DE602005005787T2

DE602005005787T2 - Indolylmaleimidderivate

Info

Publication number: DE602005005787T2
Application number: DE602005005787T
Authority: DE
Inventors: Maurice Van Eis; Peter Von Matt; Jürgen Wagner; Jean-Pierre Evenou
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2004-01-19
Filing date: 2005-01-19
Publication date: 2009-04-30
Anticipated expiration: 2025-01-20
Also published as: RU2006129891A; BRPI0506939A; EP1709030B1; WO2005068454A1; AU2005205182B2; CN101933926A; ATE391127T1; US7648989B2; JP2007518730A; CA2552740A1; AU2005205183B2; US7691861B2; EP1745037B1; AU2005205182A1; AU2005205183A1; AU2009227818A1; EP2270001A1; PT1709030E; PL1709030T3; RU2373201C2

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Indolylmaleimidderivate, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen.
Besonders betrifft die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I
worin
R_a für H, C₁-C₄-Akyl oder C₁-C₄-Alkyl steht, das substituiert ist durch OH, NH₂, NHC₁-C₄-Alkyl oder N-(Di-C₁-C₄-Alkyl)₂,
einer der Substituenten R_b, R_c, R_d und R_e für Halogen, C₁-C₄-Alkoxy oder C₁-C₄-Alkyl steht und die anderen drei Substituenten für Wasserstoff stehen, oder R_b, R_d und R_e insgesamt Wasserstoff sind, und
R für einen Rest der folgenden Formel (a) steht
worin
R₁ für -(CH₂)_n-NR₃R₄ steht, worin
R₃ und R₄ jeweils unabhängig für H oder C₁-C₄-Alkyl stehen, oder die Substituenten R₃ und R₄ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen heterocyclischen Rest bilden,
n für 0, 1 oder 2 steht, und
R₂ für H, Halogen, C₁-C₄-Alkyl, CF₃, OH, SH, NH₂, NO₂, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Alkylthio, NHC₁-C₄-Alkyl, N-(Di-C₁-C₄-Alkyl)₂ oder CN steht.
Die Verbindung der Formel I kann in freier Form oder in Form eines Salzes vorliegen.
Alkyl oder Alkoxy können gerade oder verzweigt sein.
Halogen kann F, Cl, Br oder I sein und ist vorzugsweise F, Cl oder Br.
Unter einem heterocyclischen Rest ist ein 3- bis 8-gliedriger, vorzugsweise 5- bis 8-gliedriger, gesättigter, ungesättigter oder aromatischer heterocyclischer Ring mit ein oder zwei Heteroatomen zu verstehen, die vorzugsweise ausgewählt sind aus N, O und S, und der optional substituiert ist.
Geeignete Beispiele für Substituenten R₁ sind Pyridyl, 3- oder 4-Pyridyl, Piperidyl, Piperidi-1-yl, 3- oder 4-Piperidyl, Homopiperidyl, Piperazinyl, Homopiperazinyl, Imidazolyl, Imidazolidinyl, Pyrrolyl, Pyrrolidinyl oder Morpholin-4-yl, optional mono- oder polysubstituiert. Ist der heterocyclische Rest substituiert, dann kann es sich bei diesem Rest um ein oder mehr Ringkohlenstoffatome und/oder ein Ringstickstoffatom handeln, falls vorhanden. Zu Beispielen für einen Substituenten an einem Ringkohlenstoffatom gehören unter anderem C₁-C₄-Alkyl, beispielsweise CH₃, C₃-C₆-Cycloalkyl, beispielsweise Cyclopropyl, das optional weiter substituiert ist durch C₁-C₄-Alkyl,
worin p für 1, 2 oder 3 steht und vorzugsweise 1 ist, CF₃, Halogen, NH₂, -CH₂-NR₇R₈, worin R₇ und R₈ jeweils unabhängig für H oder C₁-C₄- Alkyl stehen, oder worin R₇ und R₈ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen heterocyclischen Rest oder ein Heteroaryl bilden, -CH₂-OH, -CH₂-O-C₁-C₄-Alkyl, -CH₂-Halogen oder -CH₂-CH₂-Halogen. Beispiele für einen Substituenten am Ringstickstoffatom sind C₁-C₆-Alkyl, Acyl, R'_x-CO, worin R'_x für H, C₁-C₆-Alkyl oder Phenyl steht, optional substituiert durch C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy oder Amino, Formyl, C₃-C₅-Cycloalkyl, C₃-C₆-Cycloalkyl-C₁-C₄-alkyl, Phenyl, Phenyl-C₁-C₄-alkyl, Benzyl, ein heterocyclischer Rest, wie oben beschrieben, ein aromatischer heterocyclischer Rest mit 1 oder 2 Stickstoffatomen oder ein Rest der Formel β -R₅-Y' (β)worin R₅ für C₁-C₄-Alkylen oder C₂-C₄-Alkylen steht, das durch O unterbrochen ist, und Y' für OH, NH₂, NH-(C₁-C₄-Alkyl) oder N-(C₁-C₄-Alkyl)₂ steht. C₂-C₄-Alkylen, das durch O unterbrochen ist, kann beispielsweise für -CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂- stehen.
Die Verbindungen der Formel I können in freier Form oder in Form eines Salzes mit organischen oder anorganischen Säuren vorkommen, die ausgewählt sind aus Chlorwasserstoffsäure, Essigsäure und Trifluoressigsäure.
Natürlich können die Verbindungen der Formel I auch in Form optischer Isomere, Racemate oder Diastereoisomere vorkommen. Ein Ringkohlenstoffatom, das einen Substituenten in der Position 3 eines Piperazinylrests trägt, ist beispielsweise asymmetrisch und kann die Konfiguration R oder S haben. Selbstverständlich umfasst die vorliegende Erfindung alle Enantiomere und Gemische hiervon. Enantiomere sind gegenüber Racematen bevorzugt. Ähnliche Überlegungen gelten auch bezüglich der Ausgangsmaterialien, die asymmetrische Kohlenstoffatome enthalten, wie dies bereits erwähnt worden ist.
Bei den Verbindungen der Formel I sind die folgenden Bedeutungen einzeln oder in irgendeiner Subkombination bevorzugt:

1. R_a steht für H oder Methyl,
2. einer der Substituenten R_b, R_c, R_d und R_e steht für Methyl oder Ethyl und die anderen drei Substituenten stehen jeweils für H, oder die Substituenten R_b, R_b, R_d und R_e stehen alle für H,
3. R₂ steht für H, Cl, NO₂, CF₃, F oder Methyl,
4. n steht für 1, und
5. R₃ und R₄ stehen jeweils unabhängig für H, Methyl, Ethyl oder i-Propyl, oder R₃ und R₄ bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen heterocyclischen Rest, der ausgewählt ist aus optional substituiertem Piperazinyl oder Pyrrolidinyl.

Zur vorliegenden Erfindung gehört auch ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, durch
Umsetzung einer Verbindung der Formel II
worin R_a, R_b, R_c, R_d und R_e wie oben definiert sind,
mit einer Verbindung der Formel III R-CH₂-CO-NH₂ (III)worin R wie oben definiert ist,
und erforderlichenfalls Umwandlung der in freier Form erhaltenen Verbindung der Formel I in die Form eines Salzes oder umgekehrt, wie dies jeweils passend ist.
Dieses Verfahren kann zweckmäßig in Gegenwart einer starken Base, wie t-BuOK durchgeführt werden, beispielsweise gemäß der Beschreibungen von WO 02 038 561 A oder WO 03 008 259 A , deren Inhalte durch diese Bezugnahme eingeführt sind, wobei dies auch in den Beispielen illustriert ist.
Die Verbindungen der Formel II und III können nach an sich bekannten Verfahren hergestellt werden, beispielsweise nach den Beschreibungen in WO 02 038 561 A oder WO 03 082 858 A , deren Inhalte durch diese Bezugnahme eingeführt sind, wobei dies auch in den Beispielen illustriert ist.
Ist die Herstellung der Ausgangsmaterialien nicht besonders beschrieben, dann sind diese Verbindungen entweder bekannt oder können in Analogie zu bekannten Verfahren oder entsprechend der nachfolgenden Beschreibung hergestellt werden.
Die folgenden Beispiele dienen zur weiteren Illustration der Erfindung, wobei die darin enthaltenen Abkürzungen die folgenden Bedeutungen haben:

RT: = Raumtemperatur
THF: = Tetrahydrofuran
DMF: = Dimethylformamid
EtOAc: = Ethylacetat
Pd₂(dba)₃: = Pd(0)-Bis(dibenzylidenaceton)
FCC: = Blitzsäulenchromatographie
TLC: = Dünnschichtchromatographie.

Beispiel 1:
3-(2-Chlor-6-dimethylaminomethylnaphthalin-1-yl)-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion
Eine Lösung von 2-(2-Chlor-6-dimethylaminomethylnaphthalin-1-yl)-acetamid (54,6 mg, 0,20 mmol) und (1-Methyl-1H-indol-3-yl)-oxoessigsäuremethylester (55,7 mg, 0,26 mmol) in trocknem THF (2,5 ml) wird unter einer Argonatmosphäre mit aktiviertem 3 Å Molekularsieb (50 mg) versetzt. Hierauf erfolgt eine Zugabe einer Lösung von 1,0 M KOtBu in THF (0,59 ml, 0,59 mmol) in einem Guss bei RT. Nach 30 min bei RT zeigt eine TLC Analyse eine vollständige Umwandlung der Ausgangsmaterialien. Das Reaktionsgemisch wird mit EtOAc verdünnt und in eine gesättigte wässrige NH₄Cl Lösung gegossen. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Kochsalzlösung gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet, worauf das organische Lösemittel verdampft wird. Der Rückstand wird durch FFC (EtOAc/AcOH/ H₂O 700:110:90) gereinigt, wodurch die Titelverbindung mit folgenden physikalischen Daten erhalten wird:
¹H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δ 2,12 (s, 6H), 3,46 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 6,16 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,45-6,51 (m, 1H), 6,96-7,02 (m, 1H), 7,32-7,40 (m, 2H), 7,60-7,68 (m, 2H), 7,88 (s, 1H), 8,06 (d, J = 10 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H). ES⁺-MS: 445,5, 446,6 [M+H]⁺.
Herstellung von 2-(2-Chlor-6-dimethylaminomethylnaphthalin-1-yl)-acetamid
(2-Chlor-6-dimethylaminomethylnaphthalin-1-yl)-essigsäure (276 mg, 0,99 mmol) wird unter einer Argonatmosphäre in DMF (3 ml) gelöst. Die nach Zusatz von 1,1-Carbonyldiimidazol (177 mg, 1,09 mmol) erhaltene klare Lösung wird 3 h bei RT gerührt. Sodann erfolgt ein Zusatz an konzentrierter wässriger Ammoniaklösung (25%, 6 ml) unter weiterer Rührung während 10 min bei RT. Eine anschließende TLC Analyse zeigt einen vollständigen Verbrauch an Ausgangsmaterial. Das Reaktionsgemisch wird auf Wasser gegossen. Die wässrige Schicht wird mit EtOAc extrahiert, worauf eine Waschung mit Kochsalzlösung und Trocknung über Na₂SO₄ erfolgt. Nach Entfernung des Lösemittels zeigt sich, dass der Rückstand eine reine Titelverbindung ist, die nicht mehr gereinigt werden muss. Die physikalischen Daten dieser Verbindung sind wie folgt:
¹H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δ 2,18 (s, 6H), 3,53 (s, 2H), 4,08 (s, 2H), 6,96-7,08 (br, 2H), 7,48-7,68 (m, 2H), 7,78-7,86 (m, 2H), 7,96-8,00 (d, J = 10 Hz, 1H). ES⁺-MS: 277,3, 279,2 [M+H]⁺.
Herstellung von (2-Chlor-6-dimethylaminomethylnaphthalin-1-yl)-essigsäure
(2-Chlor-6-dimethylaminomethylnaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester (223 mg, 0,73 mmol) wird in Dioxan (2,6 ml) gelöst. Nach Zusatz von Wasser (0,96 ml) und Lithiumhydroxid (21 mg, 0,88 mmol) wird das Reaktionsgemisch 4 h auf 60°C erwärmt. Eine anschließende HPLC Analyse zeigt eine vollständige Umwandlung des Ausgangsmaterials. Das Reaktionsgemisch wird mit Wasser verdünnt, durch Zusatz von 1 M wässrigem NaHSO₄ auf pH 6 bis 7 eingestellt und mit EtOAc extrahiert. Die wässrige Schicht wird konzentriert, und der feste Rückstand wird wiederholt mit MeOH extrahiert, wodurch eine reine Titelverbindung erhalten wird. ES⁺-MS: 278,3, 280,1 [M+H]⁺.
Herstellung von (2-Chlor-6-dimethylaminomethylnaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester
Dimethylamin (5,6 M Lösung in EtOH, 0,28 ml, 1,53 mmol) wird unter einer Argonatmosphäre zu einer Lösung von (2-Chlor-6-formylnaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester (284 mg, 1,02 mmol) in THF (10 ml) gegeben. Das Reaktionsgemisch wird 18 h bei RT gerührt und dann mit einer Lösung von Natriumcyanoborhydrid (78 mg, 1,23 mmol) in MeOH (2 ml) und Eisessig (0,29 ml, 5,13 mmol) versetzt. Nach einer Rührung während 1 h bei Raumtemperatur zeigt eine TLC Analyse einen vollständigen Verbrauch des Ausgangsmaterials. Das Reaktionsgemisch wird mit Wasser verdünnt und dann durch Zusatz einer konzentrierten wässrigen NaHCO₃ Lösung auf pH 8 bis 9 eingestellt. Durch Extraktion mit EtOAc, Waschung mit Kochsalzlösung, Trocknung über Na₂SO₄ und Entfernung des Lösemittels wird das rohe Reaktionsprodukt erhalten. Durch anschließende Reinigung durch FCC (CH₂Cl₂/EtOH/NH₃ 190:9:1) wird die Titelverbindung mit folgenden physikalischen Daten erhalten:
¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 1,26 (t, J = 9 Hz, 3H), 2,30 (s, 6H), 3,59 (s, 2H), 4,18 (q, J = 9 Hz, 2H), 4,30 (s, 2H), 7,49 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,54-7,58 (m, 1H), 7,69-7,76 (m, 2H), 7,91 (d, J = 10 Hz, 1H). ES⁺-MS: 306,4, 308,3 [M+H]⁺.
Herstellung von (2-Chlor-6-formylnaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester
(2-Chlor-6-cyanonaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester (1,39 g, 5,07 mmol) wird in einem Gemisch von Wasser (17 ml), Pyridin (33 ml) und Eisessig (17 ml) gelöst. Anschließend erfolgt ein Zusatz von Natriumhypophosphit (4,30 g, 40,62 mmol) und Raney-Nickel (3,2 g) bei RT. Sodann wird das Reaktionsgemisch 1 h auf 100°C erhitzt, worauf eine TLC Analyse einen vollständigen Verbrauch des Ausgangsmaterials zeigt. Das Reaktionsgemisch wird auf RT abgekühlt und durch Celite filtriert. Nach Zusatz von Siliciumdioxidgel werden die Lösemittel auf einem Rotationsverdampfer entfernt. Eine anschließende Reinigung mittels FCC (Hexan/EtOAc 5:1) ergibt die Titelverbindung mit folgenden physikalischen Daten:
¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 1,17 (t, J = 8 Hz, 3H), 4,10 (q, J = 8 Hz, 2H), 4,24 (s, 2H), 7,52 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,94-7,98 (m, 2H), 8,26 (s, 1H), 10,09 (s, 1H). ES^–-MS: 275,2, 277,3 [M-H]^–.
Herstellung von (2-Chlor-6-cyanonaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester
(2-Chlor-6-trifluormethansulfonyloxynaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester (3,59 g, 9,04 mmol) wird in DMF (30 ml) unter einer Argonatmosphäre gelöst. Nach Zugabe von Palladium(0)-tetrakis(triphenylphosphan)(418 mg, 0,36 mmol) und Zink(II)-cyanid (2,12 g, 18,09 mmol) wird das Reaktionsgemisch auf 125°C erhitzt. Nach 1 h zeigt eine TLC Analyse einen vollständigen Verbrauch des Ausgangsmaterials. Die Suspension wird auf RT abgekühlt und auf Wasser gegossen. Nach Extraktion mit EtOAC erfolgt eine Waschung der organischen Schicht mit 1 M wässrigem HCl, gesättigter wässriger NaHCO₃ Lösung und Kochsalzlösung. Nach Trocknung über Na₂SO₄ und Entfernung des Lösemittels erfolgt eine Reinigung durch FCC (Hexan/EtOAc 3:1), wodurch die Titelverbindung mit den folgenden physikalischen Daten erhalten wird:
¹H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δ 1,06 (t, J = 8 Hz, 3H), 3,98 (q, J = 8 Hz, 2H), 4,24 (s, 2H), 7,66 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 10 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 10 Hz, 1H), 8,54 (s, 1H).
Herstellung von (2-Chlor-6-trifluormethansulfonyloxynaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester
(2-Chlor-6-hydroxynaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester (3,39 g, 12,80 mmol) wird unter einer Argonatmosphäre in Pyridin (35 ml) gelöst. Nach Abkühlung auf 0°C wird Trifluormethansulfonsäureanhydrid (2,32 ml, 14,08 mmol) tropfenweise während 15 min zugegeben. Nach einer Rührung während 15 min bei 0°C und während 1 h bei RT, zeigt eine TLC Analyse einen vollständigen Verbrauch des Ausgangsmaterials. Das Reaktionsgemisch wird in 1 M wässrige NaHCO₃ Lösung gegossen. Nach Extraktion mit EtOAc, Waschung mit Kochsalzlösung und Trocknung der organischen Schicht über Na₂SO₄ wird durch Konzentration das rohe Reaktionsprodukt erhalten. Eine Reinigung durch FCC (Hexan/EtOAc 4:1) ergibt die Titelverbindung mit den folgenden Daten:
¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 1,48 (t, J = 9 Hz, 3H), 4,41 (q, J = 9 Hz, 2H), 4,52 (s, 2H), 7,68 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,98-8,00 (m, 2H), 8,27 (d, J = 10 Hz, 1H).
Herstellung von (2-Chlor-6-hydroxynaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester
(2-Chlor-6-methoxynaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester (5,43 g, 19,48 mmol) und Tetrabutylammoniumiodid (9,35 g, 25,32 mmol) werden unter Argonatmosphäre in CH₂Cl₂ (110 ml) gelöst. Das Reaktionsgemisch wird auf –78°C gekühlt und während 15 min mit einer 1 M Lösung von BBr₃ in CH₂Cl₂ (48,7 ml, 48,7 mmol) versetzt. Sodann erfolgt eine Rührung während 10 min bei –78°C und eine Rührung während 10 min bei RT. Eine anschließende TLC Analyse zeigt einen vollständigen Verbrauch des Ausgangsmaterials. Das Reaktionsgemisch wird auf konzentrierte wässrige NaHCO₃ Lösung gegossen und kräftig während 20 min bei RT gerührt. Nach Extraktion mit CH₂Cl₂ wird die organische Schicht mit Kochsalzlösung gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet. Eine anschließende Reinigung durch FCC (Hexan/EtOAC 2:1) ergibt die Titelverbindung mit folgenden physikalischen Daten:
¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 1,19 (t, J = 9 Hz, 3H), 4,12 (q, J = 9 Hz, 2H), 4,18 (s, 2H), 5,35-5,60 (br, 1H), 6,93 (s, 1H), 6,99 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 10 Hz, 1H). ES⁺-MS: 265,2, 266,8 [M+H]⁺.
Herstellung von (2-Chlor-6-methoxynaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester
Ein Gemisch von (2-Chlor-6-methoxynaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester und (2-Chlor-6-methoxy-3,4-dihydronaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester (4,07 g, etwa 14,6 mmol) wird unter einer Argonatmosphäre in Dioxan (40 ml) gelöst. Nach anschließendem Zusatz von 2,3-Dichlor-5,6-dicyano-p-benzochinon (DDQ, 7,30 g, 32 mmol) wird das Reaktionsgemisch während 4 h auf Rückflusstemperatur gehalten. Nach Kühlung auf RT und Zusatz von MeOH wird das Reaktionsgemisch homogen. Nach anschließendem Zusatz von Siliciumdioxidgel wird das Lösemittel auf einem Rotationsverdampfer entfernt. Durch Reinigung durch FCC (Hexan/EtOAC 980:20 bis 960:40) wird die Titelverbindung mit folgenden physikalischen Daten erhalten:
¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 1,32 (t, J = 9 Hz, 3H), 4,00 (s, 3H), 4,26 (q, J = 9 Hz, 3H), 4,34 (s, 2H), 7,21 (s, 1H), 7,30 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 10 Hz, 1H). ES⁺-MS: 279,1, 280,9 [M+H]⁺.
Herstellung von (2-Chlor-6-methoxynaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester und (2-Chlor-6-methoxy-3,4-dihydronaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester
Ein Gemisch von (2-Chlor-1-hydroxy-6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydronaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester (5,0 g, 16,64 mmol), 1,1-Diphenylethen (3,2 ml), 1-Methylnaphthalin (3 ml) und Palladium-auf-Kohle (10%, 500 mg) wird unter einer Argonatmosphäre auf 180°C erhitzt. Nach 3 h zeigt eine TLC Analyse einen vollständigen Verbrauch des Ausgangsmaterials. Das Reaktionsgemisch wird auf RT gekühlt, mit EtOAc verdünnt und filtriert. Nach Entfernung von EtOAc und Reinigung mittels FCC (Hexan 100 zu Hexan/EtOAc 980:20 bis 960:40) wird die Titelverbindung als ein Gemisch erhalten.
Herstellung von (2-Chlor-1-hydroxy-6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydronaphthalin-1-yl)-essigsäureethylester
Eine Lösung von EtOAc (7,2 ml, 73,96 mmol) in THF (20 ml) wird langsam unter einer Argonatmosphäre bei –78°C zu einer Lösung von Lithiumdiisopropylamin (hergestellt aus 10,5 ml Diisopropylamin (73,96 mmol) und 46,2 ml von 1,6 M n-BuLi in Hexan (73,96 mmol)) in THF (20 ml) gegeben. Nach Rüh rung bei –78°C während 30 min erfolgt ein langsamer Zusatz einer Lösung von 2-Chlor-6-methoxy-3,4-dihydro-2H-naphthalin-1-on (7,79 g, 36,98 mmol) in THF (20 ml). Das Reaktionsgemisch wird 24 h bei –78°C gerührt. Eine anschließende TLC Analyse zeigt eine vollständige Umwandlung des Ausgangsmaterials. Das Reaktionsgemisch wird mit EtOAc verdünnt und in eine gesättigte wässrige Lösung von NH₄Cl gegossen. Die organische Schicht wird abgetrennt und mit Kochsalzlösung gewaschen. Nach Trocknung über Na₂SO₄ wird das Lösemittel entfernt. Durch Reinigung mittels FCC (Hexan/EtOAc 920:80 bis 880:120) wird die Titelverbindung mit folgenden physikalischen Daten erhalten:
¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 1,22 (t, J = 9 Hz, 3H), 2,33-2,41 (m, 2H), 2,80-3,12 (m, 4H), 3,12 (s, 1H), 3,78 (s, 3H), 4,12 (q, J = 9 Hz, 2H), 5,01-5,04 (m, 1H), 6,60-6,62 (m, 1H), 6,78-7,82 (m, 1H), 7,52 (d, J = 10 Hz, 1H).
Herstellung von 2-Chlor-6-methoxy-3,4-dihydro-2H-naphthalin-1-on
Eine Lösung von 6-Methoxy-3,4-dihydro-2H-naphthalin-1-on (5,0 g, 28,37 mmol) in THF (25 ml) wird unter einer Argonatmosphäre bei –78°C langsam zu einer Lösung von Lithiumdiisopropylamin in THF (25 ml, Herstellung aus 4,0 ml Diisopropylamin (28,37 mmol) und 17,7 ml 1,6 M n-BuLi in Hexan (28,37 mmol)) gegeben. Nach 30 min bei –78°C erfolgt ein Zusatz von para-Tolylsulfonylchlorid (5,41 g, 28,37 mmol) in THF (25 ml) während 20 min. Das Trockeneiskühlbad wird entfernt, worauf man das Reaktionsgemisch auf RT kommen lässt. Nach 1 h zeigt eine TLC Analyse einen vollständigen Verbrauch des Ausgangsmaterials. Das Reaktionsgemisch wird mit einer gesättigten wässrigen Lösung von NH₄Cl (100 ml) versetzt und 15 min bei RT gerührt. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und konzentriert. Durch eine Reinigung mittels FCC (Hexan/EtOAc 920:80 bis 880:120) wird die Titelverbindung mit folgenden physikalischen Daten erhalten:
¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 2,54-2,63 (m, 1H), 2,68-2,75 (m, 1H), 3,04-3,12 (m, 1H), 3,38-3,46 (m, 1H), 4,02 (s, 3H), 4,72-4,76 (m, 1H), 6,87 (s, 1H), 7,00-7,04 (m, 1H), 8,22 (d, J = 10 Hz, 1H). ES⁺-MS: 279,1, 280,9 [M+H]⁺.

Unter Befolgung des Verfahrens von Beispiel 1, aber Verwendung der geeigneten Ausgangsmaterialien können auch die Verbindungen der Formel A hergestellt werden, worin R_a, R_b, R₂, R₃ und R₄ die in der folgenden Tabelle 2 angegebenen Bedeutungen haben.

Tabelle 2

	R₂	R₃	R₄	R_a	R_b	MS
2.	H	H	H	CH₃	H	MH⁺ 382
3.	H	H	H	H	CH₃	MH⁺ 382
4.	Cl	CH₃	CH₃	H	H	MH⁺ 431
5.	Cl	CH₃	CH₃	H	CH₃	MH⁺ 445
6.	Cl	H	CH₃	H	H	MH⁺ 417
7.	Cl	H	CH₃	H	CH₃	MH⁺ 431
8.	H	H	H	H	H	MH⁺ 368

Die Verbindungen der Formel I in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes verfügen über wertvolle pharmakologische Eigenschaften, beispielsweise eine Inhibition von Proteinkinase C (PKC), beispielsweise von PKC Isoformen entsprechend α, β, δ, ε, η oder θ, und inhibieren T-Zellaktivierung und Proliferation, beispielsweise durch Inhibition einer Produktion durch T-Zellen oder Cytokinen, beispielsweise von IL-2, durch Inhibition der proliferativen Antwort von T-Zellen auf Cytokine, beispielsweise IL-2, wie dies beispielsweise durch in vitro und in vivo Test gezeigt werden kann, und sind daher für eine Therapie indiziert.
A. In vitro
1. Proteinkinase-C Assay
Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden bezüglich ihrer Wirksamkeit auf unterschiedliche PKC Isoformen unter Anwendung des Verfahrens getestet. Der Assay wird in einer Mikrotiterplatte mit 384 Löchern und klarem Boden mit einer nicht bindenden Oberfläche durchgeführt. Das Reaktionsgemisch (25 μl) enthält 1,5 μM eines Tridecapeptidakzeptor als Substrat, welches die Pseudosubstratsequenz von PKC α mimt unter einem Ala → Ser Austausch, mit einer Zusammensetzung von 10 μM ³³P-ATP, 10 mM Mg(NO₃)₂, 0,2 mM CaCl₂, PKC mit einer Proteinkonzentration, die von 25 bis 400 ng/ml (in Abhängigkeit vom verwendeten Isotyp) variiert, Lipidvesikel (mit einem Gehalt von 30 mol% Phosphatidylserin, 5 mol% DAG und 65 mol% Phosphatidylcholin) bei einer finalen Lipidkonzentration von 0,5 mM, in 20 mM Tris-HCl Puffer vom pH 7,4 + 0,1% BSA. Die Inkubation erfolgt während 60 min bei RT. Sodann wird die Reaktion durch Zusatz von 50 μl einer Stoppmischung (100 mM EDTA, 200 μM ATP, 0,1% Triton X-100, 0,375 mg/Loch an mit Streptavidin beschichteten SPA Perlen in einer mit Phosphat gepufferten Kochsalzlösung W/O Ca, Mg, gestoppt. Nach einer Inkubation während 10 min bei RT wird die Suspension während 10 min bei 300 g abgesponnen. Anschließend erfolgt eine Messung der inkorporierten Radioaktivität in einem Trilux Zähler während 1 min. Die Messung des IC₅₀-Werts wird auf einer Routinebasis durch Inkubation einer Reihenverdünnung von Inhibitor bei Konzentrationen im Bereich von 1 bis 1000 μM durchgeführt, wobei die IC₅₀-Werte aus der Grafik berechnet werden durch ein Kurvenfitting mit einer Software XL fit^®.
2. Proteinkinase Cα Assay
Humane rekombinante PKCα wird von Oxford Biomedical Research erhalten und unter Assaybedingungen eingesetzt, wie sie unter dem obigen Abschnitt A. 1 beschrieben sind. Bei diesem Assay inhi bieren Verbindungen der Formel I PKCα mit einem IC₅₀-Wert von ≤ 1 μM. Beispielsweise inhibiert eine Verbindung von Beispiel 6 PKCα mit einem IC₅₀-Wert von 1,1 nM und eine Verbindung von Beispiel 5 mit einem IC₅₀-Wert von 0,9 nM.
3. Proteinkinase Cβ1 Assay
Humane rekombinante PKCβ1 wird von Oxford Biomedical Research erhalten und unter Assaybedingungen eingesetzt, wie sie unter dem obigen Abschnitt A. 1 beschrieben sind. Bei diesem Assay inhibieren Verbindungen der Formel I PKCβ1 mit einem IC₅₀-Wert von ≤ 1 μM. Beispielsweise inhibiert eine Verbindung von Beispiel 5 PKCβ1 mit einem IC₅₀-Wert von 2,3 nM und eine Verbindung von Beispiel 7 mit einem IC₅₀-Wert von 2,3 nM.
4. Proteinkinase Cδ Assay
Humane rekombinante PKCδ wird von Oxford Biomedical Research erhalten und unter Assaybedingungen eingesetzt, wie sie unter dem obigen Abschnitt A. 1 beschrieben sind. Bei diesem Assay inhibieren Verbindungen der Formel I PKCδ mit einem IC₅₀-Wert von ≤ 1 μM. Beispielsweise inhibiert eine Verbindung von Beispiel 4 PKCδ mit einem IC₅₀-Wert von 9,4 nM und eine Verbindung von Beispiel 5 mit einem IC₅₀-Wert von 4,5 nM.
5. Proteinkinase Cε Assay
Humane rekombinante PKCε wird von Oxford Biomedical Research erhalten und unter Assaybedingungen eingesetzt, wie sie unter dem obigen Abschnitt A. 1 beschrieben sind. Bei diesem Assay inhibieren Verbindungen der Formel I PKCε mit einem IC₅₀-Wert von ≥ 1 μM. Beispielsweise inhibiert eine Verbindung von Beispiel 1 PKCε mit einem IC₅₀-Wert von 17,6 nM und eine Verbindung von Beispiel 6 mit einem IC₅₀-Wert von 2,3 nM.
6. Proteinkinase Cη Assay
Humane rekombinante PKCη wird von PanVera erhalten und unter Assaybedingungen eingesetzt, wie sie unter dem obigen Abschnitt A. 1 beschrieben sind. Bei diesem Assay inhibieren Verbindungen der Formel I PKCη mit einem IC₅₀-Wert von ≤ 1 μM. Beispielsweise inhibiert eine Verbindung von Beispiel 3 PKCη mit einem IC₅₀-Wert von 53,9 nM und eine Verbindung von Beispiel 4 mit einem IC₅₀-Wert von 7,2 nM.
7. Proteinkinase Cθ Assay
Humane rekombinante PKCθ wird unter Assaybedingungen wie oben beschrieben eingesetzt. Bei diesem Assay inhibieren Verbindungen der Formel I PKCθ mit einem IC₅₀-Wert von ≤ 1 μM. Beispielsweise inhibiert eine Verbindung von Beispiel 1 PKCθ mit einem IC₅₀-Wert von 19,2 nM und eine Verbindung von Beispiel 7 mit einem IC₅₀-Wert von 6,4 nM.
8. CD28 Costimulationsassay
Der Assay wird mit Jurkat-Zellen durchgeführt, die mit einem Konstrukt eines humanen Interleukin-2-Promotor/Reportergen transfektiert sind, wie dies beschrieben ist von G. Baumann et al. in Trans plant. Proc. 1992, 24, Seiten 43 bis 48, wobei das β-Galactosidase-Reportergen ersetzt ist durch das Luciferasegen, wozu beispielsweise hingewiesen wird auf J. de Wet et al., Mol. Cell Biol. 1987, 7(2), Seiten 725 bis 737. Zellen werden stimuliert durch Festphasen-gekuppelte Antikörper oder durch Phorbolmyristatacetat (PMA) und das Ca⁺⁺ ionophore Ionomycin wie folgt. Für eine durch Antikörper mediierte Stimulation werden Microlite TM1 Mikrotiterplatten (Dynatech) mit 3 μg/ml Ziegen-Antimaus IgG Fc Antikörper (Jackson) in 55 μl Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS) pro Loch während 3 h bei RT beschichtet. Nach Entfernung der Antikörper werden die Platten blockiert durch Inkubation mit 2% Rinderserumalbumin (BSA) in PBS (300 μl pro Loch) während 2 h bei RT. Nach dreimaliger Waschung mit 300 μl PBS pro Loch erfolgt ein Zusatz von 10 ng/ml Anti-T-Zellrezeptorantikörpern (WT31, Becton & Dickinson) und 300 ng/ml Anti-CD28 Antikörpern (15E8) in 50 μl 2%igem BSA/PBS zur Stimulation von Antikörpern und eine Inkubation über Nacht bei 4°C. Schließlich werden die Platten dreimal mit 300 μl PBS pro Loch gewaschen. Sieben Dreifachreihenverdünnungen der Testverbindungen in Duplikaten im Assaymedium (RPMI 1640/10% fötales Kälberserum (FCS) mit einem Gehalt von 50 μM 2-Mercaptoethanol, 100 Einheiten/ml Penicillin und 100 μg/ml Streptomycin) werden in separaten Platten zubereitet, mit transfektierten Jurkat-Zellen (Klon K22 290_H23) vermischt und während 30 min bei 37°C in 5% CO₂ inkubiert. Hierauf werden 100 μl dieses Gemisches, enthaltend 1 × 10⁵ Zellen, in die mit Antikörper beschichteten Assayplatten überführt. Parallel dazu werden 100 μl inkubiert mit 30 ng/ml PMA und 2 μM Ionomycin. Nach einer Inkubation während 5,5 h bei 37°C in 5% CO₂ wird die Menge an Luciferase durch eine Biolumineszenzmessung bestimmt. Die Platten werden 10 min bei 500 g zentrifugiert, und der Überstand wird durch einen leichten Schlag entfernt. Sodann erfolgt ein Zusatz von Lysepuffer mit einem Gehalt von 25 mM Trisphosphat vom pH 7,8, 2 mM DTT, 2 mM 1,2-Diaminocyclohexan-N,N,N',N-tetraessigsäure, 10% (Vol./Vol.) Glycerin und 1% (Vol./Vol.) Triton X-100 (20 μl pro Loch). Sodann werden die Platten 10 min bei RT unter konstantem Schütteln inkubiert. Hierauf wird die Luciferaseaktivität mit einem Biolumineszenzlesegerät (Labsystem, Helsinki, Finnland) nach einer automatischen Zugabe von 50 μl pro Loch Luciferasereaktionspuffer bestimmt, der 20 mM Tricin, 1,07 mM (MgCO₃)₄Mg(OH)₂ × 5H₂O, 2,67 mM MgSO₄, 0,1 mM EDTA, 33,3 mM DTT, 270 μM Coenzym A, 470 μM Luciferin (Chemie Brunschwig AG), 530 μM ATP, pH 7,8 enthält. Die Lag-Zeit beträgt 0,5 s, und die gesamte Messzeit liegt bei 1 oder 2 s. Niedrige Kontrollwerte sind leichte Einheiten von Anti-T-Zellrezeptorzellen oder PMA-stimulierten Zellen, wobei hohe Kontrollen Anti-T-Zellrezeptor/Anti-CD28- oder PMA/Ionomycin-stimulierte Zellen sind ohne irgendeine Testprobe. Niedrige Kontrollen werden von allen Werten subtrahiert. Die Inhibition, die in Gegenwart einer Testverbindung erhalten wird, wird als eine prozentuale Inhibition der hohen Kontrolle berechnet. Die Konzentration von Testverbindungen, die eine 50%ige Inhibition (IC₅₀-Wert) ergibt, wird aus den Dosis-Antwort-Kurven bestimmt. Bei diesem Assay inhibieren Verbindungen der Formel I Anti-T-Zellrezeptoren/Anti-CD28 und PMA/Ionomycin-stimulierte Jurkat-Zellen mit einem IC₅₀-Wert von ≤ 1 μM.
So inhibiert beispielsweise die Verbindung von Beispiel 5 Anti-T-Zellrezeptor/Anti-CD28 und PMA/Ionomycin-stimulierte Jurkat-Zellen mit einem IC₅₀-Wert von 11,5 nM und eine Verbindung von Beispiel 7 mit einem IC₅₀-Wert von 27,5 nM.
9. Allogen-gemischte Lymphozytenreaktion (MLR)
Das Zweiweg-MLR wird nach Standardverfahren durchgeführt, wozu beispielsweise hingewiesen wird auf J. Immunol. Methods, 1973, 2, Seite 279 und auf T. Meo et al., Immunological Methods, New York, Academic Press, 1979, Seiten 227 bis 239). Milzzellen von CBA und BALB/c Mäusen (1,6 × 10⁵ Zellen eines jeden Stamms pro Loch in flachbödigen Gewebekulturmikrotiterplatten, insgesamt 3,2 × 10⁵) werden in RPMI Medium inkubiert, das 10% FCS, 100 Einheiten/ml Penicilin, 100 μg/ml Streptomycin (Gibco BRL, Basel, Schweiz), 50 μM 2-Mercaptoethanol (Fluka, Buchs, Schweiz) und in Serie verdünnten Verbindungen. Es werden sieben Dreifachverdünnungsstufen in Duplikaten pro Testverbindung durchgeführt. Nach vier Tagen wird zur Inkubation ein 1 μCi ³H-Thymidin zugesetzt. Nach einer Inkubationsdauer von weiteren 5 h werden die Zellen geerntet, wobei das inkorporierte ³H-Thymidin nach Standardverfahren bestimmt wird. Die Hintergrundwerte (niedrige Kontrolle) der MLR sind die Proliferation der BALB/c Zellen allein. Niedrige Kontrollen werden von allen Werten subtrahiert. Hohe Kontrollen ohne irgendeine Probe werden als eine Proliferation von 100% angesehen. Die prozentuale Inhibition durch die Proben wird berechnet, wobei die Konzentrationen bestimmt werden, die für eine 50%ige Inhibition IC₅₀-Werte erforderlich sind. Hierbei inhibiert beispielsweise eine Verbindung des Beispiels 5 unter einem IC₅₀-Wert von 183 nM und eine Verbindung des Beispiels 7 unter einem IC₅₀-Wert von 528 nM.
B. In vivo
Transplantation eines Rattenherzes
Hierzu wird die Stammkombination von männlichen Lewis (RT¹ Haplotyp) und BN (RT¹ Haplotyp) verwendet. Die Tiere werden durch Inhalation von Isofluoran anästhesiert. Nach einer Heparinisierung der Donorratte durch die abdominale untere Hohlvene mit einer gleichzeitigen Ausblutung über die Aorta, wird die Brust geöffnet und das Herz rasch abgekühlt. Die Aorta wird ligiert und distal zur ersten Abzweigung dividiert und der Truncus brachiocephalicus bei der ersten Bifurkation aufgeteilt. Die linke Lungenarterie wird ligiert und dividiert, und die rechte Seite wird dividiert, aber offen gelassen. Alle anderen Gefäße werden frei dissektiert, ligiert und dividiert, und das Donorherz wird in eine geeiste Kochsalzlösung entfernt.
Der Rezipient wird vorbereitet durch Dissektion und Kreuzklammerung der infrarenalen Abdominalaorta und der Hohlvene. Sodann wird das Transplantat implantiert mit Ende-an-Seite Anastomosen, unter Verwendung einer 10/0 Monofilamentnaht zwischen dem Truncus brachiocephalicus des Donors und der Aorta des Rezipienten und der rechten pulmonalen Arterie des Donors zur Hohlvene des Rezipienten. Die Klammern werden entfernt, das Implantat retroabdominal angebunden, die Abdominalinhalte werden mit warmer Kochsalzlösung gewaschen, worauf man das Tier schließt und sich unter einer Wärmelampe erholen lässt. Die Überlebenszeit des Implantats wird durch eine tägliche Palpation des schlagenden Nerzes des Donors durch die Abdominalwand überwacht. Eine Abstoßung wird als vollständig angesehen, wenn das Herz zu schlagen aufhört. Erhöhungen der Überlebenszeit des Transplantats sind bei Tieren zu beobachten, denen oral eine Tagesdosis von 1 bis 100 mg/kg bid, vorzugsweise von 1 bis 30 mg/kg bid einer Verbindung der Formel I verabreicht wurde.
Transplantat-gegen-Wirt-Modell
Milzzellen (2 × 10⁷) von Wistar/F Ratten werden subkutan in die rechte Hinterpfote von F₁ Hybridratten (Wistar/F × Fischer 344) injiziert, wobei die linke Pfote unbehandelt bleibt. Die Tiere werden mit den Testverbindungen an 4 aufeinanderfolgenden Tagen (0 bis 3) behandelt. Die poplitealen Lymphknoten werden am Tag 7 entfernt, worauf die Gewichtsdifferenzen zwischen den beiden Lymphknoten bestimmt werden. Die Ergebnisse sind ausgedrückt als die prozentuale Inhibition einer Vergrößerung von Lymphknoten (in Prozent angegeben) im Vergleich zu den Gewichtsdifferenzen des Lymphknotens in den Experimentalgruppen, zur Gewichtsdifferenz zwischen den entsprechenden Lymphknoten einer Tiergruppe, die nicht mit einer Testverbindung behandelt worden ist. Dabei werden Effekte einer Vergrößerung des Lymphknotens bei Tieren erhalten, denen oral eine Tagesdosis von 1 bis 100 mg/kg bid verabreicht worden ist.
Die Verbindungen der Formel I sind daher brauchbar für die Behandlung und/oder Prävention von Krankheiten oder Störungen, die mediiert werden durch T-Lymphozyten und/oder PKC, wie eine akute oder chronische Abstoßung eines Organs eines Gewebes von Allo- oder Xenotransplantaten, von Transplantat-gegen-Wirt-Krankheiten, Atherosklerose, Vaskularokklusion infolge einer Gefäßschädigung, wie Angioplastie, Restenose, Obesität, Syndrom X, beeinträchtigte Glucosetoleranz, polyzystischem Ovarialsyndrom, Hypertension, Herzversagen, chronischer obstruktiver Pulmonalkrankheit, CNS-Krankheiten, wie Alzheimer-Krankheit oder amyotrophische Lateralsklerose, infektiöse Krankheiten, wie AIDS, septischer Schock oder akute respiratorische Insuffizienz (ARDS), Ischämie/Reperfusionsschädigung, beispielsweise Myokardinfarkt, Schlag, Darmischämie, Nierenversagen oder hämorrhagischer Schock oder traumatischer Schock, beispielsweise Hirntrauma durch Verletzung. Die Verbindungen der Formel I eignen sich auch für die Behandlung und/oder Prävention von durch T-Zellen mediierten akuten oder chronischen inflammatorischen Krankheiten oder Störungen oder von Autoimmunkrankheiten, wie rheumatoider Arhtritis, Osteoarthritis, systemischem Lupus erythematodes, Hashimoto-Thyreoiditis, multipler Sklerose, Myasthenia gravis, Diabetes Typ 1 oder 2 und damit assoziierten Störungen, Respirationskrankheiten, wie Asthma oder inflammatorischer Lungenschaden, inflammatorischer Leberschaden, inflammatorischer glomerularer Schaden, kutaner Manifestationen, immunologisch mediierter Störungen oder Krankheiten, inflammatorischer und hyperproliferativer Hautkrankheiten (wie Psoriasis, atopische Dermatitis, allergischer Kontaktdermatitis, Kontaktreizdermatitis und weiter auch ekzematischer Dermatitis und seborrhöischer Dermatitis), inflammatorischer Augenkrankheiten, wie Sjögren-Syndrom, Keratokonjunktivitis oder Uveitis, inflammatorischer Darmkrankheit, Crohn-Krankheit oder ulzeröser Kolitis. Die für die obigen Anwendungen erforderliche Dosis ist natürlich abhängig von der Art der Verabreichung, dem besonderen Zustand des zu behandelnden Patienten und dem gewünschten Effekt. Allgemein können zufriedenstellende Ergebnisse systematisch erwartet werden bei Tagesdosen von etwa 0,1 bis 100 mg/kg Körpergewicht. Eine indizierte Tagesdosis bei einem größeren Säuger, beispielsweise bei Menschen, liegt im Bereich von etwa 0,5 mg bis etwa 2000 mg, zweckmäßig verabreicht beispielsweise in unterteilten Dosen von bis zu viermal täglich oder als Retardform.
Die Verbindungen der Formel I können nach irgendeinem herkömmlichen Weg verabreicht werden, besonders enteral, beispielsweise oral, beispielsweise in Form von Tabletten oder Kapseln, oder parenteral, beispielsweise in Form injizierbarer Lösungen oder Suspensionen, topisch, beispielsweise in Form von Lotionen, Gelen, Salben oder Cremes, oder einer nasalen Form oder in Form eines Supposito riums. Pharmazeutische Zusammensetzungen, die eine Verbindung der Formel I in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes in Assoziation mit wenigstens einem pharmazeutisch annehmbaren Träger oder Verdünnungsmittel umfassen, können in herkömmlicher Weise hergestellt werden durch Vermischung mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger oder Verdünnungsmittel. Einheitsdosierungsformen für eine orale Verabreichung enthalten beispielsweise etwa 0,1 mg bis etwa 500 mg Wirkstoff.
Eine topische Verabreichung erfolgt beispielsweise auf die Haut. Eine weitere Form einer topischen Verabreichung ist das Auge.
Die Verbindungen der Formel I können in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes verabreicht werden, wie dies beispielsweise oben angegeben ist. Solche Salze können in herkömmlicher Weise hergestellt werden und zeigen größenordnungsmäßig die gleiche Aktivität wie die freien Verbindungen.
Den obigen Ausführungen entsprechend gehören zur vorliegenden Erfindung daher auch

1. Eine Verbindung der Formel I in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes für die Verhinderung oder Behandlung von Störungen oder Krankheiten, die mediiert werden durch T-Lymphozyten und/oder PKC, wie oben angegeben, oder zur Verhinderung oder Behandlung einer akuten oder chronischen Transplantatabstoßung oder inflammatorischer oder autoimmuner Krankheiten, die durch T-Zellen mediiert werden, wie dies oben angegeben ist.
2. Eine pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung der Formel I in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes hiervon in Assoziation mit einem pharmazeutisch akzeptablen Verdünnungsmittel oder Träger hiervon für die Verhinderung oder Behandlung von Störungen oder Krankheiten, die mediiert werden durch T-Lymphozyten und/oder PKC, wie oben angegeben, oder zur Verhinderung oder Behandlung einer akuten oder chronischen Transplantatabstoßung oder inflammatorischer oder autoimmuner Krankheiten, die durch T-Zellen mediiert werden, wie dies oben angegeben ist.
3. Eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon zur Verwendung für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung für die Verhinderung oder Behandlung von Störungen oder Krankheiten, die mediiert werden durch T-Lymphozyten und/oder PKC, wie oben angegeben, oder zur Verhinderung oder Behandlung einer akuten oder chronischen Transplantatabstollung oder inflammatorischer oder autoimmuner Krankheiten, die durch T-Zellen mediiert werden, wie dies oben angegeben ist.

Die Verbindungen der Formel I können als der einzige Wirkstoff verabreicht werden oder zusammen mit anderen Wirkstoffen in immunmodulierenden Behandlungsplänen oder mit anderen antiinflammatorischen Mitteln, beispielsweise für die Behandlung oder Prävention einer akuten oder chronischen Abstoßung eines Allotransplantats oder eines Xenotransplantats, oder für inflammatorische oder autoimmune Störungen. Sie können beispielsweise verwendet werden in Kombination mit Cyclosporinen oder Ascomycinen oder immunsuppressiven Analoga oder Derivaten hiervon, wie beispielsweise Cyclosporin A, ISA Tx247, FK-506, ABT-281, ASM 981, einem mTOR Inhibitor, beispielsweise Rapamycin, 40-O-(2-Hydroxyethyl)-rapamycin, CCI779, ABT578, oder einem Rapalog, beispielsweise AP23573, AP23464, AP23675, AP23841, TAFA-93, Biolimus 7 oder Biolimus 9, und dergleichen, Corticosteroiden, Cyclophosphamid, Azathiopren, Methotrexat, einem EDG Rezeptoragonisten mit beschleunigten Lym phozytenzieleigenschaften, wie FTY 720 oder einem Analogon hiervon, Leflunomid oder Analoga hiervon, Mizoribin, Mycophenolsäure oder einem Salz hiervon, wie Natiumsalz, Mycophenolatmofetil, 15-Deoxyspergualin oder Analoga hiervon, immunsuppresiven monoklonalen Antikörpern, wie monoklonalen Antikörpern zu Leukozytenrezeptoren, wie MHC, CD2, CD3, CD4, CD11a/CD18, CD7, CD25, CD27, B7, CD40, CD45, CD58, CD137, ICOS, CD150 (SLAM), OX40, 4–1 BB oder deren Liganden, wie CD154, oder anderen immunmodulatorischen Verbindungen, wie einem rekombinanten Bindungsmolekül mit wenigstens einem Teil der extrazellularen Domain von CTLA4 oder einer Mutante hiervon, wie einem wenigstens extrazellularen Teil von CTLA4 oder einer Mutante hiervon, der an eine nicht-CTLA4 Proteinsequenz gebunden ist, wie CTLA4lg (beispielsweise benanntes ATCC 68629) oder einer Mutante hiervon, wie LEA29Y, oder anderen Adhäsionsmolekülinhibitoren, wie mAbs oder Inhibitoren mit niedrigem Molekulargewicht unter Einschluss von LFA-1 Antagonisten, Selectinantagonisten und VLA-4 Antagonisten. Verbindungen der Formel I können auch zusammen mit einem antiproliferativen Wirkstoff verabreicht werden, wie einem chemotherapeutischen Wirkstoff, wie verwendet bei der Behandlung von Krebs, einschließend aber nicht beschränkt auf Aromataseinhibitoren, Antiöstrogenen, Topoisomerase I Inhibitoren, Topoisomerase II Inhibitoren, Mikrotubuluswirkstoffen, Alkylierungsmittel, Histondeacetylaseinhibitoren, Farnesyltransferaseinhibitoren, COX-2 Inhibitoren, MMP Inhibitoren, mTOR Inhibitoren, antineoplastischen Antimetaboliten, Platinverbindungen, Verbindungen zur Erniedrigung der Proteinkinaseaktivität und weiteren antiangiogenen Verbindungen, Gonadorelinagonisten, Antiandrogenen, Bengamiden, Bisphosphonaten, antiproliferativen Antikörpern und Temozolomiden, oder mit einem antidiabetischen Wirkstoff, einem Insulinsekretagogen oder Insulinsekretionsverbesserer, wie Sulfonylharnstoff, beispielsweise Tolbutamid, Chlorpropamid, Tolazamid, Acetohexamid, 4-Chlor-N-[(1-pyrrolidinylamino)-carbonyl]-benzolsulfonamid (Glycopyramid), Glibenclamid (Glyburid), Gliclazid, 1-Butyl-3-metanilylharnstoff, Carbutamid, Glibonurid, Glipizid, Gliquidon, Glisoxepid, Glybuthiazol, Glibuzol, Glyhexamid, Glymidin, Glypinamid, Phenbutamid oder Tolylcyclamid, einem Derivat eines oralen insulinotropen Mittels, wie einem kurz wirkenden Insulinenhancer, wie Meglitinid, Repaglinid, einem Phenylessigsäurederivat, wie Nateglinid, einem DPP IV Inhibitor, wie 1-{2-[(5-Cyanopyridin-2-yl)-amino]-ethylamino}-acetyl-(2S)-cyanopyrrolidindihydrochlorid, LAF237, GLP-1 oder einem GLP-1 Agonistenanalogon, oder einem Insulinsensitizer, wie einem Peroxisom-Proliferator-aktivierten Rezeptor γ Agonisten (PPARγ), wie Glitazon, ein nicht-Glitazon Typ wie ein Analogon von N-(2-Benzoylphenyl)-L-tyrosin, wie GI-262570, oder ein Oxolidindion, wie JTT501, einem dualen PPARγ/PPARα Agonisten, wie DRF-554158, NC-2100 oder NN-622, einem Retinoid X Rezeptoragonisten oder ein Rexinoid, wie 2-[1-(3,5,5,8,8-Pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydro-2-naphthyl)-cyclopropyl]-pyridin-5-carbonsäure, 4-[(3,5,5,8,8-Pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydro-2-naphthyl)-2-carbonyl]-benzoesäure, 9-cis-Retinolsäure oder ein Analogon, Derivat oder pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon, für die Therapie von Diabetes.
Den obigen Ausführungen entsprechend betrifft die vorliegende Erfindung in einem wiederum weiteren Aspekt auch

4. Eine therapeutische Kombination, umfassend a) einen Inhibitor für PKC oder für eine Aktivierung oder Proliferation von T-Zellen, der eine Verbindung der Formel I in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes ist, und b) wenigstens ein zweites Mittel, das ausgewählt ist aus einem immunsuppressiven, immunmodulatorischen, antiinflammatorischen oder antiproliferativen und antidiabetischen Wirkstoff. Die Komponenten a) und b) können gleichzeitig oder aufeinanderfolgend verwendet werden. Eine solche Kombination kann auch eine Gebrauchsanweisung für ihre Verabreichung enthalten.

Ist ein Inhibitor für eine PKC- oder eine T-Zellen-Aktivierung oder Proliferation beispielsweise eine Verbindung der Formel I, dann wird dieser in Verbindung mit einer sonstigen immunsuppressiven/immunmodulatorischen, antiinflammatorischen, antiproliferativen oder antidiabetischen Therapie verabreicht, beispielsweise zur Verhinderung oder Behandlung einer akuten oder chronischen Transplantatabstoßung oder inflammatorischer oder autoimmuner Krankheiten der hierin beschriebenen Art, dann schwanken die Dosierungen an co-verabreichter immunsuppresiver, immunmodulatorischer, antiinflammatorischer, antiproliferativer oder antidiabetischer Verbindung natürlich in Abhängigkeit von der Art eines solchen weiteren Wirkstoffs, beispielsweise ob dieser Wirkstoff ein Steroid oder ein Cyclosporin ist, vom jeweils verwendeten speziellen Wirkstoff, dem zu behandelnden Zustand usw.
Die Verbindungen der Formel I verfügen über ein interessantes pharmakokinetisches Profil und zeigen sowohl in vitro als auch in vivo interessante Aktivitäten.

Claims

Verbindung der Formel I
worin R_a für H, C₁-C₄-Alkyl oder C₁-C₄-Alkyl steht, das substituiert ist durch OH, NH₂, NHC₁-C₄-Alkyl oder N-(Di-C₁-C₄-Alkyl)₂, einer der Substituenten R_b, R_c, R_d und R_e für Halogen, C₁-C₄-Alkoxy oder C₁-C₄-Alkyl steht und die anderen drei Substituenten für Wasserstoff stehen, oder R_b, R_d und R_e insgesamt Wasserstoff sind, und R für einen Rest der folgenden Formel (a) steht
worin R₁ für -(CH₂)_n-NR₃R₄ steht, worin R₃ und R₄ jeweils unabhängig für H oder C₁-C₄-Alkyl stehen, oder die Substituenten R₃ und R₄ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen heterocyclischen Rest bilden, n für 0, 1 oder 2 steht, und R₂ für H, Halogen, C₁-C₄-Alkyl, CF₃, OH, SH, NH₂, NO₂, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Alkylthio, NHC₁-C₄-Alkyl, N-(Di-C₁-C₄-Alkyl)₂ oder CN steht, oder ein Salz hiervon.
Verbindung nach Anspruch 1, worin R_a für H oder Methyl steht, einer der Substituenten R_b, R_c, R_d und R_e für Methyl oder Ethyl steht und die anderen drei Substituenten für Wasserstoff stehen, oder R_b, R_c, R_d und R_e insgesamt für Wasserstoff stehen, R₂ für H, Cl, Methyl oder NO₂ steht, n für 1 steht, und R₃ und R₄ jeweils unabhängig für H, Methyl, Ethyl oder i-Propyl steht, oder R₃ und R₄ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen heterocyclischen Rest bilden, oder ein Salz hiervon.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, die ausgewählt ist aus 3-(2-Chlor-6-dimethylaminomethylnaphthalin-1-yl)-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion, 3-(2-Chlor-6-methylaminomethylnaphthalin-1-yl)-4-(1H-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion, 3-(6-Aminomethylnaphthalin-1-yl)-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion, 3-(2-Chlor-6-dimethylaminomethylnaphthalin-1-yl)-4-(1H-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion, 3-(2-Chlor-6-dimethylaminomethylnaphthalin-1-yl)-4-(7-methyl-1H-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion, 3-(2-Chlor-6-methylaminomethylnaphthalin-1-yl)-4-(7-methyl-1H-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion, 3-(6-Aminomethylnaphthalin-1-yl)-4-(1H-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion, 3-(6-Aminomethylnaphthalin-1-yl)-4-(7-methyl-1H-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion, oder einem Salz hiervon.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes, zur Verwendung als ein Pharmazeutikum.
Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes, in Assoziation mit einem pharmazeutisch akzeptablen Verdünnungsmittel oder Träger hierfür.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes, oder einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach Anspruch 5, zur Herstellung eines Arzneimittels für die Behandlung oder Verhinderung von Krankheiten oder Störungen, die durch T-Lymphozyten und/oder PKC mediiert werden.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes, oder einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach Anspruch 5, zur Herstellung eines Arzneimittels für die Behandlung und/oder Prävention von durch T-Zellen mediierten oder akuten chronischen inflammatorischen Krankheiten oder Störungen, Autoimmunkrankheiten, Transplantatrejektion, Krebs oder Infektionskrankheiten.
Pharmazeutische Kombination, umfassend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes, und ein weiteres Mittel, das ausgewählt ist aus immunsuppressiven, immunmodulatorischen, antiinflammatorischen, chemotherapeutischen, antiprofliferativen und antidiabetischen Mitteln.
Kombination nach Anspruch 8, worin das zweite Mittel ein Cyclosporin oder ein immunsuppressives Analogon oder Derivat hiervon, ein Ascomycin oder ein immunsuppressives Analogon oder Derivat hiervon, ein mTOR-Inhibitor, ein Corticosteroid, ein Cyclophosphamid, Azathiopren, Methotrexat, ein EDG-Rezeptoragonist mit Eigenschaften, die eine Lymphozytenrückkehr beschleunigen, Leflunomid oder ein Analogon hiervon, Mizoribin, Mycophenolsäure, Mycophenolatmofetil, 15-Deoxyspergualin oder ein Analogon hiervon, ein immunsuppressiver monoklonaler Antikörper, CTLA4lg oder eine Mutante hiervon, mAbs oder ein Inhibitor mit niederem Molekulargewicht ist.
Verfahren zur Herstellung der Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 oder 2, durch Umsetzung einer Verbindung der Formel II
worin R_a, R_b, R_c, R_d und R_e wie in Anspruch 1 und 2 definiert sind, mit einer Verbindung der Formel III R-CH₂-CO-NH₂ (III)worin R wie in Anspruch 1 und 2 definiert ist, und erforderlichenfalls Umwandlung einer Verbindung der Formel I, die in der freien Form erhalten worden ist, in die Form eines Salzes oder umgekehrt, wie dies jeweils passend ist.