CN102154509A - 用于检测clcn1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物 - Google Patents
用于检测clcn1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102154509A CN102154509A CN2011101293345A CN201110129334A CN102154509A CN 102154509 A CN102154509 A CN 102154509A CN 2011101293345 A CN2011101293345 A CN 2011101293345A CN 201110129334 A CN201110129334 A CN 201110129334A CN 102154509 A CN102154509 A CN 102154509A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- clcn1
- order
- primer
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及用于检测CLCN1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物。具体而言，本发明涉及用于检测CLCN1基因的编码区及内含子剪切位点突变的方法、试剂盒及特异性引物。
Description
技术领域
本发明涉及用于检测CLCN1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物。具体而言，本发明涉及用于检测CLCN1基因的编码区及内含子剪切位点突变的方法、试剂盒及特异性引物。
背景技术
真核生物基因由编码蛋白质的外显子(exon)和不编码蛋白质的间插序列内含子(intron)组成。外显子是真核生物基因的一部分，它在剪接后仍会被保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被表达为蛋白质。外显子是最后出现在成熟RNA中的基因序列，又称表达序列，是既存在于最初的转录产物中，也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。
通过PCR方法对基因组DNA进行扩增，将得到的目的片段进行测序，并与正常序列进行对比，可以获得基因突变的信息。在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。Sanger于1977年建立了双脱氧核糖核酸链末端终止法测序。Sanger高通量测序可以半小时完成96个样本的测序，随着测序成本的降低，这种方法越来越适合做大规模检测，既省时又高效。
氯离子通道基因CLCN1(Chloride Channel 1)的核苷酸序列是已知的(Genbank Accession No.NG_009815.1)。根据HGMD等数据库提供的信息，CLCN1的突变主要分布在外显子及剪切位点侧翼区，包括100余个点突变。详细目录见表1。
表1CLCN1突变位点
| 1097_1098delTG | 1183_1187del5 | 1278_1281delTTTG | 1437_1450del14 | 2264delC |
| 2329delG | 2518_2519delCT | 1259_1260insC | 2513_2514insCTCA | 599_600insG |
| 830_831insG | 898_899delinsTA | IVS1+3A-T | IVS13+1G-A | IVS17+1G-T |
| IVS18+5C-T | IVS19+2T-A | IVS22-1G-A | IVS5+1G-A | IVS5+2T-A |
| IVS8+1G-A | R338Q | R377X | T398I | A402V |
| P408A | Q412P | F413C | A415V | I424M |
| F428S | Q445X | S471F | P480T | P480H |
| P480L | C481X | G482R | M485V | R496S |
| G499R | A531V | T550M | I556N | V563I |
| A566T | P575S | T631I | Q658X | A659V |
| E67X | R669C | Q68X | F708L | E717X |
| K752R | Q74X | Q807X | G859D | P883T |
| R894X | P932L | R105C | M128V | S132C |
| D136G | Y150C | F161V | V165G | F167L |
| E193K | L198V | G200R | A218T | G230E |
| V236L | C242X | Y261C | T268M | C271R |
| G276D | L283F | V286A | F288S | S289N |
| E291K | V299L | R300Q | W303R | F306L |
| F307S | T310M | A313T | A313V | R317X |
| R317Q | R317L | A320V | V321L | I329T |
| A331T | D644G | D265L | 2655_2656insC |
以往对CLCN1的测序是鉴别式的测序理念，其只是针对已知的一种热点突变进行检测。目前为止，本领域尚未有关于利用多个特异性引物对同时测定CLCN1基因的多个突变的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于对CLCN1基因全部编码区及剪切突变密集的内含子区进行定点扩增，从而清晰、准确地将基因中存在的突变位点检测出来。
在一个方面，本发明提供了一种检测CLCN1基因的全部编码区及内含子剪切位点突变的方法，其包括以下步骤：
(1)使用特异性扩增引物对通过PCR扩增待测样本的CLCN1基因，从而获得PCR扩增产物；
(2)采用所述特异性扩增引物对中的正向引物将步骤(1)中的扩增产物进行测序扩增，从而获得测序扩增产物；
(3)对步骤(2)中获得的测序扩增产物进行测序，并将测序峰图与数据库中的正常CLCN1基因序列进行对比，从而确定基因的突变位点。
在一个实施方式中，步骤(1)所述扩增引物针对的是CLCN1基因的全部外显子及内含子剪切位点；优选所述扩增引物根据NCBI等数据库中正常CLCN1基因进行设计，分别在突变位点的5’端上游和3’端下游，根据碱基互补配对原则设计正反向引物，优选引物长度为15～30BP，所述引物对在基因序列的保守区域内具有特异性。
在一个具体的实施方式中，上述步骤(1)所述PCR扩增引物的序列如表2所示。
表2.CLCN1基因PCR扩增引物
在本发明中，将CLCN1分成15段，然后为每一段分别设计一对引 物。例如CLCN1-P1-F是指针对第一段的正向引物，CLCN1-P1-R是指针对第一段的反向引物，依此类推。
在一些实施方式中，本发明的方法所使用的PCR扩增引物对的核苷酸序列包含SEQ ID NO：1和16、SEQ ID NO：2和17、SEQ ID NO：3和18、SEQ ID NO：4和19、SEQ ID NO：5和20、SEQ ID NO：6和21、SEQ ID NO：7和22、SEQ ID NO：8和23、SEQ ID NO：9和24、SEQ ID NO：10和25、SEQ ID NO：11和26、SEQ ID NO：12和27、SEQID NO：13和28、SEQ ID NO：14和29、SEQ ID NO：15和30中的一对或多对。
在本发明中，用于测序扩增的引物可以是第一步PCR扩增引物的一部分，也可以完全不同。在优选的实施方式中，测序扩增引物为PCR扩增引物对中的正向扩增引物。在一些实施方案中，本发明的方法所使用的测序扩增引物的核苷酸序列包含SEQ ID NO：1-15中的一个或多个。
在一个优选实施方案中，样品选自血样，优选的来自哺乳动物，特别是人。
优选采用第一代测序技术，如SANGER测序(3730测序仪)，或第二代测序技术，如Illumina GA、Illumina Hiseq 2000。
在优选的实施方式中，在本发明方法的步骤(1)和步骤(2)之间包括纯化PCR扩增产物的步骤，优选采用的纯化方法为凝胶电泳和millipore纯化板进行纯化。在另一个优选的实施方式中，在步骤(2)和步骤(3)之间还包括纯化所述测序扩增产物的步骤，优选采用的纯化方法为EDTA和无水乙醇进行纯化。本领域技术人员可以理解，不进行PCR扩增产物的纯化仍可以实现本发明的目的，但纯化步骤可以去除RNA、盐离子等杂质，提高扩增片段纯度。并且测序扩增产物的纯化也不是实现本发明所必须，但纯化测序扩增产物可以有利于测序反应的精确度。
在另一个方面，本发明提供了一种用于检测CLCN1基因突变位点的试剂盒，其包含用于PCR扩增的特异性引物。在具体的实施方案中，所述特异性引物的核苷酸序列为SEQ ID NO：1和16、SEQ ID NO：2和17、SEQ ID NO：3和18、SEQ ID NO：4和19、SEQ ID NO：5和20、SEQ ID NO：6和21、SEQ ID NO：7和22、SEQ ID NO：8和23、SEQ IDNO：9和24、SEQ ID NO：10和25、SEQ ID NO：11和26、SEQ ID NO：12和27、SEQ ID NO：13和28、SEQ ID NO：14和29、SEQ ID NO：15和30中的一对或多对。在一些实施方案中，本发明的试剂盒还包含用于测序扩增的引物，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1-15中的一个或多个。
在一些实施方案中，本发明试剂盒还包括用于PCR扩增反应的酶和试剂，和/或用于测序扩增反应的酶和试剂。在一个实施方式中，所述的试剂盒还包括用于提取血液DNA的试剂。在另一个方面，本发明还提供了上述试剂盒用于检测CLCN1基因突变的用途。
在另一个方面，本发明涉及上述的PCR扩增引物对和/或测序扩增引物用于检测CLCN1基因突变位点的用途。在一些实施方案中，本发明涉及上述的PCR扩增引物对和/或测序扩增引物用于制备试剂盒的用途，所述试剂盒用于检测CLCN1基因突变位点。
相对于现有技术中的方案，本发明的有益效果在于：克服了现有技术中仅对热点突变检测的片面性，通过普通PCR方法即可对CLCN1基因的全部外显子进行捕获，一次性将多个潜在突变位点检测出来。
附图说明
图1显示了CLCN1的part 1-part15扩增后的电泳图，根据marker(DL2000，KaTara公司)的比对，可以确定15条带的大小，其中泳道1-15分别是197-910bp的片段。
阳性对照(P)是以健康人基因为模板对第15对引物进行的特异性扩增；阴性对照(N)是以水为模板对第15对引物进行的特异性扩增，但扩增无条带。
图2显示了2段外显子基因序列片段测序结果。图中上方为NCBI数据库中标准CLCN1基因，图中下方为检测的样本基因。图2A显示：在2655-2656位置有1个碱基C插入。图2B显示：在1616位置，C突变成T。
具体实施方式
以下结合说明书附图及具体实施例来对本发明进一步的描述。但本发明不限于此。凡根据本发明的精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
实施例1：特异性引物的设计
根据CLCN1外显子分布的特点设计扩增引物：
1)根据NCBI等数据库中CLCN1正常基因的参考序列，在突变位点的5’端上游和3’端下游，根据碱基互补配对原则设计15～30BP的引物。引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性；
2)产物不能形成二级结构、碱基要随机分布，引物自身不能有连续4个碱基的互补；
3)针对每个外显子两端各延伸40-50bp设计引物，包含内含子剪切位点(包含突变位点，可引起框移突变)。
4)所有PCR片段正反向引物退火温度相差不超过5℃，各产物退火温度在56-62℃之间，保证扩增的特异性和稳定性。
5)若两个外显子相隔较近则进行简并设计，所有PCR产物长度均不超过910bp，电泳结果显示条带唯一，没有杂带。
6)PCR扩增引物的正向扩增引物即为用于测序扩增的引物，长 度在20-30bp之间，正反两条引物之间不存在发夹结构。
本发明的特异性引物的序列如表2所示。
实施例2：样本DNA提取
本发明所用阳性样本，受试者来自山东，经过医院确诊为先天性肌强直，无家族史的散发病例，经知情同意，取得其血样。
使用QIAGEN公司的QIAamp DNA Blood MINI Kit试剂盒(Cat.No.51106)提取受试者的全血样本DNA。示例性的步骤如下：
(1)向1.5ml离心管中，加入20μl蛋白酶K；
(2)向离心管中加入200μl全血样本；
(3)向离心管中加入200μl缓冲液AL，漩涡振荡15S；
(4)56°水浴15分钟；
(5)适当离心，使所有液体降到离心管底；
(6)向离心管中加200μl无水乙醇，振荡15s混匀，适当离心，使所有液体降到离心管底；
(7)将上步所的液体小心的转移到纯化柱中，不要沾湿边缘。8000转离心1min，弃掉收集管，更换新的收集管；
(8)小心打开盖，加入500μl缓冲液AW1，不要沾湿边缘。8000转离心1min，弃掉收集管，更新收集管；
(9)小心打开盖，加入500μl缓冲液AW2，不要沾湿边缘。14000转离心3min；
(10)丢弃收集管，更新收集管，14000转离心1min；
(11)丢弃收集管，将纯化柱放入1.5ml离心管中，加入52μl缓冲液AE或是超纯水，室温下放置1min，8000转离心1min；
(12)再向纯化柱中加入52μl缓冲液AE或是超纯水，8000转离心1min。
根据以上步骤便可得出100μl DNA样本。
实施例3：PCR扩增
利用实施例1中设计的PCR扩增引物对扩增实施例2中提取的DNA样品，反应采用25μl体系，其中：酶及缓冲溶液均购自KATARA公司。
PCR条件为：
95℃预变性5min
94℃30sec→特异性退火温度30sec→72℃30sec(35个循环)
之后再延伸10min。
其中，各对引物的特异性退火温度如下：
实施例4：凝胶电泳检测
PCR之后进行凝胶电泳检测，检测所扩增出的片断是否是需要的目的片段大小。Marker使用5μl的DL2000DNA Marker，同时可以检测PCR产物的浓度。电泳采用2％的琼脂糖凝胶，130V电泳30min。每个PCR扩增产物的电泳结果如图1所示。
实施例5：利用millipore纯化板进行PCR产物的纯化
用记号笔在96孔PCR产物纯化板上标记需要使用的孔，并向需要使用的孔中加入50ul超纯水，剩余孔粘贴封口膜，室温静置15分钟或连接到抽滤系统上，以-10Pa抽滤5min。每次从抽滤系统上取下纯化板时都要在吸水纸上吸干残留在纯化板底部排液口的液体。
待纯化PCR产物离心，4000rpm×1min。在每个PCR反应体系中加入100ul超纯水。然后把加入待纯化PCR产物的纯化板连接到抽滤系统上，调节真空度至气压表显示-10±1Pa，抽滤至纯化板底部的微孔再生纤维膜上无残留液体为止，并在光照下观察为无完整液面反射光泽，通常10-15min。
向含有待纯化PCR产物的孔中加20～50ul超纯水或TE至微孔再生纤维膜上；在室温下，使用微量振荡器的中档速度振荡纯化板5min，转移相应孔内全部液体至一块新的96孔PCR板的对应孔上。
根据需要用超纯水回收已纯化的PCR产物，回收的体积根据纯化前PCR产物电泳鉴定情况决定，通常为20～50ul。
实施例6：使用测序扩增引物进行产物的扩增
使用本发明所设计的表2中引物的正向引物(F)将实施例5中纯化的PCR产物进行测序扩增。
所述测序扩增反应的条件是：
96℃2min
96℃10s→55℃5s→60℃2min(25个循环)
15℃∞
反应的体系为5ul，其组成如下表所示，其中Bigdye和缓冲溶液均购自美国应用生物系统公司(Applied Biosystems，ABI)：
| 试剂名称 | 用量 |
| 实施例5中的PCR产物 | 1ul |
| 表2中相对应的正向引物(F) | 1ul |
| ABI 2.5×Bigdye | 0.3ul |
| ABI 5×buffer | 0.85ul |
| ddH2O | 1.85ul |
实施例7：EDTA/无水乙醇纯化测序扩增产物
基本步骤：取下测序反应平板配平，离心3000g×1min。在96孔反应板的每5ul反应体系加0.125mol/L EDTA-Na2溶液2ul，85％乙醇33ul，盖上硅胶垫，充分振荡3min，在4℃离心3000×15min。将反应板置于避光通风处30min，风干至无乙醇气味。在96孔板的每孔中加10ul(384孔板每孔加8ul)HI-DI甲酰胺，盖上封口膜，振荡5s后1000±100rpm离心。
实施例8：在ABI 3730XL上进行外显子测序
使用ABI 3730测序仪对经过纯化的测序扩增产物进行测序。一个示例性的测序结果示于图2
将测序所得结果与NCBI数据库中公布的CLCN1基因标准序列进行比对；通过比对得出样品序列与标准序列的区别，找出突变位点的位置。
图2显示了2段外显子基因序列片段测序结果。图中上方为NCBI数据库中标准CLCN1基因，图中下方为检测的样本基因。图2A显示：在2655-2656位置有1个碱基C插入(2655_2656insC，Ser886GlnfsX26， 杂合子，exon 23)。图2B显示：在1616位置，C突变成T(1616C-T，T539I，杂合子，exon 15)。
对于本领域技术人员显而易见的是，在不背离本发明的范围和精神的前提下可对本发明进行各种修改和变动。本实施例仅为示例性用途，本发明的保护范围由权利要求书限定。
Claims (10)
1.一种检测CLCN1基因的编码区及内含子剪切位点突变的方法，其包括以下步骤：
(1)使用特异性扩增引物对通过PCR扩增待测样本的CLCN1基因，从而获得PCR扩增产物；
(2)采用所述特异性扩增引物对中的正向引物将步骤(1)中的扩增产物进行测序扩增，从而获得测序扩增产物；
(3)对步骤(2)中获得的测序扩增产物进行测序，并将测序峰图与数据库中的CLCN1基因参考序列进行对比，从而确定基因的突变位点。
2.权利要求1的方法，其中在步骤(1)和步骤(2)之间包括纯化PCR扩增产物的步骤，优选地，所述纯化方法为通过凝胶电泳和millipore纯化板进行纯化。
3.权利要求1的方法，其中在步骤(2)和步骤(3)之间还包括纯化所述测序扩增产物的步骤，优选地，所述纯化方法为通过EDTA和无水乙醇进行纯化。
4.权利要求1-3任一项的方法，其中在所述步骤(3)中测序方法为Sanger法或第二代测序法。
5.权利要求1-3任一项的方法，其中所述PCR扩增引物对的核苷酸序列是SEQ ID NO：1和16、SEQ ID NO：2和17、SEQ ID NO：3和18、SEQ ID NO：4和19、SEQ ID NO：5和20、SEQ ID NO：6和21、SEQ ID NO：7和22、SEQ ID NO：8和23、SEQ ID NO：9和24、SEQ IDNO：10和25、SEQ ID NO：11和26、SEQ ID NO：12和27、SEQ ID NO：13和28、SEQ ID NO：14和29、SEQ ID NO：15和30中的一对或多对，并且/或者所述测序扩增引物的核苷酸序列是SEQ ID NO：1-15中的一个或多个。
6.权利要求1-3任一项的方法，其中所述样品是血样，优选是分离自哺乳动物，特别是人的血样。
7.用于扩增CLCN1基因的特异性引物，其序列是SEQ ID NO：1-30中的任选一项。
8.权利要求7的特异性引物用于检测CLCN1基因突变位点的用途。
9.用于检测CLCN1基因突变位点的试剂盒，其包含用于扩增CLCN1基因的扩增引物，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1和16、SEQ IDNO：2和17、SEQ ID NO：3和18、SEQ ID NO：4和19、SEQ ID NO：5和20、SEQ ID NO：6和21、SEQ ID NO：7和22、SEQ ID NO：8和23、SEQ ID NO：9和24、SEQ ID NO：10和25、SEQ ID NO：11和26、SEQID NO：12和27、SEQ ID NO：13和28、SEQ ID NO：14和29、SEQ IDNO：15和30中的一对或多对；和/或用于测序扩增的引物，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1-15中的一个或多个，任选地，所述试剂盒还包括用于PCR扩增反应的酶和试剂，和/或用于测序扩增反应的酶和试剂，和/或用于提取血液DNA的试剂。
10.权利要求9的试剂盒用于检测CLCN1基因突变的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011101293345A CN102154509B (zh) | 2010-12-28 | 2011-05-19 | 用于检测clcn1 基因突变的试剂盒及特异性引物 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010610057.5 | 2010-12-28 | ||
| CN201010610057 | 2010-12-28 | ||
| CN2011101293345A CN102154509B (zh) | 2010-12-28 | 2011-05-19 | 用于检测clcn1 基因突变的试剂盒及特异性引物 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310148494.3A Division CN103205503B (zh) | 2010-12-28 | 2011-05-19 | 用于检测clcn1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102154509A true CN102154509A (zh) | 2011-08-17 |
| CN102154509B CN102154509B (zh) | 2013-12-04 |
Family
ID=44436178
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2011101293345A Active CN102154509B (zh) | 2010-12-28 | 2011-05-19 | 用于检测clcn1 基因突变的试剂盒及特异性引物 |
| CN201310148494.3A Active CN103205503B (zh) | 2010-12-28 | 2011-05-19 | 用于检测clcn1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310148494.3A Active CN103205503B (zh) | 2010-12-28 | 2011-05-19 | 用于检测clcn1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (2) | CN102154509B (zh) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103509802A (zh) * | 2012-06-20 | 2014-01-15 | 深圳华大基因科技有限公司 | Slc25a13基因突变体及其应用 |
| CN103509801A (zh) * | 2012-06-20 | 2014-01-15 | 深圳华大基因科技有限公司 | 骨骼肌氯离子通道基因突变体及其应用 |
| CN103571846A (zh) * | 2012-07-18 | 2014-02-12 | 中国人民解放军总医院 | Atp6v1b2基因突变体及其应用 |
| CN103571847A (zh) * | 2012-07-26 | 2014-02-12 | 汕头大学·香港中文大学联合汕头国际眼科中心 | Foxc1基因突变体及其应用 |
| CN104073499A (zh) * | 2013-03-26 | 2014-10-01 | 中国人民解放军总医院 | Tmc1基因突变体及其应用 |
| CN104099338A (zh) * | 2013-04-03 | 2014-10-15 | 中国人民解放军总医院 | Myo15a基因突变体及其应用 |
| CN104120133A (zh) * | 2013-04-28 | 2014-10-29 | 中国人民解放军总医院 | 基因突变体及其应用 |
| CN104178486A (zh) * | 2013-05-20 | 2014-12-03 | 中南大学湘雅医院 | Sacs基因突变体及其应用 |
| CN104178487A (zh) * | 2013-05-20 | 2014-12-03 | 中南大学湘雅医院 | Atm基因突变体及其应用 |
| CN105802974A (zh) * | 2014-12-31 | 2016-07-27 | 深圳华大基因科技有限公司 | Bcs1l基因突变体及其应用 |
| CN107475259A (zh) * | 2017-08-24 | 2017-12-15 | 复旦大学附属中山医院 | 汉族人群家族性扩张型心肌病的筛查试剂盒 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107436350B (zh) * | 2017-07-31 | 2019-05-24 | 云南沃森生物技术股份有限公司 | 一种利用酶标板和单克隆抗体进行混合物中各成分的分离方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1339457A (zh) * | 2000-08-23 | 2002-03-13 | 上海博德基因开发有限公司 | 一种新的多肽——氯离子通道蛋白17.6和编码这种多肽的多核苷酸 |
| WO2004039979A1 (en) * | 2002-10-30 | 2004-05-13 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Uni Versität Bonn | Means and methods for diagnosing and treating idiopathic generalized epilepsy (ige) |
-
2011
- 2011-05-19 CN CN2011101293345A patent/CN102154509B/zh active Active
- 2011-05-19 CN CN201310148494.3A patent/CN103205503B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1339457A (zh) * | 2000-08-23 | 2002-03-13 | 上海博德基因开发有限公司 | 一种新的多肽——氯离子通道蛋白17.6和编码这种多肽的多核苷酸 |
| WO2004039979A1 (en) * | 2002-10-30 | 2004-05-13 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Uni Versität Bonn | Means and methods for diagnosing and treating idiopathic generalized epilepsy (ige) |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 《Neurogenetics》 19980331 Jesus Esteban et al. Identification of two mutations and a polymorphism in the chloride channel CLCN-1 in patients with Becker's generalized myotonia 185-188 7，9 第1卷, 第3期 * |
| CLAUDIUS LORENZ ET AL.: "genomic organization of the human muscle chloride channel CIC-1 and analysis of novel mutations leading to Becker-type myotonia", 《HUMAN MOLECULAR GENETICS》 * |
| DANIEL F. FINNIGAN ET AL.: "A Novel Mutation of the CLCN1 Gene Associated with Myotonia Hereditaria in an Australian Cattle Dog", 《JOURNAL OF VETERINARY INTERNAL MEDICINE》 * |
| JESUS ESTEBAN ET AL.: "Identification of two mutations and a polymorphism in the chloride channel CLCN-1 in patients with Becker’s generalized myotonia", 《NEUROGENETICS》 * |
| NÚRIA COMES ET AL.: "Differential expression of the human chloride channel genes in the trabecular meshwork under stress conditions", 《EXPERIMENTAL EYE RESEARCH》 * |
Cited By (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103509802A (zh) * | 2012-06-20 | 2014-01-15 | 深圳华大基因科技有限公司 | Slc25a13基因突变体及其应用 |
| CN103509801A (zh) * | 2012-06-20 | 2014-01-15 | 深圳华大基因科技有限公司 | 骨骼肌氯离子通道基因突变体及其应用 |
| CN103509801B (zh) * | 2012-06-20 | 2017-06-06 | 深圳华大基因股份有限公司 | 骨骼肌氯离子通道基因突变体及其应用 |
| CN103571846A (zh) * | 2012-07-18 | 2014-02-12 | 中国人民解放军总医院 | Atp6v1b2基因突变体及其应用 |
| CN103571847A (zh) * | 2012-07-26 | 2014-02-12 | 汕头大学·香港中文大学联合汕头国际眼科中心 | Foxc1基因突变体及其应用 |
| CN104073499A (zh) * | 2013-03-26 | 2014-10-01 | 中国人民解放军总医院 | Tmc1基因突变体及其应用 |
| CN104073499B (zh) * | 2013-03-26 | 2017-03-08 | 中国人民解放军总医院 | Tmc1基因突变体及其应用 |
| CN104099338B (zh) * | 2013-04-03 | 2017-03-08 | 中国人民解放军总医院 | Myo15a基因突变体及其应用 |
| CN104099338A (zh) * | 2013-04-03 | 2014-10-15 | 中国人民解放军总医院 | Myo15a基因突变体及其应用 |
| CN104120133A (zh) * | 2013-04-28 | 2014-10-29 | 中国人民解放军总医院 | 基因突变体及其应用 |
| CN104178487A (zh) * | 2013-05-20 | 2014-12-03 | 中南大学湘雅医院 | Atm基因突变体及其应用 |
| CN104178486A (zh) * | 2013-05-20 | 2014-12-03 | 中南大学湘雅医院 | Sacs基因突变体及其应用 |
| CN106701709A (zh) * | 2013-05-20 | 2017-05-24 | 中南大学湘雅医院 | Atm基因突变体及其应用 |
| CN104178487B (zh) * | 2013-05-20 | 2017-09-19 | 中南大学湘雅医院 | Atm基因突变体及其应用 |
| CN104178486B (zh) * | 2013-05-20 | 2017-12-15 | 中南大学湘雅医院 | Sacs基因突变体及其应用 |
| CN106701709B (zh) * | 2013-05-20 | 2020-02-07 | 中南大学湘雅医院 | Atm基因突变体及其应用 |
| CN105802974A (zh) * | 2014-12-31 | 2016-07-27 | 深圳华大基因科技有限公司 | Bcs1l基因突变体及其应用 |
| CN105802974B (zh) * | 2014-12-31 | 2020-03-24 | 深圳华大基因科技有限公司 | Bcs1l基因突变体及其应用 |
| CN107475259A (zh) * | 2017-08-24 | 2017-12-15 | 复旦大学附属中山医院 | 汉族人群家族性扩张型心肌病的筛查试剂盒 |
| CN107475259B (zh) * | 2017-08-24 | 2020-08-11 | 复旦大学附属中山医院 | 汉族人群家族性扩张型心肌病的筛查试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102154509B (zh) | 2013-12-04 |
| CN103205503A (zh) | 2013-07-17 |
| CN103205503B (zh) | 2014-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102154509B (zh) | 用于检测clcn1 基因突变的试剂盒及特异性引物 | |
| ES2385867T3 (es) | Método y kit para cuantificación molecular de cromosomas | |
| CN101654691B (zh) | Hla基因扩增和基因分型方法及其相关引物 | |
| EP3828291A1 (en) | Methylation modification-based tumor marker stamp-ep1 | |
| EP3904515A1 (en) | Tumor marker stamp-ep3 based on methylation modification | |
| CN104328182A (zh) | 一种用于检测pdgfra基因热点突变的引物、探针、锁核苷酸探针、试剂盒及检测方法 | |
| CN104131072A (zh) | 一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的方法和系统 | |
| CN103205420A (zh) | 用于扩增T细胞受体β链CDR3编码序列的引物组合物及其用途 | |
| CN104450914A (zh) | 用于检测人hla-b*1502基因的引物、探针、荧光pcr试剂盒和方法 | |
| CN110923314A (zh) | 一组检测SNP位点rs9263726的引物、crRNA序列及其应用 | |
| US9637788B2 (en) | Discrimination of blood type variants | |
| CN102660635A (zh) | 一种定性检测hla-b*1502基因亚型的荧光pcr试剂盒 | |
| CN114574595B (zh) | 人染色体InDel基因座的应用、引物组及其产品、检材的个体识别方法 | |
| WO2013130857A1 (en) | Defining diagnostic and therapeutic targets of conserved fetal dna in maternal circulating blood | |
| CN107937487B (zh) | 一种用于hla-a基因pcr扩增、基因分型的方法、引物组及试剂盒 | |
| WO2017221040A2 (en) | Genetic diagnostics of intellectual disability disorder, autism spectrum disorder and epilepsy | |
| WO2014140788A1 (en) | Methods for the detection of sequence amplification in the brca1 locus | |
| CN103013993A (zh) | 引物及该引物质谱检测pik3ca基因热点突变的方法 | |
| CN105506090A (zh) | 一种检测adh1b基因*2多态性的引物与方法 | |
| CN105886497A (zh) | 多态性短串联重复基因座等位基因梯、其制备方法、鉴定及应用 | |
| US11021756B2 (en) | MiRNA markers for the diagnosis of osteosarcoma | |
| US20190078136A1 (en) | Multiplex Detection of Short Nucleic Acids | |
| CN116656828A (zh) | 基因ERBB2位点g.39711928A>G突变在制备乳腺癌早期筛查试剂盒中应用 | |
| CN103509854B (zh) | Pcr酶切分型快速鉴定土壤和环境水中军团菌的方法 | |
| CN102747166A (zh) | 肺炎支原体耐药菌株的pcr-snp检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: SHENZHEN BEIJING GENOMICS INSTITUTE HEALTH TECHNOL Free format text: FORMER OWNER: BGI-SHENZHEN CO., LTD. Effective date: 20131010 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20131010 Address after: Yantian District of Shenzhen City, Guangdong province 518083 North Road No. 146 North Industrial Zone 11, floor 3, 2 Applicant after: BGI HEALTH SERVICE Co.,Ltd. Address before: North Road No. 146, building 11F-3 Industrial Zone in Yantian District of Shenzhen city of Guangdong Province in 518083 Applicant before: BGI SHENZHEN Co.,Ltd. |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: SHENZHEN BGI MEDICINE CO., LTD. Free format text: FORMER NAME: SHENZHEN BEIJING GENOMICS INSTITUTE HEALTH TECHNOLOGY CO., LTD. Owner name: SHENZHEN BGI CORPORATION Free format text: FORMER NAME: SHENZHEN BGI MEDICINE CO., LTD. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: Yantian District of Shenzhen City, Guangdong province 518083 North Road No. 146 North Industrial Zone 11, floor 3, 2 Patentee after: BGI SHENZHEN Co.,Ltd. Address before: Yantian District of Shenzhen City, Guangdong province 518083 North Road No. 146 North Industrial Zone 11, floor 3, 2 Patentee before: BGI DIAGNOSIS Co.,Ltd. Address after: Yantian District of Shenzhen City, Guangdong province 518083 North Road No. 146 North Industrial Zone 11, floor 3, 2 Patentee after: BGI DIAGNOSIS Co.,Ltd. Address before: Yantian District of Shenzhen City, Guangdong province 518083 North Road No. 146 North Industrial Zone 11, floor 3, 2 Patentee before: BGI HEALTH SERVICE Co.,Ltd. |