CN101928253A

CN101928253A - 2-[5-(2-羟苯基)-4h-1,2,4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐及制备和应用

Info

Publication number: CN101928253A
Application number: CN2009100708438A
Authority: CN
Inventors: 卢俊瑞; 朱姗姗
Original assignee: Tianjin University of Technology
Current assignee: Tianjin University of Technology
Priority date: 2009-10-16
Filing date: 2009-10-16
Publication date: 2010-12-29
Anticipated expiration: 2029-10-16
Also published as: CN101928253B

Abstract

本发明提供了一种式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用的盐及其制备方法和在抗微生物方面的应用。取代水杨酸甲酯和水合肼反应生成取代水杨酰肼，再和硫氰酸铵、酸反应，所得产物进一步在碱性条件下反应生成化合物II，最后与取代卤代苯乙酮发生亲核取代反应生成2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物，通式如下。该类化合物或其可药用的盐在抗真菌、抗革兰氏阴性菌等药物开发方面有重要应用前景。

R：H，F，Cl，Br，I；R₁～R₅：H，F，Cl，Br，I，CH₃，C₂H₅，C₃H₇，C₄H₉，NH₂，OH，OCH₃，OC₂H₅，NO₂。

Description

2-[5-(2-羟苯基)-4H-1,2,4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐及制备和应用

技术领域

本发明涉及一种三唑类化合物及其制备方法和在抗微生物方面的应用；特别涉及一种式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用的盐及其制备方法和应用。

本发明提供的式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用的盐在抗真菌、抗革兰氏阴性菌等药物开发方面有重要应用前景。

背景技术

近些年来，由免疫缺陷或使用抗癌药品导致的缺陷免疫力宿主身上的真菌感染已成为诱发由于真菌感染造成的真菌病的严重问题。于是为解决这个难题研究出了各种抗真菌剂。例如EP.A.333059公开了具有三唑结构的化合物，其具有农用抗真菌活性；但是没有公开其医学用途和对人或动物的真菌感染的抑制作用，又例如ZL02136947.X，其公开了一种三氮唑醇的抗真菌化合物，其抗真菌效果较好，但与酮康唑相比其在抗真菌效果上不具备明显的优势。

为了克服上述现有技术中化合物对抗真菌的缺陷，我们对上述化合物进行了进一步的研究，惊喜地发现，将邻羟基二苯醚类化合物和唑类化合物(现有的抗菌剂)中的核心结构片断依据生物活性叠加原理进行进一步的改造后得到式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用的盐，对抗真菌效果尤为突出，同时大大降低了副作用。

目前，由于严重感染、器官移植、恶性肿瘤患者由于免疫功能低下或抑制，易伴发条件致病性感染特别是真菌感染。三唑类抗真菌药物主要有氟康唑，这类药物对白色念珠菌显示了良好的抗菌效果。但是大多数克柔念珠菌对氟康唑呈现耐药性。由于长期反复和大剂量应用，耐药菌株和发生率日趋升高，已引起医学界和药学界的广泛关注。因此，开发新型的低毒、抗菌谱广、耐药性强的抗菌药已成为急需研究的问题。

因此，本发明提供了一种具有极强抗菌活性的式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用的盐，经生物活性测试表明，该类化合物对真菌、革兰氏阴性菌等均表现出极强的抑菌活性，具有很好的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用的盐及其制备方法和在抗微生物方面的应用，它在抗真菌、抗革兰氏阴性菌等药物开发方面有重要应用前景。

为实现上述目的，本发明提供了一种式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐，其化学结构式为：

R：H，F，Cl，Br，I 式(III)

R₁～R₅：H，F，Cl，Br，I，CH₃，C₂H₅，C₃H₇，C₄H₉，NH₂，OH，OCH₃，OC₂H₅，NO₂。

本发明包括式III定义的化合物的可药用盐。根据本发明的化合物可具有足够的酸性、足够的碱性或两者的功能基，并因此与许多有机或无机碱或有机或无机酸而形成可药用盐。此处使用的术语“可药用盐”指式III化合物的盐，其对活的有机体基本上无毒。典型的可药用盐包括那些通过本发明的化合物与可药用无机或有机酸或有机或无机碱形成的盐。这些盐被称为酸加成盐或碱加成盐。

用于形成酸加成盐的酸通常包括无机酸，例如氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸等，有机酸，例如对-甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对-溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸等。优选的可药用酸加成盐为那些与无机酸如氢氯酸和氢溴酸形成的盐和那些与有机酸如马来酸和甲基苯磺酸形成的盐。

胺基盐可包括季铵盐，其中氨基的氮上连接有适宜的有机基团，如烷基、低级链烯基、取代的低级链烯基、低级炔基、取代的低级炔基或芳烷基部分。

碱加成盐包括那些衍生自无机碱的盐，无机碱如铵或碱金属或碱土金属氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐。因此。在制备本发明的盐中有用的碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、氢氧化钙、碳酸钙等。

本发明还提供了一种式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其药学上可接受盐在制备抗真菌、革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌或抗病毒药物的应用。本发明部分优选化合物或其药学上可接受盐有：

(A)：2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮；

(B)：2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对氯苯乙酮；

(C)：2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对溴苯乙酮；

(D)：2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对甲基苯乙酮；

本发明所提供的制备方法是：取代水杨酸甲酯和水合肼反应生成取代水杨酰肼，再和硫氰酸铵、酸反应，所得产物进一步在碱性条件下反应生成化合物II，最后与取代卤代苯乙酮发生亲核取代反应生成目标化合物，其合成路线如下：

R：H，F，Cl，Br，I R₁～R₅：H，F，Cl，Br，I，CH₃，C₂H₅，C₃H₇，C₄H₉，NH₂，OH，OCH₃，OC₂H₅，NO₂ R₆：Cl，Br

本发明的制备方法描述如下：

a、取代水杨酰肼(I)的合成：

以取代水杨酸甲酯和水合肼为原料，取代水杨酸甲酯和水合肼的摩尔比控制在1∶1.0-2.0，优选的摩尔比是1∶1.3-1.5；选用的溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、仲丁醇、丁二醇、正戊醇、异戊醇、正己醇、环己醇、正庚醇、正辛醇、异辛醇、仲辛醇、乙腈、二氯甲烷、氯仿、丙酮或乙醚中的一种或者它们的混合物，温度在40℃～200℃之间加热回流，反应完毕，减压蒸馏脱去部分溶剂，冷却，抽滤，把所得滤饼重结晶，所用溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇或叔丁醇中的一种或者它们的混合物或者它们和水的混合物。

b、5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫酮类化合物(II)的合成：

将取代水杨酰肼溶在溶剂中，所用溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、仲丁醇、丁二醇、正戊醇、异戊醇、正己醇、环己醇、正庚醇、正辛醇、异辛醇、仲辛醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷或氯仿中的一种或者它们的混合物，搅拌溶解至澄清，常温下加入硫氰酸铵和酸(盐酸、稀硝酸、氢溴酸、磷酸、亚磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、异丁酸、正戊酸、正己酸、正庚酸、正辛酸、异辛酸、苯甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、氯磺酸、甲基磺酸或氨基磺酸中的一种或者它们的混合物)。温度控制在40℃～200℃加热回流，TLC跟踪反应，原料斑点消失后停止反应，减压蒸馏脱去部分溶剂，冷却，抽滤，所得固体干燥后直接用于下一步反应。

将第一步产物溶于碱的水溶液中，所用碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、碳酸氢钠、碳酸氢钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸锂、硫酸氢钠、硫酸氢钾、磷酸钠、磷酸氢二钠或磷酸二氢钠中的一种或者它们的混合物，搅拌下升温至40℃～200℃加热回流，TLC 跟踪反应，反应完毕，冷却，用酸调pH，其中pH值应控制在2～10，最佳pH值为5～6。如果pH值太大或者太小，产物就会以盐的形式存在而溶于水中，从而无法析出，使其收率降低。调pH时有大量固体析出，抽滤，把滤饼水洗至中性，用适当溶剂重结晶。

c、溴代苯乙酮的合成：

在装有冷凝管(冷凝管上端接氯化钙干燥管及氯化氢吸收装置)、温度计及50mL恒压滴液漏斗的250mL三口瓶中分别加入苯乙酮，无水乙醚，冰盐浴冷却至0℃以下，搅拌下滴加液溴，先滴加一滴，等颜色褪去后再继续滴加，控制滴加速度，约2h滴完。维持反应温度继续搅拌30min左右至颜色褪去，停止反应。将反应液倒入500mL分液漏斗中，用冰水洗涤分去水层，反复水洗至有机相成中性，用无水硫酸镁干燥过夜。滤去硫酸镁再减压蒸去溶剂，粗品为淡黄色固体，用1∶1的乙醇和水重结晶得白色片状晶体。

d、取代氯代苯乙酮的合成：

在装有冷凝管(冷凝管上端接氯化钙干燥管及氯化氢吸收装置)、温度计及50mL恒压滴液漏斗的250mL三口瓶中分别加入取代苯，无水三氯化铝和无水二硫化碳，常温搅拌下滴加氯乙酰氯，控制滴加速度，滴加完毕再反应0.5h，缓慢升温至回流反应。将反应液缓慢倒入装有冰水和浓盐酸混合物的烧杯中，并搅拌0.5h后于室外放置过夜。过滤，滤饼用合适溶剂重结晶。

e、2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物(III)的合成：

在装有冷凝管、温度计及50mL恒压滴液漏斗的250mL三口瓶中分别加入适量水、5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫酮类化合物和等物质的量的碱，所用碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、碳酸氢钠、碳酸氢钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸锂、硫酸氢钠、硫酸氢钾、磷酸钠、磷酸氢二钠或磷酸二氢钠中的一种或者它们的混合物，搅拌使其溶解得澄清液。常温搅拌下滴加取代卤代苯乙酮和乙醇的混合溶液或者分批加入取代卤代苯乙酮。滴加过程中有固体析出，滴加完毕，升温至40℃～200℃，将反应混合物加热回流，TLC跟踪反应，原料斑点消失后停止反应。将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用适当溶剂重结晶，得目标化合物。

为了得到亲核性强的硫醇负离子，需要使用强碱性物质(优选氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂)，因此将硫酮溶于碱的水溶液中使其生成巯基负离子，这样便能很好地与取代卤代苯乙酮发生亲核取代反应生成目标化合物。其中，硫酮和碱的摩尔比控制在1∶1.0～2.0，优选的摩尔比是1∶1.0～1.1。如果摩尔比太小硫酮反应不完，摩尔比太大就会有其它产物生成，收率降低。

f、抑菌活性测试方法如下：

实验原料

本试验所用菌株，包括白色念珠菌(ATCC10231)、大肠杆菌(8099)和金黄色葡萄球菌(ATCC6538)均由中国科学院微生物研究所提供；所用的培养基为沙氏琼脂培养基和营养琼脂培养基。

抑菌实验的实验方法

实验检测依据以及菌悬液、活菌计数均参照GB15979-2002《一次性使用卫生标准》。

试验样品质量体积分数为0.1％、0.05％、0.01％，溶剂为V(DMF)∶V(H₂O)＝1∶4。

具体操作如下：将试验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液(要求的浓度为：用100μL滴于对5mL样液内，回收菌数为(1×10⁴～9×10⁴cfu·mL^-1)。取被试样液(5mL)和对照样液(与试样同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理)各4管。取上述菌悬液，分别在每个被试样液和对照样液上滴加100μL，均匀混合，开始计时，作用20min，用无菌刻度吸管分别将样液(0.5mL)吸入含4.5mLPBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2～3个稀释度，分别吸取0.5mL，置于两个培养皿，用凉至40～45℃的沙氏琼脂培养基(酵母菌)15mL作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃±2℃培养48h(细菌)，作活菌菌落计数。实验重复1次，按下式计算抑菌率：

X₄＝(A-B)/A×100％

式中：X₄——抑菌率，％；

A——对照样品平均菌落数；

B——被试样品平均菌落数。

本发明的有益效果是：

本发明提供了一种式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用的盐及其制备方法和在抗微生物方面的应用。这类化合物不仅合成步骤简单、生产成本低，而且产率较高，结构新颖。本发明从设计、生产到应用都符合环境友好和绿色化学的要求。

2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物对白色念珠菌、大肠杆菌具有强抑菌活性，对金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌活性。这表明这类化合物对不同菌株的抑菌活性具有明显的选择性和特异性，在抗真菌、抗革兰氏阴性菌等药物开发方面有重要应用前景。

本发明制备过程中的合成方法成本低、步骤简单、反应条件温和、产率高、易于后处理；并为安全高效抗微生物新药研制提供了先导化合物。

具体实施方式

以下结合具体实施例对依据本发明提供的具体实施方式、特征详述如下：

本发明制备过程中取代水杨酸甲酯和水合肼反应生成取代水杨酰肼，再和硫氰酸铵、酸反应，所得产物进一步在碱性条件下反应生成化合物II，最后与取代卤代苯乙酮发生亲核取代反应生成目标化合物，合成路线如下：

实施例1：

水杨酰肼的合成：

100mL的三口瓶中，将0.10mol水杨酸甲酯和0.13mol水合肼溶于40mL无水乙醇中，室温搅拌，溶液无色透明，80℃加热回流，此温度下反应约9h，TLC跟踪反应，展开剂为V(乙酸乙酯)∶V(石油醚)＝1∶5(体积比)，原料斑点消失后停止反应，冷却后旋干溶剂，抽滤得白色固体，乙醇重结晶得白色粉末，产率：88.7％，熔程：147～148℃。

实施例2：

5-(2-羟苯基)-1，2，4-三唑-3-硫酮的合成及结构鉴定：

100mL的三口瓶中，将0.01mol水杨酰肼溶于50mL乙醇中，搅拌溶解至澄清。常温下加入0.011mol硫氰酸铵，2mL浓盐酸。搅拌下升温至80℃，将反应混合物加热回流，TLC跟踪反应，展开剂为V(乙酸乙酯)∶V(石油醚)＝1∶3的混合液，原料斑点消失后停止反应，减压蒸去溶剂，抽滤，真空干燥，得1.91g白色粉末固体，直接用于下步反应。产率：90.3％，熔点：195-197℃。将第一步产物溶于30mL5％NaOH水溶液中，搅拌下升温至100℃，将反应混合物加热回流，TLC 跟踪反应，展开剂为V(乙酸乙酯)∶V(石油醚)＝1∶3的混合液.反应完，室温静置，用1mol/L盐酸中和至pH为5～6，有大量固体析出，抽滤水洗至中性，无水乙醇/乙酸乙酯重结晶，真空干燥得1.27g灰白色粉末状固体。产率：72.9％，熔点：308～310℃。¹HNMR(DMSO，300MHz)：δ11.816(s，1H，NH)，10.873(s，1H，OH)，6.95～7.95(m，4H，ArH).IR(KBr)ν：3416(OH)，3234(NH)，1661(C＝N)，1509(C＝C)，1299(C＝S)cm^-1.

实施例3：

溴代苯乙酮的合成：

在装有搅拌器、冷凝管(冷凝管上端接氯化钙干燥管及氯化氢吸收装置)温度计及50mL恒压滴液漏斗的250mL四口反应瓶中分别加入0.2mol苯乙酮，100mL 无水乙醚，用冰盐浴冷却至0℃以下，搅拌滴加0.2mol液溴，先滴加一滴，等褪色后再继续滴加，控制滴加速度，约2h滴完。维持反应温度继续搅拌30min左右至颜色褪去，停止反应。将反应液倒入500mL分液漏斗中，用冰水洗涤分去水层，反复水洗至有机相成中性，用无水硫酸镁干燥过夜。滤去硫酸镁再减压蒸去溶剂，粗品为淡黄色固体，用1∶1的乙醇和水重结晶得白色片状晶体。产率：77.0％，熔点：50～51℃。

实施例4：

对氯氯代苯乙酮的合成：

在装有搅拌器、冷凝管(冷凝管上端接氯化钙干燥管及氯化氢吸收装置)、温度计及50mL恒压滴液漏斗的250mL四口反应瓶中分别加入0.1mol氯苯，30g无水三氯化铝和10mL无水二硫化碳，常温搅拌下滴加0.1mol氯乙酸氯，控制滴加速度，约3h滴完，再反应0.5h，缓慢升温至回流反应2h。将反应液缓慢倒入装有500mL冰水和浓盐酸的混合物的烧杯中，并搅拌0.5h后于室外放置过夜。过滤，滤饼用环己烷重结晶，得黄色针状晶体，收率77.3％，熔程204～207℃。

实施例5：

对溴氯代苯乙酮的合成：

在装有搅拌器、冷凝管(冷凝管上端接氯化钙干燥管及氯化氢吸收装置)、温度计及50mL恒压滴液漏斗的250mL四口反应瓶中分别加入0.1mol溴苯，30g无水三氯化铝和10mL无水二硫化碳，常温搅拌下滴加0.1mol氯乙酸氯，控制滴加速度，约3h滴完，再反应0.5h，缓慢升温至回流反应2h。将反应液缓慢倒入装有500mL冰水和浓盐酸的混合物的烧杯中，并搅拌0.5h后于室外放置过夜。过滤，滤饼用环己烷重结晶，得白色片状晶体，收率74.8％，熔点119-121℃。

实施例6：

对甲基氯代苯乙酮的合成：

100ml三口烧瓶中称取0.0033mol(4.41g)三氯化铝，10ml二硫化碳， 0.030mol(2.76g)甲苯，电磁搅拌，三口烧瓶上装温度计，恒压滴液漏斗及尾气吸收装置。称取0.0315mol(3.56g)氯乙酰氯加入恒压滴液漏斗中，缓慢滴加，约1.5h滴完，溶液变为灰黑色，加热回流3小时左右，反应完冷却后，将反应液倒入200ml含少量浓盐酸的冰水中，放出大量热，有淡黄色固体析出，搅拌，静止过夜，抽滤得对甲基氯代苯乙酮，熔程55～57℃。

实施例7：

2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮的合成及结构鉴定：

50mL三口瓶中，加入0.003molNaOH、15mL水和0.003mol化合物4，搅拌使其溶解得澄清液，溶液为暗红色。常温搅拌下滴加0.003mol溴代苯乙酮和5mL乙醇的混合溶液，滴加过程中有暗红色固体析出，控制滴加速度，大约0.5h滴加完。搅拌下升温至100℃，将反应混合物加热回流，TLC跟踪反应。展开剂为V(乙酸乙酯)∶V(石油醚)＝1∶2的混合液，原料斑点消失后停止反应。将反应液冷却至室温，抽滤，乙醇/乙酸乙酯重结晶。¹HNMR(400MHz，DMSO)：δ8.02(d，J＝7.2Hz，2H，Ar-H)，7.83(q，J₁＝8.1Hz，J₂＝1.58Hz，1H，Ar-H)，7.69(t，J＝7.3Hz，1H，Ar-H)，7.57(t，J＝7.6Hz，2H，Ar-H)，7.29～7.36(m，1H，Ar-H)，6.91～6.99(m，1H，Ar-H)，4.88(s，2H，CH₂).IR(KBr，cm^-1)ν：3550；3411；3236；1697；1637；1617，1598，1456；623.Anal.calcd for C₁₆H₁₃N₃O₂S：C61.69，H4.25，N 13.53；foundC 61.72，H4.21，N 13.50.

实施例8：

2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对氯苯乙酮的合成及结构鉴定：

50mL三口瓶中，加入0.003molNaOH、15mL水和0.003mol化合物4，搅拌使其溶解得澄清液，溶液为黄色。常温搅拌下分批加入0.003mol对氯氯代苯乙酮，此过程中有黄色固体析出，搅拌下升温至100℃，将反应混合物加热回流，TLC跟踪反应。展开剂为V(乙酸乙酯)∶V(石油醚)＝1∶2的混合液，原料斑点消失后停止反应。将反应液冷却至室温，抽滤，乙醇/乙酸乙酯重结晶。 ¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.08(d，J＝8.7Hz，2H，Ar-H)，7.82(dd，J₁＝J₂＝1.2Hz，1H，Ar-H)，7.65(d，J＝8.7Hz，2H，Ar-H)，7.31(t，J＝7.6Hz，1H，Ar-H)，6.90～7.00(m，2H，Ar-H)，4.86(s，2H，CH₂).IR(KBr，cm^-1)：3552；3413；3233；1672；1637；1617，1588，1459；626.Anal.calcd for C₁₆H₁₂ClN₃O₂S：C55.47，H 3.59，N 12.18；foundC 55.57，H3.50，N 12.15.

实施例9：

2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对溴苯乙酮的合成及结构鉴定：

50mL三口瓶中，加入0.003molNaOH、15mL水和0.003mol化合物4，搅拌使其溶解得澄清液，溶液为土红色。常温搅拌下分批加入0.003mol对溴氯代苯乙酮，此过程中有土红色固体析出，搅拌下升温至100℃，将反应混合物加热回流，TLC跟踪反应。展开剂为V(乙酸乙酯)∶V(石油醚)＝1∶2的混合液，原料斑点消失后停止反应。将反应液冷却至室温，抽滤，乙醇/乙酸乙酯重结晶。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.99(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)，7.77～7.84(m，3H，Ar-H)，7.30～7.36(m，1H，Ar-H)，6.91～7.01(m，1H，Ar-H)，4.76(s，2H，CH₂).IR(KBr，cm^-1)：3551；3414；3232；1675；1637；1617，1587，1474；623.Anal.calcd for C₁₆H₁₂BrN₃O₂S：C49.21，H 3.19，N 10.72；found C 49.24，H 3.10，N 10.77.

实施例10：

2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对甲基苯乙酮的合成及结构鉴定：

50mL三口瓶中，加入0.003molNaOH、15mL水和0.003mol化合物4，搅拌使其溶解得澄清液，溶液为粉红色。常温搅拌下分批加入0.003mol对甲基氯代苯乙酮，此过程中有粉红色固体析出，搅拌下升温至100℃，将反应混合物加热回流，TLC跟踪反应。展开剂为V(乙酸乙酯)∶V(石油醚)＝1∶3的混合液，原料斑点消失后停止反应。将反应液冷却至室温，抽滤，乙醇/乙酸乙酯重结晶。 ¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.95(d，J＝8.1Hz，2H，Ar-H)，7.83(dd，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.5Hz，1H，Ar-H)7.30～7.36(m，3H，Ar-H)，6.70～6.91(m，2H，Ar-H)，4.85(s， 2H，CH₂)，2.40(s，3H，CH₃).IR(KBr，cm^-1)：3551；3413；3236；1670；1637；1617，1457，1436；623.Anal.calcd for C₁₇H₁₅N₃O₂S：C62.71，H 4.67，N 12.95；foundC 62.75，H4.65N 12.91.

根据上述实施例相似的原料和方法，我们制备了如下化合物，但保护并不限于此：

编号	化合物名称	m.p./℃
			A	2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮	165～167
B	2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对氯苯乙酮	227～229
			C	2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对溴苯乙酮	224～226
D	2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对甲基苯乙酮	204～205

生物活性实验：

按照国标GB15979-2002《一次性使用卫生标准》中溶出性抑菌产品抑菌性能

实验方法进行，所用菌株为大肠杆菌(Ec)(8099)、金黄色葡萄球菌(Sa)(ATCC6538)、白色念珠菌(Ma)(ATCC 10231)，均由预防医学科学院消毒检测中心提供，试样质量浓度依次为0.1％、0.05％、0.01％。

抑菌实验实施例1

称量2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮0.5mg，配成试验样品质量体积分数为0.1％，溶剂为V(DMF)∶V(H₂O)＝1∶4。

具体操作如下：将试验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液(要求的浓度为：用100μL滴于对5mL样液内，回收菌数为(1×10⁴-9×10⁴cfu·mL^-1)。取被试样液(5mL)和对照样液(与试样同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理)各4管。取上述菌悬液，分别在每个被试样液和对照样液上滴加100μL，均匀混合，开始计时，作用20min，用无菌刻度吸管分别将样液(0.5mL)吸入含4.5mLPBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2-3个稀释度，分别吸取0.5mL，置于两个培养皿，用凉至40-45℃的沙氏琼脂培养基(酵母菌)15mL作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃±2℃培养48h(细菌)，作活菌菌落计数。实验重复1次，按下式计算抑菌率：

X₄＝(A-B)/A×100％

式中：X₄——抑菌率，％；

A——对照样品平均菌落数；

B——被试样品平均菌落数。

抑菌率＝(145-0)/145×100％＝100％。

按抑菌实验实施例1的方法，对上述实施例中的化合物和氟康唑(FLCZ)进行该浓度下的抑菌活性测试，上述实施例中的4个化合物与FLCZ的测试结果如下：

化合物A-D对标准菌株的抑菌活性结果见下表：(浓度为0.1％)

抑菌实验实施例2

称量2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮0.25mg，配成试验样品质量体积分数为0.05％，溶剂为V(DMF)∶V(H₂O)＝1∶4。

具体操作按照实施例1，抑菌率＝(138-0)/138×100％＝100％。(抑菌率＝(A-B)/A×100％)

化合物A-D对标准菌株的抑菌活性结果见下表：(浓度为0.05％)

抑菌实验实施例3

称量2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮0.05mg，配成试验样品质量体积分数为0.01％，溶剂为V(DMF)∶V(H₂O)＝1∶4。

具体操作按照实施例1，抑菌率＝(140-0)/140×100％＝100％。(抑菌率＝(A-B/A×100％)

化合物A-D对标准菌株的抑菌活性结果见下表：(浓度为0.01％)

抑菌测试表明，质量浓度为0.05％时，2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物对白色念珠菌、大肠杆菌的抑菌率高达100％，对金黄色葡萄球菌抑菌率达90％以上；质量浓度为0.01％时，对白色念珠菌、大肠杆菌的抑菌率高达95％以上，对金黄色葡萄球菌的抑菌率达80％以上。这表明2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物对真菌、革兰氏阴性菌等具有强抑菌活性，对不同菌株的抑菌活性具有明显的选择性和特异性，在抗真菌、抗革兰氏阴性菌药物开发方面有重要应用前景。与FLCZ相比，目标化合物对白色念珠菌、大肠杆菌均具有更强的抑菌活性。

上述参照实施例对该通式为式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用的盐及其制备方法和在抗微生物方面的应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的；因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种通式为式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐：

式(III)

R：H，F，Cl，Br，I

2.根据权利要求1所述的通式为式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐，其特征在于所述化合物或其可药用盐选自：

(A)：2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮；

(B)：2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对氯苯乙酮；

(C)：2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对溴苯乙酮；

(D)：2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-对甲基苯乙酮。

3.一种根据权利要求1或2所述的通式为式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐的制备方法，其特征在于合成路线如下：

4.根据权利要求3所述的通式为式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐的制备方法，其特征在于：合成路线第一步中，取代水杨酸甲酯和水合肼的摩尔比控制在1∶1.0-2.0，优选的摩尔比是1∶1.3-1.5；反应所用溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、仲丁醇、丁二醇、正戊醇、异戊醇、正己醇、环己醇、正庚醇、正辛醇、异辛醇、仲辛醇、乙腈、二氯甲烷、氯仿、丙酮或乙醚中的一种或它们的混合物；溶剂的使用量是在反应温度下，使反应混合物具有良好的流动性。重结晶溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇或叔丁醇中的一种或它们的混合物或者其中一种和水的混合物。

5.根据权利要求3所述的通式为式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐的制备方法，其特征在于：合成路线第二步中，取代水杨酰肼、硫氰酸铵和酸的摩尔比控制在1∶1.0-2.0∶1.0-2.0，优选的摩尔比是1∶1.1-1.3∶1.2-1.5；所用溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、仲丁醇、丁二醇、正戊醇、异戊醇、正己醇、环己醇、正庚醇、正辛醇、异辛醇、仲辛醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷或氯仿中的一种或它们的混合物；该反应中所用酸是盐酸、稀硝酸、氢溴酸、磷酸、亚磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、异丁酸、正戊酸、正己酸、正庚酸、正辛酸、异辛酸、苯甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、氯磺酸、甲基磺酸或氨基磺酸中的一种或它们的混合物。

6.根据权利要求3所述的通式为式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐的制备方法，其特征在于：合成路线第三步所用碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、碳酸氢钠、碳酸氢钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸锂、硫酸氢钠、硫酸氢钾、磷酸钠、磷酸氢二钠、三乙胺、正丁胺或吡啶中的一种或它们的混合物。

7.根据权利要求3所述的通式为式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐的制备方法，其特征在于：合成路线第三步用酸调pH值，其pH值控制在2～10，最佳pH值为5～6；所用酸是盐酸、稀硝酸、氢溴酸、磷酸、亚磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、异丁酸、正戊酸、正己酸、正庚酸、正辛酸、异辛酸、苯甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、氯磺酸、甲基磺酸或氨基磺酸中的一种或者它们的混合物。

8.根据权利要求3所述的通式为式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐的制备方法，其特征在于：合成路线第四步中的亲核取代反应是在碱性条件下进行的，硫酮和碱的摩尔比控制在1∶1.0-2.0，优选的摩尔比是1∶1.0-1.1；其中，所用碱是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、碳酸钾、碳酸钠、碳酸锂、硫酸钾、硫酸钠、硫酸锂、三乙胺、正丁胺或吡啶中的一种或者它们的混合物。

9.一种根据权利要求1或2所述的通式为式(III)的2-[5-(2-羟苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮类化合物或其可药用盐在制备抗真菌、革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌或者抗病毒药物的应用。