CN101933926A - 作为pkc抑制剂的吲哚基马来酰亚胺衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及PKC抑制剂，它们能够选择性地抑制PKC的例如α、β和任选地θ同工型，和它们特别是在移植术中的用途。

Description

作为PKC抑制剂的吲哚基马来酰亚胺衍生物
本申请是申请日为2005年1月19日、发明名称为“作为PKC抑制剂的吲哚基马来酰亚胺衍生物”的中国专利申请200580002684.8(PCT/EP2005/000502)的分案申请。
本发明涉及新颖的蛋白激酶C(PKC)抑制剂，它们有相对于其他蛋白激酶而言的选择性；涉及新颖的PKC抑制剂，它们就PKC的同工型α和β以及任选地θ相对于一种或多种其他现有PKC同工型而言是选择性的；还涉及这类PKC抑制剂抑制移植排斥或自身免疫病的用途。
蛋白激酶C(PKC)由密切相关的酶家族组成，它们充当丝氨酸/苏氨酸激酶。目前存在至少十种已知的PKC同工酶，它们在组织分布、酶选择性、对Ca2+的需求和调节作用上有所不同。PKC在细胞-细胞信号发送、基因表达和细胞分化与生长的控制中扮演重要角色。已知有多种PKC抑制剂。有些也已知证明PKC相对于其他蛋白激酶而言是选择性的。不过关于同工酶选择性知之甚少。由于不同PKC同工酶在生理中的重要角色，需要开发选择性PKC抑制剂，特别是相对于其他蛋白激酶和/或某些特定PKC同工酶而言高度选择性的PKC抑制剂。
令人惊奇地，现在已经鉴定选择性PKC抑制剂化合物，下文称之为本发明化合物。此外，已经发现这些选择性PKC抑制剂显示令人感兴趣的治疗性质，特别是在移植，和治疗或预防自身免疫病中显示令人感兴趣的治疗性质。
一方面，本发明提供这样一种化合物，它是蛋白激酶C的蛋白质-选择性抑制剂，例如就PKC相对于一种或多种其他蛋白激酶而言选择性的抑制剂，例如相对于一种或多种酪氨酸激酶，例如相对于一种或多种非受体或受体酪氨酸激酶，例如相对于一种或多种PKA、PKB、Abl、Met、Src、Ins-R、Flt-3、JAK-2、KDR和/或Ret蛋白而言选择性的抑制剂。本发明的选择性PKC抑制剂可以任选地有相对于一种或多种丝氨酸/苏氨酸激酶，例如相对于一种或多种不属于CDK家族的丝氨酸/苏氨酸激酶而言的选择性。优选地，本发明化合物显示就PKC相对于一种或多种其他蛋白激酶，例如相对于一种或多种酪氨酸激酶，例如相对于Flt-3、JAK-2、KDR和/或Ret蛋白或者相对于一种或多种不属于CDK家族的丝氨酸/苏氨酸激酶而言至少10倍、更优选20倍、最优选100倍的选择性。
在本发明的一种实施方案中，提供了这样一种PKC抑制剂，它是就PKC相对于不属于CDK家族的丝氨酸/苏氨酸激酶，例如相对于不是CDK-1蛋白质的丝氨酸/苏氨酸激酶而言是选择性的。
可以计算PKC的选择性抑制剂相对于其他蛋白激酶的选择性，其为在下述测定法中所测量的PKC的IC50相对于另一种激酶的IC50之比。
在本发明的另一种实施方案中，提供了这样一种PKC抑制剂，在同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)测定法中所测定的IC50值与在BM测定法中所测定的IC50值之比高于5、10、20或30，优选地高于20或30。
MLR和BM测定法可以按照已知方法进行，例如小鼠或者人MLR和BM测定法，优选如下文所公开的。
另一方面，本发明提供蛋白激酶C(PKC)的选择性抑制剂，也就是同工酶-选择性PKC抑制剂，其中该化合物具备就PKC的同工型α和β相对于一种或多种其他PKC同工型而言的选择性。
优选地，本发明化合物是就α和βPKC相对于一种或多种其他PKC同工型而言选择性的，例如相对于一种或多种选自δ、ε、η和θ的PKC同工型，优选地相对于δ和εPKC同工型，更优选地相对于δ、ε和ηPKC同工型，进而更优选地相对于δ、ε、η和θPKC同工型而言选择性的。
在本发明的另一种实施方案中，本发明化合物就α、β和θPKC相对于一种或多种其他PKC同工型而言是选择性的，例如相对于一种或多种选自δ、ε和η的PKC同工型，优选地相对于δ和εPKC同工型，更优选地相对于δ、ε和ηPKC同工型是选择性的。
本发明化合物优选地显示就PKCα和β以及任选地θ相对于一种或多种其他PKC同工型，例如相对于一种或多种选自δ、ε、η和θ的PKC同工型，优选地相对于PKC同工型δ，更优选地相对于PKC同工型ε和η，进而更优选地相对于PKC同工型δ、ε和η而言至少10倍、更优选20倍、最优选100倍的选择性。
就PKC的α、β或θ同工型相对于一种或多种其他PKC同工型而言的选择性可以这样测量：比较化合物就α、β或θPKC而言的IC50与该化合物就其他PKC同工型、例如δ、ε、η而言的IC50。优选地，选择性可以这样测定，计算化合物就δ、ε或ηPKC同工型而言的IC50与该化合物就α、β或θPKC而言的IC50之比。
IC50值例如可以按照下述PKC测定法获得。
在优选的实施方案中，本发明化合物在下文提到的测定法中显示出就α和β以及任选地θPKC而言1μM或以下、优选10nM或以下的IC50值。
优选地，本发明化合物显示相对于PKC的α和β以及任选地θ同工型而言的选择性，以及相对于一种或多种其他蛋白激酶而言的选择性，例如相对于一种或多种酪氨酸激酶，或者相对于一种或多种不属于CDK家族的丝氨酸/苏氨酸激酶，例如相对于一种或多种PKA、PKB、Abl、Met、Src、Ins-R、Flt-3、JAK-2、KDR和Ret蛋白，例如相对于一种或多种Flt-3、JAK-2、KDR和Ret蛋白而言的选择性。
本发明化合物的游离形式或药学上可接受的盐形式可用于治疗和/或预防由T淋巴细胞和/或PKC介导的疾病或障碍，例如由α和β以及任选地θPKC介导的疾病或障碍，例如器官、组织或细胞同种异体移植或异种移植的急性或慢性排斥、移植物抗宿主病、自身免疫病、炎性疾病、感染性疾病、癌症或心血管疾病，例如心力衰竭。术语“移植物”以及“细胞、组织或器官”包括例如皮肤、眼睛或眼睛的部分(例如角膜、视网膜、晶状体)、骨髓、肌肉、心、肺、心肺、肝、肾、胰腺(例如胰岛细胞、β-细胞)、甲状旁腺、肠(例如结肠、小肠、十二指肠)、神经元组织、骨和脉管系统(例如动脉、静脉)。
本发明的选择性PKC抑制剂因此可用于治疗和/或预防动脉粥样硬化、由血管损伤(例如血管成形术)引起的血管闭塞、再狭窄、肥胖、X综合征、葡萄糖耐量减低、多囊性卵巢综合征、高血压、心力衰竭、慢性阻塞性肺病、CNS疾病(例如阿尔茨海默氏病或肌萎缩性侧索硬化)、癌症、感染性疾病(例如AIDS、脓毒性休克或成人呼吸窘迫综合征)、局部缺血/再灌注损伤(例如心肌梗塞、中风、肠缺血、肾衰竭或出血性休克)或者创伤性休克(例如创伤性脑损伤)。本发明的同工酶选择性PKC抑制剂也可用于治疗和/或预防T-细胞介导的急性或慢性炎性疾病或障碍或者自身免疫病，例如类风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、桥本氏甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、I或II型糖尿病和与之有关的障碍、呼吸疾病(例如哮喘或炎性肺损伤)、炎性肝损伤、炎性小球损伤、免疫学-介导障碍或疾病的皮肤表现、炎性与过度增殖性皮肤疾病(例如牛皮癣、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、刺激物接触性皮炎与进一步的湿疹性皮炎、皮脂溢性皮炎)、炎性眼睛疾病(例如Sjoegren综合征、角膜结膜炎或眼色素层炎)、炎性肠疾病、克罗恩氏病或溃疡性结肠炎。
本发明的选择性PKC抑制剂的游离形式或药学上可接受的盐形式表现宝贵的药理性质，例如如下体外和体内试验所示。
A.体外试验
1.PKC抑制剂的特异性和选择性的体外测定
按照下列方法，测试本发明化合物对不同PKC同工型的活性。在具有非结合性表面的白色透明底384-孔微量滴定平板中进行测定。反应混合物(25μl)含有1.5μM十三肽接受底物(它模拟PKCα的伪底物序列，并有Ala→Ser置换)、10μM 33P-ATP、10mM Mg(NO3)2、0.2mM CaCl2、蛋白质浓度从25至400ng/ml不等的PKC(依赖于所使用的同位型)、最终脂质浓度为0.5mM的脂囊泡(含有30mol％磷脂酰丝氨酸、5mol％DAG和65mol％磷脂酰胆碱)和20mM Tris-HCl缓冲液pH 7.4+0.1％BSA。在室温下温育60min。加入50μl终止混合物(100mM EDTA，200μM ATP，0.1％Triton X-100，0.375mg/孔链霉抗生物素蛋白-包被的SPA珠粒的磷酸缓冲盐水溶液w/o Ca，Mg)以终止反应。在室温下温育10min后，使悬液在300g下自旋10min。在Trilux计数器中测量所掺入的放射性达1min。温育浓度在1-1000μM之间的抑制剂系列稀释液，在常规基础上进行IC50测量。利用
Figure GSA00000083287600051
软件，通过曲线拟合从曲线图计算IC50值。
2.蛋白激酶Cα测定法
从Oxford Biomedical Research获得人重组PKCα，用在上述A.1节下所述测定条件下。在本测定法中，本发明化合物、例如式I化合物抑制PKCα的IC50≤1μM，优选≤10nM。
3.蛋白激酶Cβ1测定法
从Oxford Biomedical Research获得人重组PKCβ1，用在上述A.1节下所述测定条件下。在本测定法中，本发明化合物、例如式I化合物抑制PKCβ1的IC50≤1μM，优选≤10nM。
4.蛋白激酶Cδ测定法
从Oxford Biomedical Research获得人重组PKCδ，用在上述A.1节下所述测定条件下。在本测定法中，本发明化合物、例如式I化合物抑制PKCδ的IC50≤1μM。
5.蛋白激酶Cε测定法
从Oxford Biomedical Research获得人重组PKCε，用在上述A.1节下所述测定条件下。在本测定法中，本发明化合物、例如式I化合物抑制PKCε的IC50≤1μM。
6.蛋白激酶Cη测定法
从PanVera获得人重组PKCη，用在上述A.1节下所述测定条件下。在本测定法中，本发明化合物、例如式I化合物抑制PKCη的IC50≤1μM。
7.蛋白激酶Cθ测定法
在上述测定条件下使用人重组PKCθ。在本测定法中，本发明化合物、例如式I化合物抑制PKCθ的IC50≤1μM。
8.CD28共同刺激测定法
如Baumann G等在Transplant.Proc.1992；24：43-8，theβ-galactosidase reporter gene being replaced by the luciferase gene(de WetJ.，et al.，Mol.Cell Biol.1987，7(2)，725-737)中所述，利用被人白介素-2启动/报道基因构建体转染的Jurkat细胞进行测定。如下用固相-偶联抗体或乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)和Ca++离子载体离子霉素刺激细胞。就抗体-介导的刺激而言，在室温下向Microlite TM1微量滴定平板(Dynatech)每孔包被3μg/ml山羊抗-小鼠IgG Fc抗体(Jackson)的55μl磷酸缓冲盐水(PBS)溶液达三小时。除去抗体后，用2％牛血清白蛋白(BSA)的PBS溶液(300μl每孔)在RT下温育2小时，以封闭平板。用300μl PBS每孔洗涤三次后，加入10ng/ml抗-T细胞受体抗体(WT31，Becton & Dickinson)和300ng/ml抗-CD28抗体(15E8)的50μl 2％BSA/PBS溶液作为刺激性抗体，在4℃下温育过夜。最后，将平板用300μl PBS每孔洗涤三次。在单独的平板中制备供试化合物在测定培养基(RPMI 1640/10％胎牛血清(FCS)，含有50μM2-巯基乙醇，100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素)中的七份三倍系列稀释液，一式两份，与所转染的Jurkat细胞(克隆K22 290_H23)混合，在37℃下和5％CO2中温育30分钟。然后将含有1×105个细胞的100μl这种混合物转移至抗体-包被的测定平板。以平行方式温育100μl与40ng/mlPMA和2μM离子霉素。在37℃下和5％CO2中温育5.5小时后，借助生物发光测量法测定萤光素酶的水平。将平板在500g下离心10min，轻轻弹去上清液。加入溶解缓冲液，其中含有25mM Tris-磷酸盐pH 7.8、2mMDTT、2mM 1，2-二氨基环己烷-N，N，N′，N-四乙酸、10％(v/v)甘油和1％(v/v)Triton X-100(20μl每孔)。在恒定摇动下，将平板在RT下温育10分钟。在自动加入50μl每孔萤光素酶反应缓冲液后，利用生物发光读数器(Labsystem，Helsinki，Finland)评估萤光素酶活性，所述缓冲液含有20mMTricine、1.07mM(MgCO3)4Mg(OH)2x5H2O、2.67mM MgSO4、0.1mMEDTA、33.3mM DTT、270μM辅酶A、470μM萤光素(Chemie BrunschwigAG)、530μM ATP，pH 7.8。迟滞时间为0.5秒，总测量时间为1或2秒。低对照值是来自抗-T细胞受体-或PMA-刺激的细胞的光学单位，高对照来自抗-T细胞受体/抗-CD28-或PMA/离子霉素-刺激的细胞，没有任何供试样品。从所有数值中减去低对照。计算在供试化合物的存在下所获得的抑制作用，其为高对照的抑制百分比。从剂量-反应曲线测定供试化合物导致50％抑制的浓度(IC50)。在本测定法中，式I化合物抑制抗-T细胞受体/抗-CD28和PMA/离子霉素刺激的Jurkat细胞的IC50≤1μM。
9.骨髓增殖(BM)测定法
在100μl RPMI培养基中温育来自CBA小鼠的骨髓细胞(2.5×104个细胞每孔，平底组织培养微量滴定平板)，所述培养基含有10％FCS、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素(Gibco BRL，Basel，Switzerland)、50μM2-巯基乙醇(Fluka，Buchs，Switzerland)、WEHI-3条件培养基(7.5％v/v)与L929条件培养基(3％v/v)作为生长因子源和经过系列稀释的化合物。每种供试化合物进行七个三倍稀释步骤，一式两份。温育四天后，加入1μCi 3H-胸苷。另外五小时温育期后收获细胞，按照标准步骤测定所掺入的3H-胸苷。如下制备条件培养基。使WEHI-3细胞(ATCC TIB68)和L929细胞(ATCC CCL 1)在RPMI培养基中生长直至汇合，分别达四天和一周。收获细胞，在同一培养瓶中将WEHI-3细胞重新悬浮在含有1％FCS(Schreier and Tees 1981)的培养基C中，将L929细胞重新悬浮在RPMI培养基中，温育两天(WEHI-3)或一周(L929)。收集上清液，通过0.2μm过滤，以等分试样贮存在-80℃下。使用没有供试化合物并且没有WEHI-3与L929上清液的培养物作为低对照值。从所有数值中减去低对照值。没有任何样品的高对照被视为100％增殖。计算样品的抑制百分比，测定50％抑制所需浓度(IC50值)。
10.同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)测定法
按照标准步骤进行二路MLR(J.Immunol.Methods，1973，2，279和Meo T.et al.，Immunological Methods，New York，Academic Press，1979，227-39)。简而言之，在RPMI培养基中温育来自CBA和BALB/c小鼠的脾细胞(平底组织培养微量滴定平板的每孔中每种品系1.6×105个细胞，总计3.2×105个)，该培养基含有10％FCS、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素(Gibco BRL，Basel，Switzerland)、50μM 2-巯基乙醇(Fluka，Buchs，Switzerland)和经过系列稀释的化合物。每种供试化合物进行七个三倍稀释步骤，一式两份。温育四天后，加入1μCi 3H-胸苷。另外五小时温育期后收获细胞，按照标准步骤测定所掺入的3H-胸苷。MLR的背景值(低对照)是仅BALB/c细胞的增殖。从所有数值中减去低对照。没有任何样品的高对照被视为100％增殖。计算样品的抑制百分比，测定50％抑制所需浓度(IC50值)。优选地，根据MLR测定法的测定，本发明化合物显示低于100μM、优选低于10μM、更优选低于1μM的IC50值。
B.体内
大鼠心脏移植术
所使用的品系组合：雄性Lewis(RT1单元型)和BN(RT1单元型)。将动物用吸入性异氟醚(isofluorane)麻醉。用肝素处理供体大鼠的腹部下腔静脉，同时经由主动脉驱血之后，打开胸腔，迅速冷却心脏。结扎主动脉，在第一分支远端分开，在第一分叉处分开头臂主干。结扎左肺动脉，分开，右侧分开但是维持开放。切除所有其他血管，结扎，分开，取出供体心脏置于冰盐水中。
受体作如下准备，切开和交叉夹紧肾下腹部主动脉和腔静脉。植入移植物，使用10/0单丝缝合线，在供体头臂主干与受体主动脉之间和供体右肺动脉与受体腔静脉之间进行末端-边侧吻合术。除去夹子，在腹部后系住移植物，将腹部内容物用温盐水洗涤，缝合动物，在加热灯下恢复。每日通过腹部壁触诊跳动的供体心脏，监测移植物的存活。当心脏跳动停止时，认为排斥是完全的。在用口服施用的式I化合物处理的动物中获得移植物存活率的增加，每日剂量为1至150mg/kg bid，优选1至30mg/kg bid或10至100mg/kg bid。
移植物抗宿主模型
将来自Wistar/F大鼠的脾细胞(2×107)皮下注射到(Wistar/F x Fischer344)F1杂交大鼠的右后足垫内。左足垫未作处理。将动物用供试化合物连续处理4天(0-3)。在第7天除去腘淋巴结，测定两个对应淋巴结之间的重量差异。比较实验组淋巴结重量差异与未用供试化合物处理动物组的对应淋巴结重量差异，结果表示为对淋巴结增大的抑制率(以百分比给出)。
选择性PKC抑制剂化合物的代表性实例例如包括式I的吲哚基马来酰亚胺衍生物
Figure GSA00000083287600091
其中
Ra是H；C1-4烷基；或者被OH、NH2、NHC1-4烷基或N(二-C1-4烷基)2取代的C1-4烷基；
Rb、Rc、Rd和Re之一是卤素、C1-4烷氧基、C1-4烷基、CF3或CN，其他三个取代基各自是H；或者Rb、Rc、Rd和Re都是H；
R是式(a)、(b)或(c)的原子团
Figure GSA00000083287600092
其中
R1是-(CH2)n-NR3R4，
其中
每一R3和R4独立地是H或C1-4烷基；或者R3和R4与它们所结合的氮原子一起形成杂环残基；
n是0、1或2；
R2是H、卤素、C1-4烷基、CF3、OH、SH、NH2、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、NHC1-4烷基、N(二-C1-4烷基)2、CN、炔或NO2；
每一R10和R10a独立地是杂环残基；或者式α原子团
-X-Rf-Y                            (α)
其中X是直接键、O、S或NR11，其中R11是H或C1-4烷基，
Rf是C1-4亚烷基或者其中一个CH2被CRxRy代替的C1-4亚烷基，其中Rx和Ry之一是H，另一个是CH3，每一Rx和Ry是CH3，或者Rx和Ry一起形成-CH2-CH2-，
Y结合于末端碳原子，并且选自OH、-NR30R40，其中每一R30和R40独立地是H、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基、杂芳基-C1-4烷基、C2-6烯基或C1-4烷基，任选地在末端碳原子上被OH、卤素、C1-4烷氧基或-NR50R60取代，其中每一R50和R60独立地是H、C1-4烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基，或者R30和R40与它们所结合的氮原子一起形成杂环残基；
每一R20和R20a独立地是H、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、CF3、腈、硝基或氨基，
该化合物为游离形式或盐形式。
式I化合物是新颖的，因此也构成发明的一部分。
优选地，Y包含氮作为杂原子和任选地第二杂原子，其优选地选自N、O和S，并且任选地被取代。
将理解的是，本发明的同工酶选择性PKC抑制剂，例如式I化合物可以存在旋光异构体、外消旋物或非对映异构体的形式。例如，在哌嗪基残基3位携带取代基的环碳原子是不对称的，可以具有R-或S-构型。有待理解的是，本发明涵盖所有对映体和它们的混合物。对映体相对于外消旋物是优选的。相似的考虑适用于表现所述不对称碳原子的原料。
烷基或烷氧基可以是直链或支链的。
卤素可以是F、Cl、Br或I，优选F、Cl或Br。
杂环残基表示三至八元、优选五至八元饱和、不饱和或芳族杂环，其包含1或2个杂原子，该杂原子优选地选自N、O和S，并且任选地被取代。适合的实例例如包括吡啶基，例如3-或4-吡啶基；哌啶基，例如哌啶-1-基、3-或4-哌啶基、高哌啶基(homopiperidyl)、哌嗪基、高哌嗪基(homopiperazinyl)、吗啉-4-基、咪唑基、咪唑烷基、吡咯基或吡咯烷基，任选地被取代，例如单或多取代。当杂环残基被取代时，这可以位于一个或多个环碳原子上和/或环氮原子上(当存在时)。环碳原子上取代基的实例包括例如C1-4烷基，例如CH3；C3-6环烷基，例如环丙基，任选地进一步被C1-4烷基取代；
Figure GSA00000083287600111
其中p是1、2或3，优选1；CF3；卤素；OH；NH2；-CH2-NR7R8，其中每一R7和R8独立地是H、C1-4烷基，或者R7和R8与它们所结合的氮原子一起形成杂环残基或杂芳基；-CH2-OH；哌啶-1-基；或者吡咯烷基。环氮原子上取代基的实例例如有C1-6烷基；酰基，例如R’x-CO，其中R’x是H、C1-6烷基或者任选被C1-4烷基、C1-4烷氧基或氨基取代的苯基，例如甲酰基；C3-6环烷基；C3-6环烷基-C1-4烷基；苯基；苯基-C1-4烷基，例如苄基；杂环残基，例如如上所公开的，例如包含1或2个氮原子的芳族杂环残基；或者式β残基
-R5-Z                        (β).
其中R5是C1-4亚烷基或者被O中断的C2-4亚烷基，Z是OH、NH2、NH(C1-4烷基)或N(C1-4烷基)2。
当环氮上取代基是杂环残基时，它可以是五或六元饱和、不饱和或芳族杂环，其包含1或2个杂原子，优选地选自N、O和S。实例例如包括3-或4-吡啶基；哌啶基，例如哌啶-1-基、3-或4-哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、嘧啶基、吗啉-4-基、咪唑基、咪唑烷基、吡咯基或吡咯烷基。
作为R10、R10a或Y的杂环残基的进一步实例例如包括式(γ)残基
其中
环D是5、6或7元饱和、不饱和或芳族环；
Xb是-N＝、-C＝或-CH-；
Xc是-N＝、-NRf-、-CRf’＝或-CHRf’-，其中Rf是如上关于环氮原子所示取代基，Rf’是如上关于环碳原子所示取代基；
C1与C2之间的键是饱和或不饱和的；
每一C1和C2独立地是碳原子，它任选地被一个或两个选自如上关于环碳原子所示的那些取代基取代；
C3与Xb之间和C1与Xb之间的线分别代表得到5、6或7元环D所需的碳原子数，
由此当Y是式(γ)残基时，Xb和Xc至少一个是-N＝。
优选的式(γ)残基是这样的残基，其中环D构成所示任选地C-和/或N-取代的1，4-哌嗪基环。
式(γ)残基的代表性实例例如有3-或4-吡啶基、哌啶-1-基、1-N-(C1-4烷基)-或-(ω-羟基-C1-4烷基)-3-哌啶基、吗啉-4-基、咪唑基、吡咯烷基、1-哌嗪基、2-C1-4烷基-或-C3-6环烷基-1-哌嗪基、3-C1-4烷基-或-C3-6环烷基-1-哌嗪基、2，2-或3，5-或2，5-或2，6-二(C1-4烷基)-1-哌嗪基、3，4，5-三-(C1-4烷基)-1-哌嗪基、4-N-(C1-4烷基)-或-(ω-羟基-C1-4烷基)-或-(ω-二甲氨基-C1-4烷基)-1-哌嗪基、4-N-吡啶-4-基-1-哌嗪基、4-N-苯基-或-C3-6环烷基-1-哌嗪基、4-N-(C1-4烷基)-或-(ω-羟基-C1-4烷基)-3-C1-4烷基-或-3，3-二(C1-4烷基)-1-哌嗪基、4-N-(1-C1-4烷基-C3-6环烷基)-1-哌嗪基、4-N-甲酰基-1-哌嗪基、4-N-嘧啶-2-基-1-哌嗪基、或者4-N-C1-4烷基-1-高哌嗪基。
式I化合物中，下列含义个别或者以任意亚组合是优选的：
1.Ra是H或甲基；
2.Rb、Rc、Rd和Re之一是甲基或乙基，其他三个取代基是H；或者
Rb、Rc、Rd和Re都是H；
3.每一R2、R20和R20a独立地是H、Cl、NO2、F、CF3或甲基；
4.n是0或1；
5.每一R3和R4独立地是H、甲基、乙基或异丙基；或者R3和R4与它们所结合的氮原子一起形成杂环残基，例如任选取代的哌嗪基或吡咯烷基；
6.每一R1、R10和R10a是杂环残基，优选哌嗪-1-基，其任选地在3和/或4位被CH3取代或者在3位被乙基取代；-CH2NR7R8、C1-4烷氧基-C1-4烷基或卤代C1-4烷基；进而更优选在4位被CH3取代的哌嗪-1-基。
本发明也包括制备式I化合物的方法，该方法包括将式II化合物
Figure GSA00000083287600131
其中Ra至Re是如上所定义，
与式III化合物反应，
R-CH2-CO-NH2        (III)
其中R是如上所定义的，
若需要的话，转化所得式I化合物的游离形式为盐形式或者反之亦然，视情况而定。
该方法可以适宜地在强碱例如t-BuOK的存在下进行，例如WO02/38561或WO 03/08259所公开的，其内容引用在此作为参考，以及如实施例所阐述的。
式II和III化合物可以按照已知方法制备，例如WO 02/38561或WO03/08259所公开的，其内容引用在此作为参考，以及如实施例所阐述的。
根据本发明的选择性PKC抑制剂的进一步实例例如为式Ib化合物
Figure GSA00000083287600132
其中每一Ri、Rj、Rk、Rl、Rm、Rn和Ro独立地是H或C1-10烷基；Rh是(CH2)n，-CN，n’是0至5。
在式Ib化合物中，下列含义个别或者以任意亚组合是优选的：
1-Ri、Rj、Rk、Rm、Rn和Ro都是H；
2-Rl是CH3；
3-Rh是(CH2)2-CN。
其中Ri、Rj、Rk、Rm、Rn和Ro都是H、Rl是CH3、Rh是(CH2)2-CN的式Ib化合物是本领域熟知的，例如公开在Martin-Baron et al.，TheJournal of Biological Chemistry(1993)，268(13)，pp 9194-9197中，其内容引用在此作为参考。
式Ib化合物、特别是其中Ri、Rj、Rk、Rm、Rn和Ro都是H、Rl是CH3、Rh是(CH2)2-CN的式Ib化合物可以是选择性PKC抑制剂，例如就PKC的同工型α和β相对于其他现有PKC同工型而言的选择性抑制剂。
本发明化合物、例如式I或Ib化合物可以以游离形式或盐形式存在，例如与有机或无机酸的盐，所述酸为例如盐酸、乙酸、三氟乙酸。
如果没有确切地描述原料的生产，那么这些化合物是已知的或者可以类似于本领域已知的方法或如下文所述加以制备。
下列实施例是本发明的举例说明而非任何限制。
AcOH＝乙酸
DDQ＝2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌
DMF＝二甲基甲酰胺
EtOAc＝乙酸乙酯
MeOH＝甲醇
Pd2(dba)3＝Pd(0)-双(二亚苄基丙酮)
TBAF＝四丁基氟化铵
THF＝四氢呋喃
FCC＝急骤柱色谱
TLC＝薄层色谱
RT＝室温
实施例1：3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮
Figure GSA00000083287600151
在氩气氛下，将活化
Figure GSA00000083287600152
分子筛(2.0g)加入到2-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-乙酰胺(1.0g，3.61mmol)与(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(1.02g，4.69mmol)的无水THF(50ml)溶液中。然后在RT下一次性加入1.0M KOtBu的THF溶液(10.9ml，10.9mmol)。在RT下1h后，TLC分析表明原料完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发有机溶剂。残余物经过FCC纯化(EtOAc/AcOH/H2O 600∶150∶150)，得到标题化合物，将其溶于冰AcOH，冻干。得到标题化合物的水溶性双乙酸盐。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ1.80(s，6H)，3.20-3.42(m，2H)，6.10(d，J＝9.0Hz，1H)，6.44(t，J＝9.0Hz，1H)，6.94(t，J＝9.0Hz，1H)，7.31(d，J＝9.0Hz，1H)，7.34(d，J＝9.0Hz，1H)，7.42(s，1H)，7.63(d，J＝10.8Hz，1H)，7.89(d，J＝9.6Hz，1H)，8.03(d，J＝9.0Hz，1H)，8.10(s，1H)，11.0-11.3(br，1H)。ES+-MS：444，446[M+H]+。
2-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-乙酰胺的制备
在氩气氛下，将(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-乙酸乙酯(2.70g，8.82mmol)和甲酰胺(1.17ml，29.57mmol)溶于无水DMF(25ml)。将溶液加热至105℃，在10分钟内滴加NaOMe(1.64ml 5.4M MeOH溶液，8.82mmol)。在105℃下1小时后，TLC分析表明原料完全消耗。将反应混合物冷却至RT，用水稀释，加入1M NaHSO4溶液调节至pH 6-7。浓缩混合物，经过FCC纯化(CH2Cl2/EtOH/NH3 conc.90∶9∶1)，得到标题化合物。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ2.01(s，6H)，3.48(s，3H)，4.02(s，3H)，6.9-7.0(br，1H)，7.41-7.47(m，2H)；7.47-7.85(br，1H)，7.75-7.88(m，2H)，7.80(d，J＝12.1Hz，1H)。ES+-MS：277.3，279.2[M+H]+。
(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制备
在氩气氛下，将二甲胺(5.6M EtOH溶液，4.2ml，23.20mmol)加入到(2-氯-7-甲酰基-萘-1-基)-乙酸乙酯(4.28g，15.46mmol)的THF(80ml)溶液中。将混合物在RT下搅拌18h，然后加入氰基硼氢化钠(1.16g，18.56mmol)的MeOH(20ml)溶液和冰乙酸(4.4ml，77.33mmol)。在RT下搅拌2h后，TLC分析表明原料完全消耗。将反应混合物用水稀释，加入浓NaHCO3水溶液调节至pH 8-9。用EtOAc萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，除去溶剂，得到粗反应产物。经过FCC纯化(EtOAc，然后EtOAc/MeOH 4∶1)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.26(t，J＝8.8Hz，3H)，2.28(s，6H)，3.62(s，3H)，4.18(q，J＝8.8Hz，2H)，4.32(s，3H)，7.48(d，J＝9.9Hz，1H)，7.52(d，J＝9.9Hz，1H)，7.73(d，J＝9.9Hz，1H)，7.80-7.84(m，2H)。ES+-MS：306.3，308.2[M+H]+。
(2-氯-7-甲酰基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制备
将(2-氯-7-氰基-萘-1-基)-乙酸乙酯(5.53g，20.20mmol)溶于水(70ml)、吡啶(130ml)与冰乙酸(70ml)的混合物。在RT下加入次磷酸钠(17.13g，161.62mmol)和阮内镍(13g)。将反应混合物加热至100℃达1h。TLC分析表明原料完全消耗。将反应混合物冷却至RT，通过硅藻土(Celite)过滤，在旋转蒸发器上浓缩。将残余物溶于2M HCl水溶液。用EtOAc萃取，除去溶剂，经过FCC纯化(己烷/EtOAc 5∶1)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.28(t，J＝8.8Hz，3H)，4.22(q，J＝8.8Hz，2H)，4.39(s，2H)，7.68(d，J＝9.9Hz，1H)，7.83(d，J＝9.9Hz，1H)，7.95-8.03(m，2H)，8.48(s，1H)，10.2(s，1H)。ES--MS：275.3，277.3[M+H]+。
(2-氯-7-氰基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制备
在氩气氛下，将(2-氯-7-三氟甲磺酰氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯(9.30g，23.43mmol)溶于DMF(80ml)。加入四(三苯膦)钯(0)(1.08g，0.9375mmol)和氰化锌(II)(5.50g，46.87mmol)。将反应混合物加热至125℃。1h后，TLC分析表明原料完全消耗。将悬液冷却至RT，倒在水上。搅拌15分钟后，过滤，浓缩，得到粗反应产物。经过FCC纯化(己烷/EtOAc 4∶1)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.26(t，J＝8.8Hz，3H)，4.19(q，J＝8.8Hz，2H)，4.28(s，2H)，7.62-7.66(m，2H)，7.79(d，J＝9.9Hz，1H)，7.92(d，J＝9.9Hz，1H)，8.32(s，1H)。ES+-MS：274.2[M+H]+。
(2-氯-7-三氟甲磺酰氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制备
在氩气氛下，将(2-氯-7-羟基-萘-1-基)-乙酸乙酯(8.03g，30.33mmol)溶于吡啶(60ml)。冷却至0℃后，在15分钟内滴加三氟甲磺酸酐(5.50ml，33.36mmol)。在0℃下搅拌15分钟，在RT下搅拌1h，TLC分析表明原料完全消耗。将反应混合物倒入1M NaHCO3水溶液中。用EtOAc萃取，用盐水洗涤，有机层经Na2SO4干燥，浓缩，得到粗反应产物。经过FCC纯化(己烷/EtOAc 4∶1)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.13(t，J＝9.4Hz，3H)，4.08(q，J＝9.4Hz，2H)，4.15(s，2H)，7.28-7.30(m，1H)，7.48(d，J＝11Hz，1H)，7.69(d，J＝11Hz，1H)，7.72(m，1H)，7.82(d，J＝11Hz，1H)。ES+-MS：414.2，416.0，397.1[M+H]+。
(2-氯-7-羟基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制备
在氩气氛下，将(2-氯-7-甲氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯(12.0g，43.10mmol)和四丁基碘化铵(20.7g，56.04mmol)溶于CH2Cl2(240ml)。将反应混合物冷却至-78℃，在30分钟内加入1M BBr3的CH2Cl2溶液(108ml，107.77mmol)。在-78℃下搅拌15分钟，在RT下搅拌1h，TLC分析表明原料完全消耗。小心地加入饱和NaHCO3水溶液(8ml)。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩。经过FCC纯化(己烷/EtOAc 4∶1至3∶2)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.51(t，J＝9.9Hz，3H)，4.43(q，J＝9.9Hz，2H)，4.48(s，2H)，6.28-6.36(br，1H)，7.29-7.32(m，1H)，7.48-7.49(m，1H)，7.58(d，J＝10Hz，1H)，7.89(d，J＝10Hz，1H)，7.96(d，J＝10Hz，1H)。ES+-MS：265.2，267.2[M+H]+。
(2-氯-7-甲氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制备
在氩气氛下，将[2-氯-7-甲氧基-3，4-二氢-2H-亚萘-(1E/Z)-基]-乙酸乙酯与(2-氯-7-甲氧基-3，4-二氢-萘-1-基)-乙酸乙酯的混合物(26.82g，95.52mmol)溶于二噁烷(280ml)。加入2，3-二氯-5，6-二氰基-对-苯醌(DDQ，47.70g，210.16mmol)，将反应混合物回流2h。TLC分析表明原料完全转化。冷却至RT后，加入MeOH使得反应混合物均匀。加入硅胶(250g)，借助旋转蒸发除去溶剂。经过FCC纯化(己烷/EtOAc 9∶1)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.24(t，J＝8.8Hz，3H)，3.95(s，3H)，4.19(q，J＝8.8Hz，2H)，4.28(s，2H)，7.16-7.19(m，1H)，7.22(s，1H)，7.38(d，J＝10Hz，1H)，7.68(d，J＝10Hz，1H)，7.75(d，J＝10Hz，1H)。ES+-MS：279.2，281.2[M+H]+。
(2-氯-7-甲氧基-3，4-二氢-萘-1-基)-乙酸乙酯的制备
在氩气氛下，将(2-氯-1-羟基-7-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-1-基)-乙酸乙酯(42.7g，142.9mmol)溶于吡啶(250ml)。在30分钟内加入三氟甲磺酸酐(30.7ml，185.8mmol)，同时偶尔用冰浴冷却，保持温度在25℃。加入完全后，将反应混合物升温至50℃达2h。TLC分析表明原料完全转化。小心地加入2M HCl水溶液(100ml)，然后在旋转蒸发器上浓缩反应混合物至干。将残余物溶于2M HCl水溶液(100ml)，用EtOAc萃取。有机层经Na2SO4干燥，浓缩。经过FCC纯化(EtOAc)，得到标题化合物。ES+-MS：281.2，283.2[M+H]+。
(2-氯-1-羟基-7-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-1-基)-乙酸乙酯的制备
在-78℃氩气氛下，将EtOAc(16.1ml，164.48mmol)的THF(250ml)溶液缓慢加入到二异丙氨基锂(从23.3ml二异丙胺(164.48mmol)和102.8ml1.6M n-BuLi的己烷溶液(164.48mmol)制备)的THF(250ml)溶液中。在-78℃下搅拌30分钟后，在30分钟内缓慢加入2-氯-7-甲氧基-3，4-二氢-2H-萘-1-酮(31.5g，149.53mmol)的THF(250ml)溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌1h。TLC分析表明原料完全转化。在-78℃下向反应混合物小心加入饱和NH4Cl水溶液(250ml)。将混合物升温至RT。分离有机层，用EtOAc稀释，用盐水洗涤。经Na2SO4干燥后，除去溶剂。经过FCC纯化(己烷/EtOAc 4∶1)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.27(t，J＝9.4Hz，3H)，2.32-2.48(m，2H)，2.78-2.88(m，1H)，2.86-3.02(m，2H)，3.05-3.14(m，1H)，3.82(s，3H)，4.18(q，J＝9.4Hz，2H)1，5.02-5.08(m，1H)，6.81-6.84(m，1H)，7.03(d，J＝10.5Hz，1H)，7.18-7.19(m，1H)。ES+-MS：281.3，283.3[M+H-H2O]+。
2-氯-7-甲氧基-3，4-二氢-2H-萘-1-酮的制备
在-78℃氩气氛下，将7-甲氧基-3，4-二氢-2H-萘-1-酮(25.6g，145.28mmol)的THF(300ml)溶液缓慢加入到二异丙氨基锂的THF溶液(300ml；从22.6ml二异丙胺(160mmol)和100ml 1.6M n-BuLi的己烷溶液(160mmol)制备)中。在-78℃下30分钟后，在20分钟内加入对-甲苯磺酰氯(30.5g，159.8mmol)的THF(300ml)溶液。除去干冰冷却浴，使反应混合物达到RT。1h后，TLC分析表明原料完全消耗。加入饱和NH4Cl水溶液(100ml)，将混合物在RT下搅拌15分钟。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩。经过FCC纯化(己烷/EtOAc 3∶1)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ2.32-2.52(m，2H)，2.82-2.90(m，2H)，3.10-3.18(m，2H)，3.78(s，1H)，4.52-4.58(m，1H)，7.01-7.05(m，1H)，7.11(d，J＝8.8Hz，1H)，7.47-7.48(m，1H)。ES+-MS：211.3，213.3[M+H]+。
遵照实施例1的步骤，但是使用适当的原料，可以得到式A化合物，其中Ra、Rb、Rc、Rd、R3和R4是如下表1所示的，Re是H。
表1
  R3   R4   Ra   Rb   Rc   Rd   MS
  2.   H   H   CH3   H   H   H   MH+417
  3.   H   CH3   H   H   H   H   MH+417
  4.   H   CH3   CH3   H   H   H   MH+431
Figure GSA00000083287600201
遵照实施例1的步骤，但是使用适当的原料，可以得到式B化合物，其中Rc、Rd和Re是H，Ra、Rb、R3和R4是如下表2所示的。
Figure GSA00000083287600202
表2
  R3   R4   Ra   Rb   MS
  18.   H   H   CH3   CH3   MH+410
  19.   H   H   H   CH3   MH+396
  20.   H   H   H   H   MH+382
  21.   H   H   CH3   H   MH+396
遵照实施例1的步骤，但是使用适当的原料，可以得到式B化合物，其中Rb、Rc、Rd和Re是H，Ra、R3和R4是如下表3所示的。
表3
  R3   R4   Ra   MS
  22.   H   H   H   MH+368
  23.   H   H   CH3   MH+382
遵照实施例1的步骤，但是使用适当的原料，可以得到式C化合物，其中Rb、Rc、Rd和Re是H，Ra、R3和R4是如下表4所示的。
Figure GSA00000083287600212
表4
  R3   R4   Ra   MS
  24.   H   H   CH3   MH+368
  25.   H   H   H   MH+354
遵照实施例1的步骤，但是使用适当的原料，可以得到式D化合物，其中Rb是如下表5所示的。
Figure GSA00000083287600213
表5
  Rb   MS
  26.   CH3   MH+428
  27.   H   MH+414
实施例28：3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮
Figure GSA00000083287600221
在氩气氛下，将2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酰胺(150mg，0.64mmol)和(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(209mg，0.96mmol)溶于无水DMF(2ml)与无水THF(2ml)的混合物。然后在RT下加入1.0MKOtBu的THF溶液(1.9ml，1.9mmol)。在50℃下1h后，TLC分析表明原料完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发有机溶剂。残余物经过FCC纯化(EtOAc/AcOH/H2O 600∶115∶150)，得到标题化合物。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)：δ2.15(s，3H)，2.28-2.32(m，2H)，2.92-3.00(m，2H)，3.15(s，3H)，6.21(d，J＝9Hz，1H)，6.64(t，J＝9Hz，1H)，6.88(d，J＝9Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.98(br s，1H)，8.20-8.22(m，1H)。ES+-MS：402.6[M+H]+。
2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酰胺的制备
在氩气氛下，将[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酸(1.57g，5.78mmol)和羰基二咪唑(1.03g，6.36mmol)溶于DMF(16ml)。在RT下搅拌1h后，加入NH4OH水溶液(25％，16ml)，继续在RT下搅拌15分钟。TLC分析表明原料完全消耗。将水性层用NaCl饱和，用CH2Cl2反复萃取。有机层经Na2SO4干燥，浓缩。经过FCC纯化(CH2Cl2∶MeOH 95∶5至90∶10至80∶20至70∶30至50∶50至25∶75至0∶100)，得到标题化合物。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)：δ2.76(s，3H)，3.12-3.42(m，8H)，3.34(s，2H)，6.86-6.96(br s，1H)，7.26(s，1H)，7.93(s，1H)，8.21(s，1H)。ES+-MS：235.4[M+H]+。
[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酸的制备
将[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酸叔丁基酯(1.68g，5.77mmol)溶于4M HCl的二噁烷溶液(28ml)。在60℃下1h后，TLC分析表明原料完全消耗。将反应混合物冷却至RT，用Et2O稀释。将沉淀过滤，用Et2O洗涤，得到标题化合物，无需进一步纯化即可用于下一反应。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)：δ2.79(s，3H)，3.05-4.10(br m，8H)，3.81(s，2H)，8.04(s，1H)，8.22(s，1H)，8.45(s，1H)。ES+-MS：236.4[M+H]+。
2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酰胺[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酸叔丁基酯的制备
将磷酸钾(4.08g，19.21mmol)在100℃高真空下干燥90分钟。冷却至RT，放入氩后，加入Pd2(dba)3(70mg，0.077mmol)、二环己基-(2′，4′，6′-三异丙基-联苯-2-基)-膦(183mg，0.38mmol)、甲苯/叔丁醇的脱气混合物(9∶1，20ml)和N-甲基哌嗪(1.15g，11.53mmol)。将反应混合物浸在预加热的油浴(100℃)中。在100℃下2h后，加入另外的Pd2(dba)3(70mg，0.077mmol)和二环己基-(2′，4′，6′-三异丙基-联苯-2-基)-膦(183mg，0.38mmol)。在100℃下另外2h后，TLC分析表明原料完全转化。将反应混合物冷却至RT，用水稀释，用CH2Cl2萃取。合并有机层，经Na2SO4干燥，浓缩。经过FCC纯化(CH2Cl2∶MeOH 95∶5至92∶8至88∶12至80∶20)，得到标题化合物。1HNMR(CDCl3，400MHz)：δ1.57(s，9H)，2.48(s，3H)，2.68-2.72(m，4H)，3.35-3.40(m，4H)，3.60(s，2H)，7.24-7.27(m，1H)，8.10(br s，1H)，8.32-8.33(m，1H)。ES+-MS：292.4[M+H]+。
(5-氯-吡啶-3-基)-乙酸叔丁基酯的制备
在RT氩气氛下，将Pd2(dba)3(928mg，1.01mmol)和(2′-二环己基膦烷基-联苯-2-基)-二甲基-胺(838mg，2.13mmol)加入到六甲基二甲硅烷基氨基锂的甲苯溶液(在-78℃下，向六甲基二甲硅烷基胺(6.27g，38.85mmol)的甲苯(100ml)溶液加入n-BuLi(1.6M己烷溶液，24.3ml，38.85mmol)进行制备)。将混合物在RT下搅拌10分钟，然后冷却至-10℃。在10分钟内加入乙酸叔丁酯(4.12g，35.48mmol)。将该混合物经由套管加入到冷(-10℃)的1，3-二氯吡啶(5.00g，33.79mmol)的甲苯(40ml)溶液中。将混合物升温至RT，搅拌2h。TLC分析表明原料基本转化。加入水，过滤所得浆液，滤液用EtOAc萃取。合并有机层，经Na2SO4干燥，浓缩。经过FCC纯化(己烷/EtOAc 100∶0至92∶8至85∶15)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.39(s，9H)，3.47(s，2H)，7.58-7.60(m，1H)，8.31(s，1H)，8.41-8.42(m，1H)。ES+-MS：228.3[M+H]+。
实施例29：3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[2-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮
Figure GSA00000083287600241
在0℃氩气氛下，向2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-吡啶-3-基]-乙酰胺(96mg，0.34mmol)与(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(127mg，0.58mmol)的无水THF(8.0ml)溶液加入1.0M KOtBu的THF溶液(1.7ml，1.7mmol)。在0℃下搅拌2h后，TLC分析表明原料完全消耗。将反应混合物用EtOAc稀释，用盐水洗涤。水相用EtOAc萃取，合并有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩。残余物经过FCC纯化(EtOAc/AcOH/H2O 6∶1∶1)，得到标题化合物，为橙色粉末。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)：δ2.05(s，3H)，2.04-2.11(m，4H)，2.46(s，3H)，3.06-3.14(m，4H)，6.35(d，J＝8.1Hz，1H)，6.65(dd，J＝8.1，7.2Hz，1H)，6.84(d，J＝7.2Hz，1H)，6.87(d，J＝2.0Hz，1H)，7.95(s，1H)，8.16(d，J＝2.0Hz，1H)。ES+-MS：447[M+H]+。
2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-吡啶-3-基]-乙酰胺的制备
将[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-吡啶-3-基]-乙酸甲酯(222mg，0.75mmol)的33％NH4OH(100ml)水溶液在50℃密封高压釜中搅拌16h。TLC分析表明原料完全消耗。在减压下蒸发溶剂，得到标题化合物，为黄色固体，为与对应羧酸的3∶2混合物。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)：δ2.18(s，3H)，2.36-2.44(m，4H)，3.36-3.44(m，4H)，3.77(s，2H)，6.92(bs，1H)，7.34(d，J＝2Hz，1H)，7.44(bs，1H)，8.07(d，J＝2Hz，1H)。ES+-MS：280.4[M+H]+。
[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-吡啶-3-基]-乙酸甲酯的制备
将(5-溴-2-硝基-吡啶-3-基)-乙酸甲酯(472mg，1.72mmol)与N-甲基哌嗪(344mg，3.44mmol)的混合物在氩气氛下加热18h。TLC分析表明原料完全消耗。将反应混合物冷却至RT，用水稀释，用饱和NaHCO3水溶液调节至pH 8-9。水相用二氯甲烷萃取三次，合并有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩。粗产物经过FCC纯化(二氯甲烷/MeOH 95∶5至90∶10)，得到标题化合物，为黄色固体。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)：δ2.01(s，3H)，2.22-2.26(m，4H)，3.24-3.28(m，4H)，3.40(s，3H)，3.81(s，2H)，7.26(d，J＝2Hz，1H)，7.97(d，J＝2Hz，1H)。ES+-MS：295.3[M+H]+。
(5-溴-2-硝基-吡啶-3-基)-乙酸甲酯的制备
在-78℃下，向5-溴-2-硝基-吡啶(2.33g，11.5mmol)与三甲基甲硅烷基-乙酸甲酯(1.8g，12.0mmol)的THF(12ml)悬液加入在70℃高真空下干燥TBAF x 3H2O(7.5g)达18h所得干燥的TBAF(3.0g，11.5mmol)在乙腈(6ml)与THF(6ml)混合物中的溶液。将所得深红色溶液在-40℃下搅拌1h。TLC分析表明原料完全消耗。将反应混合物冷却至-78℃，小心地加入DDQ(2.6g，11.5mmol)。将黑色溶液缓慢升温至RT。由于TLC分析表明没有发生进一步的变化，使反应混合物在EtOAc与饱和NH4Cl水溶液之间分配。分离各层，将有机层用饱和NH4Cl水溶液、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩。粗产物经过FCC纯化(环己烷/EtOAc 9∶1至8∶1)，得到标题化合物，为黄色针晶。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ3.94(s，3H)，4.17(s，2H)，8.20(s，1H)，8.78(s，1H)。
遵照实施例28和29的步骤，但是使用适当的原料，可以得到式E化合物，其中Ra、Rb和R2是如下表6所示的。
表6
  R2   Ra   Rb   MS
  30   H   CH3   H   MH+402
  31   H   H   H   MH+388
  32   CF3   H   CH3   MH+470
  33   CF3   H   H   MH+456
  34   CF3   CH3   H   MH+470
  35   H   H   CH3   MH+402
  36   NO2   H   H   MH+433
  37   Cl   H   CH3   MH+437
实施例38：3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮
Figure GSA00000083287600262
将2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺(34mg，0.15mmol)与(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(47mg，0.22mmol)的混合物溶于无水THF(3ml)，蒸发，进行共沸干燥。在氩气氛下，将混合物溶于无水THF(1ml)，在RT下滴加1.0M KOtBu的THF溶液(0.44ml，0.44mmol)。在RT下5分钟后，TLC分析表明原料完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发有机层。残余物经过FCC(CH2Cl2/MeOH 95∶5至90∶10至85∶15)和制备型HPLC纯化(H2O/MeCN/TFA 95∶5∶0.1)，得到标题化合物，为红色TFA盐。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ2.48(s，3H)，2.78(s，3H)，2.78-3.02(m，4H)，3.39(d，J＝12Hz，2H)，4.14(d，J＝13Hz，2H)，6.24(d，J＝9Hz，1H)，6.71(d，J＝6Hz，1H)，8.03(d，J＝3Hz，1H)，8.10(d，J＝6Hz，1H)，9.71(s，宽峰，1H)，11.19(s，1H)，12.09(d，J＝3Hz，1H)。ES+-MS：402.5[M+H]+，ES--MS：400.3[M-H]-。
2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺的制备
将[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸叔丁基酯(95mg，0.33mmol)溶于TFA与CH2Cl2的混合物(5ml/5ml)，在RT下搅拌。在RT下1h后，TLC分析表明原料完全转化。借助旋转蒸发除去溶剂，用无水DMF(1.5ml)代替。在氩气氛下，加入羰基二咪唑(58mg，0.36mmol)。在RT下20分钟后，TLC分析表明羧酸完全转化。在RT下加入氨水溶液(25％，6ml)。在RT下15分钟后，在高真空下除去溶剂。将残余物溶于CH2Cl2/MeOH(9∶1)，经过FCC纯化(CH2Cl2/MeOH，从95∶5至40∶60的缓慢梯度)，得到标题化合物。1H NMR(d4-MeOD，400MHz)：δ2.35(s，3H)，2.56(m，4H)，3.46(s，2H)，3.54(m，4H)，6.66(d，J＝6Hz，1H)，6.78(s，1H)，8.02(d，J＝6Hz，1H)。ES+-MS：235.3[M+H]+。
[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸叔丁基酯的制备
将磷酸钾(2.65g，12.47mmol)在120℃高真空下干燥45分钟。冷却至RT，放入干燥氩气后，加入二亚苄基丙酮钯(Pd2(dba)3，25mg，0.03mmol)和二-叔丁膦基五苯基二茂铁(39mg，0.06mmol)。加入(2-氯-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯(631mg，2.77mmol)的1，2-二甲氧基乙烷(14ml，穿过碱性氧化铝柱干燥)溶液和1-甲基哌嗪(830mg，8.31mmol)。将反应混合物升温至40℃达1h。加入另外的Pd2(dba)3(25mg，0.03mmol)和膦配体(39mg，0.06mmol)，继续在60℃下搅拌2h。加入另外的Pd2(dba)3(25mg，0.03mmol)和膦配体(39mg，0.06mmol)，继续在90℃下搅拌18h，在RT下搅拌72h。TLC和MS分析表明有所需产物存在。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NaCl水溶液中。分离有机层，经Na2SO4干燥，蒸发溶剂。残余物经过FCC纯化(己烷/EtOAc，从95∶5至90∶10的梯度)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：
Figure GSA00000083287600281
1.44(s，9H)，2.34(s，3H)，2.52(m，4H)，3.42(s，2H)，3.55(m，4H)，6.55(d，J＝4Hz，1H)，6.56(s，1H)，8.11(d，J＝4Hz，1H)。ES+-MS：292.4[M+H]+。
(2-氯-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯的制备
在氩气氛下，将六甲基二甲硅烷基胺(5.45g，33.8mmol)溶于无水甲苯(80ml)。用氩充分净化溶剂后，将溶液冷却至-78℃，加入n-BuLi(21.1ml1.6M己烷溶液，33.8mmol)。将混合物在-78℃下搅拌15分钟，在RT下搅拌15分钟，由此得到澄清的溶液。加入二亚苄基丙酮钯(Pd2(dba)3，743mg，0.81mmol)和(2′-二环己基膦烷基-联苯-2-基)-二甲基-胺(670mg，1.70mmol)。将混合物在RT下搅拌10分钟，然后冷却至-10℃。缓慢加入纯乙酸叔丁酯(3.61g，31.08mmol)。在-10℃下10分钟后，一次性加入2，4-二氯吡啶(4.00g，27.03mmol)。将反应混合物升温至RT。1h后，TLC分析表明原料完全消耗。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发溶剂。残余物经过FCC纯化(己烷/EtOAc，从97∶3至90∶10的梯度)，得到标题化合物。1HNMR(CDCl3，400MHz)：
Figure GSA00000083287600282
1.44(s，9H)，3.51(s，2H)，7.15(dd，J＝1Hz，4Hz，1H)，7.27(d，J＝1Hz，1H)，8.32(d，J＝4Hz)。ES+-MS：228.2，230.1(Cl)[M+H]+。
实施例39：3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮
将2-[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺(30mg，0.12mmol)与(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(39mg，0.18mmol)的混合物溶于无水THF(3ml)，蒸发，进行共沸干燥。在氩气氛下，将混合物溶于无水THF(1ml)，在RT下滴加1.0M KOtBu的THF溶液(0.36ml，0.36mmol)。在RT下10分钟后，TLC分析表明原料完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发有机层。残余物经过制备型HPLC纯化(H2O/MeCN/TFA 95∶5∶0.1)，得到标题化合物，为红色TFA盐。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ1.79(s，3H)，2.44(s，3H)，2.79(d，J＝3Hz，3H)，2.75-3.07(m，2H)，3.44(s，宽峰，2H)，4.25(s，宽峰，2H)，6.30(d，J＝8Hz，1H)，6.64(dd，J＝8Hz，8Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.88(d，J＝8Hz，1H)，8.00(d，J＝2Hz，1H)，8.04(s，1H)，9.70(s，宽峰，1H)，11.16(s，1H)，12.04(d，J＝2Hz，1H)。19F NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ-74.542。ES+-MS：416.4[M+H]+，ES--MS：414.4[M-H]-。
2-[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺的制备
将[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸叔丁基酯(320mg，1.05mmol)溶于TFA与CH2Cl2的混合物(10ml/10ml)，在RT下搅拌。在RT下1h后，TLC分析表明原料完全转化。借助旋转蒸发除去溶剂，用无水DMF(1.5ml)代替。在氩气氛下，加入羰基二咪唑(187mg，1.16mmol)。在RT下30分钟后，TLC分析表明羧酸完全转化。在RT下加入氨水溶液(25％，16ml)。在RT下15分钟后，在高真空下除去溶剂。将残余物溶于CH2Cl2/MeOH(9∶1)，经过FCC纯化(CH2Cl2/MeOH，从95∶5至40∶60的缓慢梯度)，得到标题化合物。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ2.07(s，3H)，2.38(s，3H)，2.64(s，宽峰，4H)，3.34(s，2H)，3.46(s，宽峰，4H)，6.72(s，1H)，6.95(s，宽峰，1H)，7.44(s，宽峰，1H)，7.87(s，1H)。ES+-MS：249.3[M+H]+，ES--MS：247.3[M-H]-。
[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸叔丁基酯的制备
在大约80℃高真空下干燥叔丁醇钠(227mg，2.37mmol)。用氩净化，冷却至RT，加入乙酸钯(39mg，0.17mmol)、外-2，2′-双-二苯基膦烷基-[1，1′]联萘(rac-BINAP，54mg，0.09mmol)和(2-氯-5-甲基-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯(520mg，2.15mmol)。将混合物溶于二噁烷(7ml，在HV/氩下用三个冷冻-融化循环脱气)，加入1-甲基-哌嗪(237mg，2.37mmol)。将含有反应混合物的圆底烧瓶浸在预加热的油浴(T＝85℃)中。30分钟后，TLC分析表明原料几乎完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发溶剂。残余物经过FCC纯化(CH2Cl2/MeOH，从98∶2至90∶10的缓慢梯度)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.43(s，9H)，2.14(s，3H)，2.34(s，3H)，2.51(m，4H)，3.44(s，2H)，3.49(m，4H)，6.51(s，1H)，7.96(s，1H)。ES+-MS：306.4[M+H]+。
(2-氯-5-甲基-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯的制备
在氩气氛下，将六甲基二甲硅烷基胺(1.33g，8.23mmol)溶于无水甲苯(15ml)。用氩充分净化溶剂后，将溶液冷却至-78℃，加入n-BuLi(5.1ml1.6M己烷溶液，8.23mmol)。将混合物在-78℃下搅拌15分钟，在RT下搅拌15分钟，由此得到澄清的溶液。加入二亚苄基丙酮钯(Pd2(dba)3，151mg，0.16mmol)和(2′-二环己基膦烷基-联苯-2-基)-二甲基-胺(136mg，0.35mmol)。将混合物在RT下搅拌10分钟，然后冷却至-10℃。缓慢加入净的乙酸叔丁酯(924mg，7.96mmol)。在-10℃下10分钟后，一次性加入2，4-二氯-5-甲基-吡啶(889mg，5.49mmol)。将反应混合物升温至RT。1h后，TLC分析表明原料完全消耗。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发溶剂。残余物经过FCC纯化(己烷/EtOAc，从100∶0至90∶10的梯度)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.45(s，9H)，2.26(s，3H)，3.52(s，2H)，7.18(s，1H)，8.18(s，1H)。ES+-MS：242.2，244.2(Cl)[M+H]+。
2，4-二氯-5-甲基-吡啶的制备
将2，4-二氯-5-氯甲基-吡啶(1.43g，7.28mmol)溶于乙醇(14ml)。加入三乙胺(737mg，7.28mmol)后，加入阮内镍(143mg)。向反应容器连接充有H2的气囊。在RT下非常剧烈地机械搅拌3小时后，反应试样的NMR分析表明原料完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入水中，水层用EtOAc萃取三次。合并有机层，经Na2SO4干燥。小心除去溶剂，得到标题化合物，其纯度足够适合于进一步使用。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ2.33(s，3H)，7.35(s，1H)，8.23(s，1H)。ES+-MS：160，162，164(2Cl)[M+H]+。
2，4-二氯-5-氯甲基-吡啶的制备
在氩气氛下，将(4，6-二氯-吡啶-3-基)-甲醇(2.21g，12.41mmol)冷却至0℃。小心地加入亚硫酰氯(8ml)。在0℃下5分钟后，将溶液加热至回流。10分钟后，TLC分析表明原料完全转化。冷却至RT后，经由膜泵除去过量亚硫酰氯。将剩余的油溶于EtOAc。将溶液倒入浓NaHCO3水溶液中。分离有机层，用浓NaCl水溶液洗涤两次。经Na2SO4干燥后，除去有机溶剂，得到标题化合物，其浓度适合于立即进一步使用。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ4.65(s，2H)，7.42(s，1H)，8.44(s，1H)。ES+-MS：195，197，199(3Cl)[M+H]+。
(4，6-二氯-吡啶-3-基)-甲醇的制备
将4，6-二氯-烟酸乙酯(5.0g，22.72mmol)溶于二噁烷(30ml)。加入氢氧化锂(599mg，24.99mmol)的水(20ml)溶液，将混合物在RT下搅拌。30分钟后，TLC分析表明原料完全转化。除去溶剂，在高真空下充分干燥后，残余4，6-二氯-烟酸的锂盐直接用于下一步。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ7.54(s，1H)，8.34(s，1H)。ES--MS：190.1，192.1，194.1(2Cl)[M-H]-。
在氩气氛下，将4，6-二氯-烟酸的锂盐(4.5g，22.72mmol)悬浮在亚硫酰氯(28ml)中。在超声浴中匀浆混合物后，将反应混合物加热至回流达2.5h，然后TLC分析表明原料完全消耗。将溶液冷却至RT，利用膜泵除去过量亚硫酰氯。将固体残余物冷却至0℃，非常小心地加入硼氢化钠(3.10g，81.85mmol)的水(35ml)溶液。在RT下1h后，TLC分析表明完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，水性层用NaCl饱和。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，除去溶剂。经过FCC纯化(己烷∶EtOAc，从9∶1至7∶3的梯度)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ2.00(t，J＝6Hz，1H)，4.81(d，J＝6Hz，2H)，7.38(s，1H)，8.47(s，1H)。ES+-MS：178.1，180.1，181.9(2Cl)[M+H]+。
遵照实施例39的步骤，但是使用适当的原料，可以得到式F化合物，其中Rc、Rd、Re是H，Ra和Rb是如下表7所示的。
Figure GSA00000083287600321
表7
  Ra   Rb   MS
  40   H   H   MH+402
实施例41：3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮
Figure GSA00000083287600322
将2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-乙酰胺(50mg，0.18mmol)与(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(60mg，0.27mmol)的混合物溶于无水THF(10ml)，蒸发，进行共沸干燥。在氩气氛下，将混合物溶于无水THF(3ml)，在RT下滴加1.0M KOtBu的THF溶液(0.54ml，0.54mmol)。在RT下10分钟后，TLC分析表明原料完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发有机层。残余物经过制备型HPLC纯化(H2O/MeCN/TFA 95∶5∶0.1)，得到标题化合物，为红色TFA盐。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ2.48(s，3H)，2.70(s，3H)，3.00-3.22(s，宽峰，1H)，4.05-4.43(s，宽峰，4H)，6.44(d，J＝8Hz，1H)，6.64(s，1H)，6.76(dd，J＝8Hz，8Hz，1H)，6.92(d，J＝8Hz，1H)，8.05(d，J＝2Hz，1H)，9.07(s，1H)，9.80(s，宽峰，1H)，11.30(s，1H)，12.10(d，J＝2Hz，1H)。19F NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ-73.959。ES+-MS：447.3[M+H]+，ES--MS：445.3[M-H]-。
2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-乙酰胺的制备
将[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-乙酸乙酯(250mg，0.81mmol)溶于甲醇(2.5ml)。加入氨水溶液(25％，2.5ml)，将混合物升温至40℃达18h。TLC分析表明原料完全转化。除去溶剂，残余物经过FCC纯化(CH2Cl2/MeOH，从97∶3至90∶10的梯度)，得到标题化合物。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ2.21(s，3H)，2.38(m，4H)，3.72(m，4H)，3.80(s，2H)，6.84(s，1H)，6.93(s，宽峰，1H)，7.46(s，宽峰，1H)，8.85(s，1H)。ES+-MS：280.3[M+H]+，ES--MS：278.3[M-H]-。
[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-乙酸乙酯的制备
将磷酸钾(2.48g，11.67mmol)在120℃高真空下干燥45分钟。冷却至RT，放入干燥氩后，加入二亚苄基丙酮钯(Pd2(dba)3，24mg，0.026mmol)和二-叔丁膦基五苯基二茂铁(37mg，0.052mmol)。加入(2-溴-5-硝基-吡啶-4-基)-乙酸乙酯(750mg，2.59mmol)的1，2-二甲氧基乙烷(10ml，穿过碱性氧化铝柱干燥)溶液和1-甲基哌嗪(780mg，7.78mmol)。将反应混合物在RT下搅拌10分钟，此后TLC和MS分析表明原料完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NaCl水溶液中。分离有机层，经Na2SO4干燥，蒸发溶剂。残余物经过FCC纯化(己烷/EtOAc，从95∶5至90∶10的梯度)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.26(t，J＝7Hz，3H)，2.35(s，3H)，2.50(m，4H)，3.76(m，4H)，3.94(s，2H)，4.18(q，J＝7Hz，2H)，6.36(s，1H)，9.05(s，1H)。ES+-MS：309.3[M+H]+，ES--MS：307.3[M-H]-。
(2-溴-5-硝基-吡啶-4-基)-乙酸乙酯的制备
在氩气氛下，将2-溴-5-硝基吡啶(1.84g，9.06mmol)和三甲基硅烷基-乙酸乙酯(1.53g，9.52mmol)溶于无水THF(10ml)。冷却至-78℃后，缓慢加入四丁基氟化铵(TBAF，2.37g，真空干燥过夜)在THF与乙腈混合物(10ml/10ml)中的溶液，以便反应温度不升至-65℃以上。完全加入后，将混合物在-40℃下搅拌30分钟，在-20℃下搅拌10分钟。将反应混合物重新冷却至-78℃，加入2，3-二氯-5，6-二氰基-对-苯醌(benzochinone)(DDQ，2.06g，9.06mmol)。将悬液升温至RT。TLC分析表明完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发溶剂。残余物经过FCC纯化(甲苯/EtOAc 100∶0至97∶3)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.26(t，J＝7Hz，3H)，4.01(s，2H)，4.19(q，J＝7Hz，2H)，7.53(s，1H)，9.06(s，1H)。ES--MS：287，289[M-H]-。
遵照实施例41的步骤，但是使用适当的原料，可以得到式G化合物，其中Ra和Rb是如下表8所示的。
Figure GSA00000083287600341
表8
  Ra   Rb   MS
  42   H   H   MH+433
实施例43：3-[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮
Figure GSA00000083287600342
将2-[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺(90mg，0.18mmol)与(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(109mg，0.50mmol)的混合物溶于无水THF(10ml)，蒸发，进行共沸干燥。在氩气氛下，将混合物溶于无水THF(3ml)，在RT下滴加1.0M KOtBu的THF溶液(1.0ml，1.0mmol)。在RT下10分钟后，TLC分析表明原料完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发有机层。残余物经过制备型HPLC纯化(H2O/MeCN/TFA95∶5∶0.1)，得到标题化合物，为红色TFA盐。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ2.45(s，3H)，2.78(s，3H)，2.82-3.13(m，4H)，4.27(m，2H)，6.40(d，J＝8Hz，1H)，6.70(dd，J＝7Hz，8Hz，1H)，6.90(d，J＝7Hz，1H)，7.00(s，1H)，8.03(d，J＝2Hz，1H)，8.26(s，1H)，9.74(s，宽峰，1H)，11.27(s，1H)，12.1(d，J＝2Hz，1H)。ES+-MS：436.3[M+H]+，ES--MS：434.3[M-H]-。
2-[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺的制备
在氩气氛下，将[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸乙酯(385mg，1.29mmol)溶于无水DMF(4ml)。加入甲酰胺(195mg，4.33mmol)，将混合物加热至105℃。在该温度下，滴加甲醇钠(5.4M MeOH溶液，0.24ml，1.29mmol)。20分钟后，TLC分析表明不完全转化，因而加入另外的甲醇钠(0.08ml 5.4M MeOH溶液)。另外10分钟后，根据TLC判断反应完全。将反应混合物冷却至RT，用CHc2l2(150ml)稀释。加入水(3ml)直至得到澄清的溶液。加入充足的Na2SO4以吸收水，蒸发有机溶剂。残余物经过FCC纯化(CH2Cl2/MeOH 95∶5至80∶20)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ2.35(s，3H)，2.51(m，4H)，3.56(m，4H)，3.62(s，2H)，5.37(s，宽峰，1H)，5.54(s，宽峰，1H)，6.64(s，1H)，8.15(s，1H)。ES+-MS：269.2，271.1(Cl)[M+H]+，ES--MS：267.2，269.3(Cl)[M-H]-。
[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸乙酯的制备
在氩气氛下，将[5-氨基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸乙酯(680mg，2.44mmol)溶于18％盐酸水溶液(12ml)。冷却该溶液至0℃后，历经15分钟加入亚硝酸钠(244mg，3.54mmol)的水(6ml)溶液，注意内部温度不升至5℃以上。在0℃下20分钟后，将反应混合物加入到-10℃的氯化铜(I)(新鲜制备，725mg，7.33mmol)的水(1.8ml)溶液中。在-10℃下15分钟后，TLC分析表明完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NaCl水溶液中。分离有机层，经Na2SO4干燥，浓缩。残余物经过FCC纯化(CH2Cl2/MeOH，从98∶2至90∶10的梯度)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.27(t，J＝7Hz，3H)，2.34(s，3H)，2.50(m，4H)，3.52(m，4H)，3.66(s，2H)，4.19(q，J＝7Hz，2H)，6.59(s，1H)，8.11(s，1H)。ES+-MS：298.2，300.1(Cl)[M+H]+，ES--MS：296.2，298.2(Cl)[M-H]-。
[5-氨基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸乙酯的制备
将[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-乙酸乙酯(2.78g，9.02mmol)溶于MeOH(28ml)。加入披钯碳(10％，96mg，0.90mmol)，向反应烧瓶连接充有氢的气囊。剧烈搅拌2.5h后，TLC分析表明完全转化。将反应混合物过滤，除去有机溶剂，残余物经过FCC纯化(CH2Cl2/MeOH，从97∶3至70∶30的梯度)，得到[5-氨基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸乙酯。1HNMR(CDCl3，400MHz)：δ1.27(t，J＝7Hz，3H)，2.35(s，3H)，2.54(m，4H)，3.40(m，4H)，3.55(s，2H)，3.62(s，宽峰，2H)，4.16(q，J＝7Hz，2H)，6.50(s，1H)，7.79(s，1H)。ES+-MS：279.3[M+H]+。
遵照实施例43的步骤，但是使用适当的原料，可以得到式H化合物，其中Ra和Rb是如下表9所示的。
Figure GSA00000083287600361
表9
  Ra   Rb   MS
  44   H   H   MH+422，423
实施例45：3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮
Figure GSA00000083287600371
将2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-乙酰胺(80mg，0.26mmol)与(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(86mg，0.40mmol)的混合物溶于无水THF(10ml)，蒸发，进行共沸干燥。在氩气氛下，将混合物溶于无水THF(3ml)，在RT下滴加1.0M KOtBu的THF(1.05ml，1.05mmol)溶液。在RT下45分钟后，TLC分析表明原料完全转化。将反应混合物用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发有机层。残余物经过制备型HPLC纯化(H2O/MeCN/TFA 95∶5∶0.1)，得到标题化合物，为红色TFA盐。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ2.44(s，3H)，2.78(s，3H)，2.74-3.54(m，宽峰，6H)，4.34-4.58(m，宽峰，2H)，6.62(d，J＝8Hz，1H)，6.74(dd，J＝7Hz，8Hz，1H)，6.90(d，J＝7Hz，1H)，7.03(s，1H)，7.96(d，J＝3Hz，1H)，8.58(s，1H)，9.84(s，宽峰，1H)，11.27(s，1H)，12.01(d，J＝3Hz，1H)。19F NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ-74.00，-57.33。ES+-MS：470.3[M+H]+。
2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-乙酰胺的制备
将[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-乙酸叔丁基酯(475mg，1.32mmol)溶于TFA与CH2Cl2的混合物(10ml/10ml)，在RT下搅拌。在RT下1.5h后，TLC分析表明原料完全转化。借助旋转蒸发除去溶剂，用无水DMF(5ml)代替。在氩气氛下，加入羰基二咪唑(236mg，1.46mmol)。在RT下3h后，TLC分析表明羧酸完全转化。在RT下加入氨水溶液(25％，20ml)。在RT下15分钟后，在高真空下除去溶剂。将残余物溶于CH2Cl2/MeOH(9∶1)，经过FCC纯化(CH2Cl2/MeOH，从90∶10至40∶60的缓慢梯度)，得到标题化合物。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ2.69(s，3H)，2.93-3.18(m，宽峰，4H)，3.54(s，2H)，3.59-3.98(m，宽峰，4H)，6.95(s，1H)，7.02(s，宽峰，1H)，7.47(s，宽峰，1H)，8.45(s，1H)。ES+-MS：303.2[M+H]+。
[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-乙酸叔丁基酯的制备
在大约80℃高真空下干燥叔丁醇钠(354mg，3.68mmol)。用氩净化，冷却至RT，加入乙酸钯(60mg，0.27mmol)、外-2，2′-双-二苯基膦烷基-[1，1′]联萘(rac-BINAP，83mg，0.13mmol)和(2-氯-5-三氟甲基-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯(990mg，3.35mmol)。将混合物溶于二噁烷(11ml，在HV/氩下用三个冷冻-融化循环脱气)，加入1-甲基-哌嗪(369mg，3.68mmol)。将含有反应混合物的圆底烧瓶浸在预加热的油浴(T＝85℃)中。1h后，TLC分析表明原料几乎完全转化。将反应混合物冷却至RT，用EtOAc稀释，倒入饱和NH4Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发溶剂。残余物经过FCC纯化(CH2Cl2/MeOH，从99∶1至94∶6的缓慢梯度)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.44(s，9H)，2.34(s，3H)，2.50(m，4H)，3.59(s，2H)，3.66(m，4H)，6.54(s，1H)，8.35(s，1H)。ES+-MS：360.3[M+H]+。
(2-氯-5-三氟甲基-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯的制备
在干燥氩气氛下，将二亚苄基丙酮钯(Pd2(dba)3，22mg，0.02mmol)、二-叔丁膦基五苯基二茂铁(17mg，0.02mmol)、2-氯-4-碘-5-三氟甲基-吡啶(1.50g，4.88mmol)与从溴乙酸叔丁酯和活化锌金属制备的雷佛马茨基试剂(1.40g，5.37mmol)的混合物悬浮在无水和经过脱气的THF(20ml)中。将混合物加热至60℃。在45分钟和90分钟后，加入另外的二亚苄基丙酮钯(Pd2(dba)3，22mg，0.02mmol)、二-叔丁膦基五苯基二茂铁(17mg，0.02mmol)和雷佛马茨基试剂(1.40g，5.37mmol)。在60℃下总计2.5h后，TLC分析表明原料完全转化。冷却至RT后，将反应混合物用等量EtOAc与H2O稀释，通过紧密的棉塞过滤。分离有机层，用盐水洗涤两次，经Na2SO4干燥，蒸发溶剂。残余物经过FCC纯化(己烷/EtOAc，从100∶0至97∶3梯度)，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.44(s，9H)，3.71(s，2H)，7.39(s，1H)，8.63(s，1H)。ES+-MS：294.1，296.2(Cl)[M+H]+。
遵照实施例45的步骤，但是使用适当的原料，可以得到式I化合物，其中Ra和Rb是如下表10所示的。
Figure GSA00000083287600391
表10
  Ra   Rb   MS
  46   H   H   MH+456
实施例47：
Figure GSA00000083287600392
6976
Figure GSA00000083287600393
按照上述，本发明进一步提供：
1.1PKC抑制剂，它具备就PKC的α和β以及任选地θ同工型相对于一种或多种其他PKC同工型而言的选择性，例如相对于一种或多种同工型δ、ε和/或η而言的选择性，并且具备就PKC相对于一种或多种不属于CDK家族的蛋白激酶而言的选择性，例如相对于一种或多种酪氨酸激酶，例如相对于一种或多种PKA、PKB、Abl、Met、Src、Ins-R、Flt-3、JAK-2、KDR和Ret蛋白，例如相对于一种或多种Flt-3、JAK-2、KDR或Ret蛋白而言的选择性，所述抑制剂为游离形式或药学上可接受的盐形式。该化合物优选地显示就α和βPKC相对于一种或多种其他PKC同工型而言至少10倍、更优选20倍、最优选100倍的选择性。该化合物优选地显示就PKC相对于其他蛋白激酶而言至少10倍、更优选20倍、最优选100倍的选择性。
1.2PKC抑制剂，它具备就PKC的α和β以及任选地θ同工型相对于一种或多种其他PKC同工型而言的选择性，例如相对于一种或多种同工型δ、ε和/或η而言的选择性，根据MLR测定法所测定的IC50值与根据BM测定法所测定的IC50值之比高于5、10、20、30或50，所述抑制剂为游离形式或药学上可接受的盐形式。优选地，该比例高于20或30。优选地，MLR和BM测定法是如上所定义进行的。
1.3PKC抑制剂，它具备就α、β和θPKC同工型相对于一种或多种其他PKC同工型而言的选择性，例如相对于一种或多种PKC同工型δ、ε和/或η而言的选择性，所述抑制剂为游离形式或药学上可接受的盐形式。该化合物也可以具备就PKC相对于其他蛋白激酶而言的选择性，例如相对于不属于CDK家族的蛋白激酶，例如相对于一种或多种酪氨酸激酶而言的选择性。该化合物优选地显示就PKC相对于不属于CDK家族的蛋白激酶而言的选择性。
2.1PKC抑制剂的用途，该抑制剂是就PKC的α和β以及任选地θ同工型相对于一种或多种其他PKC同工型而言选择性的，例如相对于一种或多种同工型δ、ε和/或η而言选择性的，所述抑制剂为游离形式或药学上可接受的盐形式，用于预防或治疗由T淋巴细胞和/或PKC介导的障碍或疾病，或者预防、抑制或控制急性或慢性移植排斥或移植物抗宿主疾病，预防或治疗自身免疫病或障碍、炎性疾病、感染性疾病、心血管疾病或癌症。
2.2PKC抑制剂的用途，该抑制剂根据MLR测定法所测定的IC50值与根据BM测定法所测定的IC50值之比高于5、10、20、30或50，例如高于20或30，所述抑制剂为游离形式或药学上可接受的盐形式，用于预防或治疗由T淋巴细胞和/或PKC介导的障碍或疾病，或者预防、抑制或控制急性或慢性移植排斥或移植物抗宿主疾病，预防或治疗自身免疫病或障碍、炎性疾病、感染性疾病、心血管疾病或癌症。
2.3PKC抑制剂的用途，该抑制剂是就PKC、任选PKCα和PKCβ相对于一种或多种其他蛋白激酶而言选择性的，例如相对于一种或多种其他不属于CDK家族的蛋白激酶，例如相对于一种或多种酪氨酸激酶是选择性的，所述抑制剂为游离形式或药学上可接受的盐形式，用于预防或治疗由T淋巴细胞和/或PKC介导的障碍或疾病，或者预防、抑制或控制急性或慢性移植排斥或移植物抗宿主疾病，预防或治疗自身免疫病或障碍、炎性疾病、感染性疾病、心血管疾病或癌症。
2.4如上1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制剂的用途，例如式I或Ib化合物或其药学上可接受的盐，用于预防或治疗由T淋巴细胞和/或PKC介导的障碍或疾病，或者预防、抑制或控制急性或慢性移植排斥或移植物抗宿主疾病，预防或治疗自身免疫病或障碍、炎性疾病、感染性疾病、心血管疾病或癌症。
2.5本发明PKC抑制剂的用途，例如上文1.1、1.2或1.3下所示，例如式I或Ib化合物或其药学上可接受的盐，用于抑制移植排斥或移植物抗宿主疾病。
2.6本发明PKC抑制剂的用途，例如上文1.1、1.2或1.3下所示，例如式I或Ib化合物或其药学上可接受的盐，用于预防或治疗自身免疫病。
3.式I化合物或其药学上可接受的盐作为药物的用途。
4.1式I化合物或其药学上可接受的盐作为选择性PKC抑制剂的用途，例如作为如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制剂。
4.2式Ib化合物或其药学上可接受的盐作为如上文1.1、1.2或1.3下所示选择性PKC抑制剂的用途。
5.1预防或治疗需要这种治疗的受试者由T淋巴细胞和/或PKC介导的障碍或疾病的方法，该方法包括对所述受试者施用有效量的本发明PKC抑制剂，例如这样一种PKC抑制剂，它是就PKC的α和β以及任选地θ同工型相对于一种或多种其他PKC同工型而言是选择性的，例如相对于一种或多种同工型δ、ε和η，或者如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制剂，或者式I或Ib化合物，或者其药学上可接受的盐。
5.2预防或治疗需要这种治疗的受试者中急性或慢性移植排斥、移植物抗宿主疾病、炎性或自身免疫病、癌症、心血管疾病或感染性疾病的方法，该方法包括对所述受试者施用有效量的本发明PKC抑制剂，例如这样一种PKC抑制剂，它是就PKC的α和β以及任选地θ同工型相对于一种或多种其他PKC同工型，例如相对于一种或多种同工型δ、ε和η而言是选择性的，或者如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制剂，或者式I或Ib化合物，或者其药学上可接受的盐。
6.1药物组合物，例如用在任意如上4.1和4.2中的方法中，该药物组合物包含本发明的PKC抑制剂，例如这样一种PKC抑制剂，它是就PKC的α和β以及任选地θ同工型相对于一种或多种其他PKC同工型，例如相对于一种或多种同工型δ、ε和η而言是选择性的，或者如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制剂，或者式I或Ib化合物，其游离形式或药学上可接受的盐形式，与之结合有药学上可接受的稀释剂或载体。
6.2本发明的PKC抑制剂，例如这样一种PKC抑制剂，它是就PKC的α和β以及任选地θ同工型相对于一种或多种其他PKC同工型，例如相对于一种或多种同工型δ、ε和η而言是选择性的，或者如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制剂，或者式I或Ib化合物，其游离形式或药学上可接受的盐形式，用于制备药物组合物。
6.3本发明的PKC抑制剂，例如这样一种PKC抑制剂，它是就PKC的α和β以及任选地θ同工型相对于一种或多种其他PKC同工型，例如相对于一种或多种同工型δ、ε和η而言是选择性的，或者如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制剂，或者式I或Ib化合物，其游离形式或药学上可接受的盐形式，用于制备用在任意如上5.1和5.2中的方法中的药物组合物，例如用于抑制急性或慢性移植排斥或移植物抗宿主疾病，或者预防或治疗自身免疫病或障碍。
就本发明化合物，例如式I或Ib化合物的用途而言，所需剂量当然将因给药方式、所治疗的特定病症和所需效果而异。一般而言，按照约0.1至约100mg/kg体重的每日剂量全身给药，可以获得令人满意的结果。适用于大型哺乳动物、例如人类的每日剂量在约0.5mg至约2000mg的范围内，例如适宜以分份剂量施用，多达一天四次，或者以延迟方式施用。
本发明的选择性PKC抑制剂、例如式I或Ib化合物可以借助任意常规途径给药，特别是肠内方式，例如口服，例如片剂或胶囊形式，或者肠胃外方式，例如可注射溶液剂或混悬剂形式，或者局部方式，例如洗剂、凝胶剂、软膏或霜剂形式，或者鼻用或栓剂形式。包含本发明选择性PKC抑制剂、例如式I化合物的游离形式或药学上可接受的盐形式结合至少一种药学可接受载体或稀释剂的药物组合物可以按照常规方式制造，与药学上可接受的载体或稀释剂混合即可。用于口服施用的单位剂型例如含有约0.1mg至约500mg的活性物质。
局部给药例如用于皮肤。进一步的局部给药是施用于眼睛。
本发明的选择性PKC抑制剂、例如式I或Ib化合物可以以游离形式或药学上可接受的盐形式给药，例如如上所示。这类盐可以按照常规方式制备，并且表现与游离化合物相同级别的活性。
测定法
所用测定法是如上文所描述的。
一些本发明化合物所得PKCβ的IC50值与PKCα的IC50值之比、PKCδ的IC50值与PKCα的IC50值之比、PKCε的IC50值与PKCα的IC50值之比、PKCη的IC50值与PKCα的IC50值之比、PKCθ的IC50值与PKCα的IC50值之比、根据MLR测定法所测定的IC50值与根据BM测定法所测定的IC50值之比如表11所示。
PKCα、β、δ、ε、η与θ测定法、MLR和BM测定法是如上所述的。
表11
Figure GSA00000083287600431
Figure GSA00000083287600441
本发明的选择性抑制剂、例如α、β和任选地θPKC的选择性抑制剂、特别是式I或Ib化合物可以作为单独的活性成分或者与其他免疫调控方案用药或其他抗炎剂一起给药，例如用于治疗或预防同种异体或异种移植物的急性或慢性排斥或者炎性或自身免疫障碍。例如，它们可以与下列药物联合使用：环孢菌素或子囊菌素或者它们的免疫抑制性类似物或衍生物，例如环孢菌素A、ISA Tx247、FK-506、ABT-281、ASM 981；mTOR抑制剂，例如雷帕霉素、40-O-(2-羟基乙基)-雷帕霉素、CCI779、ABT578或者雷帕类似物(rapalog)，例如AP23573、AP23464、AP23675、AP23841、TAFA-93、biolimus 7或biolimus 9等；皮质甾类；环磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；S1P受体调控剂，例如FTY 720或其类似物；来氟米特或其类似物；咪唑立宾；霉酚酸或其盐，例如钠盐；霉酚酸酯；15-脱氧精胍菌素或其类似物；免疫抑制性单克隆抗体，例如抗白细胞受体的单克隆抗体，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD 11a/CD18、CD7、CD25、CD 27、B7、CD40、CD45、CD58、CD 137、ICOS、CD150(SLAM)、OX40、4-1BB或它们的配体，例如CD154；或者其他免疫调节化合物，例如具有至少一部分CTLA4或其突变体的细胞外结构域的重组结合分子，例如与非CTLA4蛋白序列连接的CTLA4或其突变体的至少细胞外部分，例如CTLA4Ig(例如ATCC 68629)或其突变体，例如LEA29Y，或者其他粘连分子抑制剂，例如mAbs或者低分子量抑制剂，包括LFA-1拮抗剂、选择蛋白拮抗剂和VLA-4拮抗剂。本发明的选择性PKC抑制剂、例如式I化合物也可以与抗增殖药一起给药，所述抗增殖药为例如化疗药，例如用在癌症治疗中的化疗药，包括但不限于芳化酶抑制剂、抗雌激素、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、微管活性剂、烷基化剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂、法呢基转移酶抑制剂、COX-2抑制剂、MMP抑制剂、mTOR抑制剂、抗瘤形成性抗代谢产物、铂化合物、降低蛋白激酶活性的化合物与其他抗血管生成化合物、高那瑞林激动剂、抗雄激素、bengamide、双膦酸酯、抗增殖性抗体和替莫唑胺，或者与下列药物一起用在糖尿病疗法中：抗糖尿病药、胰岛素促分泌剂或胰岛素分泌增强剂，例如磺酰脲，例如甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、妥拉磺脲、醋酸己脲、4-氯-N-[(1-吡咯烷基氨基)羰基]苯磺酰胺(格列吡脲)、格列本脲(优降糖)、格列齐特、1-丁基-3-间氨基苯磺酰脲、氨磺丁脲、格列波脲、格列吡嗪、格列喹酮、格列派特、格列噻唑、格列丁唑、格列己脲、格列嘧啶、格列平脲、苯磺丁脲或甲苯磺环己脲；口服促胰岛素剂衍生物，例如短效胰岛素增强剂，例如氯茴苯酸、瑞格列奈；苯基乙酸衍生物，例如纳格列奈；DPP IV抑制剂，例如1-{2-[(5-氰基吡啶-2-基)氨基]乙基氨基}乙酰基-(2S)-氰基-吡咯烷二盐酸盐、LAF237、GLP-1或GLP-1激动剂类似物；或者胰岛素致敏剂，例如过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂(PPARγ)，例如格列他腙，非格列他腙型，例如N-(2-苯甲酰基苯基)-L-酪氨酸类似物，例如GI-262570，或者噁唑烷二酮，例如JTT501；双重PPARγ/PPARα激动剂，例如DRF-554158、NC-2100或NN-622；类视黄酸X受体激动剂或类视黄酸(rexinoid)，例如2-[1-(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)-环丙基]-吡啶-5-羧酸、4-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)-2-羰基]-苯甲酸、9-顺式视黄酸或其类似物、衍生物或药学上可接受的盐。
按照上述，本发明在更进一步的方面提供：
7.如上所定义的方法，其包括治疗有效量的游离形式或药学上可接受的盐形式的本发明化合物、例如就α、β和任选的θPKC相对于一种或多种其他PKC同工型而言选择性的抑制剂、例如就PKC相对于一种或多种其他蛋白激酶、例如相对于一种或多种不属于CDK-1家族的蛋白激酶而言选择性的抑制剂、例如如上文1.1、1.2和1.3下所示的化合物、例如式I或Ib化合物，与第二药物物质共同给药，例如相伴或顺序给药，所述第二药物物质是如上所示的免疫抑制、免疫调节、抗炎、抗增殖或抗糖尿病药。
8.治疗组合，例如药盒，其包含a)游离形式或药学上可接受的盐形式的本发明化合物，例如就α、β和任选地θPKC相对于一种或多种其他PKC同工型而言选择性的抑制剂，例如就PKC相对于一种或多种其他蛋白激酶，例如相对于一种或多种不属于CDK-1家族的蛋白激酶而言选择性的抑制剂，例如如上文1.1、1.2和1.3下所示的化合物，例如式I或Ib化合物，和b)至少一种第二种活性剂，其选自如上所示的免疫抑制、免疫调节、抗炎、抗增殖和抗糖尿病药。组分a)和组分b)可以相伴或顺序使用。该药盒可以包含其给药指导。
若本发明的PKC选择性抑制剂、例如α、β和任选地θPKC的选择性抑制剂、例如式I或Ib化合物与其他免疫抑/免疫调节、抗炎、抗增殖或抗糖尿病疗法联合施用的，例如用于预防或治疗如上所指定的急性或慢性移植排斥或者炎性或自身免疫障碍，共同施用的免疫抑制、免疫调节、抗炎、抗增殖或抗糖尿病化合物的剂量当然将因所采用的共同药物类型(例如它是甾类还是环孢菌素)、所采用的特定药物、所治疗的病症等而异。
本发明的选择性PKC抑制剂、特别是就α、β和任选地θPKC相对于一种或多种其他PKC同工型而言选择性的抑制剂、特别是式I和Ib化合物，具有令人感兴趣的药物动力学分布图和令人感兴趣的体外与体内活性。

Claims (15)

1.游离形式或药学上可接受的盐形式的PKC抑制剂化合物的用途，用于生产治疗或预防由T淋巴细胞和/或PKC介导的疾病或障碍，特别是同种异体移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌症的药物，其中所述化合物具有就PKCα、PKCβ和任选地PKCθ相对于一种或多种其他PKC同工型而言至少10倍的选择性，该选择性是如通过该化合物对于不是PKCα和PKCβ、并且任选地不是PKCθ的PKC的IC50与该化合物对于PKCα、PKCβ或PKCθ的IC50之比所测量的。
2.游离形式或药学上可接受的盐形式的PKC抑制剂化合物，其中所述化合物具有就PKC相对于一种或多种不属于CDK-家族的蛋白激酶而言的选择性，和如根据权利要求1所测量的就PKCα、PKCβ和任选地PKCθ相对于一种或多种其他PKC同工型而言至少10倍的选择性。
3.游离形式或药学上可接受的盐形式的PKC抑制剂化合物，其中所述化合物具有就PKCα、PKCβ和任选地PKCθ相对于一种或多种其他PKC同工型而言至少10倍的选择性，并且如根据同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)测定法所测定的所述化合物的IC50值与根据骨髓增殖(BM)测定法所测定的所述化合物的IC50值之比高于5。
4.游离形式或药学上可接受的盐形式的PKC抑制剂化合物，其中所述化合物具有如根据权利要求1所测量的就PKCα、PKCβ和PKCθ相对于一种或多种其他PKC同工型而言至少10倍的选择性。
5.式I化合物或其盐，
Figure FSA00000083287500011
其中 
Ra是H；C1-4烷基；或者被OH、NH2、NHC1-4烷基或N(二-C1-4烷基)2取代的C1-4烷基；
Rb、Rc、Rd和Re之一是卤素、C1-4烷氧基、C1-4烷基、CF3或CN，其他三个取代基各自是H；或者Rb、Rc、Rd和Re都是H；
R是式(a)、(b)或(c)的原子团
Figure FSA00000083287500021
其中
R1是-(CH2)n-NR3R4，
其中
每一R3和R4独立地是H或C1-4烷基；或者R3和R4与它们所结合的氮原子一起形成杂环残基；
n是0、1或2；
R2是H、卤素、C1-4烷基、CF3、OH、SH、NH2、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、NHC1-4烷基、N(二-C1-4烷基)2、CN、炔或NO2；
其中每一R10和R10a独立地是杂环残基；或者式α的原子团
-X-Rf-Y    (α)
其中X是直接键、O、S或NR11，其中R11是H或C1-4烷基，
Rf是C1-4亚烷基或者其中一个CH2被CRxRy代替的C1-4亚烷基，其中Rx和Ry之一是H，另一个是CH3，每一Rx和Ry是CH3，或者Rx和Ry一起形成-CH2-CH2-，
Y结合于末端碳原子并且选自OH；-NR30R40，其中每一R30和R40独 立地是H、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基、杂芳基-C1-4烷基、C2-6烯基或C1-4烷基，任选地在末端碳原子上被OH、卤素、C1-4烷氧基或-NR50R60取代，其中每一R50和R60独立地是H、C1-4烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基，或者R30和R40与它们所结合的氮原子一起形成杂环残基；
每一R20和R20a独立地是H、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、CF3、腈、硝基或氨基。
6.根据权利要求5的化合物，其中Ra是H或甲基；每一R2、R20和R20a独立地是H、Cl、NO2、F、CF3或甲基；n是0或1；Rb、Rc、Rd和Re之一是甲基或乙基，其他三个取代基是H；或者Rb、Rc、Rd和Re都是H；每一R3和R4独立地是H、甲基、乙基或异丙基；或者R3和R4与它们所结合的氮原子一起形成任选被取代的杂环残基；每一R1、R10和R10a独立地是杂环残基。
7.游离形式或药学上可接受的盐形式的根据权利要求5或6的化合物，其选自
3-[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-氨基甲基-2-氯-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(6-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(6-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-{2-氯-7-[(乙基-甲基-氨基)-甲基]-萘-1-基}-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯 -2，5-二酮、
3-(2-氯-7-二乙氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-乙氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-[2-氯-7-(异丙基氨基-甲基)-萘-1-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-[2-氯-7-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)萘-1-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(2-氯-7-吡咯烷-1-基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4-(1，7-二甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-氨基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-氨基-萘-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-二甲氨基甲基-2-氟-萘-1-基)-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-二甲氨基甲基-2-氟-萘-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、
3-(1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、
3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲基-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、
3-(1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲基-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、
3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲基-吡啶-3-基]-吡 咯-2，5-二酮、
3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、
3-(1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、
3-[2-氯-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、
3-(1H-吲哚-3-基)-4-[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮、
3-(1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮、
3-(1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮。
8.游离形式或药学上可接受的盐形式的根据权利要求5至7任意一项的化合物，其用作药物。
9.根据权利要求2至7任意一项的化合物，其用于治疗或预防由T淋巴细胞和/或PKC介导的疾病或障碍，特别是同种异体移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌症。
10.药物组合物，其包含游离形式或药学上可接受的盐形式的根据权利要求2至7任意一项的化合物和与之结合的药学上可接受的稀释剂或载体。
11.游离形式或药学上可接受的盐形式的根据权利要求2至7任意一项的化合物或者根据权利要求10的药物组合物的用途，用于生产治疗或预防由T淋巴细胞和/或PKC介导的疾病或障碍，特别是同种异体移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌症的药物。
12.药物组合，其包含游离形式或药学上可接受的盐形式的根据权利要求2至7任意一项的化合物，和选自免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎剂、 化学治疗剂、抗增殖剂和抗糖尿病剂的另一种治疗剂。
13.生产根据权利要求5或6的化合物的方法，该方法包括将式II化合物
Figure FSA00000083287500061
其中Ra至Re如权利要求5中定义，
与式III化合物反应，
R-CH2-CO-NH2    (III)
其中R如权利要求5中定义，
需要时，如果合适，将游离形式的所得式I化合物转化为盐形式或者反之亦然。
14.治疗或预防需要这种治疗的受试者中由T淋巴细胞和/或PKC介导的障碍或疾病、特别是同种异体移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌症的方法，该方法包括对所述受试者施用有效量的PKC抑制剂或其药学上可接受的盐，所述PKC抑制剂具有如根据权利要求1所测量的就PKCα、PKCβ和任选地PKCθ相对于一种或多种其他PKC同工型而言至少10倍的选择性。
15.治疗或预防需要这种治疗的受试者中由T淋巴细胞和/或PKC介导的障碍或疾病、特别是同种异体移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌症的方法，该方法包括对所述受试者施用有效量的根据权利要求2至7任意一项的化合物或其药学上可接受的盐。 
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