CN102151242B - 一种抗结核药物的原位凝胶缓释制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种用于局部给药的原位凝胶缓释制剂，包括药物活性成分微球及原位凝胶，所述凝胶剂为成凝胶温度保持在15-25℃，且存在钙离子作用；所述药物活性成分为抗结核药物；药物活性成分微球与温度-离子敏感型凝胶的比例关系为：5-50mg∶1-50ml，将药物活性成分微球在搅拌的条件下均匀分散在原位凝胶中；该原位凝胶微球制剂可以抑制药物过量释放，使药物释放平稳，并且在大鼠肺部最长可滞留为120h，使药物系统在局部长时间地滞留从而实现治疗目的。
Description
技术领域
本发明提供一种药物制剂及其制备方法，特别涉及一种抗结核药物的原位凝胶缓释制剂及其制备方法。
背景技术
结核病治疗重点和难点之一：复治、难治及耐多药肺结核。常规的给药途径化疗效果差，多年迁延不愈，痰菌持续阳性或成为终生排菌者。
本发明经气管镜肺部介入治疗药物的缓释给药系统，解决局部介入治疗中缓释系统尚未建立的难题，有针对性的介入治疗难治、复治和耐多药肺结核，缩短空洞闭合时间，促进远端病灶吸收、减少复发和播散，力争明显提高肺结核的治愈率。
关于药物缓释微粒的制备已经有不少文献报道，但将缓释微粒分散在生物相容的凝胶介质中，使得其整体上具有环境响应的胶凝特性，国内外尚未见类似报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于局部病灶的原位凝胶缓释制剂。
为制备具有肺部病灶滞留性同时又适合介入给药的体系，必须使得整个给药系统在导管介入给药时具有较好的通针性(具有一定流动性，不能太过粘稠或者有较大的颗粒)，同时在达到给药部位时尽快形成粘滞的固态或半固态。这就需要一种具有环境相应胶凝特性的材料作为整个给药系统的基质或者骨架。将抗结核药物制备成缓释微粒(微球)，微球不仅能够较完美的分散到上述原位凝胶基质中，也可以符合介入治疗的需要，更特别的是可以保证在较长时间内持续缓慢释放药物而保持有效的浓度。
本发明所述用于局部病灶可以为经气管镜肺部介入治疗药物或者经手术将缓释原位凝胶置于骨结核等身体其它易于感染结核的病灶部位；优选用于肺部局部病灶。
本发明提供的一种用于局部给药的原位凝胶缓释制剂，包括药物成分微球及温度-离子敏感型原位凝胶，所述温度-离子型凝胶剂成凝胶温度保持在15-36℃，且存在钙离子作用；其中保持其成凝胶温度最优为20℃-25℃；经实验研究意外发现，凝胶剂成凝胶温度基于不同用药部位存在差别，用于肺部局部给药时，凝胶剂成凝胶温度与周围环境相接近，即如果是在室温22℃给药时，成凝胶温度即为22℃左右；当用于骨关节腔，其成凝胶的温度则接近体温，即36℃左右。
所述药物活性成分为抗结核药物，优选为利福平、利福霉素、环戊哌嗪利福霉素、异烟肼、乙胺丁醇、对氨水杨酸钠中的任意一种或两种药物的组合；最优选为利福平或异烟肼；
所述原位凝胶的原料组成为：
泊洛沙姆407 20-30g 泊洛沙姆188 0.1-10g
海藻酸钠 0.05g-5g 羟丙基甲基纤维素 0.1g-5g
去离子水 100ml；
所述药物活性成分微球的原料为：
药物活性成分 5-50mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 10-200mg
聚乙烯醇(PVA) 0.1-5g
二氯甲烷 0.1-5ml
去离子水 5-50ml
所述药物活性成分微球与温度-离子敏感型凝胶的比例关系为：5-50mg∶1-50ml；优选为20mg∶10ml。
所述温敏-离子型凝胶剂辅料优选如下：
F127(泊洛沙姆407) 23-27g
F68(泊洛沙姆188) 0.5-3g
海藻酸钠 0.5g-2g
羟丙基甲基纤维素(HPMC 90SH) 0.5g-2g
去离子水 100ml
所述温度-离子双敏型凝胶的制备方法为：各取上述处方量的F127、F68、海藻酸钠、HPMC，加入到去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得温度-离子双敏型凝胶；
所述药物成分微球及温度-离子敏感型原位凝胶的制备方法为：将药物活性成分微球在搅拌的条件下均匀分散在温度-离子敏感型原位凝胶中，即得。
一种用于肺部局部给药的原位凝胶缓释制剂，为利福平温敏-离子型凝胶缓释制剂，利福平的微球原料组成为：
利福平(RFP) 5-50mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 10-200mg
聚乙烯醇(PVA) 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-5ml
去离子水 5-50ml
所述原位凝胶的原料组成为：
泊洛沙姆407 20-30g
泊洛沙姆188 0.1-10g
海藻酸钠 0.05g-5g
羟丙基甲基纤维素 0.1g-5g
去离子水 100ml
利福平的微球原料进一步优选组成为：
利福平(RFP) 10-30mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 30-20mg
聚乙烯醇(PVA) 0.2-2g
二氯甲烷 1-3ml
去离子水 10-25ml
所述原位凝胶的原料进一步优选组成为：
泊洛沙姆407 23-27g
泊洛沙姆188 0.5-3g
海藻酸钠 0.5g-2g
羟丙基甲基纤维素 0.5g-2g
去离子水 100ml
利福平的微球制备方法：称取处方量的PLGA溶于二氯甲烷中，加入利福平，超声溶解，作为有机相；将PVA溶于去离子水中，作为水相。在1200rpm搅拌条件下，将有机相缓缓注入水相中，高速搅拌一定时间，400rpm搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥，即得。
一种用于肺部局部给药的异烟肼温敏-离子型凝胶缓释制剂，异烟肼的微球原料组成为：
异烟肼 0.1-200mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 50-400mg
聚乙烯醇(PVA) 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-50ml
去离子水 5-550ml
所述原位凝胶的原料组成为：
泊洛沙姆407 20-30g
泊洛沙姆188 0.1-10g
海藻酸钠 0.05-5g
羟丙基甲基纤维素 0.1-5g
去离子水 100ml
异烟肼的微球原料进一步优选组成为：
异烟肼 50-150mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 180-230mg
聚乙烯醇(PVA) 1-2.5g
二氯甲烷 2-10ml
去离子水 5-100ml
所述原位凝胶的原料进一步优选组成为：
泊洛沙姆407 23-27g
泊洛沙姆188 0.5-3g
海藻酸钠 0.5g-2g
羟丙基甲基纤维素 0.5g-2g
去离子水 100ml
异烟肼的微球制备方法为：精密称取处方量PLGA溶于二氯甲烷中，作为油相；将油相加入到异烟肼水溶液(25℃：120mg溶于1ml去离子水)超声15min，作为初乳；将初乳在1200rpm搅拌的条件下加入到PVA水溶液中，持续搅拌20min，将转速调制400rpm，搅拌4h，至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。即得。
所述药物活性成分微球与温敏-离子型凝胶剂关系为：5-50mg∶1-50ml；优选为20mg∶10ml。
上述药物温敏-离子型凝胶剂原位凝胶微球制剂可以抑制药物过量释放，此原位凝胶系统体外溶蚀考察溶蚀时间达到196小时，药物释放平稳，并且在大鼠肺部最长可滞留为120h，使药物系统在局部长时间地滞留从而实现治疗目的。
本发明还提供的一种用于局部给药的原位凝胶缓释制剂，包括药物成分微球及体外溶蚀时间为18-24小时的原位凝胶，所述原位凝胶的原料为：
F127(泊洛沙姆407) 20-30g
F68(泊洛沙姆188) 0.1-10g
羟丙基甲基纤维素(HPMC 90SH) 0.1-5g
去离子水 100ml
所述原位凝胶的原料进一步优选为：
F127(泊洛沙姆407) 23-27g
F68(泊洛沙姆188) 0.5-3g
羟丙基甲基纤维素(HPMC 90SH) 0.5-2g
去离子水 100ml
原位凝胶制备工艺：各取上述处方量的F127、F68，HPMC加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型-温度敏感型原位凝胶(成凝胶温度20℃)。
所述原位凝胶的原料也可以由如下原料组成：
F127(泊洛沙姆407) 20-30g
F68(泊洛沙姆188) 0.1-10g
甲基纤维素(MC) 0.1-5g
去离子水 100ml
原位凝胶的原料进一步优选为：
F127(泊洛沙姆407) 23-27g
F68(泊洛沙姆188) 0.5-3g
甲基纤维素(MC) 0.5-2g
去离子水 100ml
原位凝胶制备工艺：各取上述处方量的F127、F68，MC加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型-温度敏感型原位凝胶。
所述药物活性成分为抗结核药物，优选为利福平、利福霉素、环戊哌嗪利福霉素、异烟肼、乙胺丁醇、对氨水杨酸钠中的任意一种或两种药物的组合；最优选为利福平或异烟肼；
其中异烟肼的微球原料组成为：
异烟肼 0.1-200mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 50-400mg
聚乙烯醇(PVA) 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-50ml
去离子水 5-550ml
所述利福平微球的原料为：
利福平(RFP) 5-50mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 10-200mg
聚乙烯醇(PVA) 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-5ml
去离子水 5-50ml
其中异烟肼的微球原料进一步优选为：
异烟肼 50-150mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 180-230mg
聚乙烯醇(PVA) 1-2.5g
二氯甲烷 2-10ml
去离子水 5-100ml
所述利福平微球的原料进一步优选为：
利福平(RFP) 10-30mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 30-120mg
聚乙烯醇(PVA) 0.2-2g
二氯甲烷 1-3ml
去离子水 10-25ml
利福平的微球制备方法：称取处方量的PLGA溶于二氯甲烷中，加入利福平，超声溶解，作为有机相；将PVA溶于去离子水中，作为水相。在1200rpm搅拌条件下，将有机相缓缓注入水相中，高速搅拌一定时间，400rpm搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥，即得。
异烟肼的微球制备方法为：精密称取处方量PLGA溶于二氯甲烷中，作为油相；将油相加入到异烟肼水溶液(25℃：120mg溶于1ml去离子水)超声15min，作为初乳；将初乳在1200rpm搅拌的条件下加入到PVA水溶液中，持续搅拌20min，将转速调制400rpm，搅拌4h，至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。即得。
所述药物活性成分微球与凝胶剂关系为：5-50mg∶1-50ml；优选为20mg∶10ml。
上述药物温敏型凝胶剂原位凝胶微球制剂可以抑制药物过量释放，此原位凝胶系统体体外溶蚀时间为18-24小时，药物释放平稳，更为突出的效果是实现特定缓释时间要求的缓慢释放。可使药物系统在局部较长时间地滞留从而实现治疗目的。
本发明还提供的一种用于肺部局部给药的原位凝胶缓释制剂，包括药物成分微球及体外溶蚀时间为90-100小时的原位凝胶，所述原位凝胶的原料为：
海藻酸钠 0.05g-5g
羟丙基甲基纤维素(HPMC 90SH) 0.1g-5g
去离子水 100ml
所述原位凝胶的原料进一步优选为：
海藻酸钠 0.5-2g
羟丙基甲基纤维素(HPMC 90SH) 0.5-2g
去离子水 100ml
所述药物活性成分为抗结核药物，优选为利福平、利福霉素、环戊哌嗪利福霉素、异烟肼、乙胺丁醇、对氨水杨酸钠中的任意一种或两种药物的组合；最优选为利福平或异烟肼；
其中异烟肼的微球原料组成为：
异烟肼 0.1-200mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 50-400mg
聚乙烯醇(PVA) 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-50ml
去离子水 5-550ml
所述利福平微球的原料组成为：
利福平(RFP) 5-50mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 10-200mg
聚乙烯醇(PVA) 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-5ml
去离子水 5-50ml
其中异烟肼的微球原料进一步优选为：
异烟肼 50-150mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 180-230mg
聚乙烯醇(PVA) 1-2.5g
二氯甲烷 2-10ml
去离子水 5-100ml
所述利福平微球的原料进一步优选为：
利福平(RFP) 10-30mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 30-120mg
聚乙烯醇(PVA) 0.2-2g
二氯甲烷 1-3ml
去离子水 10-25ml
所述药物活性成分微球与凝胶关系为：5-50mg∶1-50ml；优选为20mg∶10ml。
上述药物离子敏感型凝胶剂原位凝胶微球制剂可以抑制药物过量释放，此原位凝胶系统体体外溶蚀时间为90-100小时，药物释放平稳，更为突出的效果是实现特定缓释时间要求的缓慢释放。可使药物系统在局部较长时间地滞留从而实现治疗目的。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不构成对本发明保护范围的限制。
实验例1五种原位凝胶剂外溶蚀性实验
1、仪器与试剂
1.1、仪器：LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津)：SPD-10AVP紫外检测器，SCL-10AVP控制器，CTO-10ASVP柱温箱，CLASS-VP 工作站；pH计：(PHS-3C型精密pH计，上海雷磁仪器厂)；电热恒温水浴锅(HH.SY11-Ni 2B型，北京市长风仪器仪表公司)；激光粒度仪(Malvern Mastersizer2000英国)；莱卡正置荧光显微镜及成像系统(DM4000B型德国)；智能溶出试验仪(ZRS-4型天津大学无线电厂)
1.2、试剂：利福平(美国NOVO公司，批号：20080611，纯度99％)；异烟肼(美国NOVO公司，批号：20080924，纯度98％)；聚乳酸-羟基乙酸共聚物(简称：PLGA山东医疗器械研究所，75：25，批号：09040304)；泊洛沙姆407(商品名：F127，BASF，德国，批号：WPED591C)；泊洛沙姆188(商品名：F68，BASF，德国，批号：WPMD507C)；海藻酸钠(国药集团化学试剂有限公司)；卡波姆(CP971P，美国诺誉化工有限公司赠)；HPMC(90SH-4000，日本信越Shin-Etsu)乙腈、甲醇(Fisher试剂公司)为色谱纯；液相用水为娃哈哈矿泉水；聚乙烯醇(国药集团化学试剂有限公司，批号：T20070531)；VitC、NaHSO3、Na2SO3、EDTA-2Na北京化学试剂公司，均为分析纯。
1.3、实验动物
雄性SD大鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)
2、温度敏感型原位凝胶
2.1、温度敏感型原位凝胶处方及制备工艺
处方一：
F127(泊洛沙姆407) 25g
F68(泊洛沙姆188) 1g
去离子水 100ml
制备工艺：
各取上述处方量的F127、F68，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得温度敏感型原位凝胶(成凝胶温度20℃)
处方二：
F127(泊洛沙姆407) 25g
F68(泊洛沙姆188) 3g
去离子水 100ml
制备工艺：
各取上述处方量的F127、F68，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得温度敏感型原位凝胶(成凝胶温度25℃)
处方三：
F127(泊洛沙姆407) 20g
F68(泊洛沙姆188) 3g
去离子水 100ml
制备工艺：
各取上述处方量的F127、F68，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得温度敏感型原位凝胶(成凝胶温度32℃)
处方四：
F127(泊洛沙姆407) 23g
F68(泊洛沙姆188) 5g
去离子水 100ml
制备工艺：
各取上述处方量的F127、F68，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得温度敏感型原位凝胶(成凝胶温度36℃)
2.2、温敏型原位凝胶体外溶蚀时间
将一定量的原位凝胶(成凝胶温度20℃)加入转篮中(外包有透析带)，30℃使其成凝胶，称重，再放入溶出仪中，释放介质为0.9％生理盐水，转速为100rpm，在37℃的恒温条件下观察其溶蚀情况，在固定时间点取出转篮，称重，计算出溶蚀的原位凝胶的重量。
表1：温度敏感型原位凝胶体外溶蚀率
2.3、温敏型原位凝胶SD大鼠肺部成凝胶性质考察
SD大鼠乙醚麻醉5min后，气管插管，打入0.2ml温敏型原位凝胶(成凝胶温度20℃)，半小时后处死，取出肺部观察成凝胶性质，结果肉眼观察未见凝胶，提示单纯的F127+F68温敏型原位凝胶组合凝胶强度弱，成凝胶时间过短。
3、改进型温度敏感型原位凝胶
3.1、改进型温度敏感型原位凝胶处方及制备工艺
处方一：
F127(泊洛沙姆407) 25.5g
F68(泊洛沙姆188) 2.1g
羟丙基甲基纤维素(HPMC 90SH) 0.8g
去离子水 100ml
原位凝胶制备工艺：各取上述处方量的F127、F68，HPMC加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型-温度敏感型原位凝胶。
处方二：
F127(泊洛沙姆407) 24g
F68(泊洛沙姆188) 0.8g
甲基纤维素(MC) 1.8g
去离子水 100ml
原位凝胶制备工艺：各取上述处方量的F127、F68，MC加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型-温度敏感型原位凝胶。
3.2、将一定量的原位凝胶(成凝胶温度20℃)加入转篮中(外包有透析带)，30℃使其成凝胶，称重，再放入溶出仪中，释放介质为0.9％生理盐水，转速为100rpm，在37℃的恒温条件下观察其溶蚀情况，在固定时间点取出转篮，称重，计算出溶蚀的原位凝胶的重量。
表2改进型-温度敏感型原位凝胶体外溶蚀率
3.3、改进型温敏型原位凝胶SD大鼠肺部成凝聚性质考察
SD大鼠乙醚麻醉5min后，气管插管，打入0.2ml改进型温敏型原位凝胶，分别于0.5h、1h处死大鼠，取出肺部观察成凝胶性质，结果表明，加入改进剂后凝胶强度有所提高，0.5小时肺部有凝胶，但1h未见凝胶。且凝胶情况与室温有，分别将成改进型原位凝胶凝胶温度为36℃、32℃、25℃、20℃的原位凝胶打SD大鼠肺部，成凝胶情况入表所示(实验条件室温为22℃)
表3：不同成凝胶温度的温敏型原位凝胶大鼠体内成凝胶情况分析
“-”表明在SD大鼠肺部不成凝胶，“+”表明在SD大鼠肺部成胶。
4、离子敏感型原位凝胶的制备
4.1、离子型原位凝胶处方及制备工艺
处方：
海藻酸钠 1.4g
去离子水 100ml
制备工艺：
各取上述处方量的海藻酸钠加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得离子敏感型原位凝胶
4.2、离子敏感型原位凝胶体外溶蚀时间
将一定量原位凝胶加入转篮中(外包有透析带)，加入1mol/L的CaCL2使其成凝胶，称重，再放入溶出仪中，释放介质为0.9％生理盐水，转速为100rpm，在37℃的恒温条件下观察其溶蚀情况，在固定时间点取出转篮，称重，计算出溶蚀的原位凝胶的重量。
表4：离子敏感型原位凝胶体外溶蚀率
5、改进型离子敏感型原位凝胶
5.1、离子敏感型原位凝胶的处方及制备工艺
处方：
海藻酸钠 1.6g
羟丙基甲基纤维素(HPMC 90SH) 0.9g
去离子水 100ml
制备工艺：
各取上述处方量的海藻酸钠、HPMC加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型离子敏感型原位凝胶。
5.2、离子敏感型原位凝胶体外溶蚀时间
将一定量原位凝胶加入转篮中(外包有透析带)，加入CaCL2使其成凝胶，称重，再放入溶出仪中，释放介质为0.9％生理盐水，转速为100rpm，在37℃的恒温条件下观察其溶蚀情况，在固定时间点取出转篮，称重，计算出溶蚀的原位凝胶的重量。
表5：离子敏感型原位凝胶体外溶蚀率
6、温度-离子型(双敏)原位凝胶
6.1、双敏型原位凝胶的处方及制备工艺
处方：
泊洛沙姆407 26.3g
泊洛沙姆188 1.6g
海藻酸钠 1.3g
羟丙基甲基纤维素 0.9g
去离子水 100ml
制备工艺：
所述温度-离子双敏型凝胶的制备方法为：各取上述处方量的F127、F68、海藻酸钠、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得温度-离子双敏型凝胶；
6.2、双敏型原位凝胶体外溶蚀考察
将一定量原位凝胶(成凝胶温度20℃)加入转篮中(外包有透析带)，先加入CaCL2再在40℃使其成凝胶，称重，再放入溶出仪中，释放介质为0.9％生理盐水，转速为100rpm，在37℃的恒温条件下观察其溶蚀情况，在固定时间点取出转篮，称重，计算出溶蚀的原位凝胶的重量。
表6：双敏型原位凝胶体外溶蚀率
6.3、双敏型原位凝胶SD大鼠肺部成凝胶情况
SD大鼠乙醚麻醉5min后，气管插管，打入按照上述制备方法的到的0.2ml双敏型原位凝胶(成凝胶温度20℃，含利福平微球)以及0.1ml氯化钙水溶液(浓度为：1mol/l)。分别在0.5h、2h、8h、24h、72h、120h、144h不同的时间点处死动物，取出肺部观察凝胶在肺部的胶凝状况。
观察结果表明，在0.5h、2h、8h、24h、72h、120h均可以看到大小不一的凝胶，但在144h肉眼未见凝胶。证明双敏型原位凝胶在SD大鼠肺部最长可滞留为120h。
实验例2利福平微球制备及体外释放研究
1、仪器与试剂
1.1、仪器：数显测速恒温磁力器(江苏荣华仪器制造有限公司，型号：85-2A)；LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津)：SPD-10AVP紫外检测器，SCL-10AVP控制器，CTO-10ASVP柱温箱，CLASS-VP工作站；pH计：(PHS-3C型精密pH计，上海雷磁仪器厂)；电热恒温水浴锅(HH·SY11-Ni 2B型，北京市长风仪器仪表公司)；激光粒度仪(MalvernMastersizer2000英国)；莱卡正置荧光显微镜及成像系统(DM4000B型德国)；智能溶出试验仪(ZRS-4型天津大学无线电厂)
1.2、试剂：利福平样品(美国NOVO公司，批号：20080611，纯度99％)；聚乳酸-羟基乙酸共聚物(简称：PLGA山东医疗器械研究所，75：25，批号：09040304)；乙腈、甲醇(Fisher试剂公司)为色谱纯；液相用水为娃哈哈矿泉水；聚乙烯醇(国药集团化学试剂有限公司，批号：T20070531)；VitC、NaHSO3、Na2SO3、EDTA-2Na北京化学试剂公司，均为分析纯。
2.2、利福平高效液相色谱法
2.1、色谱条件
色谱柱：依利特C18柱150×4.6mm，5μm；流动相：甲醇∶乙腈∶0.075mol/L KH2PO4∶1mol/L枸橼酸(30∶30∶35∶5)；流速：1ml/min；检测波长：254nm；柱温：25℃；进样量：20μL。亦可采用药典中利福平的HPLC含量测定法。
2、利福平微球制备工艺
2.1、利福平微球处方、制备工艺
处方：
利福平(RFP) 25mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 92mg
聚乙烯醇(PVA) 1.4g
二氯甲烷 2.2ml
去离子水 22ml
制备工艺
精密称取PLGA溶于二氯甲烷中，加入处方量利福平，超声溶解，作为有机相；水相为一定浓度的PVA水溶液。在高速搅拌条件下，将有机相缓缓注入水相中，高速搅拌一定时间，低速搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。
2.2、制备工艺单因素考察
根据制备方法选择转速、投药量、有机相体积、有机相水相比例、PVA浓度、干燥方式等作为微球质量控制的影响因素。
2.3、正交试验设计
根据单因素考察，选择PVA浓度、投药量、有机相体积、水相体积、作为正交实验考察因素，每个因素选择3个水平，即L9(34)。根据实验可知
不同的因素会对粒径、载药量、包封率产生不同的影响，因此将举例说明
例1：转速影响
精密称取25mgPLGA溶于1ml二氯甲烷中，加入25mg利福平，超声溶解，作为有机相；20ml水相为2％的PVA水溶液分别在800rpm，1200rpm，1800rpm转速下高速搅拌10min，将有机相缓缓注入水相中，400rpm低速搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。由实验结果可知：转速为800rpm时，成球性不好，出现结块现象。转速为1200rpm，粒径分布为143.642μm，转速为1200rpm，粒径分布为113.831μm。说明转速越大，粒径越小。
例2：投药量影响
精密称取25mgPLGA溶于1ml二氯甲烷中，分别加入50mg利福平，超声溶解，作为有机相；20ml水相为2％的PVA水溶液分别在1200rpm转速下高速搅拌10min，将有机相缓缓注入水相中，400rpm低速搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。由实验结果可知：包封率为12.27％。
例3：油/水比例的影响
精密称取25mgPLGA溶于1ml二氯甲烷中，加入25mg利福平，超声溶解，作为有机相；10ml水相为2％的PVA水溶液分别在1200rpm转速下高速搅拌10min，将有机相缓缓注入水相中，搅拌一定时间，400rpm低速搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。由实验结果可知：载药量为20.89％。
由上述试验例可知，通过正交试验优化，微球的载药量和包封率均有明显提高，具体实现数据见表7
表7：利福平-PLGA-微球最优处方验证
| 外观 | 载药量(％) | 包封率(％) | 粒径(μm) |
| 红色粉末 | 26.43±3.10 | 69.43±3.53 | 148.42±1.55 |
2.4、利福平微球释放度研究
精密称取利福平微球约20mg，装入预先处理好的透析袋，加入3mL释放介质，两端扎紧，放入转篮中，1％EDTA-2Na+1％Na2SO3水溶液200ml为释放介质，在(37±0.5)℃、100rpm条件下进行体外释药试验。分别在规定时间点取样，完全倾出透析袋外的释放介质，并准确补加等量新鲜释放介质。采用HPLC法测定释放介质中利福平的浓度，计算累积释药百分数。利福平-PLGA-MS体外20天释放30％左右，从第五天起释放速率基本恒定，每天释放约0.73％。
实验例3、异烟肼微球制备及体外释药
1.异烟肼HPLC检测方法学
1.1、色谱条件
色谱柱：色谱柱：依利特C18柱150×4.6mm，5μm；流动相：甲醇∶水＝20∶80；流速：1mL/min；；检测波长：263nm；进样量：20μL
2、异烟肼微球处方及制备工艺
处方：
异烟肼 125mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 214mg
聚乙烯醇(PVA) 1.5g
二氯甲烷 3.2ml
去离子水 47ml
制备工艺
精密称取处方量PLGA溶于二氯甲烷中，作为油相；将油相加入到异烟肼水溶液，超声15min，作为初乳；将初乳在1200rpm搅拌的条件下加入到PVA水溶液中，持续搅拌20min，将转速调制400rpm，搅拌4h，至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。即得。
3、异烟肼微球相关性质
| 外观 | 载药量(％) | 包封率(％) | 粒径(μm) |
| 白色粉末 | 4.63 | 30.24 | 126.67 |
4、异烟肼微球的体外释药
称取40mg异烟肼微球加入转篮中(外包有透析带)，再放入溶出仪中，以0.9％生理盐水，为释放介质200ml为释放介质，在(37±0.5)℃、100rpm条件下进行体外释药试验，以上述HPLC方法测定释放液中异烟肼含量，计算微球体外释药百分率。
异烟肼微球2小时释放约20％，24小时候释放基本平稳，196小时释放约40％。
实验例4.利福平微球原位凝胶缓释制剂
1、利福平微球-原位凝胶处方及制备工艺
1.1、利福平微球处方及制备工艺
处方：
利福平(RFP) 25mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 92mg
聚乙烯醇(PVA) 1.4g
二氯甲烷 2.2ml
去离子水 22ml
制备工艺
精密称取PLGA溶于二氯甲烷中，加入处方量利福平，超声溶解，作为有机相；水相为一定浓度的PVA水溶液。在高速搅拌条件下，将有机相缓缓注入水相中，高速搅拌一定时间，低速搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。
1.2、原位凝胶处方及制备工艺；
处方一：温敏型原位凝胶
泊洛沙姆407 24.2g
泊洛沙姆188 2.5g
去离子水 100ml
处方二：改进型温敏型原位凝胶
泊洛沙姆407 25.3g
泊洛沙姆188 2.4g
羟丙基甲基纤维素 1.9g
去离子水 100ml
处方三：离子敏感型原位凝胶
海藻酸钠 1.4g
去离子水 100ml
处方四：改进型离子敏感型原位凝胶
海藻酸钠 1.6g
羟丙基甲基纤维素 1.4g
去离子水 100ml
处方五：温度-离子双敏型原位凝胶
泊洛沙姆407 24.8g
泊洛沙姆188 2.2g
海藻酸钠 0.8g
羟丙基甲基纤维素 1.1g
去离子水 100ml
制备工艺：将处方量的各辅料，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得相应的原位凝胶；
1.3、利福平微球-原位凝胶复合系统的处方及制备工艺
处方：
利福平-PLGA微球 15mg
原位凝胶 8ml
制备工艺：
取处方量利福平-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在原位凝胶中，即得。
2、利福平微球-原位凝胶体外释放
分别取不同类型的利福平微球-原位凝胶，加入转篮中(外包有透析带)，加热或加入钙离子使其成凝胶，再放入溶出仪中，以1％亚硫酸钠+1％EDTA-2Na+0.9％生理盐水，为释放介质200ml为释放介质，在(37±0.5)℃、100rpm条件下进行体外释药试验，分别在规定时间内取出全部释放介质，再加入新的释放介质，计算微球-原位凝胶体外释药情况。
体外释药结果如附图1、2
五种凝胶溶蚀结果如下表：
表8：利福平-PLGA-MS原位凝胶复合系统体外溶蚀率
实验例5异烟肼微球原位凝胶缓释制剂
1.1、异烟肼微球处方及制备工艺
处方：
异烟肼 125mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 214mg
聚乙烯醇(PVA) 1.5g
二氯甲烷 3.2ml
去离子水 47ml
制备工艺
精密称取处方量PLGA溶于二氯甲烷中，作为油相；将油相加入到异烟肼水溶液，超声15min，作为初乳；将初乳在1200rpm搅拌的条件下加入到PVA水溶液中，持续搅拌20min，将转速调制400rpm，搅拌4h，至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。即得。
1.2、原位凝胶处方及制备工艺；
处方一：温敏型原位凝胶
泊洛沙姆407 23.7g
泊洛沙姆188 1.6g
去离子水 100ml
处方二：改进型温敏型原位凝胶
泊洛沙姆407 26.3g
泊洛沙姆188 2.4g
羟丙基甲基纤维素 1.2g
去离子水 100ml
处方三：离子敏感型原位凝胶
海藻酸钠 0.8g
去离子水 100ml
处方四：改进型离子敏感型原位凝胶
海藻酸钠 1.1g
羟丙基甲基纤维素 1.7g
去离子水 100ml
处方五：温度-离子双敏型原位凝胶
泊洛沙姆407 26.5g
泊洛沙姆188 2.4g
海藻酸钠 1.5g
羟丙基甲基纤维素 1.0g
去离子水 100ml
制备工艺：将处方量的各辅料，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得相应的原位凝胶；
1.3、异烟肼微球-原位凝胶复合系统的处方及制备工艺
处方：
异烟肼-PLGA微球 24mg
原位凝胶 13ml
制备工艺：
取处方量异烟肼-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在原位凝胶中，即得。
2、异烟肼微球体外释药
分别称取40mg异烟肼微球，加入转篮中(外包有透析带)，再放入溶出仪中，以0.9％生理盐水，为释放介质200ml为释放介质，在(37±0.5)℃、100rpm条件下进行体外释药试验，计算采用HPLC法检测异烟肼微球体外释药情况。
异烟肼微球2小时释放约20％，24小时候释放基本平稳，196小时释放约40％。
3、异烟肼微球原位凝胶体外释药
分别取不同类型的异烟肼微球-原位凝胶，加入转篮中(外包有透析带)，加热或加入钙离子使其成凝胶，再放入溶出仪中，以0.9％生理盐水，为释放介质200ml为释放介质，在(37±0.5)℃、100rpm条件下进行体外释药试验，计算微球-原位凝胶体外释药情况。
异烟肼微球-原位凝胶缓释制剂体外释药结果见附图3
实验例6异烟肼原位凝胶缓释制剂
1、原位凝胶处方及制备工艺；
处方一：温敏型原位凝胶
泊洛沙姆407 26.9g
泊洛沙姆188 0.6g
去离子水 100ml
处方二：改进型温敏型原位凝胶
泊洛沙姆407 24.2g
泊洛沙姆188 1.4g
羟丙基甲基纤维素 0.6g
去离子水 100ml
处方三：离子敏感型原位凝胶
海藻酸钠 1.4g
去离子水 100ml
处方四：改进型离子敏感型原位凝胶
海藻酸钠 1.3g
羟丙基甲基纤维素 1.3g
去离子水 100ml
处方五：温度-离子双敏型原位凝胶
泊洛沙姆407 23.3g
泊洛沙姆188 1.6g
海藻酸钠 0.8g
羟丙基甲基纤维素 1.0g
去离子水 100ml
制备方法：将一定量的异烟肼溶解在水中，再将处方量的原位凝胶基质加入到10ml的异烟肼水溶液中，4℃条件下溶胀24h。备用
2、异烟肼紫外分光光度法：经全部长扫描，异烟肼水溶液在263nm处有最大吸收波长，应此选择263nm作为异烟肼的紫外检测含量波长
3、异烟肼原位凝胶体外释药及凝胶溶蚀
将异烟肼溶解在不同处方的原位凝胶中，将原位凝胶加入转篮中(外包有透析带)，加热或加入钙离子使其成凝胶，再放入溶出仪中，0.9％生理盐水，为释放介质200ml为释放介质，在(37±0.5)℃、100rpm条件下进行体外释药试验，分别在规定时间以上述建立的紫外分光度法检测释放介质中的异烟肼浓度，计算药物释放率，并以肉眼观察转篮无凝胶即终止实验。
表9：异烟肼-原位凝胶体外药物释放率
释放率＝药物含量/释放表面积/凝胶溶蚀时间
附图说明：
图1利福平-PLGA-MS在五种原位凝胶系统中体外药物释放比较
图2利福平微球与利福平微球双敏原位凝胶复合给药系统体外释药比较
图3异烟肼微球-原位凝胶缓释制剂体外释药结果
具体实施方式
实施例1：
利福平的微球制备：
利福平(RFP) 15mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 30mg
聚乙烯醇(PVA) 0.5g
二氯甲烷 2ml
去离子水 24ml
利福平的微球制备方法：称取30mg PLGA溶于二氯甲烷中，加入15mg利福平，超声溶解，作为有机相；将0.5gPVA溶于24ml去离子水中，作为水相。在1000rpm搅拌条件下，将有机相缓缓注入水相中，高速搅拌一定时间，600rpm搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥，即得。
所述原位凝胶制备方法为：
泊洛沙姆407 25g
泊洛沙姆188 3g
海藻酸钠 2g
羟丙基甲基纤维素 0.5g
去离子水 100ml
各取上述处方量的F127、F68、海藻酸钠、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得温度-离子双敏型凝胶；
取25mg的利福平-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在10ml的温度-离子双敏型原位凝胶中，即得。
实施例2
利福平的微球制备：
利福平(RFP) 19mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 115mg
聚乙烯醇(PVA) 1.7g
二氯甲烷 1ml
去离子水 10ml
利福平的微球制备方法：称取115mg PLGA溶于二氯甲烷中，加入19mg利福平，超声溶解，作为有机相；将1.7gPVA溶于10ml去离子水中，作为水相。在1200rpm搅拌条件下，将有机相缓缓注入水相中，高速搅拌一定时间，400rpm搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥，即得。
所述原位凝胶制备方法为：
泊洛沙姆407 23.9g
泊洛沙姆188 2g
羟丙基甲基纤维素 1.5g
去离子水 100ml
各取上述处方量的F127、F68、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型温敏凝胶；
取16mg的利福平-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在9ml的改进型温敏凝胶中，即得。
实施例3
利福平的微球制备：
利福平(RFP) 28mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 40mg
聚乙烯醇(PVA) 1.4g
二氯甲烷 1ml
去离子水 21ml
利福平的微球制备方法：称取40mg PLGA溶于二氯甲烷中，加入28mg利福平，超声溶解，作为有机相；将1.4gPVA溶于21ml去离子水中，作为水相。在1200rpm搅拌条件下，将有机相缓缓注入水相中，高速搅拌一定时间，400rpm搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥，即得。
所述原位凝胶制备方法为：
海藻酸钠 1.3g
羟丙基甲基纤维素 0.8g
去离子水 100ml
各取上述处方量的海藻酸钠、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型离子敏感型凝胶
取18mg的利福平-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在16ml的改进型离子敏感型凝胶中，即得。
实施例4：
异烟肼 58mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 197mg
聚乙烯醇(PVA) 1.1g
二氯甲烷 2ml
去离子水 35ml
精密称取197mg PLGA溶于2ml二氯甲烷中，作为油相；将油相加入到1ml异烟肼水溶液超声15min，作为初乳；将初乳在1400rpm搅拌的条件下加入到34ml 3％PVA水溶液中，持续搅拌20min，将转速调制500rpm，搅拌4h，至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。即得。
所述原位凝胶制备方法为：
泊洛沙姆407 25.2g
泊洛沙姆188 3g
海藻酸钠 0.5g
羟丙基甲基纤维素 1.2g
去离子水 100ml
各取上述处方量的F127、F68、海藻酸钠、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得温度-离子双敏型凝胶；
取15mg的异烟肼-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在10ml的温度离子-双敏型原位凝胶中，即得。
实施例5
异烟肼 140mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 230mg
聚乙烯醇(PVA) 1g
二氯甲烷 5ml
去离子水 100ml
精密称取230mg PLGA溶于5ml二氯甲烷中，作为油相；将油相加入到5ml异烟肼水溶液超声15min，作为初乳；将初乳在1200rpm搅拌的条件下加入到95ml 1％PVA水溶液中，持续搅拌20min，将转速调制500rpm，搅拌4h，至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。即得。
所述原位凝胶制备方法为：
泊洛沙姆407 23.9g
泊洛沙姆188 2g
羟丙基甲基纤维素 1.5g
去离子水 100ml
各取上述处方量的F127、F68、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型温敏凝胶；
取15mg的异烟肼-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在10ml的改进型温敏凝胶中，即得。
实施例6
异烟肼 80mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 210mg
聚乙烯醇(PVA) 2g
二氯甲烷 10ml
去离子水 90ml
精密称取210mg PLGA溶于10ml二氯甲烷中，作为油相；将油相加入到20ml异烟肼水溶液超声15min，作为初乳；将初乳在1500rpm搅拌的条件下加入到70ml 2.8％PVA水溶液中，持续搅拌20min，将转速调制500rpm，搅拌4h，至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。即得。
所述原位凝胶制备方法为：
羟丙基甲基纤维素 1.5g
海藻酸钠 2g
去离子水 100ml
各取上述处方量的海藻酸钠、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型离子敏感型凝胶；
取25mg的异烟肼-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在20ml的改进型离子敏感型凝胶中，即得。
实施例7：
利福平的微球制备：
利福平(RFP) 45mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 160mg
聚乙烯醇(PVA) 3.1g
二氯甲烷 3.5ml
去离子水 30ml
利福平的微球制备方法：称取160mg PLGA溶于二氯甲烷中，加入45mg利福平，超声溶解，作为有机相；将3.1gPVA溶于30ml去离子水中，作为水相。在1000rpm搅拌条件下，将有机相缓缓注入水相中，高速搅拌一定时间，600rpm搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥，即得。
所述原位凝胶制备方法为：
泊洛沙姆407 29g
泊洛沙姆188 3.9g
海藻酸钠 3.1g
羟丙基甲基纤维素 3.9g
去离子水 100ml
各取上述处方量的F127、F68、海藻酸钠、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得温度-离子双敏型凝胶；
取44mg的利福平-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在15ml的温度-离子双敏型原位凝胶中，即得。
实施例8
利福平的微球制备：
利福平(RFP) 8.2mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 22mg
聚乙烯醇(PVA) 0.15g
二氯甲烷 0.8ml
去离子水 7.4ml
利福平的微球制备方法：称取22mg PLGA溶于二氯甲烷中，加入8.2mg利福平，超声溶解，作为有机相；将0.15gPVA溶于7.4ml去离子水中，作为水相。在1200rpm搅拌条件下，将有机相缓缓注入水相中，高速搅拌一定时间，400rpm搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥，即得。
所述原位凝胶制备方法为：
泊洛沙姆407 21g
泊洛沙姆188 0.4g
羟丙基甲基纤维素 0.3g
去离子水 100ml
各取上述处方量的F127、F68、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型温敏凝胶；
取34mg的利福平-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在9ml的改进型温敏凝胶中，即得。
实施例9
利福平的微球制备：
利福平(RFP) 42mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 145mg
聚乙烯醇(PVA) 3g
二氯甲烷 0.8ml
去离子水 50ml
利福平的微球制备方法：称取145mg PLGA溶于二氯甲烷中，加入42mg利福平，超声溶解，作为有机相；将3gPVA溶于50ml去离子水中，作为水相。在1200rpm搅拌条件下，将有机相缓缓注入水相中，高速搅拌一定时间，400rpm搅拌至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥，即得。
所述原位凝胶制备方法为：
海藻酸钠 1.8g
羟丙基甲基纤维素 2.4g
去离子水 100ml
各取上述处方量的海藻酸钠、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型离子敏感型凝胶
取18mg的利福平-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在16ml的改进型离子敏感型凝胶中，即得。
实施例10：
异烟肼 15mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 150mg
聚乙烯醇(PVA) 0.5g
二氯甲烷 1.8ml
去离子水 45.4ml
精密称取150mg PLGA溶于1ml二氯甲烷中，作为油相；将油相加入到0.4ml异烟肼水溶液超声15min，作为初乳；将初乳在1400rpm搅拌的条件下加入到45ml 1％PVA水溶液中，持续搅拌20min，将转速调制500rpm，搅拌4h，至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。即得。
原位凝胶制备方法为：
泊洛沙姆407 21.5g
泊洛沙姆188 4g
海藻酸钠 0.4g
羟丙基甲基纤维素 2.5g
去离子水 100ml
各取上述处方量的F127、F68、海藻酸钠、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得温度-离子双敏型凝胶；
取15mg的异烟肼-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在10ml的温度离子-双敏型原位凝胶中，即得。
实施例11
异烟肼 180mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 320mg
聚乙烯醇(PVA) 3.3g
二氯甲烷 18ml
去离子水 100ml
精密称取320mg PLGA溶于18ml二氯甲烷中，作为油相；将油相加入到5ml异烟肼水溶液超声15min，作为初乳；将初乳在1200rpm搅拌的条件下加入到95ml 3.5％PVA水溶液中，持续搅拌20min，将转速调制500rpm，搅拌4h，至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。即得。
所述原位凝胶制备方法为：
泊洛沙姆407 27.7g
泊洛沙姆188 3.9g
羟丙基甲基纤维素 2.5g
去离子水 100ml
各取上述处方量的F127、F68、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型温敏凝胶；
取15mg的异烟肼-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在10ml的改进型温敏凝胶中，即得。
实施例12
异烟肼 46mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 357mg
聚乙烯醇(PVA) 3.2g
二氯甲烷 20ml
去离子水 120ml
精密称取357mg PLGA溶于20ml二氯甲烷中，作为油相；将油相加入到20ml异烟肼水溶液超声15min，作为初乳；将初乳在1500rpm搅拌的条件下加入到100ml 3.2％PVA水溶液中，持续搅拌20min，将转速调制500rpm，搅拌4h，至有机相完全挥发后，抽滤收集微球，蒸馏水洗涤3遍，减压干燥。即得。
所述原位凝胶制备方法为：
羟丙基甲基纤维素 2.5g
海藻酸钠 2g
去离子水 100ml
各取上述处方量的海藻酸钠、HPMC，加入到100ml去离子水中，适当搅拌后，放入4℃冰箱中溶胀24h，即得改进型离子敏感型凝胶；
取25mg的异烟肼-PLGA微球，在搅拌的条件下均匀分散在20ml的改进型离子敏感型凝胶中，即得。
Claims (9)
1.一种用于局部给药的原位凝胶缓释制剂，包括药物活性成分微球及温度-离子敏感型原位凝胶，所述温度-离子型凝胶剂成凝胶温度保持在15-36℃，且存在钙离子作用；所述药物活性成分为利福平或异烟肼；药物活性成分微球与温度-离子敏感型凝胶的比例关系为：5-50mg∶1-50ml，将药物活性成分微球在搅拌的条件下均匀分散在原位凝胶中；
其中，所述原位凝胶的原料组成为：
泊洛沙姆407 20-30g 泊洛沙姆188 0.1-10g
海藻酸钠 0.05g-5g 羟丙基甲基纤维素 0.1g-5g
去离子水 100ml；
所述药物活性成分微球的原料为：
药物活性成分 5-50mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 10-200mg
聚乙烯醇 0.1-5g
二氯甲烷 0.1-5ml
去离子水 5-50ml。
2.如权利要求1所述的原位凝胶缓释制剂，其特征在于微球原料组成为：
利福平 10-30mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 30-20mg
聚乙烯醇 0.2-2g
二氯甲烷 1-3ml
去离子水 10-25ml
所述原位凝胶的原料组成为：
泊洛沙姆407 23-27g
泊洛沙姆188 0.5-3g
海藻酸钠 0.5g-2g
羟丙基甲基纤维素 0.5g-2g
去离子水 100ml。
3.一种用于局部给药的原位凝胶缓释制剂，包括药物活性成分微球及温度-离子敏感型原位凝胶，所述温度-离子型凝胶剂成凝胶温度保持在15-36℃，且存在钙离子作用；药 物活性成分微球与温度-离子敏感型凝胶的比例关系为：5-50mg∶1-50ml，将药物活性成分微球在搅拌的条件下均匀分散在原位凝胶中；
其中，微球原料组成为：
异烟肼 50-150mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 180-230mg
聚乙烯醇 1-2.5g
二氯甲烷 2-10ml
去离子水 5-100ml
所述原位凝胶的原料为：
泊洛沙姆407 23-27g
泊洛沙姆188 0.5-3g
海藻酸钠 0.5g-2g
羟丙基甲基纤维素 0.5g-2g
去离子水 100ml。
4.一种用于局部给药的原位凝胶缓释制剂，包括药物活性成分微球及原位凝胶，药物活性成分微球与凝胶剂在5-50mg∶1-50ml的比例条件下，将药物活性成分微球在搅拌的条件下均匀分散在原位凝胶中，其中原位凝胶的原料为：
泊洛沙姆407 20-30g
泊洛沙姆188 0.1-10g
羟丙基甲基纤维素 0.1-5g
去离子水 100ml；
所述药物活性成分微球为异烟肼或利福平微球；
其中异烟肼的微球原料组成为：
异烟肼 0.1-200mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 50-400mg
聚乙烯醇 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-50ml
去离子水 5-550ml；
其中利福平微球的原料为：
利福平 5-50mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 10-200mg
聚乙烯醇 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-5ml
去离子水 5-50ml。
5.一种用于局部给药的原位凝胶缓释制剂，包括药物活性成分微球及原位凝胶，药物活性成分微球与凝胶剂在5-50mg∶1-50ml的比例条件下，将药物活性成分微球在搅拌的条件下均匀分散在原位凝胶中，其中原位凝胶的原料为：
泊洛沙姆407 20-30g
泊洛沙姆188 0.1-10g
甲基纤维素 0.1-5g
去离子水 100ml
所述药物活性成分微球为异烟肼或利福平微球；
其中异烟肼的微球原料组成为：
异烟肼 0.1-200mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 50-400mg
聚乙烯醇 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-50ml
去离子水 5-550ml；
其中利福平微球的原料为：
利福平 5-50mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 10-200mg
聚乙烯醇 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-5ml
去离子水 5-50ml。
6.一种用于局部给药的原位凝胶缓释制剂，包括药物活性成分微球及原位凝胶，药物活性成分微球与凝胶剂在5-50mg∶1-50ml的比例条件下，将药物活性成分微球在搅拌的条件下均匀分散在原位凝胶中，其中原位凝胶的原料为：
海藻酸钠 0.05g-5g
羟丙基甲基纤维素 0.1g-5g
去离子水 100ml；
所述药物活性成分微球为异烟肼或利福平微球；
其中异烟肼的微球原料组成为：
异烟肼 0.1-200mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 50-400mg
聚乙烯醇 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-50ml
去离子水 5-550ml；
其中利福平微球的原料组成为：
利福平 5-50mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 10-200mg
聚乙烯醇 0.1-5g
二氯甲烷 0.5-5ml
去离子水 5-50ml。
7.如权利要求6所述的原位凝胶缓释制剂，其中原位凝胶的原料为：
海藻酸钠 0.5-2g
羟丙基甲基纤维素 0.5-2g
去离子水 100ml；
其中异烟肼的微球原料为：
异烟肼 50-150mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 180-230mg
聚乙烯醇 1-2.5g
二氯甲烷 2-10ml
去离子水 5-100ml；
其中利福平微球的原料为：
利福平 10-30mg
聚乳酸-羟基乙酸共聚物 30-120mg
聚乙烯醇 0.2-2g
二氯甲烷 1-3ml
去离子水 10-25ml。
8.如权利要求1-7任意一种所述的原位凝胶缓释制剂，其中用于局部给药为经气管镜肺部介入治疗药物或者经手术将缓释原位凝胶置于骨结核或身体其它易于感染结核的病灶部位。
9.如权利要求8所述的原位凝胶缓释制剂，其特征在于所述病灶部位为肺部局部病灶。
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