CN110845634B

CN110845634B - 油茶枯饼中的多糖提取物及其提取方法

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Publication number: CN110845634B
Application number: CN201911187894.9A
Authority: CN
Inventors: 谭志坚; 刘佳佳; 王朝云; 易永健; 高畅; 余旺; 曾粮斌; 汪洪鹰; 杨媛茹
Original assignee: Central South University; Institute of Bast Fiber Crops of CAAS
Current assignee: Central South University; Institute of Bast Fiber Crops of CAAS
Priority date: 2019-11-28
Filing date: 2019-11-28
Publication date: 2021-09-03
Anticipated expiration: 2039-11-28
Also published as: CN110845634A

Abstract

本发明涉及一种油茶枯饼中多糖提取物及其提取方法，该提取方法包括如下步骤：1)向粉碎的油茶枯饼中加入低共熔溶剂，超声离心，得到多糖粗提液；2)向粗提液中加入共聚物，构建出双水相体系，多糖被萃取到富含共聚物的上相，下相的低共熔溶剂可以实现回收和重复利用；3)将共聚物相分离后，通过加热使含有多糖的共聚物再次构建热分离双水相体系，得到含有多糖的水相和共聚物相，回收共聚物；4)将水相干燥，得到初步纯化的多糖提取物。本发明采用新型的绿色溶剂低共熔溶剂作为萃取剂；采用共聚物/低共熔溶剂双水相体系对多糖进行纯化，通过加热实现多糖分离和共聚物回收重复利用，进而降低了提取成本。

Description

油茶枯饼中的多糖提取物及其提取方法

技术领域

本发明涉及药物提取技术领域，更具体地，涉及一种油茶枯饼中的多糖提取物及其提取方法。

背景技术

目前，油茶枯饼中提取多糖的传统方法包括水提法、酶提法和碱提法。其中，水提法简单且成本较低，但效率不高。酶提法要求复杂的提取条件，增加了成本。碱提法效率较高，但是由于较强的碱性也带来一定的污染。

发明内容

基于此，针对现有技术中油茶枯饼中多糖的提取方法存在的技术缺陷，提供一种油茶枯饼中多糖的提取方法。

一种油茶枯饼中多糖的提取方法，包括如下步骤：

1)向粉碎的油茶枯饼中加入低共熔溶剂和水，超声离心，得到多糖粗提液；

2)向所得的粗提液中加入共聚物形成双水相体系，静置分相，得到含有多糖的共聚物相和低共熔溶剂相，回收低共熔溶剂；

3)通过加热使含有多糖的共聚物相再次形成双水相体系，分相后得到含有多糖的水相和共聚物相，回收共聚物；

4)将所得的水相干燥，得到多糖提取物。

在一些实施方式中，所述共聚物包括环氧乙烷-环氧丙烷；所述环氧乙烷-环氧丙烷的的分子量为2000～3000；所述环氧乙烷-环氧丙烷的浓度为30～70wt％。

在一些实施方式中，所述低共熔溶剂包括氢键受体和氢键给体，所述氢键受体和氢键给体的摩尔比为(1～5)：(1～3)，其中，所述氢键受体包括甘氨酸、L(-)-脯氨酸、氯化胆碱和甜菜碱中的至少一种，所述氢键给体包括L(+)-乳酸、DL-苹果酸、丙三醇、D-山梨醇、尿素、乙二醇和柠檬酸中的至少一种。

在一些实施方式中，所述低共熔溶剂中水的添加量为10～90wt％。

在一些实施方式中，所述油茶枯饼与低共熔溶剂的固液比为1：(10～50)。

在一些实施方式中，在步骤1)中，超声的温度为40～80℃；超声的时间为30～70min。

在一些实施方式中，在步骤1)中，向粉碎的油茶枯饼中加入低共熔溶剂后，调节混合液的pH为1～13。

在一些实施方式中，在步骤2)中，向所得的粗提液中加入共聚物分离纯化后，加热至20～60℃。

在一些实施方式中，在步骤3)中，加热的温度为70～80℃。

本发明还提供了一种油茶枯饼中的多糖提取物，通过上述任一项实施方式所述的提取方法制得。

本发明采用绿色的低共熔溶剂作为萃取剂从从油茶枯饼中提取多糖，得到多糖粗提液，然后再加入共聚物，构建共聚物/低共熔溶剂双水相体系，多糖被萃取到共聚物相。将两相分离后，再将共聚物相通过加热使其再次形成热分离双水相体系，多糖被萃取到水相，两相分离后将水干燥后得到纯化的多糖提取物。同时共聚物可以实现回收利用。本发明相比现有技术，具有如下有益效果；采用新型的绿色溶剂低共熔溶剂作为萃取剂；采用共聚物/低共熔溶剂双水相体系对多糖进行纯化，通过加热实现多糖分离和共聚物回收重复利用，进而降低了提取成本。

附图说明

图1为本发明公开的油茶枯饼中的多糖提取物的提取方法的流程示意图。

具体实施方式

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

实施例1

如图1所示，一种油茶枯饼中多糖的提取方法，包括如下步骤：

1)在10mL离心管中加入0.1g粉碎过筛后的油茶枯饼粉末，再加入3.0mL DES溶液(含30wt％水)，其固液比为1:30；离心管放置在超声清洗仪中进行超声协助萃取，其中，超声温度为55℃，超声萃取的时间为35min；然后离心分离出上清液，得到多糖粗提液；

2)在10mL离心管中加入1.0mL多糖粗提液，然后加入EOPO共聚物，将上述混合物搅拌均匀后静置使其分相；其中，上相是富含多糖的EOPO相，下相是DES相，回收低共熔溶剂；

3)通过水浴加热至70℃使含有多糖的共聚物相分相，得到含有多糖的水相和共聚物相，回收共聚物；

4)将所得的水相干燥，得到多糖提取物。

5)采用蒽酮-硫酸法对多糖含量进行分析测定。以葡萄糖作为标准品，用ELISA法在酶标仪上对多糖进行测定。检测波长为625nm，温度为室温，多糖测定的标准曲线为y＝5.5893x-0.0051，相关系数为R²＝0.9991，线性范围为0.01-0.06mg/mL.

实施例2

以与实施例1相同的过程，只是采用下表1中序号1～17分别所示的不同低共熔溶剂进行反应。此外，本实施例还采用了水作为萃取剂形成对照组。反应结果参见表1。

表1

DES编号	氢键受体	氢键给体	摩尔比	提取产率(mg/g)
					DES-1	甘氨酸	L(+)-乳酸	1:3	68.27
DES-2	L(-)-脯氨酸	DL-苹果酸	1:1	93.32
					DES-3	L(-)-脯氨酸	丙三醇	5:2	63.35
DES-4	L(-)-脯氨酸	L(+)-乳酸	1:1	59.33
					DES-5	L(-)-脯氨酸	D-山梨醇	1:1	56.20
DES-6	L(-)-脯氨酸	丙三醇	1:2	57.54
					DES-7	L(-)-脯氨酸	尿素	1:2	106.29
DES-8	氯化胆碱	L(+)-乳酸	1:1	97.79
					DES-9	氯化胆碱	丙三醇	1:2	108.98
DES-10	氯化胆碱	乙二醇	1:2	121.95
					DES-11	氯化胆碱	尿素	1:2	102.27
DES-12	氯化胆碱	柠檬酸	2:1	87.06
					DES-13	氯化胆碱	DL-苹果酸	1:1	73.19
DES-14	甜菜碱	L(+)-乳酸	1:1	85.72
					DES-15	甜菜碱	丙三醇	1:2	60.67
DES-16	甜菜碱	尿素	1:2	88.85
					DES-17	甜菜碱	乙二醇	1:2	102.71
水				80.35

从表1可以得到，当低共熔溶剂中氢键受体为氯化胆碱，氢键给体为乙二醇，且两者摩尔比为1:2时，多糖的提取产率最高。

实施例3

以与实施例1相同的过程，但采用不同反应条件进行，其中，超声萃取的温度为50℃，萃取时间为30min，水的添加量为10～90wt％。其反应结果如表2所示。

表2

由表2可知，当水的添加量为30wt％时，多糖的提取产率最高。

实施例4

以与实施例1相同的过程，但采用不同反应条件进行，其中，DES中添加30wt％的水，萃取温度为50℃，萃取时间为30min。反应结果如表3所示。

表3

固液比	提取产率(mg/g)
		1：10	107.41
1：20	121.50
		1：30	130.89
1：40	129.55
		1：50	128.88

由表3可知，当油茶枯饼粉末与DES的固液比为1:30时，多糖的提取产率最高。

实施例5

以与实施例1相同的过程，但采用不同反应条件进行。其中，DES中添加30wt％的水，固液比为1:30，萃取时间为30min。反应结果如表4所示。

表4

超声温度(℃)	提取产率(mg/g)
		40	114.79
50	130.22
		60	133.58
70	122.84
		80	111.44

由表4可知，当超声温为60℃时，多糖的提取产率最高。

实施例6

以与实施例1相同的过程，但采用不同反应条件进行。其中，DES中添加30wt％的水，固液比为1:30，萃取温度为60℃。反应结果如表5所示。

表5

超声时间(min)	提取产率(mg/g)
		30	126.20
40	132.23
		50	139.61
60	135.59
		70	128.21

由表5可知，当超声时间为50min时，多糖的提取产率最高。

实施例7

以与实施例1相同的过程，但采用不同反应条件进行，即调节油茶枯饼与DES溶液混合的pH。其中，DES中添加30wt％的水，固液比为1:30，萃取温度为温度为60℃，萃取时间50min。反应结果如表6所示。

表6

体系pH	提取产率(mg/g)
		1	123.51
3	138.27
		5	145.65
7	134.25
		9	132.23
11	124.18
		13	65.14

由表6可知，当体系中pH为5时，多糖的提取产率最高。

实施例8

以与实施例1相同的过程，但采用不同反应条件进行。其中，环氧乙烷-环氧丙烷(EOPO)的浓度为60wt％，双水相萃取温度为30℃，pH为5。反应结果如表7所示。

表7

EOPO分子量	EOPO相萃取效率(％)
		2000	83.23
2500	84.92
		3000	82.17

由表7可知，当EOPO的分子量为2500时，萃取效率达到最高。

实施例9

以与实施例1相同的过程，但采用不同反应条件进行。其中，EOPO的分子量2500，双水相萃取温度为30℃，pH为5。反应结果如表8所示。

表8

EOPO浓度	EOPO相萃取效率(％)
		30	80.66
40	81.09
		50	82.32
60	85.4
		70	80.45

由表8可知，当EOPO的浓度为60wt％时，萃取效率达到最高。

实施例10

以与实施例1相同的过程，但采用不同反应条件进行。其中，EOPO的分子量为2500，浓度为60wt％，pH为5。反应结果如表9所示。

表9

双水相萃取温度(℃)	EOPO相萃取效率(％)
		20	80.18
30	85.16
		40	86.92
50	81.55
		60	82.98

由表9可知，当双水相萃取温度为30℃时，萃取效率达到最高。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种油茶枯饼中多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）向粉碎的油茶枯饼中加入低共熔溶剂溶液，超声协助萃取，然后离心分离出上清液，得到多糖粗提液；所述低共熔溶剂溶液中水的添加量为10~90wt%;

2）向所得的粗提液中加入共聚物形成双水相体系，静置分相，得到含有多糖的共聚物相和低共熔溶剂相，回收低共熔溶剂；所述共聚物为环氧乙烷-环氧丙烷共聚物；所述环氧乙烷-环氧丙烷共聚物的分子量为2000~3000；所述环氧乙烷-环氧丙烷共聚物的浓度为30~70wt%；

3）通过加热使含有多糖的共聚物相再次形成双水相体系，分相后得到含有多糖的水相和共聚物相，回收共聚物；

4）将所得的水相干燥，得到多糖提取物。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述低共熔溶剂包括氢键受体和氢键给体，所述氢键受体和氢键给体的摩尔比为（1~5）：（1~3），其中，所述氢键受体包括甘氨酸、L(-)-脯氨酸、氯化胆碱和甜菜碱中的至少一种，所述氢键给体包括L(+)-乳酸、DL-苹果酸、丙三醇、D-山梨醇、尿素、乙二醇和柠檬酸中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述油茶枯饼与低共熔溶剂溶液的固液比为1：（10~50）。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，在步骤1）中，超声的温度为40~80℃；超声的时间为30~70min。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，在步骤1）中，向粉碎的油茶枯饼中加入低共熔溶剂溶液后，调节混合液的pH为1~13。

6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，在步骤2）中，向所得的粗提液中加入共聚物分离纯化后，加热至20~60℃。

7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，在步骤3）中，加热的温度为70~80℃。

8.一种油茶枯饼中的多糖提取物，其特征在于，通过权利要求1~7任一项所述的提取方法制得。