有部分结构为

的链烯酰胺衍生物对相应的低级烷基硫醇进行与a同样的加成反应处理，可制备Y为单键、X为硫原子的化合物。

（3）醚化、硫醚化

a.应用常规的醚化、硫醚化反应，将部分结构为或

（Z：卤原子）的化合物与R²-Z（Z：同前）或R²-XH在氢氧化钠等碱的存在下进行反应，可制备本发明化合物（Ⅰ）。

b.R¹为低级烷基硫代低级烷基、芳基硫代低级烷基的化合物也可用与a同样的方法，由相应的硫醚与卤化物的反应而制得。

由上述各制法所得到的反应生成物、游离化合物，它们的盐，水合物或各种溶剂合物分离后精制。盐可用通常的成盐反应制得。

用分离、精制、提取、浓缩、蒸馏、结晶化、过滤、重结晶、各种色谱法等通常的化学操作进行处理。

各立体异构体和非对映异构体混合物等可按常法，如分步结晶化或色谱法等加以分离。

本发明化合物（Ⅰ）、其制药学上允许的盐、其制药学上允许的水合物等具有优良的阻断间质金属蛋白酶活性，特别是，可证明其对家兔变形性关节炎模型有效，在结缔组织破坏亢进被认为是主要原因的人和温血动物的类风湿性关节炎、变形性关节炎等关节炎、牙周疾病、角膜溃疡、表皮水泡症、肿瘤性浸润及骨吸收疾病等的预防、治疗上是有用的。

本发明化合物的间质金属蛋白酶阻断作用被确认为是对胶原酶的阻断活性。

胶原酶阻断活性可以如下方法加以测定。

（）对胶原酶阻断活性的测定法

将M.butyricum 10mg/ml（液体石腊配制）从Lewis大鼠尾根部给予0.1ml，3-4周后从佐剂性关节炎发病大鼠的膝关节取出含膝盖骨的骨膜组织，将其置于0.2%乳白蛋白MEM培养基中培养2天。按永井等的方法〔炎症4（2），123（1984）〕，在培养的上清液中，用荧光标记胶原测定对胶原酶的阻断作用。

用胰蛋白酶活化培养上清液中胶原酶，接着用过量的大豆胰蛋白酶抑制剂灭活胰蛋白酶。然后加入阻断剂，加入底物胶原，于36℃下反应。2至数小时后以乙二胺四乙酸（EDTA）终止反应，以70%乙醇只提取胶原分解产物。离心处理于520nm（Em）/495nm（Ex）处测定所提取的分解物的荧光强度。

结果显示，实施例大部分化合物的胶原酶活性（IC₅₀）值为10^-9-10^-10M。

（2）变形性关节炎模型

关于家兔变形性关节炎模型的评价，按Arthritis and Rheuma-tism 26，875（1983）;同上26，1132（1983）;同上26，1380（1983）记载的方法进行测定。

用上述家兔变形性关节炎模型的试验法可证实本发明化合物有效。

含有以通式（Ⅰ）表示的化合物、其制药学上允许的盐、制药学上允许的水合物等的1种或2种以上有效成分的医药组合物，用通常所用的制剂用载体、赋形剂、其它添加剂等，制成片剂、散剂、细粒剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、水剂、注射剂、栓剂、软膏、贴敷剂等，经口（包括舌下）或非经口（包括关节内）给药。

本发明化合物对人的临床用量根据用药患者的症状、体重、年令和性别等作适当决定，通常成人1天口服10-500mg，以100-500mg为佳，非经口给药1-100mg，以10-100mg为佳，一次或分数次给予。给药量因各种条件而异，也有比上述给药范围用药少而足够的情况。

按本发明，作为口服的固体组合物可用片剂、散剂、颗粒剂等。这样的固体组合物，是将一种或一种以上活性物质至少与一种惰性稀释剂，例如乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、羟丙基纤维素、微晶纤维、淀粉、聚乙烯吡咯烷、硅铝酸镁，混合而成。按常规方法，组合物也可含有惰性稀释剂以外的添加剂，如硬脂酸镁之类润滑剂、纤维素乙醇酸钙之类崩解剂、乳糖之类稳定剂、谷氨酸或天门冬氨酸之类助溶剂。片剂或丸剂按需要可用蔗糖、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯等胃溶性或肠溶性物质的薄膜包衣。

口服给药的液体组合物包括药剂上允许的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、酏剂等，含有一般所用的惰性稀释剂，如精制水、乙醇。该组合物也可含有除惰性稀释剂外的可溶化剂及助溶剂、湿润剂、悬浮剂之类辅助剂、甜味剂、风味剂、芳香剂和防腐剂。

非经口给药的注射剂包括无菌的水性或非水性溶液剂、混悬剂、乳剂。水性的溶液剂、混悬剂含有诸如注射用蒸馏水及生理盐水。非水溶性的溶液剂。混悬剂为诸如丙二醇、聚乙二醇、橄榄油之类植物油，乙醇那样的醇类，聚山梨酸酯80（商品名）等。这样的组合物还可含有等渗剂、防腐剂、湿润剂、乳化剂、分散剂、稳定剂（如乳糖）、可溶化至辅助溶解剂之类的添加剂。将这样的组合物以如下方式灭菌，例如，通过截留细菌的滤器过滤，与杀菌剂配合或照射。这些组合物也可制成无菌的固体组成物，在使用前溶于无菌水或无菌注射用溶剂，然后使用。

下面，列举实施例更具体地说明本发明。另外，以参考例对实施例所用原料化合物的制备方法加以说明。

参考例和实施例中，Tr为三苯甲基、Bzl为苄基、tBu为叔丁基、iBu为异丁基、HOBT为1-羟基苯并三唑、DCC为二环己基碳二亚胺。

参考例1

（1）

在-15℃下，在60%氢化钠10g、咪唑0.35g和干燥四氢呋喃90ml的混合液中，于15分钟内滴加N-三苯甲基-D-丝氨酸8.3g、四氢呋喃50ml的混合液，于-15℃下搅拌45分钟。在混合液中加入丙基碘32g，在-5℃下搅拌2小时，再在-15℃下加入60%氢化钠4.0g、丙基碘64g，在-5℃下搅拌过夜。在反应液中加水400ml，用乙醚100ml提取2次。

用冰醋酸中和水层。用乙醚120ml提取2次。合并醚液，用5%枸橼酸水溶液和饱和食盐水洗净，干燥，浓缩，得油状物。在油状物状物中加入10%乙酸-乙醇溶液36ml，于室温下搅拌过夜。滤取沉淀物，用乙醇及乙醚洗净，得O-丙基-D-丝氨酸3.2g。

理化性质

MS（m/z）（EI）：147（M⁺）

¹H NMR（D₂O，TMS内部标准）

δ：0.87（3H，t，J＝7.2Hz），1.46～1.69（2H，m），

3.51（2H，t，J＝6.7Hz），3.87（2H，m）.

（2）

在O-丙基-D-丝氨酸11.5g、溴化钾32.7g和23%硫酸60ml的混合液中，于-5℃下，经1小时时间，滴加亚硝酸钠7.12g溶于70ml水中的溶液。在0℃下搅拌5小时，反应液用二氯甲烷100ml提取4次，干燥、浓缩，得2R-溴-3-丙氧基丙酸12.9g。

理化性质

MS（m/z）（EI）：211（M⁺）

¹H NMR（CDCl₃，TMS内部标准）

δ：0.91（3H，t，J＝7.3Hz），1.41～1.71（2H，m），

3.50（2H，t，J＝6.5Hz），3.85（2H，m），

4.35（1H，m）.

（3）

在2R-溴-3-丙氧基丙酸16.4g、二氯甲烷50ml的混合液中，于-40℃下，加入等体积的异丁烯和2ml浓硫酸，封管，于室温下搅拌过夜。将反应液浓缩至1/2体积，二氯甲烷层用10%碳酸钠水溶液洗涤2次，干燥、浓缩，得2R-溴-3-丙氧基丙酸叔丁酯18.2g。

理化性质

¹H NMR（CDCl₃，TMS内部标准）

δ：0.91（3H，t，J＝7.3Hz），1.47（3H，s），

1.46～1.60（2H，m），3.46（2H，t，J＝6.6Hz），

3.79（2H，m），4.20（1H，m）.

（4）

在丙二酸二苄酯19.4g与N，N-二甲基甲酰胺70ml的混合液中，于冰冷却下加入叔丁醇钾7.65g。于0℃下，经1小时时间滴加2R-溴-3-丙氧基丙酸叔丁酯和N，N-二甲基甲酰胺30ml的混合液，于5℃下搅拌过夜。在反应液中加入饱和氯化铵水溶液，以乙酸乙酯100ml提取4次，干燥，浓缩，得〔2-苄氧基羰基-3R-（叔丁氧羰基）-4-丙氧基〕丁酸苄酯29.5g。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：471（M⁺+1）

¹H NMR（CDCl₃，TMS内部标准）

δ：0.84（3H，t，J＝7.7Hz），1.39（9H，s），

1.46～1.50（2H，m），3.25（2H，t，J＝7.0Hz），

3.48（1H，s），3.60（2H，m），

4.01（1H，d，J＝9.0Hz），

5.11～5.17（4H，m），7.26～7.34（10H，m）.

参考例2

将N，O-二甲基酪氨酰胺50g、干燥氯仿400ml、柠康酸酐27g的混合液于室温下搅拌6小时后，减压浓缩，经硅胶柱层析，以氯仿-甲醇-乙酸洗脱，得N^a-（3-羧基-2-丁烯酰基）-N，O-二甲基酪氨酰胺20g。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：321（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：1.73（3H，s），2.59（1H，m），2.64（3H，d，J＝4Hz），

3.20（1H，m），3.70（2H，s），4.27～4.33（1H，m），

5.74（1H，s），6.82（2H，d，J＝6.8Hz），

7.12（2H，d，J＝6.8Hz），7.81（1H，d，J＝2Hz），

8.46（1H，d，J＝7.2Hz），12.80（1H，br）.

参考例3

（1）

将〔2-苄氧基羰基-3R-（叔丁氧羰基）-4-丙氧基〕丁酸苄酯29.0g及95%三氟乙酸水溶液50ml的混合液于5℃以下搅拌过夜。浓缩，得油状物25.5g。在此油状物与1-羟基苯并三唑9.88g、N-甲基吗啉7.47g、O-甲基酪氨酸N-甲基酰胺15.3g及N，N-二甲基甲酰胺150ml的混合液中，于冰冷下滴加二环己碳二亚胺15.2g与四氢呋喃150ml的混合液，于室温下搅拌过夜。

浓缩后加入乙酸乙酯，有机层用10%枸橼酸水溶液、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，干燥、浓缩后，残渣经硅胶柱层析，以氯仿洗脱，得N^a-〔〔3，3-二（苄氧羰基）-2R-丙氧甲基〕丙酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺25.0g。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：606（M⁺+1）

¹H NMR（CDCl₃，TMS内部标准）

δ：0.78（3H，t，J＝7.7Hz），1.24～1.36（2H，m），

2.69（3H，d，J＝5.0Hz），3.78（3H，s），

4.60（1H，m），5.09～5.16（4H，m），6.30（1H，s），

6.55（1H，d，J＝8.5Hz），6.82（2H，d，J＝8.5Hz），

7.10（2H，d，J＝8.5Hz），7.26～7.32（10H，m）.

（2）

将盛有Na-〔〔3，3-二（苄氧羰基）-2R-丙氧甲基〕丙酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺300mg、甲醇5ml和10%钯炭催化剂50mg的混合物的容器内用氢气取代，于室温下搅拌2小时。滤去催化剂后，浓缩，得N^a-〔〔3，3-二羧基-2-丙氧甲基）丙酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺190mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：425（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.73～0.85（3H，m），1.31～1.46（2H，m），

2.60（3H，d，J＝4.4Hz），3.70（3H，s），

4.66（1H，m），6.82（2H，d，J＝7.8Hz），

7.12（2H，d，J＝7.8Hz），7.86（1H，d，J＝4.4Hz）.

参考例4

将盛有Na-〔〔3，3-二（苄氧羰基）-2R-丙氧甲基〕丙酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺4.9g、甲酸铵2.55g10%钯炭催化剂1.0g及乙醇70ml的混合液的容器内用氢气取代，于室温下搅拌1小时。滤去催化剂后，在滤液中加入哌啶0.76g，于室温下搅拌30分钟，加入35%甲醛水溶液3.8ml，于室温下搅拌过夜。

加热回流1小时后，浓缩，加入10%枸橼酸水溶液，用乙酸乙酯提取3次。有机层用碳酸钾水溶液提取，水层用盐酸调至pH4，再用二氯甲烷提取。将二氯甲烷提取液干燥，浓缩，得N^a-〔（3-羧基-2-丙氧甲基）-3-丁烯酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺1.5g。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：393（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.76～0.83（3H，m），1.37～1.48（2H，m），

2.57（3H，d，J＝4.8Hz），3.70（3H，s），

4.38（1H，m），5.53，6.06（2H，s），

6.77（2H，d，J＝8.4Hz），7.05（2H，d，J＝8.4Hz），

7.71（1H，d，J＝4.8Hz），7.98（1H，d，J＝8.8Hz），

12.60（1H，s）.

参考例5

将盛有N^a-〔（3-羧基-2-丙氧甲基）-3-丁烯酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺500mg、甲醇10ml及钯炭催化剂50mg混合液的容器内用氢气还原，于室温下搅拌5小时。滤去催化剂后，浓缩，得N^a-〔（3-羧基-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺470mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：395（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.59（3H，d，J＝6.8Hz），0.74～0.86（3H，m），

1.40～1.45（2H，m），2.58（3H，d，J＝4.4Hz），

3.69（3H，s），4，43（1H，m），6.80（2H，d，J＝8.8Hz），

7.14（2H，d，J＝8.8Hz），7.49（1H，d，J＝4.4Hz），

8.31（1H，d，J＝8.8Hz）.

参考例6

将N^a-〔（3-羧基-2-丙氧甲基）-3-丁烯酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺1.0g和硫代乙酸6ml的混合液于室温下搅拌过夜。浓缩，用乙醚洗涤残渣，得N^a-（3-羧基-4-乙酰硫代-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺0.8g。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：469（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.78～0.82（3H，m），1.39～1.44（2H，m），

2.25（3H，s），2.58（3H，d，J＝4.4Hz），

3.65（3H，s），6.74（2H，d，J＝8.8Hz），

7.13（2H，d，J＝8.8Hz），7.59（1H，d，J＝4.9Hz），

8.40（1H，d，J＝8.8Hz）.

熔点：185-186℃（从甲醇中重结晶）

元素分析值（C₂₂H₃₂N₂O₇S·1/2H₂O）以

C(%) H(%) N(%) S(%)

理论值 55.33 6.96 5.87 6.71

实验值 55.54 6.72 5.82 6.91

参考例7

将N^a-〔（3-羧基-4-乙酰硫代-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺200mg溶于10ml甲醇中。边通入氩气边加入1N氢氧化钠水溶液0.86ml，于室温下搅拌2小时。加入1N盐酸1ml，浓缩后，加水，滤取生成的沉淀，得N^a-〔（3-羧基-4-巯基-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺130mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：428（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.78～0.82（3H，m），1.39～1.46（2H，m），

2.59（3H，d，J＝4.4Hz），3.72（3H，s），

6.82（2H，d，J＝8.8Hz），7.15（2H，d，J＝8.4Hz），

7.54（2H，d，J＝4.9Hz），8.40（1H，d，J＝8.8Hz）.

参考例8

将N^a-〔（3-羧基-2-丙氧甲基）-3-丁烯酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺1.0g、硫酚5ml的混合液在60℃下避光搅拌2天。加乙醚，滤取沉淀物，用乙醚洗净，得N^a-〔（3-羧基-4-苯基硫代-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺200mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：504（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.78～0.82（3H，m），1.38～1.46（2H，m），

2.60（3H，d，J＝4.4Hz），3.68（3H，s），

6.71（2H，d，J＝8.8Hz），6.99（2H，d，J＝8.4Hz），

7.64（1H，d，J＝4.9Hz），8.50（1H，d，J＝8.8Hz）.

参考例9

在N^a-〔（3-羧基-4-乙酰硫代-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺800mg和甲醇10ml的混合液中，于室温下边通入氩气边加入1N氢氧化钠水溶液8.5ml，搅拌30分钟。加碘甲烷0.97g，再搅拌2小时。加1N盐酸10ml，浓缩，加水，滤取沉淀物，得N^a-〔（3-羧基-4-甲基硫代-2-丙氧基甲）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺650mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：441（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.79～0.83（3H，t，J＝7.2Hz），1.36～1.46（2H，m），

2.59（3H，t，J＝4.4Hz），3.39（3H，s），

3.68（3H，s），6.81（2H，d，J＝8.8Hz），

7.16（2H，d，J＝8.8Hz），7.54（1H，d，J＝4.4Hz），

8.43（1H，d，J＝9.1Hz）.

参考例10

将N^a-〔（3-羧基-4-乙酰硫代-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺800mg按参考例9同样的方法处理，得N^a-〔（3-羧基-4-异丙基硫代-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺730mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：470（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.79～0.83（3H，t，J＝7.3Hz），

0.96，1.02（6H，d，J＝6.3Hz），

1.40～1.45（2H，m），2.60（3H，d，J＝3.4Hz），

3.71（3H，s），6.80（2H，d，J＝8.3Hz），

7.17（2H，d，J＝8.3Hz），7.54（1H，s）.

8.46（1H，d，J＝8.8Hz）.

参考例11

将N^a-（3-羧基-2-丁烯酰基）-N，O-二甲基酪氨酰胺20g、硫代乙酸80ml的混合液在氩气氛围下，在室温下搅拌3天。反应液减压浓缩，残渣中加甲苯200ml，再减压浓缩。将残渣溶于150ml甲醇，在冰浴中冷至10℃以下。加入10N氢氧化钠水溶液11ml在氩气中搅拌2小时。在10℃以下加入碘代丙烷21.3g，搅拌3小时。反应液减压浓缩，残渣中加入300ml水，滤取生成的沉淀，干燥，得N^a-〔（3-羧基-2-丙基硫代）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺10g，为2个异构体的混合物。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：397（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.67～1.0（6H，（m）），1.29～1.49（2H，（m）），

2.12～2.26（1H，m），2.40～2.60（6H，（m）），

2.60～2.73（1H，m），2.86～2.90（1H，m），

3.63～3.68（3H，s），4.35～4.52（1H，m），

6.79～6.82（2H，（m）），7.12～7.19（2H，（m）），

7.89（1H，（m）），8.34～8.39（1H，（m））.

12.30（1H，br s）

实施例1

在N^a-〔（3-羧基-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺370mg、四氢呋喃10mg和N，N-二甲基甲酰胺2ml的混合液中，于冰冷却下加入N-甲基吗啉0.20ml，再加氯甲酸异丁酯0.26ml，在这样的温度下搅拌1小时。

在冰冷却下加入盐酸羟胺210mg、N-甲基吗啉0.33ml及N，N-二甲基甲酰胺4ml的混合液，在5℃以下搅拌过夜。浓缩后，加入乙酸乙酯和10%硫酸氢钾水溶液，滤取沉淀物，得N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺120mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：410（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.46（3H，d，J＝6.8Hz），0.80～0.83（3H，m），

1.41～1.46（2H，m），2.59（3H，d，J＝4.4Hz），

3.68（3H，s），6.79（2H，d，J＝8.8Hz），

7.15（2H，d，J＝8.7Hz），7.34（1H，d，J＝4.4Hz），

8.36（1H，d，J＝8.8Hz），8.75（1H，s），

10.42（1H，s）.

实施例2

将N^a-〔（3-羧基-4-乙酰硫代-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺800mg按实施例1同样的方法处理，得N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-4-乙酰硫代-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺680mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：484（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.78～0.82（3H，m），1.39～1.44（2H，m），

2.50（3H，s），2.59（3H，d，J＝4.8Hz），

3.72（3H，s），6.82（2H，d，J＝8.8Hz），

7.15（2H，d，J＝8.8Hz），7.54（1H，d，J＝4.4Hz），

8.40（1H，d，J＝8.8Hz），8.88（1H，s），

10.56（1H，s）.

实施例3

在N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-4-乙酰硫代-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺460mg、甲醇10ml的混合液中，在室温下边通入氩气边加入1N氢氧化钠水溶液4.8ml，搅拌2小时。加入1N盐酸5.0ml，浓缩，加水，滤取沉淀物，得N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-4-巯基-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺210mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：442（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.79～0.82（3H，（m）），1.40～1.46（2H，m），

2.60（3H，d，J＝4.9Hz），3.72（3H，s），

6.82（2H，d，J＝9.0Hz），

7.16（2H，d，J＝9.0Hz），

7.38（1H，d，J＝4.8Hz），

8.42（1H，d，J＝9.0Hz），

8.88（1H，s），10.56（1H，s）.

实施例4

将N^a-〔〔3-羟基-4-苯基硫代-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺150mg按实施例1同样的方法处理，得N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-4-苯基硫代-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺90mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：518（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.79～0.82（3H，t，J＝7.3Hz），

1.40～1.46（2H，m），2.57（3H，d，J＝4.4Hz），

3.67（3H，s），6.77（2H，d，J＝8.3Hz），

7.14（2H，d，J＝8.3Hz），7.88（1H，d，J＝4.4Hz），

8.34（1H，d，J＝8.3Hz），8.90（1H，s），

10.60（1H，s）.

实施例5

将N^a-〔（3-羟基-4-甲硫基-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺275mg按实施例1同样的方法处理，得N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-4-甲硫基-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺210mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：456（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.80～0.83（3H，t，J＝7.1Hz），

1.35～1.46（2H，m），2.61（3H，d，J＝4.0Hz），

3.41（3H，s），3.71（3H，s），

6.82（2H，d，J＝7.8Hz），

7.17（2H，d，J＝7.8Hz），

7.35（1H，d，J＝4.4Hz），

8.43（1H，d，J＝9.0Hz），

8.86（1H，s），10.52（1H，s）.

熔点：252-254℃（从N，N-二甲基甲酰胺中重结晶）

元素分析值（C₂₁H₃₃N₃O₆S）

C(%) H(%) N(%) S(%)

理论值 55.37 7.30 9.22 7.04

实验值 55.09 7.12 9.25 7.04

实施例6

将N^a-〔（3-羧基-4-异丙基硫代-2-丙氧甲基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺350mg按实施例1同样的方法处理，得N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-4-异丙基硫代-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺150mg。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：484（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.80～0.84（3H，t，J＝7.4Hz），

0.90，1.00（6H，d，J＝6.6Hz），

1.41～1.47（2H，m），2.60（3H，d，J＝3.4Hz），

3.71（3H，s），6.79（2H，d，J＝8.3Hz），

7.18（2H，d，J＝8.3Hz），

7.36（1H，d，J＝4.4Hz），

8.46（1H，d，J＝9.3Hz），

8.85（1H，s），10.49（1H，s）.

实施例7

将N^a-〔（3-羧基-2-丙硫基）丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺7.1g溶于干燥四氢呋喃150ml，N，N-二甲基甲酰胺10ml的混合液中。将混合液在氩气流中5℃以下冷却，加N-甲基吗啉2.4ml，然后在5℃以下滴加氯甲酸异丁酯2.8ml。在5℃以下搅拌20分钟后，加入盐酸羟胺1.9g、N-甲基吗啉3ml、N，N-二甲基甲酰胺20ml的混合液。

搅拌3小时后，将反应液减压浓缩。残渣中加50ml稀盐酸，滤取生成的沉淀。沉淀用水、乙醚洗后，干燥，得N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-2-丙硫基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺5.2g二种异构体的混合物。将1g混合物作硅胶柱层析，以氯仿-甲醇-乙酸（100∶2∶2）洗脱，得N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-2-丙硫基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺异构体A0.3g，（异构体B0.3g）。

理化性质

MS（m/z）（FAB）：412（M⁺+1）

¹H NMR（DMSO-d₆，TMS内部标准）

δ：0.54（3H，d，J＝6.8Hz），

0.85（3H，t，J＝7.2Hz），

1.43（2H，q，J＝7.2Hz），1.89～2.33（1H，m），

2.44（2H，t，J＝7.2Hz），2.58（3H，d，J＝4.0Hz），

2.65～2.71（1H，m），2.85～2.88（1H，m），

3.67（3H，s），4.47（1H，m），

6.79（2H，d，J＝8.4Hz），

7.14（2H，d，J＝8.4Hz），

7.85（1H，d，J＝4.4Hz），

8.34（1H，d，J＝8.8Hz），

8.75（1H，br s），10.43（1H，s）.

处方例1（片剂）

1片的含量

实施例5的化合物 10mg

乳糖 109mg

玉米淀粉 27.25mg

羟丙基纤维素 3mg

硬脂酸镁 0.75mg

150mg

将实施例5的化合物、乳糖和玉米淀粉在混合机中混合，将此混合物用预先配制的羟丙基纤维素水溶液以流动层制粒法制粒。所得的颗粒物于40℃下干燥后，与硬脂酸镁均匀混合，压缩成形，得每片重150mg的片剂。

处方例2（片剂）

1片的含量

实施例5的化合物 40mg

乳糖 130.5mg

玉米淀粉 14.5mg

羟丙基纤维素 4mg

羧甲基纤维素钙 10mg

硬脂酸镁 1mg

200mg

将实施例5的化合物、乳糖和玉米淀粉在混合机中混合，将此混合物用预先配制的羟丙基纤维素水溶液以流动层制粒法制粒。所得的颗粒物于40℃下干燥，在此颗粒物中均匀地混入羧甲基纤维素钙和硬脂酸镁后，压缩成形，得每片重200mg的片剂。

Claims

1、以通式(Ⅰ)

表示的化合物、其制药学上允许的盐、制药学上允许的水合物、制药学上允许的溶剂合物及其立体异构体，其特征在于：

式中，R¹为可被从巯基、低级烷基硫代基、芳基硫代基和低级酰基硫代基组成的一组中选择的取代基取代的低级烷基；

R²、R³和R⁴为相同或不同的低级烷基；

X为氧原子或硫原子；

Y为单键或低级亚烷基。

2、按权利要求1所述的化合物，其特征在于：-Y-X-R²基为丙氧甲基或丙基硫代基。

3、按权利要求1所述的化合物，其特征在于：-Y-X-R²基为丙氧甲基或丙基硫代基，同时，R¹为低级烷基或低级烷基硫代甲基。

4、N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-4-甲硫基-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺，其制药学上允许的盐或其立体异构体。

5、N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-4-异丙基硫代-2-丙氧甲基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺，其制药学上允许的盐或其立体异构体。

6、N^a-〔〔3-（N-羟基氨基甲酰基）-2-丙硫基〕丁酰基〕-N，O-二甲基酪氨酰胺，其制药学上允许的盐或其立体异构体。

7、一种医药组合物，其特征在于：由权利要求1所记载的化合物（Ⅰ）、其制药学上允许的盐、制药学上允许的水合物、制药学上允许的溶剂合物或其立体异构体与制药学上允许的载体所组成。

8、按权利要求7所述的医药组合物，其特征在于：是一种以结缔组织破坏亢进为主要原因的疾病的预防和/或治疗剂。

9、以通式（Ⅰ）

表示的化合物、其制药学上允许的盐、制药学上允许的水合物、制药学上允许的溶剂合物及其立体异构体的制备方法，

式中，R¹为可被从巯基、低级烷基硫代基、芳基硫代基和低级酰基硫代基组成的一组中选择的取代基取代的低级烷基;

R²、R³和R⁴为相同或不同的低级烷基;

X为氧原子或硫原子;

Y为单键或低级亚烷基，

该方法的特征在于：

（a）通式（Ⅱ）

式中，R²、R³、R⁴、X和Y意义同前，R^1-a为除巯基取代的低级烷基外，与R¹相同的基团所表示的羧酸或其活性衍生物与

通式（Ⅲ）

式中R⁵为氢原子或保护基

所表示的可被保护的羟胺或其盐进行反应，根据需要再除去保护基，

（b）通式（Ⅳ）

式中，R^1-a、R²、R⁵、X和Y意义同前，

表示的可被保护的羧酸或其活性衍生物与

通式（Ⅴ）

式中，R³和R⁴意义同前，

表示的胺或其盐进行反应，根据需要再除去保护基，或

（C）通式（Ⅰ-a）

式中，R²、R³、R⁴、X和Y意义同前，R⁶为氢原子或C_1-5烷基，A¹为低级亚烷基，

表示的低级酰基硫代低级烷基取代的化合物加水分解。