CN102081040A

CN102081040A - 量子点荧光检测酶活性的方法

Info

Publication number: CN102081040A
Application number: CN2009102412664A
Authority: CN
Inventors: 唐芳琼; 任湘菱; 杨柳青
Original assignee: Technical Institute of Physics and Chemistry of CAS
Current assignee: Technical Institute of Physics and Chemistry of CAS
Priority date: 2009-11-27
Filing date: 2009-11-27
Publication date: 2011-06-01
Anticipated expiration: 2029-11-27
Also published as: CN102081040B

Abstract

本发明属于生物检测领域，特别是涉及一种量子点荧光检测酶活性的方法。本发明的方法是通过在酶反应过程中，测定反应体系对水溶性量子点荧光性质的影响进行酶活性的检测。具体是在含有水溶性量子点的反应体系中，或进一步还含有辅酶的反应体系中，加入一定量的待检测酶，由于待检测酶反应的发生使得水溶性量子点的荧光强度产生变化，通过水溶性量子点荧光强度变化的量来实现对待检测酶活性高选择性的定量检测。本发明的检测方法操作简单、检测快速、成本低，可用于各种与疾病诊断相关的生理酶活性的检测。

Description

量子点荧光检测酶活性的方法

技术领域

本发明属于生物检测领域，特别是涉及一种量子点荧光检测酶活性的方法。

背景技术

疾病早期快速检测是许多重大疾病治疗的关键，越早做出正确诊断越有利于疾病的治愈，因而发展早期检测技术得到医疗界的普遍重视，进而疾病检测与监测设备的家庭化成为医药发展的重要趋势之一。在最新的早期诊断方法中，疾病标志物的检测是研究的热点。以癌症为例，从上世纪70年代末，Leon和Shapiro等首次证实肿瘤患者外周血循环中存在较高水平的DNA，且肿瘤转移者其水平有进一步增高趋势以来，对癌症标志物的发现与检测研究就有了长足的发展。目前已知的癌症标志物包括酶类、激素类、胚胎抗原、糖蛋白类抗原、蛋白类和基因标志等等，其检测手段也多种多样。其中大部分研究是针对抗原、蛋白和基因类标志物，而对于酶类这一重要标志物的研究较少。

在癌症标志物中，各种酶蛋白其实占据了相当重要的位置。以γ-谷氨酰转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(ALP)活性检测为例，这三种酶活性是血液化验中常有的指标，具有很重要的临床意义。比如：γ-谷氨酰转移酶的主要功能是参与体内蛋白质代谢，且广泛存在于人体各组织及器官中，以肾脏最为丰富，其次是胰肝等处。在胆汁淤积、炎症等刺激下肝合成GGT增加，因此大多数肝胆疾病血清GGT活动可有不同程度的增加。酒精性肝硬化及胆汁性肝硬化时，GGT明显升高，可达正常的5-10倍。重型肝炎、晚期肝硬化，由于微粒体破坏、酶合成减少，GGT因而下降。各种原因引起的肝内胆汁淤积、肝外胆道梗阻，GGT均明显增高，可达400国际单位/升以上。肝癌时，由于癌细胞逆分化，类似胚胎期，此酶的生成增加，故血清GGT也呈中度或高度升高，临床上也常把此酶作为观察慢性肝炎伴肝硬化病人是否转为肝癌的参考指标。乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶，乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。急性心肌梗塞发作后，早期血清中乳酸脱氢酶(LDH)活性升高；肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时LDH都会升高。患活动性风湿性心脏病、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血、肾坏死等病LDH也可升高。碱性磷酸酶是一种磷酸单酯酶，广泛存在于人体组织和体液中，以骨、肝、乳腺、肠粘膜、肾，胎盘中。阻塞性黄疸、肝硬化、肝坏死，碱性磷酸酶明显升高(肝细胞性黄疸则升高不明显)；原发性和继发性肝癌时碱性磷酸酶亦明显升高，与癌组织中或癌肿周围肝细胞合成碱性磷酸酶增加有关；其他肿瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨细胞瘤、骨肉瘤等，碱性磷酸酶增高时，提示可能有肝脏转移。因此γ-谷氨酰转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)的单一或联合检测可以实现癌症的早期诊断(S.L.Liang，D.W.Chan，Clinica Chimica Acta 2007，381，93-97)。

由于酶反应具有很强的专一性，酶蛋白往往较抗体、抗原或基因蛋白等更易于获得且生物活性相对稳定，酶反应的底物一般都是小分子的有机物，容易获得、价格便宜，所以构建酶类标志物的检测体系将更为方便和价廉，易于促进重大疾病早期诊断的普及化和家庭化，从而提高重大疾病的治愈率。

在众多的早期快速检测手段中，光学检测是常用的方法之一，它具有信息容量大、响应速度快、灵敏度高、操作简便、成本低廉等优点。光学检测中一个重要的方法是荧光标记法。目前，应用最为普遍的荧光物质是有机染料，在大多数情况下，由于它们的激发光谱都较窄，所以很难同时激发多种组分，而其荧光特征谱又较宽，并且分布不对称，这给区分不同物质的荧光带来麻烦，因此要同时检测多种组分较为困难。有机染料最严重的缺陷还是光化学稳定性差，光漂白与光解使每个染料分子能够发出的荧光光子平均数量不多，光解产物又往往会对生物体产生杀伤作用。近年来，量子点由于其特殊的光学和电学性质，已成为生化领域的研究热点之一。与有机荧光染料相比，量子点有以下优点：(1)荧光发射比较稳定，其发光寿命可达ms级，且不易被光漂白；(2)荧光发射强度高，谱峰窄，峰形对称；(3)发射波长随粒径的增大而有规律地红移，改变粒径就可获得多色发光；(4)其激发谱在吸收阈值以上几乎是连续的，有利于多波长激发。因而量子点有望取代有机染料应用于生物检测。目前量子点已被应用于葡萄糖(X.Y.Li，Y.L.Zhou，Z.Z.Zheng，X.L.Yue，Z.F.Dai，S.Q.Liu，Z.Y.Tang，Langmuir，2009，25，6580-6586)、半乳糖(R.Freeman，L.Bahshi，T.Finder，R.Gill，I.Willner，Chem.Commun.，2009，764-766)、核酸(W.R.Algar，U.J.Krull，Anal.Chem.，2009，81，4113-4120)等生理指标的检测，但用于检测酶类疾病标记物的研究还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种量子点荧光检测酶活性的方法，是通过在酶反应过程中，反应体系对量子点荧光性质有规律性的影响实现对酶活性的定性与定量检测。

本发明的方法是通过在酶反应过程中，测定反应体系对水溶性量子点荧光性质的影响进行酶活性的检测。具体是在含有水溶性量子点的反应体系中，或进一步还含有辅酶的反应体系中，加入一定量的待检测酶，由于待检测酶与反应底物发生反应使得水溶性量子点的荧光强度产生变化，通过水溶性量子点荧光强度变化的量来实现对待检测酶活性高选择性的定量检测。

本发明的量子点荧光检测酶活性的方法包括以下步骤：

(1)配制量子点溶液：将水溶性量子点分散在磷酸盐缓冲液中得到量子点溶液，量子点溶液中的水溶性量子点的摩尔浓度为1.3×10^-7～2.5×10^- ³mol/L；其中：优选所使用的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01摩尔/升，pH值为6.8；

(2)配制反应底物溶液：将反应底物溶解在磷酸盐缓冲液中得到反应底物溶液，反应底物溶液中的反应底物的摩尔浓度为6×10^-4～3×10^-1mol/L；其中：优选所使用的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01摩尔/升，pH值为6.8；

(3)配制辅酶溶液：将辅酶溶解在磷酸盐缓冲液中得到辅酶溶液，辅酶溶液中的辅酶的摩尔浓度为0～5×10^-1mol/L；其中：优选所使用的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01摩尔/升，pH值为6.8；对于本发明的检测体系中，特别是对乳酸脱氢酶的检测需要辅酶。

(4)将步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)配制的溶液混合，加入去离子水稀释得到量子点荧光检测酶活性的混合溶液，其中：量子点荧光检测酶活性的混合溶液中水溶性量子点的摩尔浓度为2.1×10^-8～6.5×10^-4mol/L，反应底物的摩尔浓度为8×10^-5～6×10^-2mol/L，辅酶的摩尔浓度为0～8×10^-2mol/L；

(5)将待检测的含有活性单位的酶溶液加入到步骤(4)得到的量子点荧光检测酶活性的混合溶液中，充分混合均匀并在常温下反应5～30分钟得到混合溶液体系；采用荧光分光光度计检测混合溶液体系，得到体系的荧光光谱，通过分析荧光光谱的荧光强度的变化测得待检测酶活性的数据。

所述的水溶性量子点为现有技术产品，如可参照CN 200810101429.4公开的方法进行制备。所述的水溶性量子点的荧光发射波长位于400～700纳米，量子产率大于20％。

所述的水溶性量子点是水溶性的CdTe量子点、CdTe/CdS量子点、CdTe/CdS/ZnS量子点、CdSe/ZnS量子点、ZnTe量子点或ZnSe量子点。

所述的反应底物选自γ-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺、双甘肽、γ-谷氨酰-α萘胺、γ一谷氨酰对硝基苯胺、乳酸正丁酯、L-乳酸、丙酮酸、磷酸对硝基苯、对硝基酚磷酸二钠、磷酸苯二钠、L-丙氨酸、α-酮戊二酸、氯化乙酰胆碱所组成的组中的至少一种。

所述的辅酶是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态(NAD⁺)或其还原态(NADH)。

所述的待检测酶是γ-谷氨酰转移酶、乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、胆碱酯酶或碱性磷酸酶。

本发明提供一种量子点荧光检测酶活性的方法，其检测原理及优势如下：

1.本发明使用的水溶性量子点与有机相量子点相比，这种水溶性量子点与酶分子具有更好的生物相容性和亲和性，更适用于生化检测。

2.本发明使用的量子点表面具有一定的化学活性基团，当待检测酶反应发生时，产生的化学价键变化会对量子点的荧光性质产生扰动，而这种扰动与发生反应的物质的量有一定的对应关系，从而可以实现高选择性的定量检测。

3.本发明检测体系中，使用的水溶性量子点无需进行额外修饰，不需要使用价格比较昂贵、连接步骤繁琐的有机或生化材料进行前处理，因此检测操作简单，周期短，成本低。

4.本发明通过量子点荧光变化对疾病标志物酶进行检测，从而实现疾病的早期诊断。荧光检测具有信息容量大、响应速度快、灵敏度高、操作简便、成本低廉、光学抗干扰能力强等优点，相对于质谱、显微镜、电化学工作站等检测设备，更易于实现设备的小型化、机械化、集成化和商品化。酶反应具有快速、专一、灵敏等优点。因此通过荧光变化检测酶量，既可以实现酶生化指标快速、灵敏的定性检测，也能够进行定量测定。

本发明提供的量子点荧光检测酶活性的方法，操作简单、检测快速、成本低，可用于各种与疾病诊断相关的生理酶活性的检测。

附图说明

图1.本发明实施例2的水溶性碲化镉量子点检测乳酸脱氢酶的荧光光谱图。图中“U”代表酶的活性单位。

图2.本发明实施例2的荧光检测的线性拟合图。

图3.本发明实施例3的水溶性碲化镉量子点检测乳酸脱氢酶的荧光光谱图。图中“U”代表酶的活性单位。

图4.本发明实施例3的荧光检测的线性拟合图。

具体实施方式

实施例1

1、碲化镉量子点的制备(参照CN 200810101429.4制备)

(1)在去离子水中依次加入硝酸镉、巯基乙酸，使硝酸镉与巯基乙酸的摩尔比为1∶50，络合反应完成后，加入与硝酸镉等摩尔的碲氢化钠，得到水溶性量子点的前驱体溶液，最终镉离子的浓度为10^-5M。

(2)将步骤(1)得到的前驱体溶液加到超声雾化器中，经过超声雾化后，前驱体溶液以亚微米小液滴的形式存在，得到水溶性量子点的前驱体溶液的雾滴。

(3)通入氮气，氮气流量为5L/min，将步骤(2)得到的前驱体溶液的雾滴带入到温度稳定的反应装置中，前驱体溶液的雾滴经过加热(温度为450℃)反应，反应产物由水吸收得到水溶性的碲化镉量子点。

2、通过碲化镉量子点荧光检测γ-谷氨酰转移酶的活性：

(1)配制量子点溶液：将碲化镉量子点分散在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，碲化镉量子点的摩尔浓度为6.9×10^-4mol/L。

(2)配制反应底物溶液：将γ-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺和双甘肽分别溶解在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，γ-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺的摩尔浓度为9.8×10^-3mol/L，双甘肽的摩尔浓度为3.8×10^-3mol/L。

(3)将步骤(1)和步骤(2)配制的溶液混合，加入去离子水稀释，其中碲化镉量子点的摩尔浓度为3.6×10^-7mol/L，γ-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺的摩尔浓度为6.5×10^-3mol/L，双甘肽的摩尔浓度为2.5×10^-3mol/L。

(4)将待检测的含有一定活性单位的γ-谷氨酰转移酶溶液加入到步骤(3)配制的混合溶液中，充分混合均匀后，体系常温下反应10分钟。采用荧光分光光度计检测混合溶液体系，得到体系的荧光光谱，通过分析荧光光谱的荧光强度的变化测得待检测酶活性的数据。

实施例2

1、碲化镉量子点的制备同实施例1。

2、通过碲化镉量子点荧光检测乳酸脱氢酶的活性：

(1)配制量子点溶液：将碲化镉量子点分散在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，碲化镉量子点的摩尔浓度为8.9×10^-6mol/L。

(2)配制反应底物溶液：将乳酸正丁酯溶解在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，乳酸正丁酯的摩尔浓度为5.2×10^-2mol/L。

(3)配制辅酶溶液：将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态溶解在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态的摩尔浓度为3.6×10^-2mol/L。

(4)将步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)配制的溶液混合，加入去离子水稀释，其中碲化镉量子点的摩尔浓度为6.7×10^-7mol/L，乳酸正丁酯的摩尔浓度为2.2×10^-3mol/L，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态的摩尔浓度为4.8×10^-3mol/L。

(5)将待检测的含有一定活性单位的乳酸脱氢酶溶液加入到步骤(4)配制的混合溶液中，充分混合均匀后，体系常温下反应5分钟。采用荧光分光光度计检测混合溶液体系，得到体系的荧光光谱，通过分析荧光光谱的荧光强度的变化测得待检测的乳酸脱氢酶活性数据。检测得到的水溶性碲化镉量子点检测乳酸脱氢酶的荧光光谱图见图1，荧光检测的线性拟合图见图2。

实施例3

1、碲化镉量子点的制备同实施例1。

2、通过碲化镉量子点荧光检测乳酸脱氢酶的活性：

(1)配制量子点溶液：将碲化镉量子点分散在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，碲化镉量子点的摩尔浓度为2.6×10^-7mol/L。

(2)配制反应底物溶液：将乳酸正丁酯溶解在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，乳酸正丁酯的摩尔浓度为6.2×10^-3mol/L。

(3)配制辅酶溶液：将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态溶解在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态的摩尔浓度为5.8×10^-3mol/L。

(4)将步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)配制的溶液混合，加入去离子水稀释，其中碲化镉量子点的摩尔浓度为3.1×10^-8mol/L，乳酸正丁酯的摩尔浓度为8.2×10^-4mol/L，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态的摩尔浓度为7.4×10^-4mol/L。

(5)将待检测的含有一定活性单位的乳酸脱氢酶溶液加入到步骤(4)配制的混合溶液中，充分混合均匀后，体系常温下反应12分钟。采用荧光分光光度计检测混合溶液体系，得到体系的荧光光谱，通过分析荧光光谱的荧光强度的变化测得待检测的乳酸脱氢酶活性数据。检测得到的水溶性碲化镉量子点检测乳酸脱氢酶的荧光光谱图见图3，荧光检测的线性拟合图见图4。

实施例4

1、碲化锌量子点的制备(参照CN 200810101429.4制备)

(1)在去离子水中依次加入乙酸锌、巯基乙酸，使乙酸锌与巯基乙酸的摩尔比为1∶20，络合反应完成后，加入与乙酸锌等摩尔的碲氢化钠，得到水溶性量子点的前驱体溶液，最终锌离子的浓度为3×10^-2M。

(3)通入氮气，氮气流量为1L/min，将步骤(2)得到的驱体溶液的雾滴带入到温度稳定的反应装置中，前驱体溶液的雾滴经过加热(温度为110℃)反应，反应产物由水吸收得到水溶性的碲化锌量子点。

2、通过碲化锌量子点荧光检测碱性磷酸酶的活性：

(1)配制量子点溶液：将碲化锌量子点分散在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，碲化锌量子点的摩尔浓度为1.3×10^-3mol/L。

(2)配制底物溶液：将磷酸苯二钠溶解在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，磷酸苯二钠的摩尔浓度为1.6×10^-1mol/L。

(3)将步骤(1)和步骤(2)配制的溶液混合，加入去离子水稀释，其中碲化锌量子点的摩尔浓度为5.7×10^-4mol/L，磷酸苯二钠的摩尔浓度为3.8×10^-2mol/L。

(4)将待检测的含有一定活性单位的碱性磷酸酶溶液加入到步骤(3)配制的混合溶液中，充分混合均匀后，体系常温下反应20分钟。采用荧光分光光度计检测混合溶液体系，得到体系的荧光光谱，通过分析荧光光谱的荧光强度的变化测得待检测的碱性磷酸酶活性数据。

实施例5

1、碲化锌量子点的制备同实施例3。

2、通过碲化锌量子点荧光检测胆碱酯酶的活性：

(1)配制量子点溶液：将碲化锌量子点分散在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，碲化锌量子点的摩尔浓度为4.2×10^-5mol/L。

(2)配制底物溶液：将氯化乙酰胆碱溶解在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，氯化乙酰胆碱的摩尔浓度为3.6×10^-3mol/L。

(3)将步骤(1)和步骤(2)配制的溶液混合，加入去离子水稀释，其中碲化锌量子点的摩尔浓度为2.3×10^-6mol/L，氯化乙酰胆碱的摩尔浓度为7.3×10^-4mol/L。

(4)将待检测的含有一定活性单位的胆碱酯酶溶液加入到步骤(3)配制的混合溶液中，充分混合均匀后，体系常温下反应6分钟。采用荧光分光光度计检测混合溶液体系，得到体系的荧光光谱，通过分析荧光光谱的荧光强度的变化测得待检测的胆碱酯酶活性数据。

实施例6

1、硒化锌量子点的制备(参照CN 200810101429.4制备)

(1)在去离子水中依次加入氯化镉、巯基丙酸，使氯化镉与巯基丙酸的摩尔比为1∶5，络合反应完成后，加入与氯化镉等摩尔的硒氢化钠，得到水溶性量子点的前驱体溶液，最终镉离子的浓度为7×10-3M。

(3)通入氮气，氮气流量为4L/min，将步骤(2)得到的驱体溶液的雾滴带入到温度稳定的反应装置中，前驱体溶液的雾滴经过加热(温度为250℃)反应，反应产物直接由水吸收得到水溶性的硒化锌量子点。

2、通过硒化锌量子点荧光检测乳酸脱氢酶的活性：

(1)配制量子点溶液：将硒化锌量子点分散在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，硒化锌量子点的摩尔浓度为1.8×10^-4mol/L。

(2)配制底物溶液：将丙酮酸溶解在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，丙酮酸的摩尔浓度为8.7×10^-4mol/L。

(3)配制辅酶溶液：将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原态形式溶解在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原态形式的摩尔浓度为6.5×10^-4mol/L。

(4)将步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)配制的溶液混合，加入去离子水稀释，其中硒化锌量子点的摩尔浓度为4.8×10^-6mol/L，丙酮酸的摩尔浓度为9.2×10^-5mol/L，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原态形式的摩尔浓度为2.3×10^-4mol/L。

(5)将待检测的含有一定活性单位的乳酸脱氢酶溶液加入到步骤(4)配制的混合溶液中，充分混合均匀后，体系常温下反应7分钟。采用荧光分光光度计检测混合溶液体系，得到体系的荧光光谱，通过荧光强度的变化测得乳酸脱氢酶活性的数据。

实施例7

1、硒化锌量子点的制备同实施例5。

2、通过硒化锌量子点荧光检测谷丙转氨酶的活性：

(1)配制量子点溶液：将硒化锌量子点分散在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，硒化锌量子点的摩尔浓度为3.5×10^-5mol/L。

(2)配制底物溶液：将L-丙氨酸和α-酮戊二酸分别溶解在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)中，L-丙氨酸的摩尔浓度为2.5×10^-2mol/L，α-酮戊二酸的摩尔浓度为3.5×10^-2mol/L。

(3)将步骤(1)和步骤(2)配制的溶液混合，加入去离子水稀释，其中硒化锌量子点的摩尔浓度为8.3×10^-6mol/L，L-丙氨酸的摩尔浓度为4.7×10^-4mol/L，α-酮戊二酸的摩尔浓度为6.5×10^-4mol/L。

(4)将待检测的含有一定活性单位的谷丙转氨酶溶液加入到步骤(3)配制的混合溶液中，充分混合均匀后，体系常温下反应25分钟。采用荧光分光光度计检测混合溶液体系，得到体系的荧光光谱，通过分析荧光光谱的荧光强度的变化测得待检测的谷丙转氨酶活性数据。

Claims

1.一种量子点荧光检测酶活性的方法，其特征是，该方法包括以下步骤：

(1)配制量子点溶液：将水溶性量子点分散在磷酸盐缓冲液中得到量子点溶液，量子点溶液中的水溶性量子点的摩尔浓度为1.3×10^-7～2.5×10^- ³mol/L；

(2)配制反应底物溶液：将反应底物溶解在磷酸盐缓冲液中得到反应底物溶液，反应底物溶液中的反应底物的摩尔浓度为6×10^-4～3×10^-1mol/L；

(3)配制辅酶溶液：将辅酶溶解在磷酸盐缓冲液中得到辅酶溶液，辅酶溶液中的辅酶的摩尔浓度为0～5×10^-1mol/L；

(5)将待检测的含有活性单位的酶溶液加入到步骤(4)得到的量子点荧光检测酶活性的混合溶液中，充分混合均匀并在常温下反应5～30分钟得到混合溶液体系；采用荧光分光光度计检测混合溶液体系，得到体系的荧光光谱，通过分析荧光光谱的荧光强度的变化测得待检测酶活性的数据；

2.根据权利要求1所述的量子点荧光检测酶活性的方法，其特征是：所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01摩尔/升，pH值为6.8。

3.根据权利要求1所述的量子点荧光检测酶活性的方法，其特征是：所述的水溶性量子点的荧光发射波长位于400～700纳米，量子产率大于20％。

4.根据权利要求1或3所述的量子点荧光检测酶活性的方法，其特征是：所述的水溶性量子点是水溶性的CdTe量子点、CdTe/CdS量子点、CdTe/CdS/ZnS量子点、CdSe/ZnS量子点、ZnTe量子点或ZnSe量子点。

5.根据权利要求1所述的量子点荧光检测酶活性的方法，其特征是：所述的辅酶是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态或其还原态。

6.根据权利要求1所述的量子点荧光检测酶活性的方法，其特征是：所述的待检测酶是γ-谷氨酰转移酶、乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、胆碱酯酶或碱性磷酸酶。