CN102093374A

CN102093374A - 一种高效提取喜树碱衍生物的方法

Info

Publication number: CN102093374A
Application number: CN 201010565054
Authority: CN
Inventors: 祖元刚; 史伟国; 杨磊; 祖柏实; 赵春建; 李庆勇
Original assignee: Northeast Forestry University
Current assignee: Northeast Forestry University
Priority date: 2010-11-30
Filing date: 2010-11-30
Publication date: 2011-06-15

Abstract

本发明涉及一种高效提取喜树碱衍生物的方法，采用脱脂的喜树果和干燥的喜树叶混合匀浆提取，并根据逆境生物学原理，应用喜树种芽与新鲜喜树叶鲜磨混合匀浆，进而提高原料中喜树碱衍生物的产量。在此基础上，应用负压空化混旋高效强化浸取，负压空化液液混旋萃取，重结晶和制备型高效液相色谱精制等系列创新研究，获得了喜树碱、10-羟基喜树碱的高效提取、纯化新工艺。

Description

一种高效提取喜树碱衍生物的方法

所属技术领域：

本发明涉及一种高效提取喜树碱衍生物的方法。

背景技术：

进入21世纪以来，癌症已经成了人类健康的一大隐患，严重威胁着人类的健康。由于喜树碱及10-羟基喜树碱天然在抗肿瘤方面具有独特的疗效，近年来，国际医药主流市场对喜树碱和10-羟基喜树碱的需求量急剧上升，但是现有的提取技术得率低，资源浪费大，因而严重制约了喜树碱和10-羟基喜树碱制药工业的发展。

喜树碱的全合成及以喜树碱为母体化合物经人工半合成的方法获得10-羟基喜树碱已经取得成功，但是由于路线长、产率低、生产成本高，无法投入工业化生产。因此，利用现代技术提取分离喜树碱衍生物，提高喜树碱衍生物产量已经成为目前研究的热点，而目前的提取喜树碱衍生物生产工艺落后，成本高昂，已成为喜树碱类抗癌药物发展的瓶颈。因此找到一种得率高、节约资源的喜树碱和10-羟基喜树碱的生产方法势在必行。

采用具有自主知识产权的提取、分离技术，探索研究喜树碱衍生物生产的新工艺路线，这必将为喜树碱衍生物的生产和喜树资源的合理开发利用提供科学资料和研究方向，同时也为抗癌药物的产业化开发提供一条具有重要价值的新渠道。

发明内容：

本发明的目的在于通过选取可再生的资源喜树叶、喜树果实和喜树种芽为原料混合高效提取喜树碱衍生物。首先以脱脂的喜树果和干燥的喜树叶为原料，混合匀浆提取喜树碱和10-羟基喜树碱，两种原料的混合比例为1∶2-1∶5，匀浆溶剂为40-80％乙醇，料液比为1∶10-1∶20，匀浆时间为6-15min。进而采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱，以40-80％乙醇作为提取溶剂，料液比1∶10-1∶20，通气量50-100L/min，负压空化提取15-30min。然后称取经过筛选的新喜树种子，用25℃清水浸泡后，在25℃，有光照的条件下进行发芽11-13天。以新鲜喜树叶和喜树种芽为原料进行纯水鲜磨混合匀浆，两种原料的混合比例为1∶3-1∶8，料液比1∶8-1∶20，鲜磨匀浆6-12min；在此基础上，采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱，以40-80％乙醇作为提取溶剂，料液比1∶10-1∶20，负压空化提取15-25min。再将脱脂的喜树果和干燥喜树叶的混合匀浆提取液与新鲜喜树叶和喜树种芽鲜磨匀浆提取液合并，浓缩至3/5-4/5，以二氯甲烷为萃取溶剂，浓缩物与萃取溶剂的比为1∶1-1∶2，负压空化搅拌时间为3-5min，萃取液经浓缩加乙醇进行4步重结晶，喜树碱的纯度可达95-98％。然后对分离喜树碱后的萃余液进行分离纯化，通过液相制备色谱精制10-羟基喜树碱，以乙腈-水(体积比为2∶8-3∶7)为流动相，流速为1.5-2.0mL/min，上样量为3-5mL；在该工艺条件下得到了10-羟基喜树碱单体，纯度达95-98％。

本发明的优点是：

1.采用两种原料以一定比例混合高效提取两种抗肿瘤生物碱，提取率高于每种原料分别提取的提取率，对综合利用植物资源，提高生产效率，增加设备利用率，减少设备投资，具有高效、节能、操作简单等优点。

2.打破了原料要经过先干燥粉碎再提取的常规观念，将新鲜细胞鲜磨混合匀浆引用到植物提取领域并将二者有机结合，进一步提高原料中的目的产物的产量，为高效利用有限的宝贵资源进行了一次全新的尝试，与传统提取工艺相比，具有安全、环保、提取率更高等方面的优势。

3.为喜树碱、10-羟基喜树碱的提取寻找到了可持续利用的新资源—喜树果实、喜树种芽和喜树叶，同时打破了利用单一原料进行提取加工的传统理念，为多种原料综合利用提供新思路，新技术，为植物提取物的产业开发拓宽了视角。

具体实施方式：

下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任一个或类似实例。

实施例一：

1喜树果中含有大量的油脂类成分，在提取喜树碱和10-羟基喜树碱之前，采用超临界流体CO₂萃取喜树果去除油脂，萃取压力30MPa、萃取温度45℃、萃取时间3.5h，分离压力在8-12MPa，分离温度在25-35℃。

2以脱脂的喜树果和干燥的喜树叶为原料，混合匀浆提取两种生物碱，两种原料的混合比例为1∶2.6，匀浆溶剂为65％乙醇，料液比为1∶12，匀浆时间为6.5min。进而采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱，以55％乙醇作为提取溶媒，料液比1∶15，通气量70L/min，负压空化提取25min。

3称取经过筛选的新喜树种子，用25℃清水浸泡后，在25℃，有光照的条件下进行发芽11天。

4以新鲜喜树叶和喜树种芽为原料进行纯水鲜磨混合匀浆，两种原料的混合比例为1∶5，料液比1∶15，鲜磨匀浆7.5min。在此基础上，采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱，以75％乙醇作为提取溶剂，料液比1∶12，负压空化提取20min。

5将脱脂的喜树果和干燥喜树叶的混合匀浆提取液与新鲜喜树叶和喜树种芽鲜磨混合匀浆提取液合并，浓缩至4/5，以二氯甲烷为萃取溶剂，浓缩物与萃取溶剂的比为1∶1，负压空化搅拌时间为4min，萃取液经浓缩加乙醇进行4步重结晶分离纯化喜树碱。

6对分离喜树碱后的萃余液进行分离纯化，通过液相制备色谱精制10-羟基喜树碱，以乙腈-水(体积比为3∶7)为流动相，流速为1.5mL/min，上样量为3mL。

实施例二：

1喜树果中含有大量的油脂类成分，在提取喜树碱和10-羟基喜树碱之前，采用超临界流体CO₂萃取喜树果去除油脂，萃取压力33MPa、萃取温度40℃、萃取时间4.0h，分离压力在8-12MPa，分离温度在25-35℃。

2以脱脂的喜树果和干燥的喜树叶为原料，混合匀浆提取两种生物碱，两种原料的混合比例为1∶3，匀浆溶剂为60％乙醇，料液比为1∶15，匀浆时间为7.0min。进而采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱，以60％乙醇作为提取溶媒，料液比1∶12，通气量75L/min，负压空化提取20min。

3称取经过筛选的新喜树种子，用25℃清水浸泡后，在25℃，有光照的条件下进行发芽12天。

4以新鲜喜树叶和喜树种芽为原料进行纯水鲜磨混合匀浆，两种原料的混合比例为1∶6，料液比1∶12，鲜磨匀浆7.0min。在此基础上，采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱，以70％乙醇作为提取溶剂，料液比1∶15，负压空化提取25min。

5将脱脂的喜树果和干燥喜树叶的混合匀浆提取液与新鲜喜树叶和喜树种芽鲜磨混合匀浆提取液合并，浓缩至4/5，以二氯甲烷为萃取溶剂，浓缩物与萃取溶剂的比为1∶1.5，负压空化搅拌时间为3.5min，萃取液经浓缩加乙醇进行4步重结晶分离纯化喜树碱。

6对分离喜树碱后的萃余液进行分离纯化，通过液相制备色谱精制10-羟基喜树碱，以乙腈-水(体积比为3∶7)为流动相，流速为2.0m L/min，上样量为3.5mL。

实施例三：

1喜树果中含有大量的油脂类成分，在提取喜树碱和10-羟基喜树碱之前，采用超临界流体CO₂萃取喜树果去除油脂，萃取压力35MPa、萃取温度45℃、萃取时间4.5h，分离压力在8-12MPa，分离温度在25-35℃。

2以脱脂的喜树果和干燥的喜树叶为原料，混合匀浆提取两种生物碱，两种原料的混合比例为1∶4，匀浆溶剂为70％乙醇，料液比为1∶18，匀浆时间为7.5min。进而采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱，以65％乙醇作为提取溶媒，料液比1∶14，通气量80L/min，负压空化提取30min。

3称取经过筛选的新喜树种子，用25℃清水浸泡后，在25℃，有光照的条件下进行发芽13天。

4以新鲜喜树叶和喜树种芽为原料进行纯水鲜磨混合匀浆，两种原料的混合比例为1∶5.5，料液比1∶16，鲜磨匀浆8.0min。在此基础上，采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱，以65％乙醇作为提取溶剂，料液比1∶16，负压空化提取23min。

5将脱脂的喜树果和干燥喜树叶的混合匀浆提取液与新鲜喜树叶和喜树种芽鲜磨混合匀浆提取液合并，浓缩至3/5，以二氯甲烷为萃取溶剂，浓缩物与萃取溶剂的比为1∶2，负压空化搅拌时间为4.5min，萃取液经浓缩加乙醇进行4步重结晶分离纯化喜树碱。

6对分离喜树碱后的萃余液进行分离纯化，通过液相制备色谱精制10-羟基喜树碱，以乙腈-水(体积比为3∶7)为流动相，流速为2.0mL/min，上样量为4.0mL。

Claims

1.一种高效提取喜树碱衍生物的方法，首先采用脱脂的喜树果和干燥的喜树叶混合匀浆提取喜树碱和10-羟基喜树碱，采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱；以新鲜喜树叶和喜树种芽为原料进行纯水鲜磨混合匀浆，采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱；采用负压空化液液混旋萃取和多步重结晶工艺对混合提取物浓缩物中喜树碱进行分离纯化，喜树碱的纯度可达到95-98％，进而通过液相制备色谱精制10-羟基喜树碱，得到了10-羟基喜树碱单体，纯度达95-98％。

2.根据权利要求1所述的高效提取喜树碱衍生物的方法，其特征是：以脱脂的喜树果和干燥的喜树叶为原料，混合匀浆提取两种生物碱，两种原料的混合比例为1∶2-1∶5，匀浆溶剂为40-80％乙醇，料液比为1∶10-1∶20，匀浆时间为6-15min。进而采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱，以40-80％乙醇作为提取溶剂，料液比1∶10-1∶20，通气量50-100L/min，负压空化提取15-30min。

3.根据权利要求1所述的高效提取喜树碱衍生物的方法，其特征是：取经过筛选的新喜树种子，用25℃清水浸泡后，在25℃，有光照的条件下进行发芽11-13天。

4.根据权利要求1所述的高效提取喜树碱衍生物的方法，其特征是：以新鲜喜树叶和喜树种芽为原料进行纯水鲜磨混合匀浆，两种原料的混合比例为1∶3-1∶8，料液比1∶8-1∶20，鲜磨匀浆6-12min；在此基础上，采用负压空化混旋法提取匀浆固形物中喜树碱和10-羟基喜树碱，以40-80％乙醇作为提取溶剂，料液比1∶10-1∶20，负压空化提取15-25min。

5.根据权利要求1所述的高效提取喜树碱衍生物的方法，其特征是：将脱脂的喜树果和干燥喜树叶的混合匀浆提取液与新鲜喜树叶和喜树种芽鲜磨匀浆提取液合并，浓缩至3/5-4/5，以二氯甲烷为萃取溶剂，浓缩物与萃取溶剂的比为1∶1-1∶2，负压空化搅拌时间为3-5min，萃取液经浓缩加乙醇进行4步重结晶，喜树碱的纯度可达95-98％。

6.根据权利要求1所述的高效提取喜树碱衍生物的方法，其特征是：对分离喜树碱后的萃余液进行分离纯化，通过液相制备色谱精制10-羟基喜树碱，以乙腈-水(体积比为2∶8-3∶7)为流动相，流速为1.5-2.0mL/min，上样量为3-5mL；在该工艺条件下得到了10-羟基喜树碱单体，纯度达95-98％。