发明内容
本发明要解决的技术问题在于,针对现有技术的上述缺陷,提供一种成本低廉、工艺简单、生产周期短、产品收率高、反应条件温和的头孢地尼的制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:一种头孢地尼的制备方法,包括以下步骤:
步骤S1:在有机溶媒和水形成的混合体系中加入7-氨基-3-乙烯基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸(简称为7-AVCA)与头孢地尼活性 酯(乙酰氧亚胺基)(CAS NO.:104797-47-9),并加入有机碱使7-AVCA与头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基)反应合成头孢地尼酯,然后用有机溶媒萃取洗涤,在水相中加入活性炭脱色后洗涤,真空蒸馏得到头孢地尼酯的水溶液。
步骤S2:在头孢地尼酯的水溶液中加入固定化羧酸酯水解酶,使头孢地尼酯水解,过滤,调节滤液pH值为3.0~7.0,加入活性炭脱色,然后加入结晶用有机溶剂,并调节pH值为1.0~3.0,结晶,干燥得到头孢地尼。
在本发明所述的头孢地尼的制备方法中,优选地,所述结晶用有机溶剂与加入所述结晶用有机溶剂前的反应体系的体积比为1∶1~1∶10。
在本发明所述的头孢地尼的制备方法中,优选地,所述7-AVCA与水的体积比为1∶2~1∶20,所述7-AVCA与有机溶媒的体积比为1∶2~1∶20。
在本发明所述的头孢地尼的制备方法中,优选地,所述有机碱为三乙胺、三正丁胺、三丙胺、叔丙胺、1,2-二甲基丙胺、己二胺或吡啶。
在本发明所述的头孢地尼的制备方法中,优选地,所述有机溶媒为二氯甲仿、氯仿、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯、四氢呋喃、碳酸二四酯、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈中的一种或几种。
在本发明所述的头孢地尼的制备方法中,优选地,所述合成头孢地尼酯的温度为-5~35℃,所述合成头孢地尼酯的时间为6~30h。
在本发明所述的头孢地尼的制备方法中,优选地,所述头孢地尼酯水解的温度为0~50℃,所述头孢地尼酯水解体系的pH为5.5~8.5。
在本发明所述的头孢地尼的制备方法中,进一步优选地,所述头孢地尼水解的温度为25~35℃。
在本发明所述的头孢地尼的制备方法中,优选地,所述结晶用有机溶剂为一元醇、一元酮、一元酯中的一种或几种。
在本发明所述的头孢地尼的制备方法中,进一步优选地,所述结晶用有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种或几种。
采用本发明的头孢地尼的制备方法,具有以下有益效果:
1.本发明的头孢地尼的制备方法中,不需要将头孢地尼酯中间体结晶再溶解,既缩短了生产周期,提高了终产物头孢地尼的收率,又节约了溶媒,降低了成本。
2.本发明的头孢地尼的制备方法中,采用了固定化羧酸酯水解酶水解头孢地尼酯中间体生成头孢地尼。酶是一种生物制剂,相比于用无机强碱,如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾等来水解的方法,反应条件温和、易于控制,头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基)的水解也更加完全,产物降解少,而且,得到的头孢地尼晶形也较强碱水解好。
3.本发明的头孢地尼的制备方法中,加入的无机碱仅用于调节水解体系的pH,而非用于水解助剂,用量也大为减少,更有利于环保,并且对于产品的收率和质量都有大幅度提高。
4.本发明的头孢地尼的制备方法中,在头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基)水解后头孢地尼的结晶过程中加入了结晶用有机溶剂,使头孢地尼的结晶质量得到提高。
本发明的头孢地尼的制备方法,制备的头孢地尼经HPLC分析其纯度大于99%,最终含量超过97%,产品收率和质量均达到较高标准。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例对 本发明进行进一步的详细说明。
本发明中,所用固定化羧酸酯水解酶为湖南福来格生物技术有限公司生产的固定化去乙酰酯酶,英文名为lipase。在加入有机碱之前降至低温仅是为了使反应体系的温度更加容易控制,直接加入有机碱进行反应也是可以的。所用有机碱为三乙胺、三正丁胺、三丙胺、叔丙胺、1,2-二甲基丙胺、己二胺或吡啶,所用有机溶媒为二氯甲仿、氯仿、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯、四氢呋喃、碳酸二四酯、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈中的一种或几种,所述结晶用有机溶剂为一元醇、一元酮、一元酯中的一种或几种,具体地讲,所述结晶用有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种或几种。
实施例一:
在500mL四口反应瓶中加入180mL纯化水、20.0g7-AVCA和36g头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基),搅拌下加入140mL四氢呋喃,降温至0℃,加入16mL三乙胺,升温至20℃,搅拌反应9小时,取样用HPLC检测7-AVCA残留量小于1.0%后往反应液中加入120mL二氯甲烷,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相再用50mL纯化水萃取,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相进行有机溶媒回收,合并上层水相并加入80mL二氯甲烷洗涤,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相进行有机溶媒回收,上层水相中加入2g活性炭,搅拌脱色30分钟后过滤,用30mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液合并后倒入另一500mL反应瓶中进行真空蒸馏。
在真空蒸馏得到的水相中加入6g固定化羧酸酯水解酶,用15%氨水控制反应液pH为7.2~7.5,在25℃下搅拌反应,取样用HPLC检测头孢地尼酯的残留量低于0.5%,过滤,将固定化羧酸酯水解酶清洗后保存,滤液倒入另一 500mL反应瓶中,加入6N盐酸调节滤液pH为5.0,再加入2g活性炭搅拌脱色30分钟,过滤,用40mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液转移至另一500mL反应瓶中,加入40mL异丙醇,加入6N盐酸调节结晶液pH为2.0,结晶析出,降温至5℃,继续搅拌1小时后过滤,用5mL异丙醇和20mL纯化水的混合液洗涤,干燥后得到21.2g头孢地尼。
实施例二:
在500mL四口反应瓶中加入180mL纯化水、20.0g7-AVCA和36g头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基),搅拌下加入160mL丙酮,降温至0℃,加入17mL三乙胺,升温至20℃,搅拌反应11小时,取样用HPLC检测7-AVCA残留量小于1.0%后往反应液中加入120mL二氯甲烷,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相再用50mL纯化水萃取,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相进行有机溶媒回收,合并上层水相并加入80mL二氯甲烷洗涤,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相进行有机溶媒回收,上层水相中加入2g活性炭,搅拌脱色30分钟后过滤,用30mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液合并后倒入另一500mL反应瓶中进行真空蒸馏。
在真空蒸馏得到的水相中加入6g固定化羧酸酯水解酶,用15%氨水控制反应液pH为5.5~6.0,在35℃下搅拌反应,取样用HPLC检测头孢地尼酯的残留量低于0.5%,过滤,将固定化乙酰酯酶清洗后保存,滤液倒入另一500mL反应瓶中,加入6N盐酸调节滤液pH为7.0,再加入2g活性炭搅拌脱色30分钟,过滤,用40mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液转移至另一500mL反应瓶中,加入40mL异丙醇,加入6N盐酸调节结晶液pH为3.0,结晶析出,降温至5℃,继续搅拌1小时后过滤,用5mL异丙醇和20mL纯化水的混合液洗涤,干燥后得到20.8g头孢地尼。
实施例三:
在500mL四口反应瓶中加入180mL纯化水、20.0g7-AVCA和36g头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基),搅拌下加入160mL乙醇,降温至0℃,加入16mL三乙胺,升温至20℃,搅拌反应10小时,取样用HPLC检测7-AVCA残留量小于1.0%后往反应液中加入120mL二氯甲烷,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相再用50mL纯化水萃取,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相进行有机溶媒回收,合并上层水相并加入80mL二氯甲烷洗涤,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相进行有机溶媒回收,上层水相中加入2g活性炭,搅拌脱色30分钟后过滤,用30mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液合并后倒入另一500mL反应瓶中进行真空蒸馏。
在真空蒸馏得到的水相中加入6g固定化羧酸酯水解酶,用15%氨水控制反应液pH为6.5~7.0,在0℃下搅拌反应,取样用HPLC检测头孢地尼酯的残留量低于0.5%,过滤,将固定化羧酸酯水解酶清洗后保存,滤液倒入另一500mL反应瓶中,加入6N盐酸调节滤液pH为3.0,再加入2g活性炭搅拌脱色30分钟,过滤,用40mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液转移至另一500mL反应瓶中,加入40mL异丙醇,常温下加入6N盐酸调节结晶液pH为1.0,结晶析出,降温至5℃,继续搅拌1小时后过滤,用5mL异丙醇和20mL纯化水的混合液洗涤,干燥后得到21.0g头孢地尼。
实施例四:
在500mL四口反应瓶中加入180mL纯化水、20.0g7-AVCA和36g头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基),搅拌下加入140mL四氢呋喃,降温至0℃,加入16mL三乙胺,升温至10℃,搅拌反应15小时,取样用HPLC检测7-AVCA残留量小于1.0%后往反应液中加入120mL二氯甲烷,搅拌30分钟后静置30 分钟,分层,下层二氯甲烷相再用50mL纯化水萃取,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相进行有机溶媒回收,合并上层水相并加入80mL二氯甲烷洗涤,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相进行有机溶媒回收,上层水相中加入2g活性炭,搅拌脱色30分钟后过滤,用30mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液合并后倒入另一500mL反应瓶中进行真空蒸馏。
在真空蒸馏得到的水相中加入6g固定化羧酸酯水解酶,用15%氨水控制反应液pH为7.2~7.5,在50℃下搅拌反应,取样用HPLC检测头孢地尼酯的残留量低于0.5%,过滤,将固定化羧酸酯水解酶清洗后保存,滤液倒入另一500mL反应瓶中,加入6N盐酸调节滤液pH为4.0,再加入2g活性炭搅拌脱色30分钟,过滤,用40mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液转移至另一500mL反应瓶中,加入40mL异丙醇,常温下加入6N盐酸调节结晶液pH为2.0,结晶析出,降温至5℃,继续搅拌1小时后过滤,用5mL异丙醇和20ml纯化水的混合液洗涤,干燥后得到21.2g头孢地尼。
实施例五:
在500mL四口反应瓶中加入180mL纯化水、20.0g7-AVCA和36g头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基),搅拌下加入140mL四氢呋喃,降温至0℃,加入16mL三乙胺,维持0℃,搅拌反应20小时,取样用HPLC检测7-AVCA残留量小于1.0%后往反应液中加入120mL二氯甲烷,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相再用50mL纯化水萃取,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相进行有机溶媒回收,合并上层水相并加入80mL二氯甲烷洗涤,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,下层二氯甲烷相进行有机溶媒回收,上层水相中加入2g活性炭,搅拌脱色30分钟后过滤,用30mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液合并后倒入另一500mL反应瓶中进行真空蒸馏。
在真空蒸馏得到的水相中加入6g固定化羧酸酯水解酶,用15%氨水控制反应液pH为8.0~8.5,在15℃下搅拌反应,取样用HPLC检测头孢地尼酯的残留量低于0.5%,过滤,将固定化羧酸酯水解酶清洗后保存,滤液倒入另一500mL反应瓶中,加入6N盐酸调节滤液pH为5.0,再加入2g活性炭搅拌脱色30分钟,过滤,用40mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液转移至另一500mL反应瓶中,加入40mL异丙醇,常温下加入6N盐酸调节结晶液pH为2.0,结晶析出,降温至5℃,继续搅拌1小时后过滤,用5ml异丙醇和20ml纯化水的混合液洗涤,干燥后得到20.4g头孢地尼。
实施例六:
在500mL四口反应瓶中加入180mL纯化水、20.0g7-AVCA和36g头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基),搅拌下加入140mL四氢呋喃,降温至0℃,加入16mL三乙胺,降温至-5℃,搅拌反应30小时,取样用HPLC检测7-AVCA残留量小于1.0%后往反应液中加入100mL乙酸乙酯,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相再用50mL纯化水萃取,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相进行有机溶媒回收,合并下层水相并加入80mL乙酸乙酯洗涤,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相进行有机溶媒回收,下层水相中加入2g活性炭,搅拌脱色30分钟后过滤,用30mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液合并后倒入另一500mL反应瓶进行真空蒸馏。
在真空蒸馏得到的水相中加入6g固定化羧酸酯水解酶,用15%氨水控制反应液pH为7.2~7.5,在30℃下搅拌反应,取样用HPLC检测头孢地尼酯的残留量低于0.5%,过滤,将固定化羧酸酯水解酶清洗后保存,滤液倒入另一500mL反应瓶中,加入6N盐酸调节滤液pH为5.0,再加入2g活性炭搅拌脱色30分钟,过滤,用40mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液转移至另一500mL 反应瓶中,加入40mL异丙醇,常温下加入6N盐酸调节结晶液pH为2.0,结晶析出,降温至5℃,继续搅拌1小时后过滤,用5mL异丙醇和20mL纯化水混合液洗涤,干燥后得到22.1g头孢地尼。
实施例七:
在500mL四口反应瓶中加入180mL纯化水、20.0g7-AVCA和36g头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基),搅拌下加入140mL四氢呋喃,降温至0℃,加入16mL三乙胺,升温至35℃,搅拌反应6小时,取样用HPLC检测7-AVCA残留量小于1.0%后往反应液中加入100mL乙酸乙酯,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相再用50mL纯化水萃取,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相进行有机溶媒回收,合并下层水相并加入80mL乙酸乙酯洗涤,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相进行有机溶媒回收,下层水相中加入2g活性炭,搅拌脱色30分钟后过滤,用30mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液合并后倒入另一500mL反应瓶中进行真空蒸馏。
在真空蒸馏得到的水相中加入6g固定化羧酸酯水解酶,用15%氨水控制反应液pH为7.7~7.9,在40℃下搅拌反应,取样用HPLC检测头孢地尼酯的残留量低于0.5%,过滤,将固定化羧酸酯水解酶清洗后保存,滤液倒入另一500mL反应瓶中,加入6N盐酸调节滤液pH为5.0,再加入2g活性炭搅拌脱色30分钟,过滤,用40mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液转移至另一500mL反应瓶中,加入40mL异丙醇,常温下加入6N盐酸调节结晶液pH为2.0,结晶析出,降温至5℃,继续搅拌1小时后过滤,用5mL异丙醇和20mL纯化水的混合液洗涤,干燥后得到20.6g头孢地尼。
实施例八:
在500mL四口反应瓶中加入180mL纯化水、20.0g7-AVCA和36g头孢地 尼活性酯(乙酰氧亚胺基),搅拌下加入140mL四氢呋喃,降温至0℃,加入16mL三乙胺,升温至15℃,搅拌反应25小时,取样用HPLC检测7-AVCA残留量小于1.0%后往反应液中加入100mL乙酸乙酯,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相再用50mL纯化水萃取,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相进行有机溶媒回收,合并下层水相并加入80mL乙酸乙酯洗涤,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相进行有机溶媒回收,下层水相中加入2g活性炭,搅拌脱色30分钟后过滤,用30mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液合并后倒入另一500mL反应瓶中进行真空蒸馏。
在真空蒸馏得到的水相中加入6g固定化羧酸酯水解酶,用5%碳酸钾溶液控制反应液pH为7.7~7.9,在45℃下搅拌反应,取样用HPLC检测头孢地尼酯的残留量低于0.5%,过滤,将固定化羧酸酯水解酶清洗后保存,滤液倒入另一500mL反应瓶中,加入6N盐酸调节滤液pH为5.0,再加入2g活性炭搅拌脱色30分钟,过滤,用40mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液转移至另一500mL反应瓶中,加入40mL异丙醇,常温下加入6N盐酸调节结晶液pH为2.0,结晶析出,降温至5℃,继续搅拌1小时后过滤,用5mL异丙醇和20mL纯化水的混合液洗涤,干燥后得到20.0g头孢地尼。
实施例九:
在500mL四口反应瓶中加入180mL纯化水、20.0g7-AVCA和36g头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基),搅拌下加入140mL四氢呋喃,降温至0℃,加入16mL三乙胺,升温至20℃,搅拌反应9小时,取样用HPLC检测7-AVCA残留量小于1.0%后往反应液中加入100mL乙酸乙酯,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相再用50mL纯化水萃取,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相进行有机溶媒回收,合并下层水相并加入80mL乙 酸乙酯洗涤,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相进行有机溶媒回收,下层水相中加入2g活性炭,搅拌脱色30分钟后过滤,用30mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液合并后倒入另一500mL反应瓶中进行真空蒸馏。
在真空蒸馏得到的水相中加入6g固定化羧酸酯水解酶,用15%氨水溶液控制反应液pH为7.7~7.9,在25℃下搅拌反应,取样用HPLC检测头孢地尼酯的残留量低于0.5%,过滤,将固定化羧酸酯水解酶清洗后保存,滤液倒入另一500mL反应瓶中,加入6N盐酸调节滤液pH为5.0,再加入2g活性炭搅拌脱色30分钟,过滤,用40mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液转移至另一500mL反应瓶中,加入40mL异丙醇,常温下加入6N盐酸调节结晶液pH为1.0,结晶析出,降温至5℃,继续搅拌1小时后过滤,用5mL异丙醇和20mL纯化水的混合液洗涤,干燥后得到21.3g头孢地尼。
实施例十:
在500mL四口反应瓶中加入180mL纯化水、20.0g7-AVCA和36g头孢地尼活性酯(乙酰氧亚胺基),搅拌下加入140mL四氢呋喃,降温至0℃,加入16mL三乙胺,升温至20℃,搅拌反应9小时,取样用HPLC检测7-AVCA残留量小于1.0%后往反应液中加入100mL乙酸乙酯,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相再用50mL纯化水萃取,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相进行有机溶媒回收,合并下层水相并加入80mL乙酸乙酯洗涤,搅拌30分钟后静置30分钟,分层,上层乙酸乙酯相进行有机溶媒回收,下层水相中加入2g活性炭,搅拌脱色30分钟后过滤,用30mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液合并后倒入另一500mL反应瓶中进行真空蒸馏。
在真空蒸馏得到的水相中加入6g固定化羧酸酯水解酶,用5%碳酸钾溶液控制反应液pH为7.7~7.9,在35℃下搅拌反应,取样用HPLC检测头孢地 尼酯的残留量低于0.5%,过滤,将固定化羧酸酯水解酶清洗后保存,滤液倒入另一500mL反应瓶中,加入6N盐酸调节滤液pH为5.0,再加入2g活性炭搅拌脱色30分钟,过滤,用40mL纯化水洗涤滤饼,滤液和洗液转移至另一500mL反应瓶中,加入40mL丙酮,常温下加入6N盐酸调节结晶液pH为2.0,结晶析出,降温至5℃,继续搅拌1小时后过滤,用5mL丙酮和20mL纯化水的混合液洗涤,干燥后得到21.5g头孢地尼。
以上所述仅为本发明的具有代表性的实施例,不以任何方式限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。