CN101969917A - 抗皱用组合物和皮肤外用组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供具有高抗皱功能的并使用了富勒烯类的新型组合物。本发明的抗皱用组合物的特征在于含有在角鲨烷类溶解了富勒烯类的油溶状富勒烯。通过该组合物抑制了人皮肤角质化细胞上由于过氧化脂质所导致的DNA双链断裂。

Description

抗皱用组合物和皮肤外用组合物

技术领域

本发明涉及抗皱用组合物和皮肤外用组合物。

背景技术

皮肤外用组合物有乳膏、乳液、化妆水、油等各种剂型，在任何剂型中，为了防御紫外线配合有紫外线吸收剂或紫外线散射剂。

另一方面，近年来正在大量地开发使用了纳米技术的化妆品，已知其中含有C₆₀、C₇₀等富勒烯类的化妆品显示各种美肤效果。例如，专利文献1记载了将富勒烯溶解于油分中所获得的化妆品显示紫外线吸收作用。另外，专利文献2还记载了将作为碳燃烧残渣的超微粒子的富勒烯悬浮分散于角鲨烷所获得的产品显示保健促进效果。

另外，还开发了使难溶于水的富勒烯可溶化的技术(参照专利文献3)，并被实际用于化妆品等皮肤外用组合物。

而且，富勒烯类作为具有活性氧消除能力的物质备受关注，由于还可期待在外用涂布中的安全性，因此提出了用于预防自由基疾病等的含富勒烯类的皮肤外用组合物(参照专利文献4)。

【先进技术文献】

【专利文献1】日本特开平09-278625号公报

【专利文献2】日本特开2001-316251号公报

【专利文献3】日本特开2005-060380号公报

【专利文献4】日本特开2006-160664号公报

发明内容

发明预解决的技术问题

如上所述，期待富勒烯类在化妆品等皮肤外用组合物中的各种应用，但对于其功能或作用而言预料到还有很多未知的情况，可以说用于富勒烯类的应用的开发仍处于发展阶段。

在这种背景下，本发明人对于在适用于皮肤时对皮肤细胞的作用进行了详细的研究。此研究的课题之一为“抗皱”。

这样说的原因在于一直以来都希望开发出更为有效地发挥“抗皱”作用的技术。

本发明鉴于上述情况而完成，其课题在于提供具有高抗皱功能的利用了富勒烯类的新型组合物。

用于解决技术问题的方法

本发明是根据由本发明人在人类皮肤再构成组织中对“皱纹”形成机理的详细验证以及以此为基础的用于“抗皱”的方法的探索研究结果所获得的全新发现而导出并完成的。

即，首先作为皱纹形成诱因的过氧化脂质2，4-壬二烯醛作为经紫外线(UV)照射的皮肤细胞的甘油脂的1，2-位脂肪酸(主要是亚油酸、花生四烯酸等)的过氧化中间体较为稳定、具有皮肤内滞留性，因此成为皱纹形成的要因。实际上，当利用2，4-壬二烯醛进行皮下处理时，会发生以下3种皱纹相关症状。

(1)在皮肤表面形成凹凸起伏。(从显示使用了硅橡胶复制法的复制分析的图1(a)向图1(b)变化)

(2)在皮肤表面发生多个角质的鳞片剥离(从显示扫描型电子显微镜照片的图2(a)向图2(b)变化)

(3)在皮肤截面上发生真皮的多层分离和垂直萎缩(从显示使用了DMSO冷冻割断法的电子显微镜照片的图3(a)向图3(b)变化)

令人吃惊的是这3种(1)(2)(3)的皱纹相关症状的任一个均通过在皮肤表面上涂抹在角鲨烷中溶解有富勒烯的油溶状富勒烯被抑制。另一方面还确认角鲨烷单独时是无效的。

而且，还确认油溶状富勒烯的抗皱效果的机理是由于抑制了伴随人皮肤角质化细胞中的由过氧化脂质壬二烯醛所导致的细胞膜损伤的DNA双链断裂。

因此，本发明为了解决上述课题，提供了以以下内容为特征的组合物。

第1：一种抗皱用组合物，其特征在于，其含有在角鲨烷类中溶解有富勒烯类的油溶状富勒烯。

第2：上述1所述的抗皱用组合物，其特征在于，富勒烯类含有选自C₆₀、C₇₀和它们的盐或衍生物的至少1种。

第3：上述1或2所述的抗皱用组合物，其特征在于，防御在人皮肤角质化细胞和/或人皮肤纤维芽细胞和/或包括它们的皮肤组织中由于含有过氧化脂质和/或活性氧的氧化应激所导致的包含DNA双链/单链断裂和/或DNA碱基损伤的DNA损伤。

第4：一种皮肤外用组合物，其特征在于，由上述第1～第3任一项所述组合物构成。

发明效果

根据本发明，通过溶解于角鲨烷类的油溶状富勒烯类(可称作“脂富勒烯(Lipo富勒烯)”)可以有效地抑制之前很难抑制的“皱纹”。由此，开拓了作为以往完全无法预期、预测的作为皮肤外用组合物的富勒烯类所带来的美肤效果的全新领域。

附图说明

【图1】图1为表示实施例1的3维皮肤组织模型表面的复制图像及其利用其NIH-image的解析结果的图。

【图2】图2为实施例1的3维皮肤组织模型表面形状的扫描型电子显微镜照片。

【图3】图3为实施例1的3维皮肤组织模型的截面结构的扫描型电子显微镜照片。

【图4】图4为显示实施例2的人皮肤角质化细胞的细胞死亡抑制效果的图。

【图5】图5为实施例4的人皮肤通常组织模型表面形状的扫描型电子显微镜照片。

【图6】图6为实施例4的人皮肤通常组织模型的截面结构的扫描型电子显微镜照片。

【图7】图7为实施例5的人皮肤通常组织模型切片的截面的荧光显微镜照片。

【图8】图8为表示实施例6的随机双盲配对比较试验的皱纹面积率变化量评价结果的图表。

【图9】图9为实施例7的人皮肤通常组织模型表面形状的扫描型电子显微镜照片。

【图10】图10为说明实施例7的人皮肤通常组织模型的表面SEM图像的利用NIH-image的解析方法的图。

【图11】图11为表示实施例7的人皮肤通常组织模型的表面SEM图像的利用NIH-image的解析结果的图。

【图12】图12为实施例7的人皮肤通常组织模型的截面结构的扫描型电子显微镜照片。

【图13】图13为表示实施例7的人皮肤通常组织模型的截面SEM图像的利用NIH-image的解析结果的图。

【图14】图14为实施例7的人皮肤通常组织模型的复制图像。

【图15】图15为表示实施例7的人皮肤通常组织模型的复制图像的利用NIH-image的解析结果的图。

具体实施方式

以下详细地说明本发明。

本发中所使用的油溶状富勒烯(简称：脂富勒烯)是在角鲨烷类中溶解有富勒烯类的物质。作为富勒烯类可以使用C₃₂、C₄₄、C₅₀、C₆₀、C₅₈、C₆₀、C₇₀、C₇₆、C₇₈、C₈₂、C₈₄、C₉₀、C₉₆以及它们的盐或衍生物等，其中优选使用C₆₀、C₇₀及其盐或衍生物。另外，还可使用这些富勒烯中的2种以上的混合物。

角鲨烷类可以是角鲨烷和角鲨烯的任一者或两者的混合物。可以是植物性来源或动物、鱼类来源的任一种。

在使富勒烯类溶解于角鲨烷类时，只要是富勒烯类的可溶解量以下即可，对其溶解量而言，可以根据本发明组合物的应用方式决定。在溶解时可以搅拌、也可加热。作为组合物可以制成皮肤外用组合物。

此时的皮肤外用组合物中，可以在不损害其效果的范围内配合在化妆品、医药部外用品、药品等中通常使用的各种成分，例如水、油脂类、烃类、高级脂肪酸、高级醇、硅酮、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子表面活性剂、防腐剂、糖类、金属离子封端剂、水溶性高分子等高分子、增粘剂、粉体成分、紫外线吸收剂、紫外线遮蔽剂、保湿剂、香料、pH调整剂等。另外，还可配合维生素类、皮肤赋活剂、血液循环促进剂、活性氧消除剂、抗炎剂、美白剂、杀菌剂等其他的药效成分、生理活性成分等。

作为油脂类的具体例子可以举出山茶油、月见草油、澳洲坚果油、橄榄油、菜籽油、玉米油、芝麻油、荷荷芭油、胚芽油、小麦胚芽油、三辛酸甘油酯等液体油脂，可可奶油、椰子油、固化椰子油、棕榈油、棕榈核油、木蜡、木蜡核油、固化油、固化蓖麻油等固体油脂，蜜蜡、小烛树蜡、绵蜡、糠蜡、羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、液状羊毛脂、甘蔗蜡等蜡类等。

作为烃类的具体例子，可举出液体石蜡、角鲨烯、角鲨烷、微晶蜡等。

作为高级脂肪酸的具体例子，可举出月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)等。

作为高级醇的具体例子，可举出月桂醇、硬脂醇、鲸蜡醇、棕榈醇等直链醇、单硬脂酰甘油醚、羊毛脂醇、胆甾醇、植物甾醇、辛基十二烷醇等支链醇等。

作为硅酮的具体例子，可举出链状聚硅氧烷的二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、环状聚硅氧烷的十甲基环五硅氧烷等。

作为阴离子表面活性剂的具体例子，可举出月桂酸钠等脂肪酸盐、十二烷基硫酸钠等高级烷基硫酸酯盐、POE十二烷基硫酸三乙醇胺等烷基醚硫酸酯盐、N-酰基肌氨酸、磺基琥珀酸盐、N-酰基氨基酸盐等。

作为阳离子表面活性剂的具体例子，可举出硬脂酰基三甲基氯化铵等烷基三甲基铵盐、苯扎氯铵、苄索氯铵等。

作为两性表面活性剂的具体例子，可举出烷基甜菜碱、酰胺甜菜碱等甜菜碱系表面活性剂等。

作为非离子表面活性剂的具体例子，可举出山梨聚糖单油酸酯等山梨聚糖脂肪酸酯类、固化蓖麻油衍生物等。

作为防腐剂的具体例子，可举出尼泊金甲酯、尼泊金乙酯等。

作为金属离子封端剂的具体例子，可举出乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠盐等乙二胺四乙酸盐等。

作为高分子的具体例子，可举出阿拉伯胶、黄蓍胶、半乳聚糖、瓜尔胶、角叉胶、果胶、琼脂、榅桲子提取物(クインスシ一ド)、右旋糖酐、普鲁兰多糖、羧甲基淀粉、胶原、酪蛋白、明胶、甲基纤维素、甲基羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠(CMC)、海藻酸钠、羧基乙烯聚合物等乙烯系高分子等。

作为增粘剂的具体例子，可举出角叉胶、黄蓍胶、榅桲子提取物、酪蛋白、糊精、明胶、CMC、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧基乙烯聚合物、瓜尔胶、黄原胶、膨润土等。

作为粉体成分的具体例子，可举出滑石、高岭土、云母、二氧化硅、沸石、聚乙烯粉末、聚苯乙烯粉末、纤维素粉末、无机白色颜料、无机红色系颜料、氧化钛包覆云母、氧化钛包覆滑石、着色氧化钛包覆云母等珍珠色颜料、红色201号、红色202号等有机颜料等。

作为紫外线吸收剂的具体例子，可举出对氨基苯甲酸、水杨酸苯酯、对甲氧基桂皮酸异丙酯、对甲氧基桂皮酸辛酯、2，4-二羟基二苯甲酮等。

作为紫外线遮蔽剂的具体例子，可举出氧化钛、滑石、胭脂红、膨润土、高岭土、氧化锌等。

作为保湿剂的具体例子，可举出聚乙二醇、丙二醇、二丙二醇、1，3-丁二醇、1，2-戊二醇、甘油、二甘油、聚甘油、木糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、山梨糖醇、葡萄糖、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、乳酸钠、吡咯烷酮羧酸、环糊精等。

本发明的组合物例如可以以水溶液、油剂、乳液、悬浊液等液剂，凝胶、乳膏等半固形剂、固形等固形剂的形态使用。利用以往公知的方法调制成这些形态，可以制成洗剂、乳剂、凝胶剂、乳膏剂、软膏、硬膏、贴剂、气雾剂等各种。利用涂抹、粘贴、喷雾等将它们用于身体上。特别是在这些剂型中，洗剂、乳剂、乳膏剂、软膏剂、硬膏剂、贴剂、气雾剂等适于皮肤外用组合物。

本发明的组合物通过分散于水或水性溶剂、例如醇等与水的混合物等水系溶剂中，制成以化妆品为首的外用剂等，作为实用的技术有效地展开。

在水系溶剂中的分散例如制成O/W乳胶等被具体化，但该水系分散体的制造中，通过利用超声波的照射或旋涡混合器、匀浆机等的处理更为有效。

而且，非离子表面活性剂还有效地用于富勒烯脂溶体在该水系溶剂中的分散。例如，以聚氧乙烯醚结构为主体的非离子表面活性剂。这些非离子表面活性剂的添加使用量优选为总体量的0.01～2质量％的范围。

作为匀浆机优选的认为是Potter型匀浆机，其通过与玻璃制筒、吻合于筒内腔的氟树脂旋转棒的组合，利用两者的旋转和活塞运动的磨合，将粒子微粒化。由于难以卷入空气，因此对微粒化有效。

利用这些方法的分散处理，优选在减气泡条件下进行，更优选水分散体可作为外用剂使用，对其方式认为如下所述。

1.使用量

皮肤外用组合物中的富勒烯类的浓度例如为0.00001～30质量％、考虑到使用感的侧面等优选为5质量％以下。适用于皮肤时，外用组合物的量例如是每1平方米皮肤面积为液体0.001～20ml、优选为0.01～5.0ml、优选利用外用涂布、湿布或喷雾等进行使用。

2.使用方式

作为皮肤外用组合物的形态的例子并无特别限定，例如可采用水溶剂、软膏、乳液、乳膏、凝胶剂、面膜、浴剂、洗浄剂、敷剂、分散液等所有外用剂的形态，对于其剂型也无特别限定，可制成糊状、奶油状、凝胶状、粉末状、溶液系、可溶化系、乳化系。特别是对于水溶液、乳剂、软膏剂、凝胶剂、水溶性剂、美容液、面膜剂而言，通过在外用这些制剂后使用加湿导入器、振动导入器、离子导入器、声波导入器、电磁波导入器，可以促进富勒烯类在皮肤中的渗透，可发挥更大的效果。

涂布方法在为液剂时，可使用喷雾、贴布、湿布、浸渍、面罩等物理上可能的全部方法。

使用本发明的组合物作为化妆品时，可制成化妆水、乳液、乳膏、面膜等皮肤化妆品，上妆基底化妆水、上妆乳膏、乳液状、乳膏状或软膏型的底霜，手霜、颈霜、身体洗剂等身体用化妆品等。

【实施例】

以下，利用实施例进一步详细地说明本发明，但本发明并非限定于这些实施例。其中，下述中％只要没有特别说明，则表示质量％。

<实施例1>

使用3维皮肤组织模型(Test skin LSE-high、东洋纺织)，按照下述表1的顺序制作试验样品，进行利用脂富勒烯的抗皱试验。

【表1】

作为试验样品，准备对照(仅投予PBS(-))、投予过氧化脂质2，4-壬二烯醛(NDA)500μM、投予NDA 500μM和角鲨烷以及投予NDA 500μM和脂富勒烯的3维皮肤组织模型样品，利用使用了硅橡胶复制法的复制品的体现显微镜进行图像摄影和皱纹度的解析等评价。脂富勒烯是在植物性角鲨烷(Uniquema)中溶解了富勒烯(含有C₆₀，C₇₀)并按照作为C₆₀浓度含有500ppm进行制备。

将其结果示于图1。其中，对于实验验证而言，在含有2，4-壬二烯醛(NDA)500μM的培养基中培养人皮肤组织样品42小时，脂富勒烯是在投予NDA5小时前投予至培养基中。图1中表示(a)为对照(PBS(-))、(b)为仅投予NDA(500μM)、(c)为代替脂富勒烯投予植物性角鲨烷时的比较结果。如同一图所示，脂富勒烯投与样品与NDA投与样品、进而与对照和角鲨烷投与样品相比，抑制了皮肤表面的皱纹形成。即，如图1(c)所示，角鲨烷单独时基本不会改善表面凹凸，但如图1(d)所示投予脂富勒烯时基本改善了表面凹凸。

另外，对于与上述相同的试验样品，利用扫描型电子显微镜观察3维皮肤组织模型的表面形状(图2)、使用DMSO冷冻割断法用电子显微镜观察3维皮肤组织模型的截面结构(图3)。图2和图3中表示(a)为对照(PBS(-))、(b)为仅投予NDA(500μM)、(c)为代替脂富勒烯投予植物性角鲨烷时，(d)为投予脂富勒烯时的结果。

如图2(d)所示，为脂富勒烯时，控制在皮肤表面产生的多数角质鳞片剥离，如图3(d)所示，还防止了在皮肤截面处的真皮的多层分离和萎缩。如图2(c)、图3(c)所示，角鲨烷单独时，这些效果很弱。

<实施例2>

使用溶解于角鲨烷的富勒烯、即脂富勒烯，利用TUNRL染色验证NDA所导致的人皮肤角质化细胞(HaCaT)的细胞死亡(凋亡)抑制的效果。

图4显示其结果，从左开始依次表示对照、仅投予NDA(30μM)、代替脂富勒烯投予植物性角鲨烷的情况、投予脂富勒烯的情况。对于脂富勒烯(4％：作为C₆₀为20ppm)而言，显著地抑制了DNA双链断裂。而角鲨烷单独时基本无效。

<实施例3>

将C₆₀富勒烯的比例约95％的C₆₀标准品溶解于植物性角鲨烷，接着利用Potter型匀浆机在减气泡条件下(利用吸气器进行减压、减少气泡)使其水分散，形成O/W乳胶。

将该乳胶分别添加于人皮肤角质化细胞：HaCaT Cell培养体系中，对细胞生存率进行评价。结果确认大大提高。

<实施例4>

按照以下顺序制作具有真皮、基底膜、表皮和角质层的直径24mm的人皮肤通常组织模型。

使用胶原凝胶培养试剂盒(新田明胶(株))根据新田明胶(株)的操作规程(参照http://www.nitta-gelatin.co.jp/products/labo/column_1.html)进行胶原凝胶的培养。在含有经过离心回收的纤维芽细胞OUMS-36 5×10⁵/孔的小球中加入冷却了的I型胶原凝胶混合溶液进行混合直至均匀。将含有该纤维芽细胞OUMS-36的I型胶原混合溶液注入培养皿中，在培养箱中在37℃下静置30分钟，进行凝胶化。

接着，在培养基(DMEM/10％FCS)中对I型胶原凝胶进行液相培养，在第5天后，凝胶发生收缩。

进而，在I型胶原凝胶上重叠含有IV型胶原、层粘连蛋白和内功素的基底膜形成用凝胶。

接着，在基底膜形成用凝胶上接种人皮肤角质化细胞(HaCaT)5×10⁵/孔，在培养基(DMEM/Ham’s F12(1∶1)+5％FBS+15％Knock out serum replacement(SR、Introgen Inc.))中对其液相培养1天。

然后，更换成培养基(DMEM/Ham’s F12(1∶1)+1％FBS+15％Knock out serum replacement)，液相培养4天。

接着，将重叠有人皮肤角质化细胞的凝胶放置在浸渍了培养基(DMEM/Ham’s F12(1∶1)+15％Knock out serum replacement的滤纸上，将人皮肤角质化细胞暴露于空气，培养14天。由此，在基底膜上形成表皮和角质层。

使用如此获得的人皮肤通常组织模型，按照下述表2的顺序制作试验样品，进行脂富勒烯所带来的NDA防御效果的评价试验。

【表2】

作为试验样品准备对照(仅投予PBS(-))、投予NDA450μM、投予NDA450μM+角鲨烷以及投予NDA 450μM+脂富勒烯(作为C₆₀为2-500ppm)的人皮肤通常组织模型样品，利用扫描型电子显微镜观察其表面形状(图5)、使用DMSO冷冻割断法利用电子显微镜观察截面结构(图6)。如图5、6所示，NDA投与样品、NDA+角鲨烷投与样品由于NDA伤害了皮肤的结构，而通过脂富勒烯的投与，抑制了NDA所导致的皮肤伤害，其抑制效果依赖于富勒烯含量而增大。

<实施例5>

使用与实施例4相同的试样，利用使用了Hoechst33342核染色的荧光显微镜测定研究脂富勒烯所产生的NDA防御效果(细胞核保持效果)。将角鲨烷或脂富勒烯(作为C₆₀为2，50，200ppm)150μL/孔投予人皮肤通常组织模型进行培养(5hr，37℃)。接着，更换成含有450μMNDA/孔的培养基进行培养(42hr，37℃，5％CO₂)。利用PBS(-)200μL冲洗3次，冷冻后对皮肤切片(厚度5mm)进行Hoechst33342核染色，利用荧光显微镜进行观察。

按照以下顺序进行人皮肤通常组织模型的核染色。

【表3】

将人皮肤通常组织模型切片(厚度5μm)的截面的荧光显微镜照片示于图7。对照中，细胞核为健康状态。NDA投与样品、NDA+角鲨烷投与样品中，由于NDA，在表皮细胞发生了作为凋亡症状之一的DNA断裂、核凝缩和变形。而通过脂富勒烯的投与，C₆₀浓度依赖地抑制了NDA对细胞核造成的伤害。

<实施例6>

对于脂富勒烯配合化妆品，进行随机双盲配对比较试验。以被验者23名为对象，涂抹下述表4所示处方的化妆品(乳膏、左：被验品、富勒烯1.8μg/日、右：安慰剂、富勒烯0.0μg/日)。I组(11名)是将被验品涂抹在右侧面部、将安慰剂涂抹在左侧面部，II组(12名)是将安慰剂涂抹在右侧面部、将被验品涂抹在左侧面部。

【表4】

被验者的选择标准是皱纹程度为2～3的成年女性(左右相同级别)。化妆品是在每天早晚2次，洁面后，利用指定的护肤制剂护肤后，在化妆前涂抹于指定侧的半个面部。使用化妆品根据规范每次取相同量(每半个面部0.3g左右)、置于面部的4个位置(额头、脸颊、下颌、外眼角)后使其充分渗于半个面部。外眼角被很好地亲和、充分地渗透。使用时间为8周。

以皱纹面积率为评价项目，评价方法根据化妆品机能性评价法指南(日本香粧品学会2006年)。获得化妆品的使用前和使用后的外眼角和外眼角下的皱纹的复制品、由一定方向(距离水平面30°)照射平行光，将所产生的阴影进行图像处理。由其计算阴影面积的长度、深度。同样地，由标准尺寸计算阴影面积及其长度，制作标准曲线，校正外眼角皱纹复制的数值。

将皱纹面积率、皱纹面积率变化量的评价结果示于表5、图8。

【表5】

皱纹面积率与使用前相比，被验品在第4周、第8周减少。安慰剂在第4周、第8周均增加。而且，对于皱纹面积率变化量而言，在被验品和安慰剂之间进行了相对应的t检验，结果在第8周可见显著(p＝0.021)差异。另外，并未发现在安全性有问题的有害情况。

由上可知，脂富勒烯配合乳膏具有减少皱纹的抗皱纹作用。

<实施例7>

与实施例4相同，制作具有真皮、基底膜、表皮和角质层的人皮肤通常组织模型。

使用该人皮肤通常组织模型，按照下述表6的顺序制作试验样品，比较脂富勒烯与自由基海绵(使用10％聚乙烯吡咯烷酮将Radical Sponge(R)、维生素C60生物研究(株)、混合富勒烯(C₆₀、C₇₀)包合后，溶解于水中的产物，C₆₀200ppm以上)的抗皱效果。

【表6】

作为试验样品准备对照(仅投予PBS(-))、投予NDA500μM、投予NDA500μM+自由基海绵(作为C₆₀为4ppm，30ppm)、投予NDA500μM+脂富勒烯(作为C₆₀为4ppm，30ppm)的人皮肤通常组织模型样品，利用扫描型电子显微镜观察其表面形状(图9)。另外，如图10所示，对人皮肤通常组织模型表面形状的SEM图像进行利用NIH-image的解析。具体地说，对于SEM图像的3个区域，利用NIH-image 1.6.3制作线性直方图，在凹凸的中间引线，加和上下面积，计算平均值，作为各处理区的皱纹度(μm²/area)。将其结果示于图11。

由图9～图11可知，脂富勒烯与等量的自由基海绵相比，减少了刺激物质(NDA)所导致的皮肤刺激，

另外，对于同样的人皮肤通常组织模型样品使用DMSO冷冻割断法利用扫描型电子显微镜观察截面结构(图12)、进行人皮肤通常组织模型截面形状的SEM图像利用NIH-image的解析(图13)。

由图12、图13可知，脂富勒烯与等量的自由基海绵相比，减少了刺激物质(NDA)所导致的皮肤刺激，

另外，对于同样的人皮肤通常组织模型样品利用使用了硅橡胶复制法的复制的实体纤维径进行图像拍摄(图14)、进行复制图像的利用NIH-image的解析(图15)。

由图14、图15可知，脂富勒烯与等量的自由基海绵相比，抑制了皮肤表面的皱纹形成，

由上可知，作为富勒烯含有制剂，脂富勒烯与自由基海绵相比，是更有希望的抗皱剂。

Claims (4)

1.一种抗皱用组合物，其特征在于，含有在角鲨烷类中溶解了富勒烯类的油溶状富勒烯。

2.根据权利要求1所述的抗皱用组合物，其特征在于，富勒烯类含有选自C₆₀、C₇₀及它们的盐或衍生物中的至少1种。

3.根据权利要求1或2所述的抗皱用组合物，其特征在于，其抑制在人皮肤角质化细胞和/或人皮肤纤维芽细胞和/或包括它们的皮肤组织处的由于含有过氧化脂质和/或活性氧的氧化应激所导致的包括DNA双链/单链断裂和/或DNA碱基损伤的DNA损伤。

4.一种皮肤外用组合物，其特征在于，其由权利要求1～3中任一项所述的组合物构成。

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