CN111407699A - 山茶花提取物及其制备方法和应用以及包含其的化妆品 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种山茶花提取物及其制备方法和应用以及包含其的化妆品，涉及山茶花产品深加工技术领域，本申请制备方法首先将山茶花进行超声提取，随后将提取液与金属离子络合剂反应，得到沉淀物A；然后将沉淀物A依次进行转溶和萃取，得到山茶花提取物；所述超声提取溶剂包括乙醇和硫酸铵。上述制备方法提取得到的山茶花提取物具有提取率高、抗氧化活性强的优势，同时制备方法条件温和，易于操作，十分适应于工业化大规模生产。

Description

山茶花提取物及其制备方法和应用以及包含其的化妆品
技术领域
本发明涉及山茶花产品深加工技术领域，尤其是涉及一种山茶花提取物及其制备方法和应用以及包含其的化妆品。
背景技术
山茶花是山茶科、山茶属多种植物的通称。山茶花因其植株形姿优美，花形艳丽缤纷，而受到世界园艺界的珍视。山茶花在中国的长江流域、珠江流域、重庆、云南和四川各地，以及朝鲜、日本和印度等地也有普遍种植，是世界名贵花木之一。现有研究表明，山茶花的花叶、花蕾中富含各种氨基酸、维生素以及多种微量元素，能轻松地被肌肤所吸收，提供肌肤护理养分，同时也能够有效地锁入肌肤表层细胞的水分，使肌肤表层恢复水润活力，具有很高的护肤价值。
现有的山茶花提取方法主要有水提法、醇提法、微波提取法、超临界提取法、酶水解法等多种提取方法，不同方法提取得到的山茶花提取物的得率和纯度均不一样。然而，现有的上述提取工艺普遍存在提取率较低，所得的提取物中有效成分含量低以及提取物活性低的问题。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法得到的山茶花提取物具有提取率高、抗氧化活性强的优势，同时制备方法条件温和，易于操作，十分适应于工业化大规模生产。
本发明的第二目的在于提供一种山茶花提取物，上述山茶花提取物相对于现有山茶花提取物具有利于皮肤吸收、抗氧化活性强的优势。
本发明的第三目的在于提供一种山茶花提取物，该山茶花提取物可以广泛应用于化妆品的制备过程中。
本发明的第四目的在于提供一种化妆品，所述化妆品包括上述山茶花提取物。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明提供的一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将山茶花进行超声提取，随后将提取液与金属离子络合剂反应，得到沉淀物A；然后将沉淀物A依次进行转溶和萃取，得到山茶花提取物；
所述超声提取溶剂包括乙醇和硫酸铵。
进一步的，按体积百分数计，所述超声提取溶剂包括乙醇40～50％和硫酸铵水溶液50～60％；
所述超声提取溶剂中各组分的体积百分数之和为100％；
优选地，按体积百分数计，所述超声提取溶剂包括乙醇45％和硫酸铵水溶液55％；
所述超声提取溶剂中各组分的体积百分数之和为100％；
更优选地，所述乙醇为无水乙醇；
更优选地，所述硫酸铵水溶液的浓度为0.28～0.32g/L，优选为0.3g/L。
进一步的，所述超声提取的提取条件至少满足如下中的至少一个：
所述超声提取的超声功率为75～80kHZ，提取的时间为20～30min，提取的温度为25～35℃，所述超声提取的料液比为1:25～1:35g/ml；
优选地，所述超声提取的提取条件至少满足如下中的至少一个：
所述超声提取的超声功率为80kHZ，提取的时间为25min，提取的温度为25℃，所述超声提取的料液比为1：30g/mL。
进一步的，所述金属离子络合剂包括氯化锌、氯化铝、氯化铁和氯化镁中的至少一种；
优选地，所述金属离子络合剂为氯化铝；
更优选地，所述氯化铝的加入量与提取液中茶多酚的质量比为0.8～1.5:1，优选为1：1。
进一步的，所述转溶的转溶液包括盐酸、硫酸和磷酸中的至少一种；
优选地，所述转溶液为浓度0.3～0.8moL/L盐酸，优选为浓度0.5moL/L的盐酸；
优选地，所述转溶的方法为：将沉淀物A与盐酸溶液以1:4～6的体积比混合，随后混匀处理15～20min，得到溶液A；
更优选地，所述对沉淀物A进行转溶的方法为：将沉淀物A与盐酸溶液以1：5的体积比混合，随后混匀处理15min，得到溶液A。
进一步的，所述萃取的萃取剂包括乙酸乙酯、甲醇和丙酮中的至少一种；
优选地，所述萃取的方法为：按体积比1：1～2的比例向溶液A中加入萃取剂，25～30℃的条件下萃取2～4次，每次萃取时间为10～15min；
优选地，所述萃取的方法为：按体积比1：1的比例向溶液A中加入萃取剂，25℃的条件下萃取3次，每次萃取时间为12min。
进一步的，所述制备方法还包括对山茶花提取物进行冻干处理的步骤；
优选地，所述冻干处理的处理条件至少满足如下中的至少一个：冻干处理的真空度为490～500Pa，温度为-45～-40℃，时间为48～50h；
更优选地，所述冻干处理的处理条件至少满足如下中的至少一个：冻干处理的真空度为500Pa，温度为-45℃，时间为48h。
本发明提供的一种山茶花提取物，所述山茶花提取物由上述制备方法制备得到。
本发明提供的一种上述山茶花提取物在制备化妆品中的应用。
本发明提供的一种化妆品，所述化妆品包括上述山茶花提取物。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的山茶花提取物的制备方法，该制备方法首先将山茶花进行超声提取，随后将提取液与金属离子络合剂反应，得到沉淀物A；然后将沉淀物A依次进行转溶和萃取，得到山茶花提取物；所述超声提取溶剂包括乙醇和硫酸铵。上述制备方法首先采用乙醇和硫酸铵作为超声提取溶剂，对山茶花进行超声提取，其中乙醇、硫酸铵可快速形成双水相，下相由硫酸铵溶液及少量乙醇构成，上相则由乙醇和水构成，硫铵酸对水有束缚能力，可导致上相中水含量降低，乙醇相对体积分数增加，即上层乙醇浓度增大，山茶花有效物质能够在乙醇相富集，使得山茶花中的有效成分能够充分的提取至提取液中，随后采用金属离子沉淀法将山茶花中的有效成分沉淀出来，金属离子沉淀法具有选择性强，有效成分和提取率都高的优点，再经过转溶和萃取等步骤，得到山茶花提取物。上述制备方法得到的山茶花提取物具有提取率高、抗氧化活性强的优势，同时制备方法条件温和，易于操作，十分适应于工业化大规模生产。
本发明提供的山茶花提取物相对于现有山茶花提取物具有利于皮肤吸收，抗氧化活性强的优势。
本发明提供的山茶花提取物可以广泛应用于化妆品的制备过程中。
本发明提供的化妆品，所述化妆品包括上述山茶花提取物。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实验例2提供的实施例5制得的不同浓度的山茶花提取物对DPPH清除能力的检测图；
图2为本发明实验例2提供的不同浓度的Vc对DPPH清除能力的检测图；
图3为本发明实验例3提供的实施例5制得的山茶花提取物以及Vc对ABTS+清除能力的检测图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明的一个方面，一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将山茶花进行超声提取，随后将提取液与金属离子络合剂反应，得到沉淀物A；然后将沉淀物A依次进行转溶和萃取，得到山茶花提取物；
所述超声提取溶剂包括乙醇和硫酸铵。
本发明提供的山茶花提取物的制备方法，该制备方法首先将山茶花进行超声提取，随后将提取液与金属离子络合剂反应，得到沉淀物A；然后将沉淀物A依次进行转溶和萃取，得到山茶花提取物；所述超声提取溶剂包括乙醇和硫酸铵。上述制备方法首先采用乙醇和硫酸铵作为超声提取溶剂，对山茶花进行超声提取，其中提取物质利用在乙醇、硫酸铵两相间分配的差异进行分离，具有操作条件温和、处理量大，与一般的双水相体系相比，乙醇与硫酸铵的成本低，体系简单及后续处理简易的优点，使得山茶花中的有效成分能够充分的提取至提取液中，随后采用金属离子络合沉淀的方法将山茶花中的有效成分沉淀出来，再经过转溶和萃取等步骤，提取得到山茶花提取物。上述制备方法得到的山茶花提取物具有提取率高、抗氧化活性强的优势，同时制备方法条件温和，易于操作，十分适应于工业化大规模生产。
在本发明的一种优选实施方式中，按体积百分数计，所述超声提取溶剂包括乙醇40～50％和硫酸铵水溶液50～60％；
所述超声提取溶剂中各组分的体积百分数之和为100％；
作为一种优选的实施方式，按体积百分数计，上述超声提取溶剂包括乙醇40～50％和硫酸铵水溶液50～60％，在乙醇-硫酸铵溶液双水相中，下相由硫酸铵溶液及少量乙醇构成，上相则由乙醇和水构成，多酚易溶于乙醇，因此，多酚在乙醇相中富集。随着硫铵酸浓度增加，硫铵酸对水束缚能力增强，导致上相中水含量降低，乙醇相对体积分数增加，即上层乙醇浓度增大，其中多酚浓度也增大。不同硫酸铵浓度会影响上相极性，最终影响有效物质在溶液中的分配，从而影响有效物质的提取率。在植物体内，多酚和蛋白质通常以氢键的作用力相结合，乙醇含量低，不足以破坏氢键，山茶花有效物质的得率不高。而过高的乙醇含量会导致大量脂溶性物质溶出，40％-50％乙醇体积分数的极性与多酚类物质的极性比较相近。
上述超声提取溶剂中乙醇的含量典型但非限制性的优选实施方案为：40％、42％、44％、46％、48％和50％；上述超声提取溶剂中硫酸铵水溶液的含量典型但非限制性的优选实施方案为：50％、52％、54％、56％、58％和60％。
在上述优选实施方式中，按体积百分数计，所述超声提取溶剂包括乙醇45％和硫酸铵水溶液55％；
所述超声提取溶剂中各组分的体积百分数之和为100％；
在上述优选实施方式中，所述乙醇为无水乙醇；
在上述优选实施方式中，所述硫酸铵水溶液的浓度为0.28～0.32g/L，优选为0.3g/L。
作为一种优选的实施方式，上述硫酸铵水溶液的浓度在双水相体系中，当无水乙醇体积一定时，山茶花多酚提取率随硫酸铵浓度增加而提高，当硫酸铵浓度为0.3g/mL时，多酚提取率达到最大，随后呈下降趋势。原因是在乙醇-硫酸铵溶液双水相中，下相由硫酸铵溶液及少量乙醇构成，上相则由乙醇和水构成，多酚易溶于乙醇，因此，多酚在乙醇相中富集。随着硫铵酸浓度增加，硫铵酸对水束缚能力增强，导致上相中水含量降低，乙醇相对体积分数增加，即上层乙醇浓度增大，其中多酚浓度也增大。不同硫酸铵浓度会影响上相极性，最终影响多酚在溶液中的分配，从而影响多酚提取率。因此，最终选择0.3g/mL硫铵酸浓度。
上述硫酸铵水溶液的浓度典型但非限制性的优选实施方案为：0.28g/L、0.29g/L、0.30g/L、0.31g/L和0.32g/L。
在本发明的一种优选实施方式中，所述超声提取的提取条件至少满足如下中的至少一个：
所述超声提取的超声功率为75～80kHZ，提取的时间为20～30min，提取的温度为25～35℃，所述超声提取的料液比为1:25～1:35g/mL；
作为一种优选的实施方式，上述超声提取的提取条件是因为超声提取法的超声波空化作用可破坏植物细胞壁，使有效成分易于溶出，将双水相提取法与超声提取法协同使用有助于提高多酚提取率。同时，超声波对提取溶剂有富集效应，可缩短有机相和水相的相分离时间，提取在常温下进行，对受高温易氧化的多酚的提取更为有利。
上述超声提取的超声功率粒径典型但非限制性的优选实施方案为：75kHZ、76kHZ、77kHZ、78kHZ、79kHZ和80kHZ；上述超声提取的提取时间典型但非限制性的优选实施方案为：20min、22min、24min、26min、28min和30min；上述超声提取的提取温度典型但非限制性的优选实施方案为：25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃和35℃。
在上述优选实施方式中，所述超声提取的提取条件至少满足如下中的至少一个：
所述超声提取的超声功率为80kHZ，提取的时间为25min，提取的温度为25℃，所述超声提取的料液比为1：30g/mL。
在本发明的一种优选实施方式中，所述金属离子络合剂包括氯化锌、氯化铝、氯化铁和氯化镁中的至少一种；
作为一种优选的实施方式，上述金属离子络合剂中，根据多酚沉淀率的影响大小由高到低排列为氯化铝、氯化铁、氯化锌、氯化镁，因为氯化铁的颜色深，不易观察，后续处理较为困难，氯化锌、氯化镁的沉淀率太低，且沉淀颗粒较细，分离较困难，氯化铝的沉淀率最高，颜色浅易观察。因此，选择氯化铝作为沉淀剂。
在上述优选实施方式中，所述金属离子络合剂为氯化铝；
在上述优选实施方式中，所述氯化铝的加入量与提取液中茶多酚的质量比为0.8～1.5:1，优选为1：1。
作为一种优选的实施方式，为了更为高效的加入氯化铝，可以先对超声提取后的提取液中的茶多酚含量进行测定，然后以提取液中茶多酚的含量为基础加入氯化铝。因为此步骤为利用氯化铝与提取液中的有效成分结合形成络合物沉淀，进而将提取物沉淀下来，所以理想的比例就是有多少茶多酚加多少氯化铝。也就是说，在氯化铝与提取液中茶多酚的质量比为0.8～1.5:1，优选为1：1的质量比条件下，提取的提取效率和氯化锌的利用率更高。
在本发明的一种优选实施方式中，所述转溶的转溶液包括盐酸、硫酸和磷酸中的至少一种；
作为一种优选的实施方式，上述转溶液低浓度盐酸不能提供足量H+，导致沉淀物转溶不彻底；当盐酸浓度过大时，部分杂质也趋于溶解，增加转溶液的浑浊度，萃取困难，故多酚纯度降低。
在上述优选实施方式中，所述转溶液为浓度0.3～0.8moL/L盐酸，优选为浓度0.5moL/L的盐酸；
上述转溶液为浓度典型但非限制性的优选实施方案为：0.3moL/L、0.4moL/L、0.5moL/L、0.6moL/L、0.7moL/L和0.8moL/L。
在本发明的一种优选实施方式中，所述转溶的方法为：将沉淀物A与盐酸溶液以1:4～6的体积比混合，随后混匀处理15～20min，得到溶液A；
上述沉淀物A与盐酸溶液的体积比典型但非限制性的优选实施方案为：1:4、1:4.5、1:5、1:5.5和1:6；上述混匀的时间典型但非限制性的优选实施方案为：15min、16min、17min、18min、19min和20min。
在上述优选实施方式中，所述对沉淀物A进行转溶的方法为：将沉淀物A与盐酸溶液以1：5的体积比混合，随后混匀处理15min，得到溶液A。
在本发明的一种优选实施方式中，所述萃取的萃取剂包括乙酸乙酯、甲醇和丙酮中的至少一种；
作为一种优选的实施方式，上述萃取剂乙酸乙酯萃取时间短，可多酚提高提取率。
在本发明的一种优选实施方式中，所述萃取的方法为：按体积比1：1～2的比例向溶液A中加入萃取剂，25～30℃的条件下萃取2～4次，每次萃取时间为10～15min；
上述萃取剂与溶液A的体积比典型但非限制性的优选实施方案为：1:1.2、1:1.4、1:1.6、1:1.8和1:2；上述萃取的温度典型但非限制性的优选实施方案为：25℃、26℃、27℃、28℃、29℃和30℃；上述萃取的时间典型但非限制性的优选实施方案为：10min、11min、12min、13min、14min和15min。
在上述优选实施方式中，所述萃取的方法为：按体积比1：1的比例向溶液A中加入萃取剂，25℃的条件下萃取3次，每次萃取时间为12min。
在本发明的一种优选实施方式中，所述制备方法还包括对山茶花提取物进行冻干处理的步骤；
作为一种优选的实施方式，所述冻干处理可以更大程度的保留山茶花提取物中的有效成分，避免高温脱水带来的有效成分流失的问题。
在本发明的一种优选实施方式中，所述冻干处理的处理条件至少满足如下中的至少一个：冻干处理的真空度为490～500Pa，温度为-45～-40℃，时间为48～50h；
作为一种优选的实施方式，上述冻干处理的处理条件。
在上述优选实施方式中，所述冻干处理的处理条件至少满足如下中的至少一个：冻干处理的真空度为500Pa，温度为-45℃，时间为48h。
一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)、将山茶花粉碎为过20～200目筛的粉末，按1：30的料液比加入提取溶剂，在超声功率为75～80kHZ，提取温度为25～35℃的条件下，超声提取20～30min，随后4400rmp离心10min，抽取上层乙醇相溶液，得到提取液；
按体积百分数计，所述提取溶剂包括乙醇40～50％和硫酸铵水溶液50～60％；
(2)、利用福林酚法检测步骤(1)得到的提取液中的茶多酚含量，随后将金属离子络合剂加入到提取液中混匀并静置15min，随后将提取液4400rmp离心10min，得到沉淀物A；
所述金属离子络合剂的加入量与提取液中茶多酚的质量比为0.8～1.5:1；
(3)、将沉淀物A与转溶液以1:4～6的体积比混合，随后混匀处理15～20min，得到溶液A；
(4)、按体积比1：1～2的比例向溶液A中加入萃取剂，25～30℃的条件下萃取2～4次，每次萃取时间为10～15min；然后用旋转蒸发仪旋蒸后，加蒸馏水复溶，得样溶液B；
(5)、将步骤(4)溶液B在真空度为490～500Pa，温度为-45～-40℃的条件下，冻干处理48～50h，得到山茶花提取物。
根据本发明的一个方面，一种山茶花提取物，所述山茶花提取物由上述制备方法制备得到。
本发明提供的山茶花提取物相对于现有山茶花提取物具有利于皮肤吸收，抗氧化活性强的优势。
根据本发明的一个方面，一种上述山茶花提取物在制备化妆品中的应用。
本发明提供的山茶花提取物可以广泛应用于化妆品的制备过程中。
根据本发明的一个方面，一种化妆品，所述化妆品包括上述山茶花提取物。
本发明提供的化妆品，所述化妆品包括上述山茶花提取物。
下面将结合实施例和对比例对本发明的技术方案进行进一步地说明。
实施例1
一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)、将山茶花粉碎为过20目筛的粉末，按1：30的料液比加入提取溶剂，在超声功率为75kHZ，提取温度为25℃的条件下，超声提取20min，随后4400rmp离心10min，抽取上层乙醇相溶液，得到提取液；
按体积百分数计，所述提取溶剂包括无水乙醇40％和硫酸铵水溶液60％；
所述硫酸铵水溶液的浓度为0.28g/L；
(2)、利用福林酚法检测步骤(1)得到的提取液中的茶多酚含量4.003mg/mL，随后将氯化铝加入到提取液中混匀并静置15min，随后将提取液4400rmp离心10min，得到沉淀物A；
所述氯化铝的加入量与提取液中茶多酚的质量比为0.8:1；
(3)、将沉淀物A与浓度为0.3moL/L的盐酸以1:4的体积比混合，随后混匀处理15min，得到溶液A；
(4)、按体积比1：1的比例向溶液A中加入乙酸乙酯，25℃的条件下萃取2次，每次萃取时间为10min；然后用旋转蒸发仪旋蒸后，加蒸馏水复溶，得样溶液B；
(5)、将步骤(4)溶液B在真空度为490Pa，温度为-45℃的条件下，冻干处理48h，得到山茶花提取物。
实施例2
一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)、将山茶花粉碎为过200目筛的粉末，按1：30的料液比加入提取溶剂，在超声功率为80kHZ，提取温度为35℃的条件下，超声提取30min，随后4400rmp离心10min，抽取上层乙醇相溶液，得到提取液；
按体积百分数计，所述提取溶剂包括无水乙醇50％和硫酸铵水溶液50％；
所述硫酸铵水溶液的浓度为0.32g/L；
(2)、利用福林酚法检测步骤(1)得到的提取液中的茶多酚含量，随后将金属离子络合剂加入到提取液中混匀并静置15min，随后将提取液4400rmp离心10min，得到沉淀物A；
所述金属离子络合剂的加入量与提取液中茶多酚的质量比为1.5:1；
(3)、将沉淀物A与浓度为0.8moL/L的盐酸以1:6的体积比混合，随后混匀处理20min，得到溶液A；
(4)、按体积比1：2的比例向溶液A中加入萃取剂，30℃的条件下萃取4次，每次萃取时间为15min；然后用旋转蒸发仪旋蒸后，加蒸馏水复溶，得样溶液B；
(5)、将步骤(4)溶液B在真空度为500Pa，温度为-40℃的条件下，冻干处理50h，得到山茶花提取物。
实施例3
一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)、将山茶花粉碎为过50目筛的粉末，按1：30的料液比加入提取溶剂，在超声功率为76kHZ，提取温度为28℃的条件下，超声提取22min，随后4400rmp离心10min，抽取上层乙醇相溶液，得到提取液；
按体积百分数计，所述提取溶剂包括无水乙醇42％和硫酸铵水溶液58％；
所述硫酸铵水溶液的浓度为0.29g/L；
(2)、利用福林酚法检测步骤(1)得到的提取液中的茶多酚含量，随后将金属离子络合剂加入到提取液中混匀并静置15min，随后将提取液4400rmp离心10min，得到沉淀物A；
所述金属离子络合剂的加入量与提取液中茶多酚的质量比为0.9:1；
(3)、将沉淀物A与浓度为0.4moL/L的盐酸以1:4的体积比混合，随后混匀处理16min，得到溶液A；
(4)、按体积比1：1.2的比例向溶液A中加入萃取剂，26℃的条件下萃取3次，每次萃取时间为11min；然后用旋转蒸发仪旋蒸后，加蒸馏水复溶，得样溶液B；
(5)、将步骤(4)溶液B在真空度为490Pa，温度为-42℃的条件下，冻干处理48h，得到山茶花提取物。
实施例4
一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)、将山茶花粉碎为过150目筛的粉末，按1：30的料液比加入提取溶剂，在超声功率为79kHZ，提取温度为32℃的条件下，超声提取28min，随后4400rmp离心10min，抽取上层乙醇相溶液，得到提取液；
按体积百分数计，所述提取溶剂包括无水乙醇48％和硫酸铵水溶液52％；
所述硫酸铵水溶液的浓度为0.31g/L；
(2)、利用福林酚法检测步骤(1)得到的提取液中的茶多酚含量，随后将金属离子络合剂加入到提取液中混匀并静置15min，随后将提取液4400rmp离心10min，得到沉淀物A；
所述金属离子络合剂的加入量与提取液中茶多酚的质量比为1.2:1；
(3)、将沉淀物A与浓度为0.7moL/L的盐酸以1:6的体积比混合，随后混匀处理18min，得到溶液A；
(4)、按体积比1：1.8的比例向溶液A中加入萃取剂，28℃的条件下萃取4次，每次萃取时间为14min；然后用旋转蒸发仪旋蒸后，加蒸馏水复溶，得样溶液B；
(5)、将步骤(4)溶液B在真空度为500Pa，温度为-44℃的条件下，冻干处理50h，得到山茶花提取物。
实施例5
一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)、将山茶花粉碎为过100目筛的粉末，按1：30的料液比加入提取溶剂，在超声功率为80kHZ，提取温度为25℃的条件下，超声提取25min，随后4400rmp离心10min，抽取上层乙醇相溶液，得到提取液；
按体积百分数计，所述提取溶剂包括无水乙醇45％和硫酸铵水溶液55％；
所述硫酸铵水溶液的浓度为0.3g/L；
(2)、利用福林酚法检测步骤(1)得到的提取液中的茶多酚含量，随后将氯化铝加入到提取液中混匀并静置15min，随后将提取液4400rmp离心10min，得到沉淀物A；
所述氯化铝的加入量与提取液中茶多酚的质量比为1:1；
(3)、将沉淀物A与浓度为0.5moL/L的盐酸以1:5的体积比混合，随后混匀处理15min，得到溶液A；
(4)、按体积比1：1的比例向溶液A中加入萃取剂，28℃的条件下萃取3次，每次萃取时间为12min；然后用旋转蒸发仪旋蒸后，加蒸馏水复溶，得样溶液B；
(5)、将步骤(4)溶液B在真空度为500Pa，温度为-45℃的条件下，冻干处理48h，得到山茶花提取物。
实施例6
本实施例除步骤(1)中超声提取的条件时间外，其余同实施例5。
对比例1
本对比例除步骤(1)中的提取溶剂为浓度45％的乙醇外，其余同实施例5。
对比例2
一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)、将山茶花粉碎为过100目筛的粉末，按1：30的料液比加入提取溶剂，在超声功率为80kHZ，提取温度为25℃的条件下，超声提取25min，随后4400rmp离心10min，抽取上层乙醇相溶液，得到提取液；
按体积百分数计，所述提取溶剂包括无水乙醇45％和硫酸铵水溶液55％；
所述硫酸铵水溶液的浓度为0.3g/L；
(2)、利用福林酚法检测步骤(1)得到的提取液中的茶多酚含量，随后将氯化铝加入到提取液中混匀并静置15min，随后将提取液4400rmp离心10min，得到沉淀物A；
所述氯化铝的加入量与提取液中茶多酚的质量比为1:1；
(3)、将沉淀物A在真空度为500Pa，温度为-45℃的条件下，冻干处理48h，得到山茶花提取物。
本对比例与实施例5的不同之处在于，本对比例中不包括对沉淀物A进行转溶和萃取的步骤。
对比例3
称取一定量的山茶花粉末，按45％乙醇，料液比1：30，超声25min浸提完成后，滤液加入等体积的氯仿脱色，4℃振荡并静置分层，水层用等体积的乙酸乙酯萃取，4℃振荡30min，静置分层，取乙酸乙酯层进行减压蒸馏，冷冻干燥后得山茶花多酚粉末。
实验例1
为表明本申请山茶花提取物具有更好的有效成分提取效率，现利用福林酚法对实施例1～6以及对比例1～3制备得到的山茶花提取物进行茶多酚含量检测。
1、具体检测方法如下：分别称取实施例1～6以及对比例1～3制备得到的山茶花提取物各1mL作为样品，随后用蒸馏水稀释50倍，得到检测液，然后利用福林酚法测多酚含量。
2、所述总多酚提取率(％)＝(A样-b)/a*N*V/m样*100
A样-----样品吸光度
N------稀释倍数
V-----乙醇层体积(mL)
m样----样品的质量(mg)
c------标曲中y＝ax+b
a------标曲中y＝ax+b
3、具体检测结果如下：
Figure BDA0002460062120000161
Figure BDA0002460062120000171
实验例2
本实验例采用DPPH清除能力的测定，对实施例5制备得到的山茶花提取物进行抗氧化能力的检测，具体如下：
1、实验原理：
DPPH·又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。
2、实验方法：
配制0.2mmol/L的DPPH·甲醇(或无水乙醇)溶液；配制200mg/mL浓度的待测样品溶液；以VC作为阳性对照样品。
分别吸取2mL样品溶液和2mL DPPH·溶液于具塞试管中，混匀，避光反应30min，测定517nm波长下的吸光值A1；分别吸取2mL样品溶液和2mL甲醇于具塞试管中，混匀，避光反应30min，测定517nm波长下的吸光值A2；分别吸取2mLDPPH·溶液和2mL甲醇于具塞试管中，混匀，避光反应30min，测定517nm波长下的吸光值A0；每个样品做3个平行样。
Figure BDA0002460062120000172
3、实验结果：
当浓度在0-100μg/mL时，山茶花提取物对DPPH自由基清除效果随着浓度的升高逐渐增强，当浓度达到90μg/mL时，清除率达到91.68％，随后趋于平衡。山茶花提取物的IC50值为27.84μg/mL，VC的IC50值为1.47μg/mL。与VC相比，山茶花提取物对DPPH自由基的清除效果差。
具体实验结果参见图1和图2，由图1和图2可知，本发明实施例5制备得到的山茶花提取物的DPPH清除率呈剂量依赖关系，也表明本发明山茶花提取物具有清除DPPH自由基的效果，本申请在90μg/mL的山茶花提取物浓度下，DPPH的清除率在90％左右，与6～8μg/ml的维生素C相当。
实验例3
本实验例采用ABTS+·清除能力的测定，对实施例5制备得到的山茶花提取物进行抗氧化能力的检测，具体如下：
(1)ABTS工作液的制备：用10mmol/L PBS(pH7.4)稀释一定浓度，使吸光度在734nm处的吸光度为0.7±0.02。
(2)样品测定：取4mL ABTS工作液，加40μL样品液，震荡10s，30℃静置6min，734nm处测吸光度A1。
(3)样品空白：吸取4mL 10mmoL/L，加4μL样品液，震荡10s，30℃静置6min，测定734nm处吸光度A2。
(4)试剂空白：取4mL ABTS工作液，加40μL10 mmoL/LPBS缓冲液，震荡10s，30℃条件下静置6min，测定734nm处吸光度A0。
(5)ABTS清除率(％)＝(1-(A1-A2)/A0)*100
实验结果：
具体实验结果参见图3，由图3可知，本发明实施例5制备得到的山茶花提取物的ABTS+清除率呈剂量依赖关系，也表明本发明山茶花提取物具有清除ABTS自由基的效果，本申请在0.4～0.5mg/ml的山茶花提取物浓度下，ABTS自由基的清除率在90％以上，与0.4～0.5mg/ml的VC相当。
实验例4
本实验例对实施例5制备得到的山茶花提取物的总抗氧化能力进行检测，具体如下：
1、试剂配制
①0.3moL/L醋酸盐缓冲液(pH＝3.6)：1.55g无水乙酸钠用水溶解，加入8mL冰乙酸，用水定容至500mL；
②0.04moL/L HCl：0.83mL浓盐酸，稀释至250mL；
③10mmoL/L TPTZ：0.0312gTPTZ溶于10mL0.04 mol/L HCl溶液；
④20mmoL/L FeCl3溶液：0.2703gFeCl3·6H2O用水溶解并定容至50mL；
⑤1mmoL/LFeSO4·7H2O溶液：0.0139gFeSO4·7H2O用水溶解并定容至50mL；
⑥TPTZ工作液：①：③：④＝10:1:1(现用现配)。
2、实验步骤
取0.1mL样品溶液于试管中，加入3mL的TPTZ工作液，再加入0.3mL蒸馏水，混匀后37℃保温5min，测定593nm处的吸光值。以蒸馏水调零，分别考查样品溶液、阳性对照(VC或Trolox)、空白对照组的吸光值，每组测定三次。
3、标准曲线的绘制
将1mmoL/LFeSO4溶液稀释为0.2、0.4、0.6、0.8mmoL/L的标准梯度溶液，分别吸取0.1mL按照上述实验步骤进行测定，绘制吸光值与浓度之间的回归曲线。
4、实验结果
Figure BDA0002460062120000191
Figure BDA0002460062120000201
由上表可知，山茶花多酚的总抗氧化能力为3.3U/mg,维生素C的总抗氧化能力为6.3U/mg。(U＝mmmoL/L)。
综上所述，本发明制备方法提取得到的山茶花提取物具有提取率高、抗氧化活性强的优势，同时制备方法条件温和，易于操作，十分适应于工业化大规模生产。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种山茶花提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
将山茶花进行超声提取，随后将提取液与金属离子络合剂反应，得到沉淀物A；然后将沉淀物A依次进行转溶和萃取，得到山茶花提取物；
所述超声提取的超声提取溶剂包括乙醇和硫酸铵。
2.根据权利要求1所述的山茶花提取物的制备方法，其特征在于，按体积百分数计，所述超声提取溶剂包括乙醇40～50％和硫酸铵水溶液50～60％；
所述超声提取溶剂中各组分的体积百分数之和为100％；
优选地，按体积百分数计，所述超声提取溶剂包括乙醇45％和硫酸铵水溶液55％；
所述超声提取溶剂中各组分的体积百分数之和为100％；
更优选地，所述乙醇为无水乙醇；
更优选地，所述硫酸铵水溶液的浓度为0.28～0.32g/L，优选为0.3g/L。
3.根据权利要求1所述的山茶花提取物的制备方法，其特征在于，所述超声提取的提取条件至少满足如下中的至少一个：
所述超声提取的超声功率为75～80kHZ，提取的时间为20～30min，提取的温度为25～35℃，所述超声提取的料液比为1:25～1:35g/mL；
优选地，所述超声提取的提取条件至少满足如下中的至少一个：
所述超声提取的超声功率为80kHZ，提取的时间为25min，提取的温度为25℃，所述超声提取的料液比为1：30g/mL。
4.根据权利要求1所述的山茶花提取物的制备方法，其特征在于，所述金属离子络合剂包括氯化锌、氯化铝、氯化铁和氯化镁中的至少一种；
优选地，所述金属离子络合剂为氯化铝；
更优选地，所述氯化铝的加入量与提取液中茶多酚的质量比为0.8～1.5:1，优选为1：1。
5.根据权利要求1所述的山茶花提取物的制备方法，其特征在于，所述转溶的转溶液包括盐酸、硫酸和磷酸中的至少一种；
优选地，所述转溶液为浓度0.3～0.8moL/L盐酸，优选为浓度0.5moL/L的盐酸；
优选地，所述转溶的方法为：将沉淀物A与盐酸溶液以1:4～6的体积比混合，随后混匀处理15～20min，得到溶液A；
更优选地，所述转溶的方法为：将沉淀物A与盐酸溶液以1：5的体积比混合，随后混匀处理15min，得到溶液A。
6.根据权利要求1所述的山茶花提取物的制备方法，其特征在于，所述萃取的萃取剂包括乙酸乙酯、甲醇和丙酮中的至少一种；
优选地，所述萃取的方法为：按体积比1：1～2的比例向溶液A中加入萃取剂，25～30℃的条件下萃取2～4次，每次萃取时间为10～15min；
优选地，所述萃取的方法为：按体积比1：1的比例向溶液A中加入萃取剂，25℃的条件下萃取3次，每次萃取时间为12min。
7.根据权利要求1所述的山茶花提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括对山茶花提取物进行冻干处理的步骤；
优选地，所述冻干处理的处理条件至少满足如下中的至少一个：冻干处理的真空度为490～500Pa，温度为-45～-40℃，时间为48～50h；
更优选地，所述冻干处理的处理条件至少满足如下中的至少一个：冻干处理的真空度为500Pa，温度为-45℃，时间为48h。
8.一种山茶花提取物，其特征在于，所述山茶花提取物由上述权利要求1～7任一项所述的制备方法制备得到。
9.一种根据权利要求8所述的山茶花提取物在制备化妆品中的应用。
10.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包括权利要求9所述的山茶花提取物。
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