CN102133242A - 一种茯苓提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明茯苓提取物经乙醇提取再通过大孔吸附树脂纯化得到，富集了更多的有效部位，并且经大鼠记忆障碍模型试验表明，能够改善模型大鼠的学习记忆能力，使模型大鼠错误次数减少，潜伏期延长。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药提取物，特别涉及一种茯苓提取物及其制备方法。
背景技术
茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf，为多孔菌科(Polyporaceae)真菌茯苓的干燥菌核，主产于云南、安徽、湖北等省，其它省区大多也有栽培生产。茯苓是卫生部颁布的第一批，按照传统既是食品又是药品的34个品种之一。作为食品，茯苓含有多糖、蛋白质和硒、镁、钾、钠等几十种微量元素，具有美容，抗衰老等保健作用。作为药品，茯苓为《中华人民共和国药典》收载品种。其性平，味甘、淡。归心、肺、脾、肾经。具有利水渗湿、健脾补中、宁心安神的功效。
茯苓的化学成分较为复杂，有多糖、三萜、脂肪酸、甾醇及酶等。多糖和三萜为其主要成分。茯苓多糖占茯苓干菌核质量的70％～90％，是茯苓中含量最多的一大类成分，具有易于分离纯化、来源丰富、成本低廉等特点，茯苓多糖及其衍生物具有增强免疫、延缓衰老、抗肿瘤、抗病毒和降血糖等作用，其生产制备工艺已被进行深入研究。
茯苓三萜类化合物是茯苓的另一大成分，中外学者的大量研究表明，茯苓三萜具有很好的药理活性，具有抗炎、免疫调节等作用，但是对其制备工艺的研究未见报道，尤其是采用大孔树脂富集三萜活性部位的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种茯苓提取物，本发明的另一个目的在于提供其制备方法，本发明的第三个目的在于提供其质量检测方法。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
本发明茯苓提取物的制备方法包括如下步骤：
步骤1：取茯苓丁或将茯苓经粉碎过5-200目筛；
步骤2：50-100％乙醇回流提取；
步骤3：非极性或弱极性大孔吸附树脂纯化。
该茯苓提取物中总三萜含量为50-97％；该茯苓提取物中总三萜含量优选为80-97％；该茯苓提取物中总三萜含量进一步优选为80-97％；更优选92％、95％、96％、97％。
将以上所得提取物，加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液。
上述步骤2中，所述乙醇提取为加50-100％乙醇，回流提取1-3次，每次提取0.5-2小时，溶剂用量为5-15重量倍；
上述步骤3中，所述大孔吸附树脂为非极性或弱极性，优选HPD826、D101氢键或弱极性大孔吸附树脂；
以茯苓药材计，所述茯苓乙醇提取物上样液浓度为0.1-0.4g/mL，吸附流速为1-9BV/h，树脂柱径高比为1∶6-1∶15，上样量为0.2-1.5g/mL，0-40％乙醇洗脱1-5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为3-8BV/h，用60％-90％乙醇洗脱2-6倍树脂体积，洗脱流速为3-9BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得。
本发明茯苓提取物经乙醇提取再通过大孔吸附树脂纯化得到，富集了更多的有效部位，并且经大鼠记忆障碍模型试验表明，能够改善模型大鼠的学习记忆能力，使模型大鼠错误次数减少，潜伏期延长。
实验例1本发明茯苓提取物致大鼠记忆障碍模型的改善作用
(一)实验材料
1.实验动物
SD大鼠，雄性，体重256.3±8.4g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2009-2010；
2.药品与试剂
受试药：茯苓提取物，按实施例5方法制备，给药前用0.5％CMC-Na溶解配成溶液。
东莨菪碱，购于Fluka公司，生产批号：2040506，大鼠剂量为0.5g/kg。
3.器材
大鼠跳台仪，箱内隔成2室，可同时测定2只大鼠。
(二)实验方法与结果
1.分组及给药
大鼠按体重随机分成4组，即模型对照组、正常对照组、茯苓提取物大、小剂量组，每组12只，茯苓提取物大、小剂量组连续给药4天，模型组与正常组给予等容积的0.5％CMC-Na。
2.实验方法
第四天给药后30分钟(准确计时)腹腔注射东莨菪碱造模，30分钟后进行训练(记忆获得实验)，24小时后测试(记忆巩固实验)。模型组注射东莨菪碱造模，30分钟进行训练，24小时后测试。正常组直接进行训练，24小时后测试。
跳台行为学实验过程
将同组2只大鼠同时放入跳台仪中，适应环境3分钟，训练5分钟，记录仪记录第一次跳上跳台的时间(潜伏期)，安全期时间，5分钟内的跳下次数(错误次数)。24小时后，进行记忆巩固测试，先将大鼠放到跳台上，记录第一次跳下时间(触电潜伏期)，安全期时间，5分钟内的跳下次数(错误次数)。
3.统计方法
使用SAS8.0统计软件进行分析，实验结果以均数±标准误表示。采用两样本t检验和非参数检验(Mann-Whitney Test)进行两两比较，采用单因素方差分析(ANOVA)进行多组间比较，组间差异采用LSD(方差齐)或者Games-Howell法(方差不齐)，分别将记忆巩固测试阶段各组给药大鼠与模型组大鼠和正常组大鼠进行比较，求得组间差异。
4.实验结果
表1茯苓提取物抗痴呆实验结果
注：&&P＜0.01，与对照组比较；**P＜0.01，与模型组比较；*P＜0.05，与模型组比较
(三)结论
与模型组相比，茯苓提取物部位大、小剂量组均可改善模型大鼠的学习记忆能力，使模型大鼠错误次数减少，潜伏期延长。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施方式
实施例1：胶囊剂
取茯苓丁1kg，90％乙醇6L回流提取2次，每次提取1小时，减压回收溶剂至一定体积，使溶液浓度为0.3g/mL(以生药材量计)，加60％乙醇进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)。通过3L HPD-826大孔吸附树脂，吸附流速1BV/h，树脂柱径高比为1∶9，上样量为0.4g/mL(以生药材量计)，水洗5倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明茯苓总三萜提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成胶囊剂；
总三萜含量测定方法：
对照品溶液的制备：称取茯苓酸对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
样品溶液制备：称取茯苓提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
测定方法：采用香草醛-高氯酸可见分光光度法，分别精密吸取一定量的茯苓酸对照品溶液和样品溶液，置于西林瓶中，置于沸水浴中使溶剂挥发干，分别加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，于60℃水浴中加热2分钟，取出，迅速用冷水冷却，再加入冰醋酸5mL，放置30min，测定555nm波长下吸光度，外标两点法计算含量，经测定总三萜含量为95％。
实施例2：片剂
取茯苓丁1kg，70％乙醇10L回流提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂至一定体积，使溶液浓度为0.3g/mL(以生药材量计)，加55％乙醇进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)。通过4L HPD-826大孔吸附树脂，吸附流速1BV/h，树脂柱径高比为1∶12，上样量为0.25g/mL(以生药材量计)，水洗4倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明茯苓总三萜提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成胶囊剂；
总三萜含量测定方法：
对照品溶液的制备：称取茯苓酸对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
样品溶液制备：称取茯苓提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
测定方法：采用香草醛-高氯酸可见分光光度法，分别精密吸取一定量的茯苓酸对照品溶液和样品溶液，置于西林瓶中，置于沸水浴中使溶剂挥发干，分别加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，于60℃水浴中加热2分钟，取出，迅速用冷水冷却，再加入冰醋酸5mL，放置30min，测定555nm波长下吸光度，外标两点法计算含量，经测定总三萜含量为96％。
实施例3：丸剂
取茯苓丁1kg，80％乙醇8L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂至一定体积，使溶液浓度为0.2g/mL(以生药材量计)，加60％乙醇进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)。通过5L HPD-826大孔吸附树脂，吸附流速1BV/h，树脂柱径高比为1∶15，上样量为0.3g/mL(以生药材量计)，水洗2倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，90％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明茯苓总三萜提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成丸剂；
总三萜含量测定方法：
对照品溶液的制备：称取茯苓酸对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
样品溶液制备：称取茯苓提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
测定方法：采用香草醛-高氯酸可见分光光度法，分别精密吸取一定量的茯苓酸对照品溶液和样品溶液，置于西林瓶中，置于沸水浴中使溶剂挥发干，分别加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，于60℃水浴中加热2分钟，取出，迅速用冷水冷却，再加入冰醋酸5mL，放置30min，测定555nm波长下吸光度，外标两点法计算含量，经测定总三萜含量为92％。
实施例4：口服液体制剂
取茯苓丁1kg，80％乙醇8L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂至一定体积，使溶液浓度为0.3g/mL(以生药材量计)，加60％乙醇进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)。通过5 LHPD-826大孔吸附树脂，吸附流速1BV/h，树脂柱径高比为1∶15，上样量为0.4g/mL(以生药材量计)，40％乙醇洗4倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，90％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明茯苓总三萜提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成口服液体制剂；
总三萜含量测定方法：
对照品溶液的制备：称取茯苓酸对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
样品溶液制备：称取茯苓提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
测定方法：采用香草醛-高氯酸可见分光光度法，分别精密吸取一定量的茯苓酸对照品溶液和样品溶液，置于西林瓶中，置于沸水浴中使溶剂挥发干，分别加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，于60℃水浴中加热2分钟，取出，迅速用冷水冷却，再加入冰醋酸5mL，放置30min，测定555nm波长下吸光度，外标两点法计算含量，经测定总三萜含量为97％。
实施例5：注射剂
取茯苓丁1kg，80％乙醇8L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂至一定体积，使溶液浓度为0.3g/mL(以生药材量计)，通过5L HPD-826大孔吸附树脂，吸附流速1BV/h，树脂柱径高比为1∶15，上样量为0.4g/mL(以生药材量计)，40％乙醇洗4倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，90％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明茯苓总三萜提取物，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂；
总三萜含量测定方法：
对照品溶液的制备：称取茯苓酸对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
样品溶液制备：称取茯苓提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
测定方法：采用香草醛-高氯酸可见分光光度法，分别精密吸取一定量的茯苓酸对照品溶液和样品溶液，置于西林瓶中，置于沸水浴中使溶剂挥发干，分别加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，于60℃水浴中加热2分钟，取出，迅速用冷水冷却，再加入冰醋酸5mL，放置30min，测定555nm波长下吸光度，外标两点法计算含量，经测定总三萜含量为97％。
实施例6：
取茯苓丁1kg，90％乙醇6L回流提取2次，每次提取1小时，减压回收溶剂至一定体积，使溶液浓度为0.3g/mL(以生药材量计)，加60％乙醇进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)。通过3L HPD-826大孔吸附树脂，吸附流速1BV/h，树脂柱径高比为1∶9，上样量为0.4g/mL(以生药材量计)，10％乙醇洗5倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明茯苓总三萜提取物；
总三萜含量测定方法：
对照品溶液的制备：称取茯苓酸对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
样品溶液制备：称取茯苓提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
测定方法：采用香草醛-高氯酸可见分光光度法，分别精密吸取一定量的茯苓酸对照品溶液和样品溶液，置于西林瓶中，置于沸水浴中使溶剂挥发干，分别加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，于60℃水浴中加热2分钟，取出，迅速用冷水冷却，再加入冰醋酸5mL，放置30min，测定555nm波长下吸光度，外标两点法计算含量，经测定总三萜含量为95％。
实施例7：
取茯苓丁1kg，70％乙醇10L回流提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂至一定体积，使溶液浓度为0.3g/mL(以生药材量计)，加55％乙醇进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)。通过4L HPD-826大孔吸附树脂，吸附流速1BV/h，树脂柱径高比为1∶12，上样量为0.25g/mL(以生药材量计)，水洗4倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明茯苓总三萜提取物；
总三萜含量测定方法：
对照品溶液的制备：称取茯苓酸对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
样品溶液制备：称取茯苓提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
测定方法：采用香草醛-高氯酸可见分光光度法，分别精密吸取一定量的茯苓酸对照品溶液和样品溶液，置于西林瓶中，置于沸水浴中使溶剂挥发干，分别加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，于60℃水浴中加热2分钟，取出，迅速用冷水冷却，再加入冰醋酸5mL，放置30min，测定555nm波长下吸光度，外标两点法计算含量，经测定总三萜含量为96％。
实施例8：
取茯苓丁1kg，80％乙醇8L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂至一定体积，使溶液浓度为0.2g/mL(以生药材量计)，加60％乙醇进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)。通过5L HPD-826大孔吸附树脂，吸附流速1BV/h，树脂柱径高比为1∶15，上样量为0.3g/mL(以生药材量计)，水洗2倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，90％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明茯苓总三萜提取物；
总三萜含量测定方法：
对照品溶液的制备：称取茯苓酸对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
样品溶液制备：称取茯苓提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
测定方法：采用香草醛-高氯酸可见分光光度法，分别精密吸取一定量的茯苓酸对照品溶液和样品溶液，置于西林瓶中，置于沸水浴中使溶剂挥发干，分别加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，于60℃水浴中加热2分钟，取出，迅速用冷水冷却，再加入冰醋酸5mL，放置30min，测定555nm波长下吸光度，外标两点法计算含量，经测定总三萜含量为92％。
实施例9：
取茯苓丁1kg，80％乙醇8L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂至一定体积，使溶液浓度为0.3g/mL(以生药材量计)，加60％乙醇进行稀释，使溶液浓度为0.1g/mL(以生药材量计)。通过5LHPD-826大孔吸附树脂，吸附流速1BV/h，树脂柱径高比为1∶15，上样量为0.4g/mL(以生药材量计)，40％乙醇洗4倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，90％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明茯苓总三萜提取物；
总三萜含量测定方法：
对照品溶液的制备：称取茯苓酸对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
样品溶液制备：称取茯苓提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
测定方法：采用香草醛-高氯酸可见分光光度法，分别精密吸取一定量的茯苓酸对照品溶液和样品溶液，置于西林瓶中，置于沸水浴中使溶剂挥发干，分别加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，于60℃水浴中加热2分钟，取出，迅速用冷水冷却，再加入冰醋酸5mL，放置30min，测定555nm波长下吸光度，外标两点法计算含量，经测定总三萜含量为97％。
实施例10：
取茯苓丁1kg，80％乙醇8L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂至一定体积，使溶液浓度为0.3g/mL(以生药材量计)，通过5L HPD-826大孔吸附树脂，吸附流速1BV/h，树脂柱径高比为1∶15，上样量为0.4g/mL(以生药材量计)，40％乙醇洗4倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，90％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明茯苓总三萜提取物；
总三萜含量测定方法：
对照品溶液的制备：称取茯苓酸对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
样品溶液制备：称取茯苓提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
测定方法：采用香草醛-高氯酸可见分光光度法，分别精密吸取一定量的茯苓酸对照品溶液和样品溶液，置于西林瓶中，置于沸水浴中使溶剂挥发干，分别加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，于60℃水浴中加热2分钟，取出，迅速用冷水冷却，再加入冰醋酸5mL，放置30min，测定555nm波长下吸光度，外标两点法计算含量，经测定总三萜含量为97％。
Claims (10)
1.一种具有抗痴呆作用的茯苓提取物，其特征在于该茯苓提取物由如下制备方法包括如下步骤：
步骤1：取茯苓丁或将茯苓经粉碎过5-200目筛；
步骤2：50-100％乙醇回流提取；
步骤3：非极性或弱极性大孔吸附树脂纯化；
该茯苓提取物中总三萜含量为50-97％。
2.如权利要求1所述的茯苓提取物，其特征在于该茯苓提取物制备中，步骤2中乙回流提取1-3次，每次提取0.5-2小时，溶剂用量为5-15重量倍。
3.如权利要求1所述的茯苓提取物，其特征在于该茯苓提取物制备中，步骤3大孔吸附树脂为HPD826、D101氢键或弱极性大孔吸附树脂。
4.如权利要求1所述的茯苓提取物，其特征在于该茯苓提取物制备中，步骤3中茯苓乙醇提取物上样液浓度为0.1-0.4g/mL，吸附流速为1-9BV/h，树脂柱径高比为1∶6-1∶15，按照药材重量与树脂体积比计，上样量为0.2-1.5g/mL，0-40％乙醇洗脱1-5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为3-8BV/h，用60％-90％乙醇洗脱2-6倍树脂体积，洗脱流速为3-9BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得。
5.如权利要求1-4任一所述的茯苓提取物，其特征在于加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液。
6.一种具有抗痴呆作用的茯苓提取物的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
步骤1：取茯苓丁或将茯苓经粉碎过5-200目筛；
步骤2：50-100％乙醇回流提取；
步骤3：非极性或弱极性大孔吸附树脂纯化。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2中乙醇回流提取1-3次，每次提取1-2小时，溶剂用量为5-15重量倍。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3大孔吸附树脂为HPD826、D101氢键或弱极性大孔吸附树脂。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3中，以茯苓药材计，茯苓乙醇提取物上样液浓度为0.1-0.4g/mL，吸附流速为1-9 BV/h，树脂柱径高比为1∶6-1∶15，上样量为0.2-1.5g/mL，0-40％乙醇洗脱1-5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为3-8BV/h，用60％-90％乙醇洗脱2-6倍树脂体积，洗脱流速为3-9BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得。
10.如权利要求1-4任一所述的茯苓提取物在制备抗痴呆作用药物中的应用。
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| C14 | Grant of patent or utility model | ||
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