CN103397077A

CN103397077A - 一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法

Info

Publication number: CN103397077A
Application number: CN2013103324027A
Authority: CN
Inventors: 余涛; 应天翼; 宋云扬; 李艳军; 孙道鸣; 吴方晖
Original assignee: PLA 63975 ARMY
Current assignee: PLA 63975 ARMY
Priority date: 2013-08-02
Filing date: 2013-08-02
Publication date: 2013-11-20
Anticipated expiration: 2033-08-02
Also published as: CN103397077B

Abstract

本发明供一种以可对乙酰胆碱酯酶催化体系中的两种反应底物硫胆碱和氢离子同时产生灵敏响应的双功能量子点为核心，可灵敏检测乙酰胆碱酯酶活性的测定方法。该发明制备了可同时响应硫胆碱和氢离子的双功能量子点，结合乙酰胆碱酯酶的催化反应，构建了检测乙酰胆碱酯酶活性方法。该体系由巯基乙酸修饰的双功能碲化镉量子点、硫代乙酰胆碱、pH7.5的Tris-HCl缓冲液构成，该方法包括了如下步骤：双功能量子点合成，反应溶液配制和双功能量子点传感体系检测乙酰胆碱酯酶活性。该方法具有原理新颖、灵敏度高、合成方法简易、体系构成简单，无需生物偶联反应等优点，适用于乙酰胆碱酯酶的活性测定及其它与之相关的目标物检测。

Description

一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法

技术领域

本发明是涉及一种用于乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase，AChE)活性测定的双功能量子点传感体系，属于分析化学领域。

背景技术

乙酰胆碱酯酶可以催化神经递质乙酰胆碱(actylcholine)水解产生胆碱和氢离子，而乙酰胆碱负责传导胆碱能冲动，因而乙酰胆碱酯酶在体内的主要功能表现在中止分布在不同的胆碱能神经末端与其对应的效应靶器官和突触后位点的乙酰胆碱的作用，乙酰胆碱酯酶的存在可以有效地保证神经传导。许多重要的农药及其它有毒有害化合物都是通过抑制乙酰胆碱酯酶的催化活性的原理进行设计的，尽管这些化合物在社会生产活动中发挥了巨大的作用，但是由于这类化合物同样可以造成体内神经递质乙酰胆碱大量堆积，对机体造成伤害，进而引起死亡。因为此类化合物对人类的公共安全形成了巨大的威胁，基于乙酰胆碱酯酶催化活性的测定方法可以很好地应用于这类化合物的检出，因而有关乙酰胆碱酯酶催化活性的测定方法一直是分析化学领域的研究热点之一，传感领域的最新技术进展都在第一时间被应用于有机磷化合物的高效灵敏检测。

上世纪末，随着纳米技术的迅猛发展，II—IV族纳米材料量子点(quantumdot，QD)独特材料逐渐被发现，使得量子点被广泛应用于在传感和成像领域，基于量子点的可测定乙酰胆碱酯酶催化活性的传感体系同样也成为传感领域的一个研究热点。在这样的传感体系中，所使用的底物通常为硫代乙酰胆碱(acetylcholine，ATCh)，由于乙酰胆碱酯酶催化硫代乙酰胆碱生成硫胆碱(thiocholine，TCh)和乙酸，因此大部分的基于量子点的传感体系都是围绕检测着硫胆碱或乙酸所带的氢离子进行方案设计。如针对硫胆碱，已公开的许多电化学原理的量子点传感体系都是通过硫胆碱的巯基基团开展相关研究工作的，2009年我们曾在出版物公开了一种基于量子点的荧光猝灭型的传感体系实现了对乙酰胆碱酯酶催化活性的灵敏测定，对乙酰胆碱酯酶催化活性的检测限达到了0.002units mL^-1；类似的工作还有Zheng等通过层层组装技术，借助高分子材料，将量子点与乙酰胆碱酯酶组装成纳米结构，测定硫胆碱对体系的发光猝灭，同样测定了乙酰胆碱酯酶的催化活性。针对另一产物，乙酸所释放的氢离子的检测主要是通过检测体系pH的变化来设计传感体系的，如Buiculescu等合成了对pH敏感的CdTe量子点，设计了高灵敏的检测体系，Sun等将对pH敏感的CdTe量子点固化成单分子膜，同样可以反应乙酰胆碱酯酶的催化活性。

已公开的这些研究工作都较好地将量子点的材料学特性应用于乙酰胆碱酯酶催化活性的测定中，但目前所公开的工作中所合成的量子点均是基于对单一产物的响应进行设计和合成的，由于这些方法都只利用了一种产物进行响应，因此无法在现有检测能力水平上进行突破，不利于充分发挥量子点的材料特性，因而灵敏性提升空间有限；此外，这些方法都需要将AChE通过共价键合或物理吸附的方法偶联到QD分子表面，因而反应步骤较为复杂，操作较为繁琐。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以可同时对乙酰胆碱酯酶催化体系中的两种反应底物硫胆碱和氢离子同时产生灵敏响应的量子点为核心，可高灵敏检测神经毒剂的测定方法；本发明在传感体系的设计思想上进行了突破，设计了对硫胆碱和氢离子两种反应产物进行同时响应的量子点；并且，该种量子点合成过程中，仅改变Cd²⁺与TGA的摩尔比关系即可实现，其它反应条件与已公开的量子点合成方法基本一致，因此简便易行；在实际测定中，该双功能量子点在单独对两种反应产物的响应方面均优于传统方法合成的量子点，因此二者叠加后对检测灵敏度有明显提升，实验结果表明，基于本研究发明的双功能量子点，可实现对乙酰胆碱酯酶的催化活性的更高灵敏响应。

本发明提供的一种用双功能量子点传感体系检测乙酰胆碱酯酶AChE活性的方法，体系包括了巯基乙酸TGA修饰的双功能发光纳米材料碲化镉CdTe量子点QD、硫代乙酰胆碱ATCh、pH7.5的三羟甲基氨基甲烷Tris-盐酸HCl缓冲液，利用传感体系测定AChE的活性的方法步骤如下：将10μL新配的溶于生理盐水的AChE，加入190μL溶有ATCh和QD的，浓度为0.0001～0.0050M的Tris-HCl缓冲液，混匀后样品在35～40℃孵育8～12min后进行荧光检测，所使用的QD合成时Cd²⁺与TGA的摩尔比为1∶0.75～1.75，体系中ATCh和QD的终浓度分别为200～400μM和200～600nM，激发波长350～420nm，扫描范围420～680nm，以波峰处对应发光强度作为采集信号，每个浓度平行测定3份，检测限按3倍空白标准偏差法计算。与其它已公开的传感体系相比，此体系在操作过程中无需将AChE偶联至QD表面，因而减少了反应步骤，杜绝了偶联试剂的使用，降低实验成本，同时，还减少偶联过程中对酶或量子点反应特性的影响。

本发明中pH缓冲液配制步骤如下：配制0.2M不同pH缓冲液的醋酸钠NaAC-醋酸HAC，pH区间范围为3.5～6.5；配制0.05M不同pH缓冲液的Tris-HCl，pH区间范围为7.0～9.0。为了测定双功能量子点对氢离子的响应能力，进行了不同条件下合成的双功能量子点对pH的响应实验，所选择的NaAC-HAC和Tris-HCl缓冲体系均为分析化学中常用的pH体系，且对量子点发光不会产生影响。

本发明中不同Cd²⁺与TGA摩尔比所合成的TGA-CdTe QD对氢离子的响应步骤如下：将所合成的不同Cd²⁺与TGA摩尔比的CdTe QD用不同pH配制溶液，QD浓度均保持一致，测定荧光信号，比较不同Cd²⁺与TGA摩尔比的TGA-CdTe QD对氢离子响应能力。

本发明中不同Cd²⁺与TGA摩尔比所合成的TGA-CdTe QD对巯基基团的响应步骤如下：将所合成的不同Cd²⁺与TGA摩尔比的CdTe QD与不同浓度的巯基乙醇反应，测定荧光信号，比较Cd²⁺与TGA摩尔比的TGA-CdTe QD与巯基基团响应能力，反应体系为水，QD浓度均保持一致。选择巯基乙醇作为模型巯基化合物是由于这种化合物除了巯基以外，其它基团不会与QD之间存在着化学反应，而常用的巯基化合物如巯基乙酸或巯基乙胺除具有巯基基团外，在水溶液中还带有电荷，对QD与巯基基团的响应特性的判定有影响。

本发明中pH7.5的Tris-HCl缓冲液浓度确定步骤如下：用0.05M的NaOH调生理盐水溶液pH为7.5，以此生理盐水溶液配制QD和硫代乙酰胆碱的混合溶液和酶溶液，再加入pH为7.5的不同浓度的Tris-HCl，随后加入5M的NaCl溶液，最后加入酶溶液，37℃孵育10min后，测定荧光信号，对照组不加AChE，以Tris-HCl溶液替代。对缓冲溶液浓度的确定是由酶催化反应的特点决定的，酶催化活性的保持需要一定的pH范围内，在本方法中，如不选用具有缓冲能力的溶液体系，随着酶催化反应的进行，体系内氢离子浓度的增加，可导致pH显著下降，从而抑制了酶的催化活性；如选用较强缓冲能力的缓冲液，虽可以维持pH的稳定，但双功能量子点只对产物中的硫胆碱进行响应，无法响应氢离子浓度的变化因此，检测灵敏度无法有效提升。因而，需要对确定适合的缓冲溶液的浓度，以保持双功能量子点的双功能反应特性。

本发明中双功能传感体系的TGA-CdTe QD合成包括如下步骤：称量CdCl₂溶解于蒸馏水后，加入NaCl，分别再加入TGA，使得Cd²⁺与TGA的摩尔比为1∶0.75～1.75，调整体系离子强度为0.001～0.150mM，使用0.1M的NaOH将溶液pH调节至10.5～11.6，通入N₂30～60min以除氧，然后快速注入新合成碲氢化钠NaHTe前驱体，使Cd²⁺∶NaHTe摩尔比例为1∶0.25～0.75，溶液于N₂保护下100℃回流4～8hr获得QD，对合成后溶液中存在的沉淀，通过0.45μm的滤膜抽滤去除后，双功能TGA-CdTe QD通N₂保存。本发明所采用的合成方法与公开的合成方法基本原理一致，但针对双功能量子点的特点在合成条件上进行了进一步的探索，表现为在合成过程中引入了NaCl，考察了离子强度与双功能量子点效应的关系，并对Cd²⁺与TGA的摩尔比、体系pH、Cd²⁺∶NaHTe摩尔比、通氧时间、反应时间等关键技术方面进行了相应的研究工作。

本发明的有益效果是：

1、已公开的基于量子点的乙酰胆碱酯酶催化活性的传感体系都是利用量子点对胆碱酯酶催化反应产生的硫胆碱或氢离子的响应进行设计的，本发明在传感体系设计方面进行了突破，以合成可同时对硫胆碱和氢离子产生响应的双功能量子点为核心，构建了一个基于双功能量子点可用于检测乙酰胆碱酯酶催化活性的传感体系；

2、本发明公开的用于乙酰胆碱酯酶活性测定的双功能量子点传感体系，对乙酰胆碱酯酶催化活性有高灵敏的响应能力，检测限已达0.0005units mL^-1，较之已公开报道的0.002units mL^-1有明显提升；

3、由于同时对两种反应产物产生响应，因此相比较先前公开，反应更加高效；

4、本发明制备双功能量子点的方法简单，仅需调整所加入的Cd²⁺∶TGA的摩尔比例关系即可实现，而在其它的合成方法与条件与一般量子点的合成公开基本一致，因此具有更好的实用性；

5、反应体系构成简单，不通过将酶固定在量子点表面的偶联反应，一方面可减少偶联试剂的使用，实验步骤少，降低实验成本，另一方面还可以减少偶联过程中对酶或量子点反应特性的影响，整个测定过程中直接将各种组份混合即可实现检测.

总而言之，该方法具有原理新颖、灵敏度高、合成方法简易、体系构成简单，无需生物偶联反应等技术优点。

附图说明

图1：不同Cd²⁺与TGA比例合成的量子点对巯基基团响应关系图；

图中X轴为巯基乙醇浓度的对数，浓度单位为nM；Y轴为反应前与反应后荧光强度的差值。

图2：不同Cd²⁺与TGA比例合成的量子点对pH响应关系图；

图中X轴为pH，Y轴为不同Cd²⁺与TGA比例合成的量子点在不同pH条件下的荧光强度。

图3：Tris-HCl溶液体系的浓度与Cd²⁺与TGA比例分别为1∶0.75、1∶1.00、1∶1.25的TGA-CdTe双功能量子点的信号响应能力关系图；

图中X轴为Tris-HCl溶液体系的浓度，单位为M，Y轴为酶催化反应前与反应后荧光强度的差值。

图4：基于Cd²⁺与TGA比例为1∶1.25的双功能量子点构建的乙酰胆碱酯酶催化体系对乙酰胆碱酯酶催化活性的响应关系图

图中X轴为乙酶胆碱酯酶的酶单位浓度，单位为unit mL^-1，Y轴为量子点的荧光强度。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

所列举4个实施例，其中实施例1-3为双功能量子点，实施例4为普通量子点。

实施例1：

NaHTe前驱体合成：10mL圆底烧瓶通过小针头和橡胶管与密封水相连，将0.2g NaBH₄和0.16g Te粉加入至该密封的烧瓶中，通入N₂后于冰浴下注射3.0mL除氧处理的蒸馏水，反应6hr后，所得澄清液为下一步量子点合成的Te源；

双功能TGA-CdTe量子点合成：称量0.23g CdCl₂溶解于100mL蒸馏水后，再加入TGA，Cd²⁺与TGA之间的摩尔比为1∶0.75，使用0.1M的NaOH将溶液pH调节至11.2，通入N₂30min，快速注入新合成的NaHTe溶液，Cd²⁺∶HTe^-摩尔比例为1∶0.5，溶液于N₂保护下100℃回流4hr。所获得量子点，通过0.45μm的滤膜抽滤后，通N₂保存。

配制0.2M不同pH缓冲液的NaAC-HAC，pH分别为3.5、4.0、4.5、5.0、6.0、6.5；配制0.05M不同pH缓冲液的Tris-HCl，pH分别为7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。将Cd²⁺∶TGA摩尔比为1∶0.75的量子点溶于上述缓冲液中，终浓度400nM，测定其荧光强度。各个pH溶液中对应的荧光值分别为0、0、2.04、79.97、411.90、567.00、598.00、578.90、587.00、581.50、563.00。

以水为溶剂配制不同浓度的巯基乙醇溶液，与Cd²⁺∶TGA摩尔比为1∶0.75的量子点混合，量子点的终浓度为400nM，巯基乙醇的浓度分别为300nM、600nM、3000nM、8000nM、20000nM、60000nM、125000nM、250000nM，空白为水，测定荧光，计算不同浓度荧光与空白的差值。其对应的差值分别为14.95、56.90、290.35、600.40、734.35、765.90、784.25、787.00。

pH缓冲液配制：配制0.05M的Tris-HCl缓冲液，pH为7.5，用0.05M的NaOH调生理盐水溶液pH为7.5，以此生理盐水溶液分别配制量子点和硫代乙酰胆碱混合溶液和酶溶液。

将10μL新配的溶于生理盐水的AChE，加入含有190μLATCh和量子点反应液37℃孵育10min后进行荧光检测，所使用量子点的Cd²⁺与TGA摩尔比为1∶0.75。体系中AChE、ATCh和量子点的终浓度分别为0.010units mL^-1、250μM和400nM，Tris-HCl的浓度为0.0025M。每个浓度平行测定三份，空白三份。计算空白值与样品组的荧光差值，结果为365。

实施例2

双功能TGA-CdTe量子点合成：称量0.23g CdCl₂溶解于100mL蒸馏水后，再加入TGA，Cd²⁺与TGA之间的摩尔比为1∶1.25，使用0.1M的NaOH将溶液pH调节至11.2，通入N₂30min，快速注入新合成的NaHTe溶液，Cd²⁺∶HTe^-摩尔比例为1∶0.5，溶液于N₂保护下100℃回流4hr。所获得量子点，通过0.45μm的滤膜抽滤后，通N₂保存。

配制0.2M不同pH缓冲液的NaAC-HAC，pH分别为3.5、4.0、4.5、5.0、6.0、6.5；配制0.05M不同pH缓冲液的Tris-HCl，pH分别为7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。将Cd²⁺∶TGA摩尔比为1∶1.25的量子点溶于上述缓冲液中，终浓度400nM，测定其荧光强度。各个pH溶液中对应的荧光值分别为0、16.41、23.20、21.72、367.00、1019.00、1096.00、1097.00、1158.00、1201.00、1096.00。

以水为溶剂配制不同浓度的巯基乙醇溶液，与Cd²⁺∶TGA摩尔比为1∶1.25的量子点混合，量子点的终浓度为400nM，巯基乙醇的浓度分别为300nM、600nM、3000nM、8000nM、20000nM、60000nM、125000nM、250000nM，空白为水，测定荧光，计算不同浓度荧光与空白的差值。其对应的差值分别为13.77、60.03、222.30、411.12、554.58、631.71、673.11、682.08。

将10μL新配的溶于生理盐水的AChE，加入含有190μLATCh和量子点反应液37℃孵育10min后进行荧光检测，所使用量子点的Cd²⁺与TGA摩尔比为1∶1.25。体系中AChE、ATCh和量子点的终浓度分别为0.010units mL^-1、250μM和400nM，Tris-HCl的浓度为0.0025M。每个浓度平行测定三份，空白三份。计算空白值与样品组的荧光差值，结果为436。

实施例3

双功能TGA-CdTe量子点合成：称量0.23g CdCl₂溶解于100mL蒸馏水后，再加入TGA，Cd²⁺与TGA之间的摩尔比为1∶1.75，使用0.1M的NaOH将溶液pH调节至11.2，通入N₂30min，快速注入新合成的NaHTe溶液，Cd²⁺∶HTe^-摩尔比例为1∶0.5，溶液于N₂保护下100℃回流4hr。所获得量子点，通过0.45μm的滤膜抽滤后，通N₂保存。

配制0.2M不同pH缓冲液的NaAC-HAC，pH分别为3.5、4.0、4.5、5.0、6.0、6.5；配制0.05M不同pH缓冲液的Tris-HCl，pH分别为7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。将Cd²⁺∶TGA摩尔比为1∶1.75的量子点溶于上述缓冲液中，终浓度400nM，测定其荧光强度。各个pH溶液中对应的荧光值分别为0、4.70、71.20、183.80、360.70、343.20、302.30、293.00、289.00、275.70、253.00。

以水为溶剂配制不同浓度的巯基乙醇溶液，与Cd²⁺∶TGA摩尔比为1∶1.75的量子点混合，量子点的终浓度为400nM，巯基乙醇的浓度分别为300nM、600nM、3000nM、8000nM、20000nM、60000nM、125000nM、250000nM，空白为水，测定荧光，计算不同浓度荧光与空白的差值。其对应的差值分别为7.50、31.03、62.30、106.60、180.76、164.44、215.59、240.47。

将10μL新配的溶于生理盐水的AChE，加入含有190μL ATCh和量子点反应液37℃孵育10min后进行荧光检测，所使用量子点的Cd²⁺与TGA摩尔比为1∶1.75。体系中AChE、ATCh和量子点的终浓度分别为0.010units mL^-1、250μM和400nM，Tris-HCl的浓度为0.0025M。每个浓度平行测定三份，空白三份。计算空白值与样品组的荧光差值，结果为188。

实施例4

TGA-CdTe量子点合成：称量0.23g CdCl₂溶解于100mL蒸馏水后，再加入TGA，Cd²⁺与TGA之间的摩尔比为1∶2.50，使用0.1M的NaOH将溶液pH调节至11.2，通入N₂30min，快速注入新合成的NaHTe溶液，Cd²⁺∶HTe^-摩尔比例为1∶0.5，溶液于N₂保护下100℃回流4hr。所获得量子点，通过0.45μm的滤膜抽滤后，通N₂保存。

配制0.2M不同pH缓冲液的NaAC-HAC，pH分别为3.5、4.0、4.5、5.0、6.0、6.5；配制0.05M不同pH缓冲液的Tris-HCl，pH分别为7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。将Cd²⁺∶TGA摩尔比为1∶2.50的量子点溶于上述缓冲液中，终浓度400nM，测定其荧光强度。各个pH溶液中对应的荧光值分别为6.39、37.25、103.20、248.70、300.50、281.40、215.40、203.60、202.70、195.10、186.40。

以水为溶剂配制不同浓度的巯基乙醇溶液，与Cd²⁺∶TGA摩尔比为1∶2.50的量子点混合，量子点的终浓度为400nM，巯基乙醇的浓度分别为300nM、600nM、3000nM、8000nM、20000nM、60000nM、125000nM、250000nM，空白为水，测定荧光，计算不同浓度荧光与空白的差值。其对应的差值分别为0.70、2.35、1.75、16.90、32.45、52.98、67.58、75.83。

将10μL新配的溶于生理盐水的AChE，加入含有190μLATCh和量子点反应液37℃孵育10min后进行荧光检测，所使用量子点的Cd²⁺与TGA摩尔比为1∶2.50。体系中AChE、ATCh和量子点的终浓度分别为0.010units mL^-1、250μM和400nM，Tris-HCl的浓度为0.0025M。每个浓度平行测定三份，空白三份。计算空白值与样品组的荧光差值，结果为134。

Claims

1.一种用双功能量子点传感体系检测乙酰胆碱酯酶AChE活性的方法，其特征在于双功能量子点传感体系包括的巯基乙酸TGA修饰的双功能发光纳米材料碲化镉CdTe量子点QD、硫代乙酰胆碱ATCh、pH7.5的三羟甲基氨基甲烷Tris-盐酸HCl缓冲液，利用传感体系测定AChE的活性的方法步骤如下：将10μL新配的溶于生理盐水的AChE，加入190μL溶有ATCh和QD的，浓度为0.0001～0.0050M的Tris-HCl缓冲液，混匀后样品在35～40℃孵育8～12min后进行荧光检测，所使用的QD合成时Cd²⁺与TGA的摩尔比为1∶0.75～1.75，体系中ATCh和QD的终浓度分别为200～400μM和200～600nM，激发波长350～420nm，扫描范围420～680nm，以波峰处对应发光强度作为采集信号，每个浓度平行测定3份，检测限按3倍空白标准偏差法计算。

2.如权利要求1所述的一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于所述的pH缓冲液配制步骤如下：配制0.2M不同pH缓冲液的醋酸钠NaAC-醋酸HAC，pH区间范围为3.5～6.5；配制0.05M不同pH缓冲液的Tris-HCl，pH区间范围为7.0～9.0。

3.如权利要求1所述的一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于所述的不同Cd²⁺与TGA摩尔比所合成的TGA-CdTe QD对氢离子的响应步骤如下：将所合成的不同Cd²⁺与TGA摩尔比的CdTe QD用不同pH配制溶液，QD浓度均保持一致，测定荧光信号，比较不同Cd²⁺与TGA摩尔比的TGA-CdTe QD对氢离子响应能力。

4.如权利要求1所述的一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于所述的不同Cd²⁺与TGA摩尔比所合成的TGA-CdTe QD对巯基基团的响应步骤如下：将所合成的不同Cd²⁺与TGA摩尔比的CdTe QD与不同浓度的巯基乙醇反应，测定荧光信号，比较Cd²⁺与TGA摩尔比的TGA-CdTe QD与巯基基团响应能力，反应体系为水，QD浓度均保持一致。

5.如权利要求1所述的一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于所述的pH7.5的Tris-HCl缓冲液浓度确定步骤如下：用0.05M的NaOH调生理盐水溶液pH为7.5，以此生理盐水溶液配制QD和硫代乙酰胆碱的混合溶液和酶溶液，再加入pH为7.5的不同浓度的Tris-HCl，随后加入5M的NaCl溶液，最后加入酶溶液，37℃孵育10min后，测定荧光信号，对照组不加AChE，以Tris-HCl溶液替代。

6.如权利要求1所述的一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于所述的双功能传感体系的TGA-CdTe QD合成包括如下步骤：称量CdCl₂溶解于蒸馏水后，加入NaCl，分别再加入TGA，使得Cd²⁺与TGA的摩尔比为1∶0.75～1.75，调整体系离子强度为0.001～0.150mM，使用0.1M的NaOH将溶液pH调节至10.5～11.6，通入N₂30～60min以除氧，然后快速注入新合成碲氢化钠NaHTe前驱体，使Cd²⁺∶NaHTe摩尔比例为1∶0.25～0.75，溶液于N₂保护下100℃回流4～8hr获得QD，对合成后溶液中存在的沉淀，通过0.45μm的滤膜抽滤去除后，双功能TGA-CdTe QD通N₂保存。