CN103788229A

CN103788229A - 一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法

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Publication number: CN103788229A
Application number: CN201410056357.1A
Authority: CN
Inventors: 张作法; 范雷法; 吕国英; 苗立祥; 潘慧娟
Original assignee: Zhejiang Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Zhejiang Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2014-02-19
Filing date: 2014-02-19
Publication date: 2014-05-14
Anticipated expiration: 2034-02-19
Also published as: CN103788229B

Abstract

本发明涉及食用菌有效成份提取技术领域，尤其涉及一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，包括提取液准备步骤、超声辅助碱液提取步骤、残渣酶解步骤、乙酸乙酯萃取多酚步骤、超滤脱盐后提取多糖步骤。本发明将辅助萃取、酶解、膜过滤等操作有机结合，同时提取多糖和多酚，简化了生产工艺，安全可靠，产率高，较好的保留了金针菇子实体中多糖和多酚成分的生理和药理活性，具有较大的经济价值。

Description

一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法

技术领域

本发明涉及食用菌有效成份提取技术领域，尤其涉及一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法。

背景技术

金针菇(Flammulina velutipes)又名朴菇，冬菇，隶属真菌门，担子菌纲，伞菌目，口蘑科，金针菌属。金针菇营养极为丰富，有增智菇和“一休菇”等美称，是世界上著名的食用菌，目前已发展成为第三大食用菌。金针菇清嫩爽口，鲜美味香，营养丰富，是一道极为高档的佳肴，具有较高的营养价值。文献报道，金针菇中含较高的蛋白质、碳水化合物和粗纤维、而脂肪含量较低，是一种不可多得的高营养食品。

金针菇含有多种活性成分，包括多糖，蛋白质、多酚类物质、挥发性成分（主要是一些不饱和酸）、氨基酸、纤维素、维生素、微量元素等，其中最主要的成份为多糖，它具有免疫调节、抗感染、抗疲劳、辅助改善记忆的功能，还具有保肝作用。在多糖的开发利用中，分离提取成本占总成本的50%左右，是获得终产品的关键步骤，它不仅影响着产品的得率，还与终产品的活性、终产品的经济价值密切相关。

金针菇多糖的提取方法主要有热水浸提，酶法，超声和酸碱提法等。以往食用菌多糖一般都采用酶解提取的方法，但是这种方法生产成本较高，条件要求比较苛刻，而且，从金针菇中提取多糖，提取率低，而其余大部分的多糖都滞留在残渣中，作为动物饲料或废弃物，造成了很大的资源浪费。目前有关金针菇多糖提取方法提取时间长，提取率很低，提取的效果极不理想。

此外，研究发现在金针菇子实体中，不仅含有较多的多糖成分，而且还有较多的多酚成分（五倍子酸、原儿茶酚、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和槲皮素），这些多酚成分具有抗氧化、抗衰老、抗癌，预防心血管疾病等生理和药理活性。然而却未见关于同时提取金针菇多糖和多酚的技术方案的报道。

发明内容

本发明针对现有技术中从金针菇提取多糖时，提取率低、不能同时制备多酚成分导致浪费等缺陷，提供了一种从食药用菌金针菇中同时提取多糖和多酚的方法。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：

一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，包括如下步骤：

步骤（1）：将金针菇干粉与质量分数为0.5%～2%的氢氧化钠溶液按照质量比1:10～1:30混合；

步骤（2）：将步骤（1）中的混合液超声处理10～30分钟，6000转/分钟离心处理10分钟，分离得到上清液I和沉淀物；

步骤（3）：向步骤（2）的沉淀物中，加入沉淀物8～12倍重量的去离子水，混合均匀，调pH值为4～6，加入占混合液重量0.1%～0.5%的纤维素酶，45～55℃下酶解20～50分钟，酶解液离心，分离得上清液II和沉淀物；

步骤（4）：合并步骤（2）获得的上清液I和步骤（3）获得的上清液II,加入氯化钠固体至饱和，加入乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥获得金针菇多酚；

步骤（5）：步骤（4）萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至6～8，超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖。

碱液的使用更有利于超声能量的传递，超声和碱液的结合能够很大程度上破坏金针菇的结构，使多糖和多酚的提取更为有效；纤维素酶能水解金针菇的细胞壁，有利于多酚和多糖从金针菇细胞内释放。多酚萃取中，添加NaCl固体至饱和状态，不仅改变了多酚在水相中的溶解度，而且改变了水相的密度，有利于萃取的完成，提高了萃取效率。多糖浓缩提取前，首先超滤脱除多糖溶液中的盐，然后浓缩和制备同时进行，避免盐份混入终产品中，产品纯度高，同时也极大的提高了生产效率。

作为优选，步骤（1）之前，金针菇干粉经过超微粉碎处理。干燥金针菇经过超微粉碎，粒度小，比表面积大，与碱液的接触面积大，更有利于超声能量传递至金针菇细胞，有利于超声破碎细胞，有利于多糖和多酚的溶出，提高了多糖和多酚的收率。

作为优选，步骤（2）中，超声处理频率为100～500Hz，超声处理功率为100～1000W。100～500Hz，100～1000W的超声条件，能较好的破坏金针菇细胞结构，有利于多糖和多酚的溶出，提高了多糖和多酚的收率。

作为优选，步骤（3）中，加入醋酸调节pH值。

作为优选，步骤（3）中，酶解液离心转速6000转/分，离心时间10分钟。

作为优选，步骤（5）中，超滤膜截留分子量为6000D。截留分子量为6000D，较好的脱除水相中的盐分，避免多糖终产品混合盐分，产品纯度高；此外，超滤脱盐后，浓缩和多糖制备同时进行，提高了生产效率。

本发明由于采用了以上技术方案，具有显著的技术效果：

1、金针菇先超微粉碎，更有利于多糖和多酚的提取

2、碱液的使用更有利于超声能量的传递，超声和碱液的结合能够很大程度上破坏金针菇的结构，使多糖和多酚的提取更为有效，同时更有利于纤维素酶的处理。

3、在萃取金针菇多酚时，NaCl固体的添加，不仅改变了多酚在水相中的溶解度，而且改变了水相的密度，利于萃取的完成，提高了萃取效率。

4、采用超滤步骤，脱除多糖溶液的盐分，后续处理中，浓缩和制备同时进行，大大提高了提取效率。

5、采用此方法同时提取金针菇中的多糖和多酚，产品纯度高，产量高，提取出的多糖具有抗肿瘤和免疫活性，提取出的多酚具有较强的抗氧化活性。

附图说明

图1是从金针菇中同时提取多糖和多酚的工艺流程图。

具体实施方式

下面结合附图与实施例对本发明作进一步详细描述。

纤维素酶：160000U/g，湖州礼来生物科技有限公司

实施例1

一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，如图1所示，包括如下步骤：

步骤（1）：超微粉碎金针菇干粉后，将金针菇干粉与质量分数为0.5%的氢氧化钠溶液按照质量比1:20混合；

步骤（2）：将步骤（1）中的混合液超声处理，处理条件为200Hz，800W，10分钟，处理液6000转/分离心10分钟，分离得到上清液I和沉淀物；

步骤（3）：向步骤（2）的沉淀物中，加入沉淀物10倍重量的去离子水，混合均匀，调pH值为4，加入占混合液重量0.1%的纤维素酶，45℃下酶解20分钟，酶解液6000转/分离心10分钟，分离得上清液II和沉淀物；

步骤（4）：合并步骤（2）中的上清液I和步骤（3）中的上清液II,加入氯化钠固体至饱和，加入占上清液50%的乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥获得金针菇多酚，多酚得率为1.06%；

步骤（5）：步骤（4）萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至6，采用截留分子量6000D的超滤膜超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖，多糖得率为13.85%。

实施例2

步骤（1）：超微粉碎金针菇干粉后，将金针菇干粉与质量分数为1%的氢氧化钠溶液按照质量比1：30混合；

步骤（2）：将步骤（1）中的混合液超声处理，处理条件为400Hz，200W，20分钟，处理液6000转/分离心10分钟，分离得到上清液I和沉淀物；

步骤（3）：向步骤（2）的沉淀物中，加入沉淀物8倍重量的去离子水，混合均匀，调pH值为4.5，加入占混合液重量0.3%的纤维素酶，50℃下酶解30分钟，酶解液6000转/分离心10分钟，分离得上清液II和沉淀物；

步骤（4）：合并步骤（2）中的上清液I和步骤（3）中的上清液II,加入氯化钠固体至饱和，加入占上清液50%体积的乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥获得金针菇多酚，多酚得率为1.28%；

步骤（5）：步骤（4）萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至7，采用截留分子量6000D的超滤膜超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖，多糖得率为15.10%。

实施例3

步骤（1）：超微粉碎金针菇干粉后，将金针菇干粉与质量分数为1.5%的氢氧化钠溶液按照质量比1：25混合；

步骤（2）：将步骤（1）中的混合液超声处理，处理条件为100Hz，1000W，25分钟，处理液6000转/分离心10分钟，分离得到上清液I和沉淀物；

步骤（3）：向步骤（2）的沉淀物中，加入沉淀物12倍重量的去离子水，混合均匀，调pH值为5，加入占混合液重量0.4%的纤维素酶，50℃下酶解40分钟，酶解液6000转/分离心10分钟，分离得上清液II和沉淀物；

步骤（4）：合并步骤（2）中的上清液I和步骤（3）中的上清液II,加入氯化钠固体至饱和，加入占上清液50%体积的乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥获得金针菇多酚，多酚得率为1.35%；

步骤（5）：步骤（4）萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至7，采用截留分子量6000D的超滤膜超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖，多糖得率为14.52%。

实施例4

步骤（1）：超微粉碎金针菇干粉后，将金针菇干粉与质量分数为2%的氢氧化钠溶液按照质量比1：10混合；

步骤（2）：将步骤（1）中的混合液超声处理，处理条件为500Hz，100W，30分钟，处理液离心6000转/分离心10分钟，分离得到上清液I和沉淀物；

步骤（3）：向步骤（2）的沉淀物中，加入沉淀物10倍重量的去离子水，混合均匀，调pH值为6，加入占混合液重量0.5%的纤维素酶，55℃下酶解50分钟，酶解液6000转/分离心10分钟，分离得上清液II和沉淀物；

步骤（4）：合并步骤（2）中的上清液I和步骤（3）中的上清液II,加入氯化钠固体至饱和，加入占上清液50%体积的乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥获得金针菇多酚，多酚得率为1.54%；

步骤（5）：步骤（4）萃取后，分液获得的下层液，调节pH值至7，采用截留分子量6000D的超滤膜超滤脱盐，浓缩，冷冻干燥获得金针菇多糖，多糖得率为16.23%。

总之，以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本发明专利的涵盖范围。

Claims

1.一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（2）：将步骤（1）中的混合液超声处理10～30分钟，离心，分离得到上清液I和沉淀物；

步骤（3）：向步骤（2）的沉淀物中，加入沉淀物重量8～12倍的去离子水，混合均匀，调pH值至4～6，加入占混合液重量0.1%～0.5%的纤维素酶，45～55℃下酶解20～50分钟，酶解液离心，分离得上清液II和沉淀物；

步骤（4）：合并步骤（2）中获得的上清液I和步骤（3）中获得的上清液II,加入氯化钠固体至饱和，加入乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩，干燥获得金针菇多酚；

2.根据权利要求1所述的一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于：步骤（1）之前，金针菇干粉经过超微粉碎处理。

3.根据权利要求1所述的一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于：步骤（2）中，超声处理频率为100～500Hz，超声处理功率为100～1000W。

4.根据权利要求1所述的一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于：步骤（3）中，采用醋酸调节pH值。

5.根据权利要求1所述的一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于：步骤（3）中，酶解液离心转速6000转/分，离心时间10分钟。

6.根据权利要求1所述的一种从金针菇中同时提取多糖和多酚的方法，其特征在于：步骤（5）中，超滤膜截留分子量为6000D。