CN102215857B - 包含生姜提取物或姜烯酚的药物组合物 - Google Patents

包含生姜提取物或姜烯酚的药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN102215857B
CN102215857B CN200980146308.4A CN200980146308A CN102215857B CN 102215857 B CN102215857 B CN 102215857B CN 200980146308 A CN200980146308 A CN 200980146308A CN 102215857 B CN102215857 B CN 102215857B
Authority
CN
China
Prior art keywords
shogaol
rhizoma zingiberis
zingiberis recens
cell
recens extract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN200980146308.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102215857A (zh
Inventor
金善砺
河相根
柳钟薰
吴明淑
郑曙荣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Industry Academic Cooperation Foundation of Kyung Hee University
Original Assignee
Industry Academic Cooperation Foundation of Kyung Hee University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from KR1020080114964A external-priority patent/KR20100056020A/ko
Priority claimed from KR1020080118585A external-priority patent/KR20100060124A/ko
Priority claimed from KR1020080118582A external-priority patent/KR101288814B1/ko
Application filed by Industry Academic Cooperation Foundation of Kyung Hee University filed Critical Industry Academic Cooperation Foundation of Kyung Hee University
Publication of CN102215857A publication Critical patent/CN102215857A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102215857B publication Critical patent/CN102215857B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本发明提供一种用于预防或治疗学习障碍、记忆力障碍、帕金森病或缺血性脑血管病的药物组合物，该组合物包含生姜提取物或姜烯酚、及药学上允许使用的载体。此外，本发明提供一种包含将生姜提取物或姜烯酚作为有效成分的、用于改善或减轻学习障碍或记忆力障碍的食品组合物或用于提高学习能力或记忆力的食品组合物。

Description

包含生姜提取物或姜烯酚的药物组合物
技术领域
本发明涉及一种用于预防或治疗学习障碍、记忆力障碍、帕金森病或缺血性脑血管病的药物组合物，该组合物包含生姜提取物或姜烯酚、及药学上允许使用的载体。本发明还涉及一种有效成分包含生姜提取物或姜烯酚的、用于改善或减轻的学习障碍或记忆力障碍的食品组合物或用于提高学习能力或记忆力的食品组合物。
背景技术
记忆是指吸取从周围环境得到的新信息或学习的经验、知识并将其在大脑的特定部分符号化、存储，再进行回想的过程(William FGanong，Ganong’s生理学，首尔，韩昱丽，第289页，第291-292页，1999)。记忆的过程分为吸取、符号化、强化、维持、回忆的多个阶段。随着现代社会复杂化、专业化的发展趋势，需要获取大量信息和学习，因此要求大脑有效运动。并且，许多人苦于衰老及疾病引起的记忆力减退，而且随着人类寿命的延长要求高度的精神活动。为了很好的应对这种情况人们进行了多种努力，例如有必要进行精神活动，以使大脑清晰、增进记忆力；并且还有必要在本领域中开发可有效提高这样的功能的药品、功能性食品等。
帕金森病(Parkinson’s disease)是慢性进行性神经疾病，是代表性的疑难症之一。帕金森疾病因位于中脑的黑质(substantia nigra)部分中制备神经递质多巴胺的细胞突然退化或其数量大量减少引起。其病因具体仍不清楚，但已知其与脑的动脉硬化症、一氧化碳中毒、药物、副甲状腺机能低下症等引起的代谢性、外伤性脑炎后遗症有关。由于神经递质多巴胺的减少破坏了神经递质体系整体的平衡，其结果出现了帕金森病的代表性症状震颤(tremor)、强直(rigidity)、运动徐缓(bradykinesia)、姿势保持反射障碍(postural instability)等症状。
作为治疗帕金森病的药物已知有左旋多巴(l-dopa)制剂、多巴胺受体激动剂、抗胆碱能药剂、咪多吡(Eldepryl＝depreyl)等，这些药物的大部分不是针对病因进行治疗而是起到调节症状的作用，因此需要坚持持续地经口给药药物。但是，这些药物的长期经口给药导致药物副作用的问题。例如，抗胆碱能药剂可出现自律神经系统异常或精神异常等，因此给高龄患者持续经口给药受到限制。并且，左旋多巴制剂随着长时间的经口给药效果会逐渐降低，并且发生出现舞蹈病样及手或脚不自主动作的异常运动等副作用。其他还可以进行利用高频的神经刺激术，即高频松解术或深部脑刺激术等手术治疗，但是存在需要侵入性外科手术，并且费用高的问题。
缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease或ischemia)是向大脑供血的血管发生多种形态的异常病理而导致局部正常脑血流产生障碍的疾病。所述缺血性脑血管病包括短暂性脑缺血发作(Transient Ischemic Attck，TIA)、可逆性缺血性神经功能缺损(Reversible Ischemic Neurologic Deficit，RIND)、进展性脑卒中(progressing stoke)、完全性脑卒中(completed stroke)以及缺血性血管性痴呆(ischemic vascular dementia)。短暂性脑缺血发作(Transient Ischemic Attck，TIA)是指自由于脑缺血发生局部神经障碍后24小时以内恢复的缺血性脑血管病，其大部分在10～15分钟以内恢复。可逆性缺血性神经功能缺损(Reversible Ischemic NeurologicDeficit，RIND)是指局部缺血症状可持续24小时以上，但在3周以内恢复的缺血性脑血管病，并且由于其神经检查与TIA有明确的不同，因此可与TIA区分。进展性脑卒中(progressing stoke)是指局部脑缺血症状经数分至数小时恶化的缺血性脑血管病，其原因为关联部位脑组织中的脑缺血扩张，而这与由于缺血性脑水肿神经学症状恶化不同。颈内动脉区域的脑梗塞患者中约20％在最初48小时以内发生缺血症状，约40％的患者在椎基底动脉系统(vertebrobasilar territory)中发生缺血症状。完全性脑卒中(ischemic vascular dementia)是指局部脑缺血性症状发病后经数日至数周没有神经变化的情况。缺血性血管性痴呆(ischemic vascular dementia)为血管性痴呆的一种，其前提为发生过两次以上的缺血性脑梗塞，与痴呆时间不一定存在因果关系。
另一方面，生姜(Zingiber officinale Roscoe)为属于生姜科(Zingiberaceae)植物的姜(Zingiber)属植物，广泛分布在东南亚等地，并且一直在民间疗法中应用。生姜的成分中淀粉占整体的40～60％，并且含有芳香辛味成分、蛋白树脂、纤维素、戊聚糖、无机物等，作为生姜的辣味成分已知有姜酮(gingeron)、姜辣醇(gingerol)、姜烯酚(shogaol)、二氢姜酚(dihydrogingerol)，芳香成分已知有柠檬醛(citral)、崁烯(camphene)等40余种。关于生姜活性的研究报导已知有：抗氧化作用(Masuda等人，Chem.Lett.，1，pp189-192，1993；Jitoe et al.，Tetrahedron Lett.，35，pp981-984，1994)、抗炎症作用(Ozaki等人，Chem.Pharm.Bull.，39，pp2353-2356，1991；Jeenapongsa等人，J.Ethnopharmacol.，87，pp143-148，2003)、杀虫作用(Nugroho等人，Phytochemistry，41，pp129-132，1996)及子宫松弛作用(Kanjanapothi等人，Planta Med.，53，pp329-332，1987)。
发明内容
(一)要解决的技术问题
本发明人将安全性已确保的天然物提取物或源于天然物的化合物作为对象进行了多种药理活性检索。其结果惊人地发现生姜提取物及包含在生姜中的成分之一的姜烯酚具有优秀的提高学习能力和/或记忆力的效果，并且具有帕金森疾病及缺血性脑血管病的预防和/或治疗活性。
因此，本发明提供一种包含生姜提取物或姜烯酚、及药学上允许使用的载体的，用于预防或治疗学习障碍、记忆力障碍、帕金森病或缺血性脑血管病的药物组合物。
并且，本发明还提供一种有效成分包含生姜提取物或姜烯酚的、用于改善或减轻学习障碍或记忆力障碍症状的食品组合物或用于提高学习能力或记忆力的食品组合物。
(二)技术方案
根据本发明的一个方面，提供一种包含生姜提取物或姜烯酚、及药学上允许使用的载体的，用于预防或治疗学习障碍、记忆力障碍、帕金森病或缺血性脑血管病的药物组合物。
根据本发明的另一方面，提供一种有效成分包含生姜提取物或姜烯酚的、用于改善或减轻学习障碍或记忆力障碍症状的食品组合物。
根据本发明的又一方面，提供一种有效成分包含生姜提取物或姜烯酚的、用于提高学习能力或记忆力的食品组合物。
(三)有益效果
根据本发明，发现生姜提取物或姜烯酚，具有学习障碍、记忆力障碍、帕金森症或缺血性脑血管病的预防和/或治疗活性。因此，本发明的药物组合物可有效地预防或治疗学习障碍、记忆力障碍、帕金森病或缺血性脑血管病的中。并且，将包含生姜提取物或姜烯酚作为有效成分的食品组合物可有效地用于改善或减轻学习障碍、或记忆力障碍和/或提高学习能力或记忆力。
附图说明
图1显示了生姜提取物对神经突起生长(neurite outgrowth)的评价结果，其是将在C6细胞中处理生姜的乙醇提取物、正己烷分步分离物、乙酸乙酯分步分离物、丁醇分步分离物及水分步分离物后对获得的条件培养基在PC12细胞中处理后观察神经轴突生长长度的观察结果。
图2显示姜烯酚的对神经生长因子分泌诱导效果的评价结果，其是利用在C6细胞中以0.1、1、5、10及20μM浓度的姜烯酚处理后而获得的条件培养基(conditioned media)分析神经生长因子的定量分析结果。
图3显示姜烯酚神经生长因子分泌诱导效果的评价结果，其是将在C6细胞中处理姜烯酚得到的条件培养基在PC12细胞中处理后观察神经轴突生长的观察结果。
图4是对姜烯酚提高认知能力效果的评价结果，其为对ICR小鼠给药5mg/kg姜烯酚后为了测量认知能力的提高而进行的被动回避实验(passive avoidance task)的结果。
图5是对生姜提取物提高认知能力效果的评价结果，其为对ICR小鼠给药50mg/kg生姜提取物后为了测量认知能力的提高而进行的的被动回避实验(passive avoidance task)的结果。
图6显示针对MPP+神经毒性，在白鼠胎儿中脑细胞中姜烯酚对多巴胺能细胞保护效果的测量结果。
图7显示针对6-OHDA神经毒性，在白鼠胎儿中脑细胞中姜烯酚对多巴胺能细胞保护效果的测量结果。
图8显示针对MPP+神经毒性，在白鼠胎儿中脑细胞中生姜提取物对多巴胺能细胞保护效果的测量结果。
图9显示针对6-OHDA神经毒性，在白鼠胎儿中脑细胞中生姜提取物对多巴胺能细胞保护效果的测量结果。
图10显示姜烯酚对给药MPTP诱导了帕金森病的C57BL/6小鼠进行的爬杆试验(pole test)结果。
图11显示针对给药MPTP诱导了帕金森病的C57BL/6小鼠的纹状体(striatum)光学密度(optical density)减少的姜烯酚抑制活性的测量结果。
图12显示针对给药MPTP诱导了帕金森病的C57BL/6小鼠的对黑质(substantia nigra)的多巴胺阳性细胞(tyrosine hydroxylase positivecell)减少的姜烯酚抑制活性的测量结果。
图13显示生姜提取物对给药MPTP诱导了帕金森病的C57BL/6小鼠的的爬杆试验(pole test)结果。
图14显示针对给药MPTP诱导了帕金森病的C57BL/6小鼠的纹状体光学密度减少的生姜提取物抑制活性的测量结果。
图15显示针对给药MPTP诱导了帕金森病的C57BL/6小鼠中对黑质的多巴胺阳性细胞减少的生姜提取物抑制活性的测量结果。
图16显示2-血管闭合脑缺血模型中针对由缺血诱导的海马体部分神经细胞死亡的生姜提取物效能的评价结果。
图17是放大显示2-血管闭合脑缺血模型中海马体中发生了神经细胞死亡的CA1中间部分的结果。
图18显示在生姜提取物和分步分离物的CA1中细胞存活率的测量结果。
图19显示2-血管闭合(2-vessel occlusion)脑缺血模型中针对由缺血诱导的海马体部分神经细胞死亡的姜烯酚效能的评价结果。
图20是放大显示2-血管闭合(2-vessel occlusion)脑缺血模型中海马体中发生了神经细胞死亡的CA1中间部分的结果。
图21显示在姜烯酚的CA1中细胞存活率的测量结果。
具体实施方式
本说明书中，“学习”(learning)是指可感知和改变自身的活动的能力或行为，包括空间感知力、认知力、集中力等。
“学习障碍(learning disorder或learning disability)”是指与智能指数无关，由于多种原因，例如抑郁症、焦虑症、强迫症、社会环境因素(家庭不和、贫困、单亲家庭、压力)等“学习”能力比正常人降低的状态，包括空间感知力低下、认知力低下、集中力低下、儿童等的学业成就度低下等。
“记忆”或“记忆力”是指能够吸取从周围环境得到的新信息或学习的经验、知识并将其在脑的特定部位符号化、存储，再对其进行回忆的能力。
记忆力障碍(memory disorder或memory deficiency)”是指由于外伤、注意力缺乏、衰老、疾病等多种原因所述“记忆力”比正常人降低的状态，包括健忘症(amnesia)、集中力障碍、空间感知力缺失、学习能力的钝化、认知力丧失等。
“缺血性脑血管病(Ischemic Cerebrovascular Diseases或Ischemia)”是指向脑供血的血管出现多种形态的病理异常而导致局部正常脑血流发生障碍的疾病。所述缺血性脑血管病包括短暂性脑缺血发作(Transient Ischemic Attck，TIA)、可逆性缺血性神经功能缺损(Reversible Ischemic Neurologic Deficit，RIND)、进展性脑卒中(progressing stoke)、完全性脑卒中(ischemic vascular dementia)以及缺血性血管性痴呆(ischemic vascular dementia)。特别地，本说明书中“缺血性脑血管病”包括进展性和/或完全性脑卒中。
根据本发明，新发现了生姜提取物或姜烯酚可预防或治疗学习障碍或记忆力障碍，并且提高学习或记忆力。给药3天生姜提取物或姜烯酚后进行被动回避试验的结果，给药生姜提取物或姜烯酚时显示学习和/或记忆力显著提高。
并且，根据本发明发现生姜提取物或姜烯酚可预防或治疗帕金森病。用1-甲基-4-苯基吡啶(1-methyl-4-phenylpyridinium，MPP+)和6-羟基多巴胺(6-hydroxydopammine，6-OHDA)诱发多巴胺神经细胞毒性后，进行多巴胺神经细胞的保护活性试验的结果显示了姜烯酚对多巴胺能细胞的保护活性。并且，用N-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(N-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP)对小鼠诱发帕金森病后，进行爬杆测试(pole test)和多巴胺能细胞(dopaminergic neuron)保护活性试验的结果为：给药生姜提取物或姜烯酚时，恢复了由MPTP诱发的运动徐缓(dradykinesia)，并且在纹状体(striatum)和黑质(substantia nigra)中显示了优秀的多巴胺能细胞(dopaminergic neuron)的保护活性。
并且，根据本发明发现生姜提取物或姜烯酚可预防或治疗缺血性脑血管病。2-血管闭合脑缺血模型中生姜提取物和姜烯酚显示了优秀的对神经细胞死亡的抑制活性。
本发明提供一种包含生姜提取物或姜烯酚、及药学上允许使用的载体的，用于学习障碍、记忆力障碍、帕金森病或缺血性脑血管病的预防或治疗的药物组合物。
所述生姜提取物通过实施包括用提取溶剂提取生姜步骤的提取工序而获得。所述提取溶剂选自C1-C4醇、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿及它们的混合溶剂。更优选地，所述生姜提取物可以是将生姜用乙醇提取得到的乙醇-提取物。对所述提取溶剂的使用量没有太大的限制，例如其体积可以为生姜粉末试样1重量份的约1至10倍，优选地其体积可约为生姜粉末试样1重量份的1至5倍。并且，所述提取可采用冷浸提取、热水提取、超声波提取、冷凝回流提取等提取方法实施约7日至20日，优选地约7日至10日。优选地，所述提取可在室温(约25℃)采用冷浸提取法实施，并且所述提取过程可实施一次或多次，优选地可反复实施约3次。得到的提取液可根据需要利用通常的方法，例如约20至100℃，优选地约30至70℃下，通过减压浓缩或减压干燥得到液态或粉末状的生姜提取物。
为了提高所述生姜提取物的有效成分的含量，可通过实施附加的提取工序而获得。即，通过实施包括步骤(a)和步骤(b)工序(根据需要还可附加使用色谱分析分离工序)可得到有效成分含量高的生姜提取物。所述步骤(a)为将生姜用C1-C4醇进行提取的步骤；所述步骤(b)为向在步骤(a)中得到的提取物中添加水和正己烷进行提取并对得到的正己烷层进行分离的步骤。并且还可以选择通过实施包括步骤(a)、步骤(b′)以及步骤(c)的提取工序(根据需要还可以使用色谱分析分离工序)可得到有效成分含量高的生姜提取物。所述步骤(a)为将生姜用C1-C4醇提取的步骤；所述(b′)为向步骤(a)中得到的提取物中添加水和正己烷进行提取，并对得到的水层进行分离的步骤；所述步骤(c)为向步骤(b′)中得到的水层中添加乙酸乙酯，并对得到的乙酸乙酯层进行分离的步骤。或者还可以选择通过实施包括步骤(a)、步骤(b′)、(c′)以及步骤(d)的提取工序(根据需要还可以使用色谱分析分离工序)可得到有效成分含量高的生姜提取物。提取所述步骤(a)为将生姜用C1-C4的醇提取的步骤；所述(b′)为向步骤(a)中得到的提取物中添加水和正己烷进行提取，并对得到的水层进行分离的步骤；所述步骤(c′)为向步骤(b′)中得到的水层中添加乙酸乙酯，并对得到的水层进行分离的步骤；所述步骤(d)在步骤(c′)中得到的水层中添加正丁醇进行提取，并对得到的正丁醇层或水层进行分离的步骤。
所述附加的提取工序(即，步骤(b)、(b′)、(c)、及(d))可在室温(约25℃)通过冷浸提取法实施，并且所述提取过程可实施一次或多次，优选地可反复实施约3次。得到的提取液可根据需要利用通常的方法，例如约20至100℃，优选地约30至70℃下，通过减压浓缩或减压干燥得到液态或粉末状的生姜提取物。
并且，实施完所述附加的提取工序之后，根据需要可实施利用硅胶柱色谱法的分步分离工序。所述分步分离采用梯度增加极性的洗脱剂系统对己烷和乙酸乙酯混合溶剂(Hexane∶EtOAc＝30∶1→→1∶11)以及乙酸乙酯和甲醇混合溶剂(EtOAc∶MeOH＝25∶1→→1∶2)反复数次溶出来进行。
所述生姜提取物还可利用超临界萃取法得到。超临界萃取可在60～350bar，更优选地在约300bar的压力下，经5分钟～24小时，更优选地约6小时，在30～80℃，更优选地约50℃下实施。并且，二氧化碳的流速可维持在10～50g/分钟，更优选地维持在约30g/分钟，但并不限于此。所述超临界萃取可实施一次或多次(例如，2～4次)。包含生姜提取物的二氧化碳投入到分离机的中间部，由于压力下降到约50～60bar溶解度将急剧降低，并且分离机的上端和下端包裹在约40℃的加热套和约5℃以下的冷却套中，从而下端的提取物和液体二氧化碳与上端的气体二氧化碳分离。上端的气体二氧化碳经活性炭过滤器等过滤器由冷却器液化并再通过泵向提取机循环。
并且，在本发明的一个实施例中，提供有效成分包含姜烯酚的药物组合物。所述姜烯酚也称为6-姜烯酚，其化学名是(E)-1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)癸-4-烯-3-酮((E)-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)dec-4-en-3-one))，具有下面化学式(1)的结构。
化学式1
所述姜烯酚可从生姜分离，例如公开有以欧洲专利第EP1506958号等为首的多种合成方法。
本发明的药物组合物包含药学上允许使用的载体可以以多种形态制剂化，例如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮液、乳剂、糖浆剂、气溶胶等口服剂型、外用剂、栓剂及灭菌注射溶液的形态。尤其优选制成口服剂型。
所述药学上允许使用的载体包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯甲酯、羟苯丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油等。并且，包括充填剂、增量剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂。口服固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，并且这样的固体制剂可包括至少一个以上的赋形剂，例如淀粉、碳酸钙(calcium carbonate)、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)、明胶等，并且可包括硬脂酸镁、滑石等润滑剂。口服液体制剂包括混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂等，并且可包括水、液体石蜡等稀释剂、湿润剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。非口服制剂包括灭菌过的水溶液、非水性溶剂、混悬剂、乳剂、冻结干燥制剂及栓剂，非水性溶剂、混悬剂包括丙二醇(propylene glycol)、聚乙二醇、橄榄油等植物油、乙氧基化物等可注射的酯类等。栓剂的基质可使用半合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可脂、水石梓(laurinum)、甘油明胶等。
本发明的药物组合物中含有的生姜提取物或姜烯酚的经口给药量根据患者的状态及体重、疾病的程度、药物形态、经口给药方法及时间而不同，但本领域技术人员可适当选择。例如，所述姜烯酚可以以1日0.01至500mg/kg用量经口给药，优选地以10至200mg/kg的用量经口给药，所述经口给药一日可经口给药一次或分多次。并且，所述生姜提取物可以以1日0.01至500mg/kg用量经口给药，优选地以10至200mg/kg的用量经口给药，所述经口给药一日可经口给药一次或分多次。并且，本发明的药物组合物，相对组合物总重量所述姜烯酚或生姜提取物，其含量可以为0.001至50重量％。
本发明涉及有效成分包含生姜提取物或姜烯酚的、用于改善或减轻学习障碍或记忆力障碍的食品组合物。并且，本发明涉及有效成分包含姜烯酚的，用于提高学习或记忆力的食品组合物。所述食品组合物可根据如上所述的方法获得。
本发明的食品组合物可作为健康功能食品使用。根据韩国关于健康功能食品的法律第6727号的规定，所述“健康功能食品”是指，使用利于人体的功能性的原料或成分制备并加工的食品，并且“功能性”是指针对人体结构和功能，调节或吸收营养素，有益生理保健等用途。
本发明的食品组合物可包括通常的食品添加物，是否适合用作所述“食品添加物”在没有特别规定的前提下，根据韩国食品和药品管理局承认的食品添加物法典的总则及一般试验法等的关于相应品目的规定和基准来判定。
所述“食品添加物法典”收录的品目有，例如酮类、甘氨酸、柠檬酸钾、烟碱酸、肉桂酸等化学合成物；柿子色素、甘草提取物、结晶纤维素、高粱色素、瓜尔豆胶等天然添加物；L-谷氨酸钠制剂、面类碱性添加剂、防腐剂、焦油色素制剂等混合制剂类。
本发明的食品组合物，用于改善或减轻学习障碍或记忆力障碍或提高学习能力或记忆力，其生姜提取物或姜烯酚的含量为组合物总量的0.01至95重量％，优选为1至80重量％姜烯酚。并且，为了改善或减轻学习障碍或记忆力障碍，或为了提高学习能力或记忆力，可以制备并加工为片剂、胶囊、粉末、颗粒、液体制剂、丸剂。
例如，所述片剂形态的健康功能食品可通过将生姜提取物或姜烯酚、赋形剂、粘合剂、崩解剂及其他添加剂的混合物用通常的方法进行颗粒化后，加入润滑剂等进行压缩成型，或可直接对所述混合物压缩成型。此外，所述片剂形态的健康功能食品根据需要可包含甜味剂，并且根据需要可用适当的包衣剂来包衣。
在胶囊形态的健康功能食品中，硬胶囊剂可通过在硬胶囊中充填生姜提取物或姜烯酚；及其与赋形剂等添加剂的混合物或其颗粒或包衣颗粒来制备。并且软胶囊可通过将生姜提取物或姜烯酚；及其与赋形剂等添加剂的混合物充填到明胶等胶囊基质来制备。所述软胶囊剂根据需要可包含甘油或山梨醇等可塑剂、着色剂、防腐剂等。
丸状的健康功能食品可通过将生姜提取物或姜烯酚、赋形剂、粘合剂、崩解剂等的混合物用适当的方法进行成型来制备，并且根据需要用白糖或其他适当的制皮剂制皮，或用淀粉、滑石或适当的物质覆盖上丸衣。
颗粒形态的健康功能食品可通过适当的方法将所述生姜提取物或姜烯酚、赋形剂、粘合剂、崩解剂等的混合物制备成粒状，并且根据需要可包含着色剂、甜味剂等。
关于本申请发明的所述赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、着色剂等的用语定义是在本领域的公知文献中有记载的，这些用语包含与其功能等相同或类似的(大韩药典解说篇，文成社，韩国药科大学协会，第5次修订版，第33-48页，1989)的其他用语。
下面，通过实施例及试验例对本发明进行更详细的说明。但是，这些实施例及试验例用于例示本发明，本发明的范围不受这些实施例及试验例所限定。
实施例1.生姜提取物的制备
研磨1kg生姜并加入5升乙醇后实施1小时超声波提取后，过滤并将滤液分离。将通过所述过滤获得的固体物再放入到乙醇中并进行1小时的超声波提取后，过滤并再次分离滤液。所述过程又反复进行了2次。将得到的滤液合在一起并通过减压浓缩去除溶剂后通过冻结干燥完全去除水分，从而得到了200g生姜提取物。
向上述步骤中得到的乙醇-提取物200g中加入1000ml蒸馏水后使悬浮均匀，之后加入1000ml正己烷并通过分步分离过程分离出正己烷层。减压浓缩获得的正己烷层去除己烷并通过冻结干燥进行了干燥。反复实施3次该过程获得60g己烷分步分离物。并且，在剩下的水层中加入1000ml乙酸乙酯，分离乙酸乙酯层。减压浓缩获得的乙酸乙酯层，去除溶剂，然后通过冻结干燥完全去除水分。反复实施3次该过程获得50g乙酸乙酯分步分离物。并且，向剩下的水层中加入1000ml正丁醇，分离正丁醇层。减压浓缩获得的正丁醇层，去除溶剂，然后通过冻结干燥完全去除水分。反复实施3次该过程获得18g正丁醇分步分离物。并且，减压浓缩剩下的水层，去除溶剂，然后通过冻结干燥获得43g水分步分离物。
实施例2.生姜提取物的制备
利用超临界萃取法制备生姜提取物。将研磨并干燥的200g生姜试样充填到超临界提取机内部，在300bar及50℃的条件下，提取两次，每次6小时。此时，二氧化碳的流速维持在30g/分钟，分离机的中间部压力设置在50-60bar，上端的加热套温度设置在40℃，下端的冷却套温度设置在5℃以下。分离机上端的气体二氧化碳经过活性炭过滤器，通过冷却机被液化，再通过泵循环到提取机。如上所述，通过实施超临界萃取获得4.32g生姜提取物。
试验例1
利用已知分泌神经生长因子(nerve growth factor，NGF)的小鼠的神经胶质瘤(glioma)C6细胞株和小鼠的嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)PC12细胞株。已知神经生长因子对该PC12细胞株的作用与对神经细胞(neuron)的作用类似，可使神经轴突(neurite)生长。C6细胞和PC12细胞都是从韩国细胞株银行分领使用的(分别为KCLB第10107号及第21721号)。C6细胞使用补充有3.4g/L碳酸氢钠(NaHCO3，sodium bicarbonate)、10％牛胎血清(fetal bovineserum)及1％青霉素-链霉素抗生素(10000U/ml)的DMEM培养基(Gibco BRL，美国)进行了培养，PC12细胞使用补充有2.0g/L碳酸氢钠、10％马血清(horse serum)、5％牛胎血清及1％青霉素-链霉素抗生素(10000U/ml)的RPMI1640培养基(Gibco BRL，美国)进行了培养。牛胎血清和马血清在使用之前需要在55℃中进行30分钟非活性化处理，两种细胞都在维持70％湿度和37℃温度，并且供有5％二氧化碳的细胞培养基中进行培养。当为PC12细胞时，在培养容器中进行培养。所述培养容器表面涂覆在PBS缓冲溶液中稀释到50μg/ml的浓度后的多聚赖氨酸(Poly-D-lysine，Sigma)，涂覆1小时，之后再用PBS缓冲溶液清洗3次。使用的姜烯酚购自WAKO公司(日本)。
7(1)C6细胞中，生姜提取物对神经生长因子分泌诱导的影响效果
使用0.25％胰蛋白酶(Trypsin)-EDTA(Gibco BRL，美国)使附着在100mm培养容器中的C6细胞分离，添加10ml新鲜的培养基制备细胞悬浮液后，利用细胞计数器测量并计算存活的细胞数。基于计算值进行分株，使100mm培养板中包含2×106个细胞。培养24小时后，移除已有的培养基，更换为10ml的2％牛胎血清的DMEM培养基。所述2％牛胎血清的DMEM培养基分别添加有100ug/ml浓度的从实施例1中获得的乙醇提取物、正己烷分步分离物、乙酸乙酯分步分离物、正丁醇分步分离物及水分步分离物。继续培养24小时后获得各自的培养基。获得的培养基在1500rpm下离心分离10分钟后，仅收集上层液并将该培养基(条件培养基，conditioned media)用于PC12细胞处理。
对PC12细胞进行分株，使6孔培养板的每个孔包含105个细胞。培养24小时后，将用PBS缓冲溶液稀释的2ng/ml神经生长因子和从C6细胞中得到的条件培养基一起进行处理，每两天一次用新神经生长因子和条件培养基进行替换，培养6日并用显微镜进行观察。将条件培养基处理4日后，在每孔中随机选定10个细胞并拍摄显微镜照片，细胞中看不到神经轴突时表示为0，神经轴突长度与细胞直径相同时表示为1，并且生长为细胞体直径的2倍长度表示为2的方式对相对于细胞体直径的神经轴突长度的倍数进行了数字化。将所述试验反复进行3次并将其结果以平均±误差的形式进行处理，显示结果如图1。
从图1的结果可知，使用乙醇提取物时，神经轴突生长长度显示为细胞体的2.21±0.13倍；使用正己烷分步分离物时，显示2.35±0.38倍；使用乙酸乙酯时，显示3.24±0.34倍；使用正丁醇分步分离物时，显示0.93±0.17倍；及使用水分步分离物时，显示0.81±0.19倍。从所述结果可知生姜提取物具有生长因子分泌活性，尤其是乙酸乙酯分步分离物发挥最大的效果。
(2)C6细胞中，姜烯酚对神经生长因子分泌诱导的影响效果
采用与实验例1-1相同的方法，将C6细胞进行分株后，使用0.1、1、5、10及20μM的姜烯酚并制备条件培养基。
通过在神经生长因子测量试剂盒(DY556，研发系统，美国)中使用条件培养基，对由姜烯酚作用而在C6细胞中分泌的神经生长因子来进行定量。为了查看姜烯酚对神经生长因子分泌诱导的影响，在C6细胞中使用了姜烯酚后，在培养得到的条件培养基中定量分析神经生长因子，其结果如图2。
从图2的结果可知，与对照组相比，使用0.1μM姜烯酚时，显示105.46±7.27％；使用1μM时，显示112.72±3.67％；使用5μM时，显示112.97±4.97％；处理10μM时，显示124.81±5.61％的神经生长因子分泌。上述结果表明随着姜烯酚的浓度增加，神经生长因子的分泌量也随之增加，并且在20μM时分泌最多。上面的结果是将三次反复实验结果以平均±误差来表示的结果。
(3)在PC12细胞中，姜烯酚对神经轴突生长的影响效果
采用与实验例1-1相同的方法对PC12细胞分株并培养，在培养24小时后，仍用与上面相同的方法将神经生长因子和条件培养基在PC12细胞中进行处理。处理后第4天用显微镜观察PC12细胞的结果如图3。从图3的结果可知，在使用20μM姜烯酚时，PC12细胞神经轴突生长增加，这表示姜烯酚具有优秀的神经生长因子分泌活性。
试验例2
使用重量为25-28g的公ICR小鼠，该小鼠由庆熙大学分养并在该大学的东西医学大学院的动物饲养室饲养了7日使其适应，水和饲料可自由摄取，温度(22±2℃)、湿度(53±3％)及明暗周期(12小时)可自动调节。使用的姜烯酚购自WAKO公司(日本)。
(1)姜烯酚的提高认知能力的效果
将小鼠分为2组每组10只。在第一组(对照组)中，以小鼠体重每kg口服5mL10％二甲亚砜(dimethyl sulfoxide)的方式给药3日；在第二组中，将溶解在二甲亚砜中的姜烯酚以5mg/kg的量口服3日。1日1次口服3天，在最后一次口服1小时后实施被动回避试验(passiveavoidance task)，如下所述。
被动回避试验是在内部结构分成两个相同空间的试验装置中进行。第一天装置中间隔着门，一边开灯、另一边为黑暗状态。先使小鼠在明亮侧滞留10秒后，打开中间的门，当试验动物向黑暗空间移动时给脚底0.25mA的电刺激。24小时后用相同的方法进行被动回避试验并测量此时滞留在明亮处的时间。其结果如图4。
对照组显示为165.50±23.39秒，维持了由于电冲击的记忆力；姜烯酚5mg/kg经口给药组显示为240.63±24.14秒，滞留时间(p＜0.05)显著增加。
(2)生姜提取物的认知能力改善效果
将小鼠分为2组每组10只。在第一组(对照组)中以小鼠体重每kg口服5mL 10％二甲亚砜(dimethyl sulfoxide)的方式口服3日，第二组是将溶解在二甲亚砜中的生姜提取物(实施例2中制备的生姜提取物)以50mg/kg的量经口给药3日。1日1次经口给药3天，在最后一次口服1小时后采用与试验例2-1相同的方法实施了被动回避试验(passive avoidance task)。其结果如图5。
对照组显示为165.50±23.39秒，维持了由于电冲击的记忆力；生姜提取物50mg/kg经口给药组显示为237.43±17.35秒，显著增加了滞留时间(p＜0.05)。
试验例3.对MPP+(1-甲基l-4-苯基吡啶离子)及6-OHDA(6-羟基-多巴胺)的神经毒性的白鼠胎儿中脑细胞中姜烯酚及生姜提取物的保护效果评价
使用分养的母Sprague-Dawley大鼠(2周龄)，使用的姜烯酚购自WAKO公司(日本)。
剥离Sprague-Dawley大鼠(2周龄)胎儿的中脑组织，用医用镊子机械分离(dissociation)。用胰蛋白酶处理组织进行处理并计算细胞数量，在预先涂覆多聚赖氨酸(poly-L-Lysine，PLL)的盖玻片上进行种植(seeding)后，在5％CO2、95％空气的37℃培养基中增殖5日。在没有牛胎血清(fetal bovine serum，FBS)的培养基中稀释处理0.01μM、0.1μM姜烯酚，或稀释处理生姜提取物(从实施例1得到的乙醇提取物、己烷分步分离物、乙酸乙酯分步分离物、丁醇分步分离物、水分步分离物)。在进行1小时姜烯酚处理后再使用10μMMPP+23小时，在进行了6小时姜烯酚处理后再使用10μM 6-OHDA 18小时。用4％多聚甲醛(PFA)进行固定并用磷酸缓冲溶液(PBS)进行清洗。
(1)姜烯酚的保护活性评价-免疫组织化学法(Immunohistochemistry)
将用4％PFA固定的细胞用PBS清洗后，用1％过氧化氢进行15分钟脱水过程，然后将含有PBS和3％氚核X-100，含有正常羊血清(normal goat serum)的络氨酸羟化酶(TH，密理博，兔源1∶2000)与细胞反应一晚上。过一定时间后用二次抗体进行使生物素化抗兔(载体，羊源)反应，经过ABC反应(ABC试剂盒，载体)用二氨基联苯胺(Diaminobenzidine，DAB)显色。用DAB显色后，分离盖玻片并用凝胶(gel mount)固定在载玻片上后测量了细胞数。其结果如图6及图7。
图6显示MPP+的神经毒性下，姜烯酚的多巴胺能细胞保护效果。MPP+组的多巴胺阳性细胞数与对照组(control)相比显示44.25±7.61％，多巴胺能细胞数显著减少(p＜0.01)，用姜烯酚进行处理时，在0.01μM浓度下为91.50±3.38％，多巴胺能细胞保护效果(p＜0.05)非常明显。
图7显示在6-OHDA的神经毒性下，姜烯酚的多巴胺能细胞保护效果。6-OHDA组的多巴胺阳性细胞数与对照组(control)相比显示了34.00±5.77％，多巴胺能细胞数(p＜0.001)显著减少，用姜烯酚进行处理时，在0.01μM浓度下为57.25±5.65％，多巴胺阳性细胞数与6-OHDA组相比显示了增加的倾向。
(2)生姜提取物的保护活性评价-免疫组织化学法(Immunohistochemistry)
用与所述(1)相同的方法，用免疫组织化学法显色后，细胞数的测量结果如图8及图9。
图8显示生姜提取物在MPP+神经毒性下对多巴胺能细胞保护效果。MPP+组的多巴胺阳性细胞数与对照组(control)相比显示为44.25±7.61％，多巴胺能细胞数(p＜0.01)显著减少，使用100ug/ml浓度的生姜提取物(乙醇提取物)、己烷分步分离物、乙酸乙酯分步分离物、丁醇分步分离物、水分步分离物进行处理后多巴胺能细胞数分别为65.20±3.45％、71.41±6.32％、76.60±6.15％、58.32±7.22％、57.17±5.33％，多巴胺阳性细胞数与MPP+组相比显示了增加的倾向。
图9显示生姜提取物在6-OHDA的神经毒性下对多巴胺能细胞的保护效果。6-OHDA组的多巴胺阳性细胞数与对照组(control)相比显示34.00±5.77％，多巴胺能细胞数(p＜0.001)显著减少，使用100ug/ml浓度的生姜提取物(乙醇提取物)、己烷分步分离物、乙酸乙酯分步分离物、丁醇分步分离物、水分步分离物进行处理后多巴胺能细胞数分别为54.20±4.31％、62.50±6.94％、64.54±4.67％、49.61±5.64％、45.11±5.21％，多巴胺阳性细胞数与6-OHDA组相比显示了增加的倾向。
试验例4.通过经口给药MPTP(N-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶)诱导了帕金森病(Parkinson’s disease)的C57BL/6小鼠中，生姜提取物及姜烯酚的保护效果评价
使用7周龄C57BL/6系公小鼠(19-22g)，该小鼠由庆熙大学分养并在该大学的东西医学大学院的动物饲养室饲养了1周以上使其适应，水和饲料可自由摄取，温度(22±2℃)、湿度(53±3％)及明暗周期(12小时)可自动调节。使用的姜烯酚购自WAKO公司(日本)。
(1)由MPTP的经口给药引起的帕金森病模型中姜烯酚的保护效果
将小鼠分为3组每组6只。在第1组(对照组)及第2组(MPTP组)中以小鼠体重每kg口服5mL 10％二甲亚砜的方式，1日1次给药5日，第3组(姜烯酚经口给药组)是将溶解在二甲亚砜中的姜烯酚以10mg/kg的量1日1次经口给药5日。口服2小时后，第1组(对照组)是，以5mL生理盐水/小鼠体重kg的方式进行5日腹腔给药，在第2组及第3组中，将MPTP以30mg/小鼠体重kg的浓度溶解在生理盐水中并进行5日腹腔给药。
(1-1)爬杆试验(pole test)
在所述5日的给药结束后的第二天，利用高50cm、直径1cm的杆进行爬杆试验。将C57bl/6小鼠头向上放到杆上，小鼠在杆顶倒转180°后下爬四脚踩地，测量了头朝上转为头朝地的时间和下爬落地时间。每个小鼠练习了3次后进行了5次本实验，其结果如图10。
从图10可知，给药姜烯酚时，T-la(对照组对比％(％of control))是99.10±8.11秒，与没有给药MPTP的对照组水平类似，并且可确认姜烯酚可将由MPTP诱发的运动徐缓(dradykinesia)几乎恢复到正常水平。(p＜0.05)
(1-2)多巴胺能细胞的保护活性评价
将完成所述爬杆试验(pole test)的各组的小鼠致死后，分离了脑组织(纹状体(striatum)及黑质(substantia nigra))。将分离出的组织用过氧化氢进行脱水后，用1次抗体络氨酸羟化酶(TH，密理博，兔源1∶2000)反应一小时后，用二次抗体使用生物素化抗兔(载体，羊源)，经ABC反应(ABC试剂盒，载体)利用二氨基联苯胺显色。多巴胺能细胞保护效果是通过在纹状体中测量光学密度(opticaldensity)，在黑质中计算TH阳性细胞数来确认。其结果如图11及图12所示。
从图11及图12中可知，给药姜烯酚时，在纹状体中的光学密度的control对比％为80.11±1.97％，可确认与MPTP给药组相比显示了显著的多巴胺能细胞的保护活性(p＜0.05)，在黑质中TH阳性细胞数在用姜烯酚的情况下的control对比％为70.30±4.86％，与MPTP给药组相比TH阳性细胞数显著提高(p＜0.05)。从该结果可确认，姜烯酚在纹状体(striatum)及黑质(substantia nigra)中显示优秀的多巴胺能细胞的保护活性。
(2)由MPTP的给药引起的帕金森病模型中生姜提取物的保护效果
将小鼠分为3组每组10只。在第1组(对照组)及第2组(MPTP组)中，以小鼠体重每kg给药5mL 10％二甲亚砜的方式、1日1次经口给药5日，第3组(姜烯酚给药组)是将溶解在二甲亚砜中的生姜提取物(在实施例2中制备的提取物)以50mg/kg的量1日1次经口给药5日。经口给药2小时后，第1组(对照组)是小鼠体重每kg腹腔给药5mL生理盐水的方式进行5日，第2组及第3组以MPTP30mg/小鼠体重kg的浓度溶解在生理盐水中并腹腔给药5日。
(2-1)爬杆试验(pole test)
在所述5日的给药结束后的第二天，用与爬杆试验(1-1)相同的方法进行，其结果如图13。给药生姜提取物时，T-la为107.48±7.32秒，可确认生姜提取物将由MPTP诱发的运动徐缓(dradykinesia)几乎恢复到正常水平。
(2-2)多巴胺能细胞的保护活性评价
将完成所述爬杆试验(pole test)的各组的小鼠致死后，分离了脑组织(纹状体(striatum)及黑质(substantia nigra))。对分离出的脑组织用与所述(1-2)相同的方法进行了活性评价，其结果如图14及图15。
从图11及图12中可知，给药生姜提取物时，在纹状体中的光学密度的control对比％为84.21±1.48％，可确认与MPTP给药组相比显示了显著的多巴胺能细胞的保护活性(p＜0.05)，在黑质中TH阳性细胞数在用生姜提取物的情况下的control对比％为62.20±3.67％，与MPTP给药组相比TH阳性细胞数显著提高(p＜0.05)。从该结果可确认，姜烯酚在纹状体(striatum)及黑质(substantia nigra)中显示优秀的多巴胺能细胞的保护活性。
试验例5.在2-血管闭合脑缺血模型中的生姜提取物的活性评价
使用7周龄C57BL/6系公小鼠(20-25g)，该小鼠由庆熙大学分养并在该大学的东西医学大学院的动物饲养室饲养了1周以上使其适应，水和饲料可自由摄取，温度(22±2℃)、湿度(53±3％)及明暗周期(12小时)可自动调节。使用的姜烯酚购自WAKO公司(日本)。
将小鼠分成3组每组10只。在麻醉气体(O2：30％，N2O：70％，异氟烷(Isoflurane)：2.0％)腔室中诱导麻醉后，将各组小鼠背靠手术台面地放置。从上肢和中央线相交的位置向上约1.5cm切开皮肤后，不损伤组织地露出了两侧总颈动脉。分离贴附在颈动脉上的组织及神经并用动脉瘤夹(aneurism clip)咬合了25分钟。此时，用直肠温度计测量小鼠的体温并维持在37±0.5℃。
假实验对照组是指进行上述实验，但不咬合总颈动脉的组。给药是在2VO施术结束后立即进行，之后1日1次共给药3日。假实验组和2VO施术组给药10％吐温80，并且生姜提取物和各分步分离物(从实施例1得到)是溶化在10％吐温80，以25mg/kg给药。手术7日后，用戊巴比妥钠(pentobarbita sodium)麻醉动物，之后用4％多聚甲醛进行灌流。取出脑并用4％多聚甲醛进行固定，然后在30％蔗糖溶液中浸泡1天。之后，将脑进行冷冻后，以30μm大小在垂直方向进行剪切。切掉的组织转移到涂覆有明胶的载玻片并用0.5％甲酚紫(cresylviolet)染色。观察了在海马体CA1部分中最容易出现延迟性神经元细胞死亡而受损的部分的中间带部分的神经细胞数。细胞数的观察是通过在高倍率(×400)下数被染色的细胞数来测量。
从各组中得到的海马体进行染色的结果如图16。从图16中可知，可确认进行了2VO施术的海马体在CA1部分发生了细胞死亡，并且可确认由生姜提取物进行处理的CA1部分的细胞死亡被抑制。并且，将所述海马体的CA1中间部分进行放大的结果如图17，并且在CA1中测量细胞存活率的结果如图18。从图18中可知，可确认进行了生姜提取物(乙醇提取物)和正己烷分步分离物、乙酸乙酯分步分离物、丁醇分步分离物、及水分步分离物处理的处理组抑制CA1部分的神经细胞死亡。生姜提取物和正己烷分步分离物、乙酸乙酯分步分离物、丁醇分步分离物、及水分步分离物各自与2VO施术组相比显示了24.6±13.1％、30.2±11.5％、37.5±8.5％、15.6±5.3％、12.5±4.7％的神经细胞死亡抑制效能。
试验例6.在2-血管闭合脑缺血模型中的姜烯酚的活性评价
将小鼠分成3组每组10只。2VO施术用与试验例1相同的方法进行。假实验对照组是指进行上述的实验，但不咬合总颈动脉的组。给药是在2VO施术结束后立即进行，之后1日1次共给药3日。假实验组和2VO施术组给药10％吐温80，并且姜烯酚是溶化在10％吐温80中以1、3、10mg/kg给药。姜烯酚与2VO施术组相比在10mg/kg浓度显示了29.5±15.4％的神经细胞死亡抑制效能(参照图19、图20、及图21)
试验例7.毒性试验
(1)急性毒性试验
将实施例1及2中得到的生姜提取物及姜烯酚以0.1mg/10ml/kg至5000/10ml/kg的用量依次投给SD小鼠(分别为母：3只，公：3只)后观察了2周间的死亡率、一般症状、体重及尸体解剖意见。其结果，在试验期间没有观察到死亡动物。关于一般症状，没有观察到试验物质的异常症状，而且也没有观察到体重变化或试验物质的变化。并且，关于肉眼尸体解剖意见中，也没有观察到试验物质的异常。因此，可以判断生姜提取物及姜烯酚至少在5g/kg的用量上都具有安全性。
(2)回复突变试验
为了评价在细菌中的遗传毒性，利用小鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的营养缺陷型突变株(TA100、TA1535、TA98、及TA1573)和大肠杆菌进行了回复突变试验。其结果，在阳性对照组中比在阴性对照组菌落数显著增加，而在所有菌株的试验物质处理组(即，实施例1及2的提取物及姜烯酚处理组)中没有出现菌落数的增加。因此，证实生姜提取物及姜烯酚都在遗传毒性试验中具有安全性。

Claims (2)

1.一种药物组合物在制备用于预防或治疗帕金森病的药物中的应用，所述药物组合物包含有效成分化学式1所示的化合物，及药学上允许使用的载体，
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物的剂型为选自散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮液、乳液及糖浆剂的口服剂型。
CN200980146308.4A 2008-11-19 2009-11-13 包含生姜提取物或姜烯酚的药物组合物 Active CN102215857B (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020080114964A KR20100056020A (ko) 2008-11-19 2008-11-19 생강 추출물 또는 쇼가올을 포함하는 학습 또는 기억력 증진용 조성물
KR10-2008-0114964 2008-11-19
KR10-2008-0118585 2008-11-27
KR1020080118585A KR20100060124A (ko) 2008-11-27 2008-11-27 생강 추출물 또는 쇼가올을 포함하는 허혈성 뇌혈관 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR1020080118582A KR101288814B1 (ko) 2008-11-27 2008-11-27 생강 추출물 또는 쇼가올을 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR10-2008-0118582 2008-11-27
PCT/KR2009/006664 WO2010058926A2 (ko) 2008-11-19 2009-11-13 생강 추출물 또는 쇼가올을 포함하는 약학 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102215857A CN102215857A (zh) 2011-10-12
CN102215857B true CN102215857B (zh) 2015-06-17

Family

ID=42198634

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200980146308.4A Active CN102215857B (zh) 2008-11-19 2009-11-13 包含生姜提取物或姜烯酚的药物组合物

Country Status (3)

Country Link
US (1) US9844521B2 (zh)
CN (1) CN102215857B (zh)
WO (1) WO2010058926A2 (zh)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102697757B (zh) * 2012-05-18 2014-06-04 广州军区广州总医院 对羟基苄叉丙酮在制备预防和/或治疗脑病药物中的应用
CN102657841A (zh) * 2012-06-08 2012-09-12 桂林三金药业股份有限公司 一种生姜酚类提取物制剂及其制备方法
WO2016046817A1 (en) * 2014-09-24 2016-03-31 Vital Beverages Global Inc. Compositions and methods for selective gi tract delivery
WO2017189717A1 (en) * 2016-04-27 2017-11-02 Bdmaev Vladimir Method maintaining iron homeostasis with shogaols
CN106187727A (zh) * 2016-07-27 2016-12-07 陕西嘉禾生物科技股份有限公司 一种从天堂椒果实中提取6‑姜酮酚的方法
WO2018129315A1 (en) * 2017-01-06 2018-07-12 Flex Pharma, Inc. Methods and compositions for the treatment of disease
EP3570861A4 (en) 2017-01-23 2020-11-18 Flex Pharma, Inc. COMPOSITIONS AND PROCEDURES EFFECTING SPORTING PERFORMANCE
CN107583027A (zh) * 2017-11-01 2018-01-16 周杰 疏经通络的中药制剂、制备方法及其应用
KR102176033B1 (ko) * 2020-05-28 2020-11-06 주식회사 하나모아 생강 추출물을 함유하는 생강수 조성물 및 그 제조 방법
WO2024101890A1 (ko) * 2022-11-09 2024-05-16 경희대학교 산학협력단 건강 추출물, 쇼가올 및 레보도파를 유효성분으로 포함하는 파킨슨병 또는 도파민 유발 이상운동증의 예방 또는 치료용 조성물

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1692924A (zh) * 2005-02-25 2005-11-09 广州中医药大学 姜提取物及其制备方法和应用

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61263909A (ja) * 1985-05-20 1986-11-21 Shiseido Co Ltd 皮膚外用剤
JPS6372625A (ja) 1986-09-12 1988-04-02 Tsumura & Co 血小板凝集抑制剤
JPH02193930A (ja) * 1989-01-19 1990-07-31 Tsumura & Co ラジカル消去剤
US6518315B1 (en) * 1997-10-21 2003-02-11 The University Of Sydney Medicinal uses of phenylaikanols and derivatives
US6887898B1 (en) * 1999-10-22 2005-05-03 Darrick S. H. L. Kim Pharmaceutical compositions useful in prevention and treatment of beta-Amyloid protein-induced disease
US7728043B2 (en) * 1999-10-22 2010-06-01 Kim Darrick S H L Methods for treatment of beta-amyloid protein-induced ocular disease
JP3951798B2 (ja) * 2002-05-13 2007-08-01 東亞合成株式会社 ショウガオール類の製造方法および合成用中間体
DE10320560A1 (de) * 2003-05-07 2004-01-29 Brosig, Stefan, Dr. Mittel zur Bekämpfung der Alzheimer Erkrankung und/oder der Parkinson Krankheit
WO2005112965A2 (en) * 2004-05-20 2005-12-01 Rutgers, The State University Of New Jersey Botanical anti-inflammatory compositions and methods
US7455860B2 (en) * 2004-08-11 2008-11-25 Laila Nutraceuticals Dietary supplement formulation for controlling inflammation and cancer
US20070003641A1 (en) * 2005-06-15 2007-01-04 Kim Darrick S H Synergistic pharmaceutical compositions useful in prevention and treatment of beta-amyloid protein-induced disease
US8017162B2 (en) * 2005-10-26 2011-09-13 Oryza Oil & Fat Chemical Co., Ltd. Anti-inflammatory agent
WO2008042755A2 (en) * 2006-09-29 2008-04-10 Cognition Therapeutics, Inc. Inhibitors of cognitive decline
JP2008156297A (ja) * 2006-12-25 2008-07-10 Hokkaido Univ セロトニン２ｂおよび／または２ｃ受容体拮抗剤
EP2300029A4 (en) * 2008-05-18 2012-05-16 Rice Science Llc RICE EXTRACTS AGAINST INFLAMMATION AND APPLICATION METHOD THEREFOR
EP2303298B1 (en) * 2008-06-03 2015-12-16 M/s Laila Nutraceuticals Compositions comprising Boswellia serrata and Aegle marmelos extracts for use in the treatment of asthma and similar diseases

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1692924A (zh) * 2005-02-25 2005-11-09 广州中医药大学 姜提取物及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
6-姜酚对大鼠脑缺血再灌注炎性细胞因子的影响;姜泉等;《咸宁学院学报(医学版)》;20070815;第21卷(第04期);第283页倒数第1段 *
生姜水提取物防治血管性痴呆的实验研究;王子华;《中国优秀硕士论文全文数据库》;20071231;摘要 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20110229590A1 (en) 2011-09-22
WO2010058926A3 (ko) 2010-09-23
CN102215857A (zh) 2011-10-12
US9844521B2 (en) 2017-12-19
WO2010058926A2 (ko) 2010-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102215857B (zh) 包含生姜提取物或姜烯酚的药物组合物
KR102230576B1 (ko) 항-비듬 조성물의 이용 방법
JP6921440B2 (ja) アザミ抽出物を有効成分として含むメラニン生成促進用組成物
TW200826971A (en) Compositions and methods of their use for improving the condition and appearance of skin
US20200281845A1 (en) Compositions comprising lespedeza plant extract
JP2008019180A (ja) リパーゼ阻害剤、角栓形成抑制剤、毛穴目立ち抑制剤およびニキビ抑制剤
EP2275113A1 (en) Skin circulation-improving agent and skin temperature-elevating agent
JP2009235015A (ja) 自律神経調整剤
CN101652143A (zh) 用于选择性5-羟色胺再摄取抑制的组合物及其方法
JP2010511376A (ja) 皮膚バリア機能の鑑別法、これを用いた皮膚バリア機能強化素材のスクリーニング法、該皮膚バリア機能強化素材、及び該皮膚バリア機能強化素材を含有してなる化粧料
JP2006137690A (ja) 皮膚外用剤およびヒアルロン酸産生促進剤
CN107303006A (zh) 改善更年期症状或骨质疏松症的组合物
KR101399513B1 (ko) 과민성 장 증후군의 예방 또는 치료용 조성물
CN110381971A (zh) 女性更年期症状改善用组合物
TWI825113B (zh) 阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物、腦神經細胞死亡之抑制用組合物、由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物、及由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β產生之抑制用組合物
JP2008247894A (ja) ストレス応答力改善剤
KR102073945B1 (ko) 갯괴불주머니 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 가려움증 개선 및 보습용 화장료 조성물
JPH0737392B2 (ja) 抗痴呆剤
KR20000069310A (ko) 세포외 매트릭스의 생산 촉진제
CN100370973C (zh) 一种治疗胸痹的中药制剂
KR101509056B1 (ko) 인삼 복합 생약 추출물, 진세노사이드 Rg2와 진세노사이드 F2를 포함하는 뇌기능 및 인지 기능 개선용 조성물
CN100545163C (zh) 一种防治老年痴呆的中药活性成分化合物及其制备和用途
CN110123982A (zh) 一种草果精油的应用
CN106727770A (zh) 苏合香在制备抗抑郁、焦虑产品中的应用
KR100552995B1 (ko) 뇌기능 개선 효과가 있는 갈화 추출물 및 이의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant