CN101985051A - 一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质及其制备方法和用途 - Google Patents

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戴静
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Abstract

本发明公开了一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质及其制备方法和用途。该方法包括步骤：(1)新鲜动物全层角膜或角膜基质的获取；(2)去除角膜上皮、内皮和基质细胞：①室温下用纯水浸泡全层角膜或角膜基质；②置于酶溶液中，震荡消化，再用平衡盐溶液震荡清洗；③将全层角膜或角膜基质重复冻融过程4～8次，然后置于平衡盐溶液震荡清洗，得到脱细胞角膜或脱细胞角膜基质；(3)脱水处理；(4)消毒、保存。本方法角膜脱细胞处理时间短，对角膜结构与生理特性影响较小，处理后的角膜具有很低的免疫原性，与自然角膜特性接近。脱细胞角膜或脱细胞角膜基质可用于组织工程的人工角膜构建，又可作为医用材料用于角膜移植、屈光手术。

Description

一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医用材料领域，具体涉及一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质及其制备方法和用途。
背景技术
角膜病是全球范围内第二致盲眼病，并且以每年150～200万病例的速度递增。角膜移植是目前治疗角膜盲唯一有效的方法，但供体角膜来源的极端匮乏制约着角膜移植的开展。因此，研究和开发出人角膜替代品是解决此供需矛盾的关键。
目前，体外构建与正常角膜功能等效的活性组织工程角膜已有数十年的历史。由于角膜独特的生理和光学特性，要求构建的组织工程角膜必须具有(1)良好的生物相容性；(2)适度的强度和弹性；(3)高透明性；(4)稳定的角膜厚度和角膜曲率。
角膜基质如猪角膜基质具有与人角膜基质类似的组织结构、生物物理特性和光学特性。但是异种移植后强烈的排斥反应阻碍了异种角膜在临床上的应用。近年来的研究发现，角膜基质内的基质细胞是引起基质型排斥反应的主要抗原。而作为角膜基质架构的胶原纤维在种系间高度保守，抗原性很低，无细胞的异种角膜移植后不产生排斥反应。因此，将动物的基质细胞完全脱去，使之成为无细胞的角膜基质可能是人角膜基质的理想替代物。
经典的组织工程角膜是将种子细胞接种在可降解材料上，Minami等在胶原凝胶上培养角膜细胞，虽然获得三维角膜类似物，但由于其不透明和抗拉力弱，不能用于角膜移植。Griffith等将转基因的内皮和上皮细胞培养在以胶原-硫酸软骨素为基础的基质上，成功的培养出功能性类人角膜组织，但是病毒和醛交联对正常细胞均有毒性，且基质强度也不够，另外由于胶原易被胶原酶消化，因此不稳定，进而影响角膜的光学性能和移植细胞的长期存活。因此人工合成的角膜生物材料至今还很不理想，无法制备出与人角膜具有相似的透明性、强度及生物学特性的基质架构。
刘晓霞等采用胰酶-冰冻法对新鲜兔角膜进行脱细胞处理，结果显示用该方法获得的兔角膜全层和分层脱细胞基质未见细胞成分，但透光率低于新鲜角膜而且脱细胞时间较长，要持续3天。北京大学第三附属医院徐永根等人利用表面活性剂、DNA酶和RNA酶对天然猪角膜进行脱细胞处理，90％丙三醇脱水4h后其透明性接近天然角膜，但是破坏了天然角膜基质的超微结构。由于现在大多数使用的脱细胞方法如机械力、离子和去离子除垢剂、酶处理的方法会影响角膜的透明性而且会破坏角膜的超微结构。
发明内容
为了解决上述现有技术的不足之处，本发明的首要目的在于提供一种低免疫原性与自然角膜特性接近的脱细胞角膜或脱细胞角膜基质的制备方法；该方法用酶消化较短的时间加上相对温和缺氧冷冻的物理条件，可以保持角膜的透明性而且不影响天然角膜基质的超微结构，且整个脱细胞的过程持续时间较短，约30h就可以完成。
本发明的另一目的在于提供上述方法制备得到的脱细胞角膜或脱细胞角膜基质。
本发明的再一目的在于提供该脱细胞角膜或脱细胞角膜基质在组织工程的人工角膜构建或者制备角膜移植、屈光手术的医用材料中的应用。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：
一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质的制备方法，包括如下具体步骤：
(1)新鲜动物全层角膜或角膜基质的获取：修剪动物眼球表面附属组织后用含1000～2000u/ml的抗生素的磷酸盐缓冲液洗涤，在手术显微镜下沿角膜缘剪下全角膜，获得全层角膜；将全层角膜刮去角膜上皮层和撕去后弹力层，得到角膜基质；室温20℃～28℃条件下，将获得的全层角膜或角膜基质称取起始初重；
(2)去除角膜上皮、内皮和基质细胞：
①在室温20℃～28℃下，将获得的全层角膜或角膜基质置于纯水中浸泡0.5～1h；
②将经步骤①处理后的全层角膜或角膜基质置于酶溶液中，放在恒温摇床上震荡消化，然后再用平衡盐溶液震荡清洗；
③将经步骤②处理后的全层角膜或角膜基质重复冻融过程6～8次，然后置于平衡盐溶液震荡清洗6～8次，每次30～40min，得到脱细胞角膜或脱细胞角膜基质；所述冻融过程是把离心管置于室温下和空气中，将全层角膜或角膜基质放在离心管中，离心管注满液氮，在瞬间缺氧和-196℃条件下冷冻，并保持缺氧冷冻状态，紧密管口后在室温下放置1～1.5h，然后松开离心管口，解除缺氧冷冻状态，待角膜慢慢复温解冻；
(3)脱水处理：将脱细胞角膜或脱细胞角膜基质在无菌条件下，保持温度20℃～28℃，紫外线照射下，干燥至起始初重；
(4)消毒、保存：将经过脱水处理的脱细胞角膜或脱细胞角膜基质经辐射剂量为25kGey的钴60辐射灭菌，采用在4℃冰箱中密封保存或在体积分数为95％甘油中保存备用，得到脱细胞角膜或脱细胞角膜基质产品。
步骤(1)所述动物为猪、牛、兔、羊、猫、猴、马、驴或狗，所述动物眼球为屠宰场屠宰后的新鲜动物尸体上获取的；所述抗生素为庆大霉素；所述磷酸盐缓冲液的pH值为7～8；所述洗涤的次数为3～5次。
步骤②所述震荡消化的温度保持37℃，PH值为6～8，时间为3～5h；所述震荡清洗的次数为3～6次，每次30～40min。
步骤②所述酶溶液为磷脂酶溶液或中性蛋白酶溶液；所述酶溶液的用量为10～15ml每块全层角膜或角膜基质；所述平衡盐溶液为pH值为7～8的磷酸平衡盐溶液PBS；步骤③所述离心管为50ml塑料离心管。
所述磷脂酶溶液是磷脂酶A2溶液；所述中性蛋白酶溶液为中性蛋白酶Dispase II溶液。
所述磷脂酶溶液是将磷脂酶A2溶解在平衡盐溶液中制成的浓度为100～300U/ml的溶液，所述中性蛋白酶溶液是将中性蛋白酶Dispase II溶解在平衡盐溶液中制成的浓度为2.4U/ml的溶液。
步骤(3)所述脱水处理是将脱细胞角膜或脱细胞角膜基质放在超净台上进行处理；所述干燥采用风机吹干。
一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质，是由上述方法制备得到的。
上述脱细胞角膜或脱细胞角膜基质可应用于在组织工程的人工角膜构建，也可应用于制备角膜移植或屈光手术的医用材料。
上述方法得到的脱细胞角膜或脱细胞角膜基质为活性人工角膜的支架材料，进行角膜相关细胞的培养，获得可以进行移植的分层与全层活性人工角膜；也可以作为角膜移植物进行角膜移植眼表修复。
本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：
(1)本方法既可以去除动物角膜基质内的细胞成分，又可以保存角膜胶原纤维的基本架构，从而保留了角膜韧性和透明性，处理后的角膜具有很低的免疫原性。
(2)本方法脱细胞角膜处理时间短于现有的脱细胞角膜技术方法，综合应用物理与酶消化方法，对角膜结构与生理特性影响较小，与自然角膜特性接近，是一种理想的组织工程角膜。
附图说明
图1为猪角膜脱细胞处理前后的大体观察图，其中(a)为猪角膜脱细胞处理前的大体观察图，(b)为猪角膜脱细胞处理后的大体观察图。
图2为猪角膜脱细胞处理前后苏木精-伊红(HE)染色照片图，其中(a)为猪角膜脱细胞处理前HE染色照片图，(b)为猪角膜脱细胞处理后HE染色照片。
图3为猪角膜脱细胞处理前后的透射电镜照片图，其中(a)为猪角膜脱细胞处理前的透射电镜照片图，(b)为猪角膜脱细胞处理后透射电镜照片图。
图4为猪角膜脱细胞处理后表面进行角膜基质细胞培养图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：猪全层角膜脱细胞角膜的制备
(1)新鲜猪角膜的获取：从某屠宰场屠宰后的猪尸体上获取新鲜猪眼球，修剪眼球表面附属组织后用含2000u/ml的庆大霉素的磷酸盐缓冲液(PBS，pH值为7)洗涤3次，手术显微镜下沿角膜缘剪下猪全层角膜，参见图1a、图2a、图3a；将全层角膜室温20℃～28℃条件下，将获得的猪全层角膜称取起始初重；
(2)去除角膜上皮、内皮和基质细胞：
①室温下，将获得的猪全层角膜置于纯水中浸泡0.5h；
②将经步骤①处理后的每块猪全层角膜置于10ml 200U/ml的磷脂酶A2溶液中，置于恒温摇床上震荡消化3h，处理温度为37℃，pH值8.0；然后用pH值为7的磷酸平衡盐溶液PBS震荡清洗3次，每次40min；
③将经步骤②处理后的猪全层角膜重复冻融过程6～8次，然后置于平衡盐溶液震荡清洗6～8次，每次30～40min，得到猪脱细胞角膜；所述冻融过程是把50ml塑料离心管置于室温下和空气中，将猪全层角膜放在离心管中，离心管注满液氮，在瞬间缺氧和-196℃条件下冷冻，并保持缺氧冷冻状态，紧密管口后在室温下放置1.5h，然后松开离心管口，解除缺氧冷冻状态，待角膜慢慢复温解冻；
(3)脱水处理：将猪脱细胞角膜放在超净台上，温度保持室温下(20℃～28℃)，紫外线线照射下，风机吹干约4h直至角膜干燥至起始初重，脱水后角膜透明，参见图1b、图2b、图3b。
(4)消毒、保存：脱水处理后的猪脱细胞角膜经钴60(25kGey)辐射灭菌后，用体积分数为95％甘油(4℃冰箱)中保存备用，得到猪脱细胞角膜产品。
结果：取上述所得猪脱细胞角膜产品进行形态学HE染色观察、超微结构透射电镜观察、透光率、厚度变化、力学性质、生物相容性分析。HE染色结果显示：正常角膜具有完整的复层角膜上皮细胞和单层角膜内皮细胞，角膜基质内存在大量基质细胞。脱细胞角膜中未观察到任何完整的细胞，上皮层和内皮层，即得到的是脱细胞角膜。透射电镜照片显示：脱细胞角膜中胶原纤维排列整齐，未见胶原纤维降解的迹象。透光率结果显示：制备的脱细胞角膜高度透明，在300～800nm波长范围内，脱细胞角膜的透光率随着光波波长的增加，逐渐增加，在800nm波长时达到最大值，脱细胞角膜的透光率随着波长变化的趋势与正常角膜比较，无显著性差异(P＞0.05)。角膜厚度变化结果显示：37℃时，干燥后的脱细胞角膜置于磷酸盐缓冲液后，在吸水10min～120min时间范围内，脱细胞角膜厚度随着吸水时间的延长，逐渐增加，在120min时达到最大值，脱细胞角膜的角膜厚度变化随着吸水时间变化的趋势与正常角膜比较，无显著性差异(P＞0.05)。高精度生物材料试验机力学性质分析结果显示：在0.1～1.0mm位移范围内，随着位移的增加，脱细胞角膜所受的压强逐渐增加，脱细胞角膜压强变化随着位移变化的趋势与正常角膜比较，无显著性差异(P＞0.05)。将制备的脱细胞角膜为支架材料，进行角膜基质细胞的培养，发现角膜基质细胞在脱细胞角膜表面能够生长，参见图4。说明制备的脱细胞角膜具有良好的生物相容性。
从结果分析得出本方法制备的脱细胞角膜既去除了动物角膜基质内的细胞成分，具有很低的免疫原性，又可以保存角膜胶原纤维的基本架构，从而保留了角膜韧性和透明性，还具有良好的生物相容性，与自然角膜特性接近，是一种理想的组织工程角膜。
应用：将制备的脱细胞角膜为活性人工角膜的支架材料，进行角膜相关细胞的培养角膜获得可以进行移植的分层与全层活性人工角膜，也可以作为角膜移植物进行治疗性角膜移植眼表修复，还可以作为异种角膜移植的供体材料。
实施例2：猪角膜基质脱细胞基质的制备
(1)新鲜猪角膜基质的获取：从某屠宰场屠宰后的猪尸体上获取新鲜猪眼球，修剪眼球表面附属组织后用含1000u/ml的庆大霉素的磷酸盐缓冲液(PBS，pH值为8)洗涤4次，手术显微镜下沿角膜缘剪下猪全层角膜；将猪全层角膜刮去角膜上皮层和撕去后弹力层，得到猪角膜基质；室温20℃～28℃条件下，将获得的猪角膜基质称取起始初重；
(2)去除角膜基质细胞：
①室温下(20℃～28℃)，将获得的猪角膜基质置于纯水中浸泡0.5h；
②将经步骤①处理后的每块猪角膜基质置于15ml 300U/ml的磷脂酶A2溶液中，置于恒温摇床上震荡消化3h，处理温度为37℃，pH值7.0，然后用pH值为8的磷酸平衡盐溶液PBS震荡清洗3次，每次30min；
③将经步骤②处理后的猪角膜基质重复冻融过程6次，然后置于平衡盐溶液震荡清洗6次，每次40min，得到猪脱细胞角膜基质；所述冻融过程是把50ml塑料离心管置于室温下和空气中，将猪全层角膜放在离心管中，离心管注满液氮，在瞬间缺氧和-196℃条件下冷冻，并保持缺氧冷冻状态，紧密管口后在室温下放置1.5h，然后松开离心管口，解除缺氧冷冻状态，待角膜慢慢复温解冻；
(3)脱水处理：猪脱细胞角膜基质放在超净台上，温度保持室温下(20℃～28℃)，紫外线线照射下，风机吹干约4h直至角膜干燥至起始初重。
(4)消毒、保存：脱水处理后的猪脱细胞角膜基质经钴60(25kGey)辐射灭菌后，4℃下保存备用，得到猪脱细胞角膜基质产品。
实施例3：牛全层角膜脱细胞角膜的制备
(1)新鲜牛全层角膜的获取：从某屠宰场屠宰后的牛尸体上获取新鲜牛眼球，修剪眼球表面附属组织后用含2000u/ml的庆大霉素的磷酸盐缓冲液(PBS，pH值为7.5)洗涤5次，手术显微镜下沿角膜缘剪下全角膜获取牛全层角膜；室温20℃～28℃条件下，将获得的牛全层角膜称取起始初重；
(2)去除角膜上皮、内皮和基质细胞：
①室温下(20℃～28℃)，将获得的牛角膜置于纯水中浸泡1h；
②将经步骤①处理后的每块牛全层角膜置于15ml 2.4U/ml中性蛋白酶Dispase II溶液中，置于恒温摇床上震荡消化5h，处理温度为37℃，pH值6.0，然后用pH值为7.5的磷酸平衡盐溶液PBS震荡清洗6次，每次40min；
③将经步骤②处理后的牛全层角膜重复冻融过程8次，然后置于平衡盐溶液震荡清洗8次，每次30min，得到牛脱细胞角膜；所述冻融过程是把50ml塑料离心管置于室温下和空气中，将猪全层角膜放在离心管中，离心管注满液氮，在瞬间缺氧和-196℃条件下冷冻，并保持缺氧冷冻状态，紧密管口后在室温下放置1h，然后松开离心管口，解除缺氧冷冻状态，待角膜慢慢复温解冻；
(3)脱水处理：将牛脱细胞角膜放在超净台上，温度保持室温下(20℃～28℃)，紫外线线照射下，风干约4h直至角膜干燥至起始初重。
(4)消毒、保存：脱水处理后的牛脱细胞角膜经钴60(25kGey)辐射灭菌后，体积分数为95％甘油(室温下)中保存备用，得到牛脱细胞角膜产品。
实施例4：牛角膜基质层脱细胞基质的制备：
(1)新鲜牛角膜基质的获取：从某屠宰场屠宰后的牛尸体上获取新鲜牛眼球，修剪眼球表面附属组织后用含1500u/ml的庆大霉素的磷酸盐缓冲液(PBS，pH值为7)洗涤5次，手术显微镜下沿角膜缘剪下牛全层角膜；将牛全层角膜刮去角膜上皮层和撕去后弹力层，得到牛角膜基质；室温20℃～28℃条件下，将获得的全层角膜或角膜基质称取起始初重；
(2)去除角膜基质细胞：
①室温下(20℃～28℃)，将获得的牛角膜基质置于纯水中浸泡1h；
②将经步骤①处理后的每块牛角膜基质置于10ml 2.4U/ml中性蛋白酶Dispase II溶液中，置于恒温摇床上震荡消化3h，处理温度为37℃，pH值8.0，然后用pH值为8的磷酸平衡盐溶液PBS震荡清洗5次，每次30min；
③将经步骤②处理后的牛角膜基质重复冻融过程7次，然后置于平衡盐溶液震荡清洗7次，每次35min，得到牛脱细胞角膜基质；所述冻融过程是把50ml塑料离心管置于室温下和空气中，将猪全层角膜放在离心管中，离心管注满液氮，在瞬间缺氧和-196℃条件下冷冻，并保持缺氧冷冻状态，紧密管口后在室温下放置1h，然后松开离心管口，解除缺氧冷冻状态，待角膜慢慢复温解冻；
(3)脱水处理：将牛脱细胞角膜基质放在超净台上，温度保持室温下(20℃～28℃)，紫外线线照射下，吹干约4h直至角膜干燥至起始初重。
(4)消毒、保存：脱水处理后的牛脱细胞角膜基质经钴60(25kGey)辐射灭菌后，4℃下保存备用，得到牛脱细胞角膜基质产品。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质的制备方法，其特征在于包括如下具体步骤：
(1)新鲜动物全层角膜或角膜基质的获取：修剪动物眼球表面附属组织后用含1000～2000u/ml抗生素的磷酸盐缓冲液洗涤，在手术显微镜下沿角膜缘剪下全角膜，获得全层角膜；将全层角膜刮去角膜上皮层和撕去后弹力层，得到角膜基质；室温20℃～28℃条件下，将获得的全层角膜或角膜基质称取起始初重；
(2)去除角膜上皮、内皮和基质细胞：
①在室温20℃～28℃下，将获得的全层角膜或角膜基质置于纯水中浸泡0.5～1h；
②将经步骤①处理后的全层角膜或角膜基质置于酶溶液中，放在恒温摇床上震荡消化，然后再用平衡盐溶液震荡清洗；
③将经步骤②处理后的全层角膜或角膜基质重复冻融过程6～8次，然后置于平衡盐溶液震荡清洗6～8次，每次30～40min，得到脱细胞角膜或脱细胞角膜基质；所述冻融过程是把离心管置于室温下和空气中，将全层角膜或角膜基质放在离心管中，离心管注满液氮，在瞬间缺氧和-196℃条件下冷冻，并保持缺氧冷冻状态，紧密管口后在室温下放置1～1.5h，然后松开离心管口，解除缺氧冷冻状态，待角膜慢慢复温解冻；
(3)脱水处理：将脱细胞角膜或脱细胞角膜基质在无菌条件下，保持温度20℃～28℃，紫外线线照射下，干燥至起始初重；
(4)消毒、保存：将经过脱水处理的脱细胞角膜或脱细胞角膜基质经辐射剂量为25kGey的钴60辐射灭菌，采用在4℃冰箱中密封保存或在体积分数为95％甘油中保存备用，得到脱细胞角膜或脱细胞角膜基质产品。
2.根据权利要求1所述的一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述动物为猪、牛、兔、羊、猫、猴、马、驴或狗，所述动物眼球为屠宰场屠宰后的新鲜动物尸体上获取的；所述抗生素为庆大霉素；所述磷酸盐缓冲液的pH值为7～8；所述洗涤的次数为3～5次。
3.根据权利要求1所述的一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质的制备方法，其特征在于：步骤②所述震荡消化的温度保持37℃，pH值为6～8，时间为3～5h；所述震荡清洗的次数为3～6次，每次30～40min。
4.根据权利要求1所述的一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质的制备方法，其特征在于：步骤②所述酶溶液为磷脂酶溶液或中性蛋白酶溶液；所述酶溶液的用量为10～15ml每块全层角膜或角膜基质；所述平衡盐溶液为pH值为7～8的磷酸平衡盐溶液PBS；步骤③所述离心管为50ml塑料离心管。
5.根据权利要求4所述的一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质的制备方法，其特征在于：所述磷脂酶溶液是磷脂酶A2溶液，所述中性蛋白酶溶液是中性蛋白酶Dispase II溶液。
6.根据权利要求5所述的一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质的制备方法，其特征在于：所述磷脂酶溶液是将磷脂酶A2溶解在平衡盐溶液中制成的浓度为100～300U/ml的溶液；所述中性蛋白酶溶液是将中性蛋白酶Dispase II溶解在平衡盐溶液中制成的浓度为2.4U/ml的溶液。
7.根据权利要求1所述的一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质的制备方法，其特征在于：步骤(3)所述脱水处理是将脱细胞角膜或脱细胞角膜基质放在超净台上进行处理；所述干燥采用风机吹干。
8.一种脱细胞角膜或脱细胞角膜基质，是由权利要求1～7任一项所述方法制备得到的。
9.根据权利要求8所述的脱细胞角膜或脱细胞角膜基质在组织工程的人工角膜构建中的应用。
10.根据权利要求9所述的脱细胞角膜或脱细胞角膜基质在制备角膜移植或屈光手术的医用材料中的应用。
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Cited By (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102552979A (zh) * 2012-01-20 2012-07-11 陕西瑞盛生物科技有限公司 一种角膜板层材料的制备方法
CN102726370A (zh) * 2012-06-29 2012-10-17 厦门大学附属厦门眼科中心 一种角膜缘组织的保存方法
CN102861358A (zh) * 2012-08-16 2013-01-09 吴鸿 一种以脐带沃顿胶为材料制作新型生物软骨支架
CN103908700A (zh) * 2013-01-06 2014-07-09 陕西佰傲再生医学有限公司 一种脱细胞角膜的制备方法
CN104189957A (zh) * 2014-09-11 2014-12-10 中国海洋大学 利用新鲜猪角膜制备组织工程角膜载体支架的方法及应用
CN104338181A (zh) * 2014-09-25 2015-02-11 沈阳市第四人民医院 一种人角膜基质的脱细胞方法
CN104665956A (zh) * 2015-02-12 2015-06-03 厦门大开医疗器械有限公司 一种人工角膜的制备方法
CN104800890A (zh) * 2015-04-08 2015-07-29 中山大学 一种脱细胞颌下腺基质材料及其制备方法
CN104971384A (zh) * 2015-07-29 2015-10-14 陕西博与再生医学有限公司 一种组织工程角膜的制备方法
CN106212442A (zh) * 2016-07-01 2016-12-14 山东省眼科研究所 一种脱细胞角膜制备用保护液
CN106267343A (zh) * 2015-05-29 2017-01-04 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种角膜脱细胞系统及脱细胞方法
CN106267344A (zh) * 2015-05-29 2017-01-04 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种角膜脱细胞系统
WO2018107482A1 (zh) * 2016-12-16 2018-06-21 厦门大开生物科技有限公司 一种脱细胞猪角膜的制备方法及其脱细胞板层角膜和用法
WO2018107487A1 (zh) * 2016-12-16 2018-06-21 厦门大开生物科技有限公司 一种角膜的辐照灭菌方法及其灭菌角膜
WO2018107484A1 (zh) * 2016-12-16 2018-06-21 厦门大开生物科技有限公司 猪角膜脱细胞方法及其脱细胞角膜以及板层干燥角膜使用方法
WO2018107486A1 (zh) * 2016-12-16 2018-06-21 厦门大开生物科技有限公司 一种脱细胞角膜的干燥方法及脱细胞猪板层干燥角膜
WO2018107485A1 (zh) * 2016-12-16 2018-06-21 厦门大开生物科技有限公司 一种脱细胞猪板层干燥角膜及其使用方法和用途
CN109324001A (zh) * 2018-11-19 2019-02-12 北京大学第三医院 膜状非均一性生物材料透明性筛选方法及脱细胞真皮基质
CN110755687A (zh) * 2019-11-04 2020-02-07 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 哺乳动物角膜的脱细胞方法
CN110772665A (zh) * 2019-11-04 2020-02-11 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种脱除异种角膜细胞的方法
CN110841111A (zh) * 2019-11-04 2020-02-28 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种供临床使用的脱细胞角膜基质的制备方法
CN117085182A (zh) * 2023-08-28 2023-11-21 山东第一医科大学附属眼科研究所(山东省眼科研究所、山东第一医科大学附属青岛眼科医院) 一种仿生生物材料的制备方法及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1879578A (zh) * 2005-06-15 2006-12-20 西安组织工程工程技术研究中心 一种具有生物活性的人工角膜的制备方法
CN101274106A (zh) * 2008-03-24 2008-10-01 中山大学中山眼科中心 一种制备脱细胞基质的方法
CN101433478A (zh) * 2007-11-14 2009-05-20 上海交通大学医学院附属第九人民医院 一种全层生物角膜及其构建方法和用途
CN101590292A (zh) * 2009-06-11 2009-12-02 山东省眼科研究所 脱细胞结膜基质的制备方法和应用
WO2010101326A1 (ko) * 2009-03-04 2010-09-10 서울대학교 산학협력단 탈세포화를 위한 돼지 각막의 가공방법

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1879578A (zh) * 2005-06-15 2006-12-20 西安组织工程工程技术研究中心 一种具有生物活性的人工角膜的制备方法
CN101433478A (zh) * 2007-11-14 2009-05-20 上海交通大学医学院附属第九人民医院 一种全层生物角膜及其构建方法和用途
CN101274106A (zh) * 2008-03-24 2008-10-01 中山大学中山眼科中心 一种制备脱细胞基质的方法
WO2010101326A1 (ko) * 2009-03-04 2010-09-10 서울대학교 산학협력단 탈세포화를 위한 돼지 각막의 가공방법
CN101590292A (zh) * 2009-06-11 2009-12-02 山东省眼科研究所 脱细胞结膜基质的制备方法和应用

Cited By (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102552979A (zh) * 2012-01-20 2012-07-11 陕西瑞盛生物科技有限公司 一种角膜板层材料的制备方法
CN102726370A (zh) * 2012-06-29 2012-10-17 厦门大学附属厦门眼科中心 一种角膜缘组织的保存方法
CN102861358B (zh) * 2012-08-16 2016-01-20 吴鸿 一种以脐带沃顿胶为材料制作新型生物软骨支架
CN102861358A (zh) * 2012-08-16 2013-01-09 吴鸿 一种以脐带沃顿胶为材料制作新型生物软骨支架
CN103908700A (zh) * 2013-01-06 2014-07-09 陕西佰傲再生医学有限公司 一种脱细胞角膜的制备方法
CN104189957A (zh) * 2014-09-11 2014-12-10 中国海洋大学 利用新鲜猪角膜制备组织工程角膜载体支架的方法及应用
CN104189957B (zh) * 2014-09-11 2016-03-09 中国海洋大学 利用新鲜猪角膜制备组织工程角膜载体支架的方法及应用
CN104338181A (zh) * 2014-09-25 2015-02-11 沈阳市第四人民医院 一种人角膜基质的脱细胞方法
CN104338181B (zh) * 2014-09-25 2016-05-11 沈阳市第四人民医院 一种人角膜基质的脱细胞方法
CN104665956B (zh) * 2015-02-12 2019-04-26 厦门大开医疗器械有限公司 一种人工角膜的制备方法
CN104665956A (zh) * 2015-02-12 2015-06-03 厦门大开医疗器械有限公司 一种人工角膜的制备方法
CN104800890A (zh) * 2015-04-08 2015-07-29 中山大学 一种脱细胞颌下腺基质材料及其制备方法
CN104800890B (zh) * 2015-04-08 2017-05-17 中山大学 一种脱细胞颌下腺基质材料及其制备方法
CN106267344B (zh) * 2015-05-29 2019-04-05 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种角膜脱细胞系统
CN106267343A (zh) * 2015-05-29 2017-01-04 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种角膜脱细胞系统及脱细胞方法
CN106267344A (zh) * 2015-05-29 2017-01-04 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种角膜脱细胞系统
CN106267343B (zh) * 2015-05-29 2019-04-05 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种角膜脱细胞系统及脱细胞方法
CN104971384A (zh) * 2015-07-29 2015-10-14 陕西博与再生医学有限公司 一种组织工程角膜的制备方法
CN106212442A (zh) * 2016-07-01 2016-12-14 山东省眼科研究所 一种脱细胞角膜制备用保护液
CN106212442B (zh) * 2016-07-01 2019-06-04 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种脱细胞角膜制备用保护液
WO2018107482A1 (zh) * 2016-12-16 2018-06-21 厦门大开生物科技有限公司 一种脱细胞猪角膜的制备方法及其脱细胞板层角膜和用法
WO2018107484A1 (zh) * 2016-12-16 2018-06-21 厦门大开生物科技有限公司 猪角膜脱细胞方法及其脱细胞角膜以及板层干燥角膜使用方法
CN109069264A (zh) * 2016-12-16 2018-12-21 厦门大开生物科技有限公司 一种脱细胞角膜的干燥方法及脱细胞猪板层干燥角膜
CN109475663B (zh) * 2016-12-16 2021-11-26 厦门大开生物科技有限公司 一种脱细胞猪角膜的制备方法及其脱细胞板层角膜和用法
CN109475663A (zh) * 2016-12-16 2019-03-15 厦门大开生物科技有限公司 一种脱细胞猪角膜的制备方法及其脱细胞板层角膜和用法
WO2018107485A1 (zh) * 2016-12-16 2018-06-21 厦门大开生物科技有限公司 一种脱细胞猪板层干燥角膜及其使用方法和用途
WO2018107486A1 (zh) * 2016-12-16 2018-06-21 厦门大开生物科技有限公司 一种脱细胞角膜的干燥方法及脱细胞猪板层干燥角膜
CN109069263A (zh) * 2016-12-16 2018-12-21 厦门大开生物科技有限公司 猪角膜脱细胞方法及其脱细胞角膜以及板层干燥角膜使用方法
WO2018107487A1 (zh) * 2016-12-16 2018-06-21 厦门大开生物科技有限公司 一种角膜的辐照灭菌方法及其灭菌角膜
CN109069264B (zh) * 2016-12-16 2020-06-30 厦门大开生物科技有限公司 一种脱细胞角膜的干燥方法及脱细胞猪板层干燥角膜
CN109324001A (zh) * 2018-11-19 2019-02-12 北京大学第三医院 膜状非均一性生物材料透明性筛选方法及脱细胞真皮基质
CN110772665A (zh) * 2019-11-04 2020-02-11 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种脱除异种角膜细胞的方法
CN110841111A (zh) * 2019-11-04 2020-02-28 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 一种供临床使用的脱细胞角膜基质的制备方法
CN110755687A (zh) * 2019-11-04 2020-02-07 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 哺乳动物角膜的脱细胞方法
CN117085182A (zh) * 2023-08-28 2023-11-21 山东第一医科大学附属眼科研究所(山东省眼科研究所、山东第一医科大学附属青岛眼科医院) 一种仿生生物材料的制备方法及其应用
CN117085182B (zh) * 2023-08-28 2024-04-09 山东第一医科大学附属眼科研究所(山东省眼科研究所、山东第一医科大学附属青岛眼科医院) 一种仿生生物材料的制备方法及其应用

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