CN101961427A - 一种同时提取油茶蒲多糖和多酚的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种油茶蒲多糖和多酚的提取方法,以油茶蒲为原料,包括下列步骤:(1)将干燥粉碎的油茶蒲放入提取装置中,用水作为浸取剂进行搅拌提取,离心分离后得到油茶蒲多糖和多酚的粗提液;(2)向粗提液中加入乙醇和无机盐形成双水相系统,油茶蒲多酚进入乙醇上相,油茶蒲多糖进入无机盐下相;(3)乙醇上相采用真空浓缩、无水乙醇洗涤去盐和冷冻干燥得到油茶蒲多酚产品;(4)无机盐下相采用超滤膜浓缩和冷冻干燥得到油茶蒲多糖产品。本发明采用双水相技术同时提取油茶蒲多糖和多酚,实现了油茶蒲活性成分的综合利用,同时降低了油茶蒲活性成分生产成本,并有利于保留油茶蒲多糖的活性。
Description
技术领域
本发明涉及一种油茶蒲多糖和多酚的提取方法,尤其是采用双水相萃取的方法对含油茶蒲多糖和多酚的水提液进行纯化。
背景技术
油茶(Camellia oleifera Abel.)是山茶科山茶属植物,与油棕、椰子和橄榄被誉为世界四大木本食用油源树种。我国的油茶资源丰富,主要分布在江西、湖南、广西、浙江、福建、安徽、贵州等地区。油茶蒲为油茶果的外壳,约占茶油果总量的2/3,是山茶油生产的副产物。我国虽然油茶资源丰富,但对油茶蒲的开发利用却非常薄弱,在实际生产中通常作为燃料使用或被废弃,造成了环境的污染和资源的浪费。
油茶蒲多糖和多酚是油茶蒲中重要组分。近年来,一些研究表明油茶蒲提取物具有许多特殊的生理功能。中国专利CN101560266A公开了一种油茶蒲多糖及其用途,结果表明,油茶浦多糖是一种极具研究价值和开发潜力的抗氧化和抗肿瘤活性多糖。油茶蒲多酚特征成分为没食子酸、鞣花酸及其衍生物,具有较好的抗氧化活性、抗癌活性和安全性。
目前,有关从茶叶中提取多糖和多酚的方法甚多,但关于油茶蒲加工的文献和专利报道很少,仅中国专利CN101560265A和CN101560266A公开了油茶蒲多糖的制备方法及提纯方法,但存在不足:(1)工艺方法所得只有油茶蒲多糖一种活性成分,造成资源的浪费;(2)对油茶蒲多糖的提取采用醇沉法,该方法需消耗大量的有机溶剂,耗时长,提取物杂质含量多、后处理工序繁杂;同时易降低多糖的生物活性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种工艺简单、成本低、得率高、有利于规模化生产的同时提取油茶蒲多糖和多酚方法。
本发明的目的通过以下技术方案来实现:
一种从油茶蒲同时提取多糖和多酚的方法,以油茶蒲为原料,包括下列步骤:
(1)将干燥粉碎的油茶蒲放入提取装置中,用水作为浸取剂,调节液固比进行搅拌提取,离心分离后得到油茶蒲多糖和多酚的粗提液;
(2)向粗提液中加入乙醇和无机盐形成双水相系统,进行充分萃取,静置后分成两相,油茶蒲多酚进入乙醇上相,油茶蒲多糖进入无机盐下相;
(3)取步骤(2)分相后得到的乙醇上相,采用真空浓缩、无水乙醇洗涤去盐和冷冻干燥得到油茶蒲多酚产品;
(4)取步骤(2)分相后得到的无机盐下相,采用超滤膜浓缩和冷冻干燥得到油茶蒲多糖产品。
优选地,步骤(1)所述的提取条件为油茶蒲细度为60~120目,液固比10∶1~40∶1(v/w),搅拌转速300~500rpm,温度60~100℃,提取时间1~2h,提取次数2~4次。
优选地,步骤(2)所述的无机盐采用硫酸铵、硫酸钠、磷酸氢二钾或氯化钠。
优选地,步骤(2)所述的双水相萃取体系中乙醇的质量浓度为20~30%,无机盐的质量浓度为15~25%。
优选地,步骤(4)所述的超滤膜工作压力0.1~0.6MPa,膜的截留分子量为3000~10000,操作温度为35℃。
优选地,所述从油茶蒲同时提取多糖和多酚的方法包括下列步骤:
(1)油茶蒲经烘干和粉碎,过60~120目筛;将粉碎的油茶蒲放入提取装置中,用水作为浸取剂,在液固比10∶1~40∶1(v/w)、搅拌转速300~500rpm和温度60~100℃条件下,提取1~2h,提取液经转速4000rpm下离心10min,上清液即为油茶蒲多糖和多酚的粗提液;
(2)向粗提液中加入乙醇和无机盐形成双水相系统,其中乙醇的质量浓度为20~30%,无机盐的质量浓度为15~25%。充分萃取后静置分成两相,油茶蒲多酚进入乙醇上相,油茶蒲多糖进入无机盐下相;
(3)取分相后得到的乙醇上相,采用真空浓缩、无水乙醇洗涤去盐和冷冻干燥得到油茶蒲多酚产品;
(4)取分相后得到的无机盐下相,在0.1~0.6MPa压力下通过截留分子量为3000~10000的超滤膜,收集截留液,冷冻干燥即得油茶蒲多糖产品。
本发明采用双水相技术同时提取油茶蒲多糖和多酚,实现了油茶蒲活性成分的综合利用,克服了采用醇沉等方法只能获取一种有效成分的缺点,同时由于整个工艺过程所需有机溶剂量较少,降低油茶蒲活性成分生产成本,并有利于保留油茶蒲多糖的活性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明,但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1
取油茶蒲100g,经烘干和粉碎,过60~80目筛;称取粉碎的油茶蒲10g,采用150mL水作为浸取剂,在搅拌转速400rpm和温度80℃下提取1.5h,提取液经转速4000rpm下离心10min得上清液;按照上述条件共提取3次,合并后得油茶蒲多糖和多酚的粗提液。
分别加入乙醇和硫酸铵,使形成的双水相萃取体系中乙醇的质量浓度为25%,硫酸铵的质量浓度为20%,搅拌萃取30min,然后静置分层,上层是含有油茶蒲多酚的乙醇相,下层是含有油茶蒲多糖的硫酸铵水相。
取分相后得到的乙醇上相,真空浓缩,然后用乙醇洗涤、离心以除去其中的盐,再冷冻干燥得到油茶蒲多酚产品0.13g,多酚含量测定为26.82%。
取分相后得到的无机盐下相,在0.2MPa压力下通过截留分子量为3000的超滤膜,收集截留液,冷冻干燥即得油茶蒲多糖粉末0.52g,多糖含量为47.63%。
在本发明中,油茶蒲多酚含量采用Folin-Ciocalteau法,油茶蒲多糖含量采用苯酚-硫酸法(其他的实施例也采用此方法):(a)Folin-Ciocalteau法
标准曲线的制作:精确称取没食子酸标准品25mg,用蒸馏水溶解并定容至250mL得0.1mg/mL的没食子酸对照品标准溶液。分别于10mL容量瓶中加入0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5和0.6mL的0.1mg/mL没食子酸标准溶液,再加入1.0mL的Folin-Ciocalteu试剂和2mL的15%碳酸钠溶液,用蒸馏水定容至刻度,充分混合并放置2h后,于760nm波长下测定吸光度值,以1.0mL蒸馏水按同样操作作为空白对照。以没食子酸浓度(C)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,制作标准曲线。标准曲线方程为标准曲线方程为:A=13.965C+0.0312,R2=0.9986,其中:A为吸光度值,R2为相关系数,C为没食子酸浓度(mg/mL)。
多酚含量测定:用蒸馏水将上述提取方法提取的油茶蒲多酚产品配成浓度为1.0mg/mL,取0.2mL按上述操作测定760nm的吸光度值,根据标准曲线计算多酚含量。
油茶蒲多酚含量(%)=油茶蒲多酚中所含多酚的质量/油茶蒲多酚质量×100%
(b)苯酚-硫酸法
标准曲线的制作:准确称取标准葡萄糖20mg于500mL容量瓶中,加水溶解并定容至刻度,分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8mL,各以蒸馏水补至2.0mL。然后加入6%苯酚1.0mL及浓硫酸5.0mL,摇匀冷却,室温放置20min,于490nm波长下测定吸光度值,以2.0mL蒸馏水按同样操作作为空白对照。以葡萄糖浓度(C)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,制作标准曲线。标准曲线方程为:A=15.435C+0.0156,R2=0.9992,其中:A为吸光度值,R2为相关系数,C为葡萄糖浓度(mg/mL)。
多糖含量测定:用蒸馏水将上述提取方法提取的油茶蒲多糖产品配成1.0mg/mL,取0.2mL按上述操作测定490nm的吸光度值,根据标准曲线计算多糖含量。
油茶蒲多糖含量(%)=油茶蒲多糖中所含多糖的质量/油茶蒲多糖质量×100%
实施例2
取油茶蒲100g,经烘干和粉碎,过80~100目筛;称取粉碎的油茶蒲10g,采用100mL水作为浸取剂,在搅拌转速300rpm和温度95℃下提取1h,提取液经转速4000rpm下离心10min得上清液;按照上述条件共提取2次,合并后得油茶蒲多糖和多酚的粗提液。
分别加入乙醇和磷酸氢二钾,使形成的双水相萃取体系中乙醇的质量浓度为25%,磷酸氢二钾的质量浓度为18%,搅拌萃取30min,然后静置分层,上层是含有油茶蒲多酚的乙醇相,下层是含有油茶蒲多糖的硫酸铵水相。
取分相后得到的乙醇上相,真空浓缩,然后用乙醇洗涤、离心以除去其中的盐,再冷冻干燥得到油茶蒲多酚产品0.15g,多酚含量测定为28.44%。
取分相后得到的无机盐下相,在0.2MPa压力下通过截留分子量为3000的超滤膜,收集截留液,冷冻干燥即得油茶蒲多糖粉末0.56g,多糖含量为46.85%。
实施例3
取油茶蒲200g,经烘干和粉碎,过100~120目筛;称取粉碎的油茶蒲10g,采用100mL水作为浸取剂,在搅拌转速300rpm和温度90℃下提取1h,提取液经转速4000rpm下离心10min得上清液;按照上述条件共提取2次,合并后得油茶蒲多糖和多酚的粗提液。
分别加入乙醇和硫酸铵,使形成的双水相萃取体系中乙醇的质量浓度为25%,硫酸铵的质量浓度为20%,搅拌萃取30min,然后静置分层,上层是含有油茶蒲多酚的乙醇相,下层是含有油茶蒲多糖的硫酸铵水相。
取分相后得到的乙醇上相,真空浓缩,然后用乙醇洗涤、离心以除去其中的盐,再冷冻干燥得到油茶蒲多酚产品0.18g,多酚含量测定为26.98%。
取分相后得到的无机盐下相,在0.2MPa压力下通过截留分子量为6000的超滤膜,收集截留液,冷冻干燥即得油茶蒲多糖粉末0.53g,多糖含量测定为52.42%。
Claims (6)
1.一种从油茶蒲同时提取多糖和多酚的方法,其特征在于以油茶蒲为原料,包括下列步骤:
(1)将干燥粉碎的油茶蒲放入提取装置中,用水作为浸取剂,调节液固比进行搅拌提取,离心分离后得到油茶蒲多糖和多酚的粗提液;
(2)向粗提液中加入乙醇和无机盐形成双水相系统,进行充分萃取,静置后分成两相,油茶蒲多酚进入乙醇上相,油茶蒲多糖进入无机盐下相;
(3)取步骤(2)分相后得到的乙醇上相,采用真空浓缩、无水乙醇洗涤去盐和冷冻干燥得到油茶蒲多酚产品;
(4)取步骤(2)分相后得到的无机盐下相,采用超滤膜浓缩和冷冻干燥得到油茶蒲多糖产品。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)所述的提取条件为油茶蒲细度为60~120目,液固比10∶1~40∶1(v/w),搅拌转速300~500rpm,温度60~100℃,提取时间1~2h,提取次数2~4次。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)所述的无机盐采用硫酸铵、硫酸钠、磷酸氢二钾或氯化钠。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)所述的双水相萃取体系中乙醇的质量浓度为20~30%,无机盐的质量浓度为15~25%。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)所述的超滤膜工作压力0.1~0.6MPa,膜的截留分子量为3000~10000,操作温度为35℃。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,包括下列步骤:
(1)油茶蒲经烘干和粉碎,过60~120目筛;将粉碎的油茶蒲放入提取装置中,用水作为浸取剂,在液固比10∶1~40∶1(v/w)、搅拌转速300~500rpm和温度60~100℃条件下,提取1~2h,提取液经转速4000rpm下离心10min,上清液即为油茶蒲多糖和多酚的粗提液;
(2)向粗提液中加入乙醇和无机盐形成双水相系统,其中乙醇的质量浓度为20~30%,无机盐的质量浓度为15~25%。充分萃取后静置分成两相,油茶蒲多酚进入乙醇上相,油茶蒲多糖进入无机盐下相;
(3)取分相后得到的乙醇上相,采用真空浓缩、无水乙醇洗涤去盐和冷冻干燥得到油茶蒲多酚产品;
(4)取分相后得到的无机盐下相,在0.1~0.6MPa压力下通过截留分子量为3000~10000的超滤膜,收集截留液,冷冻干燥即得油茶蒲多糖产品。
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CN101961427B (zh) | 2012-01-04 |
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