CN1692924A - 姜提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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CN1692924A CN 200510033283 CN200510033283A CN1692924A CN 1692924 A CN1692924 A CN 1692924A CN 200510033283 CN200510033283 CN 200510033283 CN 200510033283 A CN200510033283 A CN 200510033283A CN 1692924 A CN1692924 A CN 1692924A
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王宁生
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Abstract

本发明涉及姜提取物及其制备方法和应用，所述的姜提取物主要含有姜挥发油和姜辣素，包括姜醇(即姜油酮)、姜烯、没药烯、α－姜黄烯、α－和β－金合欢烯、芳樟醇、桉油素、壬醛、α－龙脑和β－倍半菲兰烯；姜辣素(姜酚)及其分解产物姜烯酚、姜酮。其制备方法是将干燥的破碎至粒度1mm以下的原料姜，投入萃取釜中，通入超临界CO2流体，在20－30MPa，30－40℃下进行萃取0.5－3小时；萃取液进入分离罐中，在5－15MPa，40－60℃下进行分离1－3小时，得到姜提取物。以姜提取物作为活性成分，与赋形剂相结合可制成各种药物制剂，用于各种心血管病尤其是心力衰竭、心肌缺血、动脉粥样硬化的治疗。

Description

姜提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及以姜科植物姜(Zingiber offficinale Rosc)的根茎为原料的姜提取物及其制备方法；
本发明还涉及所述姜提取物在制备治疗心血管疾病的药物中的应用。
背景技术
心血管疾病是威胁人类的重大疾病之一，尽管近30年来心血管病死亡率除东欧各国外的大多数国家都有不同程度的下降，但其仍是多数国家45岁以上男性第一位的死亡原因，在女性则是仅次于肿瘤的第二位死因，严重影响着人类的期望寿命和生存质量。在中国，随着生活水平的提高，患心血管病人群持续攀升，并呈年轻化趋势，农村地区发病率也在明显上升，目前患病者已逾1亿。所以，治疗心血管病的药物不仅具有巨大的市场前景，而且对保障人类健康同样意义重大。
心血管疾病的病理学基础主要是动脉粥样硬化(AS)。虽然AS的病因学至今尚未阐明，但近年的研究结果所提出的氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)致AS的病因学说，已为多数学者所接受。所以，从氧化应激致AS的过程中有关环节应用抗氧化剂的策略来防治动脉粥样硬化是完全有可能的。事实上，至今已发现的许多心血管药物(合成药)除各有其主要药理作用外，同时也具有抗氧化剂的特性，如：钙拮抗剂、β受体阻滞剂、ACE抑制剂等。但到目前为止，尚未有以抗氧化作用为主要药理作用的心血管病治疗药物。
在心血管药物市场，治疗心血管病的药物呈逐渐增长趋势。目前世界治疗心血管疾病药物的市场销售额已达400多亿美元，位居首位。其中钙拮抗剂占治疗心血管疾病药物市场份额的19.2％，ACE抑制剂占了18.2％，降血脂药约占13％，β-阻断剂占了11.8％，其它药占38％左右。在中国，2004年全国医院心脑血管系统用药总价值超过70亿元，中药在心血管疾病的治疗中占的比重将进一步加大，除了“地奥心血康”、“步长脑心通”、“复方丹参滴丸”三大品种外，一些新的中药也将进入心血管类药物市场。虽然用于治疗心血管疾病的中药有上百种，但由于药理上不能解决动脉粥样硬化问题，而没有进一步突破。
发明内容
本发明的目的在于提供以姜科植物姜(Zingiber offficinale Rosc)的根茎为原料的姜提取物。
本发明还涉及所述姜提取物的制备方法；
本发明的目的还在于提供所述姜提取物在制备治疗心血管疾病的药物中的应用。
姜包括姜科植物姜(Zingiber officinale Rosc.)的新鲜或干燥根茎，分别称为生姜和于姜。生姜性味辛温，能发汗解表，温中止呕，温肺止咳，常用于治疗风寒感冒、恶心呕吐等；干姜性味辛热，能温中回阳，温肺化饮，常用于治疗脾胃虚寒、肺寒咳嗽等。
姜的化学成分复杂，不下百种，主要含挥发油、姜辣素，此外，还含有二氢姜酚、六氢姜黄素、γ-氨基丁酸、天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸等。
本发明所述的姜提取物主要含有姜挥发油和姜辣素，包括姜醇(即姜油酮)、姜烯、没药烯、α-姜黄烯、α-和β-金合欢烯、芳樟醇、桉油素、壬醛、α-龙脑和β-倍半菲兰烯；姜辣素(姜酚)及其分解产物姜烯酚、姜酮。
所述姜提取物的制备方法如下：将干燥的破碎至粒度1mm以下的原料姜，投入萃取釜中，通入超临界CO2流体，在20-30MPa，30-40℃下进行萃取0.5-3小时；萃取液进入分离罐中，在5-15MPa，40-60℃下进行分离1-3小时，得到姜提取物。
经药理研究证明，本发明所述的姜提取物具有以下功效：
(1)能使急性心衰兔的心肌舒缩性能得到改善，减轻心衰症状，并随剂量增加而作用加强；
(2)具有增强心肌收缩和舒张性能、降低外周阻力作用，尤其在降低舒张末期压方面，减轻心脏前负荷，改善冠脉灌流；
(3)具有降低心肌Na+-K+-ATP酶活性作用，使细胞内Ca2+浓度增加而呈正性肌力作用；
(4)对脑垂体后叶素引起的急性心肌缺血有改善和保护作用；
(5)有改善血液流变学的作用；
(6)对ADP诱导的血小板聚集有明显的抑制作用；
(7)急性毒性试验表明，所述的姜提取物的小鼠LD50为4.261mL/kg，在临床用药是安全的。
因此本发明制备的所述姜提取物制备治疗各种心血管疾病药物，例如：
所述姜提取物可用于制备抗心力衰竭疾病的药物。
所述姜提取物可用于制备抗心肌缺血疾病的药物。
所述姜提取物可用于制备抗血栓形成疾病的药物。
所述姜提取物可用于制备降血脂的药物。
所述姜提取物可用于制备降血压的药物。
所述姜提取物可用于制备抗动脉粥样硬化疾病的药物。
所述药物中含有0.1％～100％重量姜提取物。
所述药物为包括如软胶囊剂、胶囊剂、滴丸、片剂、颗粒或口服液的口服药物剂型，或者是注射剂。
本发明与现有技术相比具有如下优点：
1、姜是常见易得的药食两用中药材，姜提取物的制备方法可以实现工业化生产，原料成本低廉，为社会提供了一种具有明确抗氧化、清除自由基、保护心肌细胞、改善血管舒缩功能、改善血液流变学、抗凝血、抗血栓形成、抗心肌缺血和抗动脉粥样硬化等作用的天然药物。
2、由于其对心血管系统、消化系统、免疫系统及中枢神经系统都有相应的药理作用，并有抗氧化、清除自由基、抗运动病、抗炎、抗过敏及抗肿瘤等作用。针对心血管疾病的病理基础——动脉粥样硬化，应用姜的提取物，从抗氧化的途径来解决动脉粥样硬化问题，作用靶点明确，对于心血管疾病的治疗作用毋庸置疑，市场潜力巨大。
附图说明
图1是姜提取物的气相色谱指纹图；
图2是姜提取物的气相色谱指纹图的三维图；
图3-1是柱PEG-20M获得的姜提取物的色谱图；
图3-2是柱OV-1701获得的姜提取物的色谱图；
图3-3是柱OV-1获得的姜提取物的色谱图。
具体实施方式
本发明所述的姜提取物的制备及其药理活性实验按如下实施例进行说明。不得理解为任何意义上的对本发明权利要求的限制。
姜提取物的制备
实施例1
称取10kg预先干燥、破碎至粒度1mm以下的原料姜，投入萃取釜中，通入超临界CO2流体，在25MPa，35℃下进行萃取1小时；萃取液进入分离罐中，在10MPa，50℃下进行分离1小时，得到姜超临界CO2提取物。
实施例2
将干燥的10kg破碎至粒度1mm以下的原料姜，投入萃取釜中，通入超临界CO2流体，在20MPa，40℃下进行萃取3小时；萃取液进入分离罐中，在5MPa，60℃下进行分离2小时，得到姜提取物。
实施例3
将干燥的10kg破碎至粒度1mm以下的原料姜，投入萃取釜中，通入超临界CO2流体，在30MPa，30℃下进行萃取0.5小时；萃取液进入分离罐中，在15MPa，40℃下进行分离3小时，得到姜提取物。
姜提取物成分分析
实施例4：姜提取物气相色谱指纹图谱分析
1材料和方法
1.1样品：姜提取物(实施例1制备)。
1.2仪器：Autosystem XL气相色谱仪，美国PERKIN-ELMER公司。
1.3实验方法
1.3.1色谱条件
色谱柱：PEG-20M，15m×0.32mmID×0.4μm膜厚的石英毛细管柱；炉温：80℃，每分钟升高5℃到250℃保持26min；进样口温度：100℃，每分钟升高30℃到280℃保持54min；载气：高纯氮；柱压：3.5PSI；FID：300℃；分流比：20∶1；氢气流速：45ml/min；空气流速：450ml/min。
1.3.2测定方法
精密吸取样品0.2μl，进样，测定并记录图谱。
2结果
2.1方法学研究
为了考察分析方法的可靠性，对其稳定性、仪器精密度、实验方法的重现性作了相应的考察，结果证明稳定性及重现性良好。
2.1.1稳定性试验
取同一样品，分别在一周内每天进行检测，在每组峰中选一个峰，如图1，考察其保留时间的一致性，各色谱峰保留时间的RSD≤0.58％。所选色谱峰的保留时间见表1。
                                            表1
色谱图                              峰保留时间(min)
  1   2   3   4   5
  ZING061ZING068ZING074ZING079ZING085ZING091   2.0872.0612.0842.0892.0942.092   9.9309.8879.9339.9679.9949.960   22.61522.62522.64522.65022.64322.642   29.28829.10129.10929.12229.09729.090   43.55543.57943.29243.61443.58643.529
  RSD(％)   0.58   0.37   0.060   0.26   0.27
2.1.2仪器精密度试验
取同一份样品，连续进样6次，考察色谱峰的保留时间的一致性，各主要色谱峰保留时间的RSD≤0.27％。所选色谱峰的保留时间见表2。
                                          表2
色谱图                             峰保留时间(min)
  1   2   3   4   5
  ZING092ZING093ZING094ZING095ZING096ZING097   2.1022.1012.0992.0932.0972.087   9.9609.9519.9789.9789.9719.960   22.64322.63622.65022.63422.65122.639   29.09529.09629.09429.08929.09829.089   43.56243.54643.55643.52643.54643.523
  RSD(％)   0.27   0.11   0.032   0.013   0.036
2.1.3重现性试验
取同一批号的供试品6份，同法检测，考察色谱峰的保留时间的一致性，各主要色谱峰保留时间的RSD≤0.27％。所选色谱峰的保留时间见表3，6批姜提取物样品的色谱指纹图的三维图见图2。
                                        表3
色谱图                              峰保留时间(min)
  1   2   3   4   5
  ZING086ZING087ZING088ZING089ZING090ZING091   2.0982.0842.0942.0982.0872.092   9.9719.9569.9679.9789.9679.960   22.65022.63322.64822.64922.64122.642   29.10229.08729.08529.09429.09229.090   43.56243.55943.54543.57143.55343.529
  RSD(％)   0.27   0.078   0.029   0.023   0.034
2.2姜提取物GC指纹图的建立
作为中药色谱指纹图，其建立的测定方法不仅要简单、准确，同时要在其色谱图中尽可能多地反映出药物的内在信息，以便能从整体上把握其特征，从而保证鉴定的可靠性。由于不同的色谱柱所获得的色谱图可能有所不同，反映出来的特征也不完全一样，因此本实验选用三种不同极性的柱子：OV-1，OV-1701和PEG-20M柱，获得了3张色谱图，如图3，其中图3-1是柱PEG-20M获得的色谱图；图3-2是柱OV-1701获得的色谱图；图3-3是柱OV-1获得的色谱图。从图中可看到，OV-1及OV-1701柱能提供109及105个色谱峰，而PEG-20M柱却能提供多达125个峰，且色谱图有一个很明显的特征，它由数个峰群组成，我们可以人为地把它分成5组，保留时间从1min～5min(炉温80～105℃)为第一组，5min～15min(炉温105～155℃)为第二组，15min～25min(炉温155～205℃)为第三组，25min～40min(炉温205～250℃)为第四组，40min～55min(炉温250℃)为第五组。从量的方面看，第二组峰的含量其面积达60％，占了绝大部分；而从整体上，各个峰群清晰可辩，分离度较好，这些都构成了姜提取物指纹图谱的特征。
色谱指纹图谱用于中药鉴别，较用任何单一化学对照品作为鉴别的依据所提供的信息都要丰富得多。在生姜挥发油的研究中，往往只是对某一成分或某类成分进行测定[3-5]，这显然缺乏专属性。当然，在近几年的研究中，也有很多应用GC/MS对其进行定性定量的分析，但由于GC/MS价格较为贵，而不利于推广应用。本发明通过反复试验比较，筛选出文中记述的方法，规范了实验条件，使获得的指纹图谱在分离度、分辨率、重现性与稳定性方面均较为理想。可作为姜药材及其制剂的质量控制方法。
3结论
本实施例表明应用GC色谱指纹图谱以及文中所述方法、条件，是一种对姜提取物进行鉴别和质量监测的简单、易行、准确、可控的方法。
姜提取物在制备治疗心血管疾病的药物中的应用
实施例5：姜提取物对兔急性心衰模型心脏功能及血流动力学的影响及其与四逆汤作用的
比较
1材料与仪器
1.1实验动物
纯种新西兰兔(体重2.3±0.3kg)50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，分别为溶剂对照组、低剂量姜提取物组、中剂量姜提取物组、高剂量姜提取物组、四逆汤对照组。由广东省医学实验动物中心提供，动物合格证号：2002A025。
1.2主要实验试剂
①戊巴比妥钠，购自中国医药集团上海化学试剂公司，批号F20020915，用生理盐水配备为30g/L和20g/L浓度备用。
②肝素，购自徐州万邦生化制药有限公司，批号0203107，用生理盐水配备为1250万U/L和500万U/L浓度备用。
③50g/L葡萄糖，购自广东大冢制药有限公司，批号030125。
④姜提取物，25℃的相对密度为0.9663，20℃的折光率为1.5081，姜辣素的含量为12％，购自广州美晨药业有限公司，批号200209054。
⑤食用花生油，购自中山市鹰唛食品有限公司，产品标准号GB1534-86。
⑥受试品剂量计算、配制及观察用量：按标准体重动物的等效剂量折算，兔口服姜提取物的半数致死量(LD50)为1.689mL/kg，分别取其1/60(0.028mL/kg)、1/30(0.056mL/kg)、1/15(0.112mL/kg)为低、中、高剂量。
用食用花生油作溶剂，将姜提取物稀释100倍、50倍、25倍，分别配制成1％、2％、4％姜提取物，配制后的观察用量均为2.8mL/kg。
⑦对照品的制备：以四逆汤煎剂为对照品，其药物组成制附子、干姜、炙甘草，均购于广东省中医院药剂科。附子为毛莨科植物乌头Acomnitum carmichaeli Debx.的子根加工品；干姜为姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的干燥根茎；甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根茎。经广州中医药大学中药鉴定教研室李薇教授鉴定，所购药品均为正品。
根据《中国药典》2000版第一部，四逆汤制剂中附子、干姜、炙甘草的比例为3∶2∶3，取制附子75g、干姜50g、炙甘草75g，用蒸溜水1400mL浸泡2h，文火煎2h，滤出煎液；药渣再加1000mL蒸溜水，文火煎1.5h，滤出煎液，混合二次煎液，用水浴法蒸发浓缩为400mL，使其终浓度为0.5g生药/mL，置4℃冰箱中冷藏备用。
根据动物与人体表比换算，兔口服四逆汤的等效剂量为生药0.75g/kg，取10倍等效剂量7.5g/kg作为本实验观察用量，即四逆汤煎剂用量为15mL/kg。
1.3主要仪器
①RM-6000四道生理仪(日产光电)
②江湾I型微型人工呼吸机(第二军医大学出产)
③恒速输液泵(2132microperpex peristaltic)
④心导管、输液管(江苏锡山市南泉高分子医械厂出产)
⑤常规手术器械
2方法
2.1手术方法
①用30g/L戊巴比妥钠对新西兰兔行左侧耳缘静脉注射麻醉，仰卧固定；②分离左侧股动脉，连接压力换能器；③分离气管及左侧颈总动脉后，切开左侧颈总动脉，插入直径1mm已充满肝素(浓度500万U/L)的心导管，心导管经压力换能器连接四道生理仪，缓缓推进同时观察示波器，当波型提示导管已进入左心室时停止推进；④气管切开，连接微型人工呼吸机，潮气量38mL左右，呼吸频率40次/min左右，并根据动物体重等个体情况调节呼吸频率和潮气量。
2.2造模方法
上述手术完毕后，经右侧耳缘静脉留置的输液管，注入肝素注射液1mL/kg(浓度1250万U/L)，然后持续滴注50g/L葡萄糖(滴速20滴/min)；稳定10min后，记录各项指标的造模前基础值；用输液泵经上述留置的输液管，恒速输入20g/L戊巴比妥钠，先以0.15mL·kg-1·min-1的滴速，密切观察各指标的变化，当lv±dp/dtmax下降到基础值的20％左右，暂停滴入，稳定观察10min，观察过程若出现lv±dp/dtmax回升者，再以0.1mL·kg-1·min-1恒速给予维持量。记录造模所用时间和维持量持续时间，分别计算造模所需戊巴妥钠用量和所需维持量。
2.3给药途径及用量
经口插管入胃，于造模成功并稳定维持10min后，灌服受试品或对照品，并用适量蒸溜水冲管。各组用药量如下：
溶剂对照组：食用花生油2.8mL/kg；
低剂量姜提取物组：姜提取物0.028mL/kg；
中剂量姜提取物组：姜提取物0.056mL/kg；
高剂量姜提取物组：姜提取物0.112mL/kg；
四逆汤对照组：四逆汤煎液15mL/kg。
2.4观察方法
四道生理仪定标灵敏度400mmHg/mm，纸速50mm/s，经连接股动脉的压力换能器测量收缩压(SAP)和舒张压(DAP)；经载波放大器记录左心室内压峰值(LVSP)，将左室内压信号经直流放大器放大10倍，测定左室舒张末期压(LVEDP)，将载波放大器的电讯号输入微分器，测量左心室内压变化速率最大值(lv±dp/dtmax)；测定心率(HR)并描记变化曲线；记录II导ECG，根据心电R波峰判断心室开始收缩的标志至dp/dtmax的间隔时间(t-dp/dtmax)；从血压收缩波起始点至舒张波起点测量心室射血时间(LVET)；根据SAP×HR×LVET公式计算心肌耗氧量(MOCI)。
分别于给药前和给药后5min、10min、15min、20min、30min、45min、60min、90min、120min、150min测定以下各指标。
①心率(HR)；
②动脉血压(SAP和DAP)；
③左心室内压峰值(LVSP)；
④左心室舒张末期压(LVEDP)；
⑤左心室内压变化速率最大值(lv±dp/dtmax)；
⑥左心室内压上升速率最大值(lv+dp/dtmax)；
⑦左心室内压下降速率最大值(lv-dp/dtmax)；
⑧II导ECG，根据心电R波峰判断心室开始收缩的标志至dp/dtmax的间隔时间(t-dp/dtmax)；
⑨心室射血时间(LVET)：从血压收缩波起始点至舒张波起点的间隔时间；
⑩心肌耗氧量(MOCI)：根据SAP×HR×LVET公式计算。
造模前记录基础值，造模成功并稳定10min后记录药前值，并分别记录药后5min、10min、15min、20min、30min、45min、60min、90min、120min、150min各指标。
2.5数据处理
使用SPSS11.0统计软件包建立数据库并进行数据处理和统计分析：
①组间均衡性分析：包括基础值的组间均衡性分析；药前值的组间均衡性分析；药前心衰程度的组间均衡性分析，心衰程度用[(药前值/基础值)×100％]表示。
②各组自身比较：各组药前后自身比较采用配对t检验，检验水平α＝0.05。
③组间比较：以[(各时点实测值-药前值)/药前值×100％]计算各指标的变化率。单一指标变化率组间比较用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，方差齐性者选择最小显著差异法检验(LSD检验)；方差不齐者选择Dunnett T3法进行检验；综合指标变化率的组间比较采用Hotelling T2检验，检验水平α＝0.05。
3结果
3.1组间均衡性分析结果
分别对低、中、高剂量姜提取物组，溶剂对照组和四逆汤对照组的基础值、药前值和药前心衰程度进行均衡性分析，如表4-1、4-2，4-2所示，表4-1是基础值的组间均衡性分析结果；表4-2是药前值的组间均衡性分析结果；表4-3是药前心衰程度的组间均衡性分析结果；结果表明，各组间的均衡性好，所有观察指标的基础值、药前值和药前心衰程度组间差异均无统计学意义，P＞0.05，组间具有可比性。
3.2姜提取物对心衰兔心脏功能和血流动力学的影响
3.2.1对心率的影响
表4-4是姜提取物对心率和血压的影响数据，各组药前后HR自身比较结果，低、中、高剂量姜提取物组在DAP逐渐上升的同时，HR呈先升后降趋势，分别于药后30min至60min、30min至45min、20min至45min达高峰后随着下降，且与药前值相比，差异有显著性，P＜0.05或P＜0.01；溶剂对照组DAP虽也有逐渐上升趋势，但HR各时点与药前值相比，差异均无统计学意义，P＞0.05。
HR变化率的组间比较结果，从药后5min至45min各时点，溶剂组与低剂量姜提取物组之间差异有显著性，P＜0.05或P＜0.01；从药后5min至30min各时点，溶剂组与高剂量姜提取物组之间差异有显著性，P＜0.05；除中剂量组与高剂量组在90min时出现差异外，各剂量姜提取物组在各时点的HR变化率组间差异均无统计学意义，P＞0.05。
以上结果表明，姜提取物各剂量组，能在升高DAP的同时使HR稳步加快，有利于冠脉的灌流，并在加快到一定程度后开始减慢，避免了心率过快对心衰程度的加重。
3.2.2对血压的影响
如表4-4所示，各组药前后SAP和DAP自身比较结果，溶剂组和低、中、高剂量姜提取物组的各时点均呈逐渐上升趋势，各组药后5min至150min各时点，与药前值比较差异均有显著性意义，P＜0.05或P＜0.001。
SAP变化率的组间比较结果，组间差异无统计学意义，P＞0.05；DAP变化率的组间比较结果，从药后20min至60min各时点，溶剂组与中剂量姜提取物组之间差异有显著性意义，P＜0.05；药后15min时溶剂组与高剂量姜提取物组之间，药后45min时溶剂组与低剂量姜提取物组之间，差异均有显著性意义，P＜0.05；姜提取物各剂量组之间在各时点的SAP变化率和DAP变化率差异均无统计学意义，P＞0.05。
以上结果表明，姜提取物各剂量组能使心衰动物SAP逐渐上升，但各剂量组之间及各剂量组与对照组之间无明显差异；姜提取物各剂量组能使心衰动物DAP逐渐上升，各剂量组之间虽未出现差异，但其上升幅度比对照组大，部分时点出现显著性差异。结合其加快心率的作用，DAP的上升有利于促进冠脉的灌流。
3.2.4对左心室内压的影响
表4-5是关于姜提取物对心脏舒缩性能的影响数据(1)，各组药前后LVSP自身比较结果，溶剂组和低、中、高剂量姜提取物组的各时点均呈逐渐上升趋势，各组药后5min至150min各时点，与药前值比较差异均有显著性意义，P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001。
LVSP变化率的组间比较结果，从药后30min至120min各时点，溶剂组与低剂量姜提取物组、高剂量姜提取物组之间差异有显著性意义，P＜0.05或P＜0.01；从药后30min至150min各时点，溶剂组与中剂量姜提取物组之间差异有显著性意义，P＜0.05或P＜0.01。各剂量姜提取物组之间差异均无统计学意义，P＞0.05。
以上结果表明，姜提取物各剂量组能使心衰动物LVSP逐渐上升，各剂量组之间虽无明显差异，但各剂量组与溶剂组之间从药后30min开始出现显著性差异。提示姜提取物各剂量组能使心衰动物心肌收缩力加强，从而升高等容收缩期左心室内压峰值。
3.2.5对心室开始收缩至dp/dtmax间隔时间的影响
如表4-5所示，各组药前后t-dp/dtmax自身比较结果，各组药后5min至150min各时点，与药前值比较差异均有显著性意义，P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001。
t-dp/dtmax变化率的组间比较结果，溶剂组与低、中、高剂量姜提取物组之间差异均有显著性意义，其中与低剂量姜提取物组之间，药后45min至120min各时点，差异有显著性意义，P＜0.05；与中剂量姜提取物组之间，药后10min至150min各时点差异均有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001；与高剂量姜提取物组之间，药后20min至150min各时点差异均有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001。姜提取物各剂量组之间的差异表现为，低剂量姜提取物组与高剂量姜提取物组之间，药后30min时差异有显著性意义，P＜0.05。
以上结果表明，姜提取物各剂量组能使心衰动物t-dp/dtmax逐渐缩短，与溶剂对照组相比，其变化率的差异显著性随剂量的增加而增加，提示姜提取物缩短t-dp/dtmax的作用随剂量增加而作用增强，高剂量组与低剂量组之间在药后30min时存在差异。t-dp/dtmax值与外周阻力呈正相关，t-dp/dtmax值缩短除与心肌收缩力加强有关外，还可因外周阻力降低引起。提示姜提取物在加强心肌收缩力的同时，可能具有降低外周阻力的作用。
3.2.6对心室射血时间的影响
如表4-5所示，各组药前后LVET自身比较结果，溶剂组从药后15min至150min各时点与药前值比较，差异均有显著性意义，P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001；低、中、高剂量姜提取物组药后5min至150min各时点与药前值比较，差异均有显著性意义，P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001。
LVET变化率的组间差异不明显，仅在药后60min时低、中剂量姜提取物组与高剂量姜提取物组之间差异有显著性意义，P＜0.05。
以上结果表明，各剂量组姜提取物能使LVET逐渐缩短，并随剂量增加而作用增强，虽然各剂量组的变化率与溶剂对照组和四逆汤对照组的差异不显著，但不同剂量组的变化率在药后60min时差异有显著性意义。LVET是反映心室收缩功能的指标之一，姜提取物能使LVET缩短，且使心率加快，提示其具有增强心肌收缩性能的作用。
3.2.7对左心室内压变化速率的影响
表4-6是姜提取物对心脏舒缩性能的影响数据(2)，各组药前后lv±dp/dtmax自身比较结果，溶剂组在药后10min至150min各时点与药前值比较，差异均有显著性意义，P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001；低、中、高剂量姜提取物组药后5min至150min各时点与药前值比较，差异均有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001。
lv±dp/dtmax变化率的组间比较结果，溶剂组与低、中、高剂量姜提取物组之间差异显著，其中与低剂量姜提取物组之间，药后30min至120min各时点，差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001；与中剂量姜提取物组之间，药后30min至150min各时点，差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001；与高剂量姜提取物组之间，药后5min至150min各时点，差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001。姜提取物各剂量组之间的差异表现为，低剂量姜提取物组与高剂量姜提取物组之间，药后90min至150min各时点有差异，差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001；中剂量姜提取物组与高剂量姜提取物组之间，药后5min、45min、120min差异有显著性意义，P＜0.05。
以上结果表明，姜提取物各剂量组能使心衰动物lv±dp/dtmax逐渐上升，与溶剂对照组相比，其变化率从药后30min至150min各时点，差异均有显著性意义，其升高lv±dp/dtmax的作用随剂量增加而作用增强，高剂量组与低剂量组之间从药后90min至150min各时点差异有显著性意义，高剂量组与中剂量组之间个别时点差异有显著性意义。提示姜提取物能显著提高左室内压变化速率峰值，并随剂量增加而作用增强，提示其具有增强左心室收缩和舒张性能的作用。
3.2.8对左心室内压上升速率的影响
如表4-6所示，各组药前后lv+dp/dtmax自身比较结果，溶剂组在药后10min至150min各时点，与药前值比较差异有显著性意义，P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001；低、中剂量姜提取物组在药后5min至150min各时点，与药前值比较差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001；高剂量姜提取物组从药后5min至150min各时点，与药前值比较差异有显著性意义，P＜0.001。
lv+dp/dtmax变化率的组间比较结果，溶剂组与低、高剂量姜提取物组之间差异显著，其中与低剂量姜提取物组之间，药后30min至60min各时点，差异有显著性意义，P＜0.05；与高剂量姜提取物组之间，药后20min至150min各时点差异有显著性意义，P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001；姜提取物各剂量组之间的差异表现为，低剂量姜提取物组与高剂量姜提取物组之间，药后120min时差异有显著性意义，P＜0.05。
以上结果表明，姜提取物能使心衰动物lv+dp/dtmax逐渐上升，与溶剂对照组相比，差异有显著性意义；高剂量组与低剂量组之间在120min时差异有显著性意义。显示姜提取物能显著提高左室内压上升速率最大值，并随剂量增加而作用增强，提示其具有提高心肌收缩性能的作用。
3.2.9对左心室内压下降速率的影响
表4-7是姜提取物对心脏舒缩性能的影响(3)，各组药前后lv-dp/dtmax自身比较结果，溶剂组在药后10min至150min各时点，与药前值比较差异有显著性意义，P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001；低、中和高剂量姜提取物组从药后5min至150min各时点差异有显著性意义，P＜0.001。
lv-dp/dtmax变化率的组间比较结果，溶剂组与低、中、高剂量姜提取物组之间差异显著，其中与低剂量姜提取物组之间，药后30min至120min各时点，差异有显著性意义，P＜0.05或P＜0.01；与中剂量姜提取物组之间，药后20min至150min各时点，差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001；与高剂量姜提取物组之间，药后5min至150min各时点，差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001。姜提取物各剂量组之间的差异表现为，低剂量姜提取物组与高剂量姜提取物组之间，药后45min至150min各时点，差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001；中剂量姜提取物组与高剂量姜提取物组之间，药后5min时差异有显著性意义，P＜0.05。
以上结果表明，姜提取物各剂量组能使心衰动物lv-dp/dtmax逐渐上升，与溶剂对照组相比，差异有显著性意义；其升高lv-dp/dtmax的作用随剂量增加而作用增强，高剂量组与低剂量组之间从药后45min至150min各时点差异有显著性意义，高剂量组与中剂量组之间在个别时点差异有显著性意义。显示姜提取物能显著升高左室内压下降速率最大值，并随剂量增加而作用增强，提示其具有增强心肌舒张性能的作用。
3.2.10对左心室舒张末期压的影响
如表4-7所示，各组药前后LVEDP自身比较结果，溶剂组和低、中剂量姜提取物组的LVEDP在药后各时点与药前值相比均无统计学意义，高剂量姜提取物组的LVEDP呈逐渐下降趋势，与药前值相比，药后5min至150min各时点，差别均有显著性意义，P＜0.05或P＜0.001。
LVEDP变化率的组间比较结果，药后30min至60min各时点，溶剂组与高剂量姜提取物组之间差异有显著性意义，P＜0.05或P＜0.01；药后10min至15min，中剂量姜提取物组与高剂量姜提取物组之间差异有显著性意义，P＜0.05。
以上结果表明，LVEDP实测值各组药前后自身比较，惟独高剂量姜提取物组在药后10min至150min各时点，与药前值比较差异有显著性意义，提示其对降低心衰动物LVEDP有独特优势；高剂量姜提取物组的LVEDP变化率与中、低剂量姜提取物组和溶剂对照组之间在不同时点存在不同程度的显著性差异。提示高剂量姜提取物组具有改善室壁张力和舒张术期容积，提高左心室舒张功能，并降低左室前负荷，使心肌耗氧量减少，有利于冠脉血流流向易缺血的心内膜下心肌，从而改善心脏的冠脉循环的作用。
3.3姜提取物与四逆汤对心衰兔心脏功能和血流动力学的作用比较(见表4-8～表4-11)
表4-8是四逆汤和姜提取物对心率和血压的影响数据，表4-9是四逆汤和姜提取物对心脏舒缩性能的影响数据(1)，表4-10是四逆汤和姜提取物对心脏舒缩性能的影响数据(2)，表4-11四逆汤和姜提取物对心脏舒缩性能的影响数据(3)。
3.3.1四逆汤对心衰兔心脏功能和血流动力学指标的影响
HR和LVEDP药前后均未出现差异；SAP、DAP、LVSP和lv±dp/dtmax均呈逐渐上升趋势，药后5min至150min各时点，与药前值比较差异有显著性意义，P＜0.001；lv+dp/dtmax和lv-dp/dtmax呈逐渐上升趋势，t-dp/dtmax呈逐渐缩短趋势，三者均在药后5min至150min各时点，与药前值比较差异有显著性意义，P＜0.01或，P＜0.001；LVET呈逐渐缩短趋势，在药后10min至150min各时点，与药前值比较差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001。
3.3.2四逆汤与姜提取物对心衰兔心脏功能和血流动力学作用的异同
四逆汤和各剂量姜提取物组均使SAP、DAP、LVSP、lv±dp/dtmax、lv+dp/dtmax、lv-dp/dtmax呈逐渐上升趋势，并使t-dp/dtmax和LVET呈逐渐缩短趋势，但存在作用强度和时间差异。
四逆汤组与各剂量姜提取物组的SAP、DAP、t-dp/dtmax、LVET的变化率组间差异不明显。但就LVSP而言，中、高剂量姜提取物组的上升程度比四逆汤组强，四逆汤组药后120min时与高剂量姜提取物组之间，药后150min时与中剂量姜提取物组之间，差异有显著性意义，P＜0.05或P＜0.01；就lv±dp/dtmax而言，高剂量姜提取物组的上升程度比四逆汤组强，两组在药后30min至150min各时点差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001；就lv+dp/dtmax而言，高剂量姜提取物组的上升程度比四逆汤组强，两组在药后90min至150min各时点差异有显著性意义，P＜0.05；就lv-dp/dtmax而言，中、高剂量姜提取物组的上升程度比四逆汤组强，四逆汤组与中剂量姜提取物组在药后30min至150min各时点差异有显著性意义，P＜0.05或P＜0.01，四逆汤组与高剂量姜提取物组在药后30min至150min各时点差异有显著性意义，P＜0.01或P＜0.001。
由此可见，中、高剂量姜提取物组在提高心衰兔LVSP、lv-dp/dtmax方面的作用比四逆汤组强，高剂量姜提取物组在提高lV±dp/dtmax、lv+dp/dtmax方面的作用也比四逆汤组强，提示中、高剂量姜提取物组在改善心衰兔心脏舒缩功能方面有强于四逆汤组的作用。
3.3.4姜提取物与四逆汤对心衰兔心肌耗氧量的影响(见表4-12)
表4-12是四逆汤和姜提取物对心肌耗氧量的影响数据，各组药前后MOCI自身比较结果，溶剂组从药后10min至150min各时点，差异有显著性意义，P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001；低、中、高剂量姜提取物组和四逆汤组均在药后5min至150min各时点，差异有显著性意义，P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001。
MOCI变化率的组间比较结果，组间差异不显著，仅在药后30min至60min各时点低剂量姜提取物组与溶剂组之间差异有显著性意义，P＜0.05；药后60min时低剂量姜提取物组与高剂量姜提取物组之间差异有显著性意义，P＜0.05。
以上结果表明，各剂量姜提取物组、溶剂对照组和四逆汤对照组，用药后随着HR、SAP的逐渐回升，MOCI均呈逐渐上升趋势，但姜提取物各剂量组与溶剂对照组和四逆汤对照组之间的MOCI变化率在大多数时点均无统计学意义，提示各剂量姜提取物组在增强心肌收缩和舒张性能的同时，与对照组相比，并未明显增加心肌耗氧量。
3.3.5各指标变化趋势综合分析结果
表4-13是各指标变化率综合分析结果，如表所示，综合考虑各时点指标变化率情况，在药后30min以前，差异无统计学意义，P＞0.05，，而从药后30min开始至150min各时点，组间差异有显著性意义，P＜0.001。提示药物起效时间从药后30min左右开始并维持至150min左右。从造模成功至药后30min，心脏功能及血流动力学指标略有改善，不同施加因素作用下，改善程度虽有不同，但组间没有显著性差异；本课题实验过程采用的给药途径是经口插管灌服，药物经胃肠道吸收需要一定时间。因此药后30min开始的指标变化，可视为药物吸收后发挥作用的结果，不同施加因素作用下的心脏功能及血流动力学指标的改善程度有显著性差异，结合单指标的方差分析结果(表4-5～表4-12)，以±dp/dtmax、-dp/dtmax、+dp/dtmax、t-dp/dtmax、LVEDP和LVSP的差异最为明显，其中±dp/dtmax、-dp/dtmax、+dp/dtmax和LVSP的上升程度大小依次为“高剂量姜提取物组＞中剂量姜提取物组＞低剂量姜提取物组＞四逆汤组＞溶剂组”，中、高剂量姜提取物组升高±dp/dtmax、-dp/dtmax、+dp/dtmax和LVSP的作用程度较四逆汤组和溶剂组强，组间比较有显著性差异，且呈剂量依赖关系，低剂量姜提取物组对以上四个指标的升高程度高于四逆汤和溶剂组，但无统计学意义。t-dp/dtmax的下降程度大小依次为“高剂量姜提取物组＞中剂量姜提取物组＞四逆汤组＞低剂量姜提取物组＞溶剂组”，中、高剂量姜提取物组降低t-dp/dtmax的作用较四逆汤组和溶剂组强，组间比较有显著性差异，而四逆汤组降低t-dp/dtmax的作用较低剂量姜提取物组和溶剂组略强，但无统计学意义。LVEDP的下降程度在低、中剂量姜提取物组，四逆汤组和溶剂组之间差异无统计学意义，仅高剂量姜提取物组的下降程度与溶剂组相比有显著性差异。
                                                 表4-1
                                             ( x±S，n＝10)
指标(单位)     P值                                           基础值
 溶剂组   低剂量姜组   中剂量姜组   高剂量姜组   四逆汤组
HR(beats/min)SAP(kpa)DAP(kpa)LVSP(kpa)LVEDP(kpa)Lv±dp/dtmax(kpa/sec)Lv+dp/dtmax(kpa/sec)Lv-dp/dtmax(kpa/sec)t-dp/dtmax(ms)LVET(ms)MOCI(kpa.ms.beats/min)     0.2590.4250.2510.1320.8820.1870.4800.3660.8470.9090.526  279.7±31.818±1.511.6±1.416.8±1.20.27±0.361285±148757±172582±12045.5±7.641.5±6.7207707±35438   286.5±39.918±1.311.7±0.9516.7±1.10.23±0.411331±232780±161551±9242.5±8.942±4.2216850±44032   255.1±35.418±1.711.2±1.415.9±1.70.03±0.381216±167681±138535±8342±4.241.5±3.4186517±37787   285.5±27.517±1.510.5±1.215.3±1.60.21±0.651184±134712±149472±8442.5±8.342±7.9202615±42157   279.9±37.118±1.310.7±1.916.0±1.40.19±0.521165±171679±141487±11843±7.540±0202665±33089
注：基础值的组间均衡性分析，P＞0.05。
                                                     表4-2
                                                  ( x±S，n＝10)
指标(单位)     P值                                             药前值
  溶剂组   低剂量姜组   中剂量姜组  高剂量姜组   四逆汤组
HR(beats/min)SAP(kpa)DAP(kpa)LVSP(kpa)LVEDP(kpa)Lv±dp/dtmax(kpa/sec)Lv+dp/dtmax(kpa/sec)Lv-dp/dtmax(kpa/sec)t-dp/dtmax(ms)LVET(ms)MOCI(kpa.ms.beats/min)     0.7340.7320.7040.5860.1600.7850.8810.3630.3440.6130.321   226.7±27.56.4±1.34.1±0.97.1±1.00.87±0.45267±48149±29117±2966.5±7.862±6.390089±21467   222.1±29.66.7±1.44.1±0.66.8±1.00.69±0.49269±53152±42117±2060±9.763±6.892135±1996217   213.7±23.26.3±1.33.9±0.66.6±0.60.60±0.46259±40157±36101±2362.5±7.665±7.186583±18017  226.8±24.77.1±1.74.4±1.17.1±0.80.12±0.54249±35145±38104±1667±9.267±9.5106192±23616   220.5±15.36.4±1.43.9±0.96.8±0.80.71±0.51252±30143±18109±2264±8.164±7.090849±25039
注：药前值组间均衡性分析，P＞0.05。
                                               表4-3
                                            ( x±S，n＝10)
  指标   P值                                                  心衰程度(％)
  溶剂组   低剂量姜组   中剂量姜组   高剂量姜组   四逆汤组
  HRSAPDAPLVSPLVEDPLv±dp/dtmaxLv+dp/dtmaxLv-dp/dtmaxt-dp/dtmaxLVETMOCI   0.5660.3640.2440.2840.7040.8790.4820.4100.6540.4360.319   81.6±11.135.8±7.136.0±8.242.7±7.2225.3±239.220.9±3.520.7±6.123.5±8.6149.4±27.6150.5±9.043.8±10.3   78.1±9.037.1±7.635.0±4.440.6±5.6210.5±25720.5±3.519.6±4.121.7±4.1144.2±26.1150.5±15.243.5±11.2   84.7±10.535.7±6.334.7±5.241.6±3.9141.7±436.321.4±2.923.3±4.719.1±3.5149.8±20.3156.8±14.148.1±14.1   79.5±4.541.7±8.441.4±7.546.4±5.244.0±369.521.1±2.120.5±3.622.5±3.9160.4±25.9162.3±26.653.0±9.5   79.8±10.235.8±9.237.5±9.943.0±7.9115.3±224.621.8±2.821.9±5.423.7±7.4150.8±17.8160±17.545.2±11.5
注：药前心衰程度组间均衡性分析，P＞0.05。心衰程度＝(药前值/基础值)×100％。
                                                           表4-4( x±S，n＝10)
  指标(单位)   组别   药前值                                                                                      药后值(变化率)
  5’   10’   15’   20’   30’   45’   60’   90’   120’   150’
  HR(b/min)   溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   227±28222±30214±20227±25   223±26(-1.7±2.2)230±35*(3.4±3.9)▲215±26(0.3±6.2)234±24(3.5±5.6)▲   223±27(-1.4±4.9)233±36*(4.6±4.3)▲218±27(1.7±5.7)235±24*(4.0±5.4)▲   224±29(-1.1±4.9)235±38**(5.5±4.2)▲221±29(3.3±7.0)237±24*(4.7±6.3)▲   227±30(-6.2±4.9)241±36**(8.3±5.0▲224±29(4.5±7.3)242±31*(7.0±9.1)▲   228±26(0.9±6.1)247±32**(11.6±7.2)▲▲227±29*(6.2±8.1)246±33*(8.5±10.7)▲   235±31(37±9.9)249±32**(12.7±8.8)▲228±29*(6.4±8.2)242±24*(7.1±9.0)   234±30(3.4±9.7)247±32**(11.4±9.2)226±29(5.9±10.7)239±19(6.0±8.8)   226±29(4.6±11)241±26*(9.2±10.9)213±26(-0.1±9.0)★235±20(4.2±8.6)   226±30(-9.5±11.5)232±21(5.8±14)210±26(-1.4±9.2)230±25(1.5±8.2)   223±32(-13±11.9)230±23(4.7±14)206±24(-3.5±11.0)223±23(-1.4±9.6)
  SAP(kpa)   溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   48±9.950±10.747±9.553±12.5   59±14.8*(23.6±7.2)61±15.4***(20.8±14.4)60±12.8***(26.5±10.7)70±12.9***(32.8±14.6)   68±14.6***(44.8±29.8)75±11.7***(519±20.0)72±12.3***(548±12.0)82±11.8***(56.8±172)   72±14.3***(53.4±33.0)79±14***(61.4±23.30)80±11.9***(71.0±14.7)87±10.4***(67.5±18.7)   74±14.9***(58.3±33.4)84±21.3***(709±46.0)88±13.9***(89.0±23.9)93±11.8***(78.2±22.6)   79±15.2***(68.5±37.9)96±19.1***(970±504)95±14.6***(105±28.2)99±10.2***(90.5±27.8)   5±13.8***(83.7±51.0)103±15.7***(114±56.7)103±12***(122±27.8)110±9.1***(112±32.3)   89±14.8***(93.0±57.7)110±14.8***(129±669)108±12.1***(136±37.2)116±7.7***(125±36.1)   97±15.2***(112±74.7)113±14.1***(137±66.3)117±11.6***(156±43.0)123±9.0***(138±3806)   101±13.6***(123±77.9)117±15.7***(146±80.5)120±11.8***(161±42.5)128±6.7***(150±40.6)   102±12.2***(125±79.2)119±15.1***(151±85.5)121±15.8***(162±42.1)129±4.7***(152±45.4)
  DAP(kpa)   溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   31±6.531±4.829±4.733±8.5   38±10.4*(22.5±19.3)38±7.5***(23.2±13.3)36±5.9***(25.1±6.1)42±10.9***(29.7±19.6)   43±10.4***(40.6±26.8)47±6.6***(55.8±17.2)44±6.8***(51.8±13.4)51±10.0***(58.7±14.7)   45±9.3***(48.6±26.6)49±8.7***(59.4±23.2)48±5.8***(65.6±14.0)55±8.6***(70.6±20.6)▲   47±9.1***(54.3±28.9)51±14.5***(67.2±45.3)54±6.5***(87.9±19.3)▲56±9.2***(75.3±20.2)   48±9.2***(59.3±35.5)57±11.9***(88.3±43.5)57±7.3***(99.5±26.0)▲59±9.2***(84.2±23.3)   52±11.1***(71.1±41.2)62±11.9***(105±45.3)▲60±7.4***(110±26.5)▲64±9.7***(99.7±31.3)   54±11.1***(80.2±50.3)65±11.8***(117±47.1)63±7.9***(120±33.7)▲67±9.5***(111±32.5)   60±11.8***(101±65.7)69±9.1***(128±43.7)67±9.3***(137±36.6)71±8.2***(124±31.6)   64±11.2***(116±67.6)72±9.8***(139±51.9)70±12.4***(146±43.0)75±7.4***(136±34.4)   64±9.7***(117±63.5)72±9.1***(143±60.9)75±15.1***(160±47.5)76±3.9***(140±45.3)
注：与药前值比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001；与溶剂组比较，▲表示P＜0.05，▲▲表示P＜0.01，▲▲▲表示P＜0.001。中剂量组与低剂量组比较，★表示P＜0.05，★★表示P＜0.01，★★★表示P＜0.001。
                                                             表4-5( x±S，n＝10)
  指标(单位)   组别   药前值                                                                                                          药后值(变化率)
  5’   10’   15’   20’   30’   45’   60’   90’   120’   150’
  1vsp(kpa)   溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   54±7.651±7.649±4.853±6.2   60±10*(12.7±19)62±6.0***(22.8±16.6)55±9.4(11.7±16.1)66±9.4***(23.9±11.7)   69±12.4**(30±14)71±6.0***(42.2±18.7)62±11.7**(26.4±21.7)73±9.9***(38.9±18.3)   73±13.3***(37.9±27.9)76±7.7***(52.2±26.6)69±13.8**(39.6±25.2)79±11.5***(50.2±18.9)   75±13.4***(41.6±26)80±12.9***(605±33.2)77±11.6**(56.2±11.6)84±11.6***(58.8±21.6)   78±11.6***(46.9±26.6)91±10.8***(82.4±35.5)▲▲86±11.0***(73.3±12.0)▲92±12.0***(74.6±24.2)▲   83±12.7***(57.4±33.9)98±8.1***(96.3±34.3)▲▲91±11.4***(85.2±11.6)▲101±10.2***(91.6±24.0)▲▲   88±13.4***(68.4±37.1)103±9.4***(107±37)▲97±11.7***(97.7±17.5)▲106±7.1***(102±29)▲   93±13.8***(76.6±39.6)107±6.9***(114±37)▲107±12.9***(117±21.3)▲▲113±7.5***(115±26.6)▲▲   97±12.1***(84.8±38.0)110±8.1***(120±38)▲111±13.4***(126±23.5)▲▲119±8.0***(127±30.5)▲▲   101±13.6***(93.5±45.2)108±5.9***(118±39)114±10.3***(131±26.7)▲16±5.5***(122±26.5)▲
  t-dp/dtmax(ms)   溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   67±7.860±9.763±7.667±9.2   65±9.4(-2.5±5.9)56±10.2*(-6.5±8.2)57±9.7*(-9.5±12)61±7.8**(-8.6±6.3)   63±10.8*(-5.7±8.5)53±9.2**(-11.3±8.3)52±9.2**(-16.6±13)▲57±7.2***(-14±9)   61±10.2**(-8.6±8.5)50±9.1***(-16.3±9.2)49±7.8**(-21±13.3)▲54±8.8**(-19±14)   60±8.6***(-10.6±6.6)49±9.9***(-18.3±8.0)46±4.4***(-26.5±10)▲▲▲51±8.4***(-22.8±15)▲   58±8.3***(-13.4±8.9)47±7.8***(-22.0±8.7)44±3.9***(-28.7±11)▲▲▲46±7.6***(-31.2±12.4)▲▲▲   56±7.4***(-15.5±8.8)44±9.7***(-26.4±12.1)▲44±4.7***(-29.7±9.6)▲▲46±6.2***(-30.3±11.7)▲▲   55±7.8***(-17.1±9.0)43±9.5***(-28.2±10.3)▲44±5.7***(9.0±10)▲▲46±6.9***(-31.3±10.9)▲▲   54±7.5***(-19.4±8.2)43±9.5***(-29.1±9.7)▲42±6.8***(-32.3±11)▲▲43±7.9***(-35.4±11)▲▲▲   54±6.7***(-192±8.8)43±8.9***(-28.6±12.7)▲43±6.4***(-31.7±8.9)▲▲43±7.2***(-36±10)▲▲▲   54±7.0***(-18.5±8.92)45±8.2***(-24.8±7.9)45±7.1***(-27.7±9.7.1)▲45±7.6***(-32.3±10)▲▲▲
  LVET(ms)   溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   62±6.363±6.865±7.167±10.0   57±6.8(-7.5±12.7)58±4.2*(-7.4±7.8)58±7.9*(-10.4±12.2)59±3.2*(-10.7±10.1)   55±8.5(-10±16.8)52±9.2**(-16.9±15.2)55±8.9*(-15.5±15)52±7.9**(-20.7±17.6)   53±8.2*(-13.8±16)50±9.4**(-20±16.3)49±7.4**(-24±13.2)50±9.4**(-23.9±17.8)   52±7.9*(-15.4±152)52±9.2*(-16.7±16.7)49±7.5**(-24.4±14.8)48±7.9***(-27.7±15.7)   50±6.7**(-18.8±12.9)51±8.8**(-18.1±17.1)48±7.9**(-252±15.1)48±7.9***(-27±15.5)   49±8.8***(-20.8±13.2)53±9.8*(-15.6±19.0)47±6.8***(-26.9±13.3)48±7.9***(-27±15.5)   49±88***(-20.8±13.2)52±9.2*(-15.9±21.4)43±4.8***(-33.1±10.7)45±8.5***(-31.8±14.5)★   50±10.5***(-19.6±13.3)51±12.1*(-18.1±25.4)44±5.2***(-31.7±10.2)46±8.3***(-31.1±14.1)   51±12.9***(-18.3±14.6)50±12.6*(-19.5±26.5)47±6.7***(-27.9±12.1)47±8.2***(-29.6±13.5)   50±12.5***(-20±13.1)50±12.6*(-19.8±25.9)48±9.2**(-26.3±16.7)49±11.1**(-26.3±19.7)
注：与药前值比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001；与溶剂组比较，▲表示P＜0.05，▲▲表示P＜0.01，▲▲▲表示P＜0.001。高剂量组与中剂量组比较，★表示P＜0.05，★★表示P＜0.01，★★★表示P＜0.001。
                                                      表4-6( x±S，n＝10)
指标(单位) 组别 药前值                                                                                                               药后值(变化率)
5’   10’   15’   20’     30’   45’     60’   90’   120’   150’
Lv±dp/dtmax(kpa/sec) 溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组 2000±3622020±3971940±3031870±263 2580±994(34.1±63.5)2950±950**(46.5±36.6)2540±709**(29.6±29.7)3250±829***(73.2±31.6)▲★   3170±1022*(64.5±66.6)4000±1061***(100±47)3450±928***(77.3±41.8)4080±1109***(119±55.6)▲   3450±1121**(80.1±74.6)450±942***(125±54)4170±1278***(113±56)4690±1471***(151±69.2)▲   710±1007***(92.1±68.5)4950±1280***(151±71)4900±1135***(152±54)5100±1565***(174±78.5)▲▲   4046±880***(108±56.8)5980±1432***(206±95)▲▲5790±1056***(200±47)▲▲6170±1122***(234±64)▲▲▲   4230±927***(119±70)6610±1261***(238±99)▲▲▲6310±885***(228±45)▲▲7330±1123***(298±74)▲▲▲★   4740±1238***(148±93)7020±1336***(258±97)▲▲6900±1118***(260±62)▲▲7880±822***(328±69)▲▲▲   5070±1209***(76.6±39.6)7250±1334***(270±99)▲▲7700±1409***(303±88)▲▲▲840±1168***(379±74)▲▲▲   5300±955***(84.8±38.0)7210±1541***(266±98)▲7600±1549***(300±102)▲▲▲9150±1284***(394±70)▲▲▲★   5500±834***(93.5±45.2)6690±1475***(242±109)7530±1684***(296±106)▲▲220±1291***(346±84)▲▲▲
                                                                                                                                                                                                                                         ☆☆                    ☆☆☆                    ☆
Lv+dp/dtmax(kpa/sec) 溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组 1120±2151140±3131180±2701090±285 1590±739(44.5±67.3)1740±743**(51.8±43.9)1550±435**(31.5±28.9)1860±670***(71.2±42)   1920±779*(74.9±70.2)2340±776***(107.8±60)2080±598***(78.2±42.8)2380±735***(124.8±67.2)   2150±802**(99.5±81.7)2580±758***(132.2±67.9)2570±779***(120±56.3)2720±938***(156.5±77.8)   2330±744***(114.5±75.7)2990±926***(169±81.9)2920±673***(149±40.7)3040±973***(189.4±92.5)▲   2600±665***(138.5±70)3540±1123***(222.9±115.3)▲3370±574***(194±56.7)3530±660***(238.5±80)▲   2650±696***(146.8±87.9)3960±989***(262.8±121.3)▲3640±488***(219±61.9)4060±683***(91.7±93.8)▲▲   2800±854***(163±107)4080±1050***(272.1±118)▲3930±467***(246±73)4430±646***329.4±118)▲▲   3170±827***(193.7±100.8)4160±1073***(281.6±132.5)4370±727***(292±124)4950±899***(377.5±130)▲▲   3280±565***(204.4±89)4210±1198***(284±134)4300±735***(288±135)5150±958***(394±131)▲▲▲☆   3380±516***(211.8±80.4)3840±1065***(254.7±138)4210±962***(282±152)4490±772***(340±149)▲
注：与药前值比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001；与溶剂组比较，▲表示P＜0.05，▲▲表示P＜0.01，▲▲▲表示P＜0.001。高剂量组与中剂量组比较，★表示P＜0.05，★★表示P＜0.01。高剂量组与低剂量组比较，☆表示P＜0.05，☆☆表示P＜0.01。
                                                        表4-7( x±S，n＝10)
指标(单位) 组别   药前值                                                                                                    药后值(变化率)
    5’     10’     15’     20’     30’    45’   60’   90’     120’     150’
Lv-dp/dtmax(kpa/sec) 溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   880±215880±148760±171780±123     990±307(23±64.5)1210±251***(39.4±29.5)990±404(30.2±48.4)1390±35l***(77.1±27.5)▲★     1250±334*(53.4±69.2)1660±324***(91.6±37.3)1370±460**(81.5±59.3)1700±521***(118±64.4)▲     1300±406*(60.4±81.6)1870±302***(117±41.0)1600±562***(110±63.3)1970±687***(152±85.6)▲▲     1380±336**(68.7±75.9)1960±655***(131±81.2)1980±561***(168±89.8)▲2060±775***(163±94.8)▲     1460±420**(75±73.4)2440±403***(186±75)▲▲2420±587***(222±65.2)▲▲▲2640±688***(242±89.8)▲▲▲    1580±457***(89.8±76.9)2650±392***(211±82.7)▲▲2670±447***(259±67.1)▲▲▲3270±620***(1328±101)▲▲▲   1940±566***(139±114)2940±430***(245±87.8)▲2970±720***(295±77)▲▲▲3450±465***(351±86.5)▲▲▲   1900±546***(133±103)3090±477***(260±83.7)▲▲3330±851***(348±121)▲▲▲3890±504***(410±108)▲▲▲     2020±514***(138±69.5)3000±514***(249±82.6)▲3300±951***(339±112)▲▲▲4000±579***(422±99.6)▲▲▲     2120±527**(149±69.9)2850±621***(232±92.8)3320±927***(345±121)▲▲▲3730±797***(387±129)▲▲▲
                                                                                                                                                                                                 ☆☆                    ☆                  ☆☆                  ☆☆☆                   ☆☆
LVEDP(kpa) 溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   6.5±3.35.2±3.74.5±3.88.4±4.1     8.0±8.6(6.4±70.5)5.7±3.7(111.5±320.4)4.6±3.6(5.86±40.4)6.3±4.6*(27.7±25.3)     7.9±8.5(5.6±69)5.2±3.4(80.1±290)4.3±2.8(12.0±44.3)5.1±3.8***(-46.7±30.6)★     7.4±9.9(-10.7±85.3)5.1±3.1(80.4±289.4)4.1 3.8(-3.6±27.9)4.7±3.5***(-55.9±41.9)★     6.3±5.9(-10.4±45.2)5.3±3.8(93.5±354.4)3.7±3.4(-3.4±49.7)4.5±3.4***(-58.6±40.5) 5.5±4.2(-20.7±35.2)4.8±2.6(69.7±258.8)3.3±3.1(-14.8±60.1)3.0±1.9***(-64.0±22.8)▲    4.9±2.9(-16.7±34.6)5.0±2.9(93.1±321.8)2.4±2.6(-32.3±57.7)2.5±1.4***(-68.4±12.1)▲   4.7±2.6(-19.6±39.2)4.1±3.6(78.1±327.5)2.7 2.6(-17.3±73.6)2.0±1.4***(-77.6±13.3)   4.3 3.8(-44.6±117)4.0±3.1(62.3±296.1)2.2±2.7(-37.9±52.9)2.1±2.6***(-84.6±45)     3.4±4.1*(-64.3±117)4.2±3.6(86.8±326.5)2.9±3.0(-26.3±62.8)2.0±2.0***(-79.3±22.1)     3.9±4.8(-59.1±124)5.2±3.5(105.3±299.8)3.4±4.7(-1.5±150)1.7±2.3***(-89.5±41.8)
注：与药前值比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001；与溶剂组比较，▲表示P＜0.05，▲▲表示P＜0.01，▲▲▲表示P＜0.001。高剂量组与中剂量组比较，★表示P＜0.05，★★表示P＜0.01。高剂量组与低剂量组比较，☆表示P＜0.05，☆☆表示P＜0.01。
                                                                       表4-8( x±S，n＝10)
  指标(单位)   组别   药前值                                                                                                               药后值(变化率)
  5’   10’   15’   20’   30’   45’   60’   90’   120’   150’
HR(b/min)   四逆汤组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   221±15222±30214±20227±25   217±15(-1.4±5.2)230±35*(3.4±3.9)#215±26(0.3±6.2)234±24(3.5±5.6)#   221±16(0.13±5.9)233±36*(4.6±4.3)218±27(1.7±5.7)235±24*(4.0±5.4)   223±16(1.1±5.9)235±38**(5.5±4.2)221±29(3.3±7.0)237±24*(4.7±6.3)   228±19(3.7±7.4)241±36**(8.3±5.0)224±29(4.5±7.3)242±31*(7.0±9.1)   228±17(3.6±6.4)247±32**(11.6±7.2)#227±29*(6.2±8.1)246±33*(8.5±10.7)   225±27(2.2±10.9)249±32**(12.7±8.8)#228±29*(6.4±8.2)242±24*(7.1±9.0)   229±22(3.8±9.3)247±32**(11.4±9.2)226±29(5.9±10.7)239±19(6.0±8.8)   219±27(-0.8±11.9)241±26*(9.2±10.9)#213±26(-0.1±9.0)★235±20(4.2±8.6)   216±24(-2.2±9.6)232±21(5.8±14)210±26(-1.4±9.2)230±25(1.5±8.2)   209±27(-4.9±12.2)230±23(4.7±14)206±24(-3.5±11.0)223±23(-1.4±9.6)
  SAP(kpa)   四逆汤组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   48±10.850±10.747±9.553±12.5   65±13.1***(38.4±20.0)61±15.4***(20.8±14.4)#60±12.8***(26.5±10.7)70±12.9***(32.8±14.6)   77±15.0***(64.4±37.9)75±11.7***(51.9±20.0)72±12.3***(54.8±12.0)82±11.8***(56.8±17.2)   81±14.3***(74.1±42.7)79±14***(61.4±23.30)80±11.9***(71.0±14.7)87±10.4***(67.5±18.7)   83±16.2***(78.3±43.5)84±21.3***(70.9±46.0)88±13.9***(89.0±23.9)93±11.8***(78.2±22.6)   93±17.7***(102±57.6)96±19.1***(97.0±50.4)95±14.6***(105±28.2)99±10.2***(90.5±27.8)   96±20.6***(107±57.7)103±15.7***(114±56.7)103±12***(122±27.8)110±9.1***(112±32.3)   105±19.7***(126±55.1)110±14.8***(129±66.9)108±12.1***136±37.2)116±7.7***(125±36.1)   109±22.4***(135±59.3)113±14.1***(137±66.3)117±11.6***(156±43.0)123±9.0***(138±3806)   114±19.3***(148±58.9)117±15.7***(146±80.5)120±11.8***(161±42.5)128±6.7***(150±40.6)   113±17.8***(144±58.2)119±15.1***(151±85.5)121±15.8***(162±42.1)129±4.7***(152±45.4)
  DAP(kpa)   四逆汤组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   30±7.031±4.829±4.733±8.5   39±8.6***(34.0±18.4)38±7.5***(23.2±13.3)36±5.9***(25.1±6.1)42±10.9***(29.7±19.6)   43±6.5***(51.8±27.1)47±6.6***(55.8±17.2)44±6.8***(51.8±13.4)51±10.0***(58.7±14.7)   46±6.5***(60.4±28.2)49±8.7***(59.4±23.2)48±5.8***(65.6±14.0)55±8.6***(70.6±20.6)   46±7.1***5(62.1±29.6)51±14.5***(67.2±45.3)54±6.5***(87.9±19.3)56±9.2***(75.3±20.2)   2±10.3***(83.041.9)57±11.9***(88.3±43.5)57±7.3***(99.5±26.0)59±9.2***(84.2±23.3)   51±11.0***(79.8±41.2)62±11.9***(105±45.3)60±7.4***(110±26.5)64±9.7***(99.7±31.3)   56±12.5***(94.4±41.4)65±11.8***(117±47.1)63±7.9***(120±33.7)67±9.5***(111±32.5)   58±12.6***(101±38.2)69±9.1***(12843.7)67±9.3***(137±36.6)71±8.2***(124±31.6)   62±12.0***(114±36.1)72±9.8***(139±51.9)70±12.4***(146±43.0)75±7.4***(136±34.4)   61±12.0***(112±40.1)72±9.1***(143±60.9)75±15.1***(160±47.5)#76±3.9***(140±45.3)
注：与药前值比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001；与四逆汤比较，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01，###表示P＜0.001。中剂量组与低剂量组比较，★表示P＜0.05，★★表示P＜0.01，★★★表示P＜0.001。
                                                                    表4-9( x±S，n＝10)
  指标(单位)   组别   药前值                                                                                                                药后值(变化率)
  5’   10’   15’   20’   30’   45’   60’   90’   120’   150’
  1vsp(kpa)   四逆汤组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   51±5.851±7.649±4.853±6.2   65±7.5***(28.6±14)62±6.0***(22.8±16.6)55±9.4(11.7±16.1)#66±9.4***(23.9±11.7)   72±7.5***(41.8±19.2)71±6.0***(42.2±18.7)62±11.7**(26.4±21.7)73±9.9***(38.9±18.3)   75±7.6***(47.9±19.1)76±7.7***(52.2±26.6)69±13.8**(39.6±25.2)79±11.5***(50.2±18.9)   77±10.0***(52.8±21.8)80±12.9***(60.5±33.2)77±11.6**(56.2±11.6)84±11.6***(58.8±21.6)   83±12.9***(63.7±28.3)91±10.8***(82.4±35.5)86±11.0***(73.3±12.0)92±12.0***(74.6±24.2)   88±14.8***(75.1±31.6)98±8.1***(96.3±34.3)91±11.4***(85.2±11.6)101±10.2***(91.6±24.0)   91±15.5***(80±33.8)103±9.4***(107±37)97±117***(97.7±7.5)106±7.1***(102±29)   95±14.0***(89.2±31.1)107±6.9***(114±37)107±12.9***(117±21.3)113±7.5***(115±26.6)   99±13.1***(96.5±32.8)110±8.1***(120±38)111±13.4***(126±23.5)19±8.0***(127±30.5)#   98±13.8***(95.5±38.1)108±5.9***(118±39)114±16.3***(131±26.7)#116±5.5***(122±26.5)
  t-dp/dtmax(ms)   四逆汤组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   64±8.160±9.763±7.667±9.2   61±8.4*(-4.7±6.3)56±10.2*(-6.5±8.2)57±9.7*(-9.5±12)61±7.8**(-8.6±6.3)   58±9.8**(-10.5±7.8)53±9.2**(-11.3±8.3)52±9.2**(-16.6±13)57±7.2***(-14±9)   55±11.2***(-15.5±9.8)50±9.1***(-16.3±9.2)49±7.8**(-21±13.3)54±8.8**(-19±14)   52±11.1***(-19.4±9.949±9.9***(-18.3±8.0)46±4.4***(-26.5±10)51±8.4***(-22.8±15)   49±8.8***(-24.6±7.2)47±7.8***(-22.0±8.7)44±3.9***(-28.7±11)46±7.6***(-31.2±12.4)   47±8.6***(-26.8±8.2)44±9.7***(-26.4±12.1)44±4.7***(-29.7±96)46±6.2***(-30.3±11.7)   45±8.2***(-29.8±8.1)43±9.5***(-28.2±10.3)44±5.7***(-29.0±10)46±69***(-31.3±10.9)   43±8.2***(-33.1±7.4)43±9.5***(-29.1±9.7)42±6.8***(-32.3±11)43±7.9***(-35.4±11)   43±8.3***(-33.8±8.5)43±8.9***(-28.6±12.7)43±6.4***(-31.7±8.9)43±72***(-36±10)   44±7.1***(-31.9±7.7)45±8.2***(-24.8±7.9)45±7.1***(-27.7±9.7.1)45±7.6***(-32.3±10)
  LVET(ms)   四逆汤组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组   64±7.063±6.865±7.167±10.0   56±10.0*(-12.3±12.2)58±4.2*(-7.4±7.8)58±7.9*(-10.4±12.2)59±3.2*(-10.7±10.1)   53±8.2**(-16.8±13.4)52±9.2**(-16.9±15.2)55±8.9*(-15.5±15)52±7.9**(-20.7±17.6)   49±8.8***(-23.2±13.3)50±9.4**(-20±16.3)49±7.4**(-24±13.2)50±9.4**(-23.9±17.8)   48±10.3***(-25.6±15.9)52±9.2*(-16.7±16.7)49±7.5**-24.4±14.8)48±7.9***-27.7±15.7)   46±10.0***(-27.6±16.9)51±88**(-18.1±17.1)48±7.9**(-25.2±15.1)48±7.9***(-27±15.5)   49±10.0***(-23.3±14.2)53±9.8*(-15.6±19.0)47±6.8***(-26.9±13.3)48±7.9***(-27±15.5)   50±9.4***(-21.6±13.8)52±9.2*(-15.9±21.4)43±4.8***(-33.1±10.7)45±8.5***(-31.8±14.5)★   49±8.8***(-23±14.3)51±12.1*(-18.1±25.4)44±5.2***(-31.7±10.2)46±8.3***(-31.1±14.1)   49±7.4***(-22.8±13.9)50±12.6*-19.5±26.5)47±6.7***(-27.9±12.1)47±8.2***(-29.6±13.5)   47±6.8***(-26.1±11.6)50±12.6*(-19.8±25.9)48±9.2**(-26.3±16.7)49±11.1**(-26.3±19.7)
注：与药前值比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001；与四逆汤组比较，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01，###表示P＜0.001。高剂量组与中剂量组比较，★表示P＜0.05，★★表示P＜0.01，★★★表示P＜0.001。
                                                               表4-10( x±S，n＝10)
指标(单位) 组别 药前值                                                                                                  药后值(变化率)
 5’   10’   15’   20’   30’   45’   60’ 90’   120’   150’
  Lv±dp/dtmax(kpa/sec) 四逆汤组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组  1890±2282020±3971940±3031870±263  3200±817***(70.6±45.2)2950±950**(46.5±36.6)2540±709**(29.6±29.7)#3250±829***(73.2±31.6)★   3900±834***(108±46.4)4000±1061***(100±47)3450±928***(77.3±41.8)4080±1109***(119±55.6)   4360±1050***(131±52.6)450±942***(125±54)4170±1278***(113±56)4690±1471***(151±69.2)   4660±1225***(148±58.8)4950±1280***(151±71)4900±1135***(152±54)5100±1565***(174±78.5)   5150±1431***(172±66.5)5980±1432***(206±95)5790±1056***(200±47)6170±1122***(234±64)#   5670±1713***(199±82.6)6610±1261***(238±99)6310±885***(228±45)7330±1123***(298±74)##★   6020±1700***(219±86.7)7020±1336***(258±97)6900±1118***(260±62)7880±822***(328±69)## 6380±1753***(237±83.1)7250±1334***(270±99)7700±1409***(303±88)840±1168***(379±74)###   6520±1270***(247±65.2)7210±1541***(266±98)7600±1549***(300±102)9150±1284***(394±70)###★   6030±1274***(219±56.3)6690±1475***(242±109)7530±1684***(296±106)220±1291***(346±84)##☆
                                                                                                                                                                                                                               ☆☆                     ☆☆☆
  Lv+dp/dtmax(kpa/sec)# 四逆汤组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组  1070±1341140±3131180±2701090±285  1780±492**(69.5±55.5)1740±743**(51.8±43.9)1550±435**(31.5±28.9)1860±670***(71.2±42)   2330±602***(123±72.7)2340±776***(107.8±60)2080±598***(78.2±42.8)2380±735***(124.8±67.2)   2650±626***(154±81.2)2580±758***(132.2±67.9)2570±779***(120±56.3)2720±938***(156.5±77.8)   2810±771***(189±92.5)2990±926***(169±81.9)2920±673***(149±40.7)3040±973***(189.4±92.5)   3210±799***(205±86.1)3540±1123***(222.9±115.3)3370±574***(194±56.7)3530±660***(238.5±80)   3500±1106***(233±122)3960±989***(262.8±121.3)3640±488***(219±61.9)4060±683***(-291.7±93.8)   3660±1133***(249±129)4080±1050***(272.1±118)3930±467***(246±73)4430±646***(329.4±118) 3810±1107***(263±125)4160±1073***(281.6±132.5)4370±727***(292±124)4950±899***(377.5±130)   3860±956***(267±110)4210±1198***(284±134)4300±735***(288±135)5150±958***(394±131)#☆   3390±922***(216±66.5)3840±1065***(254.7±138)4210±962***(282±152)4490±772***(340±149)
注：与药前值比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001；与溶剂组比较，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01，###表示P＜0.001。高剂量组与中剂量组比较，★表示P＜0.05，★★表示P＜0.01。高剂量组与低剂量组比较，☆表示P＜0.05，☆☆表示P＜0.01。
                                                                 表4-11( x±S，n＝10)
  指标(单位)   组别  药前值                                                                                                      药后值(变化率)
 5’   10’ 15’    20’     30’     45’     60’     90’   120’   150’
  Lv-dp/dtmax(kpa/sec)   四逆汤组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组  820±162880±148760±171780±123  1420±563**(71.2±53.5)1210±251***(39.4±29.5)990±404(30.2±48.4)1390±351***(77.1±27.5)★   1570±362***(93.8±40.3)1660±324***(91.6±37.3)1370±460**(81.5±59.3)1700±521***(118±64.4) 1710±616***(110±62.8)1870±302***(117±41.0)1600±562***(110±63.3)1970±687***(152±85.6)   1850±685***(128±74.3)1960±655***(131±81.2)1980±561***(168±89.8)2060±775***(163±94.8)   1940±803***(135±83.3)2440±403***(186±75)2420±587***(222±65.2)#2640±688***(242±89.8)##   2170±834***(163±85.3)2650±392***(211±82.7)2670±447***(259±67.1)#3270±620***(328±101)###   2360±772***(190±84.0)2940±430***(245±87.8)2970±720***(295±77)#3450±465***(351±86.5)###   2570±929***(214±101.5)3090±477***(260±83.7)3330±851***(348±121)#3890±504***(410±108)###   2660±766***(239±133)3000±514***(249±82.6)3300±951***(339±112)#4000±579***(422±99.6)###   2640±971***(234±144)2850±621***(232±92.8)3320±927***(345±121)#3730±797***(387±129)###
                                                                                                                                                                                    ☆☆                      ☆                    ☆☆                           ☆☆☆             ☆☆
  LVEDP(kpa)   四逆汤组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组  5.3±3.85.2±3.74.5±3.88.4±4.1  4.3±2.0(-11.2±24.2)5.7±3.7(111.5±320.4)4.6±3.6(5.86±40.4)6.3±4.6*27.7±25.3)   3.8±2.5(-14.2±42.7)5.2±3.4(80.1±290)4.3±2.8(12.0±44.3)5.1±3.8***(-46.7±30.6)★ 3.4±2.5(-26.7±41.7)5.1±3.1(80.4±289.4)4.1 3.8(-3.6±27.9)4.7±3.5***(-55.9±41.9)★   3.0±3.1(-45.8±80.1)5.3±3.8(93.5±354.4)3.7±3.4(-3.4±49.7)4.5±3.4***(-58.6±40.5)   4.4±2.4(17.5±82.8)4.8±2.6(69.7±258.8)3.3±3.1(-14.8±60.1)3.0±1.9***(-64.0±22.8)   5.2±2.4(27.2±67.8)5.0±2.9(93.1±321.8)2.4±2.6(-32.3±57.7)2.5±1.4***(-68.4±12.1)   4.7±2.7(2 6.5±97.9)4.1±3.6(78.1±32 7.5)2.72.6(-17.3±73.6)2.0±1.4***(-77.6±13.3)   3.6±2.9(-20.2±87.8)4.0±3.1(62.3±296.1)2.2±2.7(-37.9±52.9)2.1±2.6***(-84.6±45.3)   3.8±3.0(-4.3±111)4.2±3.6(86.8±326.5)2.9±3.0(-26.3±62.8)2.0±2.0***(-79.3±22.1)   4.6±3.1(1.2±59.6)5.2±3.5(105.3±299.8)3.4±4.7(-1.5±150)1.7±2.3***(-89.5±41.8)
注：与药前值比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001；与四逆汤组比较，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01，###表示P＜0.001。高剂量组与中剂量组比较，★表示P＜0.05，★★表示P＜0.01。高剂量组与低剂量组比较，☆表示P＜0.05，☆☆表示P＜0.01。
                                                                表4-12( x±S，n＝10)
指标(单位)   组别 药前值                                                                                                     药后值(变化率)
    5’     10’     15’     20’     30’     45’     60’     90’     120’     150’
  MOCI(kpa.msb/min) 溶剂组低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组高剂量姜提取物组四逆汤组 675670±161003691014±149717649371±135124796446±177116681370±187789     751647±229677(11.4±21.1)790141±164326**(15.2±10.9)734210±175942*(13.0±14.7)965565±216659**(22.2±16.9)795212±220083*(18.4±19.6)     837238±244102*(26.6±31.6)884621±168241**(33.2±37.6)844437±160579**(32±21.6)1017040±293823**(27.6±23.4)909137±298598**(35.0±31.2)   850448±213491*(29.3±31.5)915497±219619*(37.8±42.7)859652198444**(33.6±24.0)1037038±274851*(32.4±31)896322±304451*(34.5±38.2)     875914±248349*(32.7±32.7)1026907±321099*(56.1±63.1)948168±213072***(47.8±30.3)1067852±265435**(35.8±26.9)92 3703±380556*(36.9±43.6)     897908±222411**(36.8±30.9)1183416±277061***(80.8±69)▲1031834±254066***(60.8±36.1)1155580±235517***(48.8±32.6)983118±319046**46.9±37.8)     957581±182684***(48.0±38.1)1332215±298608***(103±75)▲1101902±262176***(72.9±4 3.6)1270406±248641***(64.3±38.3)1064906±357600**(62.2±56.1)     1004763±220537***(55.9±45.6)1386488±234358***(111±67.3)▲1064744±255235***(66.3±38.7)1238466±233768***(61.6±45.6)☆1195568±320409***84.4±63.6)     1071620±234739***(67.6±56.6)1351613±243335***(106±68.8)1093470±192293***(72.9±35.3)1296331±173785***(68.8±38.5)1168307±359870***(77.5±55.8)     1133838±216901***(778±58.6)1312587±214153***(101±66.0)1161017±197983***(83±34.6)1536291±205400***(76±38.9)1220412±344343***(84.6±50)     1109998±211740***(75.1±62.2)1317549±223315***(102±75.1)1166750±228774***(84.5±44.0)1385066±311487***(80±47.9)11322±10359695***(71.9±56.8)
注：与药前值比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001；与溶剂组比较，▲表示P＜0.05，▲▲表示P＜0.01，▲▲▲表示P＜0.001。高剂量组与中剂量组比较，★表示P＜0.05，★★表示P＜0.01。高剂量组与低剂量组比较，☆表示P＜0.05，☆☆表示P＜0.01。
以上综合分析结果表明，中、高剂量姜提取物组从药后30min开始至150min，在升高±dp/dtmax、-dp/dtmax、+dp/dtmax和LVSP以及缩短t-dp/dtmax有强于四逆汤组和溶剂对照组的作用，高剂量姜提取物组还在降低LVEDP方面有独特优势。
                   表4-13
时间            Hotelling’s Trace
 Value   F   P值
药后5min药后10min药后15min药后20min药后30min药后45min药后60min药后90mm药后120min药后150min  1.0440.8540.8540.8431.7492.1251.7441.92920.771.726   1.3611.1131.1131.090202802.7702.2732.5152.70720250   0.1240.3310.3310.3470.001***0.000***0.001***0.000***0.000***0.001***
注：Hotelling T2检验，***表示P＜0.001。
4结论
4.1姜提取物对兔急性心衰模型心脏功能及血流动力学的影响
姜提取物对心衰动物模型心脏功能的改善作用表现在几方面：①使心衰动物模型的HR先加快后减慢，使HR在DAP升高的同时稳步加快，有利于冠脉的灌流，并在加快到一定程度后开始减慢，避免了心率过快对心衰程度的加重；②使心衰动物模型的LVSP、lv±dp/dtmax、lv+dp/dtmax均呈逐渐上升趋势，同时使t-dp/dtmax和LVET呈逐渐缩短趋势，并随剂量增加而作用增强，显示其增强心肌收缩性能的作用；③使心衰动物模型的lv±dp/dtmax、lv-dp/dtmax呈逐渐上升趋势，并随剂量增加而作用增强，高剂量组还使LVEDP呈逐渐下降趋势，显示其改善室壁张力和舒张末期容积，增强心肌舒张性能的作用；④使心衰动物模型的t-dp/dtmax呈逐渐缩短趋势，并随剂量增加而作用增强，显示其降低外周阻力，减轻心脏后负荷的作用；⑤高剂量组使LVEDP呈逐渐下降趋势，显示其减轻心脏前负荷的作用；⑥使心衰动物模型的HR在DAP升高的同时稳步加快，高剂量组还使LVEDP呈逐渐下降趋势，均有利于冠脉的灌流，显示其改善冠脉循环的作用；⑦各剂量组姜提取物在增强心肌收缩和舒张性能、减轻心脏前后负荷、改善冠脉循环的同时，与对照组相比，并未明显增加心肌耗氧量。通过以上几方面的综合作用，使心衰动物的心脏功能得到改善，从而减轻心衰症状而发挥治疗作用。
姜提取物改善心脏功能的作用具有中医理论基础。传统中医认为，心衰的病因病机，不外乎两方面：一为水泛，二为阳(气)虚。现代研究也支持心衰发病机理以心阳(气)虚损为基础的观点，其治疗以温阳利水为首务。姜提取物性温味辛，是传统的温里药，既能温里散寒、回阳救逆，又能温肺化饮而利水，切中病机，确实不失为治疗心衰的良药。4.2姜提取物与四逆汤对心衰兔心脏功能和血流动力学作用的异同
四逆汤是回阳救逆的传统名方，四逆汤对心衰动物模型心脏功能的改善作用表现在几方面：①使心衰动物模型的LVSP、lv±dp/dtmax、lv+dp/dtmax均呈逐渐上升趋势，同时使t-dp/dtmax和LVET呈逐渐缩短趋势，显示其增强心肌收缩性能的作用；②使心衰动物模型的lv±dp/dtmax、lv-dp/dtmax呈逐渐上升趋势，显示增强心肌舒张性能的作用；③使心衰动物模型的t-dp/dtmax呈逐渐缩短趋势，显示其降低外周阻力，减轻心脏后负荷的作用。
四逆汤通过以上几方面的综合作用，改善心衰动物的心脏功能，但其作用与姜提取物存在一定程度的差异。表现为中、高剂量姜提取物组在提高心衰兔LVSP、lv-dp/dtmax方面的作用比四逆汤组强，高剂量姜提取物组在提高lv±dp/dtmax、lv+dp/dtmax方面的作用也比四逆汤组强，提示中高剂量姜提取物组在改变心衰兔心脏舒缩功能方面有强于四逆汤组的作用。
四逆汤组与各剂量姜提取物组的差异还表现在对HR和LVEDP的影响，四逆汤组药后各时点HR和LVEDP与药前值比较均无统计学意义，而各剂量姜提取物组药后各时点HR呈先加速后减慢趋势，伴随DAP的稳步升高，有利于冠脉的灌流，并在加快到一定程度后开始减慢，避免了心率过快对心衰程度的加重；高剂量姜提取物组使LVEDP呈逐渐下降趋势，在药后10min至150min各时点，与药前值比较差异有显著性意义，P＜0.001，显示高剂量组姜提取物组在降低LVEDP的独特优势，能减轻心脏前负荷，改善室壁张力和舒张末期容积，增强心肌舒张性能。
本研究结果提示四逆汤和姜提取物均具有增强心衰动物模型心脏功能的作用，共同表现为增强心肌收缩和舒张性能、降低外周阻力、减轻心脏后负荷，而以姜提取物的作用更强，具有显著性差异。同时姜提取物还在改善心率、降低舒张末期压方面具有优势，更有利于冠脉灌流，减轻心脏前负荷，改善室壁张力和舒张末期容积，增强心肌舒张性能。显示了姜提取物在改善心脏功能方面有较好的开发和应用前景。
实施例6：姜提取物对正常麻醉兔心脏功能及血流动力学的影响
1材料与仪器
1.1实验动物
纯种新西兰兔(体重2.3±0.3kg)10只，雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供，动物合格证号：2002A025。
1.2主要实验试剂
①～⑤同“实施例3”中的“1.2”。
⑥受试品(2％姜提取物)的配制及用量：用食用花生油作溶剂，将姜提取物稀释50倍，即配制比例为姜提取物∶花生油＝2mL∶98mL，观察用量为2.8mL/kg(相当于姜提取物0.056mL/kg)。
1.3主要仪器
①RM-6000四道生理仪(日产光电)
②心导管、输液管(江苏锡山市南泉高分子医械厂出产)
③常规手术器械
2方法
2.1手术方法
同“实施例3”中的“2.1”。
2.2给药途经及剂量
经口插管入胃，灌服2％姜提取物2.8mL/kg(相当于姜提取物0.056mL/kg)，并用适量蒸馏水冲管。
2.3观察方法
同“实施例3”中的“2.3”。
2.4数据处理
使用SPSS11.0统计软件包建立数据库及进行数据处理和统计分析。各指标以 x±S表示，将各时点实测值与药前值作配对t检验(Paired-samples T Test)，检验水平α＝0.05。
3结果
实验结果见表4-1。经口灌服姜提取物0.056mL/kg后，使正常麻醉兔HR，SAP，DAP下降，三者依次分别在药后5min、10min和10min与药前值比较差异均有显著性意义(P＜0.01、P＜0.001、P＜0.001)，其中HR在5min至150min全过程呈逐渐下降趋势；SAP从药后15min至60min持续下降，至90min开始回升到药前水平；DAP从药后5min至150min各时点均呈下降趋势，并于45min下降到最低值后维持至150min。而LVSP、LVEDP、lv±dp/dtmax、lv+dp/dtmax、lv-dp/dtmax、t-dp/dtmax、LVET、MOCT各指标的药前后值比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。提示姜提取物0.056mL/kg灌服，对正常麻醉兔具有一定的降低血压和减缓心率的作用，特别对舒张压和心率的影响尤为显著，而对其它心脏功能和血流动力学指标无明显影响。
4结论
姜提取物能使正常麻醉动物血压和心率明显下降，而对心肌收缩和舒张性能、心脏射血时间等的影响不明显，且血压的下降特点是DAP下降的幅度比SAP大，提示姜提取物可能通过扩张血管，使外周阻力下降，从而引起血压下降。这与有关姜酚对血管阻力和舒缩功能影响的报道相吻合。
实施例7：姜提取物对兔心肌ATP酶活性的影响
1材料与仪器
1.1实验动物
分低、中剂量姜提取物组、四逆汤组和心衰对照组共4组。前三组的实验动物同“实施例3”中的“1.1”，心衰对照组用纯种新西兰兔(体重2.3±0.3kg)10只，由广东省医学实验动物中心提供，动物合格证号：2002A025。
1.2主要实验试剂
①ATP酶测试盒，购自南京建成生物工程研究所。
②考马斯亮兰蛋白测试盒，购自南京建成生物工程研究所。
1.3主要实验仪器
①EFFENDORF 5415D型离心机(美国出产)。
②UV/V 4000分光光度计(BIO-RAD公司产品，美国出产)。
③电热恒温水浴箱(北京福绥境医疗器械厂出产)。
④IKA MINI振荡器。
2方法
2.1标本准备
低、中剂量姜提取物组和四逆汤组在“实施例3”实验完成时，快速打开兔胸腔，取出心脏，挤去心腔残留血液，锡纸包裹后存放于-30℃冰箱备用；
心衰组参照“实施例3”中“2.1”的手术和“2.2”的造模方法，造模成功并稳定10min时，快速打开兔胸腔，取出心脏，挤去心腔残留血液，锡纸包裹后存放于-30℃冰箱备用。
2.2实验步骤
按南京建成生物工程研究所试剂盒提供的操作步骤进行：
2.2.1考马斯亮兰蛋白测定试剂盒测定各组心肌蛋白含量
①将待测组织恢复至室温，从右心室处剪取组织约100mg左右，准确称取待测组织的重量，按重量体积比加生理盐水制备成10％的组织匀浆，3000转/min，离心10min，然后取组织匀浆上清再用生理盐水按1∶4稀释成2％的组织匀浆，待测。
②配制考马斯亮兰应用液：取考马斯亮兰储备液40mL，加入蒸馏水160mL，混匀。
③配制蛋白标准液：取蛋白标准液(56g/l)10μL，加入生理盐水990μL，充分混匀，得到标准管浓度为0.56g/L的蛋白标准应用液。
④取空白试管若干，每管内加入3mL配制好的考马斯亮兰应用液，于测定管内，每管加入50μL测定样品，于标准管内，加入50μL蛋白标准液，于空白管内，加入50μL蒸馏水。震荡器上充分混匀，静置10min，于595nm处，1cm光径，蒸馏水调零，测定各管吸光度。
⑤计算公式如下：蛋白含量＝(测定管OD/标准管OD)×标准管浓度。
2.2.2 ATP酶试剂合测定各组心肌Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Mg2+-ATP酶的活性
①试剂准备过程：试剂1、2、3、7由试剂盒直接提供；其它试剂按说明书配备：
试剂4，每支加蒸馏水至5mL，充分混匀。
试剂5，每支加蒸馏水至5mL，适当加热溶解。
试剂6，每支加蒸馏水至10mL，充分加热使其溶解。
试剂8，每瓶加水至40mL溶解，室温保存。
试剂9，每瓶加水至100mL溶解，室温保存。
0.5mmol/L标准磷应用液配制：用时取0.5mL标准磷储备液，加蒸馏水定容至10mL。
定磷剂配制：按H2O∶硫酸∶试剂8∶试剂9＝2∶1∶1∶1的比例配制，配好的定磷剂为浅黄色。
②准备若干空白塑料管，按试剂说明书依次加入试剂1，2，3，4，5，6及待测样本。充分混匀后，37℃水浴准确反应10min。再加入试剂7(或样本)。充分混匀，3000转/分离心10min，从各管中取上清200μL定磷。
③定磷：取标准定磷液200μL，加入定磷剂2mL，其余待测管中也分别加入定磷剂2mL，混匀，37℃水浴30min，冷却至室温，在660nm处，1cm光径，蒸馏水调零比色。
④ATP酶活力单位的计算：每小时每毫克组织蛋白的ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个ATP酶活力单位，即微克分子磷/mgprot/hour(μmolpi/mgprot/hour)。计算公式如下：
组织中ATP酶活力＝
2.3数据处理
用SPSS11.0统计软件包建立数据库并进行数据处理和统计分析：用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，方差齐性者选择最小显著差异法检验(LSD检验)；方差不齐者选择Dunnett T3法进行检验，检验水平α＝0.05。
3结果
表5是兔心肌ATP酶活性测定结果实验结果显示，低、中剂量姜提取物组的Na+-K+-ATP酶活性明显偏低，与心衰组和四逆汤组比较，差别均具有显著性意义，P＜0.05，提示姜提取物具有降低Na+-K+-ATP酶活性的作用；而四逆汤组与心衰组的Na+-K+-ATP酶活性接近，两者比较，差别无统计学意义，P＞0.05，提示四逆汤对Na+-K+-ATP酶活性无明显作用。
低、中剂量姜提取物组和四逆汤组的Ca2+-ATP酶和Mg2+-ATP酶活性与心衰组比较均无统计学意义，但低剂量姜提取物组的Ca2+-ATP酶与其它三组相比有升高趋势。
                                      表5( x±S，n＝10)
    组别 Na+-K+-ATP酶▲   Ca2+-ATP酶▲▲  Mg2+-ATP酶▲▲
低剂量姜提取物组中剂量姜提取物组四逆汤组心衰组 0.802±0.698*★0.806±0.350*★1.787±1.0071.747±1.159  1.009±0.8670.458±0.3590.591±0.2060.691±0.426  0.998±0.9580.616±0.3142.190±1.9541.239±1.089
注：1、▲方差齐，采用LSD检验；▲▲方差不齐，采用Dmmett T3检验。
2、与心衰组比较，*表示P＜0.05；与四逆汤组比较，★表示P＜0.05。
4结论
姜提取物具有抑制心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶的活性的作用，提示其强心机制与强心甙类同，即通过抑制心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶的活性，减少Na+-K+交换，降低Na+的跨膜浓度梯度，从而降低Na+-Ca2+交换速率，使心肌胞浆内Ca2+浓度增高，而起到正性肌力作用，促使心肌收缩力增强。
实施例8：姜提取物对脑垂体后叶素致心肌缺血大鼠的心功能改善和心肌保护作用
(一)姜提取物对脑垂体后叶素致心电图改变的影响
1材料和方法
1.1材料
动物：Wistar大鼠，雌雄均用，140～160g
试剂：脑垂体后叶素(上海第一生化药业公司，上海生物化学制药厂，批号010327有效期至030326)、戊巴比妥钠(上海第三制药厂批号861106)
试药：复方丹参滴丸(购自天津天士力制药有限公司)、姜提取物
仪器：IM-600型电生理仪(日本光电)
1.2方法
1.2.1动物分组：Wistar大鼠，140～160g，雄性，分为4组，10只/组。正常对照组，模型对照组，阳性药(复方丹参滴丸)对照组，姜提取物组。预给药4天。
1.2.2给药：正常组、模型组给水，阳性药组复方丹参滴丸给药剂量为8.3mg/100g；姜提取物组给药剂量为24μl/100g。
1.2.3第5天给药后45min用戊巴比妥钠麻醉，大鼠背位固定，四肢接二导联，大鼠心电图稳定时，腹腔注射脑垂体后叶素，观察记录0s，5min，15min，30min，45min时心电图变化，同时记录心率的变化。空白组用生理盐水代替脑垂体后叶素。
1.2.4以S点到T点的靠S点端1/3处记为J点，计算统计J点的偏移程度。
1.2.5实验记录条件：纸速：50mm/s，电压：0.5mv/mm，
2结果
表6是姜提取物对脑垂体后叶素引起急性心肌缺血的影响数据，在30min点时，复方丹参滴丸组、姜提取物组ST段均被抬高至最高点。45min时逐渐恢复，给药组ST段并未恢复到给药前水平(即0min时)。正常组ST段也略有抬高，但并不明显。而模型组则在此期间无恢复迹象。
                                             表6
组别 n                          J点抬高(mv)( x±SD)
    3mm     15min     30min     45min
正常对照组模型对照组阳性药对照组姜提取物组  10101010  0.13±0.100.45±0.12**0.27±0.10##0.24±0.10##  0.23±0.110.79±0.07**0.63±0.12##0.68±0.10##  0.26±0.101.06±0.12**0.88±0.13##0.92±0.11##  0.22±0.080.98±0.09**0.77±0.08##0.68±0.09##
与正常组比较：*p＜0.05，**p＜0.01；与模型组比较：#p＜0.05，##p＜0.01
3结论
实验结果表明，姜提取物具有改善脑垂体后叶素所致的心肌缺血症状的作用。
(二)姜提取物对心肌缺血引起的SOD活力下降的影响
1材料和方法
1.1材料
1.1.1动物：Wistar大鼠，雌雄兼用，140～160g
1.1.2试剂：脑垂体后叶素、SOD试剂检测盒(购自南京冷泉港科技中心)
1.1.3试药：复方丹参滴丸(购自天津天士力制药有限公司)、姜提取物
1.1.4测盒：SOD试剂检测盒(购自南京冷泉港科技中心)
1.1.5仪器：HP6010可见光-紫外分光光度计
1.2方法
1.2.1动物分组：同“实施例6”(一)中的“1.2.1”。
1.2.1给药方法：同“实施例6”(一)中的“1.2.2”。
1.2.3正常组给药以给水，第4天腹腔注射脑垂体后叶素改为生理盐水；模型组则腹腔注射脑垂体后叶素，余同空白组；阳性对照组则以复方丹参滴丸为阳性药。
1.2.4药物配制：药物配制每2天一次。
1.2.5检测方法：第4天给药后30min后，颈动脉取血，离心取血清。按试剂盒说明书检测。
1.2.6配制试剂：按试剂盒说明配制试剂一、二、三、四。试剂一、二为缓冲液，试剂二配好后4℃保存。试剂三为对氨基苯磺酸，试剂四为盐酸萘乙二胺。
1.2.7加样：
1)每试管加样品50μl。
2)各试管依次加入双蒸馏水0.25ml、试剂一、试剂二各0.1ml。同时做空白对照管、标准曲线。
3)混匀，37℃水浴30min。
4)加试剂三、试剂四各0.5ml。
5)将各管混匀，置30℃水浴15min。
6)水浴取出，室温静置15min，待检。
7)对照管用双蒸馏水代替样品，其余处理同待测样品。
8)标准曲线制作：标准品与双蒸馏水的总体积为0.3ml，标准品加样量分别为0.01ml、0.02ml、0.05ml、0.1ml、0.15ml、0.2ml，其余处理皆与其他组雷同。SOD标准曲线方程：y＝-0.737x+0.150；r2＝0.997
1.2.8在550nm处用可见光-紫外分光光度计检测OD值
2结果
表7是姜提取物对SOD活力的影响。
                   表7
    组别     n     SOD活力
正常对照组模型对照组阳性药对照组姜提取物组     10101010  0.070±0.0070.062±0.0080.074±0.011*0.068±0.008*
与模型组比较：*p＜0.05，**p＜0.01
3结论
实验结果表明，姜提取物具有提高心肌缺血损伤模型SOD浓度，有改善心肌缺血损伤作用。
实施例9：姜提取物对瘀血模型大鼠血液流变学的影响
1材料和方法
1.1材料
1.1.1动物：Wistar大鼠，雄性，150g±20g
1.1.2试剂：盐酸异丙肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，批号000703，购自广州中医药大学附属第一医院)
1.1.3试药：复方丹参滴丸(购自天津天士力制药有限公司)，姜提取物
1.1.4仪器：L-100血液粘度计，LLANG-微机显示自动记录血液血浆粘度计
1.2方法
1.2.1Wistar大鼠，雄性，40只。随机分为4组，正常组、模型对照组、阳性药对照组、姜提取物组。
1.2.2给药剂量：复方丹参滴丸给药剂量为8.3mg/100g；姜提取物给药剂量为24μl/100g。
1.2.3造模方法：采取寒冷刺激结合肾上腺素造模，属于寒凝型血瘀证模型。将1mg/mL的异丙肾上腺素应用生理盐水稀释1倍，每隔4小时按0.1ml/100g皮下注射(SC)1次，共3次。在每两次给药的中间将大鼠放入0～2℃冰水中冷刺激4分钟。造模共进行2天。
1.2.4给药方法：正常组、模型对照组均给水，阳性药对照组给复方丹参滴丸。预给药3天，造模后，再给药2天，第3天检测。造模同时不停药。
1.2.5造模后第3天，心脏取全血，肝素抗凝。
1.2.6检测方法及指标：检测血液流变学指标：血液粘度，红细胞压积，红细胞变形能力，血浆粘度等。
2结果
缺血性心脏病常伴有血液流变学的改变。血液的粘、浓、凝、聚状态，使缺血性心脏病更易发生。表8是姜提取物对瘀血模型大鼠血液流变学的影响数据，可以看到，与模型组比较，姜提取物对红细胞变形性、聚集性、聚集指数影响均有显著性意义。
                                          表8
    组别     n  红细胞变形性 红细胞聚集性 红细胞聚集指数
正常组模型对照组阳性对照组姜提取物组     10101010 6.895±1.20510.358±1.608△△7.3 14±1.495**8.825±1.314△△* *# 10.0641±1.46619.633±1.797△△10.347±1.506**11.853±1.504△△**# 1.410±0.1241.749±0.139△△1.476±0.129**1.598±0.126△**
与正常组比较：△p＜0.05，△△p＜0.01；与模型组比较：*p＜0.05，**p＜0.01；姜提取物、陈皮提取物混合物给药组与复方丹参组比较：#p＜0.05
数据经方差齐性检验，各组间方差齐
3结论
实验结果表明，姜提取物具有改善瘀血模型大鼠血液流变学作用。
实施例10：姜提取物对血小板聚集率的影响
1材料和方法
1.1材料
1.1.1材料：塑料试管、一次性射器
1.1.2仪器：离心机、血液凝聚仪LBY-NJ2
1.1.3动物：Wistar大鼠，雌雄兼用，200g～250g
1.1.4试药：阿司匹林(购自广州中医药大学第1附属医院)，姜提取物
1.1.5试剂：血小板聚集诱导剂ADP钠盐、盐酸异丙肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，批号000703，购自广州中医药大学附属第一医院)、枸橼酸钠
1.2实验步骤
1.2.1动物分组：Wistar大鼠40只，雌雄兼用。随机分为4组，设为正常组、造模组、阳性药对照组、姜提取物组。除正常组外，其余均用肾上腺素冰水造模。
1.2.2给药方案：ig给药，正常组、造模组给水溶液，阳性对照组给予阿司匹林，姜提取物组24μl/100g。
1.2.3造模方法：将1mg/mL的肾上腺素用生理盐水稀释1倍，每隔4小时按0.1ml/100g皮下注射(SC)1次，共3次。在每两次给药的中间将大鼠放入0～2℃冰水中冷刺激4分钟。造模共进行2天。
1.2.4给药共5天。(造模结束后继续用药3天)。第5天给药1h后心脏取全血，置入抗凝试管中(用1％肝素处理)。以1000rpm离心5min，吸取上层PRP，余下血浆再以4000rpm离心10min，其上清液即乏血小板血浆PPP(platelet poor plasma)。
1.2.5以PPP调PRP，使PRP中血小板数平均约为45万/μl。(血液凝聚仪LBY-NJ2计数)
1.2.6取PRP0.3ml于比浊管内，以PPP调透光度，用血液凝聚仪LBY-NJ2检测描记PRP中血小板在5分钟内的最大聚集程度。
1.2.7计算两者的比值和血小板聚集率。姜提取物对抗ADP诱导的血小板聚集的影响实验结果如表9。
                   表9
    组别     n 血小板最大聚集率(％)
空白对照组模型对照组阳性药对照组姜提取物组     10101010 41.98±6.471#48.64±5.339*##38.50±5.323**##33.07±4.767**##
*与正常对照组比较p＜0.05；**与正常对照组比较p＜0.01
#与模型对照组比较p＜0.05；##与模型对照组比较p＜0.01
2结果
结果表明，模型对照组与正常对照组比较有差异p＜0.05，说明模型非常成功；姜提取物组和阳性药对照组对ADP诱导的血小板聚集有明显的抑制作用，与模型对照组比较均p＜0.01。结果见表9。
3结论
姜提取物对ADP诱导的血小板聚集有明显的抑制作用。
实施例11：姜提取物急性毒性试验研究
1材料和方法
1.1材料
1.1.1试剂：苦味酸试剂，蒸馏水，吐温80
1.1.2试药：姜超临界CO2提取物
1.1.3动物：NIH小鼠(普通级)，18～22g，雌雄各半
1.1.4实验条件：开放系统
1.2方法
实验前均禁食不禁水14小时，ig给药，给药容量为0.3ml/10g。给药1h后给食，对死亡小鼠进行解剖，记录死亡情况。给药后观察7天。
1.2.1预实验：12只小鼠，雄鼠编号1～6，雌鼠编号7～12，随机分为三组。初步确定三组给药剂量分别为每10克0.2ml、0.10ml、0.05ml。(组间剂量1∶0.5)
1.2.1.1预实验结果，表10是姜油小鼠急性毒性预实验数据
                            表10
    组别   数量   死亡数     给药剂量     结果
    组一组二组三     444     421   0.2ml/10g0.1ml/10g0.05ml/10g   全部死亡死亡2个死亡1个
1.2.1.2由预实验结果，可初步确定小鼠姜油最小全部死亡剂量(Dm)为0.2ml/10g，最大全部存活剂量(Dn)为0.03ml/10g。为确保实验的顺利的进行，将Dm扩大1.5倍定为0.3ml/10g。
1.2.2正式实验：NIH小鼠100只，雌雄各半，分为10组。在Dn和Dm的范围内分为10个剂量梯度，确定组间剂量以1∶0.75(1∶K)递减。第1剂量为0.3ml/10g，第2剂量为0.225ml/10g，......，第10剂量为0.0225ml/10g，延续到第11剂量为0.01689ml/10g。具体剂量情况见表9。
1.2.2.1先从第2剂量开始给药，在给药期间此剂量组即全部死亡，故第1剂量不必再做。实验结果如表9。
1.2.2.2实验情况：小鼠的死亡基本大部分发生在第一、二天，两天后，死亡数量大减。第4天后，组10与组9的未死亡小鼠外观行动恢复正常；第5天组7、组8小鼠恢复正常：进食饮水，大便、活动均见正常；第7天，组6未死亡小鼠恢复正常。小鼠在死亡前先后出现活动减少，蜷缩，静卧，呼吸急促、浅，皮毛无松弛现象，未见流涎、流鼻涕现象，未见抽搐现象。死亡后解剖，见：胃肠胀气、充血，第2、3天死亡小鼠解剖可见大便有干结现象，小便少(膀胱空)。肺部、心、肝、脾、肾外观无明显异常。
1.2.3一周来小鼠日死亡情况见表11，总体实验情况见表12(姜油小鼠实验急性毒性实验情况)。
                                    表11
组别                             死亡数(只)
  第1天   第2天  第3天  第4天   第5天  第6天  第7天
  组1组2组3组4组5组6组7组8组9组10∑   10107564222048   003431100012   00011100003   00000000000   00000000000   00000000000   00000000000
                         表12姜油小鼠实验急性毒性实验情况
组别   死亡数/动物数   给药剂量(ml/kg)   对数剂量 计算资料 P[注] P2
  组1组2组3组4组5组6组7组8组9组10   10/1010/1010/1010/1010/106/103/102/102/100/10   22.5016.8812.669.497.125.344.003.002.251.69   1.35221.22721.10230.97740.85240.72750.60250.47760.35270.2277   Dm＝22.5Xm＝1.3522n＝10K＝6i＝0.1249   1.01.01.01.01.00.60.30.20.20   1.01.01.01.01.00.360.090.040.040
注：P为小鼠死亡率，P2为死亡率的平方值
2结果
根据实验，按改良寇氏法公式计算：
姜油小鼠半数致死量LD50＝4.562ml/kg
LD50的95％可信限＝1g-1(0.8552±1.96×0.0407)＝5.0211～3.6158ml/kg
LD50的平均可信限＝4.261±(5.0211-3.6158)/2＝4.261±0.7026ml/kg直线回归方程为：Y＝5.77x-1.19
3结论
姜油的急性毒性实验表明，其小鼠的LD50为4.261ml/kg，相当于人约25ml/60kg，相当于生药500g，是临床常用量的50～100倍。由此，可初步认为姜油在临床应用上是安全的。
实验过程中解剖发现，姜油对胃肠道有较大刺激，引起胃肠粘膜充血，并且大肠有大便干结现象。心、肺、肝、脾、肾等器官外观无明显变化。小鼠第1天大部分在1～2小时左右死亡，第2天则少，第3天已基本无死亡现象，第7天则已恢复正常。

Claims (10)

1、一种姜提取物，其特征在于主要含有姜挥发油和姜辣素，包括姜醇(姜油酮)、姜烯、没药烯、α-姜黄烯、α-和β-金合欢烯、芳樟醇、桉油素、壬醛、α-龙脑和β-倍半菲兰烯；姜辣素(姜酚)及其分解产物姜烯酚和姜酮。
2、权利要求1所述的姜提取物的制备方法，其特征在于将干燥的破碎至粒度1mm以下的原料姜，投入萃取釜中，通入超临界CO2流体，在20-30MPa，30-40℃下进行萃取0.5-3小时；萃取液进入分离罐中，在5-15MPa，40-60℃下进行分离1-3小时，得到姜提取物。
3、权利要求1所述姜提取物在制备抗心力衰竭疾病的药物中的应用。
4、权利要求1所述姜提取物在制备抗心肌缺血疾病的药物中的应用。
5、权利要求1所述姜提取物在制备抗血栓形成疾病的药物中的应用。
6、权利要求1所述姜提取物在制备降血脂的药物中的应用。
7、权利要求1所述姜提取物在制备降血压的药物中的应用。
8、权利要求1所述姜提取物在制备抗动脉粥样硬化疾病的药物中的应用。
9、根据权利要求3-8中任一项所述的应用，其特征在于所述药物中含有0.1％～100％重量姜提取物。
10、根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述药物为包括软胶囊剂、胶囊剂、滴丸、片剂、颗粒或口服液的口服药物剂型，或者是注射剂。
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