CN102015700A - 抗菌稠合噻唑 - Google Patents

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Abstract

本发明揭示了一种具有抗菌活性的通式(I)的化合物：
Figure 200880126437.2_AB_0
式中：m是0或1；Q是氢或环丙基；Alk是可包含醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NR)-连接的任选取代的二价C1-C6亚烷基、亚烯基或亚炔基，其中R是氢、-CN或C1-C3烷基；X是-C(＝O)NR6-或-C(＝O)O-，其中R6是氢、任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；Z1是-N＝或-CH＝；Z2是-N＝或-C(R1)＝；R1是氢、甲基、乙基、乙烯基、乙炔基、甲氧基、巯基、巯基甲基、卤素、完全或部分氟化的(C1-C2)烷基、(C1-C2)烷氧基或(C1-C2)烷硫基，硝基或腈(-CN)；R2是基团Q1-[Alk1]q-Q2-，其中q是0或1；Alk1是可包含醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NR)-连接或以这些基团为末端的任选取代的二价直链或支链C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基或C2-C6亚炔基；Q2是具有5或6个环原子的任选取代的二价单环碳环或杂环基或具有9或10个环原子的任选取代的二价双环碳环或杂环基；Q1是氢、任选的取代基、或具有3-7个环原子的任选取代的碳环或杂环基。

Description

抗菌稠合噻唑
本发明涉及可用作抗菌剂的取代的苯并噻唑、噻唑并吡啶和噻唑并哒嗪。
发明背景
II型拓扑异构酶通过将一个DNA区段转运到另一个而催化DNA拓扑异构体的互变。细菌编码两种II型拓扑异构酶，DNA回旋酶和DNA拓扑异构酶IV。回旋酶控制DNA超螺旋和缓解拓扑应力。拓扑异构酶IV断开复制后的子染色体，也能使超螺旋的DNA松弛。细菌II型拓扑异构酶形成由两个亚基组成的异四倍体复合物。回旋酶形成由GyrA和GyrB组成的A2B2复合物，而拓扑异构酶形成由ParC和ParE组成的C2E2复合物。相反，真核II拓扑异构酶是同型二聚体。理想地，基于抑制细菌II型拓扑异构酶的抗生素，选择性地针对细菌酶而对真核II型异构酶相对惰性。II型拓扑异构酶是高度保守的酶，允许设计广谱抑制剂。而且，GyrB和ParE亚基功能上类似，在N末端区域和与其他亚基(分别是GyrA和ParC)和DNA相互作用的C-末端区域具有ATP酶结构域。回旋酶和拓扑异构酶IV活性位点间的保守性提示，这些位点的抑制剂可同时靶向两种II型拓扑异构酶。这种双重靶向抑制剂引人注目，因为它们具有减缓基于靶标的耐受性的潜力。
II型拓扑异构酶是许多抗菌剂的靶点。这些抗菌剂中最引人注目的是喹诺酮。原始喹诺酮类抗生素包括萘啶酸、西诺沙星和奥索利酸。加入氟则产生新一类药物氟喹诺酮，它具有更广泛的抗菌谱和改善的药动学性质。氟喹诺酮包括诺氟沙星、环丙沙星和第四代喹诺酮加替沙星和莫西沙星。香豆素和环噻嗪(cyclothialidine)是另一类抑制II型拓扑异构酶的抗生素，但是因为它们对细菌的渗透性差、具有真核毒性和水溶性低而没能广泛使用。这些抗生素的例子包括新生霉素和香豆霉素A1、环噻嗪、西诺啶(cinodine)和克罗菌素(clerocidin)。但是，抗生素耐受性的不断呈现要求继续开发新型抗生素，需要能够抑制细菌拓扑异构酶的可选化合物。
发明内容的概述
本发明基于以下发现：取代的苯并噻唑、噻唑并吡啶和噻唑并哒嗪类化合物具有抗菌活性，如该类化合物的成员能够抑制细菌生长所证明。该化合物具有对抗革兰氏阳性和/或革兰氏阴性菌株的活性，例如葡萄球菌属、肠球菌属、链球菌属、丙酸杆菌属和莫拉菌属，如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、短效棒状杆菌(Propionibacterium acnes)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)和粘膜炎莫拉菌(Moraxella catarrhalis)。因此，认为本发明化合物可用于治疗细菌感染或污染，例如尤其是治疗革兰氏阳性菌感染、后天获得性肺炎、寻常痤疮、脓疱病和感染性特应性皮炎。
虽然本发明在化合物的作用机制上不受任何具体假设的限制，但目前认为这些活性至少部分地是由于抑制II型细菌拓扑异构酶的化合物。
因此，本发明包括本文所限定的取代的苯并噻唑、噻唑并吡啶和噻唑并哒嗪化合物的抗菌应用以及该类化合物的新成员。
国际专利申请WO 03/105846和WO 2005/012292涉及能抑制细菌回旋酶活性的苯并咪唑和吡啶并咪唑化合物。合成了许多苯并咪唑和一种1H-咪唑并[4，5-b]吡啶，表征并测试了它们的回旋酶和抗菌活性。尽管要求保护3H-咪唑并[4，5-c]吡啶，但是并没有合成该化合物。因此，没有“确凿的证据”证明3H-咪唑并[4，5-c]吡啶具有所断言的回旋酶抑制性和抗菌活性。
共同待审查的申请PCT/GB2007/002314描述了能抑制细菌回旋酶活性的取代的苯并噻唑和噻唑并吡啶化合物。该申请的苯并噻唑和噻唑并吡啶在7-位具有一个取代基，并且证明了这些7位取代的化合物具有抗菌活性。
国际专利申请WO 2001057008涉及苯并噻唑，认为它可用于治疗癌症和血管新生是发病机制的疾病。该文献没有公开或暗示，所述化合物具有抗菌活性，也未描述本文要求的取代的苯并噻唑、噻唑并吡啶和噻唑并哒嗪化合物。
发明详述
根据本发明，提供了用于制备抗菌组合物的通式(I)的化合物或其盐或N-氧化物：
Figure BPA00001195242000031
式中：
m是0或1；
Q是氢或环丙基；
Alk是可包含醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NR)-连接的任选取代的二价C1-C6亚烷基、亚烯基或亚炔基，其中R是氢、-CN或C1-C3烷基；
X是-C(＝O)NR6-或-C(＝O)O-，其中R6是氢、任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；
Z1是-N＝或-CH＝；
Z2是-N＝或-C(R1)＝；
R1是氢、甲基、乙基、乙烯基、乙炔基、甲氧基、巯基、巯基甲基、卤素(包括氟、溴和氯)、完全或部分氟化的(C1-C2)烷基、(C1-C2)烷氧基或(C1-C2)烷硫基，例如三氟甲基、三氟甲氧基和三氟甲硫基、硝基或腈(-CN)；
R2是基团Q1-[Alk1]q-Q2-，其中
q是0或1；
Alk1是可包含醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NR)-连接或以这些基团为末端的任选取代的二价直链或支链C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基或C2-C6亚炔基；
Q2是具有5或6个环原子的任选取代的二价单环碳环或杂环基或具有9或10个环原子的任选取代的二价双环碳环或杂环基；
Q1是氢、任选的取代基、或具有3-7个环原子的任选取代的碳环或杂环基。
在其他广泛的方面，本发明包括：
(i)如上所定义的化合物(I)在制备抗菌组合物中的应用；
(ii)治疗对象细菌感染，或预防对象细菌感染的方法，该方法包括给予对象足够量的上述化合物(I)以抑制细菌生长；
(iii)治疗或预防基材细菌污染的方法，该方法包括对污染或潜在污染部位施加足够量的上述化合物(I)以抑制细菌生长；
(iv)上述化合物(I)在人体治疗方法中的应用；
(v)上述化合物(I)在治疗或预防细菌感染中的应用。
术语
本文所用术语“(Ca-Cb)烷基”(其中，a和b是整数)表示具有a-b个碳原子的直链或支链烷基。因此，例如当a为1，b为6时，该术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。
本文所用术语″二价(Ca-Cb)亚烷基″(其中，a和b是整数)表示具有a-b个碳原子和两个不饱和化合价的饱和烃链。该术语包括例如，亚甲基、亚乙基、正亚丙基和正亚丁基。
本文所用术语“(Ca-Cb)烯基”(其中，a和b是整数)表示具有至少一个E或Z立体化学双键(适当时)的具有a-b个碳原子的直链或支链烯基部分。该术语包括例如，乙烯基、烯丙基、1-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。
本文所用术语″二价(Ca-Cb)亚烯基″表示具有a-b个碳原子、至少一个双键和两个不饱和化合价的烃链。该术语包括例如、-CH＝CH-(亚乙烯基)、-CH＝CH-CH2-、-CH2-CH＝CH-、-CH＝CH-CH2-CH2-、-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-、-CH＝CH-CH＝CH-、-CH＝CH-CH＝CH-CH2-、-CH＝CH-CH＝CH-CH2-CH2-、-CH＝CH-CH2-CH＝CH-和-CH＝CH-CH2-CH2-CH＝CH-。
本文所用术语″Ca-Cb炔基″(其中，a和b是整数)表示具有a-b个碳原子和至少一个三键的直链或支链烃基。该术语包括例如、乙炔基、1-丙炔基、1-和2-丁炔基、2-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔基。
本文所用术语″二价(Ca-Cb)亚炔基″(其中，a和b是整数)表示具有a-b个碳原子和至少一个三键的二价烃链。该术语包括例如，-C≡C-、-C≡C-CH2-和-CH2-C≡CH-。
本文所用术语″碳环″表示所有环原子都是碳的最多具有16个环原子的单环、双环或三环基团，包括芳基和环烷基。
本文所用术语″环烷基″表示具有3-8个碳原子的单环饱和碳环基团，包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基和双环[2.2.1]庚-1-基。
本文所用术语″芳基″表示单环、双环或三环碳环芳香族基团，包括具有通过共价键直接连接的两个单环碳环芳香环的基团。该基团的例子是苯基、联苯基和萘基。
本文所用术语″杂芳基″表示含有一个或多个选自S、N和O的杂原子的单环、双环或三环芳香族基团，包括具有两个这样的单环，或具有一个这样的单环和一个单环芳环的基团，它们通过共价键直接连接。该基团的例子是噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噻唑基、苯并异噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、异噁唑基、苯并异噁唑基、异噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基。
本文所用术语″杂环基″或″杂环″包括上述定义的″杂芳基″，对于其非芳香性含义则表示含有一个或多个选自S、N和O的杂原子的单环、双环或三环非芳香性基团，表示共价连接于另一个包含一个或多个这种杂原子的单环非芳香性基团或单环碳环基团的包含一个或多个这种杂原子的单环非芳香性基团构成的基团。该基团的例子是吖丁啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、吗啉基、哌嗪基、吲哚基、吗啉基、苯并呋喃基、吡喃基、异噁唑基、苯并咪唑基、亚甲基二氧苯基、亚乙基二氧苯基、马来酰亚胺和琥珀酰亚胺基团。
除非另有说明，本文任意部分中使用的术语“取代的”表示最多被四个相容的取代基取代，各个取代基独立地是例如(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C1-C6)烷氧基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基、巯基、巯基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷硫基、卤素(包括氟、溴和氯)、完全或部分氟化的(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基或(C1-C3)烷硫基如三氟甲基、三氟甲氧基和三氟甲硫基、硝基、腈(-CN)、氧代(＝O)、苯基、苯基(C1-C3)烷基-、苯氧基、单环杂芳基、杂芳基(C1-C3)烷基-、或5-6个环原子的杂芳氧基、3-6个环碳原子的环烷基、-COORA、-CORA、-OCORA、-SO2RA、-CONRARB、-CONHNH2、-SO2NRARB、-NRARB、-NHNH2、-OCONRARB、-NRBCORA、-NRBCOORA、-NRBSO2ORA或-NRACONRARB，其中RA和RB独立地是氢或(C1-C6)烷基、羟基(C1-C6)烷基、或(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，或者当RA和RB与同一氮原子相连的情况下，RA和RB与该氮原子一起形成环状氨基环如吗啉基、哌啶基、哌嗪基或4-(C1-C6)烷基-哌嗪基如4-甲基-哌嗪基。如果取代基是苯基、苯基(C1-C3)烷基-、苯氧基或单环杂芳基、杂芳基(C1-C3)烷基-、或5或6个环原子的杂芳氧基，则苯基或杂芳环本身可被除苯基、苯基(C1-C3)烷基-、苯氧基、杂芳基、杂芳基(C1-C3)烷基-或杂芳氧基以外的任意上述取代基所取代。“任选的取代基”或“取代基”可以是上文指出的基团之一。
本文所用术语“盐”包括碱加成盐、酸加成盐和季铵盐。酸性的本发明化合物可与碱形成盐，包括药学上可接受的盐，所述碱包括：碱金属氢氧化物，例如氢氧化钠和氢氧化钾；碱土金属氢氧化物，例如钙、钡、镁的氢氧化物；有机碱如N-甲基-D-葡萄糖胺、胆碱三(羟甲基)氨基-甲烷、L-精氨酸、L-赖氨酸、N-乙基哌啶、二苄胺等。碱性化合物(I)可与酸形成盐，包括药学上可接受的盐，所述酸包括：无机酸如氢卤酸，如盐酸或氢溴酸、硫酸、硝酸或磷酸等，有机酸如醋酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苹果酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯甲酸、苯磺酸、谷氨酸、乳酸和扁桃酸等。对合适的盐的综述参见Stahl和Wermuth的《药学盐手册：性质、选择和使用》(Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties， Selection，and Use)(Wiley-VCH，Weinheim，德国，2002)。
本发明的化合物可以晶体形式制备，并且可以为水合物和溶剂合物的形式。术语‘溶剂合物’用于描述包含本发明化合物以及化学计量的一种或多种药学上可接受的溶剂分子(例如乙醇)的分子复合物。当所述溶剂是水时采用术语“水合物”。对于本发明的化合物，应理解为包括其水合物和溶剂合物。
因为存在不对称碳原子或旋转限制，可以一种或多种立体异构体形式存在的本发明化合物可以作为在各手性中心具有R或S立体化学的多个立体异构体存在，或者作为在各手性轴具有R或S立体化学的阻转异构体存在。本发明包括所有这些对映异构体和非对映异构体以及它们的混合物。
一些通式(I)的化合物可作为前药进行给药，前药被认为是通式(I)的化合物的衍生物，它本身几乎或完全不具有药理学活性，但是在给予个体内或个体上时会由于水解分裂等作用转化为具有所需活性的通式(I)的化合物。前药应用的其它信息可参见“作为新型递送系统的前药(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)”，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi和W.Stella)以及“药物设计中的生物可逆载体(Bioreversible Carriers in Drug Design)，Pergamon Press，1987(编辑E.B.Roche，美国医药协会(American Pharmaceutical Association))。
前药可以例如通过将通式(I)的化合物中存在的一些合适官能团替换为本领域技术人员已知的作为“前药部分”的某些部分来生产，所述前药部分如H.Bundgaard在前药设计(Design of Prodrugs)(Elsevier，1985)中所述的。
通式(I)的化合物的代谢物，即给药后在体内形成的化合物也具有抗菌活性。一些代谢物的例子包括：
(i)当通式(I)的化合物含有甲基时，该化合物的羟甲基衍生物(-CH3-＞-CH2OH)；
(ii)当通式(I)的化合物含有烷氧基时，该化合物的羟基衍生物(-OR-＞-OH)；
(iii)当通式(I)的化合物含有叔氨基时，该化合物的仲氨基衍生物(-NR1R2-＞-NHR1或-NHR2)；
(iv)当通式(I)的化合物含有仲氨基时，该化合物的伯氨基衍生物(-NHR1-＞-NH2)；
(v)当通式(I)的化合物含有苯基部分时，该化合物的苯酚衍生物(-Ph-＞-PhOH)；和
(vi)当通式(I)的化合物含有酰氨基时，该化合物的羧酸衍生物(-CONH2-＞COOH)。
结构特征
本发明的化合物可以具有例如任意相容组合形式的以下特征：
Z1是-N＝或-CH＝，Z2是-N＝或-C(R1)＝，其中R1是氢、甲基、乙基、乙烯基、乙炔基、甲氧基、巯基、巯基甲基、卤素(包括氟、溴和氯)、全部或部分氟化的(C1-C2)烷基、(C1-C2)烷氧基或(C1-C2)烷硫基，例如三氟甲基、三氟甲氧基和三氟甲硫基、硝基或腈(-CN))。因此，Z2的一个例子是-CF＝。在一类化合物中，Z1和Z2都是-CH＝。但是，目前较佳的是Z1为-CH＝，Z2为-CF＝，这样化合物(I)是取代的苯并噻唑。
X可以是例如，-C(O)O-或-C(O)NH-。在该子集中，m可为0，Q可以是例如，氢、环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在该子集中，m也可为1，Q是氢，Alk例如是-CH2-、-(CH2)2-或-(CH2)3-。目前，如果m为1，则优选X是-C(O)NH-，Alk是-(CH2)2-，Q是氢。
R2是基团Q1-[Alk1]q-Q2-。
当存在Alk1时，Alk1是可包含醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NR)-连接或以这些基团为末端的任选取代的二价直链或支链C1-C6亚烷基或C2-C6亚烯基或C2-C6亚炔基。这类基团的例子包括-CH2-、-CH(OH)-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C≡C-、-CH2CH＝CH-、-CH2C≡C-、-CH2NH-、-C(＝O)NH-、-CH2OCH2-、-CH2CH2C(＝O)NH-。
Q2是具有5或6个环原子的任选取代的二价单环碳环或杂环基或者具有9或10个环原子的任选取代的二价双环碳环或杂环基。这些基团的例子包括那些具有任选取代的噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噻唑基、苯并异噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、异噁唑基、苯并异噁唑基、异噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基、吲唑基、吖丁啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、哌啶基、哌嗪基、吲哚基、吗啉基、苯并呋喃基、吡喃基、异噁唑基、苯并咪唑基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基和萘基环的基团。
Q1是氢、任选的取代基，或具有3-7个环原子的任选取代的碳环或杂环基。任选的取代基包括在上文术语“任选的取代基”中详细讨论的那些基团。具有3-7个环原子的碳环或杂环包括前一段列出的那些单环以及环戊基和高哌嗪基环。
在基团R2中，Q2可以是具有5或6个环原子的任选取代的二价含氮杂环基，如任选取代的二价吡啶酮基、吡啶基、吡唑基、嘧啶基、噻唑基或吡咯基，或者Q2如果存在，可以是具有9或10个环原子的二价含氮双环碳环或杂环基，如喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基或5-氮杂吲哚基。目前优选，Q2环包括任选取代的吡啶、嘧啶、吡嗪、吡喃-2酮、嘧啶-4-酮或吡啶-2-酮环，如任选取代的吡啶-3-基环、任选取代的嘧啶-5-基环、任选取代的吡嗪-2-基环、任选取代的吡喃-2-酮-4-基环或任选取代的吡啶-2-酮-4-基环。目前优选Q2中任选的取代基包括CH3-、CH3O-、-CN和-NH2。
在基团R2中，q是0或1。如果q是1，则Alk1存在，可以是例如，任选取代的二价C1-C3亚烷基，可任选地包含-NH-连接，或任选地以-NH-连接为末端与Q2相连。在具体的情况下，Alk1是与Q2连接的以-NH-连接为末端的二价C2-C3亚烷基，在与-NH-连接相邻的碳原子上被氧代取代，因而Alk1具有通式-(CH2)0-2C(＝O)NH-。在其他情况下，Alk1具有通式-(CH2)1-2NHC(＝O)-，(C＝O)与Q2相连。
在基团R2中，Q1可以是例如，氢、或上文详细描述的任选取代基。在一些实施方式中，Q1是通式-NRARB的基团，其中RA和RB独立地是氢或(C1-C6)烷基、羟基(C1-C6)烷基或(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，或RA和RB与氮原子一起形成环状氨基环，例如哌啶、吗啉、硫代吗啉、氮杂环丁烷、吡咯烷或哌嗪环，后者任选地被例如C1-C3烷基、羟基-C1-C3烷基或C1-C3烷氧基-C1-C3烷基N-取代。
在基团R2中，Q2可以是例如任选取代的杂环，例如吡啶基、嘧啶基或吡嗪基。在一些实施方式中，q可以是0，Q1可以是例如任选取代的杂环，例如噁二唑基、四唑基、哌啶基或吡咯烷基。在后两种情况中，目前优选是Q1中任选取代基为-COOH。
在基团R2中，Q2可以是任选取代的杂环，例如嘧啶-4-酮或吡啶-2-酮，q可以是1，Q1可以是具有3-7个环原子的任选取代的杂环基，例如任选取代的吡啶基。在本发明的化合物的亚组中，Alk1可以是例如-CH2-。
本发明的实施例提供R2中可存在的Q1和Q2基的具体例子。
R2基团的例子包括以下所列：
Figure BPA00001195242000101
本发明的具体化合物包括文中实施例给出的化合物以及它们的盐和N-氧化物。
应用与组合物
如上所述，本发明所涉及的化合物是抗菌活性剂，因而可用作局部抗菌消毒剂，或者用于治疗人和除人以外其他动物(例如其他哺乳动物，鸟和鱼)的微生物感染。因为本发明化合物的II型拓扑异构酶靶点是普遍细菌酶，所以本发明化合物能够抑制各种革兰氏阳性和/或革兰氏阴性菌菌种的生长，例如葡萄球菌属、肠球菌属、链球菌属、丙酸杆菌属、嗜血杆菌属和莫拉菌属，如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎链球菌、酿脓链球菌、短效棒状杆菌、流感嗜血杆菌和粘膜炎莫拉菌。因此，本发明涉及的化合物可用于治疗细菌感染或污染，例如尤其是治疗革兰氏阳性菌感染、后天获得性肺炎、寻常痤疮、脓疱病和感染性特应性皮炎。
应理解，任何特定患者的具体剂量水平将取决于许多因素，包括所采用的特定化合物的活性、患者年龄、体重、健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物组合以及进行治疗的具体疾病的严重性。最佳剂量水平和给药频率将通过本领域所要求的临床试验来进行确定。
可制备本发明的化合物用于通过与其药动学性质相一致的任何途径给药。口服给药的组合物可以是片剂、胶囊、粉末剂、颗粒剂、锭剂、液体或凝胶制剂的形式，例如口服、局部、无菌胃肠外溶液剂或混悬剂。口服给药的片剂和胶囊可以是单位剂量呈现形式，可包含常规赋形剂如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄芪胶或聚乙烯基-吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米-淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，例如马铃薯淀粉，或可接受的湿润剂如十二烷基硫酸钠。片剂可根据一般药学实践所公知的方法进行包衣。口服液体制剂可以是例如水性或油性混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂的形式，或者是干燥制品的形式，临用前用水或其他合适的运载体进行重建。这些液体制剂可包含常规添加剂如悬浮剂，例如山梨糖醇、糖浆、甲基纤维素、葡萄糖糖浆、明胶氢化食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水运载体(可包含食用油)，例如杏仁油、分馏的椰子油、油酯如甘油、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对-羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸，需要时还包括常规芳香剂或着色剂。
皮肤局部应用时，药物可制成乳膏、洗剂或软膏。适合药用的乳膏或软膏制剂是本领域公知的常规制剂，例如药学标准参考书(如英国药典)中所述。
眼睛局部应用时，药物可在合适的无菌水性或非水性运载体中制成溶液剂或混悬剂。也可包含添加剂，例如缓冲液如偏亚硫酸氢钠或依地酸二钠；防腐剂，包括杀菌剂和杀真菌剂如苯基醋酸汞或硝酸汞、苯扎氯铵或氯己定，以及增稠剂如羟丙甲纤维素。
活性剂可使用合适的装置吸入，例如干粉吸入器、喷雾器、计量剂量吸入器或液体喷雾系统。
活性成分也可在无菌介质中胃肠外给予。根据所用运载体和浓度，药物可悬浮或溶解在运载体中。有益地，可将辅助试剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂溶解在运载体中。
合成与示例性化合物
存在许多用于合成本发明化合物(I)的合成方案，但所有方案都依赖于合成有机化学家已知的已知化学反应。因此，通式(I)的化合物可根据标准文献中描述的方法来合成，这些方法是本领域技术人员众所周知的。典型的文献来源是《高等有机化学》(“Advanced Organic Chemistry”)，第4版(Wiley)，J March，《有机转化反应综述》(“Comprehensive Organic Transformation”，第2版(Wiley)，R.C.Larock，《杂环化学手册》(“Handbook of Heterocyclic Chemistry”)，第2版(Pergamon)，A.R.Katritzky)，综述文献参见“Synthesis”，“Acc.Chem.Res.”，“Chem.Rev”，或标准文献在线搜索鉴定的一次文献来源或二次来源如“Chemical Abstracts”或“Beilstein”。
用于制备化合物(I)的合成路径和方案的例子如本文实施例中所述。
现在将参考以下实施例来阐述本发明：
缩写
DMSO    -二甲亚砜
HPLC    -高效液相色谱
MS      -质谱
NMR            -核磁共振
Rt             -保留时间
THF            -四氢呋喃
TLC            -薄层色谱
HOBT           -N-羟基苯并三唑
Boc            -叔丁氧基羰基
EDC.HCl        -1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐
Pd2(dba)3      -三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
DIPEA          -N，N-二异丙基乙基胺
PdCl2(dppf)    -二氯二(三苯基膦)-钯(II)
NMP            -N-甲基吡咯烷酮
DMF            -N，N-二甲基甲酰胺
TBAB           -溴化四正丁铵
EtOAc          -乙酸乙酯
DCM            -二氯甲烷
方案-1：
Figure BPA00001195242000131
直到中间体D[(5-溴-吡啶-2-基)-乙酸]的合成参见：Tetrahedron，53，24，1997，8257-8268。
合成中间体E：[2-(5-溴-吡啶-2基)-N-甲基-乙酰胺]
向5-溴-吡啶-2基-乙酸(0.87g，4.0mmol)的THF(12mL)悬浮液中加入HOBt(0.74g，4.8mmol)和EDCI.HCl(0.85g，4.4mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌15-20分钟，然后滴加甲胺(2.0M，在THF中，4.05mL，8.0mmol)。然后将所得混合物在室温下继续搅拌6-7小时。反应完成后，加水，用乙酸乙酯萃取。粗制残余物使用二氯甲烷∶甲醇(97.5∶2.5)在二氧化硅(60-120M)上纯化，得到浅黄色固体化合物(0.25g，27％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ2.58(d，J＝4.8Hz，3H)，3.57(s，2H)，7.33(d，J＝1H)，7.96(d，J＝2.4Hz & 8.4Hz，1H)，8.00(br s，1H)和8.58(d，J＝2.4Hz，1H)。MS：229.11(M+H+)。
合成中间体F：N-甲基-2-[5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷(dioxaborolan)-2-基)-吡啶-2基]-乙酰胺
通过用氮气鼓泡15-20分钟使2-(5-溴-吡啶-2基)-N-甲基-乙酰胺](0.5g，0.22mmol)的1，4-二噁烷溶液脱气，然后依次加入Pd2(dba)3(0.01g，0.01mmol)，联硼酸频哪醇酯(bis pinacolato diboron)(0.06g，0.24mmol)，三环己基膦(0.007g 0.03mmol)和乙酸钾(0.03g，0.033mmol)。然后将反应混合物再脱气15-20分钟，然后加热到80℃过夜。在反应完成后(TLC监控)，反应混合物冷却，用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土床(celite bed)过滤。滤液用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，并用己烷洗涤。粗制油状化合物(60mg)不进行纯化而直接用于之后的步骤。MS：277.26(M+H+)。
方案-2：
Figure BPA00001195242000141
制备中间体H：(4-溴-1-甲基-1H-吡啶-2-酮)：
向4-溴-2-羟基吡啶(0.10g，0.57mmol)的THF(5.0mL)溶液中分批加入NaH(60％的矿物油分散体，0.02g，0.86mmol)。将所得溶液在室温下搅拌5分钟，然后加入甲基碘(0.11mL，1.72mmol)。然后，将反应混合物在室温下搅拌过夜。在反应完成后，蒸馏除去THF，加水，用乙酸乙酯(3x25mL)萃取。合并的有机相用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到所需产物(0.10g，92％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ3.43(s，3H)，6.45(dd，J＝2.40和7.20Hz，1H)，6.69(d，J＝2.40Hz，1H)和7.68(d，J＝7.20Hz，1H)。MS：188.05(M+H+)。
方案-3：
制备1-苯甲酰基-3-(2，5-二溴-苯基)-硫脲(步骤-1)：(II)
在室温下向2，5-二溴-苯胺I(2.44g，9.72mmol)的丙酮(60mL)溶液中加入苯甲酰基异硫氰酸酯(1.74g，26.0mL，10.6mmol)。15分钟后，沉淀出固体。将反应混合物在室温下继续搅拌30分钟。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去丙酮，粗制固体用己烷(100mL)过滤，再用己烷(100mL)洗涤，得到浅黄色固体状的所需化合物(3.9g，97％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.47(dd，J＝6.4，6.0Hz，1H)，7.53(m，2H)，7.66(s，1H)，7.70(m，1H)，7.99(m，1H)，8.01(s，1H)，8.17(d，J＝2.4Hz，1H)，11.91(br s，1H)和12.63(brs，1H)。
制备2，5-二溴-苯基-硫脲(步骤-2)：(III)
在室温下向1-苯甲酰基-3-(2，5-二溴-苯基)-硫脲II(3.90g，11.8mmol)的THF(80mL)溶液中加入NaOH溶液(1.13g，在20mL H2O中)。然后，将反应混合物加热到60-65℃过夜。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去THF，然后加水，用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。有机层合并，用无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干燥。粗制残余物用己烷和乙醚的混合物(95∶5)洗涤，在高真空下干燥，得到浅黄色固体状的所需产物(2.5g，86％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.35(dd，J＝8.80和2.80Hz，1H)，7.48(br s，1H)，7.60(d，J＝8.40Hz，1H)，7.87(d，J＝2.40Hz，1H)，8.0(br s，1H)和9.33(br s，1H)。MS：308.98(M+H+)。
制备5-(溴-苯并噻唑-2-基)-胺(步骤-3)：(IV)
在室温下向2，5-二溴-苯基)-硫脲III(2.0g，6.5mmol)的N-甲基吡咯烷酮(10mL)溶液中加入NaH(60％的矿物油分散体，0.24g，9.70mmol)。将反应混合物加热到160℃并保持1小时。在反应完成后(TLC监控)，使反应混合物回到室温。向反应混合物中加水(100mL)，用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干燥。粗制的残余物用己烷和乙酸乙酯(80∶20)在硅胶(100-200M)上纯化，得到白色固体状的所需产物(0.23g，16％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.15(dd，J＝2.0和8.40Hz，1H)，7.47(d，J＝2.0Hz，1H)，7.62(d，J＝8.40Hz，1H)和7.68(br s，2H).MS：229.01(M+H+)。
制备1-(5-溴-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(步骤-4)：(V)
向5-溴-苯并噻唑-2-基胺IV(0.23g，1.0mmol)的1，4-二噁烷(10mL)悬浮液中加入异氰酸乙酯(0.36g，0.38mL，5.02mmol)。将该反应混合物加热到78-80℃过夜。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去1，4-二噁烷，与己烷共蒸发。用水处理所得固体至60-70℃，保持3-5小时。过滤出所得固体，再用热水洗涤，在高真空下干燥，得到灰白色固体状的所需产物(0.15g，50％)。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，3.18(m，2H)，6.70(br s，1H)，7.36(dd，J＝1.60和8.0Hz，1H)，7.79(d，J＝1.60Hz，1H)，7.84(d，J＝8.40Hz，1H)和10.85(br s，1H)。MS：300.07(M+H+)。
制备1-乙基-3-(5-吡啶-3-基-苯并噻唑-2-基)-脲：(VI-a)实施例1
在室温下，在氮气气氛下向1-(5-溴-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.20g，0.67mmol)的N，N-二甲基甲酰胺∶H2O(4∶1，5.0mL)溶液中加入吡啶-3-硼酸(boronic acid)(0.16g，1.30mmol)和磷酸三钾(0.28g，1.30mmol)。通过用氮气鼓泡15-20分钟使反应混合物脱气，然后加入PdCl2(PPh3)2(0.05g，0.07mmol)。然后，将反应混合物再脱气15-20分钟，然后加热到90℃并保持30分钟。在反应完成后(TLC监控)，反应混合物冷却，加水，用乙酸乙酯萃取，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发至干燥。用醚洗涤粗制残余物，得到浅黄色固体状的所需产物(0.13g，65％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.09(t，J＝7.2Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.74(br s，1H)，7.48-7.51(m，1H)，7.56(dd，J＝2.0和8.40Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.99(d，J＝8.0Hz，1H)，8.13(dd，J＝2.0和8.0Hz，1H)，8.56(m，1H)，8.94(d，J＝2.0Hz，1H)和10.78(br s，1H)。MS：299.23(M+H)。HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，1.7μm，253.0nm)：98.15％(保留时间＝4.93分钟)。
制备2-{5-[2-(3-乙基-脲基)-苯并噻唑-5-基]-吡啶-2基}-N-甲基-乙酰胺：(VI-b)
实施例2
在室温下，在氮气气氛下向1-(5-溴-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.03g，0.10mmol)的N，N-二甲基甲酰胺∶H2O(3∶0.5，3.5mL)溶液中加入N-甲基-2-[5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-吡啶-2基]-乙酰胺F(0.09g，0.30mmol)和磷酸三钾(0.03g，0.12mmol)。通过用氮气鼓泡15-20分钟使反应混合物脱气，然后加入PdCl2(PPh3)2(0.007g，0.01mmol)。然后，将反应混合物再脱气15-20分钟，然后加热到110℃并保持6小时。在反应完成后(TLC监控)，反应混合物冷却，加水，用乙酸乙酯萃取，用Na2SO4干燥，过滤，在高真空下蒸发至干燥。粗制残余物用二氯甲烷∶甲醇[88∶12]在硅胶(230-400M)上纯化，得到所需化合物(0.007g，20％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，2.60(d，J＝4.8Hz，3H)，3.18(m，2H)，3.63(s，2H)，7.09(br s，1H)，7.23(s，1H)，7.42(d，J＝8.0Hz，1H)，7.52(dd，J＝1.6 &，8.0Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.92(s，1H)，8.05(s，1H)，8.82(d，J＝2.4Hz，1H)和10.75(br s，1H)。MS：370.25(M+H+)。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，1.7μm，254.0nm)：85.81％(保留时间＝4.47分钟)。
制备1-乙基-3-[5-(1-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-4-基)-苯并噻唑-2-基]-脲：(VI-c)
实施例3
在室温下，在氮气气氛下向1-(5-溴-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.13g，0.43mmol)的DMSO(4mL)溶液中加入二新戊基甘醇酸合二硼(bis neopentyl glycolatodiboron)(0.20g，0.86mmol)和乙酸钾(0.13g，1.30mmol)。通过用氮气鼓泡15-20分钟使反应混合物脱气，然后加入PdCl2(dppf)(0.035g，0.043mmol)。将反应混合物再脱气15-20分钟。将所得溶液加热到80℃并保持3小时。冷却反应混合物，然后依次加入4-溴-1-甲基-1H-吡啶-2-酮H(0.13g，0.65mmol)，Cs2CO3水溶液(0.22g，在0.2mL H2O中，0.65mmol)和Pd(PPh3)4(0.05g，0.043mmol)。将所得混合物脱气15分钟，加热到100℃，再保持18小时。在反应完成后(TLC监控)，冷却反应混合物，用乙酸乙酯稀释，用水(2x20mL)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，在高真空下蒸发至干燥。粗制残余物(0.10g)通过制备型HPLC纯化，得到所需产物(0.01g，7％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.18(q，J＝6.8Hz，2H)，3.45(s，3H)，6.65(dd，J＝7.20Hz & 2.0Hz，1H)，6.72(s，1H)，6.79(br s，1H)，7.54(dd，J＝8.0Hz & 2.0Hz，1H)，7.77(d，J＝7.2Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.96(m，1H)，10.37(br s，1H)。MS：329.29(M+H+)。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，1.7μm，264.0nm)：91.08％(保留时间＝4.45分钟)。
方案-4：
Figure BPA00001195242000191
1-苯甲酰基-3-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-硫脲(步骤-1)：II
向5-溴-2，4-二氟苯胺(1.0g，4.81mmol)的丙酮(25.0mL)溶液中滴加苯甲酰基异硫氰酸酯(0.71mL，5.29mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌30分钟。在反应完成后(TLC监控)，蒸发溶剂，用己烷和醚洗涤残余物，得到白色固体状的标题化合物(1.70g，定量产量)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.02-7.06(m，1H)，7.56(t，J＝8.0Hz，2H)，7.68(t，J＝7.60Hz，1H)，7.91(d，J＝7.60Hz，2H)，8.67(t，J＝7.60Hz，1H)，9.15(br s，1H)和12.65(br s，1H)。
(5-溴-2，4-二氟-苯基)-硫脲(步骤-2)：III
向1-苯甲酰基-3-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-硫脲(1.70g，4.60mmol)的THF(35.0mL)溶液中加入NaOH(0.97g，24.25mmol)的水(13.0mL)溶液。将所得反应混合物在70℃搅拌15小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸发THF，加水，用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，浓缩，得到所需化合物(1.0g，83％)。MS：267.03(M+H)+。
5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基胺(步骤-3)：IV
向(5-溴-2，4-二氟-苯基)-硫脲(0.75g，2.80mmol)的NMP(5.0mL)溶液中分批加入NaH(0.17g，4.21mmol，60％的油分散液)。将反应混合物在130℃加热2小时。然后，将反应混合物倒在碎冰上，用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相蒸发，得到粗制残余物，该粗产物在硅胶上纯化(100-200M，12％EtOAc-己烷)，得到所需化合物(0.36g，52％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.57(d，J＝6.40Hz，1H)，7.66(br s，2H)和7.79(d，8.80Hz，1H)。
1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(步骤-4)：V
向5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基胺(0.36g，1.45mmol)的1，4-二噁烷(25.0mL)溶液中加入异氰酸乙酯(0.69mL，8.74mmol)，将所得反应混合物在80℃加热15小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸发溶剂。将得到的残余物与水一起在60℃搅拌5小时。然后，过滤溶液，用醚洗涤，得到标题化合物(0.30g，69％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝6.80Hz，3H)，3.17(m，2H)，6.69(brs，1H)，7.92(d，J＝6.40Hz，1H)，8.0(d，J＝8.40Hz，1H)和10.86(br s，1H)。
1-乙基-3-(6-氟-5-吡啶-3-基-苯并噻唑-2-基)-脲(步骤-5)：实施例4
在室温下，在氮气气氛下向1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.30g，0.94mmol)的DMF∶H2O(10∶1，11mL)溶液中加入吡啶-3-硼酸(0.23g，1.88mmol)和K3PO4(0.24g，1.13mmol)。然后将反应混合物脱气半小时，随后加入与CH2Cl2络合的[1，1′-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(0.13g，0.16mmol)。然后，将反应混合物再脱气半小时，在氮气气氛下在120℃加热1小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去DMF，向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，在减压下蒸发至干燥。粗制残余物使用EtOAc-己烷(55∶45)在硅胶(100-200M)上纯化，得到米色固体状标题化合物(0.21g，70％)。熔点：199.10℃。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝6.80Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.71(br s，1H)，7.50-7.53(m，1H)，7.78(d，J＝6.80Hz，1H)，7.97(d，J＝10.40Hz，1H)，8.01(dd，J分别＝1.60 & 8.0Hz，1H)，8.61(dd，J分别＝1.20 & 4.80Hz，1H)，8.79(s，1H)和10.81(br s，1H)。MS：317.21(M+H)+._定性HPLC纯度_(Xbridge C18，250x4.6mm，255nm)：98.15(保留时间＝13.49分钟)。
方案-5：(a)异氰酸乙酯，1，4-二噁烷；(b)联硼酸频哪醇酯(Bispinacolatodiboron)，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(c)相应的卤化物，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
制备1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(II)：
向2-氨基-5-溴苯并噻唑(0.23g，1.0mmol)的1，4-二噁烷(8.0mL)溶液中加入异氰酸乙酯(3.96mL，5.0mmol)，将所得溶液加热到80℃，并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去1，4-二噁烷，然后与正己烷共蒸馏(2次)。然后将残余物与水一起在90℃搅拌2小时，随后过滤，得到所需产物，该产物进一步用热水洗涤，然后干燥。最后，用醚洗涤残余物，得到所需产物(0.18g，60％)。
制备1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(III)：
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲II(0.20g，0.69mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.19g，0.80mmol)和KOAc(0.082g，1.03mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向反应混合物中加入三环己基膦(0.023g，0.08mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.03g，0.03mmol)，该反应混合物再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80-85℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，浓缩滤液，得到粗制残余物，该粗产物无需进一步纯化而直接用于之后的步骤。MS：348.10(M+H)+。
制备1-(5-([1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶-6-基)苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(IV-A)：实施例5
通过用氮气吹扫15分钟使6-溴-[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶(0.080g，0.40mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲III(0.21g，0.60mmol)和K3PO4(0.13g，0.60mmol)的DMF-H2O(7.0mL，2∶1)溶液脱气。然后，向反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.04g，0.05mmol)，用氮气使该混合物再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(230-400M，3.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.003g，2％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，6.72(br s，1H)，7.55(dd，J＝1.60和8.40Hz，1H)，7.80-7.96(m，3H)，8.02(d，J＝8.0Hz，1H)，8.97(s，1H)，9.25(s，1H)和10.82(br s，1H)。MS：339.24(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，255nm)：99.03％(保留时间＝4.63分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-B)：实施例6
通过用氮气吹扫15分钟使6-溴咪唑并[1，2-A]吡啶(0.062g，0.32mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲III(0.10g，0.29mmol)和K3PO4(0.07g，0.34mmol)的DMF-H2O(6.0mL，2∶1)溶液脱气。然后向反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.01g，0.014mmol)，接着再用氮气脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到100℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.014g，14％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，6.78(br s，1H)，7.54-7.65(m，4H)，7.93-7.99(m，3H)，8.99(s，1H)和10.82(brs，1H)。MS：338.24(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，257nm)：94.35％(保留时间＝4.78分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(四唑并[1，5-a]吡啶-6-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-C)：实施例7
通过用氮气吹扫15分钟使6-溴四唑并[1，5-A]吡啶(0.05g，0.24mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲III(0.08g，0.22mmol)和K3PO4(0.054g，0.25mmol)的DMF-H2O(6.0mL，2∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.007g，0.009mmol)，随后再用氮气脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.003g，4％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.75(br s，1H)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H)，8.06(d，J＝8.40Hz，1H)，8.12(s，1H)，8.29(m，2H)，9.75(s，1H)和10.82(br s，1H)。MS：338.03(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，254nm)：98.57％(保留时间＝4.95分钟)。
制备1-(5-(3，4-二氢-2H-吡啶并[3，2-b][1，4]噁嗪-7-基)苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(IV-D)：实施例8
通过用氮气吹扫15分钟使6-溴四唑并[1，5-A]吡啶7-溴-3，4-二氢-2H-吡啶并[3，2-B][1，4]噁嗪(0.10g，0.46mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲III(0.16g，0.46mmol)和K3PO4(0.20g，0.93mmol)的DMF-H2O(6.0mL，2∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.033g，0.04mmol)，随后再用氮气脱气15分钟。然后，所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，3.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.012g，7％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，3.43(br s，2H)，4.03(m，2H)，6.78(br s，1H)，6.85(br s，1H)，7.29(s，1H)，7.42(d，J＝8.40Hz，1H)，7.75(s，1H)，7.87(d，J＝8.40Hz，1H)，7.95(d，J＝1.20Hz，1H)和10.71(br s，1H)。MS：356.19(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，235nm)：87.51％(保留时间＝4.99分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(6-(羟基甲基)吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-E)：实施例9
通过用氮气吹扫15分钟使5-溴-2-羟基甲基吡啶(0.054g，0.29mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲III(0.10g，0.29mmol)和K3PO4(0.09g，0.43mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.02g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.007g，5％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，4.62(d，J＝6.0Hz，2H)，5.46(t，J＝5.60Hz，1H)，6.75(br s，1H)，7.56(d，J＝8.40Hz，2H)，7.93(s，1H)，7.99(d，J＝8.0Hz，1H)，8.15(dd，J＝2.0和8.0Hz，1H)，8.84(s，1H)和10.76(br s，1H)。MS：329.25(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，254nm)：97.81％(保留时间＝4.52分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(5-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)吡嗪-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-F)：实施例10
通过用氮气吹扫15分钟使2-溴-5-(1H-吡啶-2-酮)吡嗪(0.03g，0.12mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲III(0.082g，0.24mmol)和K3PO4(0.04g，0.18mmol)的DMF-H2O(9.0mL，2∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.009g，0.012mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.012g，26％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.46(t，J＝7.20Hz，1H)，6.59(d，J＝9.20Hz，1H)，6.72(br s，1H)，7.60(m，1H)，7.95(m，1H)，8.06(s，2H)，8.43(s，1H)，9.15(s，1H)，9.38(s，1H)和10.87(br s，1H)。MS：393.20(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，261nm)：95.76％(保留时间＝4.94分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(2-(羟基甲基)-1-甲基-1H-咪唑-5-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-G)：实施例11
通过用氮气吹扫15分钟使5-溴-2-(羟基甲基)-1-甲基-1H-咪唑(0.06g，0.32mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲III(0.21g，0.64mmol)和K3PO4(0.10g，0.48mmol)的DMF-H2O(6.0mL，2∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.023g，0.032mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，3.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.007g，7％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，3.66(s，3H)，4.56(d，J＝4.40Hz，2H)，5.36(m，1H)，6.77(br s，1H)，6.98(s，1H)，7.28(d，J＝8.40Hz，1H)，7.64(s，1H)，7.96(d，J＝8.0Hz，1H)和10.74(br s，1H).MS：332.11(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，256nm)：94.64％(保留时间＝4.25分钟)。
方案-6：(a)NaH，溴乙酸乙酯，DMF(对于II-A)和K2CO3，2-溴-乙基-甲基醚，丙酮(对于II-B)；(b)1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
制备2-(5-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)乙酸乙酯(II-A)：
向冰冷的5-溴-2(1H)-吡啶酮(1.0g，5.75mmol)的DMF(5.0mL)溶液中分批加入NaH(60％的矿物油悬浮液，0.25g，10.30mmol)，将所得溶液加热到80℃并保持90分钟。然后，将反应混合物再冷却到0℃，然后加入溴乙酸乙酯(1.92g，11.50mmol)。然后，将反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去DMF，加水，用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。粗制残余物在硅胶上纯化(100-200M，20％EtOAc-己烷)，得到所需产物(0.90g，60％)。MS：260.10(M+H)+。
制备5-溴-1-(2-甲氧基乙基)吡啶-2(1H)-酮(II-B)：
向5-溴-2(1H)-吡啶酮(0.10g，0.57mmol)的丙酮(5.0ml)溶液中加入K2CO3(0.18g，2.60mmol)，然后加入2-溴-乙基-甲基醚(0.24g，1.70mmol)。将所得反应混合物加热到60℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去丙酮，加水，用DCM(3x10mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。粗制残余物在硅胶上纯化(60-120M，1％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.10g，75％)。MS：232.01(M+H)+。
制备2-(5-(2-(3-乙基脲基)苯并[d]噻唑-5-基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)乙酸乙酯(III-A)：实施例12
通过用氮气吹扫15分钟使1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(0.20g，0.58mmol)、2-(5-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)乙酸乙酯II-A(0.30g，1.16mmol)和K3PO4(0.23g，1.08mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.02g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持45分钟。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，4％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.02g，9％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，1.22(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，4.17(q，J＝7.20Hz，2H)，4.77(s，2H)，6.54(d，J＝9.20Hz，1H)，6.73(br s，1H)，7.41(m，1H)，7.79(s，1H)，7.93(d，J＝8.0Hz，1H)，7.98(dd，J＝2.80和9.60Hz，1H)，8.21(s，1H)和10.77(br s，1H)。MS：401.23。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，261nm)：89.81％(保留时间＝4.89分钟)。
制备1-(5-(1-(2-乙氧基乙基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(III-B)：实施例13
通过用氮气吹扫15分钟使1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(0.30g，0.86mmol)、5-溴-1-(2-甲氧基乙基)吡啶-2(1H)-酮II-B(0.16g，0.65mmol)和K3PO4(0.21g，0.97mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.04g，0.065mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持15小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用DCM(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.064g，19％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，3.25(s，3H)，3.62(t，J＝5.20Hz，2H)，4.15(t，J＝5.60Hz，2H)，6.50(d，J＝9.60Hz，1H)，6.72(br s，1H)，7.41(m，1H)，7.79(s，1H)，7.87-7.92(m，2H)，8.07(d，J＝2.40Hz，1H)和10.72(br s，1H)。MS：371.10(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，262nm)：81.75％(保留时间＝4.61分钟)。
方案-7：(a)P2O5，TBAB，甲苯，100℃，2小时；(b)1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
制备4-溴-6-甲基-2H-吡喃-2-酮(II)：
在氮气气氛下向4-羟基-6-甲基-2-吡喃酮(0.20g，1.60mmol)的甲苯(5.0ml)溶液中加入P2O5(0.56g，4.0mmo)和TBAB(0.62g，1.90mmol)。将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，过滤。滤液用5％的NaHCO3溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到所需产物(0.18g，60％)。MS：189.10(M+H)+。
制备1-乙基-3-(5-(6-甲基-2-氧代-2H-吡喃-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(III)：实施例14
通过用氮气吹扫15分钟使4-溴-6-甲基-2H-吡喃-2-酮II(0.18g，0.95mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(0.50g，1.43mmol)和K3PO4(0.30g，1.43mmol)的DMF-H2O(6.0mL，2∶1)溶液脱气。向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.07g，0.095mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(230-400M，1.20％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.15g，50％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，2.30(s，3H)，3.19(m，2H)，6.56(s，1H)，6.72(br s，1H)，6.84(s，1H)，7.64(d，J＝8.40Hz，1H)，8.0-8.03(m，2H)和10.81(br s，1H)。MS：330.18(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，238nm)：97.55％(保留时间＝5.13分钟)。
方案-8：(a)1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000291
制备5-(2-(3-乙基脲基)苯并[d]噻唑-5-基)吡啶甲酸甲酯(II-A)：实施例15
通过用氮气吹扫15分钟使2-甲氧基羰基-5-吡啶硼酸、频哪醇酯(0.20g，0.75mmol)、1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.15g，0.50mmol)和K3PO4(0.21g，1.0mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.03g，0.05mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，100％EtOAc)，得到所需产物(0.01g，6％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，3.91(s，3H)，6.75(br s，1H)，7.66(d，J＝9.60Hz，1H)，8.05(m，2H)，8.14(d，J＝8.40Hz，1H)，8.36(m，1H)，9.11(s，1H)和10.78(br s，1H)。MS：357.15(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，266nm)：92.29％(保留时间＝4.99分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(II-B)：实施例16
通过用氮气吹扫15分钟使1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-硼酸、频哪醇酯(0.08g，0.25mmol)、1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.05g，0.16mmol)和K3PO4(0.053g，0.25mmol)的DMF-H2O(3.0mL，2∶1)溶液脱气。向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.012g，0.016mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.015g，23％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，2.42(br s，4H)，2.74(t，J＝6.80Hz，2H)，3.20(五重峰，J＝6.80Hz，2H)，3.55(m，4H)，4.23(t，J＝6.40Hz，2H)，6.72(br s，1H)，7.43(d，J＝8.0Hz，1H)，7.79-7.83(m，2H)，7.92(s，1H)，8.23(s，1H)和10.66(br s，1H)。MS：401.22(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，254nm)：98.63％(保留时间＝4.68分钟)。
制备1-(5-(1H-吡唑-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(II-C)：实施例17
通过用氮气吹扫15分钟使1H-吡唑-3-硼酸、频哪醇酯(0.072g，0.37mmol)、1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.075g，0.25mmol)和K3PO4(0.11g，0.50mmol)的DMF-H2O(6.0mL，2∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.017g，0.025mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，80％EtOAc-己烷)，得到所需产物(0.001g，14％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，6.77(m，2H)，7.48(m，1H)，7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，7.78(s，1H)，7.87(d，J＝7.20Hz，1H)，8.02(s，1H)和10.82(br s，1H)。MS：288.10(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，252nm)：93.64％(保留时间＝4.66分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(II-D)：实施例18
通过用氮气吹扫15分钟使1-甲基吡唑-4-硼酸、频哪醇酯(0.10g，0.38mmol)、1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.075g，0.25mmol)和K3PO4(0.16g，0.75mmol)的DMF-H2O(6.0mL，2∶1)溶液脱气。向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.018g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.015g，20％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，3.86(s，3H)，6.71(br s，1H)，7.42(d，J＝8.40Hz，1H)，7.80(m，2H)，7.91(s，1H)，8.18(s，1H)和10.66(br s，1H)。MS：302.17。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，253nm)：96.66％(保留时间＝4.76分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(4-甲基-3，4-二氢-2H-吡啶并[3，2-b][1，4]噁嗪-7-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(II-E)：实施例19
通过用氮气吹扫15分钟使4-甲基-3，4-二氢-2H-吡啶并[3，2-B][1，4]噁嗪-7-硼酸、频哪醇酯(0.096g，0.34mmol)、1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.07g，0.23mmol)和K3PO4(0.097g，0.46mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.016g，0.023mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.05g，59％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.06(s，3H)，3.20(m，2H)，3.46(t，J＝4.40Hz，2H)，4.25(t，J＝4.0Hz，2H)，6.74(br s，1H)，7.29(d，J＝1.60Hz，1H)，7.43(d，J＝8.40Hz，1H)，7.77(br s，1H)，7.88(d，J＝8.0Hz，1H)，8.06(d.J＝1.60Hz，1H)，和10.68(br s，1H)。MS：370.21。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，236nm)：95.95％(保留时间＝5.22分钟)。
方案-9：(a)1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000321
制备1-乙基-3-(5-(异喹啉-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(II-A)：实施例20
通过用氮气吹扫15分钟使4-异喹啉硼酸(0.052g，0.30mmol)、1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.075g，0.25mmol)和K3PO4(0.08g，0.37mmol)的DMF-H2O(3.0mL，2∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.01g，0.015mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到95℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用DCM(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，3％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.04g，46％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(五重峰，J＝6.80Hz，2H)，6.75(br s，1H)，7.37(d，J＝9.20Hz，1H)，7.72-7.81(m，3H)，7.89(d，J＝8.0Hz，1H)，8.07(d，J＝8.0Hz，1H)，8.24(d，J＝8.0Hz，1H)，8.49(s，1H)，9.36(s，1H)和10.80(br s，1H)。MS：349.14.定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，218nm)：98.45％(保留时间＝5.50分钟)。
制备1-(5-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(II-B)：实施例21
通过用氮气吹扫15分钟使1H-吡唑-4-硼酸(0.037g，0.33mmol)、1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.05g，0.17mmol)和K3PO4(0.11g，0.49mmol)的DMF-H2O(6.0mL，2∶1)溶液脱气。向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.011g，0.016mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用DCM(2x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，3％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.01g，21％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.18(五重峰，J＝6.80Hz，2H)，6.76(br s，1H)，7.48(dd，J＝1.60和8.40Hz，1H)，7.66(br s，1H)，7.82(m，2H)，8.11(brs，1H)，8.24(br s，1H)和10.67(br s，1H)。MS：288.20。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，251nm)：96.91％(保留时间＝4.52分钟)。
方案-10：(a)2-甲氧基-5-(三丁基甲锡烷基)噻唑，Pd(PPh3)4，DMF；(b)BBr3-DCM。
制备1-乙基-3-(5-(2-甲氧基噻唑-5-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(II)：实施例22
向1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.05g，0.17mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入2-甲氧基-5-(三丁基甲锡烷基)噻唑(0.14g，0.33mmol)，将所得溶液用氮气脱气15分钟。然后，向该溶液中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.02g，0.017mmol)，再用氮气脱气15分钟。然后，将反应混合物加热到90℃并保持5小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。粗制残余物在硅胶上纯化(230-400M，1.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.035g，63％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝6.80Hz，3H)，3.20(m，2H)，4.05(s，3H)，6.72(br s，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，1H)，7.68(s，1H)，7.74(s，1H)，7.90(d，J＝8.0Hz，1H)和10.76(br s，1H)。MS：335.09(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，268nm)：97.44％(保留时间＝5.81分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(2-羟基噻唑-5-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(III)：实施例23
向-78℃的1-乙基-3-(5-(2-甲氧基噻唑-5-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲II(0.025g，0.075mmol)的DCM溶液中加入三溴化硼(71.0μL，0.75mmol)，使所得反应混合物在1-2小时内回到室温。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到-30℃，然后用冰冷的水猝灭，用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。粗制残余物在硅胶上纯化(230-400M，2.10％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.07g，29％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.72(br s，1H)，7.30(dd，J＝1.60和8.0Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.61(s，1H)，7.86(d，J＝8.40Hz，1H)，10.74(br s，1H)和11.44(br s，1H)。MS：321.12(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEHC-18，100x2.1mm，237nm)：97.26％(保留时间＝4.68分钟)。
方案-11：(a)n-BuLi，氯化三丁锡，THF；(b)1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲，Pd(PPh3)4，DMF。
Figure BPA00001195242000341
制备3-(三丁基甲锡烷基)咪唑并[1，2-a]吡啶(II)：
在氮气下，将3-溴咪唑并[1，2-A]吡啶(0.10g，0.51mmol)的THF(7.0mL)溶液冷却到-78℃，然后滴加n-BuLi(1.30M，在己烷中，0.46mL，0.66mmol)。将所得溶液在相同温度下搅拌45分钟，然后加入氯化三丁锡(0.14mL，0.53mmol)。然后，使反应混合物回到室温(45分钟)。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物再冷却到-78℃，通过滴加饱和NH4Cl溶液猝灭。然后，用EtOAc(2x25ml)萃取反应混合物。合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。残余物不经过进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：409.10(M+H)+。
制备1-乙基-3-(5-(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(III)：实施例24
向1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.075g，0.25mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入3-(三丁基甲锡烷基)咪唑并[1，2-a]吡啶II(0.204g，0.50mmol)，将所得溶液用氮气脱气15分钟。然后，向该溶液中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.03g，0.025mmol)，再用氮气脱气15分钟。然后，将反应混合物加热到80℃，并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。粗制残余物在硅胶上纯化(100-200M，3％MeOH-DCM)，得到的产物在制备型TLC上进一步纯化，得到所需产物(0.007g，8％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.76(brs，1H)，6.96(t，J＝6.80Hz，1H)，7.30(m，1H)，7.49(dd，J＝1.60和8.0Hz，1H)，7.65(m，1H)，7.79(s，1H)，7.89(br s，1H)，8.05(d，J＝8.0Hz，1H)，8.60(d，J＝6.80Hz，1H)和10.77(br s，1H)。MS：338.18。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，254nm)：99.01％(保留时间＝5.0分钟)。
方案-12：(a)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(b)1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000351
制备6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶(II-A)：
通过用氮气吹扫15分钟使6-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶(0.15g，0.75mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.29g，1.14mmol)和KOAc(0.11g，1.13mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.025g，0.09mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.038g，0.037mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：246.10(M+H)+。
制备N-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2基)乙酰胺(II-B)：
通过用氮气吹扫15分钟使2-乙酰基氨基-5-溴吡啶(0.25g，0.95mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.27g，1.04mmol)和KOAc(0.14g，1.42mmol)的1，4-二噁烷(8.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.032g，0.11mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.05g，0.047mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：263.15(M+H)+。
制备1-(5-([1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶-6-基)苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(III-A)：实施例25
通过用氮气吹扫15分钟使6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶II-A(0.12g，0.49mmol)、1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.10g，0.33mmol)和K3PO4(0.084g，0.39mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.012g，0.016mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用DCM(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(60-120M，3％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.05g，45％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.73(br s，1H)，7.66(d，J＝8.0Hz，1H)，7.95(d，J＝9.20Hz，1H)，8.0-8.05(m，2H)，8.11(d，J＝9.60Hz，1H)，8.54(s，1H)，9.37(s，1H)，10.78(br s，1H)。MS：337.06(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，252nm)：95.40％(保留时间＝4.78分钟)。
制备N-(5-(2-(3-乙基脲基)苯并[d]噻唑-5-基)吡啶-2基)乙酰胺(III-B)：实施例26
通过用氮气吹扫15分钟使N-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2基)乙酰胺II-B(0.13g，0.49mmol)、1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.10g，0.33mmol)和K3PO4(0.084g，0.39mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.023g，0.033mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(60-120M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.057g，48％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，2.11(s，3H)，3.21(m，2H)，6.73(br s，1H)，7.55(d，J＝9.20Hz，1H)，7.92-7.97(m，2H)，8.15(m，2H)，8.68(s，1H)，10.58(br s，1H)和10.74(br s，1H)。MS：354.09(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，264nm)：93.67％(保留时间＝4.83分钟)。
方案-13：(a)甲磺酸，DCM；(b)N-苯基二(三氟甲磺酰亚胺)，DIPEA，DMF；(c)相应的硼酸盐，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000381
制备1-乙基-3-(5-羟基苯并[d]噻唑-2-基)脲(II)：
向1-(5-(苄氧基)苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲I(1.20g，3.66mmol)的DCM(100.0mL)溶液中加入甲磺酸(4.32mL，66.22mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸发溶剂。将残余物冷却，然后用饱和NaHCO3溶液碱化，随后用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到所需产物(0.90g)，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：238.10(M+H)+。
制备三氟甲磺酸2-(3-乙基脲基)苯并[d]噻唑-5-基酯(III)：
向1-乙基-3-(5-羟基苯并[d]噻唑-2-基)脲II(2.30g，9.70mmol)的DMF(100.0mL)溶液中加入DIPEA(1.62mL，12.50mmol)，然后加入N-苯基二(三氟甲磺酰亚胺)(3.81g，10.60mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸发溶剂，加水，用热EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到所需产物(1.30g，36％)。MS：370.10(M+H)+。
制备1-乙基-3-(5-(6-吗啉代吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-A)：实施例27
通过用氮气吹扫15分钟使三氟甲磺酸2-(3-乙基脲基)苯并[d]噻唑-5-基酯III(0.075g，0.20mmol)、4-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2基)吗啉(0.12g，0.40mmol)和K3PO4(0.13g，0.60mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.014g，0.020mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，3.5％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.040g，52％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，3.49(t，J＝5.20Hz，4H)，3.71(t，J＝4.80Hz，4H)，6.74(br s，1H)，6.94(d，J＝8.80Hz，1H)，7.47(m，1H)，7.83(s，1H)，7.89-7.95(m，2H)，8.52(s，1H)和10.69(br s，1H)。MS：384.22(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，233nm)：96.36％(保留时间＝5.43分钟)。
制备1-(5-(2-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-5-基)苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(IV-B)：实施例28
通过用氮气吹扫15分钟使三氟甲磺酸2-(3-乙基脲基)苯并[d]噻唑-5-基酯III(0.075g，0.20mmol)、2-(1H-咪唑-1-基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶(0.11g，0.40mmol)和K3PO4(0.13g，0.60mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.014g，0.020mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，3.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.025g，33％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，6.74(br s，1H)，7.18(s，1H)，7.68(dd，J＝1.60和8.40Hz，1H)，8.0(s，1H)，8.06(d，J＝8.40Hz，1H)，8.10(s，1H)，8.64(s，1H)，9.27(s，2H)和10.78(br s，1H)。MS：366.12(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，268nm)：96.87％(保留时间＝3.89分钟)。
方案-14：(a)Boc酸酐，DMAP，THF，H2O，室温，1小时(b)二(新戊基甘醇酸合)二硼，KOAc，PdCl2(dppf)，1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲，Cs2CO3，Pd(PPh3)4，DMSO，80℃，16小时。
Figure BPA00001195242000401
制备4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(II)：
向冰冷的5-溴吡啶-2(1H)-酮(0.20g，1.15mmol)的THF(5mL)溶液中加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.014g，0.12mmol)，然后滴加Boc酸酐(0.27g，0.12mmol)。使反应混合物回到室温，搅拌1小时。在反应完成后(TLC监控)，向反应混合物中加水，然后用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，蒸发至干。粗制的白色固体不进一步纯化而直接用于之后的步骤中(0.27g，86％)。MS：274.0(M+H+)。
制备1-乙基-3-(5-(2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(III)：实施例29
在室温下向1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.20g，0.67mmol)的DMSO(5mL)溶液中加入KOAc(0.20g，0.2.01mmol)和联硼酸新戊二醇酯(0.30g，1.34mmol)。通过用氮气吹扫使所得混合物脱气15-20分钟，然后加入PdCl2.dppf(0.06g，0.07mmol)。将反应混合物再脱气15-20分钟，然后加热到80℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，然后原位加入4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.27g，1.0mmol)和Cs2CO3(0.20g，在0.2mL H2O中)。将所得反应混合物脱气10-15分钟，然后加入Pd(PPh3)4(0.05g，0.07mmol)。最后，将反应混合物脱气15-20分钟，然后加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，向反应混合物中加水(50mL)，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，浓缩。粗制残余物在硅胶上纯化(100-200M，4％MeOH-DCM)，得到所需脱-Boc产物(0.017g，8％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，D2O交换)：δ1.06(t，J＝7.20Hz，3H)，3.15(m，2H)，6.56(d，J＝9.20Hz，1H)，7.39(d，J＝7.60Hz，1H)，7.75(m，2H)，7.87(d，J＝8.40Hz，1H)和7.96(d，J＝10.80Hz，1H)。MS：313.08(M-H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，261nm)：94.42％(保留时间＝4.24分钟)。
方案-15：(a)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(b)三氟甲磺酸2-(3-乙基脲基)苯并[d]噻唑-5-基酯，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000411
制备2-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(II)：
通过用氮气吹扫15分钟使5-溴-2-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶(0.15g，0.63mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.176g，0.69mmol)和KOAc(0.076g，0.93mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向反应混合物中加入三环己基膦(0.02g，0.07mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.03g，0.03mmol)，随后再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到100℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：288.10(M+H)+。
制备1-乙基-3-(5-(6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(III)：实施例30
通过用氮气吹扫15分钟使三氟甲磺酸2-(3-乙基脲基)苯并[d]噻唑-5-基酯(0.10g，0.27mmol)、2-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.093g，0.32mmol)和K3PO4(0.085g，0.40mmol)的DMF-H2O(5.0mL，4∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.018g，0.020mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.8％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.005g，4％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，4.48(s，3H)，6.75(br s，1H)，7.68(d，J＝9.20Hz，1H)，8.06(m，2H)，8.20(m，1H)，8.36(m，1H)，9.14(s，1H)和10.80(br s，1H)。MS：381.11(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEHC-18，100x2.1mm，266nm)：95.53％(保留时间＝5.04分钟)。
方案-16：(a)伯胺，H2O，80℃；(b)N-苯基二(三氟甲磺酰亚胺)，DIPEA，DMF；(c)1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O(对于IV-A)和1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲，Cs2CO3，四(三苯基膦)钯(0)，DMSO-H2O(对于IV-B-E)。
Figure BPA00001195242000421
制备取代的环酰胺(II)的一般步骤：
将在水中的6-甲基-4-羟基吡喃酮(1.0当量)和伯胺(1.20当量)的混合物(按重量计稀释5倍)加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，过滤沉淀的固体，用醚洗涤，在真空下干燥，得到所需产物(产率约75％)。
制备三氟甲磺酸盐/酯(III)：
向环酰胺II(1.0当量)的DMF溶液中加入DIPEA(1.15当量)，将所得混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入N-苯基二(三氟甲磺酰亚胺)(1.20当量)。将所得反应混合物在室温下继续搅拌2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物倒在冰冷的水上，用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩，得到所需产物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。
制备1-乙基-3-(5-(1-(2-甲氧基乙基)-6-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-A)：实施例31
通过用氮气吹扫15分钟使三氟甲磺酸1-(2-甲氧基乙基)-6-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基酯(0.20g，0.65mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(0.15g，0.43)和K3PO4(0.14g，0.65mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.03g，0.04mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.05g，32.0％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，2.50(s，3H)，3.19(m，2H)，3.24(s，3H)，3.58(t，J＝5.60Hz，2H)，4.14(t，J＝5.20Hz，2H)，6.59(s，2H)，6.73(br s，1H)，7.54(m，1H)，7.91(s，1H)，7.97(d，J＝8.0Hz，1H)和10.80(br s，1H)。MS：387.15(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，263nm)：98.18％(保留时间＝4.93分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(1-(2-羟基乙基)-6-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-A-1)：实施例32
向-78℃的1-乙基-3-(5-(1-(2-甲氧基乙基)-6-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲IV-A(0.035g，0.09mmol)的DCM(3.50mL)溶液中加入BBr3(0.034g，0.14mmol)，然后将所得反应混合物在0℃搅拌1小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物再冷却到-78℃，用饱和NaHCO3溶液(1.0mL)猝灭。然后，用水稀释反应混合物，用EtOAc(3x20mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到所需产物(0.015g，43％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ0.59(t，J＝6.80Hz，3H)，2.70(m，2H)，2.80(s，3H)，3.14(m，2H)，3.52(t，J＝5.60Hz，2H)，4.47(t，J＝5.20Hz，1H)，6.08(s，2H)，6.26(m，1H)，7.04(d，J＝8.40Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.47(d，J＝7.60Hz，1H)，和10.29(br s，1H)。MS：371.10(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，263nm)：87.90％(保留时间＝4.60分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(6-甲基-1-((6-甲基吡啶-2基)甲基)-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-B)：实施例33
通过用氮气吹扫15分钟使三氟甲磺酸6-甲基-1-((6-甲基吡啶-2基)甲基)-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基酯(0.10g，0.86mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(0.30g，0.86mmol)和Cs2CO3(0.21g，0.64mmol)的DMSO-H2O(5.0mL，4∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.05g，0.04mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，4.2％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.004g，1.0％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，2.43(s，3H)，2.44(s，3H)，3.19(m，2H)，5.29(s，2H)，6.68(d，J＝5.60Hz，2H)，6.74(br s，1H)，6.91(d，J＝7.60Hz，1H)，7.16(d，J＝7.60Hz，1H)，7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，7.64(t，J＝7.60Hz，1H)，7.96(m，2H)和10.82(br s，1H)。MS：434.25(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，265nm)：94.22％(保留时间＝5.20分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(6-甲基-2-氧代-1-(吡啶-3-基甲基)-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-C)：实施例34
通过用氮气吹扫15分钟使三氟甲磺酸6-甲基-2-氧代-1-(吡啶-3-基甲基)-1，2-二氢吡啶-4-基酯(0.36g，1.00mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(0.35g，1.0mmol)和Cs2CO3(0.25g，0.75mmol)的DMSO-H2O(5.0mL，4∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.06g，0.05mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，3.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.016g，4.0％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，2.38(s，3H)，3.19(m，2H)，5.34(s，2H)，6.72(m，3H)，7.38(m，1H)，7.58(m，2H)，7.96(m，2H)，8.49(m，2H)和10.81(br s，1H)。MS：420.25。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，264nm)：99.49％(保留时间＝4.78分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(6-甲基-2-氧代-1-(吡啶-2基甲基)-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-D)：实施例35
通过用氮气吹扫15分钟使三氟甲磺酸6-甲基-2-氧代-1-(吡啶-2基甲基)-1，2-二氢吡啶-4-基酯(0.30g，0.86mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(0.30g，0.86mmol)和Cs2CO3(0.21g，0.64mmol)的DMSO-H2O(5.0mL，4∶1)溶液脱气。向该反应混合物中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.05g，0.04mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，1.9％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.011g，3.0％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，2.40(s，3H)，3.19(m，2H)，5.35(s，2H)，6.67(d，J＝8.80Hz，2H)，6.73(br s，1H)，7.29(m，2H)，7.58(d，J＝8.0Hz，1H)，7.78(t，J＝7.60Hz，1H)，7.96(m，2H)，8.50(d，J＝4.80Hz，1H)和10.80(br s，1H)。MS：420.22。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，264nm)：91.62％(保留时间＝4.97分钟)。
制备1-乙基-3-(5-(6-甲基-2-氧代-1-(1-(吡啶-2基)乙基)-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-E)：实施例36
通过用氮气吹扫15分钟使三氟甲磺酸6-甲基-2-氧代-1-(1-(吡啶-2基)乙基)-1，2-二氢吡啶-4-基酯(0.25g，0.66mmol)、1-乙基-3-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(0.30g，0.86mmol)和Cs2CO3(0.16g，0.50mmol)的DMSO-H2O(5.0mL，4∶1)溶液脱气。向该反应混合物中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.04g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.004g，2.0％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，1.88(d，J＝6.80Hz，3H)，3.20(m，2H)，3.22(s，3H)，6.49(m，2H)，6.62(s，1H)，6.73(br s，1H)，7.24(m，1H)，7.34(d，J＝7.60Hz，1H)，7.55(d，J＝8.40Hz，1H)，7.76(t，J＝7.60Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.97(d，J＝8.40Hz，1H)，8.46(br s，1H)和10.81(br s，1H)。MS：432.15。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，263nm)：89.28％(保留时间＝5.15分钟)。
方案-17：(a)EtOH，SOCl2，78℃，6小时；(b)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(c)1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000461
制备7-氯-1-甲基-4-氧代-1，4-二氢喹啉-3-羧酸乙酯(II)：
将7-氯-1-甲基-4-氧代-1，4-二氢-喹啉-3-羧酸(0.50g，2.10mmol)和SOCl2(2.0mL)的EtOH(15.0mL)溶液加热到78℃并保持6小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去EtOH，加水，用EtOAc(3x70mL)萃取。合并的有机相用饱和NaHCO3溶液洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，以定量产率得到所需产物。
制备1-甲基-4-氧代-7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1，4-二氢喹啉-3-羧酸乙酯(III)：
通过用氮气吹扫15分钟使7-氯-1-甲基-4-氧代-1，4-二氢喹啉-3-羧酸酯II(0.70g粗原料，2.63mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.74g，2.89mmol)和KOAc(0.39g，3.95mmol)的1，4-二噁烷(12.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.089g，0.32mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.12g，0.13mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。将所得反应混合物加热到90℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：358.10(M+H)+。
制备7-(2-(3-乙基脲基)苯并[d]噻唑-5-基)-1-甲基-4-氧代-1，4-二氢喹啉-3-羧酸乙酯(IV)：实施例37
通过用氮气吹扫15分钟使1-甲基-4-氧代-7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1，4-二氢喹啉-3-羧酸乙酯III(0.60g，1.67mmol)、1-(5-溴苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.25g，0.84mmol)和K3PO4(0.36g，1.67mmol)的DMF-H2O(7.5mL，2∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入[1，1’-二(二苯基膦基)-二茂铁]二氯钯(II)(0.07g，0.084mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持5小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(4x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(230-400M，7％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.002g，可以忽略的产量)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，1.21(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，3.94(s，3H)，4.14(m，2H)，6.85(br s，1H)，6.99(d，J＝8.0Hz，1H)，7.22(d，J＝5.60Hz，1H)，7.36(s，1H)，7.77(m，3H)，8.65(s，1H)和10.01(br s，1H)。LCMS：451.21(M+H)+，96.95％。
方案-18：(a)苯甲酰基异硫氰酸酯，丙酮；(b)NaOH-THF；(c)NaH，NMP；(d)异氰酸乙酯，1，4-二噁烷；(e)相应的硼酸盐，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000481
制备1-苯甲酰基-3-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-硫脲(II)：
向5-溴-2，4-二氟苯胺(1.0g，4.81mmol)的丙酮(25.0mL)溶液中滴加苯甲酰基异硫氰酸酯(0.71mL，5.29mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌30分钟。在反应完成后(TLC监控)，蒸发溶剂，用己烷和醚洗涤残余物，得到白色固体状的标题化合物(1.70g，定量产量)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.02-7.06(m，1H)，7.56(t，J＝8.0Hz，2H)，7.68(t，J＝7.60Hz，1H)，7.91(d，J＝7.60Hz，2H)，8.67(t，J＝7.60Hz，1H)，9.15(br s，1H)和12.65(br s，1H)。
制备(5-溴-2，4-二氟-苯基)-硫脲：III
向1-苯甲酰基-3-(5-溴-2，4-二氟-苯基)-硫脲II(1.70g，4.60mmol)的THF(35.0mL)溶液中加入NaOH(0.97g，24.25mmol)的水(13.0mL)溶液。将所得反应混合物在70℃搅拌15小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸发THF，加水，用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，浓缩，得到所需化合物(1.0g，83％)。MS：267.03(M+H)+。
制备5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基胺：IV
向(5-溴-2，4-二氟-苯基)-硫脲III(0.75g，2.80mmol)的NMP(5.0mL)溶液中分批加入NaH(0.17g，4.21mmol，60％的矿物油悬浮液)。然后，将反应混合物在130℃加热2小时。然后，将反应混合物倒在碎冰上，用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相蒸发，得到粗制残余物，该粗产物在硅胶上纯化(100-200M，12％EtOAc-己烷)，得到所需化合物(0.36g，52％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.57(d，J＝6.40Hz，1H)，7.66(br s，2H)和7.79(d，8.80Hz，1H)。
制备1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲：V
向5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基胺IV(0.36g，1.45mmol)的1，4-二噁烷(25.0mL)溶液中加入异氰酸乙酯(0.69mL，8.74mmol)，将所得反应混合物在80℃加热15小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸发溶剂。将得到的残余物与水一起在60℃搅拌5小时。然后，过滤溶液，用醚洗涤，得到标题化合物(0.30g，69％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝6.80Hz，3H)，3.17(m，2H)，6.69(brs，1H)，7.92(d，J＝6.40Hz，1H)，8.0(d，J＝8.40Hz，1H)和10.86(br s，1H)。
制备N-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)吡啶-2基)乙酰胺(VI-A)：实施例38
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲V(0.10g，0.31mmol)、N-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2基)乙酰胺(0.17g，0.62mmol)和K3PO4(0.067g，0.31mmol)的DMF-H2O(2.5mL，2∶0.5)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.022g，0.031mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到110℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，1.5％MeOH-DCM)，随后通过制备型HPLC，得到所需产物(0.046g，39％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，2.12(s，3H)，3.20(五重峰，J＝6.40Hz，2H)，6.77(br s，1H)，7.75(d，J＝6.80Hz，1H)，7.93(d，J＝10.40Hz，1H)，8.01(d，J＝8.40Hz，1H)，8.18(d，J＝8.80Hz，1H)，8.52(s，1H)，10.63(br s，1H)和10.85(br s，1H)。MS：374.20(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，261nm)：98.72％(保留时间＝5.03分钟)。
制备2-(4-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯(VI-B)：实施例39
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲V(0.10g，0.31mmol)、1-(乙氧基羰基甲基)-1H-吡唑-4-硼酸、频哪醇酯(0.18g，0.63mmol)和K3PO4(0.067g，0.31mmol)的DMF-H2O(2.5mL，2∶0.5)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.022g，0.031mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到110℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，1.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.024g，20％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，1.22(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，4.18(q，J＝7.20Hz，2H)，5.12(s，2H)，6.69(br s，1H)，7.86(d，J＝10.80Hz，1H)，7.94(d，J＝6.40Hz，1H)，8.04(s，1H)，8.21(d，J＝2.40Hz，1H)和10.71(br s，1H)。MS：392.21(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，249nm)：89.68％(保留时间＝5.33分钟)。
方案-19：(a)P2O5，TBAB，甲苯；(b)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(c)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000501
制备4-溴-6-甲基-2H-吡喃-2-酮(II)：
将4-羟基-6-甲基-2-吡喃酮(0.50g，3.96mmol)、P2O5(1.41g，9.91mmol)和TBAB(1.53g，4.76mmol)的甲苯(25mL)溶液加热到100℃并保持1.50小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，加水，萃取有机层。用甲苯(2x20mL)反萃取水层。合并的有机相用饱和NaHCO3溶液洗涤，然后用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到所需产物(0.57g，76％)。MS：189.10(M+H)+。
制备6-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-2H-吡喃-2-酮(III)：
通过用氮气吹扫15分钟使4-溴-6-甲基-2H-吡喃-2-酮II(0.15g，0.79mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.22g，0.87mmol)和KOAc(0.12g，1.19mmol)的1，4-二噁烷(10.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.027g，0.10mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.036g，0.04mmol)，用氮气再脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：237.10(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(6-甲基-2-氧代-2H-吡喃-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV)：实施例40
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.08g，0.25mmol)、6-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-2H-吡喃-2-酮(0.118g，0.50mmol)和K3PO4(0.064g，0.30mmol)的DMF-H2O(2.5mL，2∶0.5)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.018g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到110℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x20mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，1.0％MeOH-DCM)，然后通过制备型HPLC，得到所需产物(0.026g，30％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，2.29(s，3H)，3.19(m，2H)，6.40(s，1H)，6.59(s，1H)，6.91(br s，1H)，7.80(d，J＝6.40Hz，1H)，7.97(d，J＝10.80Hz，1H)和10.33(br s，1H)。MS：348.07(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEHC-18，100x2.1mm，237nm)：98.50％(保留时间＝5.43分钟)。
方案-20：(a)2-溴乙醇，K2CO3，丙酮；(b)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(c)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
制备2-(4-(5-溴嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙醇(II)：
向5-溴-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(0.20g，0.83mmol)的丙酮(10.0mL)溶液中加入K2CO3(0.58g，4.17mmol)，然后加入2-溴乙醇(0.01g，1.66mmol)。将所得反应混合物加热到回流并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，冷却反应混合物，加水，用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。粗制残余物在硅胶上纯化(100-200M，2％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.11g，47％)。MS：287.10(M+H)+。
制备2-(4-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙醇(III)：
通过用氮气吹扫15分钟使2-(4-(5-溴嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙醇II(0.10g，0.35mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.098g，0.39mmol)和KOAc(0.052g，0.53mmol)的1，4-二噁烷(10.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.012g，0.043mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.016g，0.017mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到95-100℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：335.21(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV)：实施例41
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.08g，0.25mmol)、2-(4-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙醇(0.10g，0.30mmol)和K3PO4(0.08g，0.38mmol)的DMF-H2O(3.0mL，2∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.009g，0.013mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到95-100℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用DCM(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。该粗产物随后在中性氧化铝上纯化(4.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.070g，63％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，2.45(m，2H)，3.20(m，2H)，3.34(m，4H)，3.55(q，J＝5.60Hz，2H)，3.78(br s，4H)，4.45(t，J＝5.60Hz，1H)，6.71(br s，1H)，7.75(d，J＝6.80Hz，1H)，7.92(d，J＝10.40Hz，1H)，8.64(s，2H)和10.75(br s，1H)。MS：446.14(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，228nm)：95.88％(保留时间＝4.82分钟)。
方案-21：(a)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(b)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O；(c)HCl-1，4-二噁烷。
Figure BPA00001195242000541
制备4-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(II)：
通过用氮气吹扫15分钟使5-溴-2-(4-Boc-哌嗪-1-基)嘧啶(0.10g，0.29mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.081g，0.32mmol)和KOAc(0.035g，0.43mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.010g，0.035mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.013g，0.014mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到100℃并保持5小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：391.21(M+H)+。
制备4-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(III)：
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.05g，0.15mmol)、4-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.12g，0.31mmol)和K3PO4(0.13g，0.61mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.021g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到95-100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，1.60％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.015g，20％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，1.43(s，9H)，3.20(m，2H)，3.42(br s，4H)，3.79(br s，4H)，6.71(br s，1H)，7.76(d，J＝6.80Hz，1H)，7.92(d，J＝10.40Hz，1H)，8.62(s，2H)和10.74(br s，1H)。MS：502.27(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，272nm)：99.21％(保留时间＝6.51分钟)。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲盐酸盐(IV)：实施例42
将4-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.010g，0.02mmol)的4.0M HCl-1，4-二噁烷(5.0mL)溶液搅拌30分钟。在反应完成后(TLC监控)，蒸发溶剂，用醚研制残余物，得到所需产物(0.005g，62％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，3.18(m，2H)，3.20(br s，4H)，4.0(br s，4H)，6.89(br s，1H)，7.77(d，J＝6.80Hz，1H)，7.93(d，J＝10.40Hz，1H)，8.68(s，2H)，9.05(br s，1H)和10.83(br s，1H)。MS：402.22(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，267nm)：98.22％(保留时间＝4.47分钟)。
方案-22：(a)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(b)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O；(c)LiOH，THF-H2O。
Figure BPA00001195242000551
制备1-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(II-A)：
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(0.32g，1.05mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.32g，1.25mmol)和KOAc(0.16g，1.60mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.036g，0.13mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.05g，0.053mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到100℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：348.21(M+H)+。
制备1-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌啶-3-羧酸甲酯(II-B)：
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-3-羧酸甲酯(0.10g，0.33mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.102g，0.39mmol)和KOAc(0.05g，0.49mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.012g，0.04mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.016g，0.020mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到100℃并保持5小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：348.21(M+H)+。
制备1-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(III-A)：实施例43
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.20g，0.63mmol)、1-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(0.33g，0.94mmol)和K3PO4(0.27g，1.26mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.044g，0.06mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，5％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.12g，42％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.19(t，J＝7.20Hz，3H)，1.56(m，2H)，1.94(m，2H)，2.73(s，1H)，3.33(m，4H)，3.62(s，3H)，4.59(s，2H)，6.70(br s，1H)，7.75(d，J＝6.80Hz，1H)，7.91(d，J＝10.40Hz，1H)，8.59(s，2H)和10.74(br s，1H)。MS：459.14(M+H+)。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，229nm)：97.90％(保留时间＝6.14分钟)。
制备1-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸(IV-A)：实施例44
向1-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(0.05g，0.11mmol)的THF(3.0mL)溶液中加入LiOH.H2O(0.014g，0.33mmol)的H2O(1.0mL)溶液。将所得反应混合物加热到60℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去THF，加水，用EtOAc(2x25mL)萃取，EtOAc萃取液随后废弃。用1N HCl酸化水层，直到pH达到5-6，然后用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到所需产物(0.03g，62％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，1.55(m，2H)，1.92(m，2H)，2.57(m，1H)，3.20(m，4H)，4.58(m，2H)，6.84(br s，1H)，7.75(d，J＝7.20Hz，1H)，7.91(d，J＝10.40Hz，1H)，8.59(s，2H)，10.84(br s，1H)和12.30(br s，1H)。MS：443.07(M-H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEHC-18，2.1x100mm，229nm)：96.24％(保留时间＝4.34分钟)。
制备1-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)嘧啶-2-基)哌啶-3-羧酸甲酯(III-B)：实施例45
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.08g，0.25mmol)、1-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌啶-3-羧酸甲酯(0.13g，0.37mmol)和K3PO4(0.106g，0.50mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.018g，0.025mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到85℃并保持7小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，3％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.041g，36％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，1.50(m，1H)，1.74(m，2H)，2.03(m，1H)，2.57(m，1H)，3.08-3.32(m，4H)，3.63(s，3H)，4.48(d，J＝12.40Hz，1H)，4.74(dd，J＝3.60和13.20Hz，1H)，6.70(br s，1H)，7.75(d，J＝6.80Hz，1H)，7.92(d，J＝10.40Hz，1H)，8.59(s，2H)和10.74(br s，1H)。MS：459.14(M+H+)。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，229nm)：98.31％(保留时间＝6.26分钟)。
制备1-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)嘧啶-2-基)哌啶-3-羧酸(IV-B)：实施例46
向1-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)嘧啶-2-基)哌啶-3-羧酸甲酯(0.05g，0.11mmol)的THF(3.0mL)溶液中加入LiOH.H2O(0.014g，0.33mmol)的H2O(1.0mL)溶液。将所得反应混合物加热到60℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去THF，加水，用EtOAc(2x25mL)萃取，EtOAc萃取液随后废弃。用1N HCl酸化水层，直到pH达到5-6，然后用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到所需产物(0.03g，62％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，1.49(m，1H)，1.74(m，2H)，2.02(m，1H)，2.41(m，1H)，3.04-3.21(m，4H)，4.51(d，J＝13.60Hz，1H)，4.71(dd，J＝3.20和12.80Hz，1H)，6.77(br s，1H)，7.75(d，J＝6.80Hz，1H)，7.91(d，J＝10.40Hz，1H)，8.60(s，2H)，10.74(br s，1H)和12.50(br s，1H)。MS：445.12(M+H+)。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，229nm)：98.50％(保留时间＝4.42分钟)。
方案-23：(a)MeOH-H2SO4；(b)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(c)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
制备2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丙酸甲酯(II)：
向2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丙酸(0.20g，0.91mmol)的MeOH(4.0mL)溶液中加入浓H2SO4(0.20mL)，将所得反应混合物加热到68℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸发溶剂，用饱和NaHCO3溶液碱化残余物，然后用EtOAc(3x25.0mL)萃取。合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到所需产物(0.175g，82％)。
制备2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)丙酸甲酯(III)：
通过用氮气吹扫15分钟使2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丙酸甲酯(0.17g，0.73mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.203g，0.80mmol)和KOAc(0.107g，1.09mmol)的1，4-二噁烷(7.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.024g，0.087mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.038g，0.036mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：281.10(M+H)+。
制备2-(4-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)丙酸甲酯(IV)：实施例47
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.094g，0.29mmol)、2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)丙酸甲酯(0.164g，0.58mmol)和K3PO4(0.125g，0.59mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.020g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到90℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，1.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.025g，22％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，1.71(d，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，3.66(s，3H)，5.38(q，J＝7.20Hz，1H)，6.71(br s，1H)，7.85(d，J＝10.80Hz，1H)，7.95(d，J＝6.40Hz，1H)，8.02(s，1H)，8.30(s，1H)和10.73(br s，1H)。MS：390.11(M-H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，249nm)：98.36％(保留时间＝5.32分钟)。
方案-24：(a)Boc酸酐，DMAP，THF；(b)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(c)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000601
制备3-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-1-羧酸叔丁酯(II)：
在氮气气氛下，向3-溴-1-H-吡咯并[2，3-b]吡啶(0.10g，0.50mmol)的THF(4.0mL)溶液中加入DMAP(0.006g，0.06mmol)。将所得反应混合物冷却至-20℃，然后加入Boc酸酐(122μL，0.56mmol)。然后使反应混合物升温至室温，搅拌2小时。在反应完成后(TLC监控)，向反应混合物中加水(20mL)，用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。残余物在硅胶上纯化(60-120M，5％EtOAc-己烷)，得到油状所需产物(0.12g，79％)。
制备3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-1-羧酸叔丁酯(III)：
通过用氮气吹扫15分钟使3-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-1-羧酸叔丁酯(0.115g，0.38mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.108g，0.42mmol)和KOAc(0.056g，0.58mmol)的1，4-二噁烷(4.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.013g，0.046mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.021g，0.019mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到100℃并保持6小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：345.10(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV)：实施例48
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.049g，0.15mmol)、3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-1-羧酸叔丁酯(0.106g，0.31mmol)和K3PO4(0.065g，0.31mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.011g，0.015mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到95℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需的脱-Boc产物(0.016g，29％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.79(br s，1H)，7.17(m，1H)，7.83(m，2H)，7.93(m，1H)，8.08(d，J＝8.00Hz，1H)，8.29(d，J＝1.20Hz，1H)，10.80(br s，1H)和12.03(br s，1H)。MS：356.13(M+H+)。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，223nm)：90.90％(保留时间＝5.17分钟)。
方案-25：(a)伯胺，H2O，80℃，16小时；(b)N-苯基二(三氟甲磺酰亚胺)，DIPEA，DMF，室温，2小时；(c)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(d)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000611
制备取代的环酰胺(II)的一般步骤：
将在水中的6-甲基-4-羟基吡喃酮(1.0当量)和伯胺(1.20当量)的混合物(按重量计稀释5倍)加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，过滤沉淀的固体，用醚洗涤，在真空下干燥，得到所需产物(产率约75％)。
制备三氟甲磺酸酯(III)的一般步骤：
向环酰胺II(1.0当量)的DMF溶液中加入DIPEA(1.15当量)，将所得混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入N-苯基二(三氟甲磺酰亚胺)(1.20当量)。将所得反应混合物在室温下继续搅拌2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物倒在冰冷的水上，用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩，得到所需产物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。
制备硼酸酯(IV)的一般步骤：
向三氟甲磺酸酯III(1.0当量)的1，4-二噁烷溶液(按重量计稀释10倍)中加入二(频哪醇合)二硼(2.0当量)，然后加入KOAc(3.0当量)。将所得溶液用氮气脱气15分钟，然后加入三环己基膦(0.15当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.10当量)。将所得反应混合物再用氮气脱气15分钟，然后加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，用EtOAc稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤。滤液浓缩，不进行纯化直接用于之后的步骤中。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(6-甲基-2-氧代-1-(吡啶-3-基甲基)-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(V-A)：实施例49
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.30g，0.94mmol)、6-甲基-1-(吡啶-3-基甲基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮IV-A(0.47g，1.43mmol)和K3PO4(0.40g，1.88mmol)的DMF-H2O(14.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.065g，0.090mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，7.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.25g，61％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，2.37(s，3H)，3.20(m，2H)，5.34(s，2H)，6.48(s，1H)，6.58(s，1H)，6.70(br s，1H)，7.38(m，1H)，7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，7.77(d，J＝6.40Hz，1H)，7.95(d，J＝10.80Hz，1H)，8.50(s，2H)和10.87(br s，1H)。MS：438.07(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，240nm)：99.13％(保留时间＝4.94分钟)。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(6-甲基-1-((1-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(V-B)：实施例50
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.066g，0.20mmol)、6-甲基-1-((1-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮IV-B(0.14g，0.41mmol)和K3PO4(0.088g，0.41mmol)的DMF-H2O(8.0mL，5∶3)溶液脱气，然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.015g，0.02mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80-90℃并保持4-5小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(4x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(230-400M，8.0-10.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.005g，5％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，1.50(m，2H)，1.87(m，1H)，2.23(s，3H)，2.31(m，2H)，2.49(s，3H)，2.62(m，1H)，3.19(m，4H)，3.97(m，1H)，6.40(s，1H)，6.45(s，1H)，6.91(br s，1H)，7.72(d，J＝6.80Hz，1H)，7.93(d，J＝10.80Hz，1H)，和11.0(br s，1H)。MS：441.15(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，240nm)：85.59％(保留时间＝4.45分钟)。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(6-甲基-1-((1-甲基哌啶-2-基)甲基)-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(V-C)：实施例51
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.075g，0.24mmol)、6-甲基-1-((1-甲基哌啶-2-基)甲基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮IV-C(0.164g，0.47mmol)和K3PO4(0.10g，0.47mmol)的DMF-H2O(8.0mL，5∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.016g，0.023mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到90℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(4x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(230-400M，7.0-8.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.044g，41％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，1.21(m，2H)，1.33(m，2H)，1.52(m，2H)，1.64(m，1H)，2.47(s，3H)，2.94(m，1H)，3.20(m，3H)，3.30(s，3H)，4.24(m，2H)，6.44(s，1H)，6.47(s，1H)，6.76(br s，1H)，7.73(d，J＝6.40Hz，1H)，7.94(d，J＝10.80Hz，1H)和10.89(br s，1H)。MS：458.13(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，240nm)：97.87％(保留时间＝4.77分钟)。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(6-甲基-1-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲基)-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(V-D)：实施例52
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.077g，0.24mmol)、6-甲基-1-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮IV-D(0.16g，0.48mmol)和K3PO4(0.103g，0.48mmol)的DMF-H2O(4.0mL，3∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.017g，0.024mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到90℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x20mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(230-400M，4.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.019g，56％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，2.63(s，3H)，3.18(m，2H)，3.59(s，3H)，5.06(s，2H)，6.36(s，1H)，6.43(s，1H)，6.69(br s，1H)，7.01(br s，1H)，7.48(br s，1H)，7.70(d，J＝6.80Hz，1H)，7.92(d，J＝10.40Hz，1H)和10.80(brs，1H)。MS：441.26(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，240nm)：98.35％(保留时间＝4.76分钟)。
制备2-((4-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)-6-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(V-E)：实施例53
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.07g，0.22mmol)、2-((6-甲基-2-氧代-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-1(2H)-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯IV-E(0.184g，0.44mmol)和K3PO4(0.094g，0.44mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.014g，0.02mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，5.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.02g，17％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，1.23(s，9H)，1.74-1.85(m，4H)，2.02(m，1H)，2.41(s，3H)，3.20(m，2H)，3.89(m，1H)，4.03(m，1H)，4.21(br s，1H)，4.33(br s，1H)，6.39-6.45(m，2H)，6.70(br s，1H)，7.67(d，J＝6.80Hz，1H)，7.93(d，J＝10.40Hz，1H)和10.82(br s，1H)。MS：530.21(M+H)+。
定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，259nm)：97.62％(保留时间＝5.73分钟)。
制备1-(5-(1-(3-(二甲基氨基)丙基)-6-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)-6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(V-F)：实施例54
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.08g，0.25mmol)、1-(3-(二甲基氨基)丙基)-6-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮IV-F(0.16g，0.50mmol)和K3PO4(0.106g，0.50mmol)的DMF-H2O(7.0mL，4∶3)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.018g，0.02mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到90℃并保持1小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，饱和了1％氨水的9.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.02g，19％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，1.81(m，2H)，2.29(s，6H)，2.46(m，5H)，3.20(m，2H)，3.99(m，2H)，6.41(s，1H)，6.45(s，1H)，6.78(br s，1H)，7.71(d，J＝6.80Hz，1H)，7.93(d，J＝10.40Hz，1H)和10.85(br s，1H)。MS：432.16(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，238nm)：96.96％(保留时间＝4.37分钟)。
方案-26：(a)NH2OH.HCl，NaOH，EtOH，60-65℃，16小时；(b)乙酸，乙酸酐，100℃，2小时；(c)联硼酸频哪醇酯，KOAc，Pd2(dba)3，三环己基膦，1，4-二噁烷；(d)3-(5-溴吡啶-2基)-5-甲基-1，2，4-噁二唑III，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000661
制备5-溴-N′-羟基脒基吡啶(picolinimidamide)(II)：
向5-溴-2-氰基吡啶(1.0g，5.50mmol)的EtOH(100.0mL)溶液中加入NaOH溶液(0.22g，5.50mmol，溶解在2.0ml H2O中)，然后加入NH2OH.HCl(0.38g，5.50mmol)。将所得溶液加热到60-65℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸发溶剂，用3％HCl溶液(20.0mL)酸化残余物，加热到100℃，直到获得澄清溶液。然后，将反应混合物冷却到室温，用DCM(2x50mL)萃取，DCM萃取液随后废弃。用氨水溶液碱化水层，直到pH为8，用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到所需产物(0.75g，64％)。MS：216.01(M+H)+。
制备3-(5-溴吡啶-2基)-5-甲基-1，2，4-噁二唑(III)：
向5-溴-N′-羟基脒基吡啶II(0.75g，3.50mmol)的乙酸(50.0mL)溶液中加入乙酸酐(0.75mL，7.0mmol)，将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去乙酸，加水(25.0mL)，用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到所需产物(0.27g，45％)。MS：240.01(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(V)：
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.135g，0.42mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.19g，0.47mmol)和KOAc(0.065g，0.64mmol)的1，4-二噁烷(10.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.015g，0.05mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.02g，0.02mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到100℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：365.10(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(6-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(VI)：实施例55
通过用氮气吹扫15分钟使3-(5-溴吡啶-2基)-5-甲基-1，2，4-噁二唑III(0.070g，0.30mmol)、1-乙基-3-(6-氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲V(0.11g，0.30mmol)和K3PO4(0.077g，0.36mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.04g，0.05mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到95-100℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.50-3.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.011g，9％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，2.71(s，3H)，3.19(五重峰，J＝7.20Hz，2H)，6.72(br s，1H)，7.90(d，J＝6.80Hz，1H)，8.02(d，J＝10.40Hz，1H)，8.16(m，1H)，8.24(m，1H)，8.98(s，1H)和10.84(br s，1H)。MS：399.09(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEHC-18，100x2.1mm，262nm)：85.87％(保留时间＝5.44分钟)。
方案-27：(a)联硼酸新戊二醇酯，KOAc，PdCl2(dppf)，DMSO，80℃，3小时(b)2-氯-4-甲氧基-吡啶，Cs2CO3，Pd(PPh3)4，DMSO，80℃，16小时。
Figure BPA00001195242000681
制备1-乙基-3-[6-氟-5-(4-甲氧基-吡啶-2基)-苯并噻唑-2-基]-脲(III)：实施例56
在室温下向1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(I)(0.15g，0.47mmol)的DMSO(5mL)溶液中加入KOAc(0.14g，1.41mmol)和联硼酸新戊二醇酯(bis(neopentyl glycolato)diboron)(0.21g，0.94mmol)。通过用氮气吹扫使所得混合物脱气15-20分钟，然后加入PdCl2.dppf(0.013g，0.02mmol)。将该反应混合物再脱气15-20分钟，然后加热到80℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，然后原位加入2-氯-4-甲氧基-吡啶(0.035g，0.24mmol)和Cs2CO3(0.08g，3.70M，在H2O中)。将所得反应混合物脱气10-15分钟，然后加入Pd(PPh3)4(0.20g，0.02mmol)。最后将所得反应混合物脱气15-20分钟，加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，向反应混合物中加水，用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，蒸发。粗制残余物在硅胶上纯化(230-400M，2-3％MeOH-DCM)，得到米色固体状的所需产物(0.07g，4.3％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，3.89(s，3H)，6.69(br s，1H)，7.02(d，J＝3.60Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.93(d，J＝10.80Hz，1H)，8.06(d，J＝6.00Hz，1H)，8.54(d，J＝5.60Hz，1H)和10.86(br s，1H)。MS：347.12(M+H+)。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，247nm)：98.52％(保留时间＝5.07分钟)。
方案-28：(a)相应的溴化物，联硼酸频哪醇酯，KOAc，三环己基膦，Pd2(dba)3，1，4-二噁烷；(b)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O；(c)BBr3-DCM，-78℃。
Figure BPA00001195242000691
制备2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶(II-A)：
通过用氮气吹扫15分钟使5-溴-2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶(0.25g，0.98mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.27g，1.07mmol)和KOAc(0.12g，1.46mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.027g，0.096mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.044g，0.048mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：305.20(M+H)+。
制备3-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(II-B)：
通过用氮气吹扫15分钟使3-溴-5-甲氧基吡啶(0.10g，0.53mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.15g，0.59mmol)和KOAc(0.078g，0.80mmol)的1，4-二噁烷(8.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.018g，0.06mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.024g，0.03mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：236.10(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(III-A)：实施例57
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.13g，0.41mmol)、2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶II-A(0.25g，0.82mmol)和K3PO4(0.173g，0.82mmol)的DMF-H2O(5.0mL，4∶1)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.057g，0.05mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，4.20％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.03g，18％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，2.26(s，3H)，2.43(br s，4H)，3.20(五重峰，J＝7.20Hz，2H)，3.80(br s，4H)，6.72(br s，1H)，7.75(d，J＝6.80Hz，1H)，7.91(d，J＝10.40Hz，1H)，8.60(s，2H)和10.75(br s，1H)。MS：416.28(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，229nm)：96.97％(保留时间＝5.04分钟)。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(5-甲氧基吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(III-B)：实施例58
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.10g，0.31mmol)、3-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶II-B(0.148g，0.62mmol)和K3PO4(0.067g，0.31mmol)的DMF-H2O(2.50mL，2∶0.5)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.022g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(60-120M，2.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.091g，84％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(五重峰，J＝7.20Hz，2H)，3.89(s，3H)，6.70(br s，1H)，7.58(br s，1H)，7.81(d，J＝7.20Hz，1H)，7.97(d，J＝10.0Hz，1H)，8.33(m，1H)，8.38(br s，1H)和10.79(br s，1H)。MS：347.13(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，244nm)：95.04％(保留时间＝5.29分钟)。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(5-羟基吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV)：实施例59
将1-乙基-3-(6-氟-5-(5-甲氧基吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲III-B(0.025g，0.07mmol)的DCM(5.0mL)溶液冷却到-78℃，然后加入BBr3(0.036g，0.14mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌1小时。在反应完成后(TLC监控)，将溶液再冷却到-78℃，通过滴加水(5.0mL)猝灭，用饱和NaHCO3溶液碱化，用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。残余物在硅胶上纯化(100-200M，2％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.018g，75％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.71(br s，1H)，7.34(br s，1H)，7.73(d，J＝7.20Hz，1H)，7.95(d，J＝10.40Hz，1H)，8.16(d，＝2.40Hz，1H)，8.24(s，1H)，10.10(br s，1H)和10.80(br s，1H)。MS：333.16(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，244nm)：96.71％(保留时间＝4.83分钟)。
方案-29：(a)联硼酸频哪醇酯，KOAc，三环己基膦，Pd2(dba)3，1，4-二噁烷；(b)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O；(c)NH2OH.HCl，NaHCO3，EtOH。
Figure BPA00001195242000711
制备5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶腈(picolinonitrile)(II)：
通过用氮气吹扫15分钟使5-溴-2-氰基吡啶(0.50g，2.73mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.76g，3.0mmol)和KOAc(0.34g，4.10mmol)的1，4-二噁烷(10.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.091g，0.33mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.14g，0.14mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：231.10(M+H)+。
制备1-(5-(6-氰基吡啶-3-基)-6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(III)：
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.10g，0.31mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶腈(0.144g，0.63mmol)和K3PO4(0.133g，0.63mmol)的DMF-H2O(5.0mL，4∶1)溶液脱气。然后向反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.022g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.075g，71％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.71(br s，1H)，7.90(d，J＝6.80Hz，1H)，8.03(d，J＝10.80Hz，1H)，8.15(m，1H)，8.31(m，1H)，9.0(s，1H)和10.90(br s，1H)。MS：340.06(M-H)+。
制备5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)-N′-羟基脒基吡啶(IV)：实施例60
向1-(5-(6-氰基吡啶-3-基)-6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.075g，0.22mmol)的EtOH(5.0mL)溶液中加入NaHCO3(0.055，0.66mmol)，然后加入NH2OH.HCl(0.045g，0.66mmol)。将所得反应混合物加热到78℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸发EtOH，加水，用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。残余物在硅胶上纯化(100-200M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.038g，46％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，5.89(br s，2H)，6.76(br s，1H)，7.82(d，J＝6.80Hz，1H)，7.96(m，2H)，8.05(m，1H)，8.78(s，1H)，10.0(s，1H)和10.82(br s，1H)。MS：375.15(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，258nm)：90.12％(保留时间＝4.97分钟)。
方案-30：(a)MeI，NaH，THF(对于II-A)，4-(2-氯乙基)吗啉，KOH，DMSO(对于II-B)，N，N-二甲基氨基乙基氯.HCl，KOH，DMSO(对于II-C)和1-Boc-3-溴甲基哌啶，KOH，DMSO(对于II-D)；(b)联硼酸频哪醇酯，KOAc，三环己基膦，Pd2(dba)3，1，4-二噁烷；(c)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
制备4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(II-A)：
向冰冷的2-羟基-4-溴吡啶(1.0g，5.75mmol)的THF(20.0mL)溶液中分批加入NaH(60％，在矿物油中，0.23g，5.75mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入甲基碘(1.10mL，17.24mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到0℃，加水，用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩，得到所需产物(0.99g，92％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ3.38(s，3H)，6.44(dd，J＝2.0和7.20Hz，1H)，6.69(d，J＝2.0Hz，1H)和7.69(d，J＝7.20Hz，1H)。
制备4-溴-1-(2-吗啉代乙基)吡啶-2(1H)-酮(II-B)：
向2-羟基-4-溴吡啶(0.10g，0.57mmol)的DMSO(1.0mL)溶液中加入KOH(0.13g，2.29mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后加入4-(2-氯乙基)吗啉(0.13g，0.69mmol)。然后，将反应混合物在45℃搅拌30分钟。在反应完成后(TLC监控)，向反应中加水，用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。残余物在硅胶上纯化(100-200M，5％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.085g，52％)。MS：287.10(M+H)+。
制备4-溴-1-(2-(二甲基氨基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(II-C)：
向2-羟基-4-溴吡啶(0.10g，0.57mmol)的DMSO(1.0mL)溶液中加入KOH(0.13g，2.29mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后加入N，N-二甲基氨基乙基氯.HCl(0.098g，0.68mmol)。然后，将反应混合物在40℃搅拌1小时。在反应完成后(TLC监控)，向反应中加水，用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。残余物用醚研制，得到所需产物(0.10g，72％)。MS：245.10(M+H)+。
制备3-((4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(II-D)：
向2-羟基-4-溴吡啶(0.10g，0.57mmol)的DMSO(1.50mL)溶液中加入KOH(0.095g，1.70mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后加入1-Boc-3-溴甲基哌啶(0.16g，0.57mmol)。然后，将反应混合物在45℃搅拌16小时。在反应完成后(TLC监控)，向反应中加水，用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。残余物在硅胶上纯化(100-200M，1％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.15g，95％)。MS：371.10(M+H)+。
制备1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(III-A)：
通过用氮气吹扫15分钟使4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮II-A(0.50g，2.66mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.74g，2.93mmol)和KOAc(0.39g，3.99mmol)的1，4-二噁烷(10.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.090g，0.32mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.14g，0.13mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80-85℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：236.23(M+H)+。
制备1-(2-吗啉代乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(III-B)：
通过用氮气吹扫15分钟使4-溴-1-(2-吗啉代乙基)吡啶-2(1H)-酮II-B(0.085g，0.30mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.089g，0.35mmol)和KOAc(0.036g，0.44mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.012g，0.04mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.015g，0.014mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80℃并保持1小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：335.23(M+H)+。
制备1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(III-C)：
通过用氮气吹扫15分钟使4-溴-1-(2-(二甲基氨基)乙基)吡啶-2(1H)-酮II-C(0.10g，0.41mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.12g，0.49mmol)和KOAc(0.05g，0.61mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.017g，0.06mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.021g，0.020mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80℃并保持1小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：293.20(M+H)+。
制备3-((2-氧代-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(III-D)：
通过用氮气吹扫15分钟使3-((4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯II-D(0.15g，0.40mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.122g，0.48mmol)和KOAc(0.049g，0.61mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.017g，0.06mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.021g，0.020mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到100℃并保持1小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：419.20(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-A)：实施例61
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.20g，0.63mmol)、1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮III-A(0.18g，0.75mmol)和K3PO4(0.20g，0.96mmol)的DMF-H2O(11.0mL，7∶4)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.044g，0.06mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持1小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.065g，30％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(五重峰，J＝7.20Hz，2H)，3.44(s，3H)，6.44(d，J＝7.20Hz，1H)，6.57(s，1H)，6.70(br s，1H)，7.73(d，J＝6.40Hz，1H)，7.77(d，J＝6.80Hz，1H)，7.94(d，J＝10.40Hz，1H)和10.82(br s，1H)。MS：345.09(M-H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，238nm)：92.19％(保留时间＝4.64分钟)。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(1-(2-吗啉代乙基)-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-B)：实施例62
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.05g，0.16mmol)、1-(2-吗啉代乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮III-B(0.08g，0.22mmol)和K3PO4(0.05g，0.24mmol)的DMF-H2O(7.0mL，5∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.012g，0.017mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到95℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，5.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.020g，28％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，2.50(m，4H)，2.58(t，J＝6.0Hz，2H)，3.20(m，2H)，3.55(t，J＝4.40Hz，4H)，4.03(t，J＝6.40Hz，2H)，6.47(d，J＝6.80Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.70(br s，1H)，7.73(m，2H)，7.94(d，J＝10.40Hz，1H)和10.83(br s，1H)。MS：446.15(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，238nm)：95.30％(保留时间＝4.81分钟)。
制备1-(5-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)-6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(IV-C)：实施例63
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.12g，0.41mmol)、1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮III-C(0.065g，0.21mmol)和K3PO4(0.13g，0.62mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.028g，0.041mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，9.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.037g，41％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，2.21(s，6H)，2.55(m，2H)，3.20(m，2H)，4.01(t，J＝6.0Hz，2H)，6.46(d，J＝6.80Hz，1H)，6.56(s，1H)，6.73(br s，1H)，7.72(m，2H)，7.95(d，J＝10.40Hz，1H)和10.86(br s，1H)。MS：404.23(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，238nm)：96.07％(保留时间＝4.42分钟)。
制备3-((4-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)-2，2′-二氧代-2H-1，4′-联吡啶-1′(2′H)-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(IV-D)：实施例64
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.15g，0.47mmol)、3-((2-氧代-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯III-D(0.39g，0.94mmol)和K3PO4(0.15g，0.26mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.033g，0.047mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到100℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.032g，11％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，1.19(m，1H)，1.33(s，9H)，1.67(m，2H)，1.88(m，2H)，2.30(m，1H)，2.79(m，1H)，3.20(m，2H)，3.73-3.82(m，4H)，6.49(d，J＝6.80Hz，1H)，6.60(s，1H)，6.70(br s，1H)，7.74(m，2H)，7.95(d，J＝10.80Hz，1H)和10.85(br s，1H)。LCMS：84.22％(保留时间＝3.34分钟)。
方案-31：(a)Na(OAc)3BH，冰乙酸，吗啉，DCM，室温，4小时；(b)联硼酸频哪醇酯，KOAc，三环己基膦，Pd2(dba)3，1，4-二噁烷；(c)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000781
制备(5-溴吡啶-2基)甲醇(II-A)和4-((5-溴吡啶-2基)甲基)吗啉(II-B)：
向5-溴-吡啶-2-甲醛(carbaldehyde)(0.30g，1.62mmol)的DCM(15mL)溶液中加入吗啉(0.10g，1.13mmol)和冰乙酸(2mL)，将所得反应混合物搅拌30分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.86g，4.05mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。在反应完成后(TLC监控)，用DCM稀释反应混合物，加水，萃取有机层。有机层用Na2SO4干燥，浓缩。粗制残余物在硅胶上纯化[100-200M，化合物II-A(0.21g，69％)用1.50％EtOAc-己烷洗脱，化合物II-B(0.12g，28％)用5％EtOAc-己烷洗脱]。
制备(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2基)甲醇(III-A)：
通过用氮气吹扫15分钟使(5-溴吡啶-2基)甲醇II-A(0.20g，1.06mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.32g，1.27mmol)和KOAc(0.13g，1.59mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.045g，0.16mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.055g，0.053mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：236.20(M+H)+。
制备4-((5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2基)甲基)吗啉(III-B)：
通过用氮气吹扫15分钟使4-((5-溴吡啶-2基)甲基)吗啉II-B(0.10g，0.39mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.12g，0.47mmol)和KOAc(0.048g，0.59mmol)的1，4-二噁烷(5.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.017g，0.05mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.02g，0.02mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80℃并保持8小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：305.20(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(6-(羟基甲基)吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-A)：实施例65
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.10g，0.31mmol)、(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2基)甲醇III-A(0.15g，0.63mmol)和K3PO4(0.13g，0.62mmol)的DMF-H2O(6.0mL，4∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.022g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.80％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.050g，46％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，4.63(d，J＝6.0Hz，2H)，5.49(t，J＝5.60Hz，1H)，6.71(br s，1H)，7.56(d，J＝8.0Hz，1H)，7.77(d，J＝6.80Hz，1H)，7.96(d，J＝10.40Hz，1H)，8.0(m，1H)，8.68(s，1H)和10.79(br s，1H)。MS：347.17(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，248nm)：96.75％(保留时间＝4.75分钟)。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(6-(吗啉代甲基)吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV-B)：实施例66
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.07g，0.22mmol)、4-((5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2基)甲基)吗啉III-A(0.134g，0.44mmol)和K3PO4(0.094g，0.44mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.014g，0.02mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，5.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.007g，8％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，2.45(m，4H)，3.20(m，2H)，3.61(m，4H)，3.64(s，2H)，6.71(br s，1H)，7.57(d，J＝8.0Hz，1H)，7.77(d，J＝6.80Hz，1H)，7.93-8.0(m，2H)，8.70(s，1H)和10.80(br s，1H)。MS：416.24(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，249nm)：92.05％(保留时间＝5.35分钟)。
方案-32：(a)1-Boc-3-羟基吡咯烷，三苯基膦，DIAD，THF；(b)联硼酸频哪醇酯，KOAc，三环己基膦，Pd2(dba)3，1，4-二噁烷；(c)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O；(d)HCl-1，4-二噁烷。
Figure BPA00001195242000811
制备3-(4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(II)：
向冰冷的三苯基膦(0.17g，0.63mmol)的THF(10.0mL)溶液中加入DIAD(0.12mL，0.63mmol)，将所得溶液在相同温度下搅拌15分钟，然后形成黄色沉淀。然后，向反应混合物中加入1-Boc-3-羟基吡咯烷(0.10g，0.53mmol)，搅拌20分钟，然后加入4-溴-2-羟基吡啶(0.093g，0.53mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成后(TLC监控)，用水稀释反应混合物，用EtOAc(3x50ml)萃取。合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。残余物在硅胶上纯化(100-200M，0.5％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.20g，定量产量)。MS：343.10(M+H)+。
制备3-(2-氧代-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-1(2H)-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(III)：
通过用氮气吹扫15分钟使3-(4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.20g，0.58mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.29g，1.16mmol)和KOAc(0.17g，1.74mmol)的1，4-二噁烷(7.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.025g，0.87mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.053g，0.058mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：391.20(M+H)+。
制备3-(4-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(IV)：
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.07g，0.31mmol)、3-(2-氧代-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-1(2H)-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.24g，0.62mmol)和K3PO4(0.13g，0.62mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.022g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，1.50％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.056g，36％)。MS：502.20(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(2-氧代-1-(吡咯烷-3-基)-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(V)：实施例67
将3-(4-(2-(3-乙基脲基)-6-氟苯并[d]噻唑-5-基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.055g，0.11mmol)的HCl-1，4-二噁烷(3.0mL)溶液在室温下搅拌30分钟。在反应完成后(TLC监控)，蒸发溶剂，残余物用醚研制，得到所需产物(0.01g，45％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，1.30(m，1H)，1.81(m，1H)，2.27(m，1H)，3.15(m，2H)，3.20(m，2H)，3.40(m，1H)，5.63(m，1H)，6.85(br s，1H)，7.01(s，1H)，7.29(m，1H)，7.79(d，J＝6.80Hz，1H)，7.98(d，J＝10.80Hz，1H)，8.28(d，J＝5.20Hz，1H)，9.13(br s，1H)和10.90(brs，1H)。LCMS：402.09(86.80％)。
方案-33：(a)m-CPBA，DCM；(b)梅钟酸(Meldrum’s acid)，乙酸酐；(c)浓HCl 80℃；(d)甲基胺，HOBt，EDCI.HCl；(e)Pd2(dba)3，三环己基膦，KOAc，1，4-1，4-二噁烷，80℃，8-10小时；(f)1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲，K3PO4，PdCl2(PPh3)2，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000831
直到中间体IV：[(5-溴-吡啶-2基)-乙酸]的合成参见：Tetrahedron，53，24，1997，8257-8268。
制备[2-(5-溴-吡啶-2基)-N-甲基-乙酰胺](V)：
向5-溴-吡啶-2基-乙酸(0.87g，4.0mmol)的THF(12mL)悬浮液中加入HOBt(0.74g，4.8mmol)和EDCI.HCl(0.85g，4.4mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌15-20分钟，然后滴加甲胺(2.0M，在THF中，4.05mL，8.0mmol)。然后，将所得混合物在室温下继续搅拌6-7小时。在反应完成后，加水，用EtOAc萃取。粗制残余物在二氧化硅上纯化(60-120M，2.50％MeOH-DCM)，得到浅黄色固体化合物(0.25g，27％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.58(d，J＝4.80Hz，3H)，3.57(s，2H)，7.33(m，1H)，7.96(d，J＝2.40Hz和8.40Hz，1H)，8.00(br s，1H)和8.58(d，J＝2.40Hz，1H)。MS：229.11(M+H+)。
制备N-甲基-2-[5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-吡啶-2基]-乙酰胺(VI)：
通过用氮气鼓泡15-20分钟使2-(5-溴-吡啶-2基)-N-甲基-乙酰胺](0.5g，0.22mmol)的1，4-1，4-二噁烷溶液脱气，然后依次加入Pd2(dba)3(0.01g，0.01mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.06g，0.24mmol)、三环己基膦(0.007g 0.03mmol)和乙酸钾(0.03g，0.033mmol)。将反应混合物再脱气15-20分钟，然后加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，反应混合物冷却，用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土床过滤。滤液用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，用己烷洗涤。粗制油状化合物(60mg)不进行纯化而直接用于之后的步骤。MS：277.26(M+H+)。
制备2-{5-[2-(3-乙基-脲基)-6-氟-苯并噻唑-5-基]-吡啶-2基}-N-甲基-乙酰胺(VII)：实施例68
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.07g，0.22mmol)、N-甲基-2-[5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-吡啶-2基]-乙酰胺VI(0.122g，0.44mmol)和K3PO4(0.094g，0.44mmol)的DMF-H2O(8.0mL，5∶3)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.016g，0.022mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到100℃并保持6小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(230-400M，4％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.006g，7％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.09(t，J＝6.80Hz，3H)，2.60(d，J＝3.60Hz，3H)，3.18(m，2H)，3.65(s，2H)，6.73(br s，1H)，7.45(d，J＝8.00Hz，1H)，7.77(d，J＝6.40Hz，1H)，7.96(d，J＝9.20Hz，2H)，8.08(br s，1H)，8.68(s，1H)和10.81(br s，1H)。MS：388.21(M+H+)。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，249nm)：97.02％(保留时间＝4.69分钟)。
方案-34：(a)5-(三丁基甲锡烷基)噻唑(对于II-A)和2-(甲基磺酰基)-5-(三丁基甲锡烷基)嘧啶(对于II-B)，Pd(PPh3)4，DMF。
Figure BPA00001195242000841
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(噻唑-5-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(II-A)：实施例69
向1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.10g，0.31mmol)的DMF(4.0mL)溶液中加入5-(三丁基甲锡烷基)噻唑(0.18g，0.47mmol)，通过用氮气吹扫15分钟使所得溶液脱气，然后加入Pd(PPh3)4(0.036g，0.03mmol)。将所得反应混合物用氮气再脱气15分钟，然后加热到100℃并保持1小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.0％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.033g，33％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(m，2H)，6.72(br s，1H)，7.97-8.04(m，2H)，8.43(s，1H)，9.19(s，1H)和10.82(br s，1H)。MS：323.13(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，262nm)：88.55％(保留时间＝5.18分钟)。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(II-B)：实施例70
向1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(0.06g，0.19mmol)的DMF(4.0mL)溶液中加入2-(甲基磺酰基)-5-(三丁基甲锡烷基)嘧啶(0.13g，0.28mmol)，通过用氮气吹扫15分钟使所得溶液脱气，然后加入Pd(PPh3)4(0.022g，0.019mmol)。将所得反应混合物用氮气再脱气15分钟，然后加热到100℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(230-400M，1.60％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.007g，10％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.19(m，2H)，3.47(s，3H)，6.72(br s，1H)，8.03(d，J＝6.80Hz，1H)，8.08(d，J＝10.40Hz，1H)，9.34(s，2H)和10.86(br s，1H)。MS：393.95(M-H)+。LCMS：395.99(M+H)+，90.39％。
方案-35：(a)Et3N，乙酰氯，DCM；(b)Br2，AcOH，65℃；(c)EtOH，HCl，80℃；(d)(i)硫氰酸铵，(ii)Br2，AcOH；(e)异氰酸乙酯，1，4-二噁烷，80℃；(f)吡啶-3-硼酸，PdCl2(dppf)，K3PO4，1，4-二噁烷，MeOH。
Figure BPA00001195242000861
制备N-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(II)：
向冰冷的对茴香胺(25g，203.0mmol)的DCM(300.0mL)溶液中滴加三乙胺(90.0mL，609.0mmol)，将反应混合物在相同温度下搅拌15分钟。然后，加入乙酰氯(23.0mL，304.50mmol)，将反应混合物在室温下继续搅拌1小时。在反应完成后(TLC监控)，加水(500mL)，用DCM(2x300mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩，得到所需产物(30.0g，90％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.99(s，3H)，3.70(s，3H)，6.86(d，J＝8.80Hz，2H)，7.48(d，J＝8.80Hz，2H)和9.77(br s，1H)。制备N-(3-溴-4-甲氧基苯基)乙酰胺(III)：
向N-(4-甲氧基苯基)乙酰胺II(7.50g，45.40mmol)的乙酸(50mL)溶液中加入Br2(4.70mL，90.80mmol)的乙酸(10.0mL)溶液。然后，将所得反应混合物加热到65℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去乙酸，将残余物冷却到0℃，然后用氨水碱化到pH 12，然后用EtOAc(2x500.0mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗制残余物在硅胶上纯化(60-120M，25-30％EtOAc-己烷)，得到所需产物(5.0g，45％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.0(s，3H)，3.79(s，3H)，7.06(d，J＝8.80Hz，1H)，7.44(dd，J＝2.40和8.80Hz，1H)，7.91(d，J＝2.40Hz，1H)和9.92(br s，1H)。MS：244.15(M+H)+。
制备3-溴-4-甲氧基苯胺(IV)：
向N-(3-溴-4-甲氧基苯基)乙酰胺III(5.0g，20.50mmol)的EtOH(40.0mL)溶液中加入浓HCl(20.0mL)，将反应混合物加热到80℃并保持4-5小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去EtOH，将残余物冷却到0℃，然后用氨水碱化到pH 12，用EtOAc(2x250mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩，得到所需产物(3.56g，87％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ3.67(s，3H)，4.88(br s，2H)，6.54(dd，J＝2.40和8.40Hz，1H)和6.80(m，2H)。MS：202.17(M+H)+。
制备5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-胺(V)：
向3-溴-4-甲氧基苯胺IV(2.0g，9.90mmol)的AcOH(25.0mL)溶液中加入硫氰酸铵(3.80g，49.50mmol)，将反应混合物在室温下搅拌1小时。然后，将反应混合物冷却到0℃，然后加入Br2(0.60mL，11.0mmol)的AcOH(10.0mL)溶液。然后，将该反应混合物在室温下搅拌2小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去AcOH，将残余物冷却到0℃，然后用氨水碱化到pH 12，用EtOAc(2x250mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩，得到所需产物(2.0g，78％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ3.80(s，3H)，7.41(br s，2H)，7.49(s，1H)和7.50(s，1H)。
制备1-(5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(VI)：
向5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-胺V(2.0g，7.72mmol)的1，4-二噁烷(20.0mL)溶液中加入异氰酸乙酯(3.0mL，38.60mmol)，将所得反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去1，4-二噁烷，然后与正己烷共蒸馏(2次)。然后，将残余物与水在90℃一起搅拌2小时，然后过滤，得到所需产物，该产物进一步用热水洗涤，干燥。最后，用醚洗涤残余物，得到所需产物(2.10g，83％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.07(t，J＝7.20Hz，3H)，3.17(五重峰，J＝6.80Hz，2H)，3.86(s，3H)，6.65(br s，1H)，7.68(s，1H)，7.80(s，1H)和10.67(br s，1H)。MS：330.08(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-甲氧基-5-(吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(VII)：实施例71
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲VI(0.20g，0.60mmol)、吡啶-3-硼酸(0.11g，0.90mmol)和K3PO4(0.20g，0.90mmol)的1，4-二噁烷-MeOH(8.0mL，5∶3)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入与二氯甲烷络合的[1，1’-二(二苯基膦基)-二茂铁]二氯钯(II)(0.05g，0.06mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持2-3小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，3-4％MeOH-DCM)，得到所需产物，该产物最后用50％DCM-醚的混合物洗涤，得到0.09克(45％)产物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.09(t，J＝7.20Hz，3H)，3.18(五重峰，J＝6.80Hz，2H)，3.81(s，3H)，6.67(br s，1H)，7.44(m，1H)，7.56(s，1H)，7.69(s，1H)，7.93(m，1H)，8.53(d，J＝3.60z，1H)，8.70(s，1H)和10.62(br s，1H)。MS：329.23(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，246nm)：99.29％(保留时间＝4.95分钟)。
方案-36：(a)MeI，NaH，THF；(b)联硼酸频哪醇酯，KOAc，三环己基膦，Pd2(dba)3，1，4-二噁烷；(c)1-(5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲，K3PO4，二氯二(三苯基膦)-钯(II)，DMF-H2O。
Figure BPA00001195242000881
制备4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(II)：
向冰冷的2-羟基-4-溴吡啶(1.0g，5.75mmol)的THF(20.0mL)溶液中分批加入NaH(60％的矿物油悬浮液，0.23g，5.75mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入甲基碘(1.10mL，17.24mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到0℃，加水，用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩，得到所需产物(0.99g，92％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ3.38(s，3H)，6.44(dd，J＝2.0和7.20Hz，1H)，6.69(d，J＝2.0Hz，1H)和7.69(d，J＝7.20Hz，1H)。
制备1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(III)：
通过用氮气吹扫15分钟使4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮II(0.50g，2.66mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.74g，2.93mmol)和KOAc(0.39g，3.99mmol)的1，4-二噁烷(10.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.090g，0.32mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.14g，0.13mmol)，用氮气再脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80-85℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：236.23(M+H)+。
制备1-乙基-3-(6-甲氧基-5-(1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(IV)：实施例72
通过用氮气吹扫15分钟使1-(5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-3-乙基脲(0.10g，0.30mmol)、1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮III(0.08g，0.33mmol)和K3PO4(0.10g，0.45mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.02g，0.03mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，3-4％MeOH-DCM)，得到所需产物，该产物最后用50％DCM-醚的混合物洗涤，得到0.018克(16％)产物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，3.21(五重峰，J＝6.80Hz，2H)，3.44(s，3H)，3.81(s，3H)，6.39(dd，J＝1.60和6.80Hz，1H)，6.48(d，J＝1.20Hz，1H)，6.67(br s，1H)，7.51(s，1H)，7.67(m，2H)和10.64(br s，1H)。MS：359.20(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，237nm)：94.71％(保留时间＝4.52分钟)。
方案-37：(a)苯甲酰基异硫氰酸酯，丙酮；(b)Pd2(dba)3，dppf，KOtBu，1，4-二噁烷，80℃，20小时；(c)70％浓H2SO4，140℃，1小时；(d)异氰酸乙酯，1，4-二噁烷，70℃，8-10小时(e)N-苯基三氟甲磺酰亚胺(triflimide)，DIPEA，DMF；(f)吡啶-3-硼酸(对于VII-A)，K3PO4，PdCl2(dppf)，1，4-二噁烷∶甲醇，80℃，2小时，或二(新戊基甘醇酸合二硼，KOAc，DMSO，4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮，Cs2CO3，Pd(PPh3)4，80℃，16小时。
Figure BPA00001195242000901
制备1-苯甲酰基-3-(5-苄氧基-2-溴-4-甲基-苯基)-硫脲(II)：
在室温下向5-苄氧基-2-溴-4-甲基-苯基胺(0.50g，1.71mmol)的丙酮(20mL)溶液中滴加苯甲酰基异硫氰酸酯(0.28mL，2.08mmol)。将所得反应混合物在相同温度下搅拌30分钟。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去丙酮，将固体残余物在己烷中搅拌5-10分钟，然后过滤，得到白色固体状的所需产物(0.70g，88％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.20(s，3H)，5.10(s，2H)，7.33(m，1H)，7.40(t，J＝7.20Hz，2H)，7.48(d，J＝7.60Hz，2H)，7.55(m，3H)，7.67(m，1H)，7.73(s，1H)，8.0(d，J＝7.20Hz，2H)，11.81(br s，1H)和12.59(br s，1H)。
制备N-(5-苄氧基-6-甲基-苯并噻唑-2-基)-苯甲酰胺(III)：
在室温下，在氮气气氛下向1-苯甲酰基-3-(5-苄氧基-2-溴-4-甲基-苯基)-硫脲II(1.0g，2.20mmol)的1，4-二噁烷(30mL)溶液中依次加入Pd2(dba)3(0.12g，0.12mmol)、dppf(0.07g，0.12mmol)和KOtBu(0.75g，3.30mmol)。将所得反应混合物在80℃加热6小时。在反应完成后(TLC监控)，用EtOAc稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤。滤液浓缩，在硅胶上纯化(100-200M，20％EtOAc-己烷)，得到所需产物(0.50g，61％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.31(s，3H)，5.23(s，2H)，7.33(m，1H)，7.39(m，3H)，7.52(m，2H)，7.54(m，2H)，7.64(m，1H)，7.76(s，1H)，8.13(d，J＝7.60Hz，2H)和12.77(br s，1H)。MS：375.19(M+H)+。
制备2-氨基-6-甲基-苯并噻唑-5-醇(IV)：
向冰冷的N-(5-苄氧基-6-甲基-苯并噻唑-2-基)-苯甲酰胺(0.60g，1.60mmol)溶液中加入70％的H2SO4水溶液(5-6mL)。将所得混合物加热到140℃并保持和1小时。在反应完成后(TLC监控)，用Na2CO3水溶液碱化反应混合物(pH10)，用EtOAc(2x300mL)萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到白色固体状的所需产物(0.20g，70％)。MS：181.16(M+H)+。
制备1-乙基-3-(5-羟基-6-甲基-苯并噻唑-2-基)-脲(V)：
在室温下向2-氨基-6-甲基-苯并噻唑-5-醇(0.20g，1.11mmol)的1，4-二噁烷(5mL)溶液中加入异氰酸乙酯(0.13mL，1.68mmol)。将所得混合物加热到60-65℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去1，4-二噁烷，与己烷共蒸发(两次)。用水处理固体残余物至60-70℃并保持2-4小时。过滤出所得固体，在真空下干燥，得到白色固体化合物(0.17g，61％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.07(t，J＝7.20Hz，3H)，2.17(s，3H)，3.16(m，2H)，6.68(br s，1H)，7.00(s，1H)，7.47(s，1H)，9.33(s，1H)和10.43(br s，1H)，MS：252.18(M+H+)。
制备三氟甲磺酸2-(3-乙基脲基)-6-甲基苯并[d]噻唑-5-基酯(VI)：
向1-乙基-3-(5-羟基-6-甲基-苯并噻唑-2-基)-脲(0.185g，0.74mmol)的DMF(3ml)溶液中加入DIPEA(0.22mL，1.21mmol)，将所得溶液在室温下搅拌5分钟，然后分批加入N-苯基三氟甲磺酰亚胺(0.36g，0.99mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。在反应完成后(TLC监控)，用冷水猝灭反应混合物，用EtOAc萃取。合并有机层，用Na2SO4干燥，蒸发至干燥。粗制残余物在硅胶上纯化(100-200M，1.5％MeOH-DCM)，得到白色固体化合物形式的所需产物(0.10g，38％)。MS：384.11(M+H+)。
制备1-乙基-3-(6-甲基-5-(吡啶-3-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(VII-A)：实施例73
在室温下，在氮气气氛下，向三氟甲磺酸2-(3-乙基脲基)-6-甲基苯并[d]噻唑-5-基酯VI(0.08g，0.21mmol)的1，4-二噁烷∶MeOH(8.0mL，5∶3)溶液中加入吡啶-3-硼酸(0.03g，0.25mmol)和磷酸钾(0.05g，0.25mmol)。将所得混合物脱气15分钟，然后加入PdCl2(dppf)(0.025g，0.03mmol)，再脱气15分钟。然后，将反应混合物加热到80℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，用甲醇稀释反应混合物，通过硅藻土床过滤。蒸馏滤液，粗制残余物在硅胶上纯化(100-200M，2.5％MeOH-DCM)，得到灰白色固体状的所需产物(0.015g，23％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，2.32(s，3H)，3.20(m，2H)，6.70(br s，1H)，7.46(s，2H)，7.55(m，1H)，7.84(m，2H)，8.59(s，1H)和10.70(br s，1H)。MS：313.15(M+H+)。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，220nm)：90.14％(保留时间＝5.22分钟)。
制备1-乙基-3-(6-甲基-5-(1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)脲(VII-B)：实施例74
在室温下向三氟甲磺酸2-(3-乙基脲基)-6-甲基苯并[d]噻唑-5-基酯VI(0.122g，0.32mmol)的DMSO(8mL)溶液中加入KOAc(0.09g，0.95mmol)和联硼酸新戊二醇酯(0.15g，0.64mmol)。将所得混合物用氮气脱气15-20分钟，然后加入PdCl2.dppf(0.03g，0.03mmol)。将反应混合物再脱气15-20分钟，然后加热到80℃并保持3小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，然后加入4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(0.12g，0.64mmol)和Cs2CO3(0.16g，3.7M，在H2O中)。将所得混合物脱气10-15分钟，然后加入Pd(PPh3)4(0.04g，0.03mmol)，再脱气15-20分钟，最后加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，向反应混合物中加水，用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，浓缩。粗制残余物在硅胶上纯化(100-200M，2-2.5％MeOH-DCM)，得到白色固体状的所需产物(0.025g，24％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.08(t，J＝7.20Hz，3H)，2.31(s，3H)，3.19(m，2H)，3.46(s，3H)，6.27(dd，J＝1.60和6.80Hz，1H)，6.32(s，1H)，6.70(br s，1H)，7.41(s，1H)，7.74(d，J＝6.80Hz，1H)，7.78(s，1H)和10.71(br s，1H)。MS：343.18(M+H+)。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，2.1x100mm，237nm)：98.53％(保留时间＝4.65分钟)。
方案-38：(a)苯甲酰基异硫氰酸酯，丙酮，室温，30分钟；(b)NaOH-THF；(c)70％H2SO4，100℃，45分钟；(d)异氰酸乙酯，1，4-二噁烷；(e)吡啶-3-硼酸，K3PO4，PdCl2(PPh3)2，DMF-H2O；(f)联硼酸频哪醇酯，KOAc，三环己基膦，Pd2(dba)3，1，4-二噁烷；(g)N-(5-溴吡啶-2基)乙酰胺，K3PO4，PdCl2(PPh3)2，DMF-H2O；(h)4-溴-6-甲基-2H-吡喃-2-酮，K3PO4，PdCl2(dppf)，DMF-H2O，80℃，16小时。
制备N-(5-溴-2-氟吡啶-3-基硫代氨基甲酰基(carbamothioyl))苯甲酰胺(II)：
向3-氨基-5-溴-2-氟吡啶(1.0g，5.23mmol)的丙酮(15.0mL)溶液中加入苯甲酰基异硫氰酸酯(0.85mL，6.25mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌30分钟。在反应完成后(TLC监控)，在减压下除去丙酮，用己烷洗涤残余物，过滤，得到所需产物(1.68g，91％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.55(t，J＝7.60Hz，2H)，7.68(t，J＝7.60Hz，1H)，8.0(d，J＝7.60Hz，2H)，8.31(s，1H)，8.84(dd，J＝2.0和8.40Hz，1H)，12.03(br s，1H)和12.60(br s，1H)。
制备N-(6-溴噻唑[5，4-b]吡啶-2基)苯甲酰胺(III)：
向冰冷的N-(5-溴-2-氟吡啶-3-基硫代氨基甲酰基)苯甲酰胺II(1.80g，5.08mmol)的THF(20.0mL)溶液中加入NaOH溶液(1.0g，22.0mmol，溶解在10.0mL H2O中)。然后，将反应混合物加热到60℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，浓缩反应混合物，加水，用EtOAc(3x150mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩，得到所需产物(1.60g，95％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.42(m，3H)，7.82(d，J＝2.0Hz，1H)，8.14(m，2H)和8.18(d，J＝2.0Hz，1H)。
制备6-溴噻唑[5，4-b]吡啶-2-胺(IV)：
将N-(6-溴噻唑[5，4-b]吡啶-2基)苯甲酰胺III(2.0g，5.98mmol)的70％H2SO4(10.0mL)溶液加热到140℃并保持1小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物倒在碎冰上，用30％NaOH水溶液碱化至pH 8.0，用EtOAc(3x150mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩，得到所需产物(1.34g，98％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.85(d，J＝2.0Hz，1H)，8.05(br s，2H)和8.18(d，J＝2.0Hz，1H)。
制备1-(6-溴噻唑[5，4-b]吡啶-2基)-3-乙基脲(V)：
向6-溴噻唑[5，4-b]吡啶-2-胺IV(1.30g，5.55mmol)的1，4-二噁烷(20.0mL)溶液中加入异氰酸乙酯(2.19mL，27.07mmol)，将所得反应混合物加热到80℃并保持8小时。在反应完成后(TLC监控)，蒸馏除去1，4-二噁烷，然后与正己烷共蒸馏(2次)。然后，将残余物与水一起在90℃搅拌2小时，然后过滤，得到所需产物，该产物进一步用热水洗涤，然后干燥。最后，用醚洗涤残余物，得到所需产物(1.40g，83％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，3.20(五重峰，J＝7.20Hz，2H)，6.76(brs，1H)，8.24(d，J＝2.0Hz，1H)，8.45(d，J＝2.0Hz，1H)和11.05(br s，1H)。
制备1-乙基-3-(6-(吡啶-3-基)噻唑[5，4-b]吡啶-2基)脲(VI)：实施例75
通过用氮气吹扫15分钟使1-(6-溴噻唑[5，4-b]吡啶-2基)-3-乙基脲(0.05g，0.17mmol)、吡啶-3-硼酸(0.025g，0.20mmol)和K3PO4(0.053g，0.25mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.012g，0.016mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持4小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.40％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.003g(7％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.20Hz，3H)，3.18(m，2H)，6.77(m，1H)，7.55(m，1H)，8.22(d，J＝8.40Hz，1H)，8.31(d，J＝1.60Hz，1H)，8.63(d，J＝5.20Hz，1H)，8.72(d，J＝2.0Hz，1H)，9.01(d，J＝1.60Hz，1H)和10.97(br s，1H)。MS：300.11(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，245nm)：97.04％(保留时间＝4.40分钟)。
制备1-乙基-3-(6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)噻唑[5，4-b]吡啶-2基)脲(VII)：
通过用氮气吹扫15分钟使1-(6-溴噻唑[5，4-b]吡啶-2基)-3-乙基脲V(0.20g，0.66mmol)、联硼酸频哪醇酯(0.38g，1.32mmol)和KOAc(0.164g，2.0mmol)的1，4-二噁烷(10.0mL)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入三环己基膦(0.03g，0.10mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.06g，0.066mmol)，再用氮气脱气15分钟。将所得反应混合物加热到80-85℃并保持2小时。在反应完成后(TLC监控)，通过硅藻土床过滤反应混合物，滤液浓缩，得到粗制残余物，该粗产物不进一步纯化而直接用于之后的步骤中。MS：349.23(M+H)+。
制备N-(5-(2-(3-乙基脲基)噻唑[5，4-b]吡啶-6-基)吡啶-2基)乙酰胺(VIII)：实施例76
通过用氮气吹扫15分钟使N-(5-溴吡啶-2基)乙酰胺(0.06g，0.28mmol)、1-乙基-3-(6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)噻唑[5，4-b]吡啶-2基)脲(0.15g，0.42mmol)和K3PO4(0.18g，0.84mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入二氯二(三苯基膦)-钯(II)(0.03g，0.04mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，2.80％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.007g(5％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝7.20Hz，3H)，2.12(s，3H)，3.18(m，2H)，6.76(m，1H)，8.17-8.28(m，3H)，8.71(d，J＝1.60Hz，1H)，8.75(s，1H)，10.72(s，1H)和10.96(br s，1H)。MS：357.15(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，238nm)：89.81％(保留时间＝4.37分钟)。
制备1-乙基-3-(6-(6-甲基-2-氧代-2H-吡喃-4-基)噻唑[5，4-b]吡啶-2基)脲(IX)：实施例77
通过用氮气吹扫15分钟使4-溴-6-甲基-2H-吡喃-2-酮(0.055g，0.30mmol)、1-乙基-3-(6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)噻唑[5，4-b]吡啶-2基)脲(0.15g，0.42mmol)和K3PO4(0.185g，0.87mmol)的DMF-H2O(5.0mL，3∶2)溶液脱气。然后，向该反应混合物中加入与二氯甲烷络合的[1，1’-二(二苯基膦基)-二茂铁]二氯钯(II)(0.021g，0.028mmol)，随后用氮气再脱气15分钟。然后，将所得反应混合物加热到80℃并保持16小时。在反应完成后(TLC监控)，将反应混合物冷却到室温，倒在冰冷的水上，然后用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在减压下浓缩。粗产物随后在硅胶上纯化(100-200M，4.20％MeOH-DCM)，得到所需产物(0.032g(33％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.11(t，J＝6.80Hz，3H)，2.31(s，3H)，3.21(五重峰，J＝7.20Hz，2H)，6.71(s，1H)，6.75(m，1H)，6.90(s，1H)，8.40(s，1H)，8.79(s，1H)和11.07(br s，1H)。MS：331.10(M+H)+。定性HPLC纯度(Acquity BEH C-18，100x2.1mm，261nm)：96.37％(保留时间＝4.72分钟)。
方案-39
Figure BPA00001195242000971
制备4-羟基-6-甲基-1-[1-(6-甲基-吡啶-3-基)-乙基]-1H-吡啶-2-酮(步骤1)：
将在水(18ml)中搅拌着的4-羟基-6-甲基-2-吡喃酮(1.394g，11.1mmol)和1-(6-甲基-吡啶-3-基)-乙基胺(1.806g，13.3mmol)的混合物在回流下沸腾65小时。将混合物冷却到环境温度，将上层清液倾析除去，得到深色半固体残余物。该残余物用乙酸乙酯研制，得到灰色固体4-羟基-6-甲基-1-[1-(6-甲基-吡啶-3-基)-乙基]-1H-吡啶-2-酮(475mg)，该产物不进行纯化而直接用在之后的步骤中。LC-MS m/z 245[M+H]+保留时间＝1.21分钟。
制备甲苯-4-磺酸6-甲基-1-[1-(6-甲基-吡啶-3-基)-乙基]-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-4-基酯(步骤2)：
用无水三乙胺(0.81ml，5.839ml)处理在无水二氯甲烷(16ml)中搅拌着的步骤1的产物(475mg，1.947mmol)和4-甲基苯磺酰氯(371mg，1.947mmol)的混合物，在环境温度下继续搅拌18小时。用二氯甲烷(150ml)稀释反应混合物，依次用水(100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)。在真空下除去溶剂，通过快速二氧化硅色谱纯化残余物，洗脱液为乙酸乙酯，得到无色胶状的甲苯-4-磺酸6-甲基-1-[1-(6-甲基-吡啶-3-基)-乙基]-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-4-基酯(609mg)，该产物在静置后固化。LC-MS m/z 399[M+H]+保留时间＝2.10分钟。
方案-40
制备1-[5-(5，5-二甲基-[1，3，2]二氧硼杂环己烷(dioxaborinan)-2-基)-6-氟-苯并噻唑-2-基]-3-乙基-脲(步骤1)：
将在无水N，N-二甲基甲酰胺(4.1ml)中搅拌着的1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(100mg，0.314mmol)、二(新戊基)甘醇酸合二硼(70mg，0.314mmol)、乙酸钾(91mg，0.952mmol)和1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁氯化钯(II)络合物(26mg，0.0314mmol)的混合物用氮气吹扫15分钟。密封反应容器，在80℃加热3小时。
制备1-乙基-3-(6-氟-5-{6-甲基-1-[1-(6-甲基-吡啶-3-基)-乙基]-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-4-基}-苯并噻唑-2-基)-脲(步骤2)：实施例78
将来自步骤1的反应混合物冷却到环境温度。加入甲苯-4-磺酸6-甲基-1-[1-(6-甲基-吡啶-3-基)-乙基]-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-4-基酯(125mg，0.314mmol)，然后加入碳酸铯水溶液(3.7M，0.12ml，0.470mmol)和1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁氯化钯(II)络合物(26mg，0.0314mmol)。将反应混合物用氮气吹扫5分钟，密封，在80℃加热5小时。将反应混合物冷却到环境温度，用水(100ml)稀释，用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)。在真空下除去溶剂，通过快速二氧化硅色谱纯化残余物，先用乙酸乙酯后用0-5％7N甲醇铵(methanolic ammonium)的二氯甲烷溶液)洗脱，得到浅褐色固体1-乙基-3-(6-氟-5-{6-甲基-1-[1-(6-甲基-吡啶-3-基)-乙基]-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-4-基}-苯并噻唑-2-基)-脲(实施例78)(30mg)。LC-MS m/z 466[M+H]+保留时间＝2.65分钟。
方案-41
制备4-溴-1-(3-甲氧基-吡啶-2基甲基)-1H-吡啶-2-酮
将(3-甲氧基-吡啶-2基)-甲醇(227mg，1.63mmol)、2-羟基-4-溴吡啶(282mg，1.63mmol)和三苯基膦(416mg，1.63mmol)在干燥二氯甲烷(10ml)中，在0℃和氮气气氛下搅拌。在0℃加入偶氮二羧酸二乙酯(242mg，1.63mmol)，然后使反应混合物达到室温并搅拌过夜。加入饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)，分离各层。用二氯甲烷(2x10ml)萃取水相部分，合并有机相部分，干燥(MgSO4)，在减压下浓缩。通过快速二氧化硅色谱纯化粗产物，首先用0-100％乙酸乙酯的汽油溶液洗脱，然后用10％7N甲醇铵的二氯甲烷溶液洗脱，得到4-溴-1-(3-甲氧基-吡啶-2基甲基)-1H-吡啶-2-酮，LC-MS(340mg)分析表明纯度为57％，污染上了23％的2-羟基-4-溴吡啶和20％的氧化三苯基膦。该产物直接用于之后的步骤中。LC-MS m/z 297[M+H]+保留时间＝2.05分钟。
方案-42
Figure BPA00001195242000991
制备1-[5-(5，5-二甲基-[1，3，2]二氧硼杂环己烷-2-基)-6-氟-苯并噻唑-2-基]-3-乙基-脲(步骤1)：
将在无水N，N-二甲基甲酰胺(4.1ml)中搅拌着的1-(5-溴-6-氟-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-脲(100mg，0.314mmol)、二(新戊基)甘醇酸合二硼(70mg，0.314mmol)、乙酸钾(91mg，0.952mmol)和1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁氯化钯(II)络合物(26mg，0.0314mmol)的混合物用氮气吹扫15分钟。密封反应容器，在80℃加热3小时。
制备1-乙基-3-{6-氟-5-[1-(3-甲氧基-吡啶-2基甲基)-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-4-基]-苯并噻唑-2-基}-脲(步骤2)：实施例79
将来自步骤1的反应混合物冷却到环境温度。加入含有4-溴-1-(3-甲氧基-吡啶-2基甲基)-1H-吡啶-2-酮(114mg)的混合物，然后加入碳酸铯水溶液(3.7M，0.25ml，0.930mmol)和1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁氯化钯(II)络合物(26mg，0.0314mmol)。用氮气吹扫反应混合物5分钟，密封，在80℃加热5小时。将反应混合物冷却到环境温度，用水(12ml)稀释，用二氯甲烷(3x12ml)萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，干燥(MgSO4)，在减压下浓缩。将粗产物在二氯甲烷-甲醇(9∶1)中研制，通过过滤收集所得固体，得到白色固体1-乙基-3-{6-氟-5-[1-(3-甲氧基-吡啶-2基甲基)-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-4-基]-苯并噻唑-2-基}-脲(实施例79)(10mg)。滤液在减压下浓缩，通过快速二氧化硅色谱纯化，用0-5％7N甲醇铵的二氯甲烷溶液洗脱，再得到8mg白色固体产物。LC-MS m/z 454[M+H]+保留时间＝2.64分钟。
生物学数据
最小抑制浓度(MIC)试验
通过在液体介质中或固体介质上的易感性试验测定本发明化合物的抗微生物活性。根据临床实验室与标准协会(Clinical Laboratories and Standards Institute)，过去称为美国临床实验室标准化委员会(National Committee for Clinical Laboratory Standards)的规定(临床实验室与标准协会，稀释需氧菌的抗微生物易感性测试的方法(Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically)；认可标准-第7版(Approved Standard-Seventh Edition)，文章M7-A7，CLSI，Wayne，Pa，2006；临床实验室与标准协会，厌氧菌的抗微生物易感性测试方法(Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria)；认可标准-第6版，文章M11-A6，CLSI，Wayne，Pa，2004)，采用肉汤微稀释法或琼脂稀释法测定化合物对每种菌株的MIC。
发现本发明的化合物在上述MIC试验中具有抗微生物活性。
回旋酶ATP酶试验
回旋酶将ATP转化为ADP和无机磷酸盐。可加入孔雀绿溶液，通过检测600nm处吸光度的增加来检测释放的磷酸盐。
ATP酶试验在含4.8μg/ml回旋酶(大肠杆菌的A2B2复合物)、0.08μg/mlssDNA、35mM Tris pH 7.5、24mM KCl、2mM MgCl2、6.5％甘油、2mMDTT、1.8mM亚精胺、0.5mg/ml BSA和含抑制剂的5％DMSO溶液的缓冲液中进行。加入ATP至最终浓度1mM而开始反应，并在30℃下温育60分钟。加入200μl孔雀绿溶液(0.034％孔雀绿，10mM钼酸铵、1M HCl、3.4％乙醇、0.01％吐温20)终止反应。产生颜色5分钟，在600nm处分光光度法测定吸光度。使用没有化合物也没有酶的样品作为对照，由吸光度读数测定IC50值。
发现上面实施例中所述本发明的所有化合物都能抑制回旋酶ATP酶试验，50％抑制浓度(IC50)小于0.75微摩尔。
所有实施例都能抑制细菌生长。表1显示了在上述MIC试验中各个实施例抗粪肠球菌ATCC 29212的MIC值。活性“C”的实施例表示MIC为2-16μg/ml。活性“B”的实施例表示MIC为0.25-1μg/ml。活性“A”的实施例表示MIC＜0.25μg/ml。
表1.抗粪肠球菌的MIC
Figure BPA00001195242001011
还检测了一些实施例化合物针对其他菌种的活性。例如，表2显示了实施例3抗各个菌种的MIC。活性“C”表示MIC为2-16μg/ml。活性“B”表示MIC为0.25-1μg/ml。活性“A”表示MIC＜0.25μg/ml。
表2.抗各种细菌的MIC
Figure BPA00001195242001021
还测试了一些实施例化合物抗各种菌种临床隔离群的活性。例如，表3显示了实施例49抗各种菌种的MIC90。

Claims (26)

1.一种通式(I)的化合物或其盐或N-氧化物：
式中：
m是0或1；
Q是氢或环丙基；
Alk是可包含醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NR)-连接的任选取代的二价C1-C6亚烷基、亚烯基或亚炔基，其中R是氢、-CN或C1-C3烷基；
X是-C(＝O)NR6-或-C(＝O)O-，其中R6是氢、任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；
Z1是-N＝或-CH＝；
Z2是-N＝或-C(R1)＝；
R1是氢、甲基、乙基、乙烯基、乙炔基、甲氧基、巯基、巯基甲基、卤素、完全或部分氟化的(C1-C2)烷基、(C1-C2)烷氧基或(C1-C2)烷硫基，硝基或腈(-CN)；
R2是基团Q1-[Alk1]q-Q2-，其中
q是0或1；
Alk1是可包含醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NR)-连接或以这些基团为末端的任选取代的二价直链或支链C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基或C2-C6亚炔基；
Q2是具有5或6个环原子的任选取代的二价单环碳环或杂环基或具有9或10个环原子的任选取代的二价双环碳环或杂环基；
Q1是氢、任选的取代基、或具有3-7个环原子的任选取代的碳环或杂环基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Z1是-CH＝。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Z2是-CH＝。
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Z2是-CF＝。
5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Z1和Z2都是-CH＝。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Z1是-CH＝，Z2是-CF＝。
7.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，m是1，Q是氢。
8.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，X是-C(O)NH-。
9.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其特征在于，m是1，Q是氢，Alk是-CH2CH2-，X是-C(O)NH-。
10.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，在所述化合物的取代基R2中，Q2是任选取代的吡啶、嘧啶、吡嗪、吡喃-2-酮、嘧啶-4-酮或吡啶-2-酮环。
11.如权利要求1-9中任一项所述的化合物，其特征在于，在所述化合物的取代基R2中，Q2是任选取代的吡啶-3-基环、选取代的嘧啶-5-基环、任选取代的吡嗪-2-基环、任选取代的吡喃-2-酮-4-基环或任选取代的吡啶-2-酮-4-基环。
12.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，在所述化合物的取代基R2中，存在Alk1，并且Alk1是任选取代的二价C1-C3亚烷基。
13.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，在所述化合物的取代基R2中，Q1是通式-NRARB的基团，其中RA和RB独立的是氢或(C1-C6)烷基、羟基(C1-C6)烷基或(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基。
14.如权利要求1-12中任一项所述的化合物，其特征在于，在所述化合物的取代基R2中，Q1是通式-NRARB的基团，其中RA和RB与氮一起形成环氨基环。
15.如权利要求14所述的化合物，其特征在于，所述环氨基环是吗啉基、哌啶基或哌嗪基环。
16.如权利要求1-9中任一项所述的化合物，其特征在于，在所述化合物的取代基R2中，Q2是任选取代的吡啶基、嘧啶基或吡嗪基，q是0，Q1是具有3-7个环原子的任选取代的杂环基。
17.如权利要求16所述的化合物，其特征在于，Q1是任选取代的噁二唑基或四唑基。
18.如权利要求16所述的化合物，其特征在于，Q1是任选取代的哌啶基或吡咯烷基。
19.如权利要求18所述的化合物，其特征在于，Q1被-COOH取代。
20.如权利要求1-9中任一项所述的化合物，其特征在于，在所述化合物的取代基R2中，Q2是任选取代的嘧啶-4-酮或吡啶-2-酮，q是1，Q1是具有3-7个环原子的任选取代的杂环基。
21.如权利要求20所述的化合物，其特征在于，Alk1是-CH2-，Q1是任选取代的吡啶基。
22.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物是所述任何实施例的主题。
23.一种抗菌组合物，其包含如权利要求1-22中任一项所述的化合物和一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。
24.如权利要求1-22中任一项所述的化合物在制备抗菌组合物中的应用。
25.一种治疗或预防基材细菌污染的方法，该方法包括对污染或潜在污染部位施加足以抑制细菌生长的量的如权利要求1-24中任一项所述的化合物(I)。
26.一种治疗受细菌感染的对象或预防对象被细菌感染的方法，该方法包括向所述对象给予抗菌有效量的如权利要求1-22中任一项所述的化合物。
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