CN108913631A - 一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株cy06及其微生态制剂和应用 - Google Patents

一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株cy06及其微生态制剂和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株及其微生态制剂和应用。本发明公开的蒙氏假单胞Pseudomonas monteilii CY06的保藏号为CGMCC No.15249，本发明通过实验证明，所述蒙氏假单胞CY06对浓度2.5mg/L亚硝态氮降解率分别为96%。本发明中的蒙氏假单胞菌CY06为养殖水体改良微生态制剂提供了种源，以无污染和无残留的方式降低水中有害物质如氨氮和亚硝态氮，提高养殖品质，提高养殖经济效益，具有推广价值。

Description

一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株CY06及其微生态制剂和应用
技术领域
本发明属于水产微生态制剂技术领域，具体涉及一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株CY06及其微生态制剂和应用。
背景技术
中国是全球最大的水产养殖国家，2016年，我国养殖水产品总量达5142.39万吨，占世界养殖水产品总量的70％以上，水产养殖为我国优质蛋白质的供给与农业经济的发展做出了巨大贡献。然而，水产养殖所带来的水体污染也是不容忽视，高密度的养殖模式，过量投饵，导致水体氨氮，尤其是亚硝态氮浓度过高，氨氮通过水体藻类生长尚可去除大部分，而亚硝态氮则无法被藻类利用，直接影响水产动物的代谢、免疫、生长等，增加发病率和死亡率，已经对水产养殖业造成了极大危害。另外，不经处理的养殖水体排放到外环境中产生面源污染，危害环境和养殖业的可持续发展。控制养殖池塘水体生态环境已是我国池塘水产养殖健康发展的关键问题，水产养殖池塘水质的控制和净化迫在眉睫。
生物脱氮不仅安全环保，而且具有可续持性，但不同菌种及菌株降解亚硝酸盐效率差别较大，作用条件各不相同。为解决上述问题，本发明进行了高效降解亚硝酸盐菌种的筛选，评估其亚硝态氮降解性能，考察其最佳脱氮条件，并对其亚硝酸还原酶基因进行分析，为水产养殖中亚硝酸盐的控制提供有效的生物方法，从而改善养殖用水质量，促进水产养殖健康可持续发展。
发明内容
本发明的目的是提供了一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株及其微生态制剂和应用。本发明筛选到一株新的蒙氏假单胞菌菌株，CY06 可以进行异养硝化及好氧反硝化脱氮反应。将其制备成微生态制剂，并用于改良养殖水体环境，明显提高了养殖的经济效应。
为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
本发明提供了一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株CY06，其分类命名为蒙氏假单胞菌株Pseudomonas monteilii，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15249。
进一步的：所述菌株CY06的菌落直径为3-4mm，颜色呈乳白色，无黏性，表面光滑扁平，质地均匀有光泽；革兰氏染色反应呈红色，菌体呈杆状。
本发明提供了含有所述菌株CY06的微生态制剂。
本发明提供了所述的微生态制剂在改良养殖水体中的应用。
进一步的：所述微生态制剂用于降解水体中的氨氮和亚硝态氮，微生物制剂中菌株CY06的浓度为1×108cfu/mL～1×109cfu/mL。
进一步的：所述微生态制剂中菌株CY06在盐度为5‰-20‰，对亚硝态氮的去除效果明显。
进一步的：所述微生态制剂中菌株CY06改良水体的最适温度为 30℃。
进一步的：所述微生态制剂中菌株CY06改良水体的pH为5-10。
进一步的：所述微生态制剂中菌株CY06脱氮的碳源为柠檬酸钠和/或丁二酸钠。
进一步的：所述菌株CY06在养殖水体中的终浓度为1×104 cfu/mL以上。
与现有技术相比，本发明的优点和技术效果是：本发明中的蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)CY06从江苏虾养殖厂分离得到，所述蒙氏假单胞菌CY06与现有的蒙氏假单胞菌区别于CY06可以在 0‰、3‰、15‰盐浓度条件下均生长良好。该菌发挥反硝化作用的最适碳源为柠檬酸钠、丁二酸钠，对亚硝酸盐的去除率均近100％；最佳脱氮的温度为30℃；pH在5-10范围内都有较好的脱氮活性。
本发明中的蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)CY06为养殖水体改良微生态制剂提供了种源，以无污染和无残留的方式降低水中有害物质如氨氮和亚硝态氮，提高养殖品质，提高养殖经济效益，具有推广价值。本发明中的蒙氏假单胞菌对浓度2.5mg/L亚硝态氮降解率为96％。
附图说明
图1是菌株CY06去除NH4 +的实验结果；
图2是菌株CY06对亚硝酸盐、硝酸盐的含量的影响；
图3是不同盐度条件对菌株CY06脱氮效率的实验结果；
图4是培养温度对CY06菌株反硝化效率的影响的实验结果；
图5是初始pH值条件下菌株CY06对亚硝态氮的去除率的实验结果；
图6是碳源对菌株CY06脱氮效率的影响的实验结果。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。
实施例1、CY06菌株的筛选
1、筛选蓝色晕圈且无溶血圈的菌株
筛选样品采集自江苏、广东等地鱼塘和虾塘的水样、鱼样、虾样以及青岛海水样、沙土样等100个，采用倍比稀释法将采集的水样、土样进行梯度稀释，另将采集的鱼样和虾样先用酒精棉消毒，并解剖取其肝和肠，在少量无菌水中研磨并进行稀释涂布于BTB固体培养平板，放置于30℃恒温箱中进行培养20h，挑取周围有蓝色晕圈的菌落于LB平板上进行划线，并纯化两次。将纯化两次后的单菌落，用牙签点种在新鲜的溶血板上，放置于30℃恒温箱中观察24h、48h、 72h，是否出现溶血圈。根据使血细胞琼脂溶血的能力分类：1)α溶血：草绿色溶血，菌落周围培养基出现1～2mm的草绿色环，为高铁血红蛋白所致；2)β溶血：完全溶血，菌落周围形成一个完全清晰透明的溶血环，是细菌产生的溶血素使红细胞完全溶解所致；3)γ溶血：不溶血。将有溶血圈的菌株淘汰。
将无溶血性的菌株在选择性固体培养基上划线，生长良好的菌株用LB液体培养，在30℃恒温扩大培养16h。
LB培养基由1％胰蛋白胨、0.5％酵母提取物、1％NaCl组成，pH7.0 (若制备固体培养基加入1.5-2.0％琼脂，下同)。
固体溴麝香草酚蓝培养基(BTB培养基)：丁二酸钠4.72g、亚硝酸钠0.375g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸铁0.05g、无水氯化钙0.2g、七水硫酸镁1g、溴百里酚蓝1g、琼脂20g、蒸馏水1000ml。
最终在BTB板上筛选到有蓝色晕圈且无溶血圈的菌株34株。
2、高通量测定菌株降氮功能，筛选高效菌株
在超净台中，将34株待测菌株菌液接入相应的筛选培养基中，接种终浓度为5×105CFU/mL，重复数为3；放入摇床中进行培养30℃， 180r/min，培养48h；均匀取样到1.5mL离心管中，12000rpm离心 3min，取上清200μL加入96孔板。
测定亚硝态氮时，在96孔板中加入待测样上清液200μL后，每孔先后加入格里斯试剂A、B各20μL，于550nm比色测定。
亚硝态氮筛选培养基：丁二酸钠4.72g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸铁0.05g、无水氯化钙0.2g、七水硫酸镁1g、亚硝酸钠母液1ml、蒸馏水定容至1000ml。
亚硝酸钠母液为称取3.75g NaNO2加入1L蒸馏水，此时亚硝态氮浓度约为：2.5g/L。
选取亚硝酸氮降解率高于70％的4株菌(编号为Y1-Y4)，以不接种任何菌株为阴性对照(CK)，进行重复测定。
测定方法：在超净台中，将待测菌株菌液接入相应筛选培养基中，接种终浓度为5×105cfu/mL，重复数为3；放入摇床中进行培养30℃， 180r/min，培养48h；均匀取样到1.5mL离心管中，12000r/min离心3min，取上清200μL加入96孔板。
测定亚硝态氮时，在96孔板中加入待测样上清液200μL后，每孔先后加入格里斯试剂A、B各20μL，于550nm比色测定。
定性测定：测定亚硝态氮时，溶液变为粉红色、玫瑰红色、橙色或棕色等表示有亚硝酸盐还原，反应为阳性，即颜色越浅说明降解效果越佳。
定量测定：制定亚硝态氮浓度(Y1)与测定OD值(X1)之间参考标准曲线。
格里斯氏试剂(Griess)A：对氨基苯磺酸0.5g，稀醋酸(10％左右)150mL，棕色瓶避光，4℃保存。格里斯氏试剂B：α萘胺0.1g，蒸馏水20mL，稀醋酸(10％左右)150mL，棕色瓶避光4℃保存。
实验结果如表1所示，筛选到一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株 CY06，CY06平均亚硝降解率为96％，降氮能力最高。
表1 4株优选菌株亚硝态氮降解率比较测定(Y4号为CY06)
本发明筛选到的蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)CY06，其16SrRNA核酸序列如SEQIDNo.1所示。放入Genbank中进行比对，结果显示与Pseudomonas monteilii的16SrRNA序列的相似性达100％。同时结合细菌形态特征、生理生化特性、生长条件，确定假单胞菌(Pseudomonas sp.)CY06为蒙氏假单胞菌，对菌株CY06进行全基因组测序，发现菌株内有编码亚硝酸还原酶大小亚基的序列。
蒙氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)CY06的生物学特征如下：菌落直径为3-4mm，颜色呈乳白色，无黏性，表面光滑扁平，质地均匀有光泽；革兰氏染色反应呈红色，菌体呈杆状。
蒙氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)CY06的生理生化性质如表2所示。
表2 CY06菌株生理生化特性
注：“+”为阳性；“-”为阴性；
将筛选到的蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii CY06进行保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称 CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为2018年1月22日，蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii CY06的保藏编号为CGMCC No.15249。
实施例2、脱氮类型的研究
1、菌株CY06硝化特性的研究
在超净台中，将待测菌株CY06的菌液接入50ml硝化培养基中，接种终浓度为5×105cfu/mL，重复3次；放入摇床中进行培养30℃、 180rpm，取样测定培养基中氨氮、亚硝酸盐以及硝酸盐的含量。
结果如图1所示，CY06菌株能快速的去除NH4 +，20h时NH4 +-N 去除率为82.3％，过程中有亚硝态氮的生成。
2、菌株CY06反硝化特性的研究
在超净台中，将待测菌株CY06的菌液接入50ml反硝化培养基中，接种终浓度为5×105CFU/mL，重复3次；放入摇床中进行培养 30℃、180rpm，取样测定培养基中亚硝酸盐、硝酸盐的含量。
结果如图2所示，8-12h期间NO3 -下降速率逐渐加快，15h后NO3 -的降解率达到90％以上，从8h开始，随着NO3 -的降低，亚硝酸盐也开始有了较为明显的生成，且在10h浓度最高，为4mg/L，而后又迅速下降，12h积累的亚硝酸盐降解完全。
通过以上结果可知，菌株CY06可以进行异养硝化及好氧反硝化脱氮反应。
异养硝化培养基：丁二酸钠4.72g、氯化铵0.45g、磷酸二氢钾 1g、七水硫酸铁0.05g、无水氯化钙0.2g、七水硫酸镁1g、蒸馏水1000ml。
反硝化培养基：丁二酸钠4.72g、硝酸钠0.07g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸铁0.05g、无水氯化钙0.2g、七水硫酸镁1g、蒸馏水1000ml。
实施例3、CY06菌株的全基因组测序分析
经全基因组测序分析，发现该菌株含有一个5，689，878bp的染色组，其中G+C含量为61％，包含5110个编码基因；基因功能分析发现，在该菌株中存在与硝化反硝化功能相关的酶，如硝酸还原酶、亚硝酸还原酶、一氧化氮还原酶等，另又发现谷氨酰氨合成酶、谷氨酸合成酶、硝酸盐单加氧酶等20个与氮代谢相关的蛋白。
实施例4、环境因素对菌株CY06脱氮效率的影响
1、不同盐度条件对菌株CY06脱氮效率的影响
亚硝酸钠母液为称取3.75gNaNO2加入1L蒸馏水，此时亚硝态氮浓度约为：2.5g/L。
亚硝态氮筛选培养基：丁二酸钠4.72g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸铁0.05g、无水氯化钙0.2g、七水硫酸镁1g、亚硝酸钠母液1ml、蒸馏水定容至1000ml(加入不同量的氯化钠使培养基的盐度为5‰、 15‰、25‰、35‰)，亚硝态氮浓度约为：2.5mg/L，121℃灭菌。
不同盐度条件对菌株CY06脱氮效率的实验结果见图3所示，在盐度为5‰-20‰，菌株CY06对亚硝态氮的去除效果较为理想，培养 12h的培养基中的亚硝酸盐浓度很低甚至为零；但盐度在25‰-35‰， 12h内亚硝态氮降解率较低，表明盐度过高，会影响菌株的降解性能。
2、不同的培养温度对CY06菌株反硝化效率的影响
亚硝酸钠母液为称取3.75gNaNO2加入1L蒸馏水，此时亚硝态氮浓度约为：2.5g/L。
亚硝态氮筛选培养基：丁二酸钠4.72g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸铁0.05g、无水氯化钙0.2g、七水硫酸镁1g、亚硝酸钠母液1ml、蒸馏水定容至1000ml，亚硝态氮浓度约为：2.5mg/L，121℃灭菌。
培养温度对CY06菌株反硝化效率的影响的实验结果见图4所示， 0-9h时，培养温度为20℃和40℃时，亚硝态氮去除率几乎为0％，而温度为30℃，亚硝态氮去除率接近100％，表明菌株CY06发挥脱氮特性的最适温度为30℃。
3、不同初始pH值条件下菌株CY06对亚硝态氮的去除率
亚硝酸钠母液为称取3.75gNaNO2加入1L蒸馏水，此时亚硝态氮浓度约为：2.5g/L。
亚硝态氮筛选培养基：丁二酸钠4.72g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸铁0.05g、无水氯化钙0.2g、七水硫酸镁1g、亚硝酸钠母液1ml、蒸馏水定容至1000ml(调节培养基的pH为4、5、7、10)，亚硝态氮浓度约为：2.5mg/L，121℃灭菌。
初始pH值条件下菌株CY06对亚硝态氮的去除率的实验结果见图5，在初始pH＝4条件下去除效率稍差，培养12h的去除效率仅为 15.7％；当初始pH值分别为5-10时，亚硝态氮去除率提升，12h后培养基中的亚硝酸盐浓度很低甚至为零。表明菌株CY06对pH的适应范围较宽。
4、不同的碳源对菌株CY06脱氮效率的影响
亚硝酸钠母液为称取3.75g NaNO2加入1L蒸馏水，此时亚硝态氮浓度约为：2.5g/L。
亚硝态氮筛选培养基：丁二酸钠4.72g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸铁0.05g、无水氯化钙0.2g、七水硫酸镁1g、亚硝酸钠母液1ml、蒸馏水定容至1000ml(将丁二酸钠分别换成柠檬酸钠、乙酸钠、蔗糖、葡萄糖)，亚硝态氮浓度约为：2.5mg/L，121℃灭菌。
碳源对菌株CY06脱氮效率的影响的实验结果见图6所示，菌株CY06对所测试的5种碳源存在差异，培养9h，以柠檬酸钠和丁二酸钠为碳源时其脱氮效率接近100％，明显高于其他碳源，说明菌株 CY06脱氮的最适碳源为柠檬酸钠和丁二酸钠。
实施例5、养殖应用试验
模拟养殖环境，验证菌种的亚硝酸盐降解性能。应用60尾斑马鱼，分对照组及试验组两个处理，每个处理设2个重复。试验组加入终浓度为1×104cfu/mL的培养过夜的CY06菌液，对照组不添加益生菌液。每缸设初始亚硝酸盐浓度为2.5mg/L，正常饲喂，48h后测定水槽亚硝酸盐浓度。如表3所示，经过测定，试验组亚硝酸盐浓度平均降为0.26mg/L，亚硝酸盐降解率达89.1％，说明CY06菌株在实际养殖环境中也具有有较好的亚硝酸盐降解效果。
表3菌株CY06养殖应用试验结果
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
序列表
<110> 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司
青岛百奥安泰生物科技有限公司
<120> 一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株CY06及其微生态制剂和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1293
<212> DNA
<213> 蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)
<400> 1
ggtgagtaat gcctaggaat ctgcctggta gtgggggaca acgtttcgaa aggaacgcta 60
ataccgcata cgtcctacgg gagaaagcag gggaccttcg ggccttgcgc tatcagatga 120
gcctaggtcg gattagctag ttggtggggt aatggctcac caaggcgacg atccgtaact 180
ggtctgagag gatgatcagt cacactggaa ctgagacacg gtccagactc ctacgggagg 240
cagcagtggg gaatattgga caatgggcga aagcctgatc cagccatgcc gcgtgtgtga 300
agaaggtctt cggattgtaa agcactttaa gttgggagga agggcagtaa gttaatacct 360
tgctgttttg acgttaccga cagaataagc accggctaac tctgtgccag cagccgcggt 420
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tagagtacgg tagagggtgg tggaatttcc tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatagga 600
aggaacacca gtggcgaagg cgaccacctg gactgatact gacactgagg tgcgaaagcg 660
tggggagcaa acaggattag ataccctggt agtccacgcc gtaaacgatg tcaactagcc 720
gttggaatcc ttgagatttt agtggcgcag ctaacgcatt aagttgaccg cctggggagt 780
acggccgcaa ggttaaaact caaatgaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg 840
tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggcct tgacatgcag agaactttcc 900
agagatggat tggtgccttc gggaactctg acacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc 960
gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgta acgagcgcaa cccttgtcct tagttaccag 1020
cacgtaatgg tgggcactct aaggagactg ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg 1080
acgtcaagtc atcatggccc ttacggcctg ggctacacac gtgctacaat ggtcggtaca 1140
gagggttgcc aagccgcgag gtggagctaa tctcacaaaa ccgatcgtag tccggatcgc 1200
agtctgcaac tcgactgcgt gaagtcggaa tcgctagtaa tcgcgaatca gaatgtcgcg 1260
gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcc 1293

Claims (10)

1.一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株CY06，其特征在于：其分类命名为蒙氏假单胞菌株Pseudomonas monteilii，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15249。
2.根据权利要求1所述的蒙氏假单胞菌株CY06，其特征在于：所述菌株CY06的菌落直径为3-4mm，颜色呈乳白色，无黏性，表面光滑扁平，质地均匀有光泽；革兰氏染色反应呈红色，菌体呈杆状。
3.含有权利要求1所述菌株CY06的微生态制剂。
4.权利要求3所述的微生态制剂在改良养殖水体中的应用。
5.根据权利要求4所述的微生态制剂在改良养殖水体中的应用，其特征在于：所述微生态制剂用于降解水体中的氨氮和亚硝态氮，微生物制剂中菌株CY06的浓度为1×108cfu/mL~1×109cfu/mL。
6.根据权利要求5所述的微生态制剂在改良养殖水体中的应用，其特征在于：所述微生态制剂中菌株CY06在盐度为5‰-20‰，对亚硝态氮的去除效果明显。
7.根据权利要求5所述的微生态制剂在改良养殖水体中的应用，其特征在于：所述微生态制剂中菌株CY06改良水体的最适温度为30℃。
8.根据权利要求5所述的微生态制剂在改良养殖水体中的应用，其特征在于：所述微生态制剂中菌株CY06改良水体的pH为5-10。
9.根据权利要求5所述的微生态制剂在改良养殖水体中的应用，其特征在于：所述微生态制剂中菌株CY06脱氮的碳源为柠檬酸钠和/或丁二酸钠。
10.根据权利要求5所述的微生态制剂在改良养殖水体中的应用，其特征在于：所述菌株CY06在养殖水体中的终浓度为1×104 cfu/mL以上。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110499264A (zh) * 2019-07-16 2019-11-26 威海科尼利合环保科技有限公司 一株降解油脂的蒙氏假单胞菌及其应用
CN111018130A (zh) * 2019-12-11 2020-04-17 福建大北农水产科技有限公司 一种水产微生态制剂及其在降低养殖水体中氨氮和亚硝酸盐的应用
CN111925955A (zh) * 2020-07-02 2020-11-13 河海大学 由自养、异养反硝化菌群制备的复合固体颗粒及制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104630098A (zh) * 2014-12-29 2015-05-20 天津凯英科技发展有限公司 一种蒙氏假单孢菌ky-05与应用
CN107201325A (zh) * 2017-05-03 2017-09-26 上田环境修复股份有限公司 假单胞菌菌株及其培养方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104630098A (zh) * 2014-12-29 2015-05-20 天津凯英科技发展有限公司 一种蒙氏假单孢菌ky-05与应用
CN107201325A (zh) * 2017-05-03 2017-09-26 上田环境修复股份有限公司 假单胞菌菌株及其培养方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QINGSHAN MA，ET AL: "Complete genome sequence of a novel aerobic denitrifying strain,Pseudomonas monteilii CY06", 《MARINE GENOMICS》 *
赵健宇等: "好氧反硝化细菌LKX-1菌株培养基与发酵条件的优化", 《湖南农业科学》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110499264A (zh) * 2019-07-16 2019-11-26 威海科尼利合环保科技有限公司 一株降解油脂的蒙氏假单胞菌及其应用
CN110499264B (zh) * 2019-07-16 2022-03-22 威海科尼利合环保科技有限公司 一株降解油脂的蒙氏假单胞菌及其应用
CN111018130A (zh) * 2019-12-11 2020-04-17 福建大北农水产科技有限公司 一种水产微生态制剂及其在降低养殖水体中氨氮和亚硝酸盐的应用
CN111925955A (zh) * 2020-07-02 2020-11-13 河海大学 由自养、异养反硝化菌群制备的复合固体颗粒及制备方法

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