CN102203083A

CN102203083A - 作为激酶抑制剂的嘧啶衍生物

Info

Publication number: CN102203083A
Application number: CN200980129584XA
Authority: CN
Inventors: T·H·马斯尔杰三世; 吕文硕; 陈蓓; 贺晓晖; 蒋松春; 杨鲲泳
Original assignee: IRM LLC
Current assignee: IRM LLC
Priority date: 2008-06-25
Filing date: 2009-06-24
Publication date: 2011-09-28
Also published as: EA201100078A1; MX2010014568A; WO2009158431A2; KR20110020940A; AU2009262198B2; WO2009158431A3; CA2729546A1; AU2009262198A1; UA101057C2; EP2331526A2; JP2011526291A; BRPI0914545A2

Abstract

本发明提供了式(I)的新的嘧啶衍生物及其药物组合物和使用这类化合物的方法。例如，本发明的嘧啶衍生物可用于治疗、改善或预防对抑制胰岛素样生长因子(IGF-1R)或间变性淋巴瘤激酶(ALK)有响应的病症。

Description

作为激酶抑制剂的嘧啶衍生物

对相关申请的交叉参考

本申请要求了于2008年6月25日提交的美国临时申请号61/075,583的权益，将其整体引入本文作为参考。

技术领域

本发明涉及蛋白激酶抑制剂，更具体而言，涉及新的嘧啶衍生物及其药物组合物和它们作为药物的用途。

背景技术

在癌症中高度牵涉胰岛素样生长因子(IGF-1)信号发放，其中IGF-1受体(IGF-1R)是占优势地位的因子。IGR-1R对肿瘤转化和恶性细胞的存活而言是重要的，但是仅部分参与正常细胞生长。已经提示以IGF-1R为靶标对癌症治疗而言是有前景的选择。(Larsson等人，Br.J.Cancer 92：2097-2101(2005))。

在造血系统和非造血系统肿瘤的瘤形成中已经牵涉间变性淋巴瘤激酶(ALK)-受体酪氨酸激酶胰岛素受体超家族的一个成员。在成神经细胞瘤和成胶质细胞瘤中已经报道了全长ALK受体蛋白的异常表达；并且在间变性大细胞淋巴瘤中已经出现了ALK融合蛋白。ALK融合蛋白的研究已经提出了对患有ALK-阳性恶性病的患者的新治疗的可能性。(Pulford等人，Cell.Mol.Life Sci.61：2939-2953(2004))。

由于IGF-1R和ALK的新出现的与疾病有关的作用，一直需要可用于治疗和预防对抑制IGF-1R和ALK有响应的疾病的化合物。

发明内容

本发明涉及新的嘧啶衍生物及其药物组合物和它们作为药物的用途。

在一个方面，本发明提供了式(1)的化合物：

或其生理学上可接受的盐；

其中W是

或W’；

W’是吡啶基、异喹啉基、喹啉基、萘基、噌啉-5-基或[3-(C_1-6烷基)-(2，3，4，5-四氢-1H-苯并[d]氮杂

-7基]，它们各自任选被1-3个R⁹取代；并且所述的吡啶基、异喹啉基、喹啉基和萘基各自在环碳上被

取代；

X是-C(R)＝N-O-R⁷、C(O)NRR⁷、C(O)NR-(CR₂)_n-NRR⁷、-(CR₂)_pNRR，其中NRR中的两个R基团与N一起形成含有1-3个选自N、O和S的杂原子并且任选被1-3个R⁹取代的5-6元环，或者任选被氧代基、＝N-OH或R⁹取代的C_5-7碳环；或者X是喹啉基、(1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)或具有1-3个选自N、O和S的杂原子的5-6元杂芳基，它们各自任选被1-3个R⁹取代；

R¹是卤素、C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷基；

R²是具有1-3个选自N、O和S的杂原子的5-6元杂芳基，并且任选被C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基或C_3-7环烷基取代；

每个R³是H；

R⁴是卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基、卤素取代的C_1-6烷氧基、氰基或C(O)O_0-1R⁸；

R⁵是H或

R⁶是H、C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们各自可以任选被卤素和/或羟基取代；-(CR₂)_p-OR⁷、其中t是1-3的-(CR₂)_p-CH(OH)C_tF_2t+1、(CR₂)_p-CN；(CR₂)_p-NR(R⁷)、-(CR₂)_p-C(O)OR⁷、(CR₂)_pNR(CR₂)_pOR⁷、(CR₂)_pNR-L-C(O)R⁸、C(O)(CR₂)_qOR⁸、-C(O)O-(CR₂)_p-NRR⁷、-C(O)-(CR₂)_p-OR⁷、L-Y、-L-C(O)R⁷、-L-C(O)-NRR⁷、-L-C(O)-NR-(CR₂)_p-NRR⁷、-L-C(O)NR(CR₂)_pOR⁷、-L-C(O)-(CR₂)_q-NR-C(O)-R⁸、-L-C(O)NR(CR₂)_pSR⁷、-L-C(O)NR(CR₂)_pS(O)_1-2R⁸、-L-S(O)₂R⁸、-L-S(O)₂-(CR₂)_q-NRR⁷、-L-S(O)₂NR(CR₂)_pNR(R⁷)或-L-S(O)₂NR(CR₂)_pOR⁷；

或者，R⁶是选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团：

R¹⁰是O、S、NR¹⁷，其中R¹⁷是H、C_1-6烷基、SO₂R^8a或CO₂R^8a；

R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵和R¹⁶独立地选自H；C_1-6烷氧基；C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们各自可以任选被卤素、氨基或羟基取代；或者R¹¹和R¹²、R¹²和R¹⁵、R¹⁵和R¹⁶、R¹³和R¹⁴或R¹³和R¹⁵与它们所连接的原子一起可以形成含有1-3个选自N、O和S的杂原子并且任选被氧代基和1-3个R⁹基团取代的3-7元的饱和、不饱和或部分不饱和的环；

L是(CR₂)_1-4或价键；

Y是C_3-7碳环、C_6-10芳基或5-10元杂芳基或4-10元杂环，它们各自任选被1-3个R⁹基团取代；

R⁷、R⁸和R^8a独立地是C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们各自可以任选被卤素、NRR^7a、羟基或氰基取代；(CR₂)_qY或C_1-6烷氧基；或者R⁷是H；

R⁹是R⁴、C(O)NRR⁷或NRR⁷；

R和R^7a独立地是H或C_1-6烷基；

每个NRR⁷中的R和R⁷与N一起以及NRR^7a中的R和R^7a与N一起可以形成含有1-3个选自N、O和S的杂原子并且任选被氧代基和1-3个R⁴基团取代的5-6元环；

m是2-4；

n和p独立地是1-4；且

q是0-4。

在上面的式(1)中，R²可以是吡唑基或异

唑基，它们各自被C_1-6烷基或C_3-7环烷基取代。

在一个实施方案中，本发明提供了式(2)的化合物：

其中W是W’；

W’是任选被C_1-6烷基取代的吡啶基、异喹啉基、喹啉基、萘基、任选被C_1-6烷基取代的噌啉-5-基或[3-(C_1-6烷基)-(2，3，4，5-四氢-1H-苯并[d]氮杂

-7基]；并且所述的吡啶基、异喹啉基、喹啉基和萘基各自在环碳上被

取代；

R⁶是H、C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_2-6炔基，它们各自可以任选被卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；其中t是1的-(CR₂)_p-CH(OH)C_tF_2t+1、-L-C(O)-NRR⁷或-L-S(O)₂R⁸；

L是(CR₂)_1-4；

R和R⁷独立地是H或C_1-6烷基；

R⁸是C_1-6烷基；且

R¹和R³如式(1)中所定义。

在另一个实施方案中，本发明提供了式(3)的化合物：

其中Z是NH或O；

R⁴是卤素或C_1-6烷基；

R⁵是H或

R⁶是H；且

R¹和R³如式(1)中所定义。

在还有另一个实施方案中，本发明提供了式(4)的化合物：

其中R^4a、R^4b和R^4c中的一个是H，其余两个独立地是卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基；且

X如式(1)中所定义。

在上面的式(4)中，X可以是-C(R)＝N-O-R⁷、C(O)NRR⁷、C(O)NR-(CR₂)_n-NRR⁷或-(CR₂)_pNRR，其中NRR中的两个R基团与N一起形成吗啉基；

R⁷是H或任选被羟基或NRR^7a取代的C_1-6烷基；

每个R是H或C_1-6烷基；

每个NRR⁷中的R和R⁷与N一起以及NRR^7a中的R和R^7a与N一起可以形成含有1-2个选自N、O和S的杂原子的5-6元环；并且n和p独立地是1-4。或者，X可以是喹啉基、(1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)或选自吡唑基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、异唑基、

唑基或thiaxolyl的5-6元杂芳基，它们各自任选被C_1-6烷基、羟基或C(O)NRR⁷取代；R⁷是H或C_1-6烷基；并且R是H或C_1-6烷基。

在另一个实施方案中，本发明提供了式(5)的化合物：

其中R^4a、R^4b和R^4c中的一个是H，其余两个独立地是卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基；

环E是任选被氧代基、＝N-OH或R⁹取代的C₆碳环；

R⁹是羟基或NRR⁷；

R是H或C_1-6烷基；

R⁷是C_1-6烷基或(CR₂)_qY且Y是C₃环烷基；

或者，NRR⁷中的R和R⁷与N一起形成吗啉基、哌啶基、哌嗪基、(C_1-6烷基)-哌嗪基或吡咯烷基，它们各自任选被羟基取代；且

R¹和R³如式(1)中所定义。

在上面的式(4)和(5)中，R^4b可以是H。在另一些实例中，R^4a和R^4c独立地是卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基。

在上面的式(1)-(5)中，R¹是氯或卤素取代的C_1-6烷基。在另一些实例中，R³是H。

在另一个方面。本发明提供了包含式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物和其生理学上可接受的赋形剂的药物组合物。

在又一个方面，本发明提供了抑制细胞中IGF-1R的方法，其包括使细胞与有效量的式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物或其药物组合物接触。

本发明还提供了在患有所述病症的哺乳动物中治疗、改善或预防对抑制IGF-1R或间变性淋巴瘤激酶(ALK)有响应的病症的方法，其包括给哺乳动物施用治疗有效量的式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物或其药物组合物和任选组合施用第二治疗剂。或者，本发明提供了式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物任选与第二治疗剂组合在制备药物中的用途，所述药物用于治疗由IGF-1R或ALK介导的病症。本发明的化合物可以施用于例如患有自身免疫性疾病、移植疾病、感染性疾病或细胞增殖性障碍的哺乳动物。在特定的实例中，本发明的化合物可以单独使用或者与化疗剂组合使用来治疗细胞增殖性障碍，包括但不限于多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、滑囊、肝细胞、尤因肉瘤或选自骨肉瘤、黑素瘤和乳腺、肾、前列腺、结肠直肠、甲状腺、卵巢、胰腺、肺、子宫或胃肠道肿瘤的实体瘤。

定义

“烷基”是指一个基团和其它基团例如卤素取代的烷基和烷氧基的结构单元，可以是直链的或支链的。本文所用的任选被取代的烷基、链烯基或炔基可以是任选被卤素取代的(例如，CF₃)，或者可以具有一个或多个被杂原子如NR、O或S取代或替代的碳(例如，-OCH₂CH₂O-、烷硫基(alkylthiol)、硫代烷氧基(thioalkoxy)、烷基胺等)。

“芳基”是指含有碳原子的单环的或稠合二环的芳族环。“亚芳基”意指衍生自芳基的二价基团。例如，芳基可以是苯基、茚基、茚满基、萘基或1，2，3，4-四氢萘基，其可以任选在邻位、间位或对位被取代。

本文所用的“杂芳基”是其中一个或多个环成员是杂原子的上文所定义的芳基。例如，本发明的化合物中所用的杂芳基取代基可以是含有1-4个选自N、O和S的杂原子的单环或二环的5-10元杂芳基。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1，3]二氧杂环戊烯、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、呋喃基、

唑基、异唑基、三唑基、苯并三唑基、四唑基、吡唑基、噻吩基、吡咯基、异喹啉基、嘌呤基、噻唑基、四嗪基、苯并噻唑基、

二唑基、苯并

二唑基等。

本文所用的“碳环”是指含有碳原子的饱和或部分不饱和的单环、稠合二环或桥连多环，其可以任选被例如＝O取代。碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、亚环丙基、环己酮等。

本文所用的“杂环”是其中一个或多个环碳是杂原子的上文所定义的碳环。例如，本发明的化合物中所用的杂环可以是含有1-3个选自N、O和S或其组合的杂原子如-S(O)或-S(O)₂-的4-7元杂环。杂环的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、吗啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶基酮、1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基、1，2，3，4-四氢喹啉基等。本文所用的杂环可以包括二环的胺和二环的二胺。

本文所用的任何取代基(例如，CH₂)中的H原子包括所有合适的同位素变体，例如H、²H和³H。

本文所用的术语“药物组合”是指通过混合或组合活性成分获得的产品，包括活性成分的固定组合和非固体组合。术语“固定组合”意指活性成分例如式(1)的化合物和共用活性剂(co-agent)以单个实体或剂型的形式被同时施用于患者。术语“非固定组合”意指活性成分例如式(1)的化合物和共用活性剂以分开的实体的形式无特定时间限制地被同时、并行或相继施用于患者，其中这类施用在患者体内提供治疗有效水平的活性成分。后者也应用于鸡尾酒疗法(cocktail therapy)，例如施用三种或更多种活性成分。

“哺乳动物”是指被分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家畜和农场动物以及动物园动物、体育动物或宠物，如犬、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔等。在特定的实例中，所述哺乳动物是人。

术语“施用”主题化合物意指将本发明的化合物和其前药提供给需要治疗的个体。与一种或多种另外的活性剂“组合”施用包括同时(并行)和以任何顺序和以任何施用途径依次施用。

化合物的“有效量”是足以实现具体所述的目的的量。“有效量”可以凭经验和以常规方式确定，与所述的目的有关。

术语“治疗有效量”是指有效“治疗”个体或哺乳动物的IGF-1R-介导的障碍的化合物(例如，IGF-1R拮抗剂)的量。在癌症的情况下，药物的治疗有效量可以减少癌细胞的数目；减小肿瘤尺寸；抑制(即，在一定程度上减慢和优选停止)癌细胞浸润入周围器官；抑制(即，在一定程度上减慢和优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解一种或多种与癌症相关的症状。参见本文“治疗”的定义。在药物可防止现有癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度上，其可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。

术语“癌症”是指典型地以细胞生长/增殖失调为特征的哺乳动物的生理状况。癌症的实例包括但不限于：癌、淋巴瘤、胚细胞瘤和白血病。癌症的更具体的实例包括但不限于：慢性淋巴细胞白血病(CLL)、肺癌，包括非小细胞肺癌(NSCLC)、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肠类癌(intestinal carcinoid)、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、肝癌(肝细胞癌)、肝胚细胞瘤、食道癌、肺腺癌、间皮瘤、滑囊肉瘤、骨肉瘤、头颈鳞状细胞癌、青春期鼻咽血管纤维瘤、脂肉瘤、甲状腺癌、黑素瘤、基底细胞癌(BCC)、成神经管细胞细胞瘤和硬纤维瘤。

“治疗”或“减轻”既指治疗性处理，又指预防性或防止性措施，其中目的是防止或减缓(减少)目标病理学疾病或病症或障碍。需要治疗的那些包括已经患有障碍的那些以及易于患障碍的那些或需要防止障碍(预防)的那些。当IGF-1R-介导的障碍是癌症时，如果在根据本发明的方法接受治疗量的IGF-1R拮抗剂后患者表现出可观察到的和/或可测量的一个或多个下列情况的减轻或者不存在一个或多个下列情况，则个体或哺乳动物被成功地“治疗”或者表现出肿瘤负荷减轻：癌细胞数量减少或者不存在癌细胞；肿瘤尺寸减小；抑制(即，在一定程度上减慢和优选停止)癌细胞向周围器官的浸润，包括癌症向软组织和骨的扩散；抑制(即，在一定程度上减慢和优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解一种或多种与特定癌症相关的症状；发病率和死亡率降低，以及改善生活事务的质量。在IGF-1R拮抗剂可预防现有癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度上，其可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。这些体征或症状的减轻也可以被患者感觉到。

本文所用的“载体”包括药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，其在所用的剂量和浓度下对与其接触的细胞或哺乳动物是无毒的。生理学上可接受的载体常常是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的实例包括：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸或柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露醇或糊精；螯合剂，如EDTA；糖醇，如甘露醇或山梨醇；成盐抗衡例子，如钠；和/或非离子型表面活性剂，如

聚乙二醇(PEG)和

“化疗剂”是可用于治疗癌症的化合物。化疗剂的实例包括：烷化剂，如塞替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯，如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，如benzodopa、卡波醌、meturedopa和uredopa；乙撑亚胺类和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三亚乙基硫化磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和trimethylolomelamine；番荔枝内酯类化合物(acetogenins)(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，)；β-拉帕醌(lapachone)；拉伯醇；秋水仙碱类；桦木酸；喜树碱类(包括合成的类似物拓扑替康

CPT-11(伊立替康，

)、乙酰基喜树碱、scopolectin和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；callystatin；CC-1065(包括它的阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；cryptophycins(特别是cryptophycin 1和cryptophycin 8)；多拉司他汀；duocarmycin(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；五加苷素(a sarcodictyin)；spongistatin；氮芥类，如苯丁酸氮芥、萘氮芥、cholophosphamide、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲类，如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和ranimnustine；抗生素，如烯二炔类抗生素(例如，加利车霉素，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1(参见例如Agnew，Chem Intl.Ed.Engl.，33：183-186(1994))；dynemicin，包括dynemicin A；esperamicin；以及新制癌菌素生色团和有关的色蛋白烯二炔类抗生素生色团)、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡柔比星(carabicin)、去甲柔红霉素(caminomycin)、嗜癌霉素、色霉素(chromomycinis)、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、

多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉子基(pyrrolino)-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、马塞罗霉素、丝裂霉素如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫唑鸟嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、脱氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素类药物，如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺药(anti-adrenals)，如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比山群；edatraxate；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌；elfomithine；依利醋铵；埃坡霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidainine)；类美坦素(maytansinoids)，如美登素和美坦西醇；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol)；nitraerine；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；

多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，Oreg.)；雷佐生；根霉素；sizofuran；锗螺胺；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯三乙基胺；单端孢菌素(尤其是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素(roridin)A和anguidine)；尿烷；长春地辛

达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；塞替派；紫杉烷类，例如

紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)、ABRAXANETM不含聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor)的白蛋白结合型(albumin-engineered)紫杉醇纳米粒制剂(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，Ill.)和

多西他赛(

-Poulenc Rorer，Antony，法国)；chloranbucil；吉西他滨6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，如顺铂和卡铂；长春碱

铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱

奥沙利铂；leucovovin；长春烯碱

诺消灵；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；伊班膦酸盐；拓朴异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视色素，如视黄酸；卡培他滨

以上药物中任何一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及以上药物中两个或更多个的组合，如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙组合治疗的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATIN^TM)与5-FU和leucovovin组合治疗方案的缩写)。

此外，“化疗剂”可以包括起作用以调节、减少、阻断或抑制能促进癌症生长的激素的作用的抗激素药物；常常是系统性或全身性治疗的形式。它们本身可以是激素。实例包括抗雌激素药物和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括

他莫昔芬)、

雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、keoxifene、LY117018、奥那司酮和

托瑞米芬；抗孕酮药物；雌激素受体减量调节物(ERD)；起作用压制或停止卵巢工作的物质，例如促黄体生成素释放激素(LHRH)激动剂如

和

醋酸亮丙瑞林、醋酸戈舍瑞林，醋酸布舍瑞林和曲普瑞林(tripterelin)；其它抗雄激素药物如氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺；和抑制芳香酶(其调节雌激素在肾上腺中的产生)的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑化合物、氨鲁米特、醋酸甲地孕酮、依西美坦、福美司坦(formestanie)、法曲唑、

伏氯唑、

来曲唑和

阿那曲唑。另外，所述化疗剂定义还包括双膦酸盐如氯膦酸盐(例如，

或

)、

依替膦酸盐、NE-58095、

唑来膦酸/唑来膦酸盐、

阿仑膦酸盐、

帕米膦酸盐、

替鲁膦酸盐或利塞膦酸盐；以及曲沙他滨(一种1，3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制异常细胞增殖中涉及的信号途径中的基因表达例如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)的那些；疫苗，如

疫苗和基因疗法疫苗，例如

疫苗、

疫苗和

疫苗；拓扑异构酶1抑制剂；

rmRH；二甲苯磺酸拉帕替尼(一种ErbB-2和EGFR双重酪氨酸激酶小分子抑制剂，也称为GW572016)；和以上药物中任何一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

实施本发明的方式

本发明提供了新的嘧啶衍生物及其药物组合物和使用这类化合物的方法。

在一个方面，本发明提供了式(1)的化合物：

或其生理学上可接受的盐；

其中W是

或W’；

-7基]，它们各自任选被1-3个R⁹取代；并且所述的吡啶基、异喹啉基、喹啉基和萘基各自在环碳上被取代；

X是-C(R)＝N-O-R⁷、C(O)NRR⁷、C(O)NR-(CR₂)_n-NRR⁷、-(CR₂)_pNRR，其中NRR中的两个R基团与N一起形成含有1-3个选自N、O和S的杂原子并且任选被1-3个R⁹取代的5-6元环，或任选被氧代基、＝N-OH或R⁹取代的C_5-7碳环；或者X是喹啉基、(1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)或具有1-3个选自N、O和S的杂原子的5-6元杂芳基，它们各自任选被1-3个R⁹取代；

R¹是卤素、C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷基；

每个R³是H；

R⁵是H或

或者，R⁶是选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团：

L是(CR₂)_1-4或价键；

R⁹是R⁴、C(O)NRR⁷或NRR⁷；

R和R^7a独立地是H或C_1-6烷基；

m是2-4；

n和p独立地是1-4；且

q是0-4。

在一个实施方案中，本发明提供了式(2)的化合物：

其中W是W’；

取代；

L是(CR₂)_1-4；

R和R⁷独立地是H或C_1-6烷基；

R⁸是C_1-6烷基；且

R¹和R³如式(1)中所定义。

在另一个实施方案中，本发明提供了式(3)的化合物：

其中Z是NH或O；

R⁴是卤素或C_1-6烷基；

R⁵是H或

R⁶是H；且

R¹和R³如式(1)中所定义。

在还有另一个实施方案中，本发明提供了式(4)的化合物：

X如式(1)中所定义。

在另一个实施方案中，本发明提供了式(5)的化合物：

其中R^4a、R^4b和R^4c中一个是H，其余两个独立地是卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素取代的C_1-6烷基或卤素取代的C_1-6烷氧基；

环E是任选被氧代基、＝N-OH或R⁹取代的C₆碳环；

R⁹是羟基或NRR⁷；

R是H或C_1-6烷基；

R⁷是C_1-6烷基或(CR₂)_qY且Y是C₃环烷基；

R¹和R³如式(1)中所定义。

在上面的各结构式中，任何不对称碳原子均可以以(R)-、(S)-或(R，S)-构型存在。因此所述化合物可以以异构体的混合物形式或者以纯异构体的形式存在，例如以纯对映体或非对映体的形式存在。本发明还包括本发明的化合物的可能的互变异构体。

本文所给出的任何结构式也用于代表化合物的未标记的形式以及同位素标记的形式。同位素标记的化合物除了一个或多个原子被具有选择的原子质量或质量数的原子代替以外具有本文所给出的结构式所描绘的结构。能合并入本发明的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别例如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl、¹²⁵I。

本发明包括各种同位素标记的本文所定义的化合物，例如其中存在放射性同位素如³H、¹³C和¹⁴C的那些。这类同位素标记的化合物可用在代谢研究(使用例如¹⁴C)、反应动力学研究(使用例如²H或³H)、检测或显像技术如正电子发射断层成象术(PET)或单光子发射计算机断层成象术(SPECT)(包括药物或底物组织分布测定法)或患者的放射性治疗中。在另一些实例中，可以将¹⁸F或标记的化合物用于PET或SPECT研究。化合物的同位素变体具有改变化合物的代谢命运和/或在物理性质如疏水性方面产生小变化等潜能。同位素变体还具有提高效能和安全性、提高生物利用度和半衰期、改变蛋白结合、改变生物分布、增加活性代谢物的比例和/或减少反应性或毒性代谢物形成的潜能。同位素标记的本发明的化合物和其前药一般能通过以下方法制备：通过用可容易地获得的同位素标记的试剂替代未同位素标记的试剂来进行流程图中或实施例中所公开的操作和下文所述的制备。

在上面的各结构式中，每个任选被取代的基团可以被以下基团取代：C_1-6烷基、C_2-6链烯基或C_3-6炔基，它们各自可以任选被卤素取代或者任选具有可以被N、S、O或其组合代替或取代的碳(例如，羟基C₁-C₈烷基、C₁-C₈烷氧基C₁-C₈烷基)；卤素、氨基、脒基、C_1-6烷氧基；羟基、亚甲二氧基、羧基；C_1-8烷基羰基、C_1-8烷氧基羰基、氨基甲酰基、C_1-8烷基氨基甲酰基、氨磺酰基、氰基、氧代基、硝基或任选被取代的上文所述的碳环、杂环、芳基或杂芳基。

药理学和效用

当在细胞测定法中和在无细胞的激酶测定法中体外测试时，本发明的化合物和它们的药学上可接受的盐表现出有价值的药理学性质，因此可用作药物。

在一个方面，本发明的化合物可以抑制胰岛素样生长因子受体1(IGF-1R)，并且可用于治疗IGF-1R介导的疾病。IGF-1R介导的疾病的实例包括但不限于增殖性疾病，如肿瘤，例如乳腺、肾、前列腺、结肠直肠、甲状腺、卵巢、胰腺、神经元(neuronal)、肺、子宫和胃肠肿瘤，以及骨肉瘤和黑素瘤。本发明的化合物作为IGF-1R酪氨酸激酶活性的抑制剂的功效可以用细胞捕获ELISA来证明。在该测定法中，测定了本发明的化合物对抗(IGF-1)-诱导的IGF-1R自磷酸化的活性。

在另一个方面，本发明的化合物可以抑制间变性淋巴瘤激酶(ALK)和NPM-ALK融合蛋白的酪氨酸激酶活性。该蛋白酪氨酸激酶是由核磷蛋白(NPM)和ALK的基因融合产生的，这使得ALK配体的蛋白酪氨酸激酶活性是独立的。在许多导致血液学疾病和肿瘤性疾病的造血细胞和其它人细胞中的信号传输中NPM-ALK发挥关键作用，例如在间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)中，特别是在ALK+NHL或ALK淋巴瘤(Alkomas)中、在炎性成肌纤维细胞瘤(inflammatory myofibroblastic tumors，IMT)和成神经细胞瘤中。(Duyster等人2001 Oncogene 20，5623-5637)。除了NPM-ALK以外，在人血液学疾病和肿瘤性疾病中已经鉴定了其它基因融合；例如，TPM3-ALK(非肌肉原肌球蛋白与ALK的融合)。

类似于在J.Wood等人，Cancer Res.60，2178-2189(2000)中所述的VEGF-R激酶测定法，使用已知方法、例如使用ALK的重组激酶结构域可以证明ALK酪氨酸激酶活性的抑制。一般而言，在96孔板中以滤膜结合测定形式在20mM Tris HCl，pH＝7.5，3mM MgCl₂，10mM MnCl₂，1mM DTT，0.1μCi/测定(＝30μl)[γ-³³P]-ATP，2μM ATP，3μg/mL聚(Glu，Tyr 4∶1)Poly-EY(Sigma P-0275)，1％DMSO，25ng ALK酶中进行使用GST-ALK蛋白酪氨酸激酶的体外酶测定。将测定物于环境温度孵育10min。通过加入50μl 125mM EDTA终止反应，将反应混合物转移到预先用甲醇湿润并用H₂O再水合5min的MAIP Multiscreen板(Millipore，Bedford，MA，USA)上。在洗涤(0.5％H₃PO₄)后，将板在液体闪烁计数器中计数。通过对抑制百分数进行线性回归分析计算IC₅₀值。

本发明的化合物可以有效地抑制过表达人NPM-ALK的鼠BaF3细胞(DSMZ Deutsche Sammiung von Mikroorganismen und Zelikulturen GmbH，德国)生长。通过将BaF3细胞系用对NPM-ALK编码的表达载体pClneo^TM(Promega Corp.，Madison WI，USA)转染并且随后选择G418抵抗的细胞实现NPM-ALK的表达。未转染的BaF3细胞的细胞存活依赖于IL-3。与此不同，表达NPM-ALK的BaF3细胞(下文称为BaF3-NPM-ALK)能在不存在IL-3的情况下增殖，因为它们通过NPM-ALK激酶获得增殖信号。因此，NPM-ALK激酶的推定抑制剂取消生长信号，可以导致抗增殖活性。但是，通过加入IL-3(其通过NPM-ALK非依赖性机制提供生长信号)能克服NPM-ALK激酶的推定抑制剂的抗增殖活性。使用FLT3激酶的类似细胞系统也已经有描述(参见：E Weisberg等人，Cancer Cell；1，433-443(2002))。

可以如下测定本发明的化合物的抑制活性。一般而言，将BaF3-NPM-ALK细胞(15,000个/微量滴定板孔)转移到96孔微量滴定板中。以二甲基亚砜(DMSO)的终浓度不大于1％(v/v)的方式加入系列浓度(稀释系列)的溶于DMSO中的供试化合物。加入后，将板孵育2天，在此期间，不具有供试化合物的对照培养物能经历2个细胞分裂周期。利用YOPRO^TM染色[T Idziorek等人，J.Immunol.Methods；185：249-258(1995)]测定BaF3-NPM-ALK细胞的生长：向每个孔中加入25μl包含20mM柠檬酸钠，pH 4.0、26.8mM氯化钠、0.4％NP40、20mM EDTA和20mM的裂解缓冲液。在室温下细胞裂解在60分钟内完成，通过使用具有以下设置的Cytofluor II 96孔读数器(PerSeptive Biosystems)测量来测定与DNA结合的YOPRO^TM的总量：激发波长(nm)485/20和发射波长(nm)530/25。

本发明的化合物也可以用于治疗和/或预防急性或慢性炎性疾病或障碍或者自身免疫性疾病，例如类风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、糖尿病(I型和II型)和与其相关的障碍、呼吸系统疾病如哮喘或炎性肝损伤、炎性肾小球损伤、免疫学介导的障碍或疾患的皮肤表现、炎性和过度增殖性皮肤疾病(如银屑病、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎和另外的湿疹性皮炎、脂溢性皮炎)、炎性眼病，例如舍格伦综合征、角膜结膜炎或眼色素层炎、炎性肠病、局限性回肠炎或溃疡性结肠炎。

根据上述内容，本发明提供了：

(1)用作药物的本发明的化合物；

(2)用作IGF-1R抑制剂、例如用在上文给出的任何具体适应症中的本发明的化合物；

(3)药物组合物，其例如用在上文给出的任何适应症中，其包含作为活性成分的本发明的化合物以及一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体；

(4)在需要其的个体中治疗上文给出的任何具体适应症的方法，其包括施用有效量的本发明的化合物或包含本发明的化合物的药物组合物；

(5)本发明的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防IGF-1R活化在其中发挥作用或者其中涉及IGF-1R活化的疾病或病症；

(6)上面(4)中所定义的方法，其包括共同施用、例如伴随(concomitantly)或顺序施用治疗有效量的本发明的化合物和一种或多种另外的药物，所述另外的药物可用在上文所给出的任何具体适应症中；

(7)组合产品，其包含治疗有效量的本发明的化合物和一种或多种另外的药物，所述另外的药物在上文所给出的任何具体适应症中是有用的；

(8)本发明的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防对抑制间变性淋巴瘤激酶有响应的疾病；

(9)根据(8)所述的用途，其中所治疗的疾病选自间变性大细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、炎性成肌纤维细胞瘤、成神经细胞瘤和肿瘤性疾病；

(10)根据(8)或(9)所述的用途，其中所述化合物是式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物或任意一个实施例的化合物或其药学上可接受的盐；

(11)治疗对抑制间变性淋巴瘤激酶有响应的疾病、尤其是选自间变性大细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、炎性成肌纤维细胞瘤、成神经细胞瘤和肿瘤性疾病的疾病的方法，其包括施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

施用和药物组合物

一般而言，本发明的化合物通过本领域已知的任何通常的且可接受的方式以治疗有效量单独施用或与一种或多种治疗剂组合施用。治疗有效量将在宽范围内变化，取决于疾病的严重性、个体的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力和本领域普通技术人员已知的其它因素。例如，对于肿瘤性疾病和免疫系统障碍的治疗而言，所需的剂量也将根据施用方式、所治疗的具体病症和所需的效果而变化。

一般而言，表明约0.01至约100mg/kg体重或者更特定地约0.03至2.5mg/kg体重的日剂量全身性地获得令人满意的结果。较大的哺乳动物例如人适用的日剂量可以在约0.5mg至约2000mg或者更特定地约0.5mg至约100mg的范围内，其例如以每天不超过4次的分剂量或以迟缓形式被方便地施用。用于口服施用的合适的单位剂型包含约1-50mg活性成分。

本发明的化合物可以通过任何常规的途径以药物组合物的形式被施用；例如：肠内施用，如口服施用，例如以片剂或胶囊剂的形式施用；胃肠外施用，例如以注射液或混悬剂的形式施用；或者局部施用，例如以洗剂、凝胶剂、软膏剂或乳膏剂的形式施用，或者以鼻用形式或栓剂形式施用。

包含游离形式或药学上可接受的盐形式的本发明的化合物以及至少一种药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物可以通过混合、制粒、包衣、溶解或冻干过程以常规方式制备。例如，包含本发明的化合物以及至少一种药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物可以通过与药学上可接受的载体或稀释剂混合以常规方式制备。用于口服施用的单位剂型含有例如约0.1mg至约500mg活性物质。

在一个实施方案中，药物组合物是活性成分的溶液，包括混悬剂或分散物，如等张水溶液。在仅包含活性成分或者还包含载体如甘露醇的冻干组合物的情况下，能在使用前配制成分散物或混悬剂。药物组合物可以被灭菌和/或含有辅剂(adjuvant)，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。合适的防腐剂包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸或杀微生物剂如山梨酸或苯甲酸。溶液或混悬剂还可以包含增粘剂，包括但不限于羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮、明胶或增溶剂，例如吐温80(聚氧乙烯(20)失水山梨醇单油酸酯)。

在油中的混悬剂可以包含作为油组分的常规用于注射目的的植物油、合成油或半合成油。实例包括含有具有8-22个碳原子或者在一些实施方案中具有12-22个碳原子的长链脂肪酸作为酸组分的液体脂肪酸酯。合适的液体脂肪酸酯包括但不限于月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、山萮酸或相应的不饱和酸，例如油酸、反油酸、芥酸、巴西烯酸和亚油酸，如果需要，可以含有抗氧化剂，例如维生素E、3-胡萝卜素或3，5-二叔丁基-羟基甲苯。这些脂肪酸酯的醇组分可以具有六个碳原子，并且可以是单价的或多价的，例如单价、二价或三价的醇。合适的醇组分包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或者其异构体；乙二醇和甘油。

其它合适的脂肪酸酯包括但不限于油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、

M 2375、(聚氧乙烯甘油(polyoxyethylene glycerol))、

M 1944CS(通过杏仁油的醇解制备的并且包含甘油酯和聚乙二醇酯的不饱和的聚乙二醇化的甘油酯)、LABRASOL^TM(通过TCM醇解制备的并且包含甘油酯和聚乙二醇酯的饱和的聚乙二醇化的甘油酯；均可从GaKefosse，法国获得)和/或

812(来自Hüls AG，德国的链长度为C₈-C₁₂的饱和脂肪酸的甘油三酯)，以及植物油如棉子油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、豆油或花生油。

用于口服施用的药物组合物可以例如通过以下方法获得：将活性成分与一种或多种固体载体混合，如果需要，将所得的混合物制粒，和通过包含入另外的赋形剂加工所述混合物或颗粒以形成片剂或片芯。

合适的载体包括但不限于：填充剂，例如糖如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、纤维素制品和/或钙磷酸盐例如磷酸三钙或磷酸氢钙；以及还有粘合剂，例如淀粉如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉或马铃薯淀粉、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，和/或崩解剂，例如上述淀粉、羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸或其盐如藻酸钠。另外的赋形剂包括流动调节剂和润滑剂，例如硅酸、滑石粉、硬脂酸或其盐如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇，或其衍生物。

通过使用尤其是浓糖溶液(其可以包含阿拉伯胶(gum arable)、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛)或在合适的有机溶剂或溶剂混合物中的包衣溶液或用于制备肠溶衣的包衣溶液、合适的纤维素制品如醋酞纤维素(acetylcellulose phthalate)或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的溶液可以使片芯具有合适的、任选是肠溶的包衣。可以向片剂或片剂包衣中加入染料或色素，例如用于辨识目的或表示不同的活性成分剂量。

用于口服施用的药物组合物还可以包括包含明胶的硬胶囊或包含明胶和增塑剂如甘油或山梨醇的密封的软胶囊。硬胶囊可以含有颗粒形式的、例如与填充剂如玉米淀粉、粘合剂和/或助流剂如滑石粉或硬脂酸镁以及任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性成分可以溶解或混悬在合适的液体赋形剂如脂肪油、石蜡油或液体聚乙二醇或者乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯中，也可以向所述液体赋形剂中加入稳定剂和洗涤剂，例如聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯型稳定剂和洗涤剂。

适合用于直肠施用的药物组合物有例如包含活性成分和栓剂基质的混合物的栓剂。合适的栓剂基质是例如天然的或合成的甘油三酯、烷属烃、聚乙二醇或高级链烷醇。

适合用于胃肠外施用的药物组合物可以包含水溶性形式、例如水溶性盐形式的活性成分的水溶液或者含有增粘物质例如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或右旋糖酐以及如果需要还有稳定剂的含水注射混悬剂。活性成分以及任选的赋形剂也可以是冻干制剂的形式，在胃肠外施用之前通过加入合适的溶剂制成溶液。如此使用的例如用于胃肠外施用的溶液也可以以输液的形式应用。可注射制剂的制备通常在无菌条件下进行，例如在无菌条件下将其灌装到例如安瓿或小瓶中，并且将容器密封。

本发明的化合物可以作为唯一的活性成分或者与可用于对抗肿瘤性疾病或可用在免疫调节方案中的其它药物一起施用。例如，根据本发明可以将本发明的化合物与在上文所述的各种疾病中有效的药物组合物组合使用，例如与下列药物组合使用：环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、氟达拉滨、吉西他滨、顺铂、卡铂、长春新碱、长春碱、依托泊苷、伊立替康、紫杉醇、多西他赛、rituxan、多柔比星、吉非替尼或伊马替尼；或者还有环孢菌素、雷帕霉素、子囊霉素或它们的免疫抑制类似物，例如环孢菌素A、环孢菌素G、FK-506、西罗莫司或依维莫司、皮质类固醇，例如泼尼松、环磷酰胺、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、金盐、柳氮磺吡啶、抗疟药、白瑞夸尔、来氟米特、咪唑立宾、麦考酚酸、麦考酚酸吗乙酯、15-脱氧精胍菌素、免疫抑制单克隆抗体，例如针对白细胞受体例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、I CD40、CD45、CD58、CD80、CD86、CD152、CD137、CD154、ICOS、LFA-1、VLA-4或它们的配体的单克隆抗体，或其它免疫调节化合物，例如CTLA41g。

本发明还提供了药物组合产品，例如药盒，其包含a)第一药物，其是游离形式或药学上可接受的盐形式的本文所公开的本发明的化合物，和b)至少一种共用药物。所述药盒可以包含其施用说明书。

制备本发明的化合物的方法

制备本发明的化合物的通用操作如下面的实施例中所述。在所述的反应中，如果这些基团是终产物中所需要的，可对反应性官能团例如羟基、氨基、亚氨基、硫基(thio)或羧基进行保护以避免它们参与不希望的反应。可根据标准实践(参见例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protective Groups in Organic Chemistry”，John Wiley and Sons，1991)使用常规保护基团。

本发明的化合物(包括它们的盐)也可以以水合物的形式获得，或者它们的晶体可以包括例如用于结晶的溶剂(以溶剂合物的形式存在)。通常能将盐转化成游离形式的化合物，例如通过用合适的碱性物质例如用碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱金属氢氧化物如碳酸钾或氢氧化钠处理而将盐转化成游离形式的化合物。通过用合适的酸(例如盐酸等)处理可以将碱加成盐形式的本发明的化合物转化成相应的游离酸。鉴于游离形式的新化合物与其盐形式(包括可以作为中间体使用、例如在新化合物的纯化或鉴别中作为中间体使用的那些盐)的新化合物之间的密切关系，任何对游离化合物的指代在适宜时都应理解为也指代相应的盐。

具有成盐基团的本发明的化合物的盐可以以本身已知的方式制备。因此通过用酸或者用合适的阳离子交换试剂处理可以获得式(1)、(2A)、(2B)、(3A)和(3B)的化合物的酸加成盐。可以由具有碱性氮原子的式(1)、(2A)、(2B)、(3A)和(3B)的化合物形成本发明的化合物的药学上可接受的盐，例如与有机酸或无机酸的酸加成盐形式的药学上可接受的盐。

合适的无机酸包括但不限于氢卤酸如盐酸、硫酸或磷酸。合适的有机酸包括但不限于羧酸、磷酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、乙醇酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、氨基酸如谷氨酸或天冬氨酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、环己烷羧酸、金刚烷羧酸、苯甲酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、苯二酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲烷磺酸或乙烷磺酸、2-羟基乙烷磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘-二磺酸、2-、3-或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N环己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸或其它有机质子酸如抗坏血酸。对于分离或纯化目的而言，也可能使用药学上不可接受的盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。对于治疗用途而言，仅使用药学上可接受的盐或游离化合物(在适用的情况下，是药物制剂的形式)。

通过于0-80℃在合适的惰性有机溶剂(例如乙腈、乙醇、含水二

烷等)中用还原剂(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等)处理可以由本发明的化合物的N-氧化物制备未氧化形式的本发明的化合物。

本发明的化合物的前药衍生物可以通过本领域普通技术人员已知的方法制备(例如，关于进一步的细节，参见Saulnier等人，(1994)，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters，Vol.4，p.1985)。例如，可以通过使未衍生化的本发明的化合物与合适的氨甲酰化试剂(例如，氯甲酸1，1-酰氧基烷基酯(1，1-acyloxyalkylcarbanochloridate)、碳酸对硝基苯基酯(para-nitrophenyl carbonate)等)反应来制备适宜的前药。

可以用本领域普通技术人员已知的方法制备本发明的化合物的被保护的衍生物。可用于产生和除去保护基团的技术的详细描述可在T.W.Greene，“Protecting Groups in Organic Chemistry”，第3版，John Wiley and Sons，Inc.，1999中找到。

可以通过以下方法将本发明的化合物制备成其单独的立体异构体：使化合物的外消旋混合物与旋光活性拆分剂反应，形成一对非对映立体异构体化合物，分离该非对映体并回收旋光纯的对映体。可以使用本发明的化合物的共价非对映体衍生物或者通过使用可离解的复合物(例如结晶性非对映体盐)进行对映体的拆分。非对映体具有不同的物理性质(例如熔点、沸点、溶解性、反应性等)，利用这些差异可以将其容易地分离。可以通过分级结晶、色谱法或者通过基于溶解性差异的分离/拆分技术分离非对映体。然后通过任何不会导致外消旋化的实践方法回收旋光纯对映体以及拆分试剂。可用于从其外消旋混合物中拆分化合物的立体异构体的技术的更详细的描述可在Jean Jacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen，“Enantiomers，Racemates and Resolutions”，John Wiley And Sons，Inc.，1981中找到。

概括而言，本发明的化合物可以通过实施例中所述的方法制备；和

(a)任选将本发明的化合物转化为药学上可接受的盐；

(b)任选将本发明的化合物的盐形式转化为非盐形式；

(c)任选将本发明的化合物的未氧化的形式转化为药学上可接受的N-氧化物；

(d)任选将本发明的化合物的N-氧化物形式转化为其未氧化的形式；

(e)任选从异构体的混合物中拆分出本发明的化合物的单个异构体；

(f)任选将未衍生化的本发明的化合物转化为药学上可接受的前药衍生物；和

(g)任选将本发明的化合物的前药衍生物转化为其未衍生化的形式。

在没有具体描述原料的制备的情况下，所述化合物是已知的或者能类似于本领域中已知的方法或如下面的实施例中所公开的那样制备。本领域技术人员应当理解的是，上面的转化仅仅是制备本发明的化合物的方法的代表，能类似地使用其它已知的方法。下面的实施例举例说明了本发明的化合物的制备，它们是对本发明的进一步举例，不用于限制本发明。

中间体1

2，5-二氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺

将5-甲基-1H-吡唑-3-胺(3.00g，30.9mmol)、2，4，5-三氯嘧啶(5.67g，30.9mmol，1 equiv.)和Na₂CO₃(3.60g，34.0mmol，1.1 equiv.)在EtOH(100mL)中的混合物于40℃加热24h。真空除去溶剂。将所得的残余物在EtOAc(350mL)与水(100mL)之间分配。将EtOAc层用水(3×)、饱和NaCl水溶液(1×)洗涤并用Na₂SO₄干燥。真空浓缩所得的EtOAc溶液，得到产物2，5-二氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺；ESMS m/z 244.0(M+H⁺)。

中间体2

2-氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺

将2，4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.06g，4.86mmol)、5-甲基-1H-吡唑-3-胺(472.2mg，4.86mmol)和碳酸钠(2.06g，19.4mmol)在100mL EtOH中的混合物于室温搅拌过夜。真空浓缩反应混合物。将粗品固体在EtOAc与水之间分配。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，真空浓缩，用硅胶色谱法(EtOAc/己烷：1/1)纯化，得到2-氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺；ESMS m/z 278.0(M+H⁺)。

中间体3

2，5-二甲基-4-(3-甲基异

唑-5-基)苯胺

步骤1：1-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)乙酮

向1-溴-2，5-二甲基-4-硝基苯(1g，4.34mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(1.88g，5.2mmol)在DMF(20mL)中的混合物中加入四(三苯基膦)钯(0)(250mg，5％mmol)。密封反应管，将混合物用N₂净化3min，然后在N₂下于90℃加热过夜。将反应冷却至室温，倒入HCl水溶液(1N，100mL)中。将混合物搅拌1小时，然后用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤并浓缩。用硅胶色谱法(20％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗产物，得到1-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)乙酮，为黄色固体。

步骤2：1-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-3-(二甲基氨基)丁-2-烯-1-酮

将1-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)乙酮(步骤1，300mg，1.55mmol)和1，1-二甲氧基-N，N-二甲基乙胺(1mL)的混合物在微波中于130℃加热10min。用硅胶色谱法(60％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗产物，得到1-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-3-(二甲基氨基)丁-2-烯-1-酮，为黄色固体。

步骤3和4：2，5-二甲基-4-(3-甲基异

唑-5-基)苯胺

将1-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-3-(二甲基氨基)丁-2-烯-1-酮(步骤2，100mg，0.38mmol)和羟胺单盐酸盐(132mg，1.9mmol)在乙醇(3mL)中的混合物在微波中于100℃加热15min。将获得的5-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-3-甲基异

唑溶解在甲醇(10mL)中。向该溶液中加入Pd/C(10％)。将反应混合物脱气并用H₂净化几次，于H₂(1atm.)下搅拌过夜。过滤混合物并浓缩，得到2，5-二甲基-4-(3-甲基异唑-5-基)苯胺。ESMS m/z 203(M+H⁺)。

中间体4

2，5-二甲基-4-(

唑-5-基)苯胺

步骤1：向2，5-二甲基-4-硝基苯甲醛(75mg，0.42mmol)和甲苯磺酰基甲胩(TOSMIC)(98mg，0.5mmol)在甲醇(2mL)中的混合物中加入甲醇钠(68mg，1.26mmol)。密封该混合物，于90℃加热15h。浓缩反应混合物，在水与乙酸乙酯之间分配。分出有机层，用硫酸钠干燥并浓缩。将获得的5-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)

唑不经纯化即用于下一步。

步骤2：将前一步骤中获得的5-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)

唑溶解在甲醇(10mL)中。向该溶液中加入Pd/C(10％)。将反应混合物脱气并用H₂净化几次，然后在1atm氢气下搅拌过夜。过滤混合物并浓缩，得到2，5-二甲基-4-(唑-5-基)苯胺，为白色固体。ESMS m/z 189(M+H⁺)。

中间体5

2，5-二甲基-4-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)苯胺

将1-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-3-(二甲基氨基)丁-2-烯-1-酮(100mg，0.38mmol)和肼(60uL，1.9mmol)在乙醇(3mL)中的混合物在微波中于100℃加热15min。将获得的5-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-3-甲基吡唑溶解在甲醇(10mL)中。向该溶液中加入Pd/C(10％)。将反应混合物脱气并用H₂净化几次，在1atm氢气下搅拌过夜。过滤混合物并浓缩，得到2，5-二甲基-4-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)苯胺。ESMS m/z 202(M+H⁺)。

中间体6

2，5-二甲基-4-(2-甲基噻唑-4-基)苯胺

步骤1：向1-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)乙酮(300mg，1.55mmol)在HBr(48％)(5mL)/甲醇(2.4mL)中的混合物中加入溴(250mg，1.55mmol)。将混合物于室温搅拌4h。用水稀释混合物，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水洗涤并浓缩。用硅胶柱色谱法(10％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化残余物，得到2-溴-1-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)乙酮，为白色固体。

步骤2：将2-溴-1-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)乙酮(70mg，0.26mmol)和硫代乙酰胺(ethanethioamide)(30mg，0.4mmol)在乙醇(2mL)中的混合物在微波中于150℃加热20min。将获得的4-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-2-甲基噻唑溶解在甲醇(10mL)中。向该溶液中加入Pd/C(10％)。将反应混合物脱气并用H₂净化几次，在1atm氢气下搅拌过夜。过滤混合物并浓缩，得到2，5-二甲基-4-(2-甲基噻唑-4-基)苯胺。ESMS m/z 219(M+H+)。

中间体7

2，5-二甲基-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯胺

于0℃，向2-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-1H-咪唑(50mg，0.23mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入NaH(11mg，0.46mmol)。搅拌15min后，滴加碘甲烷(65mg，046mmol)。将混合物于0℃搅拌1h，通过加入饱和氯化铵水溶液将其淬灭。用乙酸乙酯(3×15mL)萃取该混合物。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥。浓缩后，将残余物溶解在甲醇(10mL)中。向该溶液中加入Pd/C(10％)。将反应混合物脱气并用H₂净化几次，在1atm氢气下搅拌过夜。过滤混合物并浓缩，得到2，5-二甲基-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯胺。ESMS m/z 202(M+H+)。

中间体8

2，5-二甲基-4-(吡啶-3-基)苯胺

将4-溴-2，5-二甲基苯胺(4.00g，20mmol)、吡啶-3-基硼酸(2.70g，11mmol)、Pd₂(dba)₃(0.55g，0.6mmol)、2-二环己基膦基-2’，6’-二甲氧基联苯(0.98g，1.2mmol)和Na₂CO₃(10.6g，100mmol)在n-BuOH(50mL)中的混悬液用氩气流脱气15min。密封反应瓶，置于预先加热的油浴(115℃)中。搅拌过夜，将反应冷却并过滤。用DCM洗涤滤饼，真空浓缩滤液。将所得的残余物溶解在EtOAc(150mL)中。将EtOAC依次用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥并蒸发。用硅胶色谱法(0-50％EtOAC的己烷溶液梯度)纯化粗产物，得到2，5-二甲基-4-(吡啶-3-基)苯胺，为黄色固体。ESMS m/z 199.1(M+H⁺)。

中间体9

8-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯

将4，4，4，4-四甲基-2-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(200mg，0.86mmol)、1-溴-2，5-二甲基-4-硝基苯(228mg，0.86mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(98mg，0.09mmol)和氟化铯(392mg，2.58mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(2mL)和甲醇(1mL)的混合物中的混合物脱气5min，然后在微波反应器中于130℃加热15min。将反应真空浓缩，用硅胶色谱法(EtOAC/己烷：3/7)纯化，得到8-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯；ESMS m/z 290.2(M+H⁺)。

中间体10

2，5-二甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)苯胺

将8-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷(130.2mg，0.45mmol)和10％Pd-C(13.0mg)在MeOH(20mL)中的混合物脱气，然后在1atm H₂下反应。反应完成后，通过过滤除去Pd-C，真空浓缩滤液，得到2，5-二甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)苯胺；ESMS m/z 262.2(M+H⁺)。

中间体11

2-氟-5-甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)苯胺

将4，4，4，4-四甲基-2-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(532.0mg，2.0mmol)、4-溴-2-氟-5-甲基苯胺(406.0mg，2.0mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(231.1mg，0.2mmol)、氟化铯(912.0mg，6.0mmol)、1，2-二甲氧基乙烷(4mL)和甲醇(2mL)的混合物脱气5min，然后在微波反应器中于130℃加热15min。将反应真空浓缩，用硅胶色谱法(EtOAC/己烷：3/7)纯化，得到2-氟-5-甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)苯胺；ESMS m/z264.1(M+H⁺)。

中间体12

2-氟-5-二甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)苯胺

将2-氟-5-甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)苯胺(130mg，0.50mmol)和10％Pd-C(13.0mg)在MeOH(20mL)中的混合物脱气，然后在1atm H₂下反应。反应完成后，通过过滤除去Pd-C，真空浓缩滤液，得到2-氟-5-二甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)苯胺；ESMS m/z 266.2(M+H⁺)。

中间体13

4-(5-氟-2-甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己酮

将2-氟-5-甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)苯胺(318.6mg，1.2mmol)、2-氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(333.0mg，1.2mmol)和HCl(4N的水溶液，0.3mL，1.2mmol)在i-PrOH(4.0mL)中的混合物于125℃在油浴中加热过夜。真空浓缩反应混合物。将所得的粗混合物溶解在THF(4mL)、MeOH(2mL)和HCl(4N的水溶液，0.3mL，1.2mmol)中，于室温再搅拌2h。真空浓缩反应混合物，用硅胶色谱法(0-100％EtOAC的己烷溶液梯度)纯化，得到4-(5-氟-2-甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己酮；ESMS m/z 463.2(M+H⁺)。

中间体14

N-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-5-甲基异

唑-3-胺

将5-甲基异

唑-3-胺(98mg，1.0mmol)、2，4，5-三氯嘧啶(344μL，3.0mmol)和碳酸钠(106mg，1.0mmol)在3mL EtOH中的混合物于60℃加热过夜。浓缩反应混合物，然后在EtOAc与盐水之间分配。将收集的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，真空浓缩，用硅胶色谱法(MeOH/DCM：1/9)纯化，得到N-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-5-甲基异

唑-3-胺；ESMS m/z 245.0(M+H⁺)。

中间体15

2，5-二氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺

将5-环丙基-1H-吡唑-3-胺(246mg，2.00mmol)、2，4，5-三氯嘧啶(367mg，2.00mmol，1 equiv.)和Na₂CO₃(233mg，2.20mmol，1.1 equiv.)在EtOH(10mL)中的混合物于40℃加热16h。将粗反应混合物用EtOAc稀释，依次用水(3×)和饱和NaCl水溶液(1×)洗涤。将所得的EtOAc层用Na₂SO₄干燥，然后真空浓缩，得到2，5-二氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺；ESMSm/z 270.0(M+H⁺)。

中间体16

4-(6-氨基-5-氟-1-氧代二氢异吲哚-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

步骤1：4-(2-氯-4-氟-5-硝基苯甲酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在N₂下，向于0℃的2-氯-4-氟-5-硝基-苯甲酸(1.0g，4.56mmol)在40mL DCM中的溶液中依次加入亚硫酰氯(1.0mL，13.68mmol)和0.1mLDMF。将反应混合物逐渐温热至室温并搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，得到2-氯-4-氟-5-硝基苯甲酰氯。将粗品溶解在40mL DCM中，向溶液中依次加入1-boc-4-氨基哌啶(910mg，4.56mmol)和三乙胺(1.29mL，9.12mmol)。于室温搅拌1h后，将反应混合物用20mL水洗涤。干燥有机萃取物(Na₂SO₄)，然后真空浓缩，得到4-(2-氯-4-氟-5-硝基苯甲酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；ESMS m/z 402.1(M+H⁺)。

步骤2：4-(4-氟-5-硝基-2-乙烯基苯甲酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在氮气下，将4-(2-氯-4-氟-5-硝基苯甲酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(步骤1，1.52g，3.88mmol)、乙烯基硼酸二丁基酯(0.86mL，3.88mmol)、二氯双(三苯基膦)钯(II)(136mg，0.2mmol)和碳酸钠(2.9g，27.2mmol)在THF(40mL)和水(10mL)中的混合物于90℃加热过夜。将反应混合物冷却至室温，在EtOAc与盐水之间分配。干燥有机萃取物(Na₂SO₄)，浓缩，用硅胶色谱法(EtOAc/己烷：1/4)纯化，得到4-(4-氟-5-硝基-2-乙烯基苯甲酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；ESMS m/z 394.2(M+H⁺)。

步骤3：4-(5-氟-6-硝基-1-氧代二氢异吲哚-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将在50mL DCM中的4-(4-氟-5-硝基-2-乙烯基苯甲酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(步骤2，1.1g，2.77mmol)冷却至-78℃。使臭氧通过该溶液，直至原料被消耗掉，然后使氮气通过溶液5min。将反应混合物温热至室温。加入在10mL DCM中的三苯基膦-树脂(2.77g)，再搅拌1.5h。滤出树脂，真空浓缩溶液。将所得的粗品溶解在DCM(15mL)中，向该溶液中依次加入TFA(15mL)和三乙基硅烷(1.0mL，5.9mmol)。将反应于室温搅拌2h。浓缩后，将反应粗品倒入10mL水，用饱和NaHCO₃水溶液中和至pH 8，然后加入在10mL DCM中的(Boc)₂O(603mg，2.77mmol)。将反应于室温搅拌1.5h，然后用DCM萃取。干燥有机萃取物(Na₂SO₄)，真空浓缩，用硅胶色谱法(EtOAc/己烷：1/4)纯化，得到4-(5-氟-6-硝基-1-氧代二氢异吲哚-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；ESMS m/z 380.2(M+H⁺)。

步骤4：4-(6-氨基-5-氟-1-氧代二氢异吲哚-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将4-(5-氟-6-硝基-1-氧代二氢异吲哚-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(步骤3，240mg，0.72mmol)、Pd(10％wt，在活性碳上，24mg)和MeOH(20mL)的混合物抽空以除去空气，然后将反应在氢气囊下搅拌，直至原料被消耗掉。滤出Pd/C，真空浓缩溶液，得到4-(6-氨基-5-氟-1-氧代二氢异吲哚-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯；ESMS m/z 350.2(M+H⁺)。

中间体17

4-(4-氨基萘-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

步骤1：4-(4-氨基萘-1-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯

将4-溴萘-1-胺(1.0g，4.5mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.7g，5.4mmol)、Pd(PPh₃)₄(26.01mg，0.02mmol)和Na₂CO₃(3.34g，31.5mmol)在10mL DMF和5mL水中的混合物脱气，用氮气净化。将反应于100℃加热5h，冷却至室温。将反应混合物在EtOAc与水之间分配。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，真空浓缩，用硅胶色谱法(MeOH/DCM：5/95)纯化，得到4-(4-氨基萘-1-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯。

步骤2：4-(4-氨基萘-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向4-(4-氨基萘-1-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯在50mL MeOH中的溶液中加入10wt％Pd-C(100mg)。将反应脱气以除去空气，在1atmH₂下搅拌，直至原料被消耗掉。通过过滤除去Pd-C，将所得的溶液真空浓缩，得到4-(4-氨基萘-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。

中间体18

3-乙基-2，3，4，5-四氢-1H-苯并[d]氮杂

-7-胺

通过文献Pecherer，B.等人，J.Heterocyclic Chem 1971，8(5)，779-783中所述的方法以及标准合成方法合成了3-乙基-2，3，4，5-四氢-1H-苯并[d]氮杂

-7-胺。

实施例1

1-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2，5-二甲基苯基)乙酮O-2-羟基乙基肟(28)

步骤1：向N²-(4-溴-2，5-二甲基苯基)-5-氯-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2，4-二胺(280mg，0.69mmol)在THF(3mL)中的溶液中加入p-TSA(119mg，0.69mmol)和3，4-二氢-2H-吡喃(348mg，2.86mmol)。将混合物于室温搅拌14h，然后倒入饱和NaHCO₃水溶液(10mL)中。用EtOAc(3×10mL)萃取所得的混合物，将合并的有机层浓缩。用闪式柱色谱法(硅胶，0-50％EtOAc的己烷溶液梯度)纯化所得的残余物，得到N²-(4-溴-2，5-二甲基苯基)-5-氯-N⁴-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2，4-二胺，为白色固体；ESMS m/z 491.1(M+H⁺)。

步骤2：将N²-(4-溴-2，5-二甲基苯基)-5-氯-N⁴-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2，4-二胺(166mg，0.34mmol)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(146mg，0.41mmol)和Pd(PPh₃)₄(39mg，0.034mmol)在甲苯(2mL)中的混合物脱气，在N₂下于100℃加热14h。冷却至室温后，浓缩混合物。将所得的残余物重新溶解在乙腈(2mL)中，用1N HCl(2mL)处理14h。用EtOAc(3×15mL)萃取后，将合并的有机层用饱和KF水溶液(10mL)处理。收集所得的有机层，用盐水处理，用MgSO₄干燥。过滤除去干燥剂后，浓缩滤液，用闪式柱色谱法(硅胶，0-100％EtOAc的己烷溶液梯度)纯化，得到1-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2，5-二甲基苯基)乙酮，为白色固体；ESMS m/z 371.1(M+H⁺)。

步骤3：向1-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2，5-二甲基苯基)乙酮(60mg，0.16mmol)在MeOH(1mL)中的溶液中加入AcOH(15mg，0.25mmol)，然后加入2-(氨基氧基)乙醇(20mg，0.26mmol)。将混合物加热至60℃达14h，冷却至室温。然后直接用制备型RP-HPLC纯化混合物，得到1-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2，5-二甲基苯基)乙酮O-2-羟基乙基肟；ESMS m/z 430.2(M+H⁺)。

实施例2

4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-2，5-二甲基苯甲酰胺(31)

向4-(5-氯-4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2，5-二甲基苯甲酸(35.0mg，0.077mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液中加入HATU(29.1mg，0.077mmol)、DIEA(26.7μL，0.153mmol)和N¹，N¹-二甲基乙烷-1，2-二胺(25.2μL，0.230mmol)。将反应混合物于室温搅拌过夜。然后加入1N HCl水溶液(0.5mL)，将反应混合物于100℃加热1.5小时以除去四氢-2H-吡喃-2-基保护基团。用制备型RP-HPLC纯化混合物，得到4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-2，5-二甲基苯甲酰胺；ESMS m/z 443.2(M+H⁺)。

实施例3

4-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2，5-二甲基苯基)环己酮肟(33)

向4-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2，5-二甲基苯基)环己酮(15mg，0.033mmol)在MeOH(0.5mL)中的溶液中加入NaOAc(6mg，0.073mmol)和NH₂OH·HCl(5mg，0.073mmol)。将所得的混合物于70℃搅拌2h，然后冷却至室温。直接用制备型RP-HPLC纯化混合物，得到4-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2，5-二甲基苯基)-环己酮肟；ESMS m/z 440.2(M+H⁺)。

实施例4和5

5-氯-N ² -(2，5-二甲基-4-(4-反式-吗啉代环己基)苯基)-N ⁴ -(5-甲基-1H-吡唑-3- 基)嘧啶-2，4-二胺(37)

5-氯-N ² -(2，5-二甲基-4-(4-顺式-吗啉代环己基)苯基)-N ⁴ -(5-甲基-1H-吡唑-3- 基)嘧啶-2，4-二胺(38)

步骤1：将1-溴-2，5-二甲基-4-硝基苯(100mg，0.43mmol)、4，4，5，5-四甲基-2-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(112mg，0.43mmol)、Pd(PPh₃)₄(49mg，0.043mmol)和CsF(196mg，1.29mmol)在二甲基乙二醇(dimethyl ethylene glycol)和水(2∶1，1.5mL)的混合物中的混合物脱气，在N₂下于130℃在微波反应器中加热15min。冷却至室温后，将反应混合物用饱和NH₄Cl水溶液(5mL)处理，用EtOAc(3×4mL)萃取。将合并的有机层浓缩，用闪式柱色谱法(硅胶，0％-30％EtOAc的己烷溶液梯度)纯化，得到8-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯，为白色固体；ESMS m/z 290.1(M+H⁺)。

步骤2：将8-(2，5-二甲基-4-硝基苯基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯(105mg，0.36mmol)和Pd/C(10mg)在EtOH中的混合物脱气，在1atm H₂下于室温搅拌14h。通过过滤除去Pd/C，浓缩滤液，得到2，5-二甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)苯胺，将其不经进一步纯化即用于下一步骤；ESMS m/z 262.2(M+H⁺)。

步骤3：将2，5-二甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)苯胺(86mg，0.33mmol)和2，5-二氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(104mg，0.43mmol)在ⁱPrOH(3mL)中的混合物用HCl(82μL，4N在二

烷中的溶液，0.33mmol)处理，在密封的管中加热至125℃达14h。冷却至室温后，浓缩混合物，于室温用丙酮(2mL)和HCl(330μL，4N在二

烷中的溶液)处理5h。然后将混合物用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)处理，用EtOAc(3×10mL)萃取。合并有机层，浓缩，用闪式柱色谱法(硅胶，0％-100％ EtOAc的己烷溶液梯度)纯化，得到4-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2，5-二甲基苯基)环己酮，为白色固体；ESMS m/z 425.2(M+H⁺)。

步骤4：向4-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2，5-二甲基苯基)环己酮(30mg，0.071mmol)在1，2-二氯乙烷(1mL)中的溶液中加入吗啉(9mg，0.11mmol)，然后加入AcOH(6.5mg，0.11mmol)和分子筛。将混合物于室温搅拌1h，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(22.5mg，0.11mmol)。将混合物于室温搅拌14h，在该时间点加入另外的吗啉(5mg，0.058mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(10mg，0.047mmol)，于室温再搅拌5h。然后将反应混合物用饱和NH₄Cl水溶液(3mL)处理，用EtOAc(3×4mL)萃取。将合并的有机层浓缩，用制备型硅胶薄层色谱法(含有0.2％NH₃的7％MeOH/CH₂Cl₂)纯化，得到5-氯-N²-(2，5-二甲基-4-(4-顺式-吗啉代环己基)苯基)-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2，4-二胺，为极性较小的异构体；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.01(br，1H)，8.49(br，2H)，7.98(s，1H)，7.10(s，1H)，7.00(s，1H)，6.13(br，1H)，3.64(m，4H)，2.75(m，1H)，2.41(m，4H)，2.24(s，3H)，2.00～2.20(m，9H)，1.70～1.85(m，2H)，1.35～1.55(m，4H)；ESMS m/z 496.3(M+H⁺)，和5-氯-N²-(2，5-二甲基-4-(4-反式-吗啉代环己基)苯基)-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2，4-二胺，为极性较大的异构体；¹HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.01(br，1H)，8.47(br，2H)，7.98(s，1H)，7.14(s，1H)，7.02(s，1H)，6.13(br，1H)，3.57(br，4H)，2.60(m，1H)，2.50(br，4H)，2.32(m，1H)，2.22(s，3H)，2.13(s，3H)，2.10(s，3H)，1.93(b，2H)，1.79(b，2H)，1.30～1.55(m，4H)；ESMS m/z 496.3(M+H⁺)。

实施例6

5-氯-N ² -(2，5-二甲基-4-(吗啉代甲基)苯基)-N ⁴ -(5-甲基-1H-吡唑-3-基) 嘧啶-2，4-二胺(39)

步骤1：将2，5-二氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(732mg，3mmol)、4-溴-2，5-二甲基苯胺(554mg，2mmol)和浓HCl水溶液(1.5mL)在异丙醇(15mL)中的混合物在微波中于130℃加热40min。LCMS显示反应不完全，向反应中加入另外的2，5-二氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(732mg，3mmol)。再次将反应在微波中于130℃加热另外60min。然后将粗反应混合物用EtOAc(100mL)稀释，依次用饱和NaHCO₃水溶液(2×20mL)和盐水(10mL)洗涤，用Na₂CO₃干燥并真空浓缩。用硅胶色谱法(含有1％NH₃添加剂的0-10％MeOH的EtOAc溶液梯度)纯化粗产物，得到N²-(4-溴-2，5-二甲基苯基)-5-氯-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2，4-二胺，为灰白色固体；ESMS m/z 407.2(M+H⁺)。

步骤2：将N²-(4-溴-2，5-二甲基苯基)-5-氯-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2，4-二胺(41mg，0.1mmol)、1-三氟硼酸合甲基吗啉钾(potassium 1-trifluoroboratomethylmorpholine)(43mg，0.2mmol)、Pd(OAc)₂(3mg，0.013mmol)、Xantphos(12mg，0.025mmol)和Cs₂CO₃(98mg，0.3mmol)在THF(1mL)/H₂O(0.1mL)中的混合物用氩气流脱气。将小瓶密封，于160℃在微波中加热30min。加入另外的1-三氟硼酸合甲基吗啉钾(69mg)、Xantphos(18mg)和Cs₂CO₃(98mg)。再次将反应在微波中于160℃加热另外30min。用RP-HPLC纯化粗产物，得到5-氯-N2-(2，5-二甲基-4-(吗啉代甲基)苯基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2，4-二胺，为白色粉末；ESMSm/z 428.2(M+H⁺)。

实施例7

4-(2，5-二甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基) 苯基)环己酮(40)

将2，5-二甲基-4-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)苯胺(111.3mg，0.43mmol)、2-氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(119.6mg，0.43mmol)、HCl(4N在水中的溶液，0.11mL，0.43mmol)在i-PrOH(4.0mL)中的混合物在油浴中于125℃加热过夜。真空浓缩反应混合物。将粗产物溶解在THF(2mL)、MeOH(1mL)和HCl(4N在水中的溶液，0.11mL，0.43mmol)中，于室温搅拌2h。真空浓缩反应混合物，然后用硅胶色谱法(0-100％EtOAc的己烷溶液梯度)纯化，得到4-(2，5-二甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己酮；ESMS m/z459.2(M+H⁺)。

实施例8

反式-4-(2，5-二甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己醇(41)

向4-(2，5-二甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己酮(100mg，0.22mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入NaBH₄(33.2mg，0.87mmol)。将反应搅拌30min，浓缩，用硅胶色谱法(MeOH/DCM：8∶92)纯化，得到反式-4-(2，5-二甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己醇；R_f：0.35(硅胶；MeOH/DCM 8∶92)；ESMS m/z 461.2(M+H⁺)。

实施例9

顺式-4-(2，5-二甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己醇(42)

向4-(2，5-二甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己酮(100mg，0.22mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入NaBH₄(33.2mg，0.87mmol)。将反应搅拌30min，浓缩，用硅胶色谱法(MeOH/DCM：8∶92)纯化，得到顺式-4-(2，5-二甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己醇；R_f：0.45(硅胶；MeOH/DCM8∶92)；ESMS m/z 461.2(M+H⁺)。

实施例10

N ² -(2-氟-5-甲基-4-(顺式-4-(哌啶-1-基)环己基)苯基)-N ⁴ -(5-甲基-1H-吡唑-3- 基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2，4-二胺(62)

将4-(5-氟-2-甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己酮(30mg，0.065mmol)、哌啶(30μL，0.174mmol)和乙酸(75μL，0.13mmol)的混合物于室温搅拌1h。向反应中加入三乙酰氧基硼氢化钠(27.4mg，0.13mmol)，将反应混合物搅拌过夜。浓缩混合物，用硅胶色谱法(MeOH/DCM 8∶92)纯化，得到N²-(2-氟-5-甲基-4-(顺式-4-(哌啶-1-基)环己基)苯基)-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2，4-二胺；R_f：0.41(硅胶；MeOH/DCM 8∶92)；ESMS m/z 532.3(M+H⁺)。

实施例11

N ² -(2-氟-5-甲基-4-(反式-4-(哌啶-1-基)环己基)苯基)-N ⁴ -(5-甲基-1H-吡唑-3- 基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2，4-二胺(63)

将4-(5-氟-2-甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己酮(30mg，0.065mmol)、哌啶(30μL，0.174mmol)和乙酸(75μL，0.13mmol)的混合物于室温搅拌1h。向反应中加入三乙酰氧基硼氢化钠(27.4mg，0.13mmol)，将反应混合物搅拌过夜。浓缩混合物，用硅胶色谱法(MeOH/DCM 8∶92)纯化，得到N²-(2-氟-5-甲基-4-(反式-4-(哌啶-1-基)环己基)苯基)-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2，4-二胺；R_f：0.32(硅胶；MeOH/DCM 8∶92)；ESMS m/z 532.3(M+H⁺)。

实施例12

N ² -(2，5-二甲基-4-(顺式-4-吗啉代环己基)苯基)-N ⁴ -(5-甲基-1H-吡唑-3- 基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2，4-二胺(66)

将4-(2，5-二甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己酮(40mg，0.087mmol)、吗啉(15μL，0.174mmol)和乙酸(75μL，0.13mmol)的混合物于室温搅拌1h。向反应中加入氰基硼氢化钠(8.2mg，0.13mmol)，将反应混合物搅拌过夜。浓缩混合物，用硅胶色谱法(MeOH/DCM 8∶92)纯化，得到N²-(2，5-二甲基-4-(顺式-4-吗啉代环己基)苯基)-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2，4-二胺；R_f：0.50(硅胶；MeOH/DCM 8∶92)；ESMS m/z 530.3(M+H⁺)。

实施例13

N ² -(2，5-二甲基-4-(反式-4-吗啉代环己基)苯基)-N ⁴ -(5-甲基-1H-吡唑-3- 基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2，4-二胺(67)

将4-(2，5-二甲基-4-(4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)环己酮(40mg，0.087mmol)、吗啉(15μL，0.174mmol)和乙酸(75μL，0.13mmol)的混合物于室温搅拌1h。向反应中加入氰基硼氢化钠(8.2mg，0.13mmol)，将反应混合物搅拌过夜。浓缩混合物，用硅胶色谱法(MeOH/DCM 8∶92)纯化，得到N²-(2，5-二甲基-4-(反式-4-吗啉代环己基)苯基)-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2，4-二胺；R_f：0.38(硅胶；MeOH/DCM 8∶92)；ESMS m/z 530.3(M+H⁺)。

通过重复上面实施例中所述的操作并且使用适宜的原料获得了下列表1中的化合物。

表1

实施例14

6-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-氟-2-(哌啶-4-基)二氢异吲哚-1-酮(79)

向4-(6-氨基-5-氟-1-氧代二氢异吲哚-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体20，18mg，0.05mmol)和2，5-二氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶(12mg，0.05mmol)在1mL i-PrOH中的溶液中加入5滴浓HCl水溶液。将反应混合物在微波反应器中于150℃加热20min，然后浓缩，用制备型RP-HPLC纯化，得到6-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-氟-2-(哌啶-4-基)二氢异吲哚-1-酮；ESMS m/z 457.2(M+H⁺)。

实施例15

6-(5-氯-4-(5-甲基异

唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-氟-2-(哌啶-4-基)二氢异吲哚-1-酮(80)

向4-(6-氨基-5-氟-1-氧代二氢异吲哚-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(35mg，0.1mmol)和5-氯-4-(5-甲基异唑-3-基)嘧啶-2-胺(25mg，0.1mmol)在1mL i-PrOH中的溶液中加入5滴浓HCl水溶液。将反应混合物在微波反应器中于150℃加热20min，然后浓缩，用制备型RP-HPLC纯化，得到6-(5-氯-4-(5-甲基异唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-氟-2-(哌啶-4-基)二氢异吲哚-1-酮；ESMS m/z 458.1(M+H⁺)。

实施例16

2-(4-(6-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲基吡啶-3-基) 哌啶-1-基)乙酰胺(84)

步骤1：向5-溴-4-甲基吡啶-2-胺(200mg，1.07mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(370mg，1.2mmol)和碳酸钠(400mg，1.28mmol)在DMF/H₂O(8/2mL)中的混合物中加入四(三苯基膦)钯(0)(62mg，5％mmol)。密封反应管，将混合物用N₂净化3min，然后在N₂下于100℃加热过夜。将反应冷却至室温，倒入饱和氯化铵水溶液中。将粗反应混合物用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤并浓缩。用硅胶柱色谱法(80％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗产物，得到4-(6-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯，为黄色油状物。将获得的油状物溶解在甲醇(20mL)中。向该溶液中加入Pd/C(10％w/w)。将反应混合物脱气并用H₂净化几次，然后在1atmH₂下搅拌过夜。过滤混合物并浓缩，得到4-(6-氨基-4-甲基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，为黄色固体；ESMS m/z 236(M-56+H⁺)。

步骤2：向2，5-二氯-N-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(150mg，0.45mmol)、4-(6-氨基-4-甲基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.41mmol)、Xantphos(24mg，0.04mmol)和碳酸铯(270mg，0.82mmol)在THF(4mL)中的混合物中加入乙酸钯(5mg，0.02mmol)。将混合物用氮气净化，密封管。将混合物在油浴中于100℃加热5h。过滤混合物并浓缩。用硅胶色谱法(70％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化残余物，得到4-(6-(5-氯-4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，为黄色固体；ESMS m/z 583(M+H⁺)。

步骤3：向4-(6-(5-氯-4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯在DCM(1mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。将混合物搅拌1h并浓缩，得到5-氯-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N2-(4-甲基-5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2，4-二胺，为微棕色油状物。将产物不经进一步纯化直接用于随后的反应。

步骤4：向5-氯-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N2-(4-甲基-5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2，4-二胺(50mg，0.12mmol)和三乙胺(50uL，0.36mmol)在DMF(1.5mL)中的混合物中加入2-溴-乙酰胺(25mg，0.18mmol)。将混合物于室温搅拌2小时。过滤反应，用RP-HPLC纯化滤液，得到2-(4-(6-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)哌啶-1-基)乙酰胺，为白色固体；¹H NMR(400MHz，MeOD-d₄)δ8.30(s，1H)，8.21(s，1H)，7.28(s，1H)，6.19(s，1H)，4.0(s，2H)，3.80-3.73(m，2H)，3.33-3.21(m，3H)，2.61(s，3H)，2.37(s，3H)，2.37-2.32(m，2H)，2.20-2.16(m，2H)；ESMSm/z 456.2(M+H⁺)。

实施例17

5-氯-N ⁴ -(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N ² -(4-(哌啶-4-基)萘-1-基)嘧啶-2，4-二胺(85)

将2，5-二氯-N-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(202.7mg，0.62mmol)、4-(4-氨基萘-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(202.0mg，0.62mmol)、Xantophos(35.9mg，0.062mmol)、乙酸钯(II)(7.0mg，0.031mmol)和碳酸铯(40.3mg，0.12mmol)在5.0mL THF中的混合物在微波反应器中于150℃加热25min。过滤反应混合物，真空浓缩滤液。将粗产物溶解在5mL DCM和4mL TFA中。将该反应混合物于室温搅拌2h，然后真空浓缩。用RP-HPLC纯化粗产物，得到5-氯-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N²-(4-(哌啶-4-基)萘-1-基)嘧啶-2，4-二胺；ESMS m/z 434.2(M+H⁺)

实施例18

2-(4-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)萘-1-基)哌啶-1- 基)乙酰胺(86)

将5-氯-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N²-(4-(哌啶-4-基)萘-1-基)嘧啶-2，4-二胺(30.8mg，0.07mmol)、2-溴乙酰胺(19.6mg，0.14mmol)和三乙胺(30.0μL，0.21mmol)在2mL DMF中的混合物在微波反应器中于130℃加热20min。用RP-HPLC纯化粗产物，得到2-(4-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)萘-1-基)哌啶-1-基)乙酰胺；ESMS m/z 491.2(M+H⁺).

实施例19

3-(4-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)萘-1-基)哌啶-1- 基)-1，1，1-三氟丙烷-2-醇(88)

将5-氯-N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N²-(4-(哌啶-4-基)萘-1-基)嘧啶-2，4-二胺(30.8mg，0.07mmol)和2-(三氟甲基)环氧乙烷(39.2mg，0.35mmol)在1mL DMF中的混合物于室温搅拌过夜。用RP-HPLC纯化粗产物，得到3-(4-(4-(5-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶-2-基氨基)萘-1-基)哌啶-1-基)-1，1，1-三氟丙烷-2-醇；ESMS m/z 546.2(M+H⁺)。

通过重复上面实施例中所述的操作并且使用适宜的原料获得了下列表2中的化合物。

表2

测定法

通过构建剂量-响应曲线和检查不同拮抗剂浓度对逆转激动剂活性的作用可以测定药物的IC₅₀。通过测定抑制激动剂的最大生物响应的二分之一所需的浓度可以计算给定拮抗剂的IC₅₀值。为了计算IC₅₀值，产生一系列剂量-响应数据(例如，药物浓度x1、x2、...、xn和生长抑制y1、y2、...、yn，y的值在0-1范围内)。可以使用下面的公式通过计算机辅助的系统确定IC₅₀值：

y＝D+((A-D)/(1+10^{(x-log(IC50)B})

其中A是最低药物浓度与对照之间的生长抑制比；B是S形曲线的斜率；D是最高药物浓度与对照之间的生长抑制比。

IC₅₀值被表示为导致比使用无抑制剂的对照低50％的生长抑制的供试化合物浓度。游离形式或药学上可接受的盐形式的本发明的化合物可表现出有价值的药理学性质，例如如本申请中所述的体外试验中所示。一般而言，本发明的化合物具有1nM-10μM的IC₅₀值。在一些实施例中，本发明的化合物具有0.01μM-5μM的IC₅₀值。在另一些实施例中，本发明的化合物具有0.01μM-1μM或者更特别是1nM-1μM的IC₅₀值。在还有一些实施例中，本发明的化合物具有小于1nM或大于10μM的IC₅₀值。在10μM下，针对IGF-1R，本发明的化合物可表现出大于50％的抑制百分数，或者在另一些实施方案中可表现出大于约70％的抑制百分数。

Ba/F3细胞系组和试剂

Ba/F3是鼠IL-3-依赖性祖-B淋巴瘤细胞系。用亲本Ba/F3细胞产生一组亚系，通过各酪氨酸激酶(通过与TEL(氨基酸1-375)或BCR的氨基末端部分融合被活化)的稳定转导使得它们的增殖和存活是IL-3-非依赖性的。为了产生Tel-酪氨酸激酶(TK)融合转化的Ba/F3细胞系，将亲本Ba/F3细胞用包含每种TEL-融合激酶的逆转录病毒感染并进行嘌罗霉素选择和IL-3撤回(withdrawal)以获得IL-3-非依赖性的转化Ba/F3细胞。

在补充有10％FBS(Hyclone Cat #SV30014.03，Logan，UT)、4.5g/L葡萄糖(Sigma #G5400，St.Louis，MO)、1.5g/L碳酸氢钠(Biowhittaker#17-613E，Walkersville，MD)和Pen/Strep(Gibco #10378-016，Carlsbad，CA)的RPMI-1640培养基(Gibco Cat #11875093，Carlsbad，CA)中培养各转化Ba/F3细胞。每周将细胞分传两次。

Ba/F3细胞生存力抑制测定法

如下测定供试化合物对各种Tel-TK转化Ba/F3系的效力。将指数生长的BaF3Tel-TK细胞在新鲜培养基中稀释至75,000个细胞/mL，用μFill液体分样器(BioTek，Winooski，VT，USA)以50μL/孔接种在384-孔板中(3750个细胞/孔)。对于每个细胞系用一式两块板进行。将供试化合物和对照化合物用DMSO系列稀释，排列在聚丙烯384-孔板中。使用针转移(pin-transfer)装置将50nL化合物转移到测定板中，将板于37℃(5％ CO₂)孵育48小时。加入25μL Britelite(Perkin Elmer)，使用Analyst GT(Molecular Devices)对发光进行定量。用常规曲线拟合软件产生细胞存活力百分数(作为抑制剂浓度的对数的函数)的对数拟合。用内插法得到IC₅₀，为将细胞生存力降低至DMSO对照的50％所需的化合物浓度。按照与上面所述的操作相同的操作将在IL-3(终浓度1ng/ml)存在下维持和培养的亲本Ba/F3细胞在含有IL-3(终浓度1ng/ml)的新鲜培养基中稀释至75,000个细胞/mL。

酶HTRF测定法

IGF-1R和INSR(胰岛素受体)购自Upstate。内部制备下列试剂：10x激酶缓冲液(KB)(200mM Tris(pH 7.0)，100mM MgCl₂，30mM MnCl₂，50nM NaVO₄)，10mM ATP，100mg/ml BSA，0.5M EDTA，4M KF。用来自Perkin-Elmer的Proxiplate-384进行测定。包括底物(生物素-聚-GT(61GT0BLB)，Mab PT66-K，(61T66KLB)，链霉抗生物素-XL^ent(611SAXLB))在内的所有HTRF试剂均购买自CIS-US，Inc。

如下制备底物/ATP混合物：将ATP(终浓度，3μM)和生物素化的聚-GT(终浓度，10ng/μl)加入1x KB中，使用μFill(Bio-TEK)以5μl/孔分配到Proxiplate-384中。使用50nL的针头(pinhead)将系列稀释的化合物(在DMSO中)转移到板中。使用μFill(Bio-TEK)加入5μL制备的酶混合物(酶(终浓度，5ng/μl)，与BSA和DTT在1×KB中混合)以启动激酶反应。将测定板于室温孵育2小时。如下制备检测混合物：将Mab PT66-K和链霉抗生物素-XL^ent均加入0.5×含有KF(终浓度，125mM)、EDTA(终浓度，50mM)和BSA(终浓度，100μg/ml)的KB溶液中。反应结束时，加入10μL检测混合物，于室温孵育30分钟，然后进行测定。用Analyst-GT(molecular Devices)检测HTRF信号。

癌细胞增殖抑制测定法

为了将癌细胞系萤光化，将每个细胞系用带有萤光素酶基因和嘌罗霉素-抗性基因(其表达由LTR推动)的两性逆转录病毒转导。简言之，根据生产商的说明使用Fugene6(Roche)将逆转录病毒载体pMSCV-Puro-Luc转染入Phoenix细胞系。转染后两天，收获含有病毒的上清液，用0.2μm滤器过滤。立即使用收获的病毒或将其储存于-80’C。为了进行感染，收获培养的癌细胞，将其铺在(5×10⁵个细胞/孔，在1ml培养基中)6-孔组织培养板上。对于每个孔，加入3ml病毒上清液以及400μl FBS、40μl 1M HEPES(pH8.0)和4μl 1，5-二甲基-1，5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物(10μg/ml，Specialty media)。将板于2500rpm离心90分钟以用于针感染(spin-infection)，转移到培养箱中进行过夜感染。第二天，将感染的细胞系转移到含有新鲜培养基的T-75瓶中，孵育一天。感染后两天，以1μg/ml的终浓度加入嘌罗霉素以开始选择。1-2周内，在至少两次随后的分传后建立了嘌罗霉素-抗性细胞系，将其作为萤光化的储备液保存。

当在对数生长期时通过胰蛋白酶消化收获每个细胞系，在各培养基中稀释至适宜的密度，然后铺板。用μFill(BioTeK)将细胞以50μl/孔分配入白色壁透明底的板(Greiner-为GNF定做的)中。然后将细胞置于供应5％CO2的37℃培养箱中过夜。通过Platemate(Matrix)使用50nL/孔Pintool技术转移化合物。然后将测定板放回培养箱中3天。在化合物转移后的第三天，向测定板中加入

(Perkin Elmer，根据生产商的建议稀释)，在Analyst GT(Molecular Devices)或Envision(Perkin Elmer)上读数。在RLU中产生原始数据。

应当理解的是，本文所述的实施例和实施方案仅用作举例说明目的，基于其的各种修改或改变对本领域技术人员而言已有提示，这些修改或改变包括在本申请的精神和主旨以及所附权利要求书的范围内。将本文中所引用的所有出版物、专利和专利申请引入本文作为参考用于所有目的。