CN102178862B - 香连消毒液的制备及质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及香连消毒液、含有香连组合物的口服、注射和喷雾的制剂及其制备方法和质量检测方法。本发明的香连消毒液是由黄连、丁香、苦参、薄荷、徐长卿、香薷、柠檬草、艾叶组成的。它解决了现有技术存在的毒副作用、污染环境等缺点。本发明生产工艺简便，检测手段先进，产品质量稳定，对细菌、真菌和病毒具有卓越的杀灭和抑制作用，绿色、环保、无毒副作用，消毒效果显著。

Description

香连消毒液的制备及质量检测方法

(一)技术领域

本发明涉及香连消毒液、含有香连组合物的口服、注射和喷雾的制剂及其制备方法和质量检测方法。

(二)背景技术

消毒是对被保护生物体及其周围环境的病原微生物进行杀灭的过程，对于消灭传染来源、切断传播途径，对于控制传染病的发生与扩散具有至关重要的作用。在畜牧业生产过程中应用较多的为化学消毒剂，这些制剂选用得当是行之有效的。但又各有其不足，如部分消毒剂有毒性、刺激性、金属腐蚀性、环境破坏性等；许多消毒剂不同程度影响动物的健康，不适合带动物消毒；操作系统要有防护措施；消毒后异味不能很快消除，长期使用会对动物有蓄积中毒的危险等。如“84”消毒液空气浓度较高时，对人体的黏膜、皮肤有较强的刺激或损伤；臭氧浓度超过0.3mg/m3、时间过长可使皮肤产生红斑或引起眼炎以及臭氧中毒、脱发、掉眉毛等副作用；过氧化氢长期作用对大鼠，特别是雄鼠肝、肾功能及肺、睾丸有损害，长期接触对皮肤和粘膜有刺激感、皮肤刺痛及暂时性变白、红肿、起泡、眼疾、胃出血，严重时可造成失明、组织坏死、肺水肿；甲醛具有刺激、致敏和致突变作用，主要危害表现为对皮肤粘膜的刺激作用，甲醛是原浆毒物质，能与蛋白质结合、高浓度吸入时出现呼吸道严重的刺激和水肿、眼刺激、头痛，皮肤直接接触甲醛可引起过敏性皮炎、色斑、坏死，吸入高浓度甲醛时可诱发支气管哮喘，高浓度甲醛还是一种基因毒性物质，动物在高浓度吸入的情况下，可引起鼻咽肿瘤；过氧乙酸具有强腐蚀性、性质不稳定等。

因此，在现代畜牧业生产中迫切需要更加安全、有效的消毒制剂。

(三)发明内容

本发明的目的就是为了解决现有消毒产品存在的毒副作用、污染环境等缺点，而设计一种以天然中草药为主要原料的香连消毒液，该产品质量稳定，对细菌、真菌和病毒具有卓越的杀灭和抑制作用，并给出了其具体的制备及质量检测方法。

本发明由如下技术方案实现的：

香连消毒液是由黄连、丁香、苦参、薄荷、徐长卿、香薷、柠檬草、艾叶组成的，它们的质量分数分别为

香连消毒液是一种以天然中草药为主要原料的消毒液，其制备步骤如下：

选取黄连、苦参、徐长卿，按照质量分数进行配料，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入物料质量8～10倍的水，煎煮二次，每次1.0～1.5小时，放出提取液，并将二次提取液合并，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.30(70～80℃测)，冷至室温时缓慢加入乙醇，使含醇量达40％～70％，充分搅拌，静置12小时后，取上清液备用；再取香薷、艾叶、丁香、薄荷、柠檬草，按照质量分数进行配料，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入物料质量6～10倍的水，加热煮沸3.0小时，收集挥发油，将收集的挥发油与适量的酒精和吐温-80混合后，加入到上清液中，搅拌均匀后，加水定容至物料质量4～8倍的体积，搅匀，滤过，即得香连消毒液；

本发明香连消毒液的质量检测方法为：

【性状】本品为黄棕色至红棕色澄清液体，气味清香；

【鉴别】(1)取本品10ml，水浴浓缩至5ml，置分液漏斗中，加浓氨试液调节pH值至1l，用石油醚萃取二次，每次5ml，取水层，用三氯甲烷振摇提取三次，每次5ml，合并三氯甲烷液，水浴浓缩至1ml，滤过，滤液作为供试品溶液；另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用2％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲醇的比例为8∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色斑点；

(2)取本品20ml，加20ml纯化水稀释，沸水浴蒸馏3小时，收集蒸馏液20ml，加20ml纯化水稀释，用三氯甲烷萃取三次，每次20ml，合并三氯甲烷液后，水浴60℃蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯的比例为3∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％的三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点；

(3)取本品10ml，沸水浴蒸馏3小时，收集蒸馏液5ml，加5ml纯化水稀释，用石油醚萃取三次，每次10ml，合并石油醚液，水浴60℃浓缩至5ml，滤过，滤液作为供试品溶液；另取麝香草酚对照品，加石油醚制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯为展开剂，展开，展距15cm以上，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取本品10ml，沸水浴蒸馏3小时，收集蒸馏液5ml，加5ml纯化水稀释，用石油醚萃取二次，每次10ml，合并石油醚液，水浴60℃浓缩至1ml，滤过，滤液作为供试品溶液；另取艾叶对照药材2g，加纯化水40ml，沸水浴蒸馏3小时，收集蒸馏液10ml，用石油醚萃取二次，每次10ml，合并石油醚液，水浴60℃浓缩至1ml，滤过，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲苯-丙酮的比例为10∶8∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

【检查】pH值应为4.0～6.0；

乙醇含量应为30％～40％；

其它应符合“中华人民共和国兽药典2005版”附录6页酊剂项下有关的各项规定；

【含量测定】照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05％磷酸二氢钾溶液为流动相，比例为50∶50，其中每100ml加十二烷基硫酸钠2.0g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为345nm；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取在100℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液的制备：精密量取本品2ml，过中性氧化铝柱，用20ml的50％甲醇洗脱，收集洗脱液移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，用微孔滤膜过滤，取续滤液2ml移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明中，每1ml香连消毒液含黄连以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₈ClNO₄)计，不得少于1.5mg。

通过本发明，我们验证了香连消毒液作为一种绿色环保型消毒液，其独特的消毒机理，对各种常见病原体如细菌、真菌和病毒具有显著的杀灭和抑制作用。

本发明具有工艺简单，成本低廉，使用安全，质量稳定，消毒效果显著等优点。

附图说明

附图1为以苦参碱为对照的香连消毒液薄层色谱图

附图2为以丹皮酚为对照的香连消毒液薄层色谱图

附图3为以麝香草酚为对照的香连消毒液薄层色谱图

附图4为以艾叶药材为对照的香连消毒液薄层色谱图

附图5为盐酸小檗碱标准品的液相色谱图

附图6为香连消毒液供试品的液相色谱图

附图7为香连消毒液供试品阴性样品的液相色谱图

具体实施例：

实施例1：本发明香连消毒液的制备

称取黄连50g、苦参30g、徐长卿20g，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入900ml的水，加热煮沸1.5小时，放出提取液于贮罐中，再加入720ml的水，加热煮沸1.0小时，放出提取液，并将二次提取液合并，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.20(80℃测)，冷至40℃时缓慢加入乙醇，使含醇量达60％，充分搅拌，静置12小时后，取上清液备用；再取香薷80g、艾叶30g，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入720ml的水，加热煮沸3.0小时，收集挥发油，将收集的挥发油与适量酒精和吐温-80混合后，加入到上清液中，搅拌均匀后，滤过，加水定容至1000ml，搅匀，即得香连消毒液1。

选取黄连20g、苦参40g、徐长卿40g，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入700ml的水，加热煮沸1.5小时，放出提取液于贮罐中，再加入560ml的水，加热煮沸1.0小时，放出提取液，并将二次提取液合并，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.22(75℃测)，冷至40℃时缓慢加入乙醇，使含醇量达50％，充分搅拌，静置12小时后，取上清液备用；再取香薷20g、艾叶20g、丁香20g、薄荷40g、柠檬草30g，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入1300ml的水，加热煮沸3.0小时，收集挥发油，将收集的挥发油与适量酒精和吐温-80混合后，加入到上清液中，搅拌均匀后，滤过，加水定容至900ml，搅匀，即得香连消毒液2。

选取黄连25g、苦参30g、徐长卿25g，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入900ml的水，加热煮沸1.5小时，放出提取液于贮罐中，再加入720ml的水，加热煮沸1.0小时，放出提取液，并将二次提取液合并，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.25(70℃测)，冷至40℃时缓慢加入乙醇，使含醇量达55％，充分搅拌，静置12小时后，取上清液备用；再取香薷20g、艾叶20g，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入320ml的水，加热煮沸3.0小时，收集挥发油，再依次加入丁香酚6g、薄荷油3g、柠檬草油3g，将上述挥发油与适量酒精和吐温-80混合后，加入到上清液中，搅拌均匀后，滤过，加水定容至1000ml，搅匀，即得香连消毒液3。

选取黄15g、苦参25g、徐长卿20g，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入1000ml的水，加热煮沸1.5小时，放出提取液于贮罐中，再加入800ml的水，加热煮沸1.0小时，放出提取液，并将二次提取液合并，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.24(70℃测)，冷至40℃时缓慢加入乙醇，使含醇量达60％，充分搅拌，静置12小时后，取上清液备用；再取丁香20g、薄荷30g、柠檬草20g，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入810ml的水，加热煮沸3.0小时，收集挥发油，再依次加入香薷油1.5g、艾叶油1.5g，将上述挥发油与适量酒精和吐温-80混合后，加入到上清液中，搅拌均匀后，滤过，加水定容至800ml，搅匀，即得香连消毒液4。

实施例2：本发明香连消毒液的质量标准研究

本发明香连消毒液是在数十种具有抑菌或杀菌作用的中药中，运用现代科学的组方和提供工艺的筛选方法，得到对多种病原微生物均具有抑制或杀灭作用的香连消毒液。其主要由黄连、苦参、徐长卿、香薷、艾叶、丁香、薄荷等组成，为了在实际生产中能有效的控制香连消毒液的质量及有效性，特对香连消毒液进行质量标准的制定。

1仪器与试药

1.1仪器

美国Waters-1525型高效液相色谱仪；2487-DAD紫外检测器；Breeze色谱工作站；色谱柱：ZORBAX SB-C18柱(4.6×250mm，5μm)

1.2试剂

盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所)；磷酸二氢钾(分析纯)；磷酸(分析纯)；乙腈(色谱纯)；流动相用水为双蒸水；其余试剂为分析纯。

2试验方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18柱(4.6×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05％磷酸二氢钾溶液(50∶50)，(其中每100ml加十二烷基硫酸钠2.0g，再以磷酸调节pH值为4.0)；检测波长：345nm；柱温：25℃；流速：0.8ml/min。

2.2供试品溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备

精密称取在105℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品13.04mg，用甲醇定容至25ml的量瓶中，摇匀，即得。

2.2.2供试品溶液的制备

取本品2ml，过中性氧化铝柱(100～200目，5g)，用20ml的50％甲醇洗脱，收集洗脱液后，用微孔滤膜过滤，取续滤液2ml至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.2.3供试品阴性对照溶液的制备

去掉处方中的黄连后，按照生产工艺制备得到香连消毒液的阴性对照溶液，按“2.2.2”项的方法制备得到阴性对照液。

2.3线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置25ml的量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，配制成20.864、41.728、62.592、83.456、104.32μg/ml的系列浓度，在选定的色谱条件下，进样20μl，以进样浓度与峰面积进行线性回归，得回归方程y＝98545x+154730，r＝0.9999，线性范围20.864～104.32μg/ml。

2.4精密度试验

精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液20μl，按上述色谱条件重复进样6次，根据峰面积值，得平均峰面积为10410129，RSD＝0.09％。

2.5重现性试验

取本发明同一批次香连消毒液6瓶，分别按照上述样品溶液的制备方法进行制备，并在上述色谱条件下测定峰面积，根据峰面积值得出样品中含量，得平均含量为1.897mg/ml，RSD＝0.19％。

2.6加样回收率试验

分别取已知含量的本发明香连消毒液6份，每份1.0ml，分别加入盐酸小檗碱对照品，按上述样品制备方法和色谱条件测定峰面积，盐酸小檗碱的平均回收率为95.6％，RSD＝1.24％(n＝6)，见表1。

表1  回收率测定结果(n＝6)

2.7样品测定

分别取本发明不同的香连消毒液，精密吸取，按上述样品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积，每一样品进样3次。结果见表2。

表2  香连消毒液含量测定结果(n＝4)

3讨论

黄连在香连消毒液中是主要成分，其所含的小檗碱在体外具有很好的抗菌、抗病毒作用，因此我们选用黄连中的小檗碱成分作为香连消毒液的含量测定指标。

4结论

采用HPLC测定香连消毒液中盐酸小檗碱的含量，方法简便、快速、准确，经加样回收实验及精密度实验，认为结果可靠。结果分析香连消毒液中盐酸小檗碱含量不低于1.5mg/ml，同时这个方法符合国家中药新药研究指南的要求。

实施例3：本发明香连消毒液的稳定性考察

目的：以香连消毒液的性状、pH值、含量、杀菌效能的变化为检测指标，对本发明香连消毒液的稳定性进行了考察，为临床使用提供了科学依据。

1仪器与药品

1.1仪器

美国Waters-1525型高效液相色谱仪；2487-DAD紫外检测器；色谱柱：ZORBAX SB-C18柱(4.6×250mm，5μm)；雷磁PHS-25型数显pH计(上海精密科学仪器有限公司)，恒温培养箱。

1.2试剂

盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所)；磷酸二氢钾(分析纯)；磷酸(分析纯)；乙腈(色谱纯)；流动相用水为双蒸水；本发明香连消毒液1、2、3、4由北京生泰尔生物科技有限公司提供。

1.3菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；蜡样芽孢杆菌，购自中国兽医药品监察所。

2试验方法

2.1加速试验

将本发明香连消毒液1、2、3、4密封、经37℃、相对湿度为75％，恒温放置0、1、2、3、个月后，按照《消毒剂鉴定技术规范》中，消毒剂稳定性重点考察项目表中确定的项目进行考察，并且与0月数据进行比较。

2.2抑菌试验

2.2.1供试菌液的制备

将传代培养后的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的菌液进行活菌计数，用0.03M的磷酸盐缓冲液稀释成含菌10⁵～10⁶cfu/ml的供试菌液。

2.2.2试验操作程序

分别吸取0.5ml供试菌液于4.5ml加速试验后的香连消毒液内，置20℃水浴中作用3分钟，立即吸取上述菌药混合液1ml，加入9ml中和剂中混匀。以0.03M磷酸盐缓冲液代替香连消毒液，同时进行上述各步骤，作为对照组。中和10分钟后进行活菌计数，计算杀菌率。

3实验结果

3.1香连消毒液加速试验结果

香连消毒液在37℃、相对湿度为75％的条件下放置三个月，其性状、pH值无明显变化，香连消毒液含量变化差异不显著，结果见表3。

表3  加速试验结果

3.2香连消毒液抑菌试验结果

香连消毒液在37℃、相对湿度为75％的条件下放置三个月，其原液体外作用3min对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的杀菌率均为100％，结果见表4。

表4  抑菌试验结果

4结论

本发明香连消毒液在37℃、相对湿度为75％的环境中放置90天后，其性状、pH值和含量变化不显著。体外对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的杀菌效能未发生明显的变化，根据《消毒剂鉴定技术规范》中有关消毒液的稳定性试验要求，可以得出香连消毒液在常温情况下的保质期为二年。

实施例4  本发明香连消毒液的毒理学试验

1、急性经口毒性试验：

试验采用经口灌服香连消毒液，以12000mg/kg体重的剂量给予小鼠一次性经口灌服香连消毒液，观察一周，未见小鼠有急性中毒症状及死亡现象，LD₅₀＞5000mg/kg，属实际无毒级。

2、急性皮肤刺激试验：

试验采用香连消毒液原液作家兔皮肤刺激试验，未出现红斑和水肿，刺激指数均值为1，按皮肤刺激强度评价最高分值在0～0.4之间，属无刺激性。

3、急性眼睛刺激试验：

试验采用香连消毒液原液作家兔眼睛刺激试验，未出现结膜充血和水肿，刺激指数均值为0，按眼睛刺激反应分级标准判定，属无刺激性。

实施例5  本发明香连消毒液的实验室微生物杀灭效果

1、试验器材：

(1)菌种：金黄色葡萄球菌ATC6538、大肠杆菌8099、链球菌C55100、白色念珠菌ATCC10231；

(2)药液：香连消毒液；

(3)中和剂：0.5％硫代硫酸钠+0.5％卵磷脂+3％吐温-80的1/15MPBS溶液。

2、供试菌液的制备：

将上述金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌，经过适当的方法培养后，进行活菌计数，用0.03M的磷酸盐缓冲液稀释成含菌10⁵～10⁶个/ml的供试菌液。

3、试验操作程序：

分别吸取0.5ml上述供试菌悬液加入到4.5ml不同浓度的香连消毒液内，置20℃水浴中作用至各预订时间，立即吸取上述菌药混合液0.5ml，加入4.5ml中和剂中混匀，以0.03M磷酸盐缓冲液代替香连消毒液，同时进行上述各步骤，作为对照组，中和10分钟后进行活菌计数，试验重复3次，计算杀菌率。

4、试验结果

(1)对金黄色葡萄球菌的杀菌效果

在20℃±1℃条件下，经三次重复试验证明，浓度为100％、50％、10％的香连消毒液，作用5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、60分钟对金黄色葡萄球菌平均杀灭率见(表5)。

表5  香连消毒液对金黄色葡萄球菌的杀灭效果

注：阳性对照组平均菌落数及范围为6.58×10⁵(4.21×10⁵～8.53×10⁵)cfu/ml，阴性对照组为无菌生长。

(2)对大肠杆菌的杀菌效果

在20℃±1℃条件下，经三次重复试验证明，浓度为100％、50％、10％的香连消毒液，作用5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、60分钟对大肠杆菌平均杀灭率见(表6)。

表6  香连消毒液对大肠杆菌的杀灭效果

注：阳性对照组平均菌落数及范围为8.57×10⁵(6.85×10⁵～9.86×10⁵)cfu/ml，阴性对照组为无菌生长。

(3)对链球菌的杀菌效果

在20℃±1℃条件下，经三次重复试验证明，浓度为100％、50％、10％的香连消毒液，作用5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、60分钟对链球菌平均杀灭率见(表7)。

表7  香连消毒液对链球菌的杀灭效果

注：阳性对照组平均菌落数及范围为8.36×10⁵(7.69×10⁵～9.86×10⁵)cfu/ml，阴性对照组为无菌生长。

(4)对白色念珠菌的杀菌效果

在20℃±1℃条件下，经三次重复试验证明，浓度为100％、50％、10％的香连消毒液，作用5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、60分钟对白色念珠菌平均杀灭率见(表8)。

表8  香连消毒液对白色念珠菌的杀灭效果

注：阳性对照组平均菌落数及范围为5.74×10⁵(4.69×10⁵～6.87×10⁵)cfu/ml，阴性对照组为无菌生长。

综上所述，香连消毒液在对细菌繁殖体、真菌均具有较好的体外杀灭作用。

实施例6  本发明香连消毒液对鸡新城疫病毒的杀灭效果

1、试验器材：

(1)毒种：鸡新城疫病毒(NDV)LaSota株，EID₅₀为10^-9.375/ml，购自中国兽医药品监察所；

(2)药液：香连消毒液，聚维酮碘溶液；

(3)SPF鸡胚，购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。

2、抗NDV效果的评价：

将2×10⁵EID₅₀的NDV分别与1∶5、1∶10、1∶20浓度的香连消毒液和聚维酮碘溶液等体积混合，同时将2×10⁵EID₅₀的NDV与等体积的生理盐水混合，作为病毒对照组，置室温(20～25℃)下作用1h后，各组用生理盐水连续10倍递增稀释，取10^-1～10^-7，每组各稀释度接种5枚9日龄SPF鸡胚，每胚接种0.1ml，37℃培养，弃去24h内死亡胚，以后每隔8h照蛋一次，共观察7d，以生理盐水作对照组。每次观察都要记录每枚鸡胚死亡的时间。按Reed-Muench法计算病毒的滴度。

3、试验结果：

SPF鸡胚在接种NDV后，一般在3～4天出现死亡，表现为鸡胚全身充血，头和翅等处出血，尿囊液清朗。将NDV与不同消毒剂混合后，1∶10浓度的香连消毒液和聚维酮碘溶液可以100％的杀灭NDV，使鸡胚正常生长，1∶20浓度的香连消毒液和聚维酮碘溶液可以达到99.9％的杀灭NDV，对鸡胚的生长达到很好的保护作用。具体情况见表9，

表10。

表9  SPF鸡胚接种消毒剂与NDV作用产物的死亡情况

表10  香连消毒液抗NDV效能的结果

4结论

从消毒液抗病毒效果的测定结果可以看出，二种消毒液在1∶20和1∶40的浓度时，可以对IBRV起到很好的杀灭或抑制作用，能够对MDBK细胞的生长达到很好的保护作用，在1∶10～1∶40的浓度时，可以对NDV起到很好的杀灭或抑制作用，能够对SPF鸡胚的生长达到很好的保护作用。

Claims (6)

1.一种香连消毒液，其特征是原料药及其质量分数分别为：

2.根据权利要求1所述香连消毒液，其特征在于制备方法为：

选取黄连、苦参、徐长卿，按照质量分数进行配料，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入物料质量8～10倍的水，煎煮二次，每次1.0～1.5小时，放出提取液，并将二次提取液合并，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.30，70～80℃测，冷至室温时缓慢加入乙醇，使含醇量达40％～70％，充分搅拌，静置12小时后，取上清液备用；再取香薷、艾叶、丁香、薄荷、柠檬草，按照质量分数进行配料，质量分数为0％时即不取该原料药，混合均匀后装入中药提取罐中，向罐中加入物料质量6～10倍的水，加热煮沸3.0小时，收集挥发油，将收集的挥发油与适量的酒精和吐温-80混合后，加入到上清液中，搅拌均匀后，加水定容至物料质量4～8倍的体积，搅匀，滤过，即得香连消毒液。

3.根据权利要求1所述的香连消毒液，其特征在于处方中的丁香、薄荷、香薷、柠檬草、艾叶以丁香酚、薄荷油、香薷油、柠檬草油、艾叶油替代。

4.根据权利要求1所述的香连消毒液，其特征在于质量检测方法为：

【性状】香连消毒液为黄棕色至红棕色澄清液体，气味清香；

【鉴别】(1)取香连消毒液10ml，水浴浓缩至5ml，置分液漏斗中，加浓氨试液调节pH值至11，用石油醚萃取二次，每次5ml，取水层，用三氯甲烷振摇提取三次，每次5ml，合并三氯甲烷液，水浴浓缩至1ml，滤过，滤液作为供试品溶液；另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用2％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲醇的比例为8∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色斑点；

(2)取香连消毒液20ml，加20ml纯化水稀释，沸水浴蒸馏3小时，收集蒸馏液20ml，加20ml纯化水稀释，用三氯甲烷萃取三次，每次20ml，合并三氯甲烷液后，水浴60℃蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯的比例为3∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％的三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点；

(3)取香连消毒液10ml，沸水浴蒸馏3小时，收集蒸馏液5ml，加5ml纯化水稀释，用石油醚萃取三次，每次10ml，合并石油醚液，水浴60℃浓缩至5ml，滤过，滤液作为供试品溶液；另取麝香草酚对照品，加石油醚制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯为展开剂，展开，展距15cm以上，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取香连消毒液10ml，沸水浴蒸馏3小时，收集蒸馏液5ml，加5ml纯化水稀释，用石油醚萃取二次，每次10ml，合并石油醚液，水浴60℃浓缩至1ml，滤过，滤液作为供试品溶液；另取艾叶对照药材2g，加纯化水40ml，沸水浴蒸馏3小时，收集蒸馏液10ml，用石油醚萃取二次，每次10ml，合并石油醚液，水浴60℃浓缩至1ml，滤过，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲苯-丙酮的比例为10∶8∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

【检查】pH值应为4.0～6.0；

乙醇含量应为30％～40％；

其它应符合“中华人民共和国兽药典2005版”附录6页酊剂项下有关的各项规定；

【含量测定】照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05％磷酸二氢钾溶液为流动相，比例为50∶50，其中每100ml加十二烷基硫酸钠2.0g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为345nm；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取在100℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液的制备：精密量取香连消毒液2ml，过中性氧化铝柱，用20ml的50％甲醇洗脱，收集洗脱液移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，用微孔滤膜过滤，取续滤液2ml移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

香连消毒液每1ml含黄连以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₈ClNO₄)计，不得少于1.5mg。

5.根据权利要求1～4任一述香连消毒液，其特征在于以香连消毒液为原料制备成口服液、注射剂、喷雾剂。

6.根据权利要求5所述香连消毒液，其特征在于对细菌、真菌、病毒有很好的杀灭作用。

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