CN102056925A

CN102056925A - 作为激酶抑制剂的化合物和组合物

Info

Publication number: CN102056925A
Application number: CN2009801210269A
Authority: CN
Inventors: 江涛; P-Y·米歇里斯; T·N·源; 裴伟; 吴报根; 朱雪峰
Original assignee: IRM LLC
Current assignee: IRM LLC
Priority date: 2008-04-07
Filing date: 2009-04-03
Publication date: 2011-05-11
Also published as: AU2009233963B2; EA018484B1; JP5214799B2; UY31750A; US8518931B2; BRPI0910979A2; CA2720944C; EP2271645A1; KR20110002080A; WO2009126514A1; CA2720944A1; EA201001596A1; MX2010011069A; WO2009126514A8; AU2009233963A1; US20110190264A1; AR071300A1; JP2011516554A

Abstract

本发明涉及具有式(1)或(2)的三嗪和嘧啶衍生物，以及使用这样的化合物的方法。例如，本发明的化合物可用于治疗、改善或预防对抑制间变性淋巴瘤激酶(ALK)活性、c-ros癌基因(ROS)、胰岛素样生长因子(IGF-1R)和/或胰岛素受体(InsR)或它们的组合有响应的病症。

Description

作为激酶抑制剂的化合物和组合物

相关申请的交叉参考

本申请要求于2008年4月7日提交的美国临时申请序号为61/043,111和于2008年9月10日提交的美国临时申请序号为61/095,883的美国专利申请的优先权，它们的全部内容都被引入本文作为参考。

技术领域

本发明涉及蛋白激酶抑制剂及使用这样的化合物的方法。更具体而言，本发明涉及Ros、IGF-1R、Ins和间变性淋巴瘤激酶(ALK)的抑制剂以及它们作为治疗剂的用途。

背景技术

癌症是源自组织的异常生长的疾病。一些癌症有可能侵入局部组织并且还转移至远处器官。这种疾病可能发育成不同器官、组织和细胞类型的广泛变化。因此，术语“癌症”指的是超过一千种不同疾病的集合。

间变性淋巴瘤激酶(ALK)是受体酪氨酸激酶的胰岛素受体超家族的成员，参与造血系统和非造血系统肿瘤的瘤形成过程。在成神经细胞瘤和成胶质细胞瘤中发现了全长ALK受体蛋白的异常表达；并且在间变性大细胞淋巴瘤中发现了ALK融合蛋白。对ALK融合蛋白的研究为患有ALK-阳性的恶性肿瘤的患者提出了新的治疗可能性。(Pulford等人，Cell.Mol.Life Sci.61：2939-2953(2004))。

胰岛素样生长因子(IGF-1)信号传导与癌症高度相关，并且IGF-1受体(IGF-1R)是占主导地位的因子。IGR-1R对于肿瘤转化和恶性细胞的存活是很重要的，但仅部分参与正常细胞的生长。靶向于IGF-1R对于癌症治疗而言被认为是很有前景的选择。(Larsson等人，Br.J.Cancer 92：2097-2101(2005))。

c-ros癌基因1(ROS1，也称为ROS)，是酪氨酸激酶胰岛素受体基因家族中的一员，在许多肿瘤细胞系中高表达。

尽管本领域中有些进展，但对癌症治疗和抗癌化合物仍然有需求。

发明内容

本发明涉及三嗪和嘧啶衍生物及其药物组合物以及它们作为治疗剂的用途。

一方面，本发明提供式(1)或(2)的化合物或其生理学可接受的盐：

其中X为C_3-12碳环、C_6-10芳基或者含有NR⁶、O或S的5-10元杂芳基或4-10元杂环，它们均任选地被1-3个R^5’基团取代；

或者，X为C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；或者X为(CR₂)_0-4CO₂R⁷或(CR₂)_0-4CR(NRR⁷)(CO₂R⁷)；

Y为S(O)_0-2R⁸、SO₂NRR⁷或CONRR⁷；

Z¹为N或CH；

Ph为苯基且B为任选含有NR⁶、O、＝O或S的5-6元环；且Ph和B任选地被1-3个R^5’基团取代；

R¹和R²独立地为H、卤素、C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基；或者R¹和R²与它们所连接的环原子一起形成稠合的5-、6-或7-元环烷基、芳基、杂芳基或杂环；

每个R³相同或不同且独立地为H或C_1-6烷基；

R⁴、R⁵和R^5’独立地为C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；或者独立地为卤素、硝基、氰基、C(R)(OR⁷)(R⁷)、OR⁷、NR(R⁷)、C(R)(NRR⁷)(R⁷)、(CR₂)_q-W、C(O)O_0-1R⁷、C(O)NR(R⁷)、C(O)CRR⁷-NR(R⁷)、C(O)NR(CR₂)_pNR(R⁷)、C(O)NR(CR₂)_pOR⁷、C(O)NR(CR₂)_pSR⁷、C(O)NR(CR₂)_qS(O)_1-2R⁸、S(O)_0-2R⁸、(CR₂)_1-6NR(CR₂)_pOR⁷、(CR₂)_1-6NR(CR₂)_qC(O)R⁸、S(O)₂NRR⁷、S(O)₂NR(CR₂)_pNR(R⁷)或S(O)₂NR(CR₂)_pOR⁷；

R⁶为H、C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；或者为-(CR₂)_1-4-CN、(CR₂)_p-OR⁷、(CR₂)_p-NR(R⁷)、-L-W、-L-C(O)-R⁷、-(CR₂)_1-4-C(O)-(CR₂)_q-OR⁷、-C(O)OR⁸、-L-C(O)-NRR⁷、-L-CR(OR⁷)-C_tF_(2t+1)其中t为1-3；-L-C(O)-CR(R⁷)-NRR⁷、-L-C(O)-NR-(CR₂)_p-NRR⁷、-L-C(O)NR(CR₂)_pOR⁷、-L-C(O)-(CR₂)_q-NR-C(O)-R⁸、-L-C(O)NR(CR₂)_pSR⁷、-L-C(O)NR(CR₂)_qS(O)_1-2R⁸、(CR₂)_pNR(CR₂)_pOR⁷、(CR₂)_pNR-L-C(O)R⁸、-L-S(O)₂R⁸、-L-S(O)₂NRR⁷、-L-S(O)₂NR(CR₂)_pNR(R⁷)、-L-S(O)₂NR(CR₂)_pOR⁷或者为选自式(a)、(b)或(c)的基团：

其中R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自H或C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；或者R⁹和R¹⁰、R¹⁰和R¹³、R¹³和R¹⁴、R¹¹和R¹²或R¹¹和R¹³与它们所连接的碳和/或氮原子一起形成任选地含有选自C(O)、N、O和S(O)_0-2的最多3个原子或基团的3-7元饱和的、不饱和的或部分不饱和的环并任选地被1-3个R⁵基团取代；

L为(CR₂)_1-4或键；

R⁷和R⁸独立地为(CR₂)_q-W或C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；或R⁷为H；

W为C_3-12碳环、C_6-10芳基或5-10元杂芳基或4-10元杂环，它们各自任选地被1-3个R^5’基团取代；

每个R为H或C_1-6烷基；

m和n独立地为0-2；

p为2-4；且

q为0-4。

在一些实例中，上述式(1)中的X为5-6元杂芳基；或者X为C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；或者为(CR₂)_1-4CO₂R⁷或(CR₂)_1-4CR(NRR⁷)(CO₂R⁷)；

n为0-1；且

R^5’如果存在于X上，则为羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基。

在其他实例中，上述式(1)中的X为含有NR⁶、O或S的6元杂环。

在一个实施方案中，本发明提供式(2A)、(2B)或(2C)的化合物：

其中Z²和Z³中的一个为NR⁶、O或S，且另一个为CH₂；

Z⁴为NR⁶、O或S；

环E可以任选地含有一个双键；

R⁶为H、-(CR₂)_1-4-C(O)-(CR₂)_q-OR⁷、-C(O)OR⁸或-L-S(O)₂R⁸；且

R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和m如式(1)或(2)中所定义。

在另一实施方案中，本发明提供式(3A)或(3B)的化合物：

其中R^5a、R^5b和R^5c独立地为H、卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基；

Z⁵、Z⁶和Z⁷中的一个为NR⁶、O或S，且其余为CH₂；且

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和m如式(1)或(2)中所定义。

在一些实例中，上述式(3A)或(3B)中的Z⁷为NR⁶或O；且Z⁵和Z⁶为CH₂。在特定实例中，R⁶为H、C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；或者为卤素、硝基或氰基；-L-W、-L-C(O)-R⁷、-(CR₂)_1-4-C(O)-(CR₂)_q-OR⁷、-C(O)OR⁸、-L-C(O)-NRR⁷、-L-C(O)-CR(R⁷)-NRR⁷、-L-S(O)₂R⁸，或者为式(a)或(b)的基团：

其中R、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴和L如式(1)或(2)中所定义。

在又一实施方案中，本发明提供式(3C)或(3D)的化合物：

R⁷为(CR₂)_q-W或C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；

W为5-6元杂环；且

R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、L、q和m如式(1)或(2)中所定义。

在上述式(3A)、(3B)、(3C)或(3D)的一些实例中，R^5b为H；且R^5a和R^5c独立地为卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基。在其他实施方案中，R^5b为H；且R^5a和R^5c独立地为C_1-6烷基或C_1-6烷氧基。在其他实例中，本发明提供式(3D)的化合物，其中L为键，且R⁹和R¹⁰、R¹⁰和R¹³、R¹³和R¹⁴、R¹¹和R¹²或R¹¹和R¹³与它们所连接的碳和/或氮原子一起形成任选地含有N、O或S(O)_0-2的5-6元环。

在任意上述化合物中，R¹、R²和R³可为H。在其他实例中，Z¹为N。在另外实例中，m为0且Y为SO₂R⁸且R⁷和R⁸为C_1-6烷基。

另一方面，本发明提供包含具有式(1)、(2)、(2A)、(2B)、(2C)、(3A)、(3B)、(3C)或(3D)的化合物和生理学可接受的赋形剂的药物组合物。

另一方面，本发明提供抑制细胞中的激酶的方法，其包括将所述细胞接触治疗有效量的具有式(1)、(2)、(2A)、(2B)、(2C)、(3A)、(3B)、(3C)或(3D)的化合物或其生理学可接受的盐，并任选地与第二种治疗剂联用，其中所述激酶选自Ros、IGF-1R、InsR和间变性淋巴瘤激酶；从而抑制所述激酶。

本发明还提供用于治疗、改善或预防对抑制Ros、IGF-1R、InsR或ALK有响应的病症的方法，其包括向需要这样的治疗的个体施用有效量的具有式(1)、(2)、(2A)、(2B)、(2C)、(3A)、(3B)、(3C)或(3D)的化合物或其可药用盐或其药物组合物，从而治疗所述病症。此外，本发明提供具有式(1)、(2)、(2A)、(2B)、(2C)、(3A)、(3B)、(3C)或(3D)的化合物在制备用于治疗由Ros、IGF-1R、InsR或ALK介导的病症的药物中的用途。本发明的化合物可单独使用或与第二种治疗剂例如化学治疗剂联用以治疗由Ros、IGF-1R、InsR或ALK介导的病症。

在特定实施方案中，本发明提供用于在患有ALK介导的病症的个体中治疗该病症的方法，其包括向哺乳动物施用治疗有效量的具有式(1)、(2)、(2A)、(2B)、(2C)、(3A)、(3B)、(3C)或(3D)的化合物或其生理学可接受的盐，并任选地与化学治疗剂联用，其中所述ALK介导的病症为自身免疫性疾病、移植病、感染性疾病或细胞增殖性病症。在其他实施方案中，本发明提供用于治疗细胞增殖性病症的方法，其包括向需要这样的治疗的个体施用有效量的具有式(1)、(2)、(2A)、(2B)、(2C)、(3A)、(3B)、(3C)或(3D)的化合物或其可药用盐或其药物组合物，并任选地与第二种治疗剂联用，从而治疗所述病症。或者，本发明提供具有式(1)、(2)、(2A)、(2B)、(2C)、(3A)、(3B)、(3C)或(3D)的化合物在制备用于治疗细胞增殖性病症的药物中的用途。在特定实例中，本发明的化合物可被单独使用或与化学治疗剂联用以治疗细胞增殖性病症，所述细胞增殖性病症包括但不限于多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、淋巴瘤、白血病、黑素瘤、肉瘤、骨肉瘤、滑膜肉瘤、尤因肉瘤、肝细胞瘤、胃肠道间质瘤或乳腺、肾、前列腺、结肠直肠、甲状腺、卵巢、胰腺、肺、子宫、呼吸道、脑、消化道、泌尿道、眼、肝、皮肤、头和颈、甲状腺或甲状旁腺的实体瘤。

定义

“烷基”是一种基团和作为其它基团例如卤代烷基和烷氧基的结构元素，并且可以是直链或支链的。本文所用的任选被取代的烷基、链烯基或炔基可以任选被卤化(例如，CF₃)，或者其中一个或多个碳原子可被杂原子，如NR、O或S替换或替代(例如，-OCH₂CH₂O-、烷基硫醇、硫代烷氧基、烷基胺等)。

“芳基”是指包含碳原子的单环或稠合的二环芳族环。“亚芳基”是指由芳基衍生的二价基团。例如，芳基可以是苯基、茚基、茚满基、萘基或1，2，3，4-四氢萘基，它们可任选地在邻、间或对位上被取代。

本文所用的“杂芳基”是其中一个或多个环成员是杂原子的以上所定义的芳基。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1，3]间二氧杂环戊烯、咪唑基、苯并-咪唑基、嘧啶基、呋喃基、

唑基、异

唑基、三唑基、苯并三唑基、四唑基、吡唑基、噻吩基、吡咯基、异喹啉基、嘌呤基、噻唑基、四嗪基、苯并噻唑基、

二唑基、苯并

二唑基等。

本文所用的“碳环”是指包含碳原子的饱和或部分不饱和的单环、稠合的二环或桥连的多环，其可任选被取代，例如，被＝O取代。碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙烯、环己酮等。

本文所用的“杂环”是其中一个或多个环碳是杂原子的以上所定义的碳环。例如，杂环可含有N、O、S、-N＝、-S-、-S(O)、-S(O)₂-或-NR-，其中R可为氢、C_1-4烷基或保护基。杂环的实例包括但不限于吗啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基、1，2，3，4-四氢喹啉基等。本文所用的杂环可包括二环胺和二环二胺。

本文所用的任何取代基(例如CH₂)中的H原子包括所有合适的同位素变体例如H、²H和³H。

除非另外指出，当取代基被认为被“任选地取代”时，其表示所述取代基为可被一个或多个基团各自并独立地取代的基团，所述一个或多个基团选自例如任选卤代的烷基、链烯基、炔基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、炔基、酰胺、氨基包括单取代和二取代氨基、芳基、芳基氧基、芳硫基、羰基、碳环、氰基、环烷基、卤素、杂烷基、杂链烯基、杂炔基、杂芳基、杂环、羟基、异氰酸基、异硫氰酸基、巯基、硝基、O-氨甲酰基、N-氨甲酰基、O-硫代氨甲酰基、N-硫代氨甲酰基、C-酰胺基、N-酰胺基、S-磺酰氨基、N-磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、全卤烷基、全氟烷基、甲硅烷基、O-磺酰基、硫代羰基、硫氰酸基、三卤甲基磺酰基，以及它们的被保护的化合物。可形成上述取代基的被保护的化合物的保护基是本领域技术人员已知的并可从参考资料中找到，例如Greene和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)，第三版，John Wiley & Sons，纽约，NY，1999，和Kocienski，Protective Groups(保护基)，Thieme Verlag，纽约，NY，1994，其全部内容在此引入用作参考。

本文所用的术语“药物组合”是指通过将活性成分混合或联合获得的产品，并且既包括活性成分的固定组合，又包括活性成分的非固定组合。术语“固定组合”是指活性成分例如式(1)的化合物和共活性剂以单一实体或剂量的形式同时向患者给药。术语“非固定组合”是指活性成分，例如式(1)的化合物和共活性剂以独立实体的形式同时、并行或在没有特定时间限制的情况下相继给药于患者，其中这种给药方式在患者体内提供治疗有效水平的各活性成分。后一种情况也适用于鸡尾酒疗法，例如给药三种或更多种活性成分。

术语“治疗有效量”是指在细胞、组织、器官、系统、动物或人体内引起研究者、兽医、医生或其它临床医师所寻求的生物学或医学响应的主题化合物的量。

“个体”指的是人类和哺乳动物，包括家畜和耕作动物、动物园动物、竞技动物或宠物，例如狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔等。在一些实施方案中，所述个体为人类。

与一种或多种其他治疗剂“组合”给药包括同时(共同)给药和按任意顺序先后给药。

实施本发明的方式

本发明提供了三嗪和嘧啶衍生物及其药物组合物和使用该化合物的方法。

其中

X为C_3-12碳环、C_6-10芳基或者含有NR⁶、O或S的5-10元杂芳基或4-10元杂环，它们各自任选地被1-3个R^5’基团取代；

Y为S(O)_0-2R⁸、SO₂NRR⁷或CONRR⁷；

Z¹为N或CH；

每个R³相同或不同且独立地为H或C_1-6烷基；

L为(CR₂)_1-4或键；

每个R为H或C_1-6烷基；

m和n独立地为0-2；

p为2-4；且

q为0-4。

在一个实施方案中，本发明提供式(2A)、(2B)或(2C)的化合物：

其中Z²和Z³中的一个为NR⁶、O或S，且另一个为CH₂；

Z⁴为NR⁶、O或S；

环E可以任选地含有一个双键；

R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和m如式(1)或(2)中所定义。

在另一实施方案中，本发明提供式(3A)或(3B)的化合物：

Z⁵、Z⁶和Z⁷中的一个为NR⁶、O或S，且其余为CH₂；且

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和m如式(1)或(2)中所定义。

在又一实施方案中，本发明提供式(3C)或(3D)的化合物：

W为5-6元杂环；且

另一方面，本发明提供式(4)或(5)的化合物或其可药用盐：

其中A为含有1-3个N杂原子的5-6元杂芳基，且任选地被1-2个R³基团取代；

B¹和B²独立地为芳基或杂芳基，它们各自任选地被1-3个R⁴基团取代；

B³为任选含有NR⁵、O、＝O或S的5-6元环，并与苯环稠合形成任选地被1-3个R³基团取代的稠合的9-10元环；

Ph为苯基；

X为C_3-12碳环、C_6-10芳基或者任选含有NR⁵、O或S的5-10元杂芳基或4-10元杂环；它们各自任选地被1-3个R³基团取代；或者X为C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基或(CR₂)_1-4CO₂R⁷，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；

Z¹为N或CH；

R¹和R²独立地为H、C(O)R⁶、C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷基；

R³和R⁴独立地为C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；或者独立地为卤素、硝基、氰基、C(R)(OR⁷)(R⁷)、OR⁷、NR(R⁷)、C(R)(NRR⁷)(R⁷)、(CR₂)_qY、C(O)O_0-1R⁷、C(O)NR(R⁷)、C(O)CRR⁷-NR(R⁷)、C(O)NR(CR₂)_pNR(R⁷)、C(O)NR(CR₂)_pOR⁷、C(O)NR(CR₂)_pSR⁷、C(O)NR(CR₂)_qS(O)_1-2R⁸、S(O)_0-2R⁸、(CR₂)_1-6NR(CR₂)_pOR⁷、(CR₂)_1-6NR(CR₂)_qC(O)R⁸、S(O)₂NRR⁷、S(O)₂NR(CR₂)_pNR(R⁷)或S(O)₂NR(CR₂)_pOR⁷；

R⁵为H、C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；或者为卤素、硝基或氰基；(CR₂)_p-OR⁷、(CR₂)_p-NR(R⁷)、-L-Y、-L-C(O)-R⁷、-(CR₂)_1-4-C(O)O-R⁷、-C(O)-(CR₂)_q-OR⁷、-L-C(O)-NRR⁷、-L-CR(OR⁷)-C_tF_(2t+1)，其中t为1-3；-L-C(O)-CR(R⁷)-NRR⁷、-L-C(O)-NR-(CR₂)_p-NRR⁷、-L-C(O)NR(CR₂)_pOR⁷、-L-C(O)-(CR₂)_q-NR-C(O)-R⁸、-L-C(O)NR(CR₂)_pSR⁷、-L-C(O)NR(CR₂)_qS(O)_1-2R⁸、(CR₂)_pNR(CR₂)_pOR⁷、(CR₂)_pNR-L-C(O)R⁸、-L-S(O)₂R⁸、-L-S(O)₂NRR⁷、-L-S(O)₂NR(CR₂)_pNR(R⁷)、-L-S(O)₂NR(CR₂)_pOR⁷或者为选自式(a)、(b)或(c)的基团：

其中R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自H或C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；或者R⁹和R¹⁰、R¹⁰和R¹³、R¹³和R¹⁴、R¹¹和R¹²或R¹¹和R¹³与它们所连接的碳和/或氮原子一起形成任选地含有选自C(O)、N、O和S(O)_0-2的最多3个原子或基团的3-7元饱和的、不饱和的或部分不饱和的环并任选地被1-3个R³基团取代；

L为(CR₂)_1-4或键；

R⁷和R⁸独立地为(CR₂)_qY或C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；或R⁷为H；

Y为C_3-12碳环、C_6-10芳基或5-10元杂芳基或4-10元杂环，它们各自任选地被1-3个R³基团取代；

每个R为H或C_1-6烷基；

p为2-4；且

q为0-4；

条件是当B¹为苯基时，B¹被S(O)_0-2R⁸、SO₂NRR⁷或CONRR⁷取代。

在一些实例中，本发明提供具有式(4)或(5)的化合物，其中B¹和B²为苯基；B¹被SO₂R⁸、SO₂NRR⁷或CONRR⁷取代；且R⁷和R⁸为C_1-6烷基。

在一些实施方案中，本发明提供具有式(5A)、(5B)或(5C)的化合物：

其中Z²和Z³中的一个为NR⁵、O或S，且另一个为CH₂；

Z⁴为NR⁵、O或S；

环E可以任选地含有一个双键；且

R⁵如式(4)或(5)中所定义。

在其他实施方案中，本发明提供具有式(6A)或(6B)的化合物：

其中R^4a、R^4b和R^4c独立地为H、卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基；

Z⁵、Z⁶和Z⁷中的一个为NR⁵、O或S，且其余为CH₂；且

R⁵如式(4)或(5)中所定义。

在上述式(6A)或(6B)中，Z⁶为NR⁵或O且Z⁵和Z⁷为CH₂。在其他实例中，R^4b为H；且R^4a和R^4c独立地为卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基。

在其他实施方案中，本发明提供具有式(7)的化合物：

其中X为任选含有NR⁵、O或S的5-6元杂芳基或杂环；或者X为C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基或(CR₂)_1-4CO₂R⁷，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；且

R⁴如果存在，则为羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基。

在上述式(4)、(5)、(5A)、(5B)、(5C)、(6A)、(6B)或(7)中，R¹和R²可为H。在上述任意式中，环A可为

其中R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷和R¹⁸独立地为H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；或者独立地为卤素、硝基、氰基或(CR₂)_qY；且

Y为C_3-12碳环、C_6-10芳基；或5-10元杂芳基或4-10元杂环。

在以上各式中，任何不对称碳原子可以以(R)-、(S)-或(R，S)-构型存在。因此所述化合物可以以异构体混合物或者纯异构体的形式存在，例如以纯对映体或非对映体的形式存在。本发明还包括本发明化合物的可能的互变异构体。

本发明还包括本发明化合物的所有合适的同位素变体或其可药用盐。本发明化合物的同位素变体或其可药用盐的定义是其中至少一个原子被具有相同原子序数但原子量与自然界常见的原子量不同的原子所替代。本发明的化合物及其可药用盐可包含的同位素的实例包括但不限于氢、碳、氮和氧的同位素，例如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl和¹²³I。本发明化合物的某些同位素变体及其可药用盐，例如含有放射性同位素例如³H或¹⁴C的化合物及其可药用盐，可用于药物和/或底物组织分布研究。

在具体实例中，由于制备简便、容易检测，可使用²H、³H和¹⁴C同位素。在其它实例中，用例如²H同位素取代可由于代谢稳定性增强获得某些治疗上的优势，例如半衰期加长或剂量要求减少。本发明化合物的同位素变体或其可药用盐通常可通过常规方法使用适当试剂的适当同位素变体制备。所述化合物的同位素变体有可能改变化合物的代谢情况和/或使物理性质例如疏水性等发生小的变化。同位素变体有可能加强功效和安全性，提高生物利用度和加长半衰期、改变蛋白质结合、改变生物分布、增加活性代谢物比例和/或减少反应性或毒性代谢物的形成。

在上述各式中，每个任选被取代的基团可被C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_3-6炔基(其中每个基团都可以任选被卤素取代或任选有碳原子被N、S、O或其组合取代或替代(例如羟基C₁-C₈烷基、C₁-C₈烷氧基C₁-C₈烷基))；卤素、氨基、脒基、C_1-6烷氧基；羟基、亚甲基二氧基、羧基；C_1-8烷基羰基、C_1-8烷氧基羰基、氨基甲酰基、C_1-8烷基氨基甲酰基、氨磺酰基、氰基、氧代、硝基或如前所述的任选被取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基所取代。

药理学和用途

当在体外在无细胞的激酶试验和在细胞试验中进行测试时，本发明化合物及其可药用盐表现出有价值的药理学性质，因此可用作药物。

一方面，式(1)、(2)、(2A-2C)、(3A-3D)、(4)、(5)、(5A-5C)、(6A-6B)或(7)的化合物可抑制间变性淋巴瘤激酶(ALK)和NPM-ALK的融合蛋白的酪氨酸激酶活性。该蛋白酪氨酸激酶产生于核磷蛋白(NPM)和ALK的基因融合，导致不依赖ALK配体的蛋白酪氨酸激酶活性。NPM-ALK在许多导致血液性和增殖性疾病的造血和其它人类细胞的信号传导中起关键作用，例如间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)和非-何杰金氏淋巴瘤(NHL)、特别是ALK+NHL或Alkomas，以及炎性肌纤维母细胞瘤(IMT)和成神经细胞瘤。(Duyster等人.2001 Oncogene 20，5623-5637)。除了NPM-ALK外，在人的血液性和增殖性疾病中还发现了其它基因融合，例如TPM3-ALK(非肌肉原肌球蛋白与ALK的融合)。

对ALK酪氨酸激酶活性的抑制可利用已知方法证明，例如利用ALK的重组激酶结构域以类似于J.Wood等人.Cancer Res.60，2178-2189(2000)所述的VEGF-R激酶试验进行。利用GST-ALK蛋白酪氨酸激酶的体外酶试验通常在96-孔板上以滤器结合试验的形式在20mM Tris HCl、pH＝7.5、3mM MgCl₂、10mM MnCl₂、1mM DTT、0.1μCi/试验(＝30μl)[γ-³³P]-ATP、2μM ATP、3μg/mL聚(Glu、Tyr 4∶1)Poly-EY(Sigma P-0275)、1％DMSO、25ng ALK酶中进行。将试验在室温下保温10分钟。通过加入50μl 125mM EDTA终止反应并将反应混合物转移到事先用甲醇润湿的MAIP Multiscreen板上(Millipore，Bedford，MA，USA)并用H₂O重新水合5分钟。洗涤(0.5％H₃PO₄)后将板在液体闪烁计数器中计数。IC₅₀值通过抑制百分比的线性回归分析计算得到。

式(1)、(2)、(2A-2C)、(3A-3D)、(4)、(5)、(5A-5C)、(6A-6B)或(7)的化合物可有效地抑制过度表达人NPM-ALK的鼠BaF3细胞(DSMZ Deutsche Sammiung von Mikroorganismen und Zelikulturen GmbH，德国)的生长。NPM-ALK的表达可通过用编码NPM-ALK的表达载体pClneo^TM(Promega Corp.，Madison WI，USA)转染BaF3细胞系、随后选择G418耐受细胞来实现。未转染的BaF3细胞依赖IL-3存活。相反，表达NPM-ALK的BaF3细胞(以下称作BaF3-NPM-ALK)可在不存在IL-3的条件下增殖，因为它们通过NPM-ALK激酶得到增殖信号。因此NPM-ALK激酶的推定抑制剂消除了生长信号并且可导致抗增殖活性。但是，NPM-ALK激酶的推定抑制剂的抗增殖活性可通过加入IL-3来消除，它通过不依赖于NPM-ALK的机制提供生长信号。还描述了类似的利用FLT3激酶的细胞系统(参见E Weisberg等人，Cancer Cell；1，433-443(2002))。

本发明化合物的抑制活性可通过以下所述的方法来确定。通常，将BaF3-NPM-ALK细胞(15,000/微滴定板孔)转移到96-孔微滴定板上。以DMSO的终浓度不大于1％(v/v)的方式加入一系列浓度(稀释序列)的溶于二甲基亚砜(DMSO)的待测化合物。加入后，将该板保温2天，期间不含待测化合物的对照培养物能够完成两个细胞分裂周期。BaF3-NPM-ALK细胞的生长通过YOPRO^TM染色测定[T Idziorek等人，J.Immunol.Methods；185：249-258(1995)]：将包含20mM柠檬酸钠，pH 4.0，26.8mM氯化钠，0.4％NP40，20mM EDTA和20mM的25μl溶解缓冲液加入到每个孔中。细胞裂解在室温下在60分钟内完成，结合到DNA上的YOPRO^TM的总量利用具有下列设置的Cytofluor II 96-孔读数器(PerSeptive Biosystems)来确定：激发(nm)485/20，发射(nm)530/25。

IC₅₀值可通过计算机辅助系统使用下式来确定：

IC₅₀＝[(ABS_测试-ABS_开始)/(ABS_对照-ABS_开始)]x 100.(ABS＝吸光度)

那些实验中的IC₅₀值以用导致与不含抑制剂的对照所得的细胞量相比低50％的所讨论的测试化合物的浓度给出。游离形式或可药用盐形式的本发明化合物，可表现出有价值的药理学性质，例如，如本申请中的体外试验所述。一般而言，本发明化合物的IC₅₀值为1nM至10μM。在一些实例中，本发明化合物的IC₅₀值为0.01μM至5μM。在其它实例中，本发明化合物的IC₅₀值为0.01μM至1μM或更具体而言为1nM至1μM。在其它实例中，本发明化合物的IC₅₀值低于1nM或高于10μM。在10μM下，本发明化合物对ALK的抑制百分比可高于50％，或者在其它实施方案中，抑制百分比可高于约70％。

本发明的化合物也可使用上文针对BaF3-NPM-ALK细胞系所描述的相同的方法学，在人类KARPAS-299淋巴瘤细胞系中确定抗增殖作用(DSMZ Deutsche Sammiung von Mikroorganismen und Zelikulturen GmbH，布伦瑞克，德国，描述于WG Dirks等人Int.J.Cancer 100，49-56(2002)中)。在一些实施方案中，本发明的化合物可显示约0.01至1μM的IC₅₀的抑制活性。本发明的化合物对ALK的自磷酸化作用可通过如WGDirks等人Int.J.Cancer 100，49-56(2002)中描述的免疫印迹法，在人类KARPAS-299淋巴瘤细胞系中确定。

本发明化合物还可抑制胰岛素样生长因子受体1(IGF-1R)，并可用于IGF-1R介导的疾病的治疗。IGF-1R介导的疾病的实例包括但不限于增殖性疾病诸如肿瘤，例如乳腺、肾、前列腺、结肠直肠、甲状腺、卵巢、胰腺、神经、肺、子宫或胃肠道的肿瘤，以及骨肉瘤和黑素瘤。本发明化合物作为IGF-1R酪氨酸激酶活性的抑制剂的效能可利用细胞捕获ELISA来证明。在该试验中，测定本发明化合物对抗IGF-1R的(IGF-1)-诱导的自身磷酸化的活性。

本发明化合物还可用于治疗和/或预防急性或慢性炎性疾病或病症或自身免疫性疾病例如类风湿性关节炎、骨关节炎、全身性红斑狼疮、桥本甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、糖尿病(I和II型)及其相关的病症、呼吸道疾病例如哮喘或炎性肝损伤、炎性肾小球损伤、免疫介导的病症或疾病的皮肤症状、炎性和过度增殖性皮肤病(诸如牛皮癣、特应性皮炎、过敏性接触性皮炎、刺激性接触皮炎和其它的湿疹皮炎、脂溢性皮炎)、炎性眼病、例如干燥综合征，、角膜结膜炎或葡萄膜炎、炎性肠病、克罗恩病或溃疡性结肠炎。

按照前面的描述，本发明提供了：

(1)用作药物的本发明化合物；

(2)用作ALK抑制剂、Ros抑制剂、IGF-1R抑制剂和/或InsR抑制剂，例如用于上文所列的特定适应症中的任何一种的本发明化合物；

(3)例如用于上文所列的适应症中的任何一种的药物组合物，其包含作为活性成分的本发明化合物和一种或多种可药用稀释剂或载体；

(4)在需要所述治疗的个体中治疗上文所列的任何特定适应症的方法，该方法包括施用有效量的本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物；

(5)本发明化合物在制备用于治疗或预防其中ALK、Ros、IGF-1R和/或InsR活化起作用或被涉及的疾病或病症的药物中的用途；

(6)以上的(4)所定义的方法，该方法包括共同给药、例如同时或依次施用治疗有效量的本发明化合物和一种或多种其它药物，所述的其它药物可用于上文所列的特定适应症中的任何一种；

(7)包含治疗有效量的本发明化合物和一种或多种其它药物的组合，所述的其它药物可用于上文所列的特定适应症中的任何一种；

(8)本发明化合物在制备用于治疗或预防对抑制间变性淋巴瘤激酶有响应的疾病的药物中的用途；

(9)根据(8)所述的用途，其中待治疗的疾病选自间变性大细胞淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、炎性成肌纤维细胞瘤、成神经细胞瘤和肿瘤疾病；

(10)根据(8)或(9)所述的用途，其中该化合物是实施例中任何一项的化合物或其可药用的盐；

(11)用于治疗对抑制间变性淋巴瘤激酶有响应的疾病、特别是选自间变性大细胞淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、炎性成肌纤维细胞瘤、成神经细胞瘤和肿瘤的疾病的方法，该方法包括施用有效量的本发明化合物或其可药用盐。

给药和药物组合物

如本文所使用，药物组合物，指的是本发明的化合物与其他化学成分例如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、增稠剂和/或赋形剂的混合物。所述药物组合物促进了所述化合物向有机体给药。含有本发明的化合物的药物组合物可通过本领域已知的任何常规的剂型和途径以作为组合物的治疗有效量进行给药，所述剂型和途径包括但不限于静脉、口服、直肠、气雾剂、肠胃外、眼、肺、经皮、阴道、耳、鼻和局部给药。

人们可按局部的而非全身方式给药所述化合物，例如：通常以储库或缓释制剂经由直接注射所述化合物至器官中。此外，人们可以以靶向药物递送系统例如以用器官特异性抗体涂覆的脂质体来施用含有本发明的化合物的药物组合物。所述脂质体靶向于所述器官并由所述器官有选择地吸收。另外，含有本发明的化合物的药物组合物可按速释制剂、延长释放制剂或中等释放制剂的形式提供。

对于口服给药，本发明的化合物可通过将活性化合物与本领域熟知的可药用载体或赋形剂结合来容易地进行配制。这样的载体能够使本文描述的化合物被配制为用于被治疗的患者口服的片剂、散剂、丸剂、锭剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、糖浆剂、酏剂、膏剂、混悬剂等。

用于口服使用的药物组合物可通过将一种或多种固体赋形剂与一种或多种本文描述的化合物进行混合得到，如果需要的话，任选地碾磨所得混合物并在加入合适的助剂后加工粒料以得到片剂或锭芯。特别地，合适的赋形剂为填充剂例如糖类包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素制剂如：例如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠；或者其他的例如：聚乙烯吡咯烷酮(PVP或聚维酮)或磷酸钙。如果需要的话，可加入崩解剂，例如交联的交联羧甲纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或者海藻酸或其盐例如海藻酸钠。

锭芯可提供合适的包衣。为此目的，可使用浓糖溶液，其可任选地含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或着色剂可加至所述片剂或锭剂包衣中，用于鉴别或表示活性化合物剂量的不同组合。

可以口服使用的药物制剂包括由明胶制得的压接式胶囊(push-fit capsule)以及由明胶和增塑剂例如甘油或山梨糖醇制得的密封软胶囊。所述压接式胶囊可含有活性成分，其与填充剂例如乳糖、粘合剂例如淀粉和/或润滑剂例如滑石或硬脂酸镁以及任选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性化合物可溶解或混悬于合适的液体，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。此外，还可加入稳定剂。

对于含服或舌下给药，所述组合物可采用常规方式配制为片剂、锭剂或凝胶剂的形式。肠胃外注射可包括快速浓注或连续输注。本发明的化合物的药物组合物可按适于肠胃外注射的形式作为油性或水性载体中的灭菌混悬剂、溶液剂或乳剂，并且可含有配方剂例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。用于肠胃外给药的药物制剂包括在水溶形式中的活性化合物的含水溶液剂。另外，所述活性化合物的混悬剂可制备为合适的油性注射混悬剂。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油例如芝麻油或合成的脂肪酸酯例如油酸乙酯或甘油三酯，或者为脂质体。水性注射混悬剂可包含增加所述混悬剂的粘性的物质例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，所述混悬剂还可包含合适的稳定剂或增加所述化合物的溶解度以允许制备高浓度溶液剂的试剂。或者，所述活性成分可为粉末形式，用于以合适的载体如灭菌的无热原水在使用前配制。

本发明的化合物可被局部给药，并且可被配制进许多可局部给药的组合物例如溶液剂、混悬剂、洗剂、凝胶剂、糊剂、药棒、香脂、乳膏剂或软膏剂中。这样的药用化合物可含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。

适于经皮给药的制剂可应用经皮递送装置和经皮递送药贴，并可为溶解和/或分散在聚合物中的亲脂乳剂或缓冲水溶液，或者为粘合剂。这样的药贴可制成连续的、脉冲的或者按需递送的药剂。此外，本发明的化合物的经皮递送可通过离子电渗透疗法的药贴等形式实现。另外，经皮药贴可提供本发明的化合物的受控递送。可通过使用速率控制膜或通过在聚合物基质或凝胶中截留所述化合物来减慢吸收速率。相反，吸收促进剂可用于增加吸收。吸收促进剂或载体可包括可吸收的药学可接受的溶剂以帮助通过皮肤。例如，经皮装置为包含衬垫部分、含有所述化合物和任选的载体的储库以及任选的速率控制屏障的绷带形式(其用于经过较长的时间以控制和预定速率递送所述化合物至宿主的皮肤)，以及将所述装置固定到皮肤的手段。

对于通过吸入给药，本发明的化合物可为气雾剂、喷雾或散剂的形式。本发明的化合物的药物组合物可按喷雾剂的形式被方便地递送，其通过使用合适的抛射剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体被从增压包或喷雾器中推出。就增压气雾剂而言，剂量单元可通过提供阀以递送计量量来确定。胶囊剂和弹射剂例如，仅为举例，用在吸入剂或吹入剂中的明胶可被配制为含有所述化合物和合适的粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。

本发明的化合物还可被配制在直肠组合物中，例如灌肠剂、直肠凝胶剂、直肠泡沫剂、直肠气雾剂、栓剂、胶状栓剂或保留灌肠剂、含有如可可脂或其他甘油酯的常规栓剂基质，以及合成聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、PEG等。在所述组合物的栓剂形式中，低熔点蜡例如但不限于脂肪酸甘油酯任选地与可可脂组合的混合物首先融化。

药物组合物可使用一种或多种生理学可接受的载体包括赋形剂和助剂以常规方式配制，助剂可促进加工所述活性化合物进入药学上可用的制剂中。合适的制剂取决于所选择的给药途径。任何熟知的技术、载体和赋形剂可合适地使用且是本领域已知的。包含本发明的化合物的药物组合物可按常规方式制造，例如：仅作为举例，通过常规的混合、溶解、制粒、制锭、磨细、乳化、包封、包埋或压缩过程实现。

所述药物组合物将包括至少一种可药用载体、稀释剂或赋形剂以及作为活性成分的本文描述的式(1)、(2A-2C)、(3A-3D)、(4)、(5)、(5A-5C)、(6A-6B)或(7)的化合物，化合物为游离酸或游离碱形式或者可药用盐形式。此外，本文描述的所述方法和药物组合物包括使用N-氧化物、晶形(也称为多晶型物)以及具有相同类型的活性的这些化合物的活性代谢物。在一些情况中，化合物可按互变异构体存在。所有互变异构体被包括在本文提出的化合物的范围内。另外，本文所述的化合物可以以非溶剂化物的形式以及与可药用的溶剂例如水、乙醇等的溶剂化物形式存在。本文所述的化合物的溶剂化物形式也被视为在本文公开。此外，所述药物组合物可包括其他药物或药剂、载体、助剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，所述药物组合物还可包含其他在治疗上有价值的物质。

用于制备包含本文描述的化合物的组合物的方法包括将所述化合物与一种或多种惰性的可药用赋形剂或载体配制以形成固体、半固体或液体。固体组合物包括但不限于：散剂、片剂、可分散的颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。液体组合物包括其中溶解了化合物的溶液剂、包含化合物的乳剂或者包含含有本文公开的化合物的脂质体、微团或者纳米颗粒的溶液剂。半固体组合物包括但不限于：凝胶剂、混悬剂和乳膏剂。所述组合物可为液体溶液剂或混悬剂、适于在使用前溶解或悬浮在液体中的固体形式、或者为乳剂。这些组合物还可含有小量的无毒辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等。

本文描述的药物组合物的概述可在例如下述文献中找到：Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版(伊斯顿，Pa.：Mack Publishing Company，1995)；Hoover，John E.，Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，伊斯顿，宾夕法尼亚1975；Liberman，H.A.和Lachman，L.，编辑，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，纽约，N.Y.，1980；和Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版(Lippincott Williams & Wilkins1999)，它们的全部内容在此引作参考。

给药方法与治疗方法

含有本文描述的化合物的组合物可用于预防性和/或治疗性治疗。在治疗性应用中，所述组合物以有效治愈或至少部分阻止疾病或病症的症状的量向已患有所述疾病或病症的患者给药。通过常规实验(包括但不限于：剂量按比例增加的临床试验)确定治疗有效量被认为在本领域技术人员的能力范围内。

本发明的化合物可作为单一活性成分给药，或者与第二种治疗剂联用。例如，本发明的化合物可与其他抗肿瘤疾病的治疗剂、与免疫调节治疗中有用的试剂或者与对以上所述的多种疾病有效的药物组合物一起给药，例如与环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、氟达拉滨、吉西他滨、顺铂、碳铂、长春新碱、长春碱、依托泊苷、依立替康、紫杉醇、多西他赛、Rituxan、阿霉素、吉非替尼或伊马替尼联合给药；或还可与环孢菌素、雷帕霉素、子囊霉素或它们的免疫抑制性类似物、例如环孢菌素A、环孢菌素G、FK-506、西罗莫司或依维莫司、皮质类固醇例如泼尼松、环磷酰胺、硫唑嘌呤、甲氨喋呤、金盐、柳氮磺吡啶、抗疟药、布喹那、来氟米特、咪唑立宾、麦考酚酸、麦考酚酸吗乙酯、15-脱氧精胍菌素、免疫抑制性单克隆抗体，例如白细胞受体的单克隆抗体，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、T CD40、CD45、CD58、CD80、CD86、CD152、CD137、CD154、ICOS、LFA-1、VLA-4或它们的配体的抗体，或其他免疫调节化合物，例如CTLA41g一起给药。

本发明的化合物还可与化学治疗剂联用以治疗细胞增殖性病症，所述细胞增殖性病症包括但不限于淋巴瘤、骨肉瘤、黑素瘤或乳腺、肾、前列腺、结肠直肠、甲状腺、卵巢、胰腺、神经、肺、子宫或胃肠肿瘤。可用于本发明的组合物和方法中的化学治疗剂的实例包括但不限于：蒽环类抗生素、烷化剂(如：丝裂霉素C)、烷基磺酸酯、氮丙啶、乙撑亚胺、甲基三聚氰胺、氮芥、亚硝基脲、抗生素、抗代谢物、叶酸类似物(如：二氢叶酸还原酶抑制剂例如甲氨蝶呤)、嘌呤类似物、嘧啶类似物、酶类、鬼臼毒素、含铂试剂、干扰素和白介素。可用于本发明的组合物和方法中的已知化学治疗剂的具体实例包括但不限于：白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、苯佐替派、卡波醌、美妥替哌、乌瑞替派、六甲蜜胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基磷酰胺、三羟甲蜜胺、苯丁酸氮芥、萘氮芥、环磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥、卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、达卡巴嗪、甘露莫司汀、甘露莫司汀、二溴卫矛醇、哌泊溴烷、阿柔比星、放线菌素F(1)、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博莱霉素、放线菌素C、卡柔比星、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、道诺霉素、6-重氮-5-氧代-1-正亮氨酸、阿霉素、表柔霉素、丝裂霉素C、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、普卡霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、链黑菌素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星、二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙、氟达拉滨、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤、安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、氟尿嘧啶、替加氟、L-门冬酰胺酶、阿法链道酶、醋葡醛内酯、醛磷酰胺苷、氨基乙酰丙酸、安吖啶、bestrabucil、比生群、卡铂、顺铂、地磷酰胺、秋水仙胺、地吖醌、依氟鸟氨酸、依利醋铵、依托格鲁、依托泊苷、氟他胺、硝酸镓、羟基脲、α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素、白细胞介素-2、香菇多糖、氯尼达明、米托胍腙、米托蒽醌、莫哌达醇、二胺硝吖啶、喷司他丁、蛋氨氮芥、吡柔比星、鬼臼酸、2-乙基肼类、丙卡巴肼、雷佐生、西佐喃、锗螺胺、紫杉醇、他莫昔芬、替尼泊苷、替奴佐酸、三亚胺醌、2，2′，2″-三氯三乙胺、乌拉坦、长春碱、长春新碱和长春地辛。

当本发明的化合物与其他治疗剂共同给药时，共同给药的化合物的剂量将根据所应用的共同药物的类型、所应用的具体药物、受治疗的疾病或病症等变化。此外，当与一种或多种生物活性剂共同给药时，本发明的化合物可同时或连续地与所述生物活性剂进行给药。本发明的化合物与第二种治疗剂的给药可具有累加或协同效应。

通常，本发明的化合物以治疗有效量通过本领域已知的任何常规和可接受的方式、单独地或与一种或多种治疗药物组合来进行给药。治疗有效量可随疾病的严重程度、个体的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力和其它因素而在宽范围内进行变化。通常，以每日约0.03至2.5mg/kg体重的日剂量系统给药可获得满意结果。对于大型哺乳动物例如人而言，每日推荐剂量为约0.5mg至约100mg，可方便地以每日最多4次的分次剂量或以缓释剂型进行给药。口服给药的适宜单位剂型包含大约1至50mg活性成分。

这样的治疗方案的毒性和治疗效能可通过在细胞培养物或实验动物中的标准药学操作进行确定，其包括但不限于：确定LD₅₀(使50％的群体致死的剂量)和ED₅₀(在50％的群体中治疗有效的剂量)。毒性效应和治疗效应之间的治疗比率是治疗指数并可表示为LD₅₀和ED₅₀之间的比率。在细胞培养物测定和动物研究中获得的数据可用于配制用于人类的剂量范围。这样的化合物的剂量优选存在于包括ED₅₀和最小毒性的循环浓度范围内。该剂量可根据所应用的剂型和所使用的给药途径在该范围内变化。

制备本发明化合物的方法

在下文的实施例中描述了制备本发明化合物的一般操作。在所述反应中，可能有必要保护在终产物中所需的反应性官能团，例如羟基、氨基、亚氨基、巯基或羧基，以避免它们不必要地参与反应。可按照标准操作使用常规的保护基团(例如，参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“有机化学中的保护基团(Protective Groups in Organic Chemistry)”，John Wiley and Sons，1991)。

在一些实例中，具有式(1)的化合物可按照描述于路线1中的合成操作进行制备：

W＝CH₂或NH；Z¹＝N或CH

路线1

或者，式(1)的化合物可按照描述于路线2中的合成操作进行制备：

Z¹＝N或CH

路线2

本发明化合物(包括它们的盐)还可以以水合物的形式得到，或它们的结晶可包括例如用于结晶的溶剂(以溶剂化物的形式存在)。盐通常可转化成游离形式的化合物、例如通过用适当的碱性试剂例如用碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱金属氢氧化物例如碳酸钾或氢氧化钠处理。碱加成盐形式的本发明化合物可通过用适当的酸(例如盐酸等)处理而转化成相应的游离酸。由于游离形式的新化合物与盐形式的化合物(包括可用作中间体的那些盐，例如在新化合物的纯化或鉴别过程中)之间的密切关系，任何提及的游离化合物在适当的时候都应理解成还指相应的盐。

含有成盐基团的本发明化合物的盐可按照本领域已知的方式制备。式(1)、(2)、(2A-2C)、(3A-3D)、(4)、(5)、(5A-5C)、(6A-6B)或(7)的化合物的酸加成盐可通过用酸或用适当的阴离子交换剂处理来得到。本发明化合物的可药用盐例如酸加成盐的形式可用有机或无机酸从含有碱性氮原子的式(1)、(2)、(2A-2C)、(3A-3D)、(4)、(5)、(5A-5C)、(6A-6B)或(7)的化合物来形成。

适当的无机酸包括但不限于氢卤酸例如盐酸、硫酸或磷酸。适当的有机酸包括但不限于羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二酸、乙醇酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、氨基酸，例如谷氨酸或天门冬氨酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、环己烷甲酸、金刚烷甲酸、苯甲酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、邻苯二甲酸、苯基乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲-或乙磺酸、2-羟基乙磺酸、乙-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘-二磺酸、2-、3-或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N-环己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸或其它有机质子酸、例如抗坏血酸。为了分离或纯化的目的，还可以使用不可药用盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。为了为了治疗应用，仅使用可药用盐或游离化合物(在适当的情况下是药物制剂的形式)。

非氧化形式的本发明化合物可通过在适宜的惰性有机溶剂(例如乙腈、乙醇、二

烷水溶液等)中，于0至80℃下，用还原剂(例如，硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等)处理本发明化合物的N-氧化物而制备。

本发明化合物的前药衍生物可用本领域普通技术人员已知的方法(例如，详情见Saulnier等人(1994)，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters，第4卷，第1985页)来进行制备。例如，合适的前药可通过将未衍生化的本发明化合物与适宜的氨基甲酰化试剂(例如，1，1-酰氧基烷基羰基氯(carbanochloridate)、对-硝基苯基碳酸酯等)反应来制备。

本发明化合物的被保护衍生物可用本领域普通技术人员已知的方法进行制备。用于产生保护基团和除去保护基团的技术的详细描述可见于T.W.Greene，“有机化学中的保护基团(Protecting Groups in OrganicChemistry)”，第3版，John Wiley and Sons，Inc.，1999。

本发明化合物可通过将化合物的外消旋混合物与光学活性的拆分剂反应以形成一对非对映异构体化合物，分离非对映异构体并回收光学纯的对映异构体来制备其单个的立体异构体。对映异构体的拆分可利用本发明化合物的共价非对映异构体衍生物来进行，或者可以用易于解离的复合物(例如，结晶的非对映异构体盐)来进行。非对映异构体具有不同的物理性质(例如，熔点、沸点、溶解度、反应性等)并且可以很容易地利用这些差异进行分离。非对映异构体可以通过分步结晶、色谱法分离，或者可以通过基于溶解度差异的分离/拆分技术进行分离。然后通过任何不会导致消旋化的操作方法回收光学纯的对映异构体与拆分剂。用于从外消旋混合物中拆分化合物的立体异构体的技术的更详细描述可见于Jean Jacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen，“对映异构体，外消旋体和拆分(Enantiomers，Racemates and Resolutions)”，John Wiley And Sons，Inc.，1981。

总之，本发明化合物可通过实施例中所述的方法制备；和

(a)任选地将本发明化合物转化为可药用盐；

(b)任选地将盐形式的本发明化合物转化为非盐形式；

(c)任选地将非氧化形式的本发明化合物转化为可药用的N-氧化物；

(d)任选地将N-氧化物形式的本发明化合物转化为其非氧化物形式；

(e)任选地从异构体混合物拆分本发明化合物的单个异构体；

(f)任选地将未衍生化的本发明化合物转化为可药用的前药衍生物；和

(g)任选地将本发明化合物的前药衍生物转化为其未衍生化的形式。

只要没有对起始材料的制备进行特别描述，则该化合物是已知的或者可以用与本领域已知的方法或下文实施例中所公开的方法类似的方法来进行制备。本领域技术人员将意识到，上述转化仅仅是本发明化合物制备方法的代表，也可以类似地使用其它众所周知的方法。通过解释说明本发明化合物的制备的下列实施例来进一步举例说明本发明，但不限制本发明。

实施例1

N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-2，4-二胺(1)

2-(甲硫基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]]三嗪-4-醇

将7g 2-巯基吡唑并[1，5-a][1，3，5]]三嗪-4-醇(根据Chemische Berichte，1971，104：3039-47中描述的方法制备)溶解在5％NaOH水溶液(100mL)中。将该溶液冷却至5℃(冰浴)并滴加6g碘甲烷。在15-20分钟后，加入活性炭并过滤混合物，接着用乙酸酸化。过滤沉淀的(2-(甲硫基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]]三嗪-4-醇，干燥并分离。再在AcOH中重结晶得到2-(甲硫基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]]三嗪-4-醇。MS(ES⁺)：183.0(M+1)⁺。

4-氯-2-(甲硫基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪

向10mL三氯氧化磷和1mL N，N-二甲基苯胺的混合物中加入0.5g2-(甲硫基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]]三嗪-4-醇(来自于先前步骤的粗品)。将该溶液回流30-60分钟直至全部固体溶解。减压除去多余的磷并在剧烈搅拌下将糖浆状残余物倾至冰水混合物上。10分钟后，用乙醚萃取该水溶液。收集乙醚层并用冷水洗涤，接着用无水Na₂SO₄干燥。过滤并减压浓缩得到期望的4-氯-2-(甲硫基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪。MS(ES⁺)：201.0(M+1)⁺。

N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-2-(甲硫基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-4-胺

在100mL异丙醇中的4-氯-2-(甲硫基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪(10mmol)和2-(N，N-二甲基磺酰基)苯胺(10mmol)溶液搅拌回流1小时。冷却至室温后，向该反应混合物中加入Et₃N(12mmol)，接着在回流下加热该溶液30分钟。后处理毕，经SiO₂快速色谱法纯化残余物(洗脱液：己烷/EtOAc 4∶1)以得到期望的N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-2-(甲硫基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-4-胺。MS(ES⁺)：364.08(M+1)⁺。

N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-2-(甲基磺酰基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-4- 胺

在0℃，向10mL 1，2-二氯乙烷中的N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-2-(甲硫基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-4-胺(1mmol)溶液中缓慢加入MCPBA(3mmol)。将反应混合物逐渐加热至室温并搅拌1小时。后处理毕，经SiO₂快速色谱法纯化残余物(洗脱液：CH₂Cl₂/MeOH 9∶1)以得到N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-2-(甲基磺酰基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-4-胺。MS(ES⁺)：396.07(M+1)⁺。

N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-2，4-二胺

向1mL异丙醇中的N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-2-(甲基磺酰基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-4-胺(0.5mmol)悬浮液中加入2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯胺(0.5mmol)和4-甲基苯磺酸(1mmol)。该混悬液在150℃搅拌3小时。冷却至室温并后处理完毕，使用制备HPLC纯化残余物以得到N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-2，4-二胺。¹H NMR(MeOD，400MHz)δ8.51-8.54(d，1H)，7.94-8.04(m，2H)，7.35-7.47(m，3H)，6.90(s，1H)，6.34-6.35(d，1H)，4.54-4.60(m.1H)，3.82-3.85(m，2H)，3.23-3.30(m，1H)，2.91-3.01(m，6H)，2.25-2.33(m，5H)，2.03-2.06(m，2H)，1.33-1.35(d，6H)，1.26-1.28(d，6H)；MS(ES⁺)：578.28(M+1)⁺。

实施例2

(R)-(4-(4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-2-基氨基)-5-甲氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-基)(吗啉-3-基)甲酮(70)

在350mL圆底压力罐中，向80mL 2-丙醇中的N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-2-(甲基磺酰基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-4-胺(6.3g，15.9mmol)和2-甲氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯胺TFA盐(15.9mmol，以游离碱计)的混合物中加入TFA(1.22mL，15.9mmol)。将得到的混合物在150℃加热三小时。冷却至室温后，沉淀出产物。用冷的2-丙醇洗涤滤液并空气干燥，得到作为TFA盐的N⁴-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-N²-(2-甲氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-2，4-二胺。

向在30mL DMF中的该TFA盐(1.26g，2.0mmol)、(R)-4-(叔丁氧羰基)吗啉-3-甲酸(0.504g，2.2mmol)和HATU(0.847g，2.2mmol)的混合物中加入DIPEA(1.76mL，10mmol)。将得到的溶液在室温搅拌30分钟并接着滴加至150mL水中。过滤收集沉淀并空气干燥得到(R)-3-(4-(4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪-2-基氨基)-5-甲氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-羰基)吗啉-4-甲酸叔丁酯，为白色固体。将该羧酸酯(1.3g，1.7mmol)溶解在10mL的1，4-二

烷的4M HCl中并在室温搅拌30分钟。通过蒸发除去溶剂并将残余物在100mL CH₂Cl₂和100mL饱和NaHCO₃之间分配。分离各层并将水层用CH₂Cl₂(3x100mL)萃取。合并有机层并经NaSO₃干燥，浓缩并通过硅胶层析法纯化(在CH₂Cl₂中的0至8％MeOH作为洗脱剂)以得到标题化合物，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ10.85(宽单峰，1H)，8.82-8.84(dd，1H)，8.30(宽单峰，1H)，7.98-7.99(d，1H)，7.95-7.98(dd，1H)，7.73-7.77(dd，1H)，7.46(s，1H)，7.32-7.36(dd，1H)，6.65-6.67(d，1H)，6.15-6.16(d，1H)，4.78-4.82(m，1H)，4.10-4.13(m，1H)，3.93-4.04(m，2H)，3.90(s，3H)，3.80-3.84(m，1H)，3.35-3.51(m，2H)，3.27-3.34(m，1H)，3.15-3.25(m，1H)，2.94-3.12(m，3H)，2.65-2.71(m，1H)，2.36(s，3H)，1.45-1.95(m，5H)，1.33-1.35(d，6H)；MS(ES⁺)：649.40(M+1)⁺。

实施例3

N5-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N7-(2-(异丙基磺酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-5，7-二胺(82)

5-氯-N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺

向5mL DMF中的5，7-二氯-吡唑并[1，5-a]嘧啶(1.0mmol)和2-(异丙基磺酰基)苯胺(1.0mmol)的溶液中小心地加入NaH(24mg)。将得到的悬浮液在50℃搅拌2小时。在室温冷却并小心地猝灭(冰)后，加入水并用EtOAc萃取该混合物。收集得到的有机层、干燥(Na₂SO₄)、过滤并浓缩。将残余物经SiO₂柱层析法(洗脱液：9∶1 己烷∶EtOAc)纯化以得到期望的5-氯-N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺。MS(ES⁺)：351.06(M+1)⁺。

N5-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N7-(2-(异丙基磺酰基)苯基) 吡唑并[1，5-a]嘧啶-5，7-二胺

向2mL异丙醇中的5-氯-N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺(0.1mmol)和2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯胺(0.1mmol)的溶液加入25uL在二

烷中的HCl(2N)。将得到的悬浮液在150℃搅拌3小时。在后处理和制备HPLC后，得到产物。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.88-7.95(m，3H)，7.73-7.75(d，1H)，7.61-7.64(m，1H)，7.23-7.26(m，1H)，6.88(s，1H)，6.75(s，1H)，6.17-6.18(d，1H)，6.09(s，1H)，4.46-4.54(m.1H)，3.30-3.34(m，2H)，3.12-3.21(m，1H)，2.79-2.83(m，3H)，2.27(s，3H)，1.77-1.79(m，4H)，1.15-1.28(m，12H)；MS(ES⁺)：563.28(M+1)⁺。

表1描述了根据上述步骤制备的本发明的代表性化合物。IC50值如NPM-ALK BaF3测定中所测量。

表1

测定法

可使用下文描述的测定法以及其他本领域已知的测定法评价本发明的化合物抑制ALK的能力。

Ba/F3细胞系清单和试剂

Ba/F3是鼠IL-3-依赖性原B淋巴瘤细胞系。将母体Ba/F3细胞用于产生亚系的成员，其增殖和存活通过用与TEL的氨基末端部分(氨基酸1-375)或BCR融合所活化的各酪氨酸激酶稳定转导而不依赖于IL-3。为了产生通过Tel-酪氨酸激酶(TK)融合体转化的Ba/F3细胞系，将母体Ba/F3细胞用带有各自激酶结构域的逆转录病毒感染并进行嘌呤霉素选择和撤去IL-3以得到IL-3-非依赖性的转化的Ba/F3细胞系。

将所有转化的Ba/F3细胞在补充有10％FBS(Hyclone Cat #SV30014.03，Logan，UT)，4.5g/L葡萄糖(Sigma #G5400，St.Louis，MO)，1.5g/L碳酸氢钠(Biowhittaker #17-613E，Walkersville，MD)和Pen/Strep(Gibco #10378-016，Carlsbad，CA)的RPMI-1640培养基(Gibco Cat #11875093，Carlsbad，CA)中培养。细胞每周分瓶两次。

Ba/F3细胞存活能力的抑制测定

待测化合物对各种Tel-TK转化的Ba/F3细胞系的效能按照以下方法确定。将指数生长期的BaF3 Tel-TK细胞在新鲜培养基中稀释至75,000细胞/mL并且以50μL/孔利用μFill液体分配器(BioTek，Winooski，VT，USA)接种到384-孔板(3750细胞/孔)中。对于所有细胞系采用一式两份的两个板。将待测化合物和对照化合物用DMSO连续稀释并排列在聚丙烯384-孔板中。将50nL化合物利用针形-转移设备转移到试验板中并将该板在37℃(5％CO₂)下保温48小时。加入25μL Bright-Glo(Promega，麦迪逊，WI，美国)并利用Analyst GT(Perkin Elmer，惠灵顿，MA)定量测定发光。用常规的曲线拟合软件将细胞存活百分比作为抑制浓度的对数的函数进行逻辑拟合。推算出使细胞生存能力降低至DMSO对照的50％所需的化合物浓度作为IC₅₀。按照与以上所述的相同的方法，将在IL-3(终浓度为1ng/ml)的存在下保持并培养的母体Ba/F3细胞在含有IL-3(终浓度为1ng/ml)的新鲜培养基中稀释至75,000细胞/mL。

Kapas 299细胞测定法

通过感染编码萤光素酶基因的逆转录病毒，并在添加有10％FBS、1％P/S/L-Glu的RPMI-1649培养基中培养得到偶联了荧光素酶的Karpas 299(Karpas299-Luc)。在第1天，采集细胞并以150,000细胞/ml(使用ViCell(BD)测量细胞数)的密度再悬浮。使用μFill(Bio-TEK)将细胞从稀释的悬浮液中分配至384孔测定板中，每孔50μl体积。使用50nL针头将连续稀释的化合物(在DMSO中)转移至板中。将测定板在37℃温育48小时。在第4天，使用μFill(Bio-TEK)加入Bright-Glo试剂(Promega)25μl/孔。在30分钟内，使用Analyst GT按发光检测的默认设置测量萤光素酶信号。

酶的HTRF测定法

IGF-1R和INSR(胰岛素受体)购买自Upstate。下列活性剂自行制备；10x激酶缓冲液(KB)(200mM Tris(pH 7.0)、100mM MgCl₂、30mM MnCl₂、50nM NaVO₄)、10mM ATP、100mg/ml BSA、0.5M EDTA、4M KF。来自Perkin-Elmer的Proxiplate-384用于建立检测法。所有HTRF活性剂，包括底物(生物素-聚-GT(61GT0BLB)、Mab PT66-K、(61T66KLB)、Streptavidin-XL^ent(611SAXLB))均购买自CIS-US公司。

底物/ATP混合物通过将ATP(终浓度，3μM)和生物素化的聚-GT(终浓度，10ng/μl)加入到1x KB中并利用μFill(Bio-TEK)以5μL/孔分配到Proxiplate-384中来制备。将连续稀释的化合物(在DMSO中)利用50nL针头转移到板中。利用μFill(Bio-TEK)加入5μL制备好的酶混合物(酶(终浓度，5ng/μl)在1x KB中与BSA和DTT相混合)以引发激酶反应。将试验板在室温下保温2小时。通过将Mab PT66-K和Streptavidin-XL^ent加入到含有KF(终浓度，125mM)、EDTA(终浓度，50mM)和BSA(终浓度，100μg/ml)的0.5x KB溶液中来制备检测混合物。在反应结束时，加入10μL检测混合物并在测定前在室温下保温30分钟。HTRF信号利用Analyst-GT(Molecular dynamic)检测。

在U2OS细胞中使用针对IGF1-S3-5或INSR-S3-5的RE1-pGL3的报告基因测定法

在Mc Coy 10％FBS中接种10M细胞/T175培养瓶，并在4天后吸去培养基和加入新鲜培养基。在下一天(接种5天后)，用胰蛋白酶处理细胞，用PBS洗涤一次，接着再将细胞悬浮于含有P/S/G和4％去脂化的血清的Mc-Coy培养基中。计数细胞并稀释至400,000细胞/ml。

对于95ml细胞(400000细胞/ml(40M))，制备下述DNA/Fugene6混合物：5ml无血清的Mc-Coy培养基；120μg DNA混合物(20μgIGF1R-S3-5或INSR-S3-5+100μg RE1-pGL3)；和240μL Fugene6试剂。温育DNA/Fugene6混合物15分钟后将其加至在4％去脂化的血清的细胞中。在384孔板中分配50μL/孔。22-24小时后，使用针头加入50nL连续稀释的化合物。30分钟后，使用μ-Fill加入在4％去脂化的血清的Mc-Coy中稀释的2μL 26X IGF1(或100X胰岛素)剂量。30小时后，加入25μL100％ bright-glo并在Analyst-GT上读数测量发光性。

应当理解，本文所述的实施例和实施方案仅仅是出于举例说明的目的，本领域技术人员可以据此进行各种修饰或改变，并且这些修饰和改变均包括在本申请的精神和范围内以及所附权利要求的保护范围之内。本文所引用的所有公开出版物、专利和专利申请均引入本文作为参考并用于所有目的。

Claims

1.式(1)或(2)的化合物或其生理学可接受的盐：

Y为S(O)_0-2R⁸、SO₂NRR⁷或CONRR⁷；

Z¹为N或CH；

每个R³相同或不同且独立地为H或C_1-6烷基；

R⁶为H、C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；或者为-(CR₂)_1-4-CN、(CR₂)_p-OR⁷、(CR₂)_p-NR(R⁷)、-L-W、-L-C(O)-R⁷、-(CR₂)_1-4-C(O)-(CR₂)_q-OR⁷、-C(O)OR⁸、-L-C(O)-NRR⁷、-L-CR(OR⁷)-C_tF_(2t+1)，其中t为1-3；-L-C(O)-CR(R⁷)-NRR⁷、-L-C(O)-NR-(CR₂)_p-NRR⁷、-L-C(O)NR(CR₂)_pOR⁷、-L-C(O)-(CR₂)_q-NR-C(O)-R⁸、-L-C(O)NR(CR₂)_pSR⁷、-L-C(O)NR(CR₂)_qS(O)_1-2R⁸、(CR₂)_pNR(CR₂)_pOR⁷、(CR₂)_pNR-L-C(O)R⁸、-L-S(O)₂R⁸、-L-S(O)₂NRR⁷、-L-S(O)₂NR(CR₂)_pNR(R⁷)、-L-S(O)₂NR(CR₂)_pOR⁷或者为选自式(a)、(b)或(c)的基团：

其中R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自H或C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；或者R⁹和R¹⁰、R¹⁰和R¹³、R¹³和R¹⁴、R¹¹和R¹²或R¹¹和R¹³可以与它们所连接的碳和/或氮原子一起形成任选地含有选自C(O)、N、O和S(O)_0-2的最多3个原子或基团的3-7元饱和的、不饱和的或部分不饱和的环并任选地被1-3个R⁵基团取代；

L为(CR₂)_1-4或键；

每个R为H或C_1-6烷基；

m和n独立地为0-2；

p为2-4；且

q为0-4。

2.权利要求1的化合物，其中所述化合物为式(2A)、(2B)或(2C)的化合物：

其中Z²和Z³中的一个为NR⁶、O或S，且另一个为CH₂；

Z⁴为NR⁶、O或S；

环E可以任选地含有一个双键；

R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和m如权利要求1中所定义。

3.权利要求1的化合物，其中X为5-6元杂芳基；或者X为C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；或者为(CR₂)_1-4CO₂R⁷或(CR₂)_1-4CR(NRR⁷)(CO₂R⁷)；

n为0-1；且

4.权利要求1的化合物，其中X为含有NR⁶、O或S的6元杂环。

5.权利要求1的化合物，其中所述化合物为式(3A)或(3B)的化合物：

Z⁵、Z⁶和Z⁷中的一个为NR⁶、O或S，且其余为CH₂；且

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和m如权利要求1中所定义。

6.权利要求5的化合物，其中Z⁷为NR⁶或O；且Z⁵和Z⁶为CH₂。

7.权利要求6的化合物，其中R⁶为H、C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们可以任选地被卤素、氨基或羟基取代；或者为卤素、硝基或氰基；-L-W、-L-C(O)-R⁷、-(CR₂)_1-4-C(O)-(CR₂)_q-OR⁷、-C(O)OR⁸、-L-C(O)-NRR⁷、-L-C(O)-CR(R⁷)-NRR⁷、-L-S(O)₂R⁸，或者为式(a)或(b)的基团：

其中R、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴和L如权利要求1中所定义。

8.权利要求5的化合物，其中R^5b为H；且R^5a和R^5c独立地为卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基。

9.权利要求1的化合物，其中所述化合物为式(3C)或(3D)的化合物：

W为5-6元杂环；且

R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、L、q和m如权利要求1中所定义。

10.权利要求1-9中任一项的化合物，其中R¹、R²和R³为H。

11.权利要求1-9中任一项的化合物，其中Z¹为N。

12.权利要求1-9中任一项的化合物，其中Y为SO₂R⁸且R⁷和R⁸为C_1-6烷基。

13.权利要求1-9中任一项的化合物，其中m为0。

14.权利要求1的化合物，其中所述化合物选自：

15.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-14中任一项的化合物和生理学可接受的载体，以及任选的第二种治疗剂。

16.权利要求15的药物组合物，其中所述第二种治疗剂为抗过度增殖药物。

17.抑制细胞中的激酶的方法，其包括将所述细胞接触有效量的权利要求1-14中任一项的化合物或其生理学可接受的盐，并任选地与第二种治疗剂联用，所述激酶选自Ros、IGF-1R、InsR和间变性淋巴瘤激酶，从而抑制所述激酶。

18.权利要求1-14中任一项的化合物或其药物组合物、并且任选地与第二种治疗剂联用在制备用于治疗ALK-介导的病症的药物中的用途，其中所述病症为自身免疫性疾病、移植病、感染性疾病或细胞增殖性病症。

19.权利要求1-14中任一项的化合物或其药物组合物、并且任选地与第二种治疗剂联用在制备用于治疗细胞增殖性病症的药物中的用途，其中所述细胞增殖性病症为多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、淋巴瘤、白血病、黑素瘤、肉瘤、骨肉瘤、滑膜肉瘤、尤因肉瘤、肝细胞瘤、胃肠道间质瘤或乳腺、肾、前列腺、结肠直肠、甲状腺、卵巢、胰腺、肺、子宫、呼吸道、脑、消化道、泌尿道、眼、肝、皮肤、头和颈、甲状腺或甲状旁腺的实体瘤。

20.权利要求18的用途，其中所述第二种治疗剂为化学治疗剂。