CN102010848B - 一株具有双重噬菌体抗性的l-苯丙氨酸生产菌及其选育方法 - Google Patents
一株具有双重噬菌体抗性的l-苯丙氨酸生产菌及其选育方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102010848B CN102010848B CN2010101356049A CN201010135604A CN102010848B CN 102010848 B CN102010848 B CN 102010848B CN 2010101356049 A CN2010101356049 A CN 2010101356049A CN 201010135604 A CN201010135604 A CN 201010135604A CN 102010848 B CN102010848 B CN 102010848B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phage
- phenylalanine
- phe
- wsh
- cctcc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Abstract
本发明对容易受到噬菌体污染的WSH-Z06的宿主菌分别进行紫外线诱变处理、噬菌体淘汰培养，筛选到一株具有BP-1和BP-2双重抗性的大肠杆菌宿主菌，随后用编码L-苯丙氨酸合成酶基因的质粒(pAP-B03)转化宿主菌，得到抗噬菌体L-苯丙氨酸生产菌WSH-BR165(pAP-B03)；本发明将传统紫外诱变育种的优点与分子生物学改造的优点相结合，通过噬菌体淘汰培养的方法，高效率地筛选并构建出一株具有噬菌体BP-1、BP-2抗性的L-苯丙氨酸生产菌。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有双重噬菌体抗性的微生物及其选育方法，属于生物工程技术领域。
背景技术
噬菌体污染是影响氨基酸发酵生产的关键因素之一。如果在生产中受到噬菌体的污染，会影响生产率，从而影响企业效益。其来源很多，在相对较长的发酵周期中，无论哪个环节发生污染，都会对整个过程造成影响。多年来，企业在噬菌体在生产过程对噬菌体的防治上积累了大量的经验，但选育抗噬菌体的生产菌株才是最有效的方法。
本实验室前期开发了一株L-苯丙氨酸生产菌WSH-BR42(CCTCC M 2010008)，该菌株具有噬菌体BP-1(CCTCC M 2010054)抗性，但在实际生产中发现该菌种又受到了噬菌体BP-2(CCTCC M 2010055)的污染。
利用诱变手段筛选抗噬菌体的菌株是选育抗性菌株的方法之一。由于现在所知的诱变方法已有很多，其对机理方面的要求也不高，人们在对诱变方法的选用上已有了很多的经验。但往往用诱变手段选育菌种具有一定的盲目性，是一件耗时耗力的工作。在筛选抗噬菌体抗性的大肠杆菌方面，本发明提出在诱变后培养阶段利用噬菌体淘汰培养的方法，就如何快速有效的获得目的菌株而言提供了一条新的途径。
发明内容
本发明所要解决的一个技术问题是提供一株重组大肠杆菌WSH-BR165（pAP-B03），该菌株具有对重组大肠杆菌易感染噬菌体BP-1（CCTCC M 2010054，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2010年3月15日，地址：中国武汉，武汉大学，分类学命名为：大肠杆菌噬菌体（Bacteriophage））和BP-2的（CCTCC M 2010055，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2010年3月15日，地址：中国武汉，武汉大学，分类学命名为：大肠杆菌噬菌体（Bacteriophage））双重抗性；含有重组质粒，质粒上携带L-苯丙氨酸合成酶基因，现已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间2010年1月18日，地址：中国武汉，武汉大学，分类学命名为：大肠杆菌（Escherichia coli），保藏编号为 CCTCC M 2010013。
所述噬菌体BP-1来源于本实验室前期开发的L-苯丙氨酸生产菌WSH-ZH06(含重组质粒pAP-B03，CCTCC M 2010009)受到噬菌体污染的裂解液，噬菌体BP-1已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间2010年3月15日，保藏编号为CCTCC M 2010054；噬菌体BP-2来源于本实验室开发的L-苯丙氨酸生产菌WSH-BR42(含重组质粒pAP-B03，CCTCCM 2010008)受到噬菌体污染的裂解液，WSH-BR42具有噬菌体BP-1的抗性，但不具有噬菌体BP-2的抗性，噬菌体BP-2已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间2010年3月15 日，保藏编号为CCTCC M 2010055。
所述重组质粒为pAP-B03，其上携带L-苯丙氨酸合成的关键酶CM/PDT和DS的基因pheAfbr和aroF，其中pheAfbr基因来源于E.coli K12的突变株，aroF来源于E.coli K12(Enhanced L-phenylalanine biosynthesis by co-expression of pheAfbr and aroFwt.HaiyanZhou，Xianyan Liao，Tianwen Wang，Guocheng Du，Jian Chen.Bioresource Technology)。
本发明所要解决的另外一个技术问题是提供了一种紫外线诱变育种、噬菌体淘汰培养以及分子生物学改造相结合的L-苯丙氨酸生产菌的选育方法。
为解决上述技术问题，对容易受到噬菌体污染的WSH-Z06的宿主菌(EnhancedL-phenylalanine biosynthesis by co-expression of pheAfbr and aroFwt.Haiyan Zhou，XianyanLiao，Tianwen Wang，Guocheng Du，Jian Chen.Bioresource Technology)分别进行紫外线诱变处理、噬菌体淘汰培养，筛选到一株具有BP-1和BP-2双重抗性的大肠杆菌宿主菌，随后用编码L-苯丙氨酸合成酶基因的质粒(pAP-B03)转化上述大肠杆菌宿主菌，得到具有双重噬菌体抗性的L-苯丙氨酸生产菌WSH-BR165(pAP-B03)。
所述紫外线诱变处理，具体方法为培养WSH-Z06的宿主菌，离心、洗涤菌体后在紫外照射10-60s进行诱变处理。
所述噬菌体淘汰培养，具体方法为在紫外线诱变处理后，红灯下在培养皿中分别吸取一定含量菌液于装有30mL LB培养基和各1mL效价为1010pfu/mL的噬菌体BP-1和BP-2裂解液的三角瓶中培养6h，使得诱变后不具有噬菌体抗性的菌被淘汰，具有双重噬菌体抗性的菌得到富集。
所述噬菌体抗性筛选，具体方法为：离心、收集、培养诱变后的菌体，挑取形态、大小、颜色各不相同的菌落逐一涂布单层平板，然后在平板的4个象限处分别各滴加5μL噬菌体BP-1和BP-2的裂解液，做好标记，培养24h后，挑取在4处滴加噬菌体的地方均没有出现噬菌斑的菌株。
所述噬菌体裂解液BP-1，取样于受噬菌体污染的WSH-Z06(pAP-B03)发酵液，经过分离、培养后获得，具体方法为：发酵液离心后的上清液经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，取出一定上清液放入装有肉膏蛋白胨培养基的试管中，同时加入一定量的WSH-Z06(pAP-B03)菌悬液，培养一段时间，待长出单个噬菌斑后，用接种针穿刺法挑取形态、大小不一的单个空斑分别接入含有敏感菌WSH-Z06的液体培养基中，37℃振荡培养16-24h。
所述噬菌体裂解液BP-2，取样于受噬菌体污染的WSH-BR42(pAP-B03)发酵液，经过分离、培养后获得，具体方法为：发酵液离心后的上清液经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，取出 一定上清液放入装有肉膏蛋白胨培养基的试管中，同时加入一定量的WSH-BR42(pAP-B03)菌悬液，培养一段时间，待长出单个噬菌斑后，用接种针穿刺法挑取形态、大小不一的单个空斑分别接入含有敏感菌WSH-Z06的液体培养基中，37℃振荡培养16-24h。
所述噬菌体抗性检测培养基，采用肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖10g/L，NaCl 5g/L)，pH 7.0-7.2，琼脂2％。
所述抗噬菌体L-苯丙氨酸生产菌，其优选培养基组成为：
(1)种子培养基：
使用LB培养基(蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 10g/L)，pH 7.0，固体培养基加2％的琼脂。
(2)发酵培养基(g/L)：
葡萄糖25，L-酪氨酸0.4，碳酸钙12.5，七水合硫酸镁3.0，二水合氯化钙0.015，磷酸二氢钾3.0，氯化钠1.0，硫酸铵5.0，七水合硫酸亚铁0.075，柠檬酸钠1.0，硫胺素(thiamine·HCl)0.075，硫酸卡那霉素0.04，微量元素溶液(TES)1.5mL/L，pH 7.0。
TES溶液(g/L)：Al2(SO4)3·18H2O 2.0，CoSO4·7H2O 0.75，CuSO4·5H2O 2.5，H3BO30.5，MnSO4·H2O 24，Na2MoO4·2H2O 3.0，NiSO4·6H2O 2.5，ZnSO4·7H2O 15，用1N的HCl溶解。
所述抗噬菌体L-苯丙氨酸生产菌，其发酵罐培养方法为：
将37℃、200rpm下培养12h的种子以10％的接种量分别接入3L发酵罐中，发酵培养基体积为1.5L，通气量为1vvm，搅拌转速为400rpm，待DO降至20％，通过调节搅拌转速和通气量维持DO在20％以上；温度设定在33℃，菌体浓度达到OD610＝3时，升温至37℃，用28％氨水控制pH在7.0左右，使用流加700g/L的葡萄糖溶液的方式维持培养基中残余葡萄糖浓度在5g/L左右。
细胞干重(DCW)的测定方法为：取一定量的菌悬液置于10mL容量瓶中，加去离子水定容，摇匀，用722型可见分光光度计，于610nm处比色测OD值，利用细胞干重标准曲线算得细胞干重，若测摇瓶发酵培养中的菌体浓度则在定容前加2mL 2N的盐酸溶解菌悬液中的碳酸钙。
L-苯丙氨酸浓度的测定方法采用氨基酸常用测定方法，高效液相色谱(HPLC)柱前衍生化方法进行测定(Rapid，accurate，sensitive，and reproducible HPLC analysis of aminoacids.Henderson，J.W.，Rieker，R.D.，Bidlingmeyer，B.A.，Woodward，C.，Agilent Technologies，USA，2000)。
有益效果：
本发明将传统紫外诱变育种的优点与分子生物学改造的优点相结合，通过噬菌体淘汰培养的方法，高效率地筛选并构建出一株具有噬菌体BP-1、BP-2抗性的L-苯丙氨酸生产菌；与之前的L-苯丙氨酸生产菌株相比，可以抵抗两种大肠杆菌噬菌体的感染，且细胞生长速度和L-苯丙氨酸产量不受影响，并且具有良好的遗传稳定性，提高了L-苯丙氨酸生产企业的经济效益。
具体实施方式
实施例一：噬菌体BP-1的分离纯化
菌株：
本实验室前期开发的L-苯丙氨酸生产菌重组大肠杆菌WSH-Z06(pAP-B03)，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏编号为CCTCC M 2010009。
取某工厂受到噬菌体感染的重组大肠杆菌WSH-Z06(pAP-B03)发酵液4mL，8000rpm离心10min后，上清液经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，取出100μL到50℃装有6mL上层肉膏蛋白胨培养基的试管中，同时加入WSH-Z06(pAP-B03)菌悬液100μL，立即混匀，倒入已凝固的底层培养基上，铺匀，置37℃培养箱内培养16-24h。待长出单个噬菌斑后，用接种针穿刺法挑取形态、大小不一的单个空斑分别接入含有WSH-Z06(pAP-B03)的液体培养基中，37℃振荡培养16-24h。重复上述步骤进行噬菌斑形态、大小的检验，直至得到纯化的噬菌体。
噬菌体分离纯化培养基：肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖10g/L，NaCl 5g/L，pH 7.0-7.2，上层琼脂0.8％，下层琼脂2％)。
噬菌体BP-1已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2010054。
实施例二：噬菌体BP-2的分离纯化
菌株：
本实验室前期开发的L-苯丙氨酸生产菌重组大肠杆菌WSH-BR42(pAP-B03)，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏编号为CCTCC M 2010008。
取某工厂受到噬菌体感染的重组大肠杆菌WSH-BR42(pAP-B03)发酵液4mL，8000rpm离心10min后，上清液经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，取出100μL到50℃装有6mL上 层肉膏蛋白胨培养基的试管中，同时加入WSH-BR42(pAP-B03)菌悬液100μL，立即混匀，倒入已凝固的底层培养基上，铺匀，置37℃培养箱内培养16-24h。待长出单个噬菌斑后，用接种针穿刺法挑取形态、大小不一的单个空斑分别接入含有WSH-BR42(pAP-B03)的液体培养基中，37℃振荡培养16-24h。重复上述步骤进行噬菌斑形态、大小的检验，直至得到纯化的噬菌体。
噬菌体分离纯化培养基：肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖10g/L，NaCl 5g/L，pH 7.0-7.2，上层琼脂0.8％，下层琼脂2％)。
噬菌体BP-2已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2010055。
实施例三：紫外线诱变育种、噬菌体淘汰培养以及双抗性的筛选
菌株：
大肠杆菌宿主菌WSH-ZH06(前期构建，Enhanced L-phenylalanine biosynthesis byco-expression of pheAfbr and aroFwt.Haiyan Zhou，Xianyan Liao，Tianwen Wang，GuochengDu，Jian Chen.Bioresource Technology)
从斜面上接一环大肠杆菌宿主菌WSH-ZH06菌种入LB种子培养基中(25mL/250mL锥形瓶)，在37℃、200rpm的条件下培养12h后，离心收集菌体，用生理盐水洗涤三次。取适量菌悬液于六只内置磁力搅拌子的培养皿中，放入紫外诱变箱(紫外灯与菌液距离为30cm，紫外灯为15瓦特)，分别在紫外灯下照射10s，20s，30s，40s，50s及60s。在红灯下，在每只培养皿中分别吸取1mL菌液于装有30mLLB和各1mL效价为1010pfu/mL的两种噬菌体裂解液的三角瓶中间培养6h，而后稀释、涂布LB平板，置于37℃培养箱中培养过夜，挑取形态、大小、颜色各不相同的菌落逐一涂布单层平板，然后在平板的4个象限处分别各滴加5μl噬菌体BP-1和BP-2裂解液，做好标记，培养24h后，挑取在4处滴加噬菌体的地方均没有出现噬菌斑的菌株6株，将每株菌分别在斜面培养基上连续传代10次，再分别检测各菌株每一代的噬菌体抗性，结果选出噬菌体抗性遗传稳定的菌株1株，命名为WSH-BR165。
实施例四：将质粒转入具有双重噬菌体抗性的大肠杆菌
菌株：
具有噬菌体BP-1、BP-2双重抗性的大肠杆菌宿主菌WSH-BR165
质粒：
pAP-B03为本实验室自行构建(详见参考文献Enhanced L-phenylalanine biosynthesis byco-expression of pheAfbr and aroFwt.Haiyan Zhou，Xianyan Liao，Tianwen Wang，GuochengDu，Jian Chen.Bioresource Technology，2010，1)
采用电转化的方法对大肠杆菌突变株WSH-BR165进行转化质粒pAP-B03。将WSH-BR165的对数期培养液100mL先用等量的水洗涤三次，再用等量的10％甘油洗涤三次，最后用1mL的10％甘油悬浮菌体。向电转化杯中加入50μl的菌悬液，再加入5μl的质粒，向电转杯提供2.5KV的电压5ms，立刻在电转杯中加入1mL的LB培养基，混匀后转入1.5mL的离心管里于37℃、200rpm条件下培养2h后，涂布含有硫酸卡那霉素的LB平板，置于37℃培养箱中培养过夜。待有单菌落长出，得到具有双重噬菌体抗性的L-苯丙氨酸生产菌WSH-BR165(pAP03)，将其接入含有硫酸卡那霉素的LB斜面上保藏备用。
WSH-BR165(pAP03)已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2010013。
实施例四：在添加噬菌体BP-2裂解液的条件下，WSH-BR165(pAP03)与WSH-BR42(pAP-B03)以及WSH-Z06(pAP-B03)产L-苯丙氨酸能力的比较
菌株：
WSH-BR165(pAP03)、WSH-ZH06(pAP03)、WSH-BR42(pAP-B03)
优选培养基组成为：
(1)种子培养基：
使用LB培养基(蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 10g/L)，pH 7.0，固体培养基加2％的琼脂。
(2)发酵培养基(g/L)：
葡萄糖25，L-酪氨酸0.4，碳酸钙12.5，七水合硫酸镁3.0，二水合氯化钙0.015，磷酸二氢钾3.0，氯化钠1.0，硫酸铵5.0，七水合硫酸亚铁0.075，柠檬酸钠1.0，硫胺素(thiamine·HCl)0.075，硫酸卡那霉素0.04，微量元素溶液(TES)1.5mL/L，pH 7.0。
TES溶液(g/L)：Al2(SO4)3·18H2O 2.0，CoSO4·7H2O 0.75，CuSO4·5H2O 2.5，H3BO30.5，MnSO4·H2O 24，Na2MoO4·2H2O 3.0，NiSO4·6H2O 2.5，ZnSO4·7H2O 15，用1N的HCl溶解。
3L发酵罐中发酵培养基体积为1.5L，通气量为1vvm，搅拌转速为400rpm，待DO降至20％，通过调节搅拌转速和通气量维持DO在20％以上；温度设定为33℃，菌体浓度 达到OD610＝3时，升温至37℃，用28％氨水控制pH在7.0左右，使用流加700g/L的葡萄糖溶液的方式维持培养基中残余葡萄糖浓度在5g/L左右，发酵至L-苯丙氨酸产量达到最大，结果见表一。
表一
表一数据表示，经过诱变后，虽然重组大肠杆菌L-苯丙氨酸产量略微降低，但发酵时间有所缩短，生产强度总体不变，并且具有了噬菌体BP-1和BP-2抗性。
实施例五：在添加噬菌体BP-1和BP-2裂解液的条件下，WSH-BR165(pAP03)产L-苯丙氨酸能力的验证
菌株：
噬菌体BP-1，保藏编号为CCTCC M 2010054；噬菌体BP-2，保藏编号为CCTCC M2010055；WSH-BR165(pAP03)保藏编号为CCTCC M 2010013。
3L发酵罐中发酵培养基(分别添加0.5％(v/v)的效价为1010PFU/mL的噬菌体BP-1和BP-2的裂解液)体积为1.5L。通气量为1vvm，搅拌转速为400rpm，待DO降至20％，通过调节搅拌转速和通气量维持DO在20％以上；温度设定为33℃，菌体浓度达到OD610＝3时，升温至37℃，用28％氨水控制pH在7.0左右，使用流加700g/L的葡萄糖溶液的方式维持培养基中残余葡萄糖浓度在5g/L左右，发酵48小时，L-苯丙氨酸产量达到48g/L。
Claims (3)
1.一种L-苯丙氨酸生产菌，其特征在于：该菌株具有对重组大肠杆菌易感染的保藏编号为CCTCC NO：M 2010054的噬菌体BP-1和保藏编号为CCTCC NO： M 2010055的噬菌体BP-2的双重抗性；含有重组质粒，质粒上携带L-苯丙氨酸合成酶基因，现已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏时间2010年1月18日，保藏编号为 CCTCC NO：M 2010013，分类学命名为大肠杆菌（Escherichia coli）。
2.根据权利要求1所述L-苯丙氨酸生产菌，其特征在于，噬菌体BP-1来源于保藏编号为CCTCC NO： M 2010009的L-苯丙氨酸生产菌WSH-ZH06受到噬菌体污染的裂解液，噬菌体BP-1已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间2010年3月15日，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号为 CCTCC NO： M 2010054，分类学命名为大肠杆菌噬菌体（Bacteriophage）；噬菌体BP-2来源于保藏编号为CCTCC NO：M 2010008的L-苯丙氨酸生产菌WSH-BR42受到噬菌体污染的裂解液，WSH-BR42具有噬菌体BP-1的抗性，但不具有噬菌体BP-2的抗性，噬菌体BP-2已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏时间2010年3月15日，保藏编号为 CCTCC NO：M 2010055，分类学命名为大肠杆菌噬菌体（Bacteriophage）。
3.根据权利要求1所述L-苯丙氨酸生产菌，其特征在于，重组质粒上携带L-苯丙氨酸合成的关键酶CM/PDT和DS的基因pheAfbr和aroF wt 。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101356049A CN102010848B (zh) | 2010-03-30 | 2010-03-30 | 一株具有双重噬菌体抗性的l-苯丙氨酸生产菌及其选育方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101356049A CN102010848B (zh) | 2010-03-30 | 2010-03-30 | 一株具有双重噬菌体抗性的l-苯丙氨酸生产菌及其选育方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102010848A CN102010848A (zh) | 2011-04-13 |
| CN102010848B true CN102010848B (zh) | 2012-02-08 |
Family
ID=43841180
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101356049A Expired - Fee Related CN102010848B (zh) | 2010-03-30 | 2010-03-30 | 一株具有双重噬菌体抗性的l-苯丙氨酸生产菌及其选育方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102010848B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102212569A (zh) * | 2011-04-15 | 2011-10-12 | 江苏汉光生物工程有限公司 | 一种提高l-苯丙氨酸生产强度的酪氨酸流加方法 |
| CN102181503A (zh) * | 2011-04-15 | 2011-09-14 | 江苏汉光生物工程有限公司 | 一种发酵生产l-苯丙氨酸的方法 |
| CN102718671A (zh) * | 2012-06-04 | 2012-10-10 | 江苏汉光生物工程有限公司 | 从发酵液中提取l-苯丙氨酸的方法 |
| CN109370936A (zh) * | 2018-10-25 | 2019-02-22 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一株广谱抗噬菌体的大肠埃希氏菌bl21(de3)-pr及其应用 |
| CN110396533B (zh) * | 2019-07-04 | 2023-05-26 | 成都英普博集生物科技有限公司 | 具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株、筛选方法、重组工程菌表达重组蛋白的制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102010847B (zh) * | 2010-03-15 | 2012-10-10 | 江南大学 | 一种抗噬菌体l-苯丙氨酸生产菌及选育方法和其应用 |
| CN101984066B (zh) * | 2010-12-09 | 2012-10-10 | 江南大学 | 一种生物法生产l-苯丙氨酸的方法 |
-
2010
- 2010-03-30 CN CN2010101356049A patent/CN102010848B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102010848A (zh) | 2011-04-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106190921B (zh) | 一种谷氨酸棒状杆菌与应用 | |
| CN105886431B (zh) | 一株谷氨酸棒状杆菌及其高产异亮氨酸的方法 | |
| CN102010848B (zh) | 一株具有双重噬菌体抗性的l-苯丙氨酸生产菌及其选育方法 | |
| CN102010847B (zh) | 一种抗噬菌体l-苯丙氨酸生产菌及选育方法和其应用 | |
| CN110373359A (zh) | 一种白色链霉菌X-18及利用该菌生产ε-聚赖氨酸的方法 | |
| CN105331552B (zh) | 一株高效脱氮不动杆菌新种及其应用 | |
| CN108410744A (zh) | 一种产多糖、腺苷和虫草素的融合菌株 | |
| WO2020181765A1 (zh) | 一种地丝霉突变菌株及其应用 | |
| CN105441348B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌新菌株，微生态制剂及应用 | |
| CN111849807B (zh) | 一种刺糖多孢菌ds190375及其发酵产物、菌剂、发酵与筛选方法及应用 | |
| CN101245362A (zh) | 发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法 | |
| CN110643559A (zh) | 提高l-色氨酸生产效率的转运载体基因在大肠杆菌中的应用 | |
| CN101892287B (zh) | 一种选育生产达托霉素的玫瑰孢链霉菌菌株的筛选方法及其所得菌株 | |
| CN104745520B (zh) | 一种高产l‑苯丙氨酸的优良菌株及其应用 | |
| CN103361289A (zh) | 一株产l-赖氨酸的菌株及其生产l-赖氨酸的方法 | |
| CN104450571B (zh) | 一种高效降解蝇蛆蛋白的苏云金芽孢杆菌菌株 | |
| CN104726381A (zh) | 一株产l-赖氨酸的菌株及其生产l-赖氨酸的方法 | |
| CN110029069A (zh) | 一株浅黄霉素基因簇敲除的须糖多孢菌工程菌株及其应用 | |
| CN108913631A (zh) | 一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株cy06及其微生态制剂和应用 | |
| CN112300953A (zh) | 枯草芽孢杆菌及其在发酵生产腺苷酸脱氨酶中的应用 | |
| CN110358685A (zh) | 一种土著氮转化微生物富集培养的方法及其治理的应用 | |
| CN112646740B (zh) | 甲酸基单细胞蛋白菌株ma5及其应用 | |
| CN104531548A (zh) | 雄烯二酮耐底物突变株及其诱变选育方法 | |
| CN111733095B (zh) | 一株高产γ-氨基丁酸的德氏乳杆菌保加利亚亚种 | |
| CN114410523A (zh) | 一种高效制备红茶菌的菌种组合及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120208 Termination date: 20170330 |