CN102028732A - 一种高效提取杜仲中黄酮的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高效提取杜仲中黄酮的方法，其具体工艺步骤为：首先原料预处理，制成盐杜仲并磨成粉末；其次超声波处理溶液，称取盐杜仲在70％的乙醇中浸泡，并不断震摇，进行超声处理后用定性滤纸过滤，过滤后的残渣再加入70％的乙醇浸泡，并不断震摇，定性滤纸过滤后，合并两次滤液，将滤液倒入旋转蒸发仪的蒸发瓶中，进行常温减压蒸发浓缩，直至滤液形成浸膏，再用无水乙醇溶解浸膏；最后为层析。本发明在超声提取的基础上，应用了极性大孔树脂吸附和洗脱方法，利用总黄酮与其他物质对树脂吸附性的差异，达到初步分离纯化的目的，该方法具有提纯度高、成本低、重复性好、无次生污染等优点。

Description

一种高效提取杜仲中黄酮的方法

技术领域：

本发明涉及一种黄酮提取方法，尤其是涉及一种从杜仲中高效提取黄酮的方法。

背景技术：

杜仲，又名思仙、丝绵，系杜仲科杜仲属多年生落叶乔木，是我国地质史上第三纪冰川运动残留下来的古生物物种，被誉为“植物界的孤儿”，为我国特有的经济林树种。杜仲皮为名贵滋补药材，具有补中益气、坚筋骨、强志、安胎、久服轻身耐老之功效。我国对杜仲的认识和利用至少有2000年的历史。

我国有丰富的杜仲资源，截止2000年底全国杜仲种植面积已达35万公顷，种植范围已从传统的湖南、贵州、四川和湖北等长江中下游各省扩大到山东、北京。天津、河北、辽宁等省市。

我国的杜仲研究主要集中在育种、药材用林营造与栽培、化学成分分析、资源调查、药理及保健功能研究上。目前国内对杜仲资源的利用率不高，生产水平低，科技含量不高，多是低档次低水平重复，缺乏市场竞争力；然而，日本杜仲栽培面积不足100公顷，原料多从我国进口，但其杜仲产品销售额居全球首位。这无疑是对我国杜仲研究实现产业化、工业化道路的一种鞭策与激励。因此对杜仲成分的开发利用具有重要意义。

杜仲的药用成份主要包括绿原酸、木脂素、环烯醚萜甙和黄酮。黄酮类化合物是杜仲的主要有效成分之一，具有多种生物活性，杜仲总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，是中草药用的有效成分。黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环(A-与B-环)通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、乙丙烯基等官能团。杜仲黄酮类化合物含量的高低，是判断相关产品的重要指标。

目前，黄酮类化合物的传统提取方法主要有热水提取法、醇提法、碱性水或碱性稀醇提取法和其他有机溶剂萃取法等。此些方法提取纯度较低、成本高、不利于工业化生产。

发明内容：

本发明为了解决现有技术对杜仲中总黄酮提纯度低、成本高、不利于工业化生产的问题而提供了一种高效提取杜仲总黄酮的方法。

为了解决以上技术问题，本发明的技术方案是：1.一种高效提取杜仲中黄酮的方法，其特征在于：具体工艺步骤如下：

(1).原料预处理

将杜仲干燥树皮切成小块，浸没于3％的NaCl溶液中4小时，弃去盐溶液后，进入烘箱中，120℃烘烤4小时，形成盐杜仲，然后使用研磨机将盐杜仲磨成粉末；

(2).超声波处理溶液

称取盐杜仲粉按照盐杜仲粉和乙醇1∶10的比例，在70％的乙醇中浸泡4小时，并不断震摇，3小时后进行超声处理1小时(5分钟超声，5分钟间歇)，后用定性滤纸过滤，过滤后的残渣再加入200ml 70％的乙醇浸泡4小时，并不断震摇，定性滤纸过滤后，合并两次滤液，将滤液倒入旋转蒸发仪的蒸发瓶中，进行常温减压蒸发浓缩，直至滤液形成浸膏，再用100ml无水乙醇溶解浸膏；

(3).层析

使用直径为5cm，长度为40cm的层析柱，无水乙醇调和AB-8型大孔树脂胶，然后湿法装入层析柱至柱体积的3/4位置，将无水乙醇溶解的浸膏液加入到层析柱上，自然流出液体，使浸膏液吸附于大孔数值上，采用蒸馏水洗柱体至无色，再采用400ml 70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥。

与传统的煎煮法和回流提取法相比，本技术采用的超声波提取法以其简单、快捷、活性成分活率高等优点而著称。它是以超声波辐射强压产生的空化效应和热效应引起机械搅拌、加速扩散溶解的一种新型提取方法。超声波具有特殊的生物效应，选择适当的超声参数可以使植物细胞的细胞壁间形成较多的小孔，从而可以增强细胞膜的透性和选择性，是近年来应用到中草药有效成分提取分离中的一种重要提取手段。本技术在超声提取的基础上，应用了极性大孔树脂吸附和洗脱方法，利用总黄酮与其他物质对树脂吸附性的差异，达到初步分离纯化的目的，该方法具有提纯度高、成本低、重复性好、无次生污染等优点。

具体实施方式：

本发明的具体工艺步骤如下：

1.原料预处理

将杜仲药材(干燥树皮)切成小块，浸没于3％NaCl溶液中4小时，弃去盐溶液后，进入烘箱中，120℃烘烤4小时，形成盐杜仲，然后使用研磨机将盐杜仲磨成粉末。

2.超声波处理溶液

称取盐杜仲粉按照盐杜仲粉和乙醇1∶10的比例，在70％的乙醇中浸泡4小时，并不断震摇，3小时后进行超声处理(KQ-100B型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司生产)1小时(100W功率，5分钟超声，5分钟间歇)，定性滤纸(双圈牌中速定性滤纸，d11cm)过滤后，残渣(过滤后的残渣)再加入200ml 70％的乙醇浸泡4小时，并不断震摇，定性滤纸过滤后，合并两次滤液(直接将两次滤液混合)。将滤液倒入旋转蒸发仪的蒸发瓶中，进行常温减压蒸发浓缩，直至滤液形成浸膏，再用100ml 99％无水乙醇(无水乙醇和浸膏无配比比例，只要将浸膏溶解即可，100ml是过量添加，无水乙醇的多少根据浸膏的多少适量添加，以能溶解浸膏为度)溶解浸膏。

3.层析

使用直径为5cm，长度为40cm的层析柱，无水乙醇调和AB-8型大孔树脂胶，然后湿法(装柱子时有两种方法：即湿法装柱和干法装柱。湿法装柱是先把AB-8大孔吸附树脂用石油醚拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂″走柱子″，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。)装入层析柱至柱体积的3/4位置。将无水乙醇溶解的浸膏液加入到层析柱上，自然流出液体，使浸膏液吸附于大孔数值上。采用蒸馏水洗柱体至无色，再采用400ml 70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥，总黄酮得率高达4.760mg/g。

采用紫外分光光度法对黄酮含量进行检测，用芦丁作标准样，绘制出标准曲线，得出回归方程；测出样品溶液的吸光度值，由对应的吸光度标准曲线查出相应浓度，并计算提取液样品总黄酮含量。

Claims (1)

1.一种高效提取杜仲中黄酮的方法，其特征在于：具体工艺步骤如下：

(1).原料预处理

将杜仲干燥树皮切成小块，浸没于3％的NaCl溶液中4小时，弃去盐溶液后，进入烘箱中，120℃烘烤4小时，形成盐杜仲，然后使用研磨机将盐杜仲磨成粉末；

(2).超声波处理溶液

称取盐杜仲粉按照盐杜仲粉和乙醇1∶10的比例，在70％的乙醇中浸泡4小时，并不断震摇，3小时后进行超声处理1小时(5分钟超声，5分钟间歇)，后用定性滤纸过滤，过滤后的残渣再加入200ml 70％的乙醇浸泡4小时，并不断震摇，定性滤纸过滤后，合并两次滤液，将滤液倒入旋转蒸发仪的蒸发瓶中，进行常温减压蒸发浓缩，直至滤液形成浸膏，再用100ml无水乙醇溶解浸膏；

(3).层析

使用直径为5cm，长度为40cm的层析柱，无水乙醇调和AB-8型大孔树脂胶，然后湿法装入层析柱至柱体积的3/4位置，将无水乙醇溶解的浸膏液加入到层析柱上，自然流出液体，使浸膏液吸附于大孔数值上，采用蒸馏水洗柱体至无色，再采用400ml 70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥。